1

CURS 1 GENERALITI DESPRE RSPUNSUL IMUN Pentru asigurarea supravieuirii principalele probleme ale unui organism viu sunt : Asigurarea hranei, oxigenului i apei Eliminarea produilor de catabolism Meninerea homeostaziei mediului intern Aprarea contra agresiunilor interne i externe Aprarea este : Nespecific : barierele anatomice (tegumente, mucoase), secretiile exocrine (lacrimi, saliva, suc gastric), inflamaia, reacia febril, hemostaza, SRIS (RSPA) Specific = rspunsul imun Imunitatea furnizeaz capacitatea de aprare a organismului fa de : Agresorii externi de natur biologic : bacterii, virusuri, parazii, fungi, celule strine (transplant) Propriile molecule sau celule modificate (ex. celule neoplazice) Sistemul imun este un complex de celule, molecule (Ac) i structuri care se afl distribuite : n organe anatomice : splin, timus, gg limfatici Difuz n tot organismul : la porile de intrare a antigenelor in tegumente i mucoase (bucal, respiratorie, digestiv, genital) n interstiiul organelor interne : ficat, plmni, rinichi n sistemul circulator : snge i limf n cavitile seroase : pleur, peritoneu, pericard n SNC Imunologia studiaz : Structurile moleculare i celulare implicate n aprarea specific Mecanismele de aciune ale sistemului imun Mecanismele de reglare ale sistemului imun Patologia sistemului imun

Problema fundamental a sistemului imun este recunoaterea structurilor self (proprii) i non-self. Structura non-self este orice molecul sau celul care este recunoscut de sistemul imun c strin i este eliminat prin mijloacele aprrii imune

Alterrile mecanismelor de recunoatere duc la patologii diverse : Prin defect nnscut sau dobndit sistemul imun nu recunoate un agresor ca nonself, ceea ce duce la infecii foarte grave (ex. SIDA) Celulele neoplazice pot s scape controlului imun, producnd cancerul Sistemul imun recunoate ca non-self celule sau molecule self normale i le distruge, producnd bolile autoimune Mecanismele aprrii imune la mamifere se grupeaz n : rspunsul imun umoral (RIU) rspunsul imun celular (RIC) Prezentm separat cele dou tipuri de RI din motive didactice. n realitate RIU i RIC sunt intricate. n ambele tipuri de RI locul central l au limfocitele : LB n RIU LTC n RIC. Limfocitele fac recunoatere specific a Ag pentru c au pe suprafa receptori cu structuri complexe, asemntori cu Ig (Ac) care recunosc specific Ag. Un tip de receptori recunoate un singur Ag. Organismul vine n contact n timpul vieii cu milioane de Ag diferite, aa c trebuie s avem n organism limfocite care s aib pe suprafa o varietate la fel de mare de receptori. Practic n organism exist o infinitate de subpopulaii limfocitare (numrul estimat este de zeci de milioane) care difer prin structura receptorilor de recunoatere a Ag. Diferenierea clonelor de limfocite se face prin reorganizarea (translocatia) aleatorie a genelor care codific structura proteic a receptorilor pentru Ag. O subpopulaie de limfocite are pe suprafa acelai tip de receptor pentru Ag (BCR sau TCR) i deci recunoate acelai Ag. Aceast subpopulaie sau familie rezult dintr-o singur celul mam i se numete clon de limfocite. O clon de limfocite cuprinde un numr foarte mare de limfocite identice. Celulele mam (precursorii LB i LT) se formeaz n mduva hematogen. Ele sunt imature. LB se matureaz tot n mduv, pe cnd LT se matureaz n timus. n mod normal clonele de LB i LT care ataca structurile self sunt distruse. Dac aceste clone rmn active ele dau patologia autoimun. RIU RIU se produce prin intermediul imunoglobulinelor (Ac) care recunosc Ag. Ac sunt glicoproteine specializate n recunoaterea moleculelor non-self. Moleculele de recunoatere a Ag se gsesc sub dou forme : circulante (Ac) sau fixate pe suprafaa LB (BCR)

Ac sunt produi de LB stimulate, care se transform n plasmocite. O clon de plasmocite produce un singur tip de Ac. Dup contactul cu Ag crete titrul Ac specifici pentru Ag declanator. n organism se formeaz complexe Ag-Ac (complexe imune) care ajut la eliminarea Ag prin fagocitarea lui (n special de MF i de PMN) sau prin declanarea cascadei complementului. RIU este ndreptat n principal contra bacteriilor i toxinelor bacteriene. RIC Celulele efectoare sunt n principal LTC (citotoxice). LTC au pe suprafa receptori specifici pentru Ag numii TCR. LTC recunosc celulele non-self : celule ale organismului (singenice) care au devenit non-self : canceroase sau infectate cu virusuri / bacterii intracelulare celule strine (alogenice) = aduse prin transplant / gref LTC ader de celulele antigenice prin receptori i secret substane care distrug aceste celule. Tot n cadrul RIC acioneaz o clas de limfocite non-B non-T numite NK (natural killer) care recunosc nespecific i distrug celulele neoplazice.

Celulele fagocitare Celulele fagocitare (n special MF, mai puin PMN) au roluri importante n RI prezint Ag spre LB i LT = au funcie de APC (antigen presenting cells) secret factori solubili (interleukine - IL) care stimuleaz LB i LT fagociteaz complexele imune au efect citotoxic direct (de distrugere) fa de celule acoperite cu Ac i fa de celule neoplazice Dinamica RI Intensitatea RIU se evalueaz mai uor, prin dozarea Ac specifici. Evaluarea RIC se face mai greu. Intensitatea RI depinde de faptul dac organismul este la primul contact cu Ag respectiv sau a mai venit n contact cu acesta n trecut. RI primar este rspunsul organismului la primul contact cu un Ag. Poate fi RIU sau RIC, n funcie de natura Ag. El are o anumit laten, o intensitate sczut i dureaz puin. RI secundar apare la al 2-lea... - al n contact cu acelai Ag. RI secundar apare mult mai rapid, are intensitate mare i dureaz mult. Organismul are memorie

imunologic. Memoria imunologic este un element fundamental al imunitii i apare de exemplu dup o boal infecioas vindecat sau dup vaccinare. Intensitatea RI este variabil de la un individ la altul i la acelai organism n funcie de Ag . Variabilitatea mare a RI se explic prin : Variabilitatea structural foarte mare a Ag Cile diferite de intrare n organism a Ag Cantitatea de Ag Caracterele genetice ale sistemului imun pentru fiecare organism in parte Caracteristicile fundamentale ale RI sunt : Capacitatea de discriminare ntre self i non-self Capacitatea de discriminare ntre Ag diferite Memoria imunologic Hematopoieza liniei limfoide Pentru hematopoieza LB, micromediul specific este mduva hematogen. Pentru LT, acest rol este jucat de timus. IL au rol de stimuli inductori pentru difereniere i maturare. IL sunt produse de o mare varietate de celule din micromediul hematopoietic : MF, LT, mastocite, celulele endoteliale, fibroblati, osteoblati. IL4,IL7 PRE-B CFC-LB+LT cel.stem limfoid IL7 IL2,IL4,IL7 PRO-T PRE-T LT IL5,IL6 ? NK n mduv i n timus, care reprezint organele limfoide primare sau centrale, se produce diferenierea de la celulele precursoare pn la stadiul de limfocit naiv, numit i virgin sau de repaus. Fenomenul este antigen-independent. Limfocitul naiv este imunocompetent, dar nu a fost stimulat niciodata de Ag. Limfocitele sunt eliberate n circulaie i migreaz n organele limfoide secundare sau periferice : ganglionii limfatici, splina, amigdalele, esutul limfoid LT CD8+ LB IL2,IL3,IL4,IL5,IL6 PLASMOCIT

IL1,IL2,IL4,IL6

LT CD4+

asociat mucoaselor (MALT). Acolo se produce stimularea antigenic. Limfocitele se activeaz, se produce expansiunea clonal i limfocitele devin funcionale. La adult, n orice moment dat, majoritatea limfocitelor (aproximativ 98%) se gsesc n organele limfoide i n esuturi, n timp ce numai 2% se afl n circulaia sanguin. Limfocitele T Celulele precursoare ale LT migreaz din mduva hematogen spre corticala timusului. Procesul ncepe n viaa intrauterin i continu la adult. n diferenierea i maturarea LT se disting dou etape, care se produc succesiv n timus i n organele limfoide periferice. n timus LT se difereniaza n LT CD4+ i LT CD8+ . Tot acolo sunt distruse clonele de LT autoreactive care pot produce fenomene autoimune: Prin selecia pozitiv, precursorii de LT ai cror TCR reacioneaz cu moleculele MHC self sunt distruse prin apoptoz. Prin selecia negativ, precursorii de LT ai cror TCR recunosc Ag self sunt de asemenea distruse. LT rezultate sunt imunocompetente, adic au dou caractere : LT recunosc Ag non-self numai dac acestea le sunt prezentate n complex cu moleculele MHC (I sau II). LT au toleran imun fa de Ag proprii. LT care ies din timus n snge se numesc LT mature de repaus, naive sau virgine. LT virgine ajung n zonele timodependente din organele limfoide periferice: paracorticala ganglionilor limfatici PALS intern din pulpa alb a splinei. n organele limfoide periferice se produce stimularea antigenic a LT. LT activate au aspectul de limfoblast sau imunoblast T. Imunoblatii T prolifereaz intens pe parcursul a 5-10 cicluri mitotice. Celulele care rezult sunt LT mici, complet maturate. Ele pot lua dou direcii evolutive : Majoritatea alctuiesc compartimentul LT efectoare, cu funcii citotoxice. Altele devin LT de memorie imun. Memoria imun reprezint rspunsul imun foarte rapid i intens al unor limfocite la un nou contact cu agenii patogeni ntlnii anterior. LT de memorie patruleaz permanent n ntreg organismul.

Limfocitele B Precursorii LB provin din celula stem limfoid. n cursul proliferrii lor se rearanjeaz prin translocaie aleatorie genele care codific regiunile variabile ale lanurilor BCR. Urmtoarea etap este cea de LB virgin sau de repaus. LB virgine nu se mai divid. n aceast etap LB se matureaz n mduv. Pe suprafata lor apar receptorii BCR. LB virgine trec apoi din circulaia sanguin n ariile bursodependente din organele limfoide periferice : corticala extern a ganglionilor limfatici PALS extern din pulpa alb a splinei n organele limfoide periferice LB vin n contact cu Ag specifice si se matureaza. Aceast maturare cuprinde trei procese : Recunoaterea antigenului Activarea LB Diferenierea terminal Recunoaterea antigenului se face prin receptorii BCR. LB pot s recunoasc antigene sub form nativ sau antigene prezentate de celulele APC, n complex cu moleculele MHC II. Activarea este un fenomen complex declanat prin legarea antigenelor de BCR. APC elibereaz IL1 care stimuleaz LTH, care la rndul lor produc factorii de proliferare IL2 i IL4. LB intr n ciclul de diviziune i produc 5-15 generaii de LB fiice. LB activate se difereniaz n dou tipuri de celule : LB efectorii (plasmocitele) i LB de memorie. Plasmocitele sunt LB efectorii. Ele au via scurt i sintetizeaz cantiti mari de anticorpi specifici. LB de memorie recircul prin snge i esuturi. La un nou contact cu acelai antigen ele produc un RIU extrem de rapid i intens, cu IgG. Acesta este un RIU secundar. Populaia de LB de memorie pentru un anumit antigen este activ pe perioade lungi, uneori toat viaa. Nu se tie dac LB de memorie au via lung sau dac ele se produc printr-un proces de recrutare celular permanent. Celulele NK Limfocitele din populaia NK nu au antigene de suprafa. Nu li se cunoate cu precizie originea. Se presupun dou variante : NK constituie o fraciune imatur a LT. NK provin direct din progenitorul limfocitar comun, celula CFC-LB+LT.

ANTIGENUL Orice RI apare dup contactul organismului cu un Ag. Ag este o substan recunoscut ca non-self de ctre sistemul imun al organismului. Ag este orice substan de origine endogen sau exogen care poate s declanseze un RI. Ag solubile sunt molecule recunoscute c non-self. De obicei Ag solubile sunt proteine cu greutate molecular mare, peste 10 kDa. Uneori Ag solubile sunt polizaharide, acizi nucleici, glicolipide. Ag corpusculate sunt structuri non-self mai complexe : virusuri, bacterii, protozoare, celule strine, celule infectate, celule neoplazice. De fapt Ag corpusculate sunt formate dintr-un numr foarte mare de molecule antigenice. Dintre ele, cele mai importante pentru recunoaterea i distrugerea Ag corpusculat sunt Ag de suprafa. RI nu apare obligatoriu dup un contact cu un Ag : Ag care induc RI se numesc imunogene Ag care inhib RI se numesc tolerogene. Exist fenomenul de toleran imunologic. Originea Ag Majoritatea Ag sunt exogene : bacterii, parazii, unele substane chimice industriale, alergenele (ex. polen, praf din cas, alergene alimentare). Exist i Ag endogene : autoAg sunt Ag proprii care n mod normal sunt sechestrate (ascunse, izolate) prin bariere anatomice sau funcionale. n mod normal autoAg nu vin n contact cu sistemul imun i nu produc RI. n conditii patologice se produce desechestrarea Ag, autoAg vin n contact cu sistemul imun i se produce un RI fa de structurile self. Aceste RI autoreactive produc boli autoimune. neoAg sunt produse de celulele neoplazice (canceroase). Ele au rol n aprarea antitumoral. Orice organism normal produce un numr mic de celule canceroase, care sunt distruse de sistemul imun. Aceast aprare este eficient pn la o limit, dup care apar tumorile. Ag virale : se consider c Ag virale sunt endogene pentru c virusurile includ genomul n genomul gazdei. Celula gazd sintetizeaz proteinele virale pe aceleai ci metabolice ca proteinele proprii. Proprietile de baz ale Ag imunogenitatea = proprietatea Ag de a declana RIU sau RIC specificitatea sau antigenitatea = proprietatea Ag de a se combina specific cu moleculele de recunoatere Ac i receptorii de membran

Imunogenitatea Imunogenitatea este proprietatea unui Ag de a declana RI. Declanarea RI se face n 3 etape succesive : Selecia clonal = selecia dintre toate clonele limfocitare numai a limfocitelor Ag-specifice, care exprim pe membrana lor receptori care recunosc Ag. Dup ce intr n organism, Ag este transportat la organele limfoide periferice : gg limfatici i splin. Acolo Ag este prezentat spre un numr foarte mare de LTH i LB, din clone diferite. Ag este recunoscut doar de limfocitele Ag-specifice, care au pe suprafa receptorii care se potrivesc cu Ag, pe principiul cheie-broasc. Activarea clonal = clona de limfocite se activeaz metabolic. Proliferarea sau expansiunea clonei activate = LB se divid prin mitoze, crete foarte mult nr. limfocitelor identice. Antigenitatea sau specificitatea Antigenitatea sau specificitatea este proprietatea Ag de a reaciona specific numai cu receptorii antigenici fabricai special pentru el. Receptorii pentru Ag pot fi solubili (Ac) sau membranari (BCR sau TCR). S-a observat c nu toate Ag au ambele proprieti. Ele pot fi : complete = au ambele proprieti incomplete = au doar specificitate Ag complete sau imunogene Ag complete au imunogenitate i specificitate. Ag complete sunt majoritatea Ag din natur, n special cele cu structur proteic. Ele declaneaz RI prin mecanisme diferite, cu sau fr participarea LTH. Din acest punct de vedere Ag complete se mpart n : Ag timodependente sunt majoritatea. Ele declaneaz RIU sau RIC prin cooperare celular cu participarea obligatorie a LTH. Ag timoindependente sunt mai rare, n structura unor bacterii (ex flagelina i LPS = lipopolizaharide bacteriene). Aceste Ag au dimensiuni foarte mari. Nu este nevoie de cooperare celular cu LT. Ele pot declana numai RIU, prin stimularea direct a LB. Ag incomplete sau haptenele Haptenele au numai specificitate. Ele reacioneaz specific cu receptorii Agspecifici (Ac anti-hapten), dac acetia exist. Haptenele nu au imunogenitate din cauz c ele au greutate molecular foarte mic i singure nu pot declana un RI. Haptenele pot declana RI doar dac se cupleaz cu macromolecule imunogene numite purttor sau carrier.

Haptenele nu pot s declaneze RI pentru c : LB au pe suprafa receptorii BCR asezai difuz, pe toat suprafaa celulei. Aceti receptori sunt identici, au acelai tip de situs combinativ (de recunoatere a Ag). i haptenele sunt recunoscute de receptorii membranari BCR, dar LB nu se activeaz deoarece stimulii activatori sunt de intensitate slab, ei se produc la mare distan unul de altul, pe toat suprafaa LB. Stimulii trebuie s se concentreze ca s produc activarea LB. Ag complete pot realiza concentrarea haptenelor pe o zon mic : Ag timoindependente (n special bacteriene) au un carrier cu greutate molecular mare. De el se leag multe grupri haptenice identice, care pot activa direct LB. Ag timodependente au un carrier cu greutate molecular mai mic, de care se leag haptena. Aceste Ag au nevoie de LTH, care recunosc partea carrier i prezint Ag cu partea haptenic spre receptorii LB. LTH prezint haptenele concentrat, pe o zon mic de pe suprafaa LB. De fapt i Ag complete sunt formate din dou componente : hapten + carrier, cu funcii diferite n RI : Ansamblul carrier + hapten d imunogenitatea. Haptena d specificitatea Ag. n funcie de hapten se face selecia clonal. Din acest motiv haptena se mai numete determinant antigenic sau epitop. Determinanii antigenici i epitopii Determinanii antigenici sunt fragmentele din molecula de Ag care dau specificitatea. Ag este o macromolecul cu suprafaa neregulat. O molecul de Ac nu acoper toat suprafaa Ag, ci doar o mic parte. Cele dou suprafee sunt complementare din punct de vedere al conformaiei n spaiu i al structurii chimice. Regiunea din Ag care se combin cu Ac (sau cu receptorul de membran) se numete determinant antigenic sau epitop. O macromolecul de Ag are mai muli determinani antigenici, care sunt de obicei diferii, sau mai rar identici (Ag cu structur repetitiv). Numrul de determinani antigenici reprezint valena Ag. Un Ag polivalent induce sinteza mai multor tipuri de Ac, fiecare specific pentru un determinant antigenic. De obicei un Ag induce un RI policlonal. Epitopul sau determinantul antigenic este o regiune din Ag care determin sinteza Ac de un singur tip (monoclonali). Regiunea din Ac care se combin cu epitopul se numete paratop sau situs combinativ sau regiune de complementaritate. Dup structur determinanii antigenici sau epitopii pot fi liniari sau conformaionali.

10

Determinanii antigenici liniari (secveniali) Sunt caracterizai prin structura primar, adic prin succesiunea aminoacizilor n lanul proteic sau a monozaharidelor n glicoproteine. Sunt recunoscuti doar de receptorii TCR de pe suprafaa LT. Sunt aezai n interiorul moleculei de Ag. Ei sunt expui la exteriorul moleculei numai dup procesarea Ag nativ, prin aciunea enzimelor proteolitice ale APC. Pentru recunoaterea epitopilor liniari de ctre LT este obligatorie prelucrarea i prezentarea lor de ctre APC. Determinanii antigenici conformaionali (tridimensionali sau spaiali) Sunt formai din mai multe lanuri de aminoacizi sau monozaharide situate n regiuni diferite ale lanului proteic sau glicoproteic, sau chiar pe dou lanuri diferite. Lanurile sunt aduse n apropiere prin puni disulfurice sau legturi necovalente, intra- sau intercatenare. Aceste puni fac bucle n molecula de Ag. Sunt recunoscui de receptorii LB (BCR) i de Ac. Sunt aezai la suprafaa moleculelor de Ag, de aceea nu este obligatorie procesarea i prezentarea lor de ctre APC. Recunoaterea epitopilor conformaionali se face prin complementaritate, pe principiul cheie-broasc. Clasificarea funcional a determinanilor antigenici Determinanii antigenici efectori Determinanii efectori stabilesc tipul de RI : RIU sau RIC. Ei sunt de dou tipuri : B i T Determinanii de tip B sunt recunoscui de LB i produc RIU. Determinanii de tip C sunt recunoscui de LTC i produc RIC. De obicei n Ag purificate exist determinani de tip B sau C, de aceea un Ag produce numai RIU sau RIC. Determinanii antigenici modulatori sau imunoreglatori Determinanii modulatori stabilesc intensitatea RI : mai puternic sau mai slab. Ei sunt de dou tipuri : H i S Determinanii de tip H sunt recunoscui de LTH care coopereaza mai departe cu LB sau LTC. Ei stimuleaz RIU sau RIC. Ag care contin determinani de tip H sunt imunogene, adic induc un RI puternic Determinanii de tip S sunt recunoscui de LTS, care inhib RI. Ag care conin predominent determinani de tip S sunt tolerogene, adic induc un RI slab sau inhib RI.