Aula de Enzimas

PROPRIEDADES
GERAIS DAS ENZIMAS

-Catalisam reaes de sistemas biolgicos; -Apresentam alto grau de especificidade para o substrato; -Aceleram reaes qumicas e atuam em solues aquosas sob condies suaves de pH e de temperatura; -Atuam em sequncias organizadas com vistas a degradao de molculas de nutrientes que conservam e transformam energia qumica e constroem macromolculas biolgicas oriundas de precursores elementares. -Ateno: Algumas doenas so causadas pela atividade excessiva ou pela inibio de algumas enzimas
sexta-feira, 3 de maio de 13
PROPRIEDADES GERAIS
Enzimas
Todas as enzimas so protenas
Protenas
Exceto pequeno grupo RNA de molculas de RNA
PROPRIEDADES GERAIS
RNA 1989 - Canadense Sidney Altman e o norte-americano Thomas Cech: RNA Prmio Nobel de Qumica AAvidade CatalAca
PROPRIEDADES GERAIS
Sua atividade cataltica depende da integridade de sua conformao nativa Enzimas desnaturadas perdem a funo
Algumas enzimas requerem outro grupo qumico adicional chamados de cofator (um ou mais ons inorgnicos) ou coenzimas (molculas orgnicas ou metalorgnicas).
Uma coenzima ou on metlico que seja ligado muito forte ou at mesmo covalentemente protena chamado de Grupo prosttico.
PROPRIEDADES GERAIS
Uma enzima cataliticamente ativa completa (ligada a coenzima e/ ou co-fatores chamada de holoenzima;
A parte protica da enzima chamada de apoenzima ou apoprotena;
As coenzimas atuam como transportadoras de grupos funcionais especficos. Muitas delas so derivadas de vitaminas (nutrientes orgnicos requeridos em pequenas quantidades na dieta).
Cofatores
Quase 1/3 das enzimas requerem um componente no protico para sua aAvidade, denominado cofator Poro protica APOENZIMA
Cofator
ons metlicos
HOLOENZIMA
Molculas orgnicas Coenzimas
Cofatores
A natureza essencial de tais cofatores explica por que razo os organismos necessitam de quanAdades diminutas de certos elementos nas suas dietas. Isso tambm explica, os efeitos txicos de certos metais pesados (o Cd2+ e o Hg2+) que podem subsAtuir o Zn2+ nos sAos aAvos de certas enzimas
Nomenclatura e classicao das

Sculo XIX - poucas enzimas idenEcadas Adio do suxo ASE ao nome do substrato: *LIPASE quebra da gorduras (lipo - grego) *AMILASE quebra do amido (amylon - grego) *UREASE hidrlise da ureia *DNA polimerase polimerizao dos nucleo\deos para formar o DNA
Nomenclatura e classicao das enzimas

Sculo XX - quanEdade de enzimas descritas Nomenclatura existente se tornou inecaz 1955 - IUB - Unio Internacional de Bioqumica adotou um novo sistema de nomenclatura e classicao mais complexo sem ambigidades baseado no mecanismo de reao
Nomenclatura e classicao das enzimas

Cada enzima cdigo com 4 dgitos que caracteriza o Apo de reao catalisada: (E.C.- Enzime Comission) 1 dgito classe 2 dgito subclasse 3 dgito - sub-subclasse 4 dgito - indica o substrato
Outras formas de classicar

Enzimas habituais ou constitutivas
As clulas sempre as sintetizam
Enzimas indutivas
As clulas s as sintetizam quando esto na presena do substrato da enzima Enzimas que tm a mesma funo, ou seja, catalisam uma mesma reao, porm apresentam estruturas diferentes
Isoenzimas
Como as enzimas trabalham
As reaes requeridas para digerir os alimentos, enviar sinais nervosos ou contrair um msculo simplesmente no ocorrem com uma velocidade Cl sem a catlise; Uma reao catalisada por uma enzima ocorre dentro do SEo AEvo; A molcula que ligada no sCo aCvo e age sobre a enzima chamada de Substrato. Foi postulado por Charles-Adolphe Wurtz em 1880. Alm de ser essencial para a ao das enzimas o ponto inicial para a equao que dene o comportamento cinCco das reaes enzimCcas.
COFATORES Coenzima: quando o cofator no se liga covalentemente enzima Grupo prosttico: quando o cofator se liga covalentemente enzima Holoenzima: enzima + cofator (enzima cataliticamente ativa)
Apoenzima ou apoprotena: refere-se somente a parte protica da enzima
Cofatores que so ons inorgnicos
ATP + GLICOSE
ADP + GLICOSE-6-FOSFATO
Nome comum da enzima: Hexoquinase Nome sistemtico: ATP:Glicose fosfotransferase
Classificao: E.C.2.7.1.1
A Catlise Enzimtica e o Complexo Enzima-Substrato
Quimiotripsina
O centro ativo: regio da enzima onde ocorre a catlise
Modelo Cintico
E + S
ES
EP
E + P
O Estado de Transio
As enzimas baixam a energia de ativao sem alterar a constante de equilbrio
Relao entre a constante de equilbrio e a variao de energia livre de uma reao
Reao:
Keq = [P]/[S] G = - RT ln Keq Reaes com G grande e negativo significa que o equilbrio favorvel formao dos produtos
A velocidade de uma reao e a energia de ativao

A lei de velocidade
a) Reao de 1 ordem: (unimolecular) b) Reao de 2 ordem: (bimolecular)
V = k [S]
V = k [S1][S2]
Obs. uma pequena diminuio na energia de ativao, corresponde a um grande aumento na velocidade da reao
A ordem de grandeza dos aumentos em velocidades das reaes catalisadas por enzimas
A Energia de Ligao
A energia de ligao resultante das interaes fracas, no covalentes, entre a enzima e o substrato, tais como: as pontes de hidrognio, as interaes hidrofbicas, as interaes inicas ou eletrostticas e as foras de van der Waals. Cada uma dessas interaes libera uma pequena quantidade de energia livre, porm o somatrio contribui de forma significativa para uma maior estabilidade do complexo ativado da reao e, consequentemente, para o abaixamento da energia de ativao da reao. A energia de ligao a principal responsvel pelo grande aumento na velocidade das reaes enzimticas.
O significado da Energia de Ligao

1. responsvel pela especificidade da enzima pelo substrato 2. Diminui a entropia entre as molculas dos substratos mantendo-as na orientao correta para que haja choques efetivos; 3. Provoca a retirada da capa de solvatao que estabiliza as molculas do substrato em soluo; 4. Ajuda a compensar termodinamicamente qualquer tenso ou toro que o substrato precise sofrer para reagir; 5. Finalmente, a energia de ligao responsvel pela mudana conformacional que muitas enzimas sofrem, quando realizam a catlise, e que chamada de ajuste induzido.
A Complementaridade da Enzima com o Substrato

NADP+
tetrahidrofolado
O Ajuste Induzido
Mudana conformacional na hexoquinase induzida pela ligao da glicose em seu centro ativo
A Enzima Complementar a seu Substrato no Estado de Transio
Efeito da Concentrao do Substrato na Velocidade Inicial de uma Reao Enzimtica [E] = constante e limitante
Equao de MichaelisMenten
Quando [S] tende a zero (reao de 1 ordem)
Quando [S] tende para infinito (reao de ordem zero)
Constante de Michaelis-Menten (Km) a concentrao do substrato [S], quando Vo = Vmax/2

A EQUAO DE MICHAELIS-MENTEN Modelo Cintico: E + S k1 k-1 Aproximaes: 1. Admitindo-se a reao em seu incio: k1 k2 E + S ES E + P k-1 2. Considerando-se a segunda etapa como passo limitante, tem-se que a velocidade inicial da reao (Vo) dada por: Vo = k2 [ES] (eq. 1) ES k2 k-2 E + P
A EQUAO DE MICHAELIS-MENTEN
3. Considera-se que a concentrao de S muito maior que a de enzima e despreza-se a quantidade de substrato complexada com a enzima, em relao concentrao total de substrato Note que, numa reao enzimtica, a enzima se encontra na forma livre (EL) e na forma complexada com o substrato (ES), da: [EL] = [ET] - [ES] 4. Considerando-se estado estacionrio, a concentrao de ES permanece constante, ou seja, a velocidade de sua formao (Vf) igual de seu desaparecimento (Vd) Vf = k1 [EL][S] ou Vf = k1 ([ET] [ES]) [S] ( eq. 3) (eq. 2)
Vd = k2 [ES] + k-1 [ES]

A EQUAO DE MICHAELIS-MENTEN Igualando a eq. 2 com a eq. 3 e rearranjo os termos, temos: [ES] = [ET] [S] [S] + Km onde, Km = (k-1+k2)/k1 (Constante de Michaelis-Menten) Combinando a eq. 1 com a eq. 4, temos: Vo = k2[ET] [S] [S] + Km
(eq. 4)
Vmax [S] ou Vo = [S] + Km
O grfico de 1/vo x 1/[S]
A forma dos inversos da equao de MichaelisMenten ou equao de Lineweaver-Burk
Modo mais correto de se determinar Vmax e Km

O significado de Km e a afinidade enzimtica

Se k2 << k-1, tem-se que Km = k-1/k1 e, portanto a constante de dissociao do complexo ES
Reaes que ocorrem em vrias etapas em que o passo EP E + P o limitante

Passo limitante
kcat = k3 e [EP] ~[Et]
kcat denominado de nmero de renovao: equivale ao n de molculas de substrato convertidas em produto por uma nica enzima em uma dada unidade de tempo, quando a enzima est saturada com o substrato
A Relao kcat/Km
Para [S] << Km
Vo depende da concentrao de dois reagentes e o termo kcat/Km um constante de 2 ordem. considerado o melhor parmetro cintico para comparar eficincia cataltica
Reaes com Dois ou Mais Substratos
(Mecanismo de dupla troca ou pingue-pongue)
Cintica envolvendo um complexo ternrio
Cintica de dupla troca ou pingue-pongue
Inibio Reversvel
a) Inibio Competitiva
KI a constante de dissociao do complexo EI
Cintica de uma Inibio
Competitiva
EI
E + I
KI a constante de dissociao do complexo EI

Inibidor Competitivo
No altera a velocidade mxima da reao, porm aumenta a constante de Michaelis-Menten ou seja:
Vmax = Vmax Km > Km Admitindo-se que o inverso de Km represente a afinidade enzimtica, pode afirmar que este inibidor diminui a afinidade da enzima pelo substrato Inibio competitiva pode ser revertida por aumentos na concentrao do substrato
b) Inibio Incompetitiva
KI a constante de dissociao do complexo ESI
Inibio Incompetitiva
Cintica de uma
ESI
ES + I

Inibidor Incompetitivo
Diminui a velocidade mxima da reao e a constante de Michaelis-Menten ambos por um mesmo valor ():
Vmax < Vmax Km < Km
Note que independentemente do valor de o coeficiente angular da reta 1/Vo x 1/[S] ser sempre o mesmo, da as retas serem paralelas
c) Inibio Mista
Quando KI = KI, temos a inibio no competitiva

Inibio Mista
Inibio no competitiva
1/vo [I]
- 1/Km
Sem inibidor 1/[S]
Vo =
(Vmax/) [S[ Km + [S]
Inibio No Competitiva
No altera a constante de Michaelis-Menten, porm diminui a velocidade mxima da reao
Vmax < Vmax Km = Km
Admitindo que o inverso de Km represente a afinidade enzimtica, pode afirmar que este inibidor no afeta a afinidade da enzima pelo substrato
Numa inibio mista Vmax diminui e Km aumenta

Inibio Irreversvel
Inibidores irreversveis so importantes ferramentas no estudo do mecanismo de uma reao enzimtica
Inibio da quimotripsina com o diisopropilfluorofosfato (DIFP), leva concluso que a Ser195 um resduo chave na catlise
Inibidores Suicidas: classe de inibidores irreversveis pouco reativos, mas que no centro ativo da enzima so modificados e reagem irreversivelmente com a enzima inativando-a. So substncias utilizadas na industria farmacutica como remdios ou drogas de poucos efeitos colaterias
Efeito do pH na Atividade Enzimtica
Os grupos laterais dos aminocidos podem se encontrar com carga positiva, negativa ou neutra, dependendo do pH
Efeito da Temperatura na Atividade Enzimtica
Vo
10
20
30
40
50
60
70
Temperatura (C) A atividade aumenta com a temperatura at o ponto onde a enzima no se desnatura
Efeito da Concentrao de Enzima na Atividade Enzimtica

Vo (mmol/s)
[S] em excesso
Concentrao de Enzima (mM)
Se o substrato no estiver em excesso, a velocidade da reao atinge um valor mximo e permanece constante
As Enzimas Reguladoras
Enzimas que tm sua atividade cataltica aumentada ou diminuda em resposta a determinados sinais
1 Tipo: Enzimas Alostricas: so reguladas por ligaes no covalentes
A Aspartato Transcarbamoilase
R
R R
Inibio por Retroalimentao ou Feedback da Converso de LTreonina em L-Isoleucina
E1 a enzima desidratase da Ltreonina, que inibida de forma alostrica por Lisoleucina
Cintica Sigmoidal das Enzimas Alostricas
O substrato um modulador positivo
Com um modulador positivo e um ne-gativo, sem alterar Vmax
Com um modulador negativo que no altera K0,5

Algumas Enzimas Reguladoras Sofrem Modificaes Covalentes
Regulao Covalente da Fosforilase do Glicognio
Regulao alostrica por AMP (secundria)
AMP
glicose
Ser-P Piridoxal-P
Piridoxal-P
glicose
Ser-P AMP

Aula de Enzimas

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Aula de Enzimas

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

PROPRIEDADES

GERAIS DAS ENZIMAS

Exceto pequeno grupo RNA de molculas de RNA

A parte protica da enzima chamada de apoenzima ou apoprotena;

Molculas orgnicas Coenzimas

Nomenclatura e classicao das

Nomenclatura e classicao das enzimas

Nomenclatura e classicao das enzimas

Outras formas de classicar

As clulas sempre as sintetizam

Como as enzimas trabalham

Apoenzima ou apoprotena: refere-se somente a parte protica da enzima

Cofatores que so ons inorgnicos

Nome comum da enzima: Hexoquinase Nome sistemtico: ATP:Glicose fosfotransferase

A Catlise Enzimtica e o Complexo Enzima-Substrato

O centro ativo: regio da enzima onde ocorre a catlise

As enzimas baixam a energia de ativao sem alterar a constante de equilbrio

Relao entre a constante de equilbrio e a variao de energia livre de uma reao

A velocidade de uma reao e a energia de ativao

a) Reao de 1 ordem: (unimolecular) b) Reao de 2 ordem: (bimolecular)

O significado da Energia de Ligao

A Complementaridade da Enzima com o Substrato

A Enzima Complementar a seu Substrato no Estado de Transio

Quando [S] tende a zero (reao de 1 ordem)

Quando [S] tende para infinito (reao de ordem zero)

Constante de Michaelis-Menten (Km) a concentrao do substrato [S], quando Vo = Vmax/2

Vd = k2 [ES] + k-1 [ES]

Vmax [S] ou Vo = [S] + Km

O grfico de 1/vo x 1/[S]

A forma dos inversos da equao de MichaelisMenten ou equao de Lineweaver-Burk

Modo mais correto de se determinar Vmax e Km

O significado de Km e a afinidade enzimtica

Reaes que ocorrem em vrias etapas em que o passo EP E + P o limitante

kcat = k3 e [EP] ~[Et]

Reaes com Dois ou Mais Substratos

(Mecanismo de dupla troca ou pingue-pongue)

Cintica envolvendo um complexo ternrio

Cintica de dupla troca ou pingue-pongue

KI a constante de dissociao do complexo EI

Cintica de uma Inibio

KI a constante de dissociao do complexo EI

KI a constante de dissociao do complexo ESI

KI a constante de dissociao do complexo ESI

KI a constante de dissociao do complexo ESI

Quando KI = KI, temos a inibio no competitiva

Sem inibidor 1/[S]

(Vmax/) [S[ Km + [S]

Numa inibio mista Vmax diminui e Km aumenta

Efeito do pH na Atividade Enzimtica

Efeito da Temperatura na Atividade Enzimtica

Efeito da Concentrao de Enzima na Atividade Enzimtica

Concentrao de Enzima (mM)

1 Tipo: Enzimas Alostricas: so reguladas por ligaes no covalentes

Inibio por Retroalimentao ou Feedback da Converso de LTreonina em L-Isoleucina

E1 a enzima desidratase da Ltreonina, que inibida de forma alostrica por Lisoleucina

Cintica Sigmoidal das Enzimas Alostricas

O substrato um modulador positivo

Com um modulador positivo e um ne-gativo, sem alterar Vmax

Com um modulador negativo que no altera K0,5

Algumas Enzimas Reguladoras Sofrem Modificaes Covalentes

Regulao Covalente da Fosforilase do Glicognio

Regulao alostrica por AMP (secundria)

You might also like