Fase Pr-analtica (60% -70%)

Coleta Transporte

Fase analtica (20% - 30%) Fase ps-analtica (10%)

Realizada do local real da infeco; Obteno de uma quantidade suficiente de amostra Utilizao de dispositivos apropriados para a coleta do material Obteno de cultura antes da administrao de antibiticos Identificao do material

Seringa:
Exsudatos frescos ou amostras lquidas: procedimento vlido para amostras enviadas para anlise logo aps a coleta.

Frascos :
Frascos de boca larga com sistema de fechamento eficiente contra vazamento e contaminao de material

Swab
Algodo estril Rayon ou Dracon Alginato de clcio Soluo salina, meio de cultura Amie (com ou sem carvo),Stuart e Clairy Blair.

Amostra recebida em formalina; Coleta de escarro de 24 horas; nico swab para vrios fins; Recipiente imprprio, contaminado ou com vazamento Placas de cultura com crescimento excessivo ou secas.

Seleo de meios de cultura primrios

Transferncia e cultura das amostras clinicas Interpretao das culturas e anlise dos resultados.

Destinados para a reproduo, isolamento e anlise dos microorganismos de interesse medico.

Compostos por
Hidrolisados de protenas: fonte de C e N Carboidratos: Tampes Enriquecimento Inibidores Indicadores de pH gar: agente solidificante Substratos para ao enzimtica

Crescimento:
gar gar gar gar chocolate sangue Cled Mueller Hinton

gar chocolate: meio nutritivo maioria bactrias, adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemcias lisem, liberando hematina. Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. gar sangue: meio no seletivo, crescimento de bactrias gram e + Cled- gar cystine lactose eletrolyte deficient: meio que permite o crescimento de gram+ e gram- . gar Mueller-Hinton um meio de cultura microbiolgico que freqentemente usado para testes de susceptibilidade antimicrobiana.

gar gar gar gar gar gar gar gar

Manitol Mac Conkey, EMB Salmomella Shigella Sabouraud Bili-Esculina Dnase TSI Lowestein Jensen

gar Manitol - Famlias Micrococcaceae

gar Mac Conkey, EMB - Crescimento de bactrias Gram negativas e indicar a fermentao de lactose

gar Salmomella Shigella

gar Sabouraud - Identificao de fungos patognicos e leveduras. gar Bili-Esculina - Isolamento e identificao de estreptococos. gar Dnase - Recomendado para a deteco da atividade desoxiribonuclease de bactrias e fungos. Staphylococcus aureus.

gar TSI - Diferenciao de patgenos entricos (E. coli) pela capacidade de determinar a fermentao do carboidrato.
gar Lowestein Jensen - Mycobacterium tuberculosis

Azul de Toluidina

Caldo Caldo Caldo Caldo Caldo Caldo

tetrationato selenito nitrato malonato triptona e SIM BHI

Caldo tetrationato Meio de enriquecimento para uso com Salmonella spp.Cosposto por sais de bile impede o crescimento de bactrias Gram-positivas e o iodo proporciona o impedimento de crescimento de espcies fecais. Caldo selenito. Diferenciar e identificar vrios tipos de bactrias especialmente a famlia Enterobacteriaceae. Inibem coliformes e outras espcies da flora intestinal como estreptococos. Caldo malonato usado para a diferenciao de bactrias gram-negativas com base na habilidade de utilizar malonato e produzir cido pirvico. Caldo triptona e SIM Metabolizar o triptofano em indol. Diferenciar gneros e espcies de enterobactrias, no fermentadores, Haemophilus e anaerbios. Caldo BHI. Caldo infuso de cerebro e corao e um meio altamente nutritivo empregado para a propagao de cocos.

gar Nutriente Salina tamponada Clary Blair Meio Stuart gua peptonada

Lag: perodo varivel, onde ainda no h um aumento significativo da populao. Log ou exponencial: nesta etapa, as clulas esto plenamente adaptadas, absorvendo os nutrientes, sintetizando seus constituintes, crescendo e se duplicando. A taxa de crescimento exponencial varivel, de acordo com o tempo de gerao do organismo em questo. Estacionria: Nesta fase, os nutrientes esto escasseando e os produtos txicos esto tornando-se mais abundantes. Nesta etapa no h um crescimento lquido da populao, ou seja, o nmero de clulas que se divide equivalente ao nmero de clulas que morrem. Declnio: A maioria das clulas est em processo de morte

O tempo de gerao pode ser calculado quando uma cultura encontra-se em fase exponencial, pela frmula abaixo: N=No.2n, onde N= nmero final de clulas, No= nmero inicial de clulas, n= nmero de geraes. n= log(N) - log(No)/0.301 g = t/n , onde g= tempo de gerao, t= tempo de crescimento e n= determinado acima.

Tamanho: dimetro em milmetros Forma Elevao Margem Cor: branca, amarela, preta, camura, laranja... Superfcie: brilhante, opaca Densidade: opaca, translcida, transparente Consistncia: viscosa, butircea, membranosa

Odores: tnis sujo (citrobacter spp.), ptrido ( Clostridium difficile), plo molhado ( Haemophillus spp), chocolate queimado (

Proteus spp)

Mudanas de cor no meio: indicadores de pH

Avaliao das colnias

Avaliao das colnias

Colorao de Gram Colorao cido resistente Colorao fluorescente (UV) fluorocromos (ag/ac) Laranja de acridina Azul de Toluidina bipsia de pulmo e secrees respiratrias

Gram Negativa

Gram positiva

Identificao das caractersticas bacterianas referente a colorao da parede celular e sua diferenciao em bactrias Gram positivas e Gram negativas; Verificao da forma, arranjo e tamanho das bactrias .

Soluo de cristal violeta

Cristal violeta 1g cido fnico 2 g lcool absoluto 10 mL gua destilada 100 mL

Lugol
Iodo 1 g Iodeto de potssio 2 g gua destilada 300 mL

lcool acetona
lcool 800 mL Acetona 200 mL

Fucsina
Fucsina 2,5 g lccol etlico 100 mL gua destilada 90 mL

Os corantes devem ser armazenados em frasco de vidro mbar em locais onde as condies do ambiente sejam favorveis, com temperaturas entre 20 e 25C (temperatura ambiente) e sem teor de umidade.

Amostras recebidas em Swab

Rolar delicadamente o swab sobre a superfcie de uma lmina limpa Se o swab estiver seco, colocar um pequeno volume de soluo fisiolgica estril, agitar vigorosamente, comprimindo-o contra a parede do tubo e utilizar essa suspenso para o preparo do esfregao. Deixar secar ao ar e fixar ao calor. Corar pelo mtodo de Gram

As amostras recebidas em seringa devem ser transferidas para um tubo estril, homogeneizadas para a execuo de um esfregao em lmina. Se a amostra for muito espessa, diluir em soluo fisiolgica estril antes de fazer o esfregao. Para as amostras recebidas em frascos ou tubos estreis, selecionar a parte mais purulenta e confeccionar o esfregao em lmina. Espalhar a amostra em da lmina e formar o esfregao fino. Deixar secar ao ar e fixar com calor. Corar pelo mtodo de Gram

Colocar uma pequena gota de soluo fisiolgica sobre a lmina.

Com a ala bacteriolgica, tocar a superfcie de uma colnia isolada e emulsionar gentilmente na gota de soluo fisiolgica colocada sobre a lmina. Deixar secar ao ar e fixar no calor Corar pelo mtodo de Gram.

Aps centrifugao (3.000 a 5.000 rpm / 15 min.) remover o sobrenadante e deixar aproximadamente 0,5 mL do sedimento. Homogeneizar e confeccionar o esfregao (+/- 50 uL do material 1 gota) Deixar secar ao ar e fixar no calor. Corar pelo mtodo de Gram

Flambar rapidamente uma lmina de microscopia limpa, nos dois lados, cortando lentamente a chama do bico de Bunsen; Flambar a ala de platina at o rubor e esfri-la. Tomar o tubo de cultura com a mo esquerda e com os dedos mnimo e anelar da mo direita remover a tampa do tubo; Flambar a boca do tubo de cultura;

Introduzir a ala de platina, apreendida entre o polegar e o indicador da mo direita, no interior do tubo at tocar o meio de cultura Flambar novamente a boca do tubo de cultura; Fechar o tubo e coloc-lo na estante; Tomar uma lmina (anteriormente preparada) com a mo esquerda e depositar no centro da mesma uma amostra de suspenso bacteriana;

Espalhar o material com movimentos de rotao da ala de platina, para se obter um esfregao de forma oval, bem fino e uniforme, secar naturalmente;
Manter o esfregao nas proximidades da chama.

Fixar o esfregao, cortando lentamente a chama por 3 vezes, a fim de que o material fique bem aderente lmina. A fixao sempre feita do lado contrrio ao esfregao bacteriano.

Cobrir com cristal violeta e deixar agir por 1 minuto; Cobrir com soluo de lugol por 1 minuto; Lavar com gua tomando cuidado pra que o jato no incida diretamente no material a ser analisado. Descorar com lcool acetona;

Lavar com gua;

Corar com fucsina fenicada por 30 segundos;

Lavar com gua, secar e observar em objetiva de 100 x com leo de imerso.

Bactria Gram positiva roxo escuro

Bactria Gram negativa avermelhadas (rosada)

O cristal violeta cora tanto a parede celular das bactrias Gram + quanto Gram -. O lugol tem ao de fixador, sendo absorvido por ambas, formando assim o complexo cristal violeta-iodo ( CV-I) corando a bactria de roxo.

O lcool acetona funciona como um solvente atuando na poro lipdica da parede celular das bactrias Gram -, resultando numa porosidade e permeabilidade aumentada, extraindo desta forma o complexo CV-I, descorando as clulas.

O lcool acetona, desidratando a espessa camada de peptideoglicano das bactrias Gram +, provoca a contrao dos poros, retendo desta forma o CV-I, mantendo as clulas coradas. A ltima etapa do processo tratamento com o corante fucsina que cora a parede celular das Gram -, tornado-as avermelhadas ou rosa.

Gram positiva

Gram negativa