PRACTICA 4 CUANTIFICACIN DE MALATIN RESIDUAL EN ALIMENTOS.

CUESTIONARIO PREVIO

1. Qu tipo de insecticida es el malatin y qu ventajas presenta su uso con respecto a los insecticidas organoclorados? El malatin es un tipo de insecticida organofosforado no sistemtico de amplio espectro; sus caractersticas principales son su alta toxicidad, su baja estabilidad qumica y su nula acumulacin en los tejidos, caracterstica sta que lo posiciona en ventaja con respecto a los organoclorados de baja degradabilidad y gran bioacumulacin.

2. Cul es el mecanismo de toxicidad del malatin? El malatin y sus productos acompaantes pueden ingresar a travs de la piel, del aire inspirado, del agua y de los alimentos. La inhalacin del malatin es particularmente peligrosa. El malatin acta por inhibicin de la acetilcolinesterasa, enzima localizada en la sinapsis ganglionar nerviosa de las estructuras neuromusculares, la cual se encarga de llevar a cabo la hidrolisis de la acetilcolina para generar colina y cido actico. El malatin, primero se oxida a malaoxn, y ya en esta forma, se une a la enzima acetilcolinesterasa por medio de un residuo de serina que esta enzima contiene en su sitio activo. Al realizarse esta unin, la enzima se inactiva y ya no se realiza la hidrlisis, por lo que la acetilcolina se acumula en las terminaciones del sistema nervioso central y perifrico y produce efectos muscarnicos y nicotnicos sobre el SNC (contracciones en los msculos, falta de coordinacin, convulsiones, parlisis y finalmente la muerte). La accin txica directa, con sus correspondientes lesiones, tiene lugar sobre los rganos como el pulmn, hgado, mdula sea, corazn o tubo digestivo.

3. Cules son las enzimas utilizadas en mamferos e insectos para la biotransformacin del malatin? Qu productos genera cada una? Las enzimas detoxifiacantes tanto en los mamferos como en los propios insectos son: carboxiesterasas, oxidasas (microsomales) y fosfatasas. El malatin es detoxicado en mamferos por hidrlisis a cargo de carboxilesterasas hasta el monocido de malatin que no es txico, pero que es muy efectivo en insectos. Los mamferos lo hidrolizan muy abundantemente y adems en suero, con lo cual no es fcil que niveles txicos de organofosforados lleguen al sistema nervioso. La va oxidativa de este organofosforado a malaoxn es minoritaria y adems se da en tejidos como en el hgado, y por lo tanto ya ha habido una previa hidrlisis en suero lo que rebajar los niveles del malatin susceptible a la oxidacin. Mientras tanto en insectos la va oxidativa de malatin a malaoxn es mayoritaria y este metabolito es un fuerte inhibidor de la acetilcolinesterasa. La toxicidad selectiva del malation para aves e insectos, radica en que las esterasas no son tan abundantes en estas especies. No obstante, en ciertas cepas de insectos que son resistentes al malation, el mecanismo se asocia con un alto nivel de arilesterasa, con la que pueden destoxicarse por hidrlisis del insecticida.

4. Qu reaccin se lleva a cabo con el malatin en medio bsico y en presencia de etanol?

5. Indique el valor de LMR de malatin para frutas ctricas y vegetales de acuerdo a la legislacin vigente. Codex Alimentarius: 7mg/kg

6. Investigue la densidad de todos los disolventes que se utilizarn en esta prctica. - Tetracloruro de carbono - Disulfuro de carbono - Etanol 1.59 g/mL 1.26 g/mL 0.79 g/mL

DATOS DE LA MUESTRA Toronja Masa = 300 g Masa cscara = 74.4 g Volumen extraccin = 23 mL Masa muestra cscara utilizada = 25 g Relacin masa cscara/toronja = 74.4 g/300 g

RESULTADOS

Tabla 1. Resultados curva patrn del malatin. Volumen de solucin patrn (mL) 0 1.0 2.5 5.0 Concentracin malatin (mg/mL) 0 0.008 0.020 0.040 %Transmitancia 100.000 23.880 0.116 0.030 Absorbancia 0 0.622 2.936 3.523

- Clculo determinar concentracin malatin para cada punto de la curva patrn.

( ) ( )( )( )( )( )

- Formula que relaciona la transmitancia con absorbancia,

como tenemos %T: ( )

Grfica 1. Curva patrn del malatin obtenida a = 420 nm.

Concentracin vs Absorbancia
4.5 4 Absorbancia (:420 nm) 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 Concentracin malatin (mg/mL) y = 92.770x + 0.193 R = 0.880

Tabla 2. Resultados muestra. %Transmitancia 97.676 90.808 Absorbancia 0.010 0.042 Absorbancia corregida 0 0.032

Blanco Muestra - Clculo absorbancia corregida.

De la ecuacin de la recta tenemos: ( despejando, )

sustituyendo,

Debido a que no es posible tener un valor de concentracin negativo, se har de nueva cuenta la regresin lineal forzando a la recta intersectar el punto (0,0).

Grfico 2. Curva patrn malatin obtenida a = 420 nm, con lnea de tendencia forzada.

Concentracin vs Absorbancia
4.5 4 Absorbancia (:420 nm) 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 Concentracin malatin (mg/mL) y = 99.129x R = 0.872

De la ecuacin de la recta tenemos: ( )

despejando,

sustituyendo,

Para conocer la concentracin de malatin en la toronja se realiza un breve esquema de la preparacin de la muestra utilizada:

mtoronja=300g mcscara=74.4

extraccin 25 g cscara + 50 mL CCl4

23 mL soln.

2 alcuotas 10 mL Rxn eliminacin Lectura Formacin cromforo

)(

)(

)(

ANLISIS DE RESULTADOS

La curva patrn no haba resultado como se esperaba, con base en esto tuvimos que hacer una correccin en la curva. Pensamos que la curva no ayudaba a la interpolacin de nuestros resultados porque tal vez las concentraciones no fueron las correctas esto se pudo deber a que las diluciones fueron incorrectas al preparar la solucin patrn, tambin a una adicin incorrecta del volumen de etanol o otro factor importante que pudo influir fue al agregar el tetracloruro de carbono; esto afecto la concentracin y por lo tanto una mala lectura de %Transmitancia.

Figura 1. Complejo formado entre el malatin y el Cu2+. PROBLEMA

a) Cul es el contenido de malatin en la muestra?

b) El contenido de malatin se encuentra dentro del lmite mximo residual establecido para este pesticida? S, el contenido de malatin en la toronja se encuentra dentro del lmite mximo residual establecido para este pesticida.

CONCLUSION El contenido de malatin en la toronja (0.032mg/kg) se encuentra dentro del lmite mximo residual establecido para este pesticida.

REFERENCIAS Montenegro, Ral A., Informe sobre los riesgos sanitarios y ambientales del Malathin, RAP-AL Uruguay, Red de Accin en Plaguicidas y sus Alternativas para Amrica Latina, Crdoba, Argentina, Enero 2011, http://webs.chasque.net/~rapaluy1/malation/informe1.html Google, 31-agosto-11, 5:50 a.m. Vzquez, Alfonso Botello, Golfo de Mxico: Contaminacin e impacto ambiental; diagnstico y tendencias, 2da edicin, Ed. Universidad. J. Autnoma de Tabasco, Mxico, 2005, pp. 178-184. Bataller, Jos R., V. Balaguer Martnez, Toxicologa clnica, Ed. PUV., 2004, pp. 221-223. CODEX alimentarius, Residuos de plaguicidas en alimentos y piensos, 49 Malatin, Lmites mximos de residuos para Malatin, http://www.codexalimentarius.net/pestres/data/pesticides/details.html?id=49 Google, 31-agosto-11, 6:50 a.m.