Manual de Bioquímica Clínica 1

FAC. DE C. QUIMICAS./ CAMPUS IV/UNACH.
UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS CAMPUS IV
MANUAL DE LA MATERIA DE :
BIOQUIMICA CLINICA I
LICENCIATURA DE QUIMICO FARMACOBIOLOGO

TITULAR DE LA MATERIA: M. EN C. CONSUELO CHANG RUEDA
CICLO JULIO-DICIEMBRE .2009 TAPACHULA, CHIAPAS
M. EN C. CONSUELO CHANG RUEDA
FAC. DE CIENCIAS QUIMICAS/CAMPUS/ UNACH
INDICE
INTRODUCCION A LA BIOQUIMICA CLINICA . PRACTICA NO. 1: 1.0 1.1 DIGESTION: EXAMEN COPROLOGICO. . . . . . . 4
PRACTICA NO. 2: 2.0 METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS 2.1 DOSIFICACION DE GLUCOSA. . . . 2.1.1 METODOS ENZIMATICO. . . . . 2.1.2 METODOS REDUCTIVOS. . . . . 2.1.3 POR CONDENSACION CON AMINAS AROMATICAS. PRACTICA NO. 3: 3.0 3.1 3.2 PRUEBAS CONFIRMATORIAS DE DIABETES MELLITUS CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA. . . PRUEBA POSTPRANDIAL. . . . . .
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PRACTICA NO. 4: 4.0 METABOLISMO DE LIPIDOS: 4.1 COLESTEROL TOTAL. . . . 4.1.1 DOSIFICACION DE COLESTEROL. . . 4.2 TRIGLICERIDOS. . . . . 4.3 DETERMINACION DE HDL COLESTEROL. 4.4 FACTOR DE RIESGO. . . . PRACTICA NO. 5 5.0 PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL: 5.1 DOSIFICACION DE UREA. . . 5.2 DOSIFICACION DE CREATININA. . 5.3 ACIDO URICO. . . . . PRACTICA 6 PROTEINAS TOTALES. . . 6.1 DETERMINACION DE ALBUMINA. PRACTICA No. 7 7.1 EXAMEN GENERAL DE ORINA.. . . . . . . 40 . . . . . . . . . . . . 38 39
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M.C. CONSUELO CHANG RUEDA.
INTRODUCCION.
La bioqumica clnica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la aplicacin de la Ciencia Qumica para la resolucin de problemas de salud.
La funcin del laboratorio de Bioqumica clnica es realizar analisis tanto cualitativos como cuantitativos en fludos corporales como sangre,orina lquido seminal , lquido cefalorraqudeo, as como en otros materiales por ejemplo clculos. Para que los resultados de dicho anlisis sean utiles a los mdicos en el diagnstico, tratamiento y seguimiento de una enfermedad estas debern realizarse bajo un estricto control de calidad logrando niveles ptimos de precisin, exactitud, coordinacin y plausibilidad, caractersticas deseables en cualquier resultado de diagnstico.
Es indispensable que el estudiante de la licenciatura en Qumico farmacobiologo, adquiera una formacin y preparacin bioqumica que le permita afrontar los retos que encontrar en su vida profesional, ante el creciente nmero de tcnicas manuales y automatizadas, que continuamente se estan desarrollando para la deteccin y cuantificacin de metabolitos de inters para la medicina moderna.
Al trmino del curso, el alumno deber ser capaz de realizar el anlisis de productos biolgicos incluyendo una adecuada manipulacin de los especmenes desde la toma y/o recepcin de muestras hasta la entrega de resultados. Este proceso incluye: diseo seleccin, elaboracin y ejecucin analtica, evaluacin y resolucin de problemas con la metodologa empleada, planeacin aplicacin e interpretacin de programas de control de calidad, interpretacin de grficas y monogramas relativos, y correlacin de los datos obtenidos con las posibles alteraciones que se presentan en el organismo en las diferentes patologias.
PRACTICA No. 1
EXAMEN COPROLOGICO INTRODUCCION.La composicin de las heces normales depende en gran medida de la cantidad y la calidad del alimento ingrido. An en un funcionamiento totalmente competente del sistema digestivo, no se puede procesar y absorver completamente una excesiva ingestin de limentos, por lo que para este examen, el paciente debe llevar una dieta no excedida, y particularmente no debe comer carne, durante 3 das que preceden al estudio. El examen general de las heces, que cubre los aspectos macro y microscpicos, as como el estudio qumico, tiene especial importancia en algunas disfunciones digestivas y en el reconocimiento de sangrado en tubo digestivo. Este examen refleja tan slo el estado de la digestin en un determinado momento.
METODO.* EXAMEN MACROSCOPICO.- CANTIDAD: 200 - 300 gr/da. - COLOR: Caf en distinta intensidad - Adulto Verde obscuro ------- R/N Amarillas -------------- Bebes alimentados con leche. Arcilla ------------------Oclusin de las vas biliares, Hepatitis Aguda Esteatorrea (heces grasas) Caf muy obscuro ---Anemia hemoltica Negras --------------- Sangrado en porciones altas del tubo digestivo. -OLOR: Fecal ------------Normal. Acido picante -Excesiva fermentacin de CHOS Ptrido ---------Insuficiencia gastrica, Excesiva putrefaccin intestinal
- FORMA: Una evacuacin normal debe ser moldeada a la forma del conducto anorrectal, de consistencia pastosa a dura, mas bien gruesa. * Moldeada --------------------------- Normal. * Afilada ------------------------------- Estenosis rectales. * Redondeadas y Fragmentos ---Espasmos del colon. * Gruesas -----------------------------Insuficiencia pancretica. * Alquitranadas ----------------------Sangrados gastrointestinales. * Pequeas, Purulentas, sanguinolentas -------------------- Colitis ulcerativa. * Blanquesinas, purulentas sanguinolentas ----- Disenteria bacilar. * Normal, Mucosas y sanguinolentas ---------------------Disenteria amibiana. (fase inicial). * Diarreicas, Mucosas y sanguinolenta ----------------------Disenteria amibiana. (fases posteriores). * Liquidas ------------------------------Paratifoidea, Enteritis. CONSISTENCIA: La consistencia de las heces se registra como acuosas o lquidas, blanda, pastosa y dura. Duras --------------------- Espasmos del colon. Pastosas y viscosas -- Insuficiencia pancretica. Viscosas ----------------- Sangrados gastrointestinales. Pastosas a lquidas --- Dispepsia putrefactiva. Acuosas ------------------ Presencia de trofozotos de protozoarios. Duras --------------------- Quistes. MOCO: El moco puede presentarse mezclado o recubriendo las heces, en forma de filamentos, masas gelatinosas, bolas o cintas, que aveces tienen el aspecto de seudomembranas. Cuando el moco es abundante, caracteriza por lo general, la irritacin o inflamacin de la mucosa intestinal o del sigmoides. pH: El pH de las heces depende de la relacin que existe entre los cidos producidos por el proceso de frementacin y el amoniaco producido por el proceso de putrefaccin. 7.0 - 8.0 ------------ Normal Menor de 6.5 ----- Dispepsia fermentativa. Mayor de 8.0 ----- Dispepsia putrefactiva. La reaccin de las heces se mide humedeciendo un papel indicador.
* EXAMEN QUIMICO. El Analisis Qumico asume importancia principal en sospecha de sangrado de tubo digestivo y en caso de esteatorrea. - SANGRE OCULTA: El examen es de gran utilidad sobre todo en el estudio de las neoplasias del tubo digestivo y de las anemias por deficiencia de hierro. Para detectar sangre oculta en heces el paciente no deber comer carne durante los tres das que preceden al examen, ni tomar medicamentos que contengan hemoglobina. Valores Normales: NEGATIVO. Investigacin de Pigmentos Biliares.
Dicho analisis se realiza en base al color de las heces y mediante pastillas de ictotest . Valores Normales: NEGATIVO. - DETERMINACION DE LIPIDOS TOTALES: El aumento de grasa en heces (esteatorrea) sugiere menoscabo de la absorcin intestinal, por lo que la medicin de lpidos fecales ayudar al diagnstico de mala absorcin. Los adultos normales y los nios mayores eliminan hasta 5 gr de grasa total/24 hrs., valores por encima de 6 gr. han de ser considerados anormales. O bien, lpidos totales de 24 hrs; 7% de la ingestin o menos; 10% es el lmite superior absoluto. * EXAMEN MICROSCOPICO. El examen coprolgico general incluye el estudio microscpico de las heces para investigar: -Residuos alimenticios microscpicos. -Clulas, como eritrocitos, leucocitos y clulas epiteliales. -Microorganismos, como bacterias y hongos. -Objetos inertes, como cristales de CHARCOT-LEYDEN. -Huevecillos y larvas de Helmintos, Quistes de protozoarios y trofozoitos, cuando se recibe y procesa.
* PREPARACIONES PARA MICROSCOPIA DE RESIDUOS ALIMENTICIOS CELULAS Y OTROS ELEMENTOS * Para el examen de rutina, se disponen cuatro preparaciones hmedas para observacin directa de la muestra de heces, entre porta y cubre objetos, tomando una pequea porcin de heces con una varilla de vidrio o mediante una asa de platino y homogenizndola en uno o dos gotas de las soluciones siguientes, previamente depositadas en los correspondientes portaobjetos: 1).- SOLUCION SALINA FISIOLOGICA: Corresponde al Examen ordinario para observacin directa de heces en preparacin humeda. Permite una apreciacin general de los elementos microscpicos presentes, en cuanto a su naturaleza y su numero. Si se observan objetos parecidos a quistes, se confirma la identidad con examen de la preparacin con yodo y otros procedimientos. 2).- LUGOL: Se emplea principalmente para teir quistes y establecer el numero de sus ncleos, que se tien de amarillo; para la investigacin de almidones, para el reconocimiento de vacuolas que contienen glucgeno (Iodamoeba) y para el reconocimiento general de los elementos en la preparacin. 3).- ACIDO ACETICO AL 30%: Para investigar especialmente fibras musculares y clulas (leucocitos, eritrocitos y clulas epiteliales). 4).- SUDAN III: Despus de calentar ligeramente la preparacin, esta solucin colorante se emplea para la investigacin de grasas neutras y cidos grasos. Pueden hacerse, adems, otras preparaciones para la diferenciacin de lpidos. El estudio microscopico de las heces nos puede revelar: Fibras musculares Tejido conectivo Lpidos Almidn Celulosa Clulas Otros elementos.
ANALISIS COPROLOGICO HOJA DE REPORTE NOMBRE DEL PACIENTE:___________________________ Fecha:_______________ EDAD:____________ EXAMEN MACROSCOPICO: CANTIDAD APROXIMADA:_______________ COLOR:______________________________ OLOR:_______________________________ FORMA:______________________________ CONSISTENCIA:_______________________ Ph:__________________________________ EXAMEN QUIMICO: MOCO:_______________________________ SANGRE:_____________________________ PIGMENTOS BILIARES:_________________ GRASAS:_____________________________ ALMIDONES:__________________________ SEXO:_________
EXAMEN MICROSCOPICO: PROTOZOARIOS:___________________________________________ HELMINTOS:_______________________________________________ BACTERIAS:________________________________________________
OTRAS OBSERVACIONES: ERITROCITOS:______________________ LEUCOCITOS:______________________ LEVADURAS:______________________
VoBo:_______________________ CALIFICACION:___________________
PRACTICA No. 2 BIOQUIMICA CLINICA DE CARBOHIDRATOS. OBJETIVOS ESPECFICOS DEL APRENDIZAJE: 1. Describir los conceptos fundamentales del metabolismo de los carbohidratos. 2. Describir el metabolismo intracelular de la glucosa va glucognesis, glucogenolisis, gluconeognesis y oxidacin de la glucosa. 3. Describir el origen y regulacin hormonal de la glucosa. 4. Describir la fisiopatologa de la hiperglicemia: Diebetes Mellitus y su clasificacin. 5. Describir las causas secundarias de la hiperglicemia. 6. Describir las causas de hipoglicemia 7. Describir la importancia diagnstica de las pruebas de glucosa posprandial y curva de tolerancia a la glucosa. 8. Describir los mtodos anliticos ms usuales para el anlisis de la glucosa 9. Determinar correctamente los niveles de glucosa en suero y orina e interpretar los rangos de referencia. METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS: Digestin y absorcin: Los carbohidratos de la dieta contienen comnmente, polisacridos como el almidn, y disacridos como la lactosa y sacarosa. La amilasa de las glndulas salivales y el pncreas actan sobre las molculas del almidn y las convierten en disacridos(maltosa). Estos ltimos, por la actividad intestinal de sistemas enzimticos especficos, son digeridos degradndolos en sus monosacridos constituyentes, las hexosas: Las exosas: glucosa galactosa y frustosa.(5,6) Estos productos finalesde la digestin principalmente la glucosa, por un mecanismo de difusin activoy sodio dependiente, se absorven en las vellosidades del intestino, sobre todo en la primera porcin del yeyuno, y pasan a la sangredel sistema portal cuya circulacin va al hgado; por ello despues de la absorcin, los monosacridos deben pasar por el hgado antes de llegar a la circulacin general.(1) Desde el punto de vista clnico, la glucosa es la hexosa principal con niveles de normalidad de 70-110 mg/dL. En condiciones ordinarias, la concentracin de la glucosa en la sangre es el resultado de un equilibrio entre procesos productores y consumidores de la misma, estos procesos son regulados por las hormonas insulina, glucagn y somatostatina, producidas por el pncreas. (2,3)
Metabolismo Intracelular de la Glucosa: Las clulas del hgado y rin metabolizan la glucosa de manera similar. La glucosa entra en las clulas bajo la influencia de la insulina y de la enzima glucocinasa para formar intracelularmente glucosa-6-fosfato (G-6-P),compuesto clave que puede tomar una de las tres rutas metabolicas, las dos principales vas son la glucognesis y la glucolisis a travs del ciclo del cido tricarboxlico (TCA), mientras que una proporcin variable de G-6-P, puede entrar por la va de oxidacin alternativa denominada el shunt de monofosfato de hexosa (HMP), tambin conocido como ciclo de las pentosas. Los requerimientos de energa elevada (ATP o trifosfato de adenosina) probablemente empiezen por la demanda de glucgeno (glucgenolisis), y el glucgeno puede tambin generar glucosa y puede haber glucognesis cuando las necesidades energticas lo permiten. (2) Va de la glucogenlisis: Es la sntesis de glucogno a partir de glucosa. La sntesis de glucgeno ocurre practicamente en todos los tjidos del cuerpo, pero principalmente en en el hgado y msculo. Los monosacridos pasan del intestino a la sangre portal que llega directamente al hgado, si el hgado no utiliza la glucosa la almacena un 6% de su peso en forma de glucgeno, la dems glucosa es enviada a los tejidos para que stos la utilizen o almacenen enforma de glucgeno. Va de la glucogenlisis: Es la degradacin del glucgeno, La glucosa es el principal producto de la glucogenlisis en el hgado, y el piruvato y el lactado son los principales productos en el msculo. El glucgeno heptico est en gran parte de encargado del mantenimiento de la glucosa sangunea, cuando la concentracin de sta disminuye se liberan las homonas glucagn-adrenalina, que hacen que se active la fosforilasa heptica, iniciandose asi la sntesis de glucosa. La funcin de glucgeno muscular es actuar como fuente de unidades de hexosa para la glucolisis dentro del msculo, la hormona que desencadena este mecanismo es la adrenalina(6).
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Va de oxidacin de la glucosa: La funcin principal de los carbohidratos en el metabolismo es la de un combustible que al ser oxidado suministra energa para otros procesos metablicos. La oxidacin de la glucosa se divide en dos etapas: 1) metabolismo anaerobio, tambin llamado gluclisis o ciclo de embden Meyerhof; 2) metabolismo aerobio, del cual forma parte el ciclo de Krebs. La fase anaerobia debe su nombre a que no requiere de oxgeno, aunque puede tener lugar en presencia de l . Forman parte del metabolismo anaerobio la produccin y desdoblamiento de glucgeno y las transformaciones mutuas de las hexosas, galactosa, fructosa con glucosa; esta etapa termina con la produccin de piruvato o lactato, y una pequea cantidad de energa. Para poder entrar al metabolismo aerobioel cido pirvico necesita oxidarse hasta acetil-CoA. El acetil-CoA, entra al ciclo de Krebs em el cual por una serie de reacciones se obtienen como productos finales CO2, agua y energa.(6)
Gluconeognesis. La gluconeognesis es la formacin de glucosa a partir de fuentes que no son carbohidratos. Las comprometidas en la gluconeognesis son principalmente las del cido ctrico y la gluclisis. Los substratos principales para la gluconeognesis, son los aminocidos glucgenicos, el lactato y el glicerol. La gluconeognesis se efecta cuando no se disponen de suficientes carbohidratos de la dieta. En la hipoglicemia se obtiene primeramente glucosa a partir de glucgeno, al no existir ste, se tiene que activar la gluconeognesis, para esto primero se libera la hormona adrenocorticotrpica cuya principal funcin es la de estimular a la corteza suprarrenal para que libere cortisol. El cortisol estimula el catabolismo proteco en los tejidos y activa a las enzimas que actan en la gluconeognesis(5).
Control y regulacin hormonal de la glucemia.
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2.1.- DOSIFICACION DE GLUCOSA INTRODUCCIN: Los principales monosacridos que resultan de los procesos digestivos son: Aldosas, Glucosa, Galactosa,y la Cetosa como la Fructosa. Los Carbohidratos son utilizados por las clulas principalmente en forma de Glucosa, que sirve como combustible para suministar energa para otros procesos biolgicos. Los mtodos que se utilizan para la identificacin y cuantificacin de Glucosa de los fluidos del cuerpo, se dividen en:
2.1.1.- METODOS ENZIMATICOS. El uso de enzimas especficas para la Glucosa, como Glucooxidasa y Hexoquinasa purificadas d una alta especificidad a la cuantificacin de dicho monosacrido. Utilizando stos mtodos directamente en suero o plasma, la presencia de ciertos inhibidores como altas concentraciones de Acido Ascrbico, Hemlisis, Bilirrubina, Acido Urico, Catecolaminas pueden restarle a esta tcnica algunas de sus ventajas tericas. Utilizando la Glucoxidasa tenemos la siguiente reaccin: Glucoxidasa H2O GLUCOSA -----------> GLUCONOLACTONA ---------> AC. GLUCONICO FAD FADH2 H2O2 MUESTRAS: Suero sin hemolisis. Liquido cefalorraqudeo
TECNICA: 1.- Marcar 3 tubos ( blanco, Estandar y Muestra) posteriormente pipetear los reactivos como se indican en la siguiente tabla: BLANCO 1ml (1000l) 10 l ----------------ESTNDAR 1ml (1000l) --------10 l --------MUESTRA 1ml (1000l) ---------------10 l
Reactivo en uso Agua destilada Estandar Muestra
Mezcle e incube a 37 oC durante 10 min.o deje a temperatura ambiente durante por lo menos 30 min..
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Leer la absorvancia a 500 (492 550) nm de la muestra y el patron frente al blanco 500 nm contra el blanco. CALCULOS: A (abs)muestra A (abs) patron x (Conc. Del Estandar)
VALORES DE REFERENCIA: Suero o Plasma: 70 105 mg/dL 50 70 mg/dL
Liquido Cefalorraqudeo:
2.1.2.- METODOS QUIMICOS Por reduccin. a).- Usando FERRICIANURO como oxidante. La Glucosa se calienta frente a un exceso de Ferricianuro los iones amarillos de ste son reducidos en solucin alcalina a iones incoloros de Ferricianuro. El cambio de color (de amarillo a incoloro) puede medirse por titulacin Iodomtrica o por medicin Fotomtrica, (Mtodo de Hoffman). b).- Usando COBRE como oxidante. Los monosacridos se oxidan fcilmente ya que son sustancias reductoras. Las sales cpricas en solucin alcalina caliente se reducen a xido cuproso rojo. Se puede medir el xido formado utilizando Fosfomolibdato (Foln-Wu), Fosfotungstato (Benedict), Arsemolibdato (Somogyi-Nelson) que dan un color estable para su medicin Fotomtrica.
METODO UTILIZANDO COBRE COMO OXIDANTE: METODO DE FOLIN-WU DESPROTEINIZACION: En los mtodos que utilizan cobre es necesario eliminar las protenas como paso preeliminar la mayoria de las protenas muestran una tendencia a experimentar cierta forma de alteracin, llamada DESNATURALIZACION, por accin de calor, de lcali, de cidos, alcoholes e incluso agitacin. Generalmente en Bioqumica Clnica se prefieren los mtodos a base de cidos (como el cido Tungstico, Ac. Tricloroactico, etc). Para el mtodo de Folin-Wu se sigue el siguiente procedimiento: * FUNDAMENTO DE LA DESPROTEINIZACION.
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El Acido Sulfrico reacciona con el Tungstato de Sodio para formar Acido Tngstico, el cual precipita las protenas que son separadas por centrifugacin o filtracin. * REACTIVOS Acido Sulfrico 1/12 N. Tungstato de Sodio al 10% en Agua Destilada. * FUNDAMENTO DEL FOLIN-WU La Glucosa reduce en solucin alcalina y caliente el in cprico en in cuproso con formacin de Oxido Cuproso insoluble el cual reacciona con el Acido Fosfomolibdico dando lugar a un complejo azul que es proporcional al contenido de Glucosa y que puede ser medido espectrofotomtricamente. REACTIVOS: 1.3.4.Solucin Patrn Stock de Glucosa . . 1 ml = 10 mg. Solucin cuproalcalina Solucin Fosfomolbdica.
CIFRAS NORMALES: Suero: 80-120 mg%
2.1.3.- METODO DE CONDENSACION CON AMINAS AROMATICAS. METODO DE ORTO-TOLUIDINA Las aldosas se condesan con Aminas Aromticas en solucin de Acido Actico caliente para formar Glucosilaminas (Aldosilaminas). Se han utilizado Bencidona, O-Aminodifenil y la O-Toluidina. * FUNDAMENTO Los aldosacridos dan con la O-Toluidina disuelta en cido actico glacial, por calentamiento, una aldosilamina y la base de Schiff correspondiente. El color azul verdoso obtenido es suceptible a medirse fotomtricamente. REACTIVOS: 1.- Solucin de O-Toluidina (Merck o Hycel) para Glucosa.
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2.- Solucin patrn de trabajo. De la solucin Stock del mtodo de Folin se hace una dilucin de 1:10 con agua destilada para obtener 1 ml. = 1 mgr., que equivale a un patrn de Glucosa de 100 mgr.
CIFRAS NORMALES: Sangre Total: 70 Plasma o Suero: 65 LCR: 40 l00 mgr% 100 mgr% 74 mgr%
REPORTE DEL RESULTADO:
No. De Clave:_________________ No. De Identificacin de su muestra:__________________________________
NOMBRE DEL PACIENTE:_________________________________________ Resultado de su muestra : _________________________________________ ________________________________________________________________
COMPARATIVAMENTE EXPONGA SUS RESULTADOS DE ACUERDOS A LAS TECNICAS EMPLEADAS . (EXPLIQUE). _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ OBSERVACIONES:_______________________________________________
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PRACTICA No. 3 3.2.- PRUEBAS CONFIRMATORIAS DE DIABETES MELLITUS:
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA INTRODUCCIN El proposito de esta prueba es saber en que forma maneja el organismo una dosis fija de Glucosa administrada por va oral o venosa en condiciones adecuadas del paciente; se trata de pruebas naturales que permiten establecer la respuesta insulnica a un estmulo fisiolgico por glucosa. Los pacientes con diabetes leve o controlada, pueden tener en ayunas niveles de glucosa en sangre que estn dentro del intervalo normal, sin embargo, no pueden producir suficiente insulina para metabolizar pronto los carbohidratos ingeridos. Como resultado de ello, la concentracion de glucosa en sangre sube a niveles anormalmente altos y se retarda el retorno al valor normal.
PROCEDIMIENTO: 1.Obtener una muestra de sangre en ayunas (Basal). Trabajar la muestra segn la tcnica a emplear. 2.Administrar la solucin de glucosa, haciendola beber completamente, (ej. 100 gr. de glucosa disuelta en agua con unas gotas de limn), marcar el tiempo. 3.Obterner otra muestra de sangre cada 30 min. durante dos horas (pueden omitirse estas muestras y tomarse una despus de dos horas).
VALORES NORMALES: En una respuesta normal, el nivel de glucosa en ayunas (basal) esta dentro de los lmites normales; la concentracin mxima se alcanza hasta los 30 a 60 min. y no excede de 170 mg/dl y el nivel de glucosa a las dos horas desciende por debajo de 120 mg/dl. Se recupera nuevamente el nivel de Glucosa en ayunas despus de tres horas.
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REPORTE DE SUS RESULTADOS:
GLUCOSA EN AYUNAS:______________________ORINA:____________ GLUCOSA A LOS 30 MIN:______________________ORINA:____________ GLUCOSA A LOS 60 MIN:______________________ORINA:____________ GLUCOSA A LOS 120 MIN: ____________________ORINA:_____________
GLUCOSA POSTPANDRIAL Glucosa en ayunas: Glucosa postpandrial:
Cuestionario: 1.- Cual es la dieta previa que se le debe de dar al paciente:
2.- Que otras pruebas para el control del paciente diabtico existen:
3.- Indique en base a sus resultados si su paciente esta o no diabetico:
Observaciones y Conclusiones:
Calificacion:_______________ VoBo._____________________
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Practica No. 4 METABOLISMO DE LOS LIPIDOS: Todos los lpidos son transportados en la sangre como lipoprotenas, sus clases son: Lipoprotenas de alta densidad () Lipoprotenas de baja densidad () Lipoprotenas de muy baja densidad Quilomicrones (ricos en triglicridos) transitoriamente elevados despues de la ingestin de grasas.
Con respecto al riesgo, las dos clases ms importantes son las lipoprotenas de baja densidad y las de muy baja densidad. Las lipoprotenas de alta densidad son ricas en Colesterol y llevn algunos triglicridos; y slo tienen algo de colesterol. La determinacin de triglicridos debe hacerse siempre en conjunto con la determinacin de colesterol en suero. Ya que por medio de la medicin de am,bos, es posible hacer una estimacin de la naturaleza de algunos desordenes lpidicos. El colesterol se sintetiza sobre todo en el hgado , pero tambin en la piel, intestino, glndulas suprarrenales, el ovario, el testiculo, el rin y el pulmn. Todas las sustancias que en el organismo producen cido actico pueden ser precursoras de colesterol(cidos grasos, glucosa, algunos aminocidos, etc.) El colesterol es esencial para el funcionamiento normal del organismo ya que es: 1.- Componente estructural esencial de membranas de todas las clulas y partculas subcelulares. 2.- Precursor de cidos biliares. 3.- Precursor de hormonas esteroides. Clinicamente es importante ya que existe una relacin entre la concentracin del colesterol plasmtico y la presencia de problemas coronarios. Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) han demostrado tener una correlacin inversa con enfermedades isqumicas del corazn y su determinacin ayuda al pronostico de riesgos cardacos. Hay dos metodos bsicos disponibles para medir HDL, El primero es la ultacentrifugacin y el segundo la precipitacin LDL, VLDL (lipoprotenas de baja densidad y lipoprotenas de muy baja densidad.
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COLESTEROL TOTAL FECHA:__________ Existe una gran variedad de mtodos para la determinacin de Colesterol sanguneo, como enzimaticos, gravimtricos, cromatogrficos, fluoromtricos, turbidimtricos, etc. siendo los ms usados los colorimtricos. El Colesterol como otros esteroides dan colores intensos cuando son tratados con reactivos cidos. El color producido depende del cido empleado y de su concentracin, adems de otras variantes. Se pueden clasificar los mtodos colorimtricos segn la reaccin empleada; y tambien en mtodos directos e indirectos.
4..1.- DOSIFICACION DE COLESTEROL TOTAL: 4.1.1.- METODO DE LIEBERMAN -BOURCHARD Mtodo en medio actico-sulfrico; es una modoficacin al mtodo original de LIEBERMAN-BOURCHARD. * FUNDAMENTO: El colesterol libre y esterificado forma con el anhidrido actico y el cido sulfrico una combinacin verde cuya intensidad de color es proporcional a la cantidad de colesterol. REACTIVOS Ac. Actico Glacial Anhidrido Actico Colesterol Q.P. Ac. Sulfrico Concentrado. Patrn de Colesterol 200mg/dl
CIFRAS NORMALES 1 mes a 20 aos 20 aos- 29 aos 30 aos- 39 aos 40 aos- 49 aos 50 en adelante. 100-140 mgrs% 144-275 165-295 170-315 177-340
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4.1.1 .- DOSIFICACION DE COLESTEROL. METODO ENZIMATICO OBJETIVO: Realizar el anlisis enzimtico para la determinacin de colesterol total en suero y compararlo con el mtodo de Lieberman Bourchard. FUNDAMENTO: El colesterol y sus esteres se liberan de las lipoprotenas por los detergentes. La colesterol-esterasa hidrolisa los steres. En la oxidacin enzimtica por el colesterol oxidasa, que tiene lugar a continuacin se produce H2O2 por reaccin de la 4 amino-antipirina y fenol, en un colorante quinonimina.
MUESTRA CLINICA: Suero o plasma (heparina o EDTA).
TECNICA: 1.- Marcar3 tubos ( blanco, Estandar y Muestra) posteriormente pipetear los reactivos como se indican en la siguiente tabla: TECNICA: 1.- Marcar 3 tubos ( blanco, Estandar y Muestra) posteriormente pipetear los reactivos como se indican en la siguiente tabla: BLANCO ----------------1ml (1000) l ESTNDAR 10 l ---------1ml (1000) l MUESTRA --------10 l 1ml (1000) l
Estandar Muestra Reactivo de trabajo
Mezcle e incube a 37 oC durante 5 min. O deje a temperatura ambientee durante 20 min. Leer la absorvancia a 505 (490 530) nm de la muestra y el patron frente al blanco 500 nm contra el blanco.
El color de reaccin final es estable 30 minutos.
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LINEARIDAD DEL METODO: Hasta 700 mg/dL
CALCULOS: Colesterol: D x f donde f= 200 mg/dl S
VALORES DE REFERENCIA:
Deseable: Moderadamente alto: Elevado:
< 200
mg/dL
200 239 mg/dL >240 mg/dL
REPORTE: Resultado de su muestra problema fue:_____________
OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:
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4.2 DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS. FUNDAMENTO: El glicerol liberado en la hidrlisis de triglicridos por la accin de la lipoprotena lipasa se convierte por accin de la glicerol quinasa en glicerol-3fosfato, que se oxida por laaccin de glicerol fosfato oxidasa en fosfato de dihidroxiacetona y proxido de hidrogeno. En presencia de peroxidasa, el perxido de hidrgeno oxida el cromgeno(4-aminoantipirina/pclorofenol) en un compuesto de color rojo. . MUESTRA CLINICA: Suero sin hemolisis. Plasma heparinizado, EDTA,o citrato.
REACTIVOS: Estuche comercial para determinacin de triglicridos (Mtodo enzimtico). Sol. estndar de trinoleina 100 mg/dL Sol. amortiguadora pH=7.7 Sol. de NADH2 PEP/ATP Suspencin de PC/LDH Suspencin de glicerocinasa Sol. de Sulfato de Magnesio Sol. etanlica dehidrxido de potasio Sol. reactiva Sol. amortiguadora
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METODO ENZIMATICO TECNICA:
REACTIVO AGUA DESTILADA ESTANDAR MUESTRAS
BLANCO 1 ml 10 l -------------
ESTANDAR 1 ml ------10 l -------
MUESTRA 1 ml ------------10 l
Mezclar, incubar a 37C 10 minutos y leer a 500 nm. Leer contra blanco de reactivo.
VALOR DE REFERENCIA HOMBRES: 60 165 mg/dL MUJERES: 40 - 140 mg/dL
CALCULOS: Muestra abs Estandar abs x 200 mg/dL
EL RESULTADO DE SU MUESTRA FUE:___________________
OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:
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4.3 HDL (lipoprotenas de alta densidad) FUNDAMENTO: Las lipoprotenas de alta densidad (HDL), se saparan de los quilomicrones, y de las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL) as como de las de baja densidad (LDL) por la adicin de un reactivo de precipitacin (con cido fosfotngstico e iones magnesio) al suero o al plasma. Despus de centriifugar, se determina el contenido de colesterol en la fraccin HDL que permanece en el sobrenadante, por el mtodo colorimetrico enzimatico de colesterol.
OBJETIVO: Separacin de la fraccin HDL de las fracciones LDL y VLDLpor precipitacin con cido fosfotnsgtico e iones de magnesio y consecuente determinacin. Establecer la significancia clnica de la determinacin de HDL y su correlacin con las demas determinaciones del perfil de lpidos. MIESTRA CLINICA: Suero obtenido de 12 horas de ayuno. El suero puede conservarse a temperatura ambiente hasta 5 das. La refrigeracin puede alterar la estructura de las lipoprotenas dando resultados bajos. Usar suero control comercial. REACTIVOS: Solucin precipitante (Reactivo comercial): 0.5 Molar de MgCl2 Fosfotungstato al 4% Reactivo para la determinacin de colesterol enzimtico ( reactivo comercial) Solucin estandar de colesterol de 200 mg/dL
Nota: las soluciones se deben atemperar ante de su uso.
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MATERIAL POR EQUIPO: Tubo de ensaye de 13x100 mmm Tubos de centrifuga Micropipeta de vol. Variable p1000 Micropipeta de volumen variable p200 Gradilla Centrifuga POR GRUPO Bao maria a 25 oC Espectofotometro Celdas
PROCEDIMIENTO: En un tubo de Kahn medir 200ml de muestra, y agregar 500ml de Reactivo Precipitante. Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 10 min en reposo a temperatura ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m o 2 minutos a 12000 r.p.m Usar sobrenadante lmpido como muestra. standard y desconocido colocar: B -------------2ml En tres tubos marcados blanco,
Sobrenadante Standard Reactivo de Trabajo
S --------20l 2ml
D 200l -------2ml
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 0 15 minutos a Tem. Ambiente. Retirar del bao y enfriar. Leer a 505 (490 530) nm, llevando a cero con Blanco.
LINEARIDAD DEL METODO: La reaccin es lineal u sigue la ley de Lambert-Beer hasta 1000 mg/dL VALORES DE REFERENCIA: HOMBRES (mg/dL) > 55 35 55 < 35 MUJERES(mg/dL) > 65 45 65 < 45
Pronstico favorable Riesgo Normal Alto riesgo
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CALCULOS: HDL colesterol= D x f f= 0.762 S
DETERMINACION DEL FACTOR DE RIESGO DE INFARTO AL MIOCARDIO. VLDL + LDL = --------------------------HDL
F.R.
CUESTIONARIO: 1.- Determine el Factor de Riesgo del paciente analizado.
2.- Indique el Perfil de Lpidos completo.
3.- Porque es importante realizar el perfil de Lpidos.
4.- Que indicaciones se le deben de dar al paciente antes de realizar el Perfil de Lpidos.
5.- Cuales son los factores de riesgo que favorecen las hiperlipidemias:
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REPORTE PERFIL DE LIPIDOS: No. DE MUESTRA:_________________________
RESULTADOS: RERENCIA COLESTEROL TRIGLICERIDOS :___________ :___________
METODO
VALOR DE
__________ __________ __________ __________ __________
_________________ _________________ _________________ _________________ _________________
HDL-COLESTEROL:___________ LDL-COLESTEROL :___________ FACTOR DE RIESGO:_________
INTERPRETACION DIAGNOSTICA DEL LABORATORIO:
ANALIZO:_____________________________________ NOMBRE Y FIRMA
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PRACTICA NO. 5 PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL Las principales funciones del rion son: 1) Formacin de la orina 2) Regulacin del equilirio hidroelectrolitico 3) Regulacin del equilibrio acido-base 4) Excresin de los productos de desecho del metabolismo proteico 5) Funcin hormonal El laboratorio clinico desempea un papel importante en el diagnostico y evaluacin de todas las enfermedades renales. Las pruebas clnicas de laboratorio permiten a veces detectar la presencia de anormalidades de la funcin renal mucho tiempo antes del desarrollo de los sintomas de la enfermedad. El papel principal desempeado por las pruebas funcionales renales en la medicina clnica consisten en la evaluacin de la severidad de la enfermedad renal y en el seguimiento de su evolucin. Las principales pruebas de bioquimica clnica que se realizan para valorar la funcin renal son:
1.- Determinacin de Urea 2.- Nitrogeno Ureico Sanguneo (BUN) 3.- Determinacin de Creatinina 4.- Depuracin de Creatinina CLEARENCE 5.- Determinacin de Acido Urico.
FECHA:
.
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PRACTICA NO. 5.1 CUERPOS NITROGENADOS *UREA* Ls urea constituye la fraccin de nitrgeno no proteico mas importante en la mayora de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo proteico. Se produce en el hgado y es excretada por la orina atraves de los riones. Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta como una posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores sericos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteracin en ests variables se traducir en un cambio de la concentracin de urea en suero.
Los mtodos de urea en lquidos biolgicos pueden dividirse en 3 grupos: a.- DIRECTO: Condensacin de la Urea con diacetilmonoxina b.- INDIRECTO: Determinacin como amoniaco como producto de la accin de la ureasa sobre la urea. c.- OTROS PROCEDIMIENTOS que incluyen principios fisicos o fotomtricos de anlisis.
METODO ENZIMATICO: PROCEDIMIENTO: TECNICA EN SUERO O PLASMA: En tres tubos marcados blanco, Standard y Desconocido colocar una o dos gotas de agua y agregar: B ---------------1 gotal S 20l --------1 gotal D --------20l 1 gotal
Standard Suero o Plasma Ureasa
Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C.
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Luego agregar: REACTIVO 1 REACTIVO 2 1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml.
Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C. Luego agregar Agua destilada 10ml 10ml 10ml
Mezclar por inversin y retirar del bao. Despus de 10 minutos leer a 540 nm llevando a cero con el blanco.
CALCULO: Suero o Plasma Urea= D x Factor Factor=60 mg/dl S
CIFRAS NORMALES. 20 - 45 mg/dl
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5.2 CUERPOS NITROGENADOS *CREATININA* TECNICA DE PETERS MODIFICADA.La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo que va del color amarillo al anaranjado (reaccin de Jaff) suceptible de medicin fotomtrica. La reaccin no es especfica ya que abarca todos los cromgenos de la sangre, pero como la mayora de estos se encuentran en los eritrocitos, se evita su interferencia usando suero o plasma (no hemolizado).
REACTIVOS: - Solucin de Acido Pcrico al 1 % (guardar en frasco obscuro). - Hidrxido de Sodio al 10 %. - Solucin patrn de Creatinina PROCEDIMIENTO: NOTA: No usar sangre hemolizada ya que los eritrocitos contienen creatinina. METODO ENZIMATICO FUNDAMENTO: La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtracin renal. La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reaccinde Jaffe) produciendo un cromgeno rojo. La velocidad de esta reaccin, bajo condiciones controladas, es una medida de la concentracin de creatinina de la muestra puesto que se comporta como una reaccin cinticade primer orden para la creatinina. TECNICA: Equilibrar el reactivo de trabajo a la temperatura de reaccin (25C). antes de agregar la muestra, llevar el aparato a cero con agua destilada. ESTANDAR 1,0 ml 100L -----MUESTRA 1,0 ml ------100L
REACTIVO DE TRABAJO ESTANDAR MUESTRA
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Mezclar inmediatamente, iniciando al mismo tiempo el cronometro y proseguir la incubacin. A los 10 segundos exactos medir la absorbancia (S1 y M1) y continuar la incubacin. Medir nuevamente la absorbancia (S2 y M2) a los 2 minutos despus de la primera.
CALCULOS: 1) CREATININA EN SUERO (mg/l)= (M2 M1) x f f= 2.0 mg/dl S2 S1
VALORES DE REFERENCIA: 0.6 1.3 mg/dl.
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P RACTICA NO. 10 FECHA: .
CUERPOS NITROGENADOS *ACIDO URICO*
INTRODUCCION: El Acido Urico proviene del metabolismo de las bases purcas (guanina) y se elimina por la orina. Parte del cido rico circulante es endgeno (por destruccin normal de los tejidos del organismo) y parte exgeno (por el metabolismo de los alimentos). La mayor parte de los mtodos para dosificarlo se basa en su oxidacin y otros por su degradacin con Uricasa. METODO ENZIMATICO PROCEDIMIENTO En tres tubos marcados blanco, Standard y Desconocido colocar: BLANCO 1 ml 25 l ------------------ESTANDAR 1 ml ---------25 l ---------MUESTRA 1 ml -------------------25 l
REACTIVO AGUA DESTILADA ESTANDAR MUESTRA
Mezclar e incubar a 37C por 5 minutos a 555 nm, llevando a cero con blanco. CIFRAS NORMALES ACIDO URICO: 3.0 5.7 mg/dL CALCULOS: Abs muestra x 6.0 mg/dl Abs Estandar
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PRACTICA NO. 6 FECHA: .
PROTEINAS TOTALES
FUNDAMENTO: Las protenas del suero reaccionan con el reactivo de Biuret formando una coloracin violeta, cuya intensidad es proporcional a la concentracin de las mismas en la muestra. Se recomienda que el suero se procese el mismo da de su recoleccin, pero puede ser almacenado 3 das en refrigeracin o 7 en el congelacin. REACTIVOS: 1.2.Patrn de Protenas totales (7gr/100ml). Reactivo de Biuret (concentrada).
METODO ENZIMATICO:
REACTIVO AGUA DESTILADA ESTANDAR MUESTRA BLANCO 1 ml 10 l ----------------ESTANDAR 1 ml --------10 l --------MUESTRA 1 ml ----------------10 l
Mezclar e incubar a 37C por 10 minutos y leer a 550 nm (546), llevar a cero con blanco.
CALCULO: Abs Muestra x 6g/dL Abs Estandar
VALORES DE REFERENCIA: Protenas totales: 6.2 - 8.0 g/dL.
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6.1
FUNDAMENTO:
*ALBUMINA*
La albumina reacciona con el verde de Bromocresol y debido al llamado error proteco de los indicadores, se forma una coloracin verde que es proporcional a la concentracin de la albmina en la muestra. REACTIVOS: 1.- Amortiguador (concentrado). 2.- Verde de bromocresol (concentrado).
REACTIVO DE ALBUMINA: Transferir 100 ml del amortiguador y 3 ml de verde de bromocresol a un matraz de 500 ml y aforar con agua destilada. PROCEDIMIENTO: -------------------------------------------------------------------------------------------------------------REACTIVO BLANCO MUESTRA PATRON -------------------------------------------------------------------------------------------------------------Muestra 0.01 Patrn 0.01 Reactivo de Albmina 1.0 ml. 1.0 ml. 1.0 ml. -------------------------------------------------------------------------------------------------------------Mezclar y reposar 5 minutos. Leer a 600 nm8550-628) Color estable por1 hora. CALCULO: Abs Muestra x 5 g/dL Abs Estandar
VALORES DE REFERENCIA: Albmina: 3.8 - 5.4 g/dl.
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PRACTICA No. 7 FECHA:________ EXAMEN GENERAL DE ORINA
INTRODUCCION:
La orina es un lquido excretado por el rin y su examen es de gran utilidad en el diagnstico de varios padecimientos , en los que se modifican sus caracteres fsicos y/o qumicos o aumentan los elementos celulares que normalmente se encuentran en pequea cantidad. Su estudio es de utilidad no slo en transtornos urinarios sino tambin en muchos transtornos generales o localizados en porciones distales del organismo. El estudio de los componentes qumicos normales se debe efectuar en orina de 24 hrs. debido a las variaciones de concentracin de sus componentes y la aparicin de ciertos compuestos durante el da, entre los principales tenemos: 1.- UREA: Se elimina de 15 a 35 gr/24 hrs. Aumenta en casos de degradacin protenica, cancer, fiebre, diabetes, etc. Disminuye en casos de inanicin, transtornos hepticos, etc. 2.- AMONIACO: Se elimina unido a cidos principalmente fosfatos y sulfatos. Su determinacin solo tiene valor en orinas frescas cuando no se ha iniciado la accin bacteriana. Aumentan en la ACIDOSIS. 3.- ACIDO URICO: Se elimina de 0.4 a 1.2 gr/24 hrs. Aumenta en incremento de destruccin nucleoproteca como neoplasias, tuberculosis, leucemias, ictericias hemolticas, etc. 4.- CREATININA: Se elimina de 1 a 1.5 gr/24 hrs. Aumenta en actividad muscular anormal como epilepsia. 5.- CLORUROS, FOSFATOS, CALCIO, ETC. El urinalisis implica el examen de los caracteres fsicos y componentes qumicos de la muestra, as como el estudio microscopico del sedimento urinario.
OBJETIVOS: Conocer las tcnicas bsicas y actualizadas para el exmen general de orina. Analizar las propiedades fsicas y qumicas de la orina. Realizar la observacin microscpica de elementos celulares en el sedimento urinario.
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REACTIVOS: - Tiras reactivas comerciales. - Colorante de Eternheimer-Malbin ( Solucin diluida). MATERIAL. Recipientes recolectores de orina. Tubos de ensaye VACUTAINER. Etiquetas adheribles. Portaobjetos. Cubreobjetos. Pipeta automtica de 20 microlitros. Puntillas plsticas para pipeta. Cmaras KOVA. Papel adherente. Gradilla. EQUIPO. Microscopio. Centrifuga. Equipo automatizado Clinitex 50. REACTIVOS. Control positivo (tiras) Chek-Stix. BAYER. Control negativo.(tiras) Chek-Stik. BAYER. Tiras reactivas para uroanalisis (Multistix 10SG, Ames de Mexico) Agua destilada.
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INDICACIONES DE TOMA DE LA MUESTRA: De ser posible, utilize guantes de latex; de no ser as , lave perfectamente sus manos con jabn y abundante agua. Cualquier residuo de jabn puede causar errores en el anlisis. 1.- En el caso de ser mujer realizar un aseo del rea pbica con jabn y abundante agua. En el caso de ser Varn y no tener la circuncicin, se retrae la cabeza que cubre la cabeza del glande (pene) con un movimiento hacia atras para exponer el meato uretral. Debe de realizarse para ambos casos una limpieza posterior con una gasa de preferencia estril. (Ver anexos) Este procedimiento debe de repetirse con una segunda gasa. 2.- Iniciar la miccin sin recolectar la primer fraccin, la cual se desecha en el excusado. en el recipiente que se le proporcion en el laboratorio, recolecte la fraccin del chorro medio. Termine de orinar desechando la fraccin final. 3.- Etiquetar la(s) muestra(s), anotando # de identificacin, nombre y hra de recoleccin de la muestra. 4.- Iniciar el anlisis en un tiempo no mayor de una hora de iniciada la recoleccin.
EXAMEN FISICO: 1.- VOLUMEN: En el adulto normal se forma diariamente de 600 a 1,800 mL. de orina. El volmen normal depende de la ingestin de agua, de la temperatura del ambiente, de la dieta y del estado fsico y mental de la persona. 600 - 800 mL ----------- Normal Poliuria ----------- Aumento anormal del volmen de orina de hrs. Oliguria ----------- Disminucin anormal. Anuria ---------- Cesacin total de la excresin urinaria.
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2.- ASPECTO: Normalmente la orina recien emitida es transparente, pero puede volverse turbia por reposo o por la presencia de cristales, moco . A medida que la orina se enfria y que ocurren cambios de pH como resultado de la acccin bacteriana, ocurre precipitacin de solutos. La orina normal es lmpida y transparente, o con escasos fosfatos, uratos u oxalatos. El exmen del sedimento urinario es la forma ms segura para determinar la naturaleza de la turbidez urinaria.
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3.- COLOR: La orina de personas normales puede presentar toda gamma de amarillos, generalmente tiene color amarillo claro( paja) o ambar. El color vara con la cantidad y concentracin de la orina eliminada. El color y la transparencia del frasco interfieren se aconsejan usar tubos de 16 x 150 mm. se homogeiniza por rotacin y se observa con buena luz. Amarillo paja a mbar ------------------------- Normal. Amarillo marrn al verde ------------------------ Enfermedades hepaticas Rojizo --------------------------------------------------- Sangre o hemoglobina. 4.- Olor: La orina reciente tiene un olor caracterstico aromtico, debido a la presencia de cidos voltiles, ms intenso en las orinas concentradas. Suigneris -------------------------------------------- Normal Acetona ----------------------------------------------- Cetosis diabtica. Amoniacal ptrido -------------------------------- Infeccin.
5.- pH : Mide la cantidad de iones hidrgeno libres, no la excresion total de cidos. Para que esta prueba tenga valor diagnstico se debe medir el pH en orina reciente y respetar las indicaciones de uso al igual que los tiempos de lectura de la tira del fabricante. (Lakeside , Bayer o Ames) FUNDAMENTO: Principio de doble indicador. Interpretacin: Se lee a los 60 segundos. La mala tcnica de uso de la tira, ocaciona contaminacin del rea de pH, produciendo resultados falsamente disminuidos. Para que esta prueba tenga valor diagnstico se debe medir el pH en orina reciente. NORMAL. El pH urinario en pacientes adultos puede variar desde 4.5 a 8.0 en especimes recin emitidos. ANORMAL. El pH usualmente ms cido en el caso de acidosis diabtica, fiebre, efisema pulmonar, diarrea y deshidratacin. Un pH alcalino se encuentra en cistitis crnica, ciertas infecciones en tracto urinario, obstruccin pilrica, disfuncin renal aguda y crnica, acidsis renal tubular, intoxicacin por salicilatos de acetozolamida. Valor de Referencia: pH : 5.5 6.5
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6.- DENSIDAD o GRAVEDAD ESPECIFICA. FUNDAMENTO: Cambio aparente de pKa de polielectrolitos pretratados en relacin a la concentracin inica. Procedimiento: Se lee a los 45 segundos. Interpretacin: En orinas con pH alcalino debe asumirse 0.005 a la lectura obtenida. Se pueden obtener resultados elevados en presencia de cantidades moderadas de protenas (100-750 mg/dl). NORMAL. La gravedad especifica mide la capacidad del rion para diluir concentrar, indica la proporcin relativa de slidos disuleltos en el volumen total del espcime. La gravedad especifica vara entre 1.010 a 1.025, dependiendo de la ingesta de lquidos, la ms alta es la obtenida en la primera de la maana. ANORMAL. Esta elevada cuando hay vmito diarrea , disminuida cuando hay incremento en la ingesta de lquidos, insuficiencia adrenal, hepatopatas, falla cardiaca congestiva, en diabetes inspida y anormalidades como : falla renal aguda, defectos tubulares, glomerulonefritis y pielonefritis.
VALOR DE REFERENCIA: 1.003 y 1.030, variando segn la ingestin de alimentos a agua, y en relacin directa con la cantidad de slidos disueltos.
EXAMEN QUIMICO: Se consideran todos aquellos metabolitos que frecuentemente aparecen en las orinas normales en cantidades mnimas, tan pequeas que con los reactivos normales comunes no alcanzan a ser descubiertas por lo cual se consideran practicamente ausentes, y que slo aumentan en trastornos orgnicos. Generalmente se reportan por cruces de acuerdo con la intensidad de la reaccin, con el siguiente significado.
(-) Negativo (H) Huellas
( +) Positivo debil (++) Positivo
( +++) Positivo fuerte.
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A)
GLUCOSA:
FUNDAMENTO: Doble reaccin secuencial enzimtica de glucosa oxidasa y peroxidasa. Procedimiento:Se lee a los 30 segundos Interpretacin: La temperatura, las cetonas, el cido ascrbico y la gravedad especifica alteran la reactividad del rea. NORMAL. Normalmente no existe glucosa detectable en la orina, esta es absorbida en el rion por los tbulos despus de atravesar el glomrulo. El umbral renal es aproximadamente 10 14 mmol/l. , si la concentracin sangunea excede ste nivel aparece en orina. (glucosuria). ANORMAL.La diabtes mellitus es la principal causa de glucosuria, otras causas ms comunes son el dolor, hipertiroidismo, infarto del miocardio, traumatismos, sindrome de Cushing, acromegalis. Dao hepatico. Shock y pancreatitis aguda. Puede verse tambin una elevacin posterior a la administracin de corticoides y anestesia. Puede ser determinada con los siguientes mtodos cuando se desea hacer una cuantificacin. - Benedict cualitativa - Orto-Toluidina (cuantitativo) - Somogyi-Nelson - Folin-wu B) PROTEINAS:
Fundamento: Principio de error proteco de los indicadores. Procedmiento: Se lee a los 60 seg. Posibles Interferencias: Pueden ocurrir falsos positivos en orinas alcalinas, en presencia de compuestos de amonio cuaternario (antisptico, detergentes), o con limpiadores de la piel que contengan clorohexidina. VALOR DE REFERENCIA: NORMAL. Los niveles de albumina por debajo de 15 ug/ml pueden ser considerados como normales ya que en orina puede aparecer por ejercicio extenuante y exposicin al fro, en algunas con personas con proteinuria ortosttica pueden aparecer protenas despus de levantarse.
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ANORMAL. Proteinuria: puede ocurrir en varias enfermedades renales debido a un incremento en la permeabilidad del glomrulo. La glomerulonefritis, pielonefritis o hipertensin maligna pueden ocasionar proteinuria al igual que la toxemia del embarazo, hipertensin benigna, la falla cardiaca congestiva y la diabetes mellitus. Cuando se requieren resultados cuantitativos se usa la siguiente prueba: - Pruebas con acido sulfosalicilico C) CUERPOS CETONICOS:
Fundamento: Reaccin de cido acetoactico con nitroprusiato de sodio. Procedimiento: Se lee a los 40 seg.
Interpretacin: La gravedad especifica elevada, el pH bajo, los metabolitos de levo-dopa, puede dar resultados elevados. NORMAL. Los cuerpos cetnicos, ( cido acetoactico, acetona y cido bhidroxibutrico), pueden aparecer en muestras de pacientes normales con dietas deficientes en carbohidratos, cuando el cuerpo no puede hallar glucosa que catabolizar, obtiene la energa de los depsitos de grasas las cuales a su vez son convertidas en cuerpos cetnicos. ANORMAL. Los cuerpos cetnicos aparecen en la orina antes que en la sangre. En la diabetes fuera de control, la cetonuria es un signo importante y puede estar presente en los casos en los que estn incrementados los requerimientos energticos como hipertiroidismo, diarrea, vmito, fiebre, embarazo, lactancia, inanicin o trauma. Las pruebas que pueden servir para confirmacin del resultado de cetonas sn las siguientes: - Prueba de Rothera - Reaccin de Legal
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D)
BILIRRUBINAS, UROBILINOGENO Y UROBILINA: con la dicloranilina
FUNDAMENTO: Acoplamiento de la bilirrubina diazotizada en un medio fuertemente cido. Procedimiento: Se lee a los 30 seg Interpretacin:
La reactividad puede ser alterada por la presencia de sulfato de indoxilo, etodolaco y cido ascrbico. NORMAL. La bilirrubina se forma del metabolismo de la hemoglobina en el reticuloendotelio. Despus es transportada al hgado , donde se conjuga con el cido glucornico, y despus es excretada va tracto biliar al intestino, donde es reducida a urobilinogeno con la ayuda de la flora intestinal, Normalmente hay pequea cantidad de bilirrubina en orina que se encuentra por debajo de la sensibilidad de cualquier tira reactiva. ANORMAL. La bilirrubina aparece por obstruccin biliar y en hepatopatas. La ictericia causada por la obstruccin eleva la bilirrubina, la hemoltica no. Enfermedades como hepatitis, cirrosis , carcinoma del pncreas, obstruccin biliar, envenenamiento por inhalaciones nocivas y la falla cardiaca congestiva asociada con ictericia cursan con bilirrubinuria.
E).- UROBILINOGENO FUNDAMENTO: Reaccin de Erhlich modificada. PROCEDIMIENTO: Se lee a los 60 seg. Causa interferencias: El cido paraaminisaliclico, las sulfonamidas y la formalina presentes en la orina por medicacin o contaminacin. VALOR DE REFERENCIA: Negativo INTERPRETACIN: NORMAL. El urobilinogeno se forma a partir de la bilirrubina por la accin de la flora intestinal, de donde una parte es excretada por las heces. Otra parte (+/10-15%) es regresada al hgado y excretada por la orina; la presencia de una pequea parte de urobilinogeno en la orina es normal.
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ANORMAL. No existe en el caso de obstruccin biliar. Hay disminucin en el caso de terapia antibitica. El incremento se presenta en caso de dao celular heptico, cirrosis incipiente, hepatitis viral aguda, hepatitis asociada con mononucleosis (periodo ixtrico), anemia hemoltica, hemlisis extravascular, anemia perniciosa, talsemia o falla cardiaca congestiva.
F) HEMATURIA Y HEMOGLOBINURIA: FUNDAMENTO: Catalizacin del di-hidroperxido de di-isopropibenceno y 3,3,5,5- tetrametibencidina por la similut de la actividad de peroxidasa y hemoglobina. METODOLOGA: Se lee a los 60 seg. VALOR DE REFERENCIA: Negativo INTERPRETACIN: La sensibilidad del rea disminuye en orina con gravedad especifica elevada por ingesta de Capotena (captotril), El hipoclorito y peroxidasas microbianas en infecciones del tracto urinario pueden causar falsos positivos. NORMAL. Ms de 10 eritrocitos/uL es considerado como patolgico ,el rea de sangre en la tira multistix 10SG es capaz de revelar la presencia de sangre oculta en tres condiciones ms comunes: hematuria (eritrocitos intactos), hemoglosuria (eritrocitos lisados), mioglosuria(de tejido muscular). ANORMAL. La hematuria esta presente en : nefritis aguda, litiasis, infeccin cronicau carcinomas renales, papiloma maligno. Las sulfonamidas y anticoagulantes pueden tambin causar hematuria. La hemo-globinuria puede ser resultado de reacciones hemotliticas post-transfuncionales, descargas electricas, quemadas severas, etc. La mioglobinuria ocurre en transtornos musculares, traumatismos y dermatomiocitis.
Para c0onfirmar el resultado se utiliza una de las siguientes pruebas como sn: - Prueba de la Bencidina. - Prueba de la O- Toluidina
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G) LEUCOCITOS. FUNDAMENTO: Hidrlisis de un derivados del ster cido aminipirrol, liberando 3- hidroxi-5-fenil pirrol. Catalizado con esterasa. PROCEDIMIENTO: Se lee a los 120 seg. VALOR DE REFERENCIA: Negativo Interpretacin: La descarga vaginal puede ocasionar contaminacin de la muestra. Los resultados disminuidos pueden ser causados por elevadas concentraciones de glucosa, gravedad especifica elevada, medicacin con cefalosporinas tetraciclina. NORMAL. La prueba detecta la esterasa liberada de los leucocitos granulocitos en la orina. En condiciones normales la orina debe ser negativa a leucocitos. Los falsos positivos pueden aparecer por contaminacin del espcimen. ANORMAL. La presencia de leucocitos en la orina sugiere una infeccin del tracto urinario, la combinacin de leucocitos y nitritos positivos es una buena indicacin para uqe que se haga el anlisis del sedimento urinario y se confirme la presencia de leucocitos. H).- NITRITOS: FUNDAMENTO: Conversin de nitratos en nitritos por la accin de las bacterias PROCEDIMIENTO: Se lee a los 60 seg. Gram negativas en orina. VALOR DE REFERENCIA: Negativo INTERPRETACIN: La prueba slo detecta infecciones producidas por gram negativas. El cido ascrbico interfiere y puede haber resultados falsos negativos si falta incubacin en vejiga si no se ingieren nitratos en la dieta. NORMAL. La pruebade Griess modificada cuando es positiva- es virtualmente diagnostica de bacteriuria significativa, (105 microorganismos por ml de orina),como la prueba depende de la conversin (in vivo) de nitratos de la dieta, en nitritos por la presencia de bacterias gram negativas se recomienda el uso de orina con no ms de dos horas de haber sido emitida y por lo menos 4 horas de 0incubacin en vejiga, para obtener resultados confiables. ANORMAL. Una reaccin positiva de nitritos indica de manera muy precisa la presencia de infeccin. Aproximadamente de 1 2% de las nias y entre un 5 10 % de las mujeres presentan bacterinuria, esta puede estar asociada a pielonefritis, cictitis y uretritis.
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EXAMEN MICROSCOPICO: METODOLOGA PARA EL ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO. Existen 2 mtodos que son la forma tradicional y la estandarizada, recomendada por la Norma internacional de la NCSL que hasta ahorita no se ha implantado en Mxico, pero que debemos de tratar de saber y realizar para estar conforme a dichas Normas de calidad que rigen los laboratorios clnicos y que nos compete por ser nuestra fuente de trabajo, por lo cual les enlisto las dos metodologas ya que para la Internacional se requiere de equipo cosa que en la Universidad no contamos ms que con lo indispensable. METODO TRADICIONAL. PROCEDIMIENTO: 1.Se mezcla la orina y se colocan unos 10 ml en un tubo de ensayo de 16x150. 2.Centrifugar a 2 000 r.p.m. durante 5 minutos. 3.Decantar el sobrenadante dejando solo el sedimento Se homogeneizar por golpes suaves laterales con los dedos y se tomar una gota de la suspensin que se depositar en el centro de un portaobjetos limpio y nuevo, se colocar un cubreobjetos de 20 x 20 mm sobre la gota dejando que asiente, enfocar al microscopio atenuando la luz y as mismo, se deber describir la presencia de los distintos elementos formes que componen la orina y la cantidad en forma subjetiva (abundantes, regular y escasos)(Argeri y Lopardo, 1993). y observar al microscopio el sedimento urinario. METODOLOGIA ESTANDARIZADA: Con la metodologa estandarizada Kova una vez depositado los 12 ml de orina en el tubo de ensaye, se centrifugar durante 5 minutos a una fuerza centrfuga relativa (FCR) de 400g.Se calcular las revoluciones por minuto (R.P.M.) a las que debe centrifugar para tener una FCR de 400g empleando la siguiente formula: RFC= 11.18 x Radio en cm x [R.P.M./1000]2 En donde: RFC= fuerza centrfuga relativa. Radio = distancia en centmetros entre el eje de rotacin y el centro del tubo de la centrfuga. Una vez centrifugada la muestra, eliminar 11ml de sobrenadante con pipeta o jeringa, conservar en el tubo 1ml para resuspender el sedimento. En los casos peditricos se utilizarn bolsas peditricas dependiendo del sexo (nio o nia) en que no puedan recolectar 12 ml, se pueden centrifugar 6 ml, eliminando 5.5 y resuspender en 0.5ml.
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Adicionar al sedimento una gota de colorante Sternheimer-Malbin, mezclar suavemente hasta obtener una mezcla homognea. Con una pipeta Pasteur o con un capilar, tomar una gota de la suspensin del sedimento teido y colocarla en la esquina de una cmara de KOVA glasstic slide 10. La cmara se llenar por capilaridad con un volumen estndar de 6.6 microlitros. Localizar la cmara y las estructuras de mayor tamao (cilindros) con objetivo 100x.Estudiar los otros elementos formes con objetivo 400x.Para reportar los elementos formes/microlitro hay dos mtodos descritos por el fabricante: Realizar el conteo de cada elemento forme en 10 cuadros pequeos de diferentes cuadrantes empleando aumento de 100x para cilindros, o 400x para otros elementos formes. Realizar el clculo empleando la formula siguiente: Elemento forme/microlitro = [N entre C] x 7.5 En donde: N= numero de elementos formes observados. C= numero de cuadros pequeos en los que se efecta el conteo 7.5= factor constante. (Bayer, 1997). De esa manera se realizar una tabla en donde se igualara la cantidad en cruces de los elementos formes con la cantidad en microlitros de dichos elementos formes. Para la estadstica de los datos se usar la prueba de chi cuadrada para los anlisis, sobre diferencias de concordancia entre las lecturas. 4.Anotar los elementos encontrados ya sea por la forma tradicional o estandarizada los cuales pueden ser cualquiera de las clulas enlistadas a continuacin.
a).-
CELULAS EPITELIALES: Generalmente tienen poco significado.
b).-
LEUCOCITOS: La eliminacin normal de leucocitos en la orina es del orden de 3000/ml lo que corresponde aproximadamente a un leucocitos por cada 3 - 5 campos en orina no concentrada. c).ERITROCITOS: La presencia de eritrocitos en la orina indica sangrado en algn lugar de las vas urinarias. d).CILINDROS: Los cilindros urinarios son precipitados de protenas que se forman en los tbulos de la nefrona. Las orinas normales pueden presentar algunos cilindros hialinos. Pueden observarse ademas de estos los cilindros leucocitarios, hemticos, epiteliales, granulosos, creos, grasos.
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e).-
CILINDROIDES: Son en todos los aspectos iguales a los cilindros, excepto que tienen extremos Puntiagudos.
f).-
FILAMENTOS MUCOSOS O MUCINA: Se pueden encontrar en la orina normalmente pequeas cantidades de filamentos mucosos. g).ESPERMATOZOIDES: Normalmente se encuentra en la orina de los hombres despus de la eyaculacin en la mujer contaminada por la secresin vaginal despus del coito. Nota: No se reportan unicamente para cuestiones medico-legales. h).BACTERIAS: La orina normal no debe contener bacterias, cuando menos en nmero apreciable. i).HONGOS Y LEVADURAS: En las orinas normales no deben observarse estos elementos.
j).-
PARASITOS: Exceptuando el flagelado Trichomana vaginalis, es raro encontrar zooparsitos en el. SEDIMENTO NO ORGANIZADO: CRISTALES: Normalmente no hay cristales en la orina recin emitida. En general los cristales urinarios no tienen significacin salvo si son de sulfonamidas, cistina, leucina, tirosina u oxalatos. La naturaleza de los cristales esta en relacin directa con el pH de la orina. 1.CRISTALES DE ORINA ACIDA: Oxalato de Calcio, Ac. Urico, Cistina, Leucina, Tirosina Urato de Sodio, Uratos Amorfos. 2.CRISTALES DE ORINA ALCALINA: Fosfatos Amorfos, Fosfatos Triples, Carbonato de Calcio, Fosfato de Calcio, Urato de Amonio, Urato de Calcio.
CUERPOS EXTRAOS: No es raro que la orina se contamine con substancias extraas exgenas. Suele suceder as cuando se emplean recipientes sucios para recogerlas o cuando las muestras no se conservan adecuadamente.
M.C. CONSUELO CHANG RUEDA. 48
REPORTE DEL EXAMEN GENERAL DE ORINA.
PACIENTE:__________________________
ESTUDIO FISICO DE LA ORINA: ESTUDIO FISICO DE LA ORINA: VOLUMEN:_________________ OLOR........: _________________ pH.............: _________________
COLOR:________________________ ASPECTO:______________________ Densidad:_______________________
ESTUDIO QUIMICO DE LA ORINA: GLUCOSA:__________________ ACETONA:__________________ ALBUMINA:_________________ NITRITOS:__________________ ESTUDIO MICROSCOPICO: LEUCOCITOS:__________________ERITROCITOS:___________________ LEVADURAS:___________________CEL.EPITELIALES:________________ BACTERIAS:____________________FILAMENTOS DE MUCINA__________ CRISTALES DE:_________________________________________________ OTROS:________________________________________________________ _______________________________________________________________ SANGRE: _______________________ HEMOGLOBINA:_________________ BILIRRUBINA:___________________ UROBILINA:____________________
RESPONSABLE DEL ANALISIS:
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50

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FAC. DE C. QUIMICAS./ CAMPUS IV/UNACH.

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS CAMPUS IV

LICENCIATURA DE QUIMICO FARMACOBIOLOGO

CICLO JULIO-DICIEMBRE .2009 TAPACHULA, CHIAPAS

M. EN C. CONSUELO CHANG RUEDA

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EXAMEN MICROSCOPICO: PROTOZOARIOS:___________________________________________ HELMINTOS:_______________________________________________ BACTERIAS:________________________________________________

OTRAS OBSERVACIONES: ERITROCITOS:______________________ LEUCOCITOS:______________________ LEVADURAS:______________________

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Control y regulacin hormonal de la glucemia.

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Reactivo en uso Agua destilada Estandar Muestra

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VALORES DE REFERENCIA: Suero o Plasma: 70 105 mg/dL 50 70 mg/dL

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CIFRAS NORMALES: Suero: 80-120 mg%

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REPORTE DEL RESULTADO:

No. De Clave:_________________ No. De Identificacin de su muestra:__________________________________

NOMBRE DEL PACIENTE:_________________________________________ Resultado de su muestra : _________________________________________ ________________________________________________________________

_______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________

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PRACTICA No. 3 3.2.- PRUEBAS CONFIRMATORIAS DE DIABETES MELLITUS:

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REPORTE DE SUS RESULTADOS:

GLUCOSA POSTPANDRIAL Glucosa en ayunas: Glucosa postpandrial:

Cuestionario: 1.- Cual es la dieta previa que se le debe de dar al paciente:

3.- Indique en base a sus resultados si su paciente esta o no diabetico:

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MUESTRA CLINICA: Suero o plasma (heparina o EDTA).

Estandar Muestra Reactivo de trabajo

El color de reaccin final es estable 30 minutos.

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LINEARIDAD DEL METODO: Hasta 700 mg/dL

EXAMEN MICROSCOPICO: PROTOZOARIOS:___________________ HELMINTOS:_ BACTERIAS:__________________________

OTRAS OBSERVACIONES: ERITROCITOS: LEUCOCITOS: LEVADURAS:__

No. De Clave:_ No. De Identificacin de su muestra:__________________

NOMBRE DEL PACIENTE:_____________________ Resultado de su muestra : _ ____________________________________________

_______________________________ _ _ _______________________________

RESULTADOS: RERENCIA COLESTEROL TRIGLICERIDOS :_ :_

__

_________ _ _ _ _________

HDL-COLESTEROL:_____ LDL-COLESTEROL :_ FACTOR DE RIESGO:_____

CUERPOS NITROGENADOS ACIDO URICO