INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA

Laboratorio de Bacterias y Virus

Prctica No. 12 BIODEGRADACIN DE PLAGUICIDAS POR MICROORGANISMOS DEL SUELO

Objetivos Analizar el efecto de la concentracin de un plaguicida sobre la capacidad de los microorganismos de un suelo para metabolizarlo, midiendo la actividad respiratoria de la comunidad. Analizar el efecto de la mezcla de un plaguicida con un surfactante sobre la capacidad de los microorganismos de un suelo para metabolizarlo, midiendo la actividad respiratoria de la comunidad.

Resultados
Tabla 1 Efecto de la concentracin de un plaguicida en su degradacin
Equipo Compuesto Conc. Diazinon 10mg/L Blanco Conc. Diazinon 5mg/L Blanco Conc. Diazinon 2.5mg/L Blanco Conc. Diazinon 1.25mg/L Determinacin Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Inicio (0 Hs) Hora Res No se 11.2 tiene 30 registro 11.8 No se tiene registro No se tiene registro No se tiene 11.2 30 11.8 11.2 30 11.8 11.2 30 2 da (24 Hs) Hora Res 5.5 3:49 160 pm 8.7 3:15 pm 4.4 -----No se tiene registro 4.3 260 9.5 5.2 165 Resultados 3er da (48 Hs) Hora Res 8.2 2:10 45 pm 9 1:50 pm 8.8 5 8.9 9.5 125 12 9.7 70 4 da (72 Hs) Hora Res No se 6.4 tiene 20 registro 6.8 10:05 am 8.7 65 10 9.5 90 11.3 9.7 35 5 da (96 Hs) Hora Res 6.2 9:09 10 am 6.4 9:12 am 9.1 20 9.5 11 55 12.1 9 125

1 2

2:23 pm

2:08 pm

10:08 am

9:23 pm

3:13

1:43

10:12

9:18

4 5

Blanco Conc. Diazinon 0.625mg/L Blanco Conc. Diazinon 0.3125mg/L Blanco Conc. Diazinon 0.1563mg/L Blanco Testigo

Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml)

registro No se tiene registro No se tiene registro No se tiene registro No se tiene registro

11.8 11.2 30 11.8 11.2 30 11.8 11.2 30 11.8 11.2 30 11.8

pm 3:07 pm

8.5 5.1 190 8.9 5.5 200 9.5 5.2 195 9.1 4.6 245 9.5

pm 1:36 pm

11.1 8.2 125 10.7 9 115 11.3 7.9 135 10.6 8.5 10 8.7

am 10:00 am

10.4 9.1 40 9.9 7.5 185 9.7 10.2 65 11.5 9 80 10.6

am 9:11 am

11.5 8.7 100 10.7 9 50 10 10 25 10.5 9.2 40 10

6 7 8

3:15 pm

2:03 pm

10:05 am

9:03 am

3:15 pm

2:00 pm No se tiene registro

11:28 am No se tiene registro

2:00 pm

Blanco

3:15 pm

9:20 am

Tabla 2 Efecto de la mezcla de un plaguicida con un surfactante en su degradacin

Inicio (0 Hs) Hora Res 10.5 12:55 0 pm 10.5 12:55 pm 10.3 0 10.3 10.3 0 10.3 10.3 0 10.3 10.3 0 10.3 10.3 0 10.3 10.3 0 10.3 2 da (24 Hs) Hora Res 3.1 3:27 200 pm 7.1 3:19 pm 2.5 230 7.1 Resultados 3er da (48 Hs) Hora Res 8.3 1:49 135 pm 11 2:01 pm 7.4 120 9.8 4 da (72 Hs) Hora Res 9.3 10:13 10 am 9.5 10:07 am 8.7 50 9.7 6.8 145 9.7 8.4 120 10.8 9.2 105 11.3 8.8 90 10.6 9.2 180 12.8 5 da (96 Hs) Hora Res 8.8 9:04 95 am 10.7 9:03 am 9.5 45 10.4 8.2 150 11.2 8.4 85 10.1 10 65 11.3 5 350 12 10.2 40 11

Equipo

Compuesto Sol. Surfact. 2ml Sol. Diazinon 0ml Blanco Sol.Surfact.1.2ml Sol Diazinon .8ml Blanco Sol. Surfact.1 ml Sol. Diazinon 1ml Blanco Sol. Surfact. .8ml Sol. Diazino1.2ml Blanco Sol. Surfact. .4ml Sol. Diazino1.6ml Blanco Sol. Surfact. 0ml Sol. Diazinon 2ml Blanco Testigo

Determinacin Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml) Gasto HCl (ml) CO2 (moles) Gasto HCl (ml)

1 2 3 4 5

12:55 pm

No se tienen datos 2.8 280 8.4 3.5 150 6.5 3.5 225 8 6.2 160 9.4

No se tienen datos 7.5 390 15.3 7.7 130 10.3 7 150 10 9 35 9.7

10:17 am

9:19 am

12:55 pm

3:14 pm

1:54 pm

10:18 am

9:16 am

12:55 pm

3:13 pm

1:50 pm

10:16 am

9:13 am

6 7

12:55 pm

3:25 pm

1:40 pm

10:25 am

10:50 am

Blanco

12:55 pm

11:29 pm

2:18 pm

10:32 am

1:35 pm

Efecto de la concentracin
700 600 500 moles de CO2 400 300 200 100 0 0 20 40 60 80 100 120 tiempo (horas) Conc. Diazinon10mg/L Conc. Diazinon5mg/L2 Conc. Diazinon2.5mg/L3 Conc. Diazinon1.25mg/L4 Conc. Diazinon0.6225mg/L42 Conc. Diazinon0.3125mg/L6 Conc. Diazinon0.1563mg/L7 Testigo

Grafico 1. Resultados de la actividad respiratoria de los microorganismos y el efecto de la concentracin de un plaguicida en su degradacin (Seccin I)

Efecto de la mezcla
1200 1000 moles de CO2 800 600 400 200 0 0 20 40 60 Tiempo (hr) 80 100 120 Diazunon 0ml Diazinon 0.8 ml Diazinon 1.2ml Diazinon 1.6ml Diazinon 2ml Testigo

Grafico 2. Resultados del efecto de la mezcla de un plaguicida con un surfactante en su degradacin, midiendo la actividad respiratoria de la comunidad microbiana. (Seccin II)

Discusin de resultados
Un plaguicida es toda aquella sustancia o mezcla de sustancias destinadas a prevenir, destruir o controlar cualquier plaga, su empleo en las actividades agropecuarias es una de las ms grandes amenazas para la perdida de fertilidad en los suelos, sin embargo existen varias formas en que estos se pueden degradar, una de las principales es aquella llevada a cabo por microorganismos presentes en el suelo como las bacterias y algunos hongos. En este caso el plaguicida que hemos de analizar es el Diazinon, pertenece al grupo de los plaguicidas rganofosforados usado para controlar insectos en el suelo, en plantas y cosechas de frutas y hortalizas, cuya tasa de degradacin depende mucho de la acidez del medio, es ms estable en medios alcalinos que en aquellos que cuentan con un pH neutro o cido, por lo tanto su degradacin es lenta en suelos con un pH mayor a 6. Uno de los procesos ms importantes para la desintoxicacin de compuestos organofosfatados es la hidrlisis del mismo lo que hace que los compuestos sean ms vulnerables a la degradacin. La bibliografa nos dice que se han establecido aquellos grupos de bacterias que se encuentran relacionadas con la biodegradacin de plaguicidas organofosfatados, y son aquellos principalmente son aquellos representantes del gnero Bacillus, Pseudomonas y Flavobacterium. Debido a experimentos realizados anteriormente con muestras de la misma zona podemos decir que stas se encuentran presentes en nuestra muestra de suelo. Estos microorganismos lo usarn como fuente de carbono, fuente de energia y donador de electrones, por lo tanto su cintica de degradacin se ver afectado o beneficiado directamente por la cantidad de microorganismos y las condiciones fsicas como humedad, pH., temperatura, etc. Adems de la concentracin en la que se encuentre el plaguicida. La degradacin en suelos que contienen plantas es muy diferente a aquellos que no las poseen ya que presentan una intensa actividad bacteriana provocando una rpida mineralizacin de los plaguicidas. Por lo tanto en nuestro anlisis de efecto de la concentracin de un plaguicida en su degradacin observamos que efectivamente entre mayores son las concentraciones del ste, es menor la actividad respiratoria que presentan los microorganismos como resultado de la degradacin del plaguicida, lo que nos hace referencia a que a esas concentraciones es difcilmente metabolizado por las bacterias, probablemente a que se hayan visto modificados parmetros como el pH lo que provocara que fuera ms estable la molcula del Diazinn; todo ellos repercutira en la poblacin de microorganismos ya que no proliferaran adecuadamente y por lo tanto la degradacin del plaguicida seria mnima, quizs

en esas cantidades ya no lo puedan tolerar los microorganismos y por lo tanto encuentre inhibiendo su crecimiento, por ende la concentracin de CO2 producto del metabolismo que se reporta es menor, es el caso de la concentracin 5 mg/L y 10 mg/L, mientras que en la de grafica de 1.25 mg/L se presenta una diferencia respecto a lo que se esperaba, que era que se encontrara por arriba de la testigo, pero esto pudo deberse a que no haba gran cantidad de microorganismos en la muestra de suelo que degradaran al plaguicida, puesto que estos son especficos. Ahora analizaremos las concentraciones que van desde 0.1563 mg/L, 0.3125 mg/L, 0.6225 mg/L hasta 2.5 mg/L todas ellas se encuentran por arriba del testigo, esta tendencia se observa ms claramente al final de la prueba a partir de las 35 horas aproximadamente y nos indica que la tasa de respiracin es mayor en estos casos, por lo tanto podemos decir que a estas concentraciones principalmente la de 2.5 mg/L el Diazinn est siento usado por los microorganismos presentes como fuente de carbono y energa de forma optima. Las concentraciones de 0.1563 mg/L, 0.3125 mg/L y 0.6225 mg/L al principio la actividad respiratoria de los microorganismos se registra por debajo de la grafica que marca el testigo, es decir la produccin de CO2 era menor, probablemente a que apenas se estaban adaptando al medio adicionado con Diazinon, pero pasadas las 35 horas la actividad respiratoria se incremento. Con lo observado podemos decir que existe una relacin entre las concentraciones pues entre mayor es la concentracin del plaguicida es menor la actividad respiratoria de la poblacin microbiolgica. Con aquellas concentraciones menores a los 2.5 mg/L de concentracin se vieron favorecidos los microorganismos, probablemente incrementaron su poblacin y por ello tambin las emisiones de CO 2 . Usaron al plaguicida como fuente de carbono y donador de electrones. Los surfactantes se aplican con el fin de mejorar la accin de los plaguicidas, y en trminos generales se puede decir que proporcionan al plaguicida mayor capacidad de cubrimiento, penetracin y translocacion, solubilidad, adherencia y estabilidad. Tambin reducen la dosis de los plaguicidas y aumentan su penetracin en el suelo. Las actividades agropecuarias constituyen un modo de disturbar los equilibrios naturales y las modificaciones ocasionadas en las capas superficiales del suelo alteran significativamente la composicin de la comunidad microbiana y su potencial bioqumico. Frente a este tipo de adversidades, los microorganismos tienen un potencial gentico excepcional que les permite tolerar y reacomodar su composicin poblacional mediante estrategias como la seleccin intra e interespecfica, las mutaciones, la activacin de genes bloqueados, etc. Lo cierto es que cuando una poblacin se ve afectada y su capacidad de competencia

disminuye, aparecen rpidamente otras formas de vida que la sustituyen espacialmente. El hecho de que un suelo agrcola posea una importante actividad microbiana, presupone pero no garantiza, el cumplimiento de los ciclos energticos esenciales para la vida. Como podemos observar; el comportamiento de los microorganismos se ve favorecido con la presencia del plaguicida cuando lo mezclamos con el surfactante; ya que todas las concentraciones, se encuentran por arriba del testigo. En caso de las concentraciones de 0ml, 0.8 ml y 1.6 ml, observamos que la actividad respiratoria no es muy favorecida; pues se mantienen a la par respecto al testigo. La concentracin de 2 ml, al comienzo de la actividad respiratoria de los microorganismos; no presenta algn cambio significativo, pero aproximadamente al llegar a las 75 hrs; observamos que la actividad respiratoria se ve favorecida. Respecto a la concentracin de 1.2 ml, al transcurrir las 24 horas, la tasa respiratoria se ve altamente favorecida; esto nos indica que esta concentracin es la que mas favorece a los microorganismos, ya que la utilizan como principal fuente de carbono. De acuerdo a los resultados obtenidos, podemos decir que cuando mezclamos el plaguicida con el surfactante; no favorece en mucho la actividad respiratoria de los microorganismos; pero tampoco la disminuye.

Conclusiones
A mayor concentracin de Diazinn la tasa respiratoria se ve reducida, y viceversa, con concentraciones ms bajas la tasa respiratoria se ve favorecida. Las concentraciones de la mezcla del plaguicida y el surfactante; no favorecen significativamente la actividad respiratoria de los microorganismos. El Diazinn sirvi como fuente de carbono, energa y donador de electrones para los microorganismos que lo metabolizaron.

Cuestionario
1. Represente la estructura molecular del plaguicida usado en la prctica.

2. En qu grupo y contra qu organismos se cataloga a ste compuesto? Es considerado como un insecticida acaricida agrcola organofosforado; ste compuesto es utilizado contra insectos en el suelo, en plantas ornamentales y hortalizas, tambin para combatir moscas, pulgas, garrapatas y cucarachas.

3. Cul

es la forma de accin de ste plaguicida? Su mecanismo de accin es inhibir la acetilcolinesterasa. En la sinapsis nerviosa, un impulso nervioso es transmitido por la acetilcolina (Ach), una vez transmitido el mensaje, la Ach es destruida por accin de una enzima llamada acetilcolinesterasa, por lo que el impulso es anulado para otra transmisin.

Al anularse la accin de la Ach, la transmisin de los impulsos nerviosos no puede ser interrumpida y la contraccin muscular conduce a parlisis y muerte del parsito. Solamente los insectos poseen sisnapsis colinrgicas en el sistema nervioso central, por lo que los signos en los insectos son hiperexcitabilidad, convulsiones, parlisis y finalmente la muerte.

Referencias http://www2.ine.gob.mx/sistemas/plaguicidas/pdf/diazinon.pdf http://www.virbac.com.mx/produc/productos.asp?producto=Preventef Efecto de los plaguicidas sobre la actividad de los microorganismos del suelo. 1 Parte. Ing. Agr. Mara Cristina Pozzo Ardizzi (M.Sc.), Lic. Graciela Pellejero, Lic. Gabriela Aschkar, Lic. Mara Ins Gil y Lic. Mariza Abrameto. Disponible en: http://www.inta.gov.ar/valleinferior/info/documentos/rrnn/plaguicidas.pdf. ltima visita: 27 de noviembre de 2011. CIAT (Centro Internacional de Agricultura Tropical). 1980. Los surfactantes: Clases, Propiedades y Usos con herbicidas. Cali, Colombia. Pp.25