TACTICA IDENTIFICRII I VALORIFICRII PROBELOR GENETICE DIN SCENA INFRACIUNILOR Romic POTORAC comisar de poliie biochimist Abstract n aceast

lucrare ncercm s explicm principalele tactici de identificare i valorificare a probelor biologice existente n scena infraciunilor prin metode de analiz genetic judiciar, inclusiv tehnicile de interpretare a rezultatelor genotiprii. Am utilizat exemple din cazuri reale ale cror rezultate au contribuit sau pot contribui la probarea infraciuniilor respective incluznd unele din metodele dezvoltate n cadrul Sistemului de Analize Genetice. Vom ncerca s demonstrm prin explicaiile date c valoarea unui profil genetic i informaiile aduse de ctre acesta este o continuare a calitii muncii personalului care efectueaz cercetarea la faa locului i a celui care instrumenteaz cazul. Toate acestea au ca motivaie faptul c scena infraciunii ofer de cele mai multe ori informaii preioase despre evenimentele petrecute acolo. Aceste informaii pot fi valorificate dac sunt fcute corelaii ntre urmele identificate, valoarea lor probatorie i metoda de investigare a acestora. 1. INTRODUCERE ADN acidul deoxiribonucleic este o molecul care se gsete n celulele nucleate ale oricrui om, animal, plant sau oricrei alte materii organice vii. Celulele sunt unitile structurale i funcionale ale oricrui organism viu, fiind coninute de ctre variate tipuri de esuturi (piele, muchi, snge, oase etc.). n interiorul majoritii celulelor se gsete nucleul care conine sursa i totodat vectorul motenirii genetice - cromozomul. Prin prisma criminalistului, fiecare celul nucleat din organismul unui individ conine ADN i este o potenial surs de identificare genetic a acestuia. Structura chimic a ADN nglobeaz codul genetic i se manifest prin exprimarea caracterelor diferite ale fiecrei persoane: sex, nlime, culoarea prului, ochilor etc. Acizii nucleici reprezint moleculele care pastreaz, transport si manipuleaz informaia n orice celul vie. Codul de scriere a acestei informaii este universal valabil, iar mecanismele biochimice implicate sunt pe de o parte complexe si pe de alta parte foarte precise. Cea mai utilizat tehnic a analizei genetice judiciare este cunoscut ca fiind Short Tanden Repeat genotiparea fragmentelor scurte repetitive de un anumit numr de ori, localizate in zonele neinformaionale ale genomului. Astfel, din fiecare urm sau microurm biologic uman care conine celule nucleate se extrage ADN ce urmeaz a fi supus unei reacii de amplificare Polymerase Chain Reaction - un proces enzimatic prin care regiunile sunt replicate (multiplicate) de 28 - 34 ori, generndu-se cca. un bilion (109) copii. Aceast tehnic evideniaz numrul de repetri ale unitilor de baz i le transform n valori alfanumerice, cunoscute ca profile genetice. Probele biologice constituite din celule nucleate sunt eseniale pentru determinarea profilului genetic. Din acest motiv, trebuie efectuate cercetri sistematice pentru descoperirea acestora, iar ulterior ridicarea, conservarea si transportul acestora trebuie sa in seam de o serie de reguli pentru a nu le compromite. Probele biologice care fac parte din aceast categorie sunt: Snge lichid sau depus pe suporturi n stare uscat Sperm lichid sau depus pe suporturi n stare uscat Diverse secreii biologice umane (saliv, sperm) sau amestecuri de secreii provenite n urma actelor sexuale esuturi biologice moi formate din celule nucleate Celule nucleate (epiteliale) transferate pe obiecte (prin frecare , atingere etc.) esuturi dure (os, dini) Fire de pr cu foliculi (rdcin) Saliv Materii fecale Urin Microurme biologice constituite din celule nucleate Slide-uri i frotiuri citologice esuturi ncrustate n parafin sau alte ceruri Prin microurme biologice pot fi definite acele tipuri de urme care pot fi transferate de la o persoan pe diverse obiecte suport, care nu pot fi observate macroscopic. n toate cazurile, materialul biologic transferat este constituit din celule nucleate i se formeaz ca urmare a unui contact direct intim sau de la distan. Microurmele pot fi sub form de celule epiteliale remanente provenite, fie n urma unui contact sub form de apucare sau frecare, fie sub form de transpiraie, mtrea, saliv etc.

224

De cele mai multe ori n practic ne ntlnim cu cantiti foarte mici de material biologic pretabil a fi recoltat. Mai mult, sunt frecvente situaiile n care suntem pui n faa unor amestecuri de probe biologice ce provin de la mai muli contribuitori, n care unul dintre acetia sau mai muli sunt minoritari n amestec. Analiza genetic a unui numr foarte mic de celule nucleate, respectiv a unei cantiti foarte mici de material biologic, se face printr-o abordare diferit fa de situaiile uzuale i are ca scop generarea prin reacia de amplificare a unei cantiti suficiente de copii ale fragmentelor de ADN pentru a se obine un profil genetic valorificabil. Aceast metod este aplicabil probelor biologice cu un coninut de ADN matri sub 50 pg, microurmelor biologice, probelor biologice aflate ntr-un stadiu avansat de degradare, cu surs unic sau surse multiple. Este o metod foarte sensibil, permind obinerea profilelor genetice dintr-o prob biologic constituit din cca. 10 celule diploide (ex. materialul biologic coninut de un fragment de amprent papilar). Datorit acestei sensibiliti, tehnica necesit condiii speciale de aplicare deoarece riscul de contaminare i intercontaminare a probelor este foarte crescut. Profilele genetice pot fi utilizate n scopuri judiciare astfel: - un profil genetic obinut dintr-o prob biologic de la faa locului poate fi comparat cu cel al unei persoane suspecte n cauz; dac sunt identice, aceasta poate constitui o prob pentru acuzare; - probe biologice obinute de la mai multe infraciuni au profile genetice identice, ceea ce demonstreaz prezena aceleiai persoane la comiterea infraciunilor; aceste informaii pot fi utilizate ca probatorii n justiie sau pot fi adugate la soluionarea altor cauze; - compararea profilelor genetice ale persoanelor arestate cu cele ale urmelor de la faa locului rmase neatribuite n alte cauze nesoluionate; - identificarea persoanelor sau victimelor terorismului, dezastrelor i catastrofelor naturale; - stabilirea afiliaiilor genetice paterne i materne. 2. TEHNICI ANALITICE DE CERCETARE A LOCULUI INFRACIUNII Totalitatea nsuirilor i a laturilor eseniale n virtutea crora informaiile aduse de un profil genetic pot fi valorificate corespunztor se bazeaz pe o niruire de etape care ncep din momentul n care a avut loc infraciunea. Chiar de la intrarea n scena infraciunii a personalului autorizat este bine s se in seama c prin necunoaterea adecvat a materiei asupra creia este orientat activitatea subiectului, pot fi introduse erori care odat nglobate sunt foarte greu de corectat. Procesul de investigare, documentare i examinare a locului infraciunii, din punctul de vedere al valorificrii urmelor sau microurmelor biologice prin metode de analiz genetic, se bazeaz pe o serie de reguli de care va depinde calitatea informaiilor aduse de aceste tipuri de investigaii. Investigatorul tebuie s nceap cercetarea ncet i metodic pentru a reui s identifice i s colecteze urmele i microurmele prezente n scena infraciunii. Decizii rapide trebuie luate doar n cazul n care sunt identificate urme n pericol de a fi distruse sau compromise. nainte de intrarea n scena crimei este bine ca investigatorul s fi obinut deja ct mai multe informaii despre scopul cercetrii i valoarea tipului de urme care pot fi prezente. Aceste informaii sunt bazate pe starea mprejurrilor, date despre victim i autor, precum i alte informaii de la ofierii care au intrat deja n contact cu locul faptei i au ca scop prevenirea distrugerii sau compromiterii oricror urme. Investigatorul trebuie s dea un sens logic cercetrii pentru descoperirea urmelor i s utilizeze resursele cognitive dobndite pentru a face corelaiile logice dintre existenei acelor probe care pot demonstra comiterea faptului, tipului de urm i zonele int unde pot exista, datorate accesrii acesteia. Criminalistul trebuie s documenteze i s nregistreze orice aspect sesizat pe parcursul procesului de investigare a scenei crimei, ncepnd cu observarea i finaliznd cu recoltarea probelor. Aceasta este necesar pentru a reobserva de cte ori este necesar locul faptei n condiiile de dinaintea intrrii, ridicrii sau modificrii acestuia. Examinarea locului faptei ncepe, de regul, cu un tur (screening) al zonei i al traseului crimei. Acest tur are ca scop marcarea prezenei probelor, punctul de intrare al autorului, localizarea victimei, zona unde autorul s-a curat sau a lsat anumite obiecte, locul de ieire al autorului, precum i alte detalii care pot fi valorificate. Constituirea unei tactici de cercetare a cmpului infraciunii pentru identificarea probelor biologice ce pot fi valorificate prin genotipare judiciar trebuie s in cont de tipul infraciunii, a scenei (deschis sau nchis), precum i starea victimei. Vor fi cutate acele suporturi purttoare de urme sau microurme biologice care au fost accesate de autor sau victim, n funcie de caz, prin intermediul crora a fost posibil realizarea unui transfer direct i care vor demonstra prezena autorului sau victimei ntr-un spaiu determinat. Scopul final este acela de a identifica sau deduce obiectele suport purttoare de urme sau microurme biologice care pot aduce informaii n ancheta judiciar.

225

Prezena probelor biologice de interes pentru anchet, prezente n scena infraciunii, se datoreaz transferului acestora n mod direct i uneori indirect, presupunnd c acestea nu au ca surs existena unei contaminri sau intercontaminri. Transferul urmelor biologice n mod direct poate fi rezultatul urmtoarelor situaii: A. Transferul urmei biologice a suspectului pe victim (pe corpul acesteia sau pe obiectele sale de mbrcminte) Aici pot fi incluse cazurile de viol, cnd sunt recoltate probe vaginale, probe biologice remanente pe suprafaa corpului victimelor sau pe obiecte vestimentare. Cazurile n care au fost analizate probe biologice ale autorilor rmase pe corpul victimei sunt foarte numeroase, spre exemplu cele recoltate de pe gt, brbie, piept (sni), mini, zona unei mucturi sau de pe vestimentaie. B. Transferul urmei biologice a suspectului pe un obiect de la faa locului. Pentru exemplificare acestui tip de transfer mai jos sunt prezentate cteva moduri de abordare a probelor: a - infraciunea de omor deosebit de grav comis de autori necunoscui. Probele supuse analizelor au fost: - material textil reprezentat de un clu cu care victima a fost legat la gur Foto 1 - probele au fost prelevate din zonele adiacente nodului care nu conineau snge provenit de la victim. Examinarea microscopic a preparatelor citologice efectuate din aceste probe au evideniat microurme de celule epiteliale remanente. Profilul genetic obinut a fost identic cu al uneia dintre persoanele incluse n cercul de suspeci. - un cablu electric cu techer, cu care victima a fost legat la nivelul gtului i la ncheieturile minilor Foto 1 material textil reprezentnd cluul cu care victima a Foto 2. Au fost prelevate probe din zona nodurilor din fost legat la gur care s-au efectuat preparate citologice care au evideniat microurme de celule epiteliale remanente al cror profil genetic a fost identic cu al aceleiai persoane; - n depozitul subunghial recoltat de la victim au fost identificate deasemenea celule epiteliale al cror profil genetic a fost identic cu al aceleiai persoane din cercul de suspeci.

b infraciunea de omor calificat. Proba acuzatoare a fost constituit din dou fragmente de mnu chirurgical ridicate din scena crimei Foto 3. Probele au fost examinate separat, pe ambele suprafee (exterior i interior), identificndu-se la examinarea microscopic microurme de celule epiteliale remanente rezultate n urma contactului/frecrii dintre acestea i persoana purttoare sau/i persoana cu care a intrat n contact fizic n timpul utilizrii. n urma genotiprii s-au obinut urmtoarele: suprafaa exterioar profilul genetic al victimei; suprafaa interioar profilul genetic al unuia dintre persoanele din cercul de suspeci.

Foto 2 - cablu electric cu techer, cu care victima a fost legat la nivelul gtului

Foto 3 fragment de mnu chirurgical

226

c. vtmarea corporal prin mpucare. n cmpul infraciunii a fost identificat un cartu marca WOLF, calibru 5,45x18 Foto 4. Examinarea microscopic a preparatelor efectuate din probele prelevate de pe suprafaa tubului au evideniat microurme de celule epiteliale remanente al cror profil genetic s-a demonstrat a fi identic cu cel al persoanei suspectate.

Foto 4 cartu marca WOLF

d. infraciune de omor n care a fost analizat din punct de vedere genetic un fragment de bt. n vederea identificrii persoanei / persoanelor care l-au utilizat, acesta a fost mprit n 4 zone, notate cu A, B, C, i D Foto 5 . Au fost prelevate cte dou probe de pe fiecare zon P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7 i P8, din care au fost efectuate preparate citologice. Examinarea microscopic a evideniat celule epiteliale remanente n cazurile probelor P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, iar n cazul P8, snge uman.
Urm de culoare brun rocat

Zona A Zona D Foto 5 - fragmentul de bt

Zona B

Zona C

Probele notate cu P1, P2, P3, P4, P5, P6 i P7 din zonele A, B, C i D au demonstrat prezena unei persoane necunoscute de sex masculin. Proba notat cu P8 din zona D un profil genetic identic cu cel al victimei. e. deinere ilegal de arme. Proba analizat a fost un pistol tip Carpai, md. 1974, calibru 7,65 mm (Foto 6,7 i 8) i cinci cartue de acelai calibru (Foto 9). n vederea identificrii persoanelor care deinut sau utilizat arma, au fost prelevate probe dup cum urmeaz: - maonul exterior i piedica trgaciului; - cocoul i patul; - trgaci; - ncrctorul i sigurana ncrctorului; - manonul interior i eava; - gura evii, ina manonului i zonele greu accesibile ale componentelor interioare; - arc.

Foto 6 Proba 1: pistol Md. 1974, Carpai, calibru 7,65 mm

227

Foto 7 pistol Md. 1974, Carpai, calibru 7,65 mm, detaliu prelevare manon interior mm,

Foto 8 pistol Md. 1974, Carpai, calibru 7,65 prelevare de pe componentele interioare

Din aceste probe s-au efectuat preparate citologice care examinate microscopic au evideniat celule epiteliale remanente n amestec cu diverse substane. Genotiparea acestora poate demonstra prezena a cel puin patru indivizi identificai n diverse zone, astfel: - maonul exterior i piedica trgaciului trei persoane; - cocoul i patul - patru persoane; - trgaci - trei persoane; - ncrctorul i sigurana ncrctorului - trei persoane; Foto 9 cinci cartue calibru 7,65 mm - manonul interior i eava - patru persoane ; - gura evii, ina manonului i zonele greu accesibile ale componentelor interioare - trei persoane; - arc celule epiteliale - dou persoane ; - cartue - celule epiteliale - dou persoane. C. Transferul urmei biologice a victimei la suspect (pe corpul sau pe hainele acestuia). O abordare simpl a acestui gen de transfer poate fi cea n cazul unei infraciuni de viol comis asupra unei minore, cnd a fost analizat chilotul persoanei suspecte Foto 10, pe suprafaa cruia au fost identificate urme de snge uman n amestec cu secreii biologice de tipul celor vaginale sau spermatice. A fost demonstrat astfel prezena urmelor biologice (snge) provenite de la victim pe un obiect vestimentar al suspectului.

Foto 10 chilotul suspectului

228

D. Transferul urmei biologice a victimei pe un obiect de la faa locului. Prin acest tip de transfer se poate demonstra prezena victimei ntr-un anumit perimetru sau incint, n condiiile n care aceasta a fost mutat sau este disprut. Pentru exemplificare este prezentat mai jos analiza efectuat ntr-o cauz de tentativ de omor cu victime multiple, asupra sabiei presupus a fi implicat n eveniment Foto 11. Urmele identificate pe suprafaa acesteia au fost constituite i identificate astfel: - pe lam: o snge uman sub forma a trei urme distincte din care s-au obinut profile genetice ale victimelor; o trei fragmente de amprente papilare care au cantitatea de material biologic suficient pentru obinerea profilului genetic al uneia dintre victime; - pe suprafaa mnerului: celule epiteliale provenite de la persoana deintoare a acestui obiect.

Urma 3 Urma 1 Urma 2

Foto 11 sabia supus examinrii E. Transferul urmei biologice a unui martor pe victim sau pe un obiect de la faa locului. Este ntlnit n cazurile contaminrilor directe sau ncruiate. Aceste tipuri de probe nu aduc informaii n rezolvarea cazurilor i deseori conduc ancheta judiciar pe o pist greit, prin cutarea unei persoane al crei profil genetic s fie identic cu cel n litigiu. F. Transferul urmei biologice a unui martor pe autor Poate fi o surs de informaii prin care se s se aduc un plus de veridicitate declaraiilor acestuia. Spre exemplificare v prezentm un caz n care o persoan aflat n apropierea desfurrii unei infraciuni surprinde autorul i ncearc s l imobilizeze. Prin contactul direct dintre cei doi este realizat un transfer de material biologic unidirecional: martor autor. Din ancheta judiciar i declaraiile martorului pot fi identificate obiectele vestimentare ale autorului i zonele de contact pe suprafaa creia a avut loc transferul. Genotiparea materialului biologic remanent n aceast zon i a probei biologice de referin recoltat de la martor poate duce la confirmarea evenimentului. G. Transferul urmelor biologice ale unei persoane pe obiecte n litigiu, pe baza crora poate fi stabilit un fapt. Realizarea unor studiii n cadrul laboratoarelor de genetic judiciar ale Poliiei Romne a demonstrat posibilitatea de genotipare a microurmelor biologice remanente n stratul interstiial al hrtiei pe care au fost efectuate nscrisuri cu vechime de pn la aproape 26 ani. Aceste rezultate au relevat faptul c analizele genetice pot completa n anumite condiii determinrile grafoscopice, fie la identificarea falsurilor, fie al persoanei creatoare. n acest studiu au fost utilizate nscrisuri executate pe diverse tipuri de hrtii, cu o vechime cuprins ntre o zi i 26 ani Foto 12, 13 i 14.

229

Foto 12. nscris cu o vechime de aproximativ o lun

Foto 13. nscris cu o vechime de aproape 26 ani

Foto 14. nscris cu o vechime de aproape 15 ani

Genotiparea materialului biologic prelevat din stratul superficial n cazul nscrisurilor cu o vechime de aproape 26 ani a dus la obinerea unor profile genetice n care apare fenomenul LCN (Low Copy Number) Figura 15, 16, 17 i 18, profilele B, D, F i H - pentru celulele epiteliale prelevate dup ndeprtarea stratului superficial, au fost obinute profile genetice complete pentru cei 16 loci utilizai - Figura 15, 16, 17 i 18, profilele A, C, E i G.

A B
Foto 16. Profilul genetic al celulelor epiteliale remanente n stratul interstiial C i n stratul superficial D, pentru markerii D3S1358, TH01, D13S317, D16S539 i D2S1338.

Foto 15. Profilul genetic al celulelor epiteliale remanente n stratul interstiial A i n stratul superficial B, pentru markerii D8S1179, D21S11, D7S820 i CSF1PO.

230

G H

Foto 17. Profilul genetic al celulelor epiteliale remanente n stratul interstiial E i n stratul superficial F, pentru markerii D19S433, vWA, TPOX i D18S51.

Foto 18. Profilul genetic al celulelor epiteliale remanente n stratul interstiial G i n stratul superficial H, pentru markerii AMEL, D5S818 i FGA.

n cazul nscrisurior cu vechime de aproximativ o lun, genotiparea materialului biologic prelevat din stratul superficial adiacent nscrisului a determinat obinerea unui amestec de profile genetice. Analiza genetic a probelor recoltate din stratul urmtor a evideniat profile genetice unice. Pentru nscrisul creat cu aproximativ 15 ani n urm, rezultatele au fost similare celui cu vechimea de aproape 26 de ani. De asemenea i n domeniul balisticii pot fi furnizate o serie de informaii care s duc la identificarea proprietarului sau/i ale altei persoane care a utilizat o arm, deoarece de pe suprafaa acesteia este posibil s fie prelevate microurme biologice din care se pot obine profile genetice ale acestora. Un alt exemplu poate fi cel al unui dispozitiv suspect disimulat ntr-o cutie de conserv marca NOSTROMO de fabricaie Italian, Foto 19 - 22, care ntrunete caracteristicile tehnice ale unei bombe confecionate artizanal.

Foto 19 componentele din interiorul dispozitivului suspect introdus disimulat ntr-o cutie de conserv marca NOSTROMO

Foto 20 spatele cutiei de conserve n care a fost

231

Foto 21 detaliu al poziionrii ncrcturii explozive explozive

Foto 22 banda adeziv a ncrcturii

Rezultatele genotiprii au fost urmtoarele: banda adeziv n care a fost mpachetat bateria un profil genetic al unei persoane de sex masculin; suprafaa interioar a cutiei un profil genetic al unei persoane de sex masculin identic cu cel al celulelor epiteliale remanente pe banda adeziv n care a fost mpachetat bateria; banda adeziv a ncrcturii explozive un amestec de profile genetice ce provine de la minim dou persoane. Profilul genetic al microurmelor de celule epiteliale remanente pe banda adeziv n care a fost mpachetat bateria i respectiv, suprafaa interioar a cutiei, este inclus n acest amestec. Transferul urmelor biologice n mod indirect (secundar)

Uneori urmele ce conin ADN pot fi transferate (la victim, suspect, martor, obiect) printr-un vector intermediar. n cazul transferului indirect nu exist un contact fizic nemijlocit ntre sursa de ADN i suprafaa int. n aceste cazuri vectorul de transfer poate fi o persoan sau obiect. Transferul indirect al urmei nu constituie o prob care s fac legtura informaional dintre o persoan i o anumit arie infracional. 3. IDENTIFICAREA PROBELOR BIOLOGICE Factori de risc ce pot compromite probele, fcndu-le inapte pentru analiza genetic judiciar. Realizarea cu succes a genotiprii probelor biologice ridicate de la faa locului depinde de modul n care sunt ridicate, ambalate, conservate i transportate. Astfel, tehnica de recoltare i nregistrare a probelor, cantitatea i natura acestora, modul de manipulare, ambalare, condiiile de conservare i transport au o importan deosebit pentru obinerea unor rezultate viabile prin analiza ADN. Dac urmele nu sunt recoltate, nregistrate, ambalate, conservate i transportate corespunztor, nerespectnd regulile impuse prin managementul de calitate i dispoziiile care reglementeaz aceast activitate, acestea nu vor satisface condiiile minime pentru a fi admise ca probe n justiie i nu vor fi genotipate pentru evitarea cheltuielilor nejustificate. Dac probele nu sunt nregistrate, naintea ridicrii, iar custodia acestora nu este documentat, atunci originea acestora poate fi contestat. Dac recoltarea este incorect probele se pot distruge. Dac ambalarea este incorect probele se pot contamina sau degrada. Pstrarea n condiii necorespunztoare poate duce deasemenea la degradarea probelor. Toi aceti factori pot influena negativ, n mod decisiv, succesul genotiprii probelor sau pot fi contestate ca probe tiinifice n soluionarea cazului. Sngele, sperma, esuturile biologice moi sau dure (epitelial, conjunctiv, muscular sau osos), firele de pr i saliva pot fi transferate n mod direct pe corpul unei persoane, pe mbrcmintea acesteia sau pe un obiect gsit la faa locului. O dat cu depunerea lichidelor biologice, acestea ader sub form de pete pe suprafaa obiectului purttor. Probele biologice solide (esut, os, pr) se pot, de asemenea, depune pe obiecte prin contact direct. esutul biologic esutul biologic poate fi gsit depus pe o gam foarte variat de suporturi n scena crimei, cum ar fi: armele implicate n eveniment (de ex.: n/pe eava armei, pe topor, ciocan, fierstru, etc). obiecte vestimentare care pot face legtura dintre victim i autor sau autor i scena crimei;

232

vehicule, pe toate zonele unde a existat un contact fizic dintre persoana implicat sau victim i obiectul suport (volan, mnere, sub acestea, parbrize deteriorate, pe interior sau exterior, airbag etc.) obiecte diverse prezente n cmpul infracional care au fost utilizate de persoane sau constituie suportul pentru realizarea unui transfer al urmelor sau microurmelor biologice.

Sngele Urmele de snge permit identificarea persoanei de la care provine prin intermediul genotiprii ADN coninut n acesta, din acest motiv, au o valoare probatorie foarte mare. Urmele de snge pot fi examinate i din punct de vedere al dispunerii pe obiectul suport, obinndu-se informaii traseologice i o posibil localizare n spaiu a persoanei de la care provine. Urmele de snge pot fi gsite : pe autor pe victim pe obiecte vestimentare pe diferite obiecte existente la faa locului pe obiectele implicate n svrirea infraciunii Saliv i secreii nazale Probe ce pot fi folosite pentru identificarea unui individ utiliznd genotiparea ADN a celulelor prezente n saliv/secreii nazale sunt: resturi de igar vase de but erveele gum de mestecat timbre plicuri urme de mucturi urme de saliv pe pri ale corpului alimente parial consumate mti faciale Secreii vaginale i sperm Secreiile vaginale/sperma au un potenial ridicat de identificare prin genotiparea ADN, din aceste motiv au o valoare probatorie foarte mare, n special n cazurile de viol. Urmele de sperm au n general o coloraie alb glbuie i un aspect uor rugos. Deseori sunt intuite de ctre investigator obiectele purttoare de astfel de urme. Unghii i depozite subunghiale Unghiile pot fi o surs de material probatoriu (material biologic, fibre, lac de unghii) atunci cnd provin de la victim i/sau autor i pot avea un potenial mare de identificare (profil ADN, creste verticale, orice fragmente). Infraciunile n care unghiile i/sau depozitele subunghiale pot avea importan, includ faptele comise cu violen, infraciunile sexuale (ex. unghii rupte sau crpate, urme de zgriere prezente pe victim i/sau autor, etc). Fire de pr Prul uman, corporal sau capilar, este important pentru genotiparea ADN. Aplicaii criminalistice ale acestor tipuri de probe: genotiparea ADN a celulelor prezente n bulbul firului de pr, analiza mitocondrial a firelor de pr; examinri morfologice (aspect, culoare, canalul medular, keratina, boli ale prului, pr smuls/colorat). Fecale i urin Aceste tipuri de probe biologice pot fi examinate din punct de vedere al geneticii judiciare pentru identificarea persoanei de la care provin i parial din punct de vedere chimic sau toxicologic (urina).

233

Este tiut faptul c fecalele, indiferent de origine, sunt un mediu bacteriologic foarte bun. Acesta poate duce la distrugerea oricrei microurme biologice, care ar putea sta la baza stabilirii unui profil genetic. Dar, n anumite situaii i cu o prelevare corect a microurmelor care conin material genetic, acestea pot fi genotipate. Urmele de mucturi Urmele de mucturi pot fi gsite pe piele, pe mncare parial consumat, pe gum de mestecat etc. De regul se ntlnesc n cazurile infraciunilor sexuale, cnd provin de la victim i/sau autor. Urmele de mucturi pot fi analizate att din punct de vedere al formei ct i prin examinarea genetic a salivei prezente n zonele adiacente. Urme sau microurme biologice de transfer. Probe provenite din contactul cu pielea/transpiraia Prin manipularea de mai multe ori a unui obiect vor fi transferate pe suprafaa acestuia celule epiteliale care se vor depune stratificat. Acestea sunt probe care pot fi folosite pentru a identifica un individ prin intermediul genotiprii celulelor nucleate transferate prin contact sau transpiraie (contact tegumentar). La recoltarea acestui gen de microurme biologice, trebuie inut cont de aceast dispunere n straturi, deoarece ofer posibilitatea prelevrii microurmelor sau urmelor biologice ce provin de la persoane diferite, n funcie de modul de prelevare. Aceste tipuri de probe pot fi gsite pe cele mai variate suporturi, cum ar fi: haine (nclminte) mnui plrii sau mti arme folosite la comiterea faptei (cuit, arm de foc, piatr), unelte folosite la spargere (urubelni, levier, etc) sau alte obiecte piele (de ex. pielea victimei) vehicule (volan, schimbtor de viteze, etc) amprente papilare latente Urmele sau microurmele biologice depuse pe suporturi atipice La identificarea urmelor sau microrumelor biologice se va ine seama de proprietile morfologice sau fizico-chimice ale acestora, iar identificarea se realizeaz diferit n funcie de natura materialului biologic i de suport. Spre exemplificare vom prezenta cteva dintre acestea: - sol care conine urme biologice (snge, saliv sau alte secreii); - uleiuri sau vaseline amestecate cu urme biologice (snge, saliv sau alte secreii); - urme biologice (snge, saliv sau alte secreii) depuse pe suprafee ruginite sau se afl n amestec cu alte tipuri de substane. 4. RISCUL PRIVIND CONTAMINAREA LOCULUI FAPTEI Analiza genetic n scop judiciar a probelor biologice provenite de la faa locului (genotiparea judiciar) reprezint din ce n ce mai frecvent o provocare n cadrul laboratoarelor de specialitate, presupunnd abordarea unor tehnici adaptate cantitii i strii de conservare a materialului biologic pus la dispoziie. Mijloacele din ce n ce mai sofisticate de comitere a infraciunilor, se traduc prin prezena la faa locului a unor cantiti foarte mici de material biologic care s constituie suportul analizei genetice i implicit a posibilitii identificrii infractorilor. Mai mult, probele biologice de tipul fragmentelor osoase vechi, la care degradarea s-a produs datorit aciunii nucleazelor i efectelor proceselor hidrolitice si oxidative, cazurile de viol caracterizate de cele mai multe ori prin prezena unui numr mic de copii ADN provenite de la suspect (contribuitor minor, brbat) n amestec cu un numr mare de copii ADN provenite de la victim (contribuitor major, femeie) sunt adesea mai complicate i presupun abordarea unor tehnici de analiz genetic adaptate. Obinerea profilelelor ADN dintr-o cantitate foarte mic de material biologic (sub 100 pg ADN matri) a fost definit ca fiind genotiparea ADN low copy number (tehnica LCN). Trebuie menionat c la ultima ntlnire a grupului de lucru ENFSI (European Network of Forensic Science Institute), a fost anunat renunarea la termenul tiinific de tehnic low copy number, ntruct s-a constatat c parametrii de lucru i modul de abordare a probelor biologice cu un coninut mic de ADN matri (ex. 34 de cicluri ale reaciei de amplificare) pot fi aceiai i n cazul probelor cu un coninut suficient de material biologic. Prin urmare termenul tiinific acceptat de comunitatea tiinific ENFSI este genotiparea probelor biologice cu un coninut mic de ADN matri. Astfel analiza genetic a probelor biologice cu un coninut mic de ADN matri implic gsirea unor soluii de cretere a sensibilitii metodei, rezultatele obinute fiind caracterizate prin modificri semnificative n

234

morfologia profilelor electroforegramelor, astfel nct metodele standard de interpretare devin inadecvate n unele cazuri, fiind astfel necesare metode noi de interpretare i precauii suplimentare. De asemenea prezentarea rezultatelor impune o atenie deosebit. Este necesar o abordare complex a intregului proces, de la ridicarea probelor de la faa locului i pn la interpretarea rezultatelor. O cantitate foarte mic de material genetic (10 - 17 celule diploide) lsat accidental la faa locului de ctre o persoan care nu are legatur direct cu infraciunea, poate fi ridicat, analizat i implicit introdus n ecuaia investigrii criminalistice, cu toate consecinele de ordin interpretativ ce decurg din aceasta. n sprijinul celor prezentate mai sus, facem referire la un studiu realizat de ctre Rutty et al. care prezint observaiile fcute n cadrul unui numr redus de experimente realizate n scopul de a investiga potenialul contaminrii cu ADN strin de ctre persoanele ce realizeaz cercetarea la faa locului. De asemenea acest studiu prezint importana utilizrii de ctre personalul implicat n cercetarea la faa locului a echipamentului de protecie adecvat, n scopul reducerii riscului privind contaminarea. Experimentele au fost realizate de ctre un singur subiect de sex masculin, cunoscut ca fiind good shedder - persoan care n contact cu un suport inert las suficient material genetic pentru a se obine un profil genetic complet. Persoanele care n contact cu un suport inert las o cantitate de material genetic insuficient pentru a se obine un profil genetic complet sunt denumii poor shedder. Experimentele au fost mprite n patru grupe generale: Fr micare, Cu micare (micri ale subiectului ca acelea pe care investigatorul de la faa locului le-ar putea face), Vorbind i Tuind, n picioare i n genunchi, cu i fr purtarea echipamentului de protecie. Cnd subiectul a purtat echipament de protecie acesta a fost compus din salopet pentru corp cu glug, protecie de plastic antistatic pentru picioare i mnui chirurgicale. Atunci cnd a fost utilizat protecie pentru gur aceasta a constat din masc de unic folosin. Pentru fiecare test, zona de testare a constat din dou suprafee din polietilen (non-absorbante) avnd dimensiunile de 46 cm x 57 cm, ce au fost plasate pe podea (dimensiuni: 114 cm lungime si 47 cm laime), peste care au fost aezate coli de hrtie pentru a simula aria din imediata apropiere a investigatorului care realizeaz cercetarea la faa locului (colile de hrtie au fost aezate de ctre un voluntar pentru a preveni contaminarea acesteia de ctre subiect). Dup fiecare test, coala de hrtie a fost ridicat i de pe aceasta au fost prelevate probe cu ajutorul unui tampon de bumbac steril umezit cu ap steril deionizat (a fost utilizat cte o fiol pentru fiecare test) de pe toat suprafaa celor cinci zone ale acesteia, aa cum este prezentat n figura de mai jos. 114 cm

subiect

z o n a 1

z o n a 2

z o n a 3

z o n a 4

zona 5

46 cm

14.2 cm 14.2 cm

14.2 cm 14.2 cm 57 cm

57 cm

Reprezentarea schematica a zonei de testare Au fost utilizate controale negative constnd din ase tampoane de bumbac mbibate cu acelai lot de ap steril deionizat. Toate probele prelevate au fost imediat congelate la -200C, fr uscare prealabil, procesate de ctre o alt persoan dect subiectul: extracie cu QIAmp DNA mini kit - Qiagen, amplificare kit AmpFlSTR SGM Plus - Applied Biosystems, interpretare.

235

Rezultatele sunt exprimate prin numrul de alele ale donorului, respectiv nedonorului pentru fiecare zon de testare i numrul de alele observate n fiecare control negativ (Tabelul nr. 1), care practic se pot traduce prin gradul de contaminare existent n fiecare situaie n parte (cu ct numrul de alele donor/nedonor este mai mare cu att gradul de contaminare este mai mare). Msuri protecie Corp + + + + + + + + + + + + + + + Fa + + + + +a +a n picioare(S) n genunchi (K) S K S K S K S K S K S K S K S K S K Numr alele donor / nedonor vorbin d + + + + + + tuin d + + + + Zona 1 0 (0) 0 (0) 21(0) 21 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 21 (0) 0 (0) 19 (0) 2 (0) 0 (1) 0 (0) 21 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 5 (4) Zona 2 0 (0) 0 (0) 1 (0) 20 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 21 (0) 0 (0) 20 (0) 7 (0) 17 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (0) 0 (0) 10 (12) Zona 3 0 (0) 0 (0) 1 (0) 19 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 6 (2) 0 (0) 9 (0) 0 (0) 10 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (0) Zona 4 0 (0) 0 (0) 0 (0) 21(0) 0 (0) 0 (0) 21 (0) 7 (1) 0 (0) 11 (0) 1 (0) 4 (0) 0 (0) 0 (0) 0 (1) 0 (0) 0 (0) 1 (0) Zona 5 0 (0) 0 (0) 2 (0) 16 (0) 0 (0) 0 (0) 18 (0) 1 (0) 0 (0) 0 (0) 21 (0) 1 (1) 0 (0) 0 (0) 1 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (1) Alele n control negativ 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 2 0 0 0 8

Exp . 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Nivel activitate fr fr normal normal fr fr intens intens fr fr fr fr fr fr fr fr fr fr

+a masc cu vizor Tabel nr. 1. Condiiile experimentale i rezultatele obinute. (adaptat dup Rutty, G.N., Hopwood, A., Tucker, V, The effectiveness of protective clothing in the reduction of potential DNA contamination of the scene of crime, Int. J.Legal. Med.(2003), 117: 170 174) Recomandri Purtarea echipamentului de protecie specific (costum, protecie pentru cap i gur, manui sterile) reduce, dar nu implicit elimin, contaminarea accidental cu ADN a locului faptei. Referitor la masca de protecie pentru gur, se recomand a nu se vorbi i nici a o atinge n mod repetat pe timpul utilizrii acesteia. Referitor la costumul de protecie, se recomand ca acesta s nu interfere cu hainele purtate n mod uzual ntr-o manier n care s afecteze locul faptei. Modalitatea de micare la locul faptei trebuie s fie minim astfel nct s permit desfurarea optim a activitilor specifice. Manuile i masca de protecie pentru gur trebuie schimbate regulat n afara locului faptei pentru a reduce contaminarea i intercontaminarea. Accesul la locul faptei trebuie strict limitat i permis numai persoanelor care au motive legitime s fie prezente. Comunicarea verbal la locul faptei trebuie s fie la un nivel minim. Ca msur de precauie, ar trebui considerat posibilitatea de a se recolta probe de referin pe la persoanele care particip la cercetarea locului faptei, precum i de la cele care au avut acces la locul faptei, n vederea gestionrii corecte a cazului n situaia existenei unei contaminri. n acest context aspectele legate de riscul privind contaminarea, respectiv intercontaminarea accidental a probelor biologice de ctre echipa care efectueaz cercetarea la faa locului trebuie abordate cu maximum de profesionalism, pe baza dispoziilor i ghidurilor specifice in vigoare, care trebuie aplicate i respectate cu strictee.

236

5. INTERPRETAREA REZULTATELOR ANALIZELOR GENETICE Rezultatele analizelor genetice, respectiv profilele obinute sunt prezentate sub form tabelar i pot fi interpretate prin: - identitate - ntre genotipurile probelor de referin i cele ale urmelor sau microurmelor biologice litigiu nu exist deosebiri; - includere - profilele genetice ale probelor biologice de referin sunt incluse n amestecurile de profile obinute n urma genotiprii probelor biologice litigiu; - excludere prin compararea genotipurilor probelor biologice de referin i a celor litigiu, rezult diferene care pot fi explicate numai prin faptul c acestea provin din surse diferite; - transmiterea ereditar a caracterelor - jumtate din genotipul prinilor este transmis la copii. Fiecare identificare implic analize biostatistice aferente care sunt prezentate sub form de frecven a genotipului respectiv i / sau grup populaional n care profilul genetic la care se adreseaz este unic. Pentru populaia Romniei a fost efectuat un astfel de studiu n urma cruia au fost obinute frecvenele fiecrei alele utilizate actual n Sistemul de Analize Genetice. Rezultatele obinute pot fi folosite n calculele biostatistice pentru populaia din Romnia, la estimarea frecvenei profilelor genetice, att n cazuistica judiciar ct i cea civil. Au fost studiai 15 loci STR tetramerici (D8S1179, D21S11, D7S820, CSF1PO, D3S1358, TH01, D13S317, D16S539, D2S1338, D19S433, vWA, TPOX, D18S51, D5S818, FGA) corespunztori kit-ului multiplex AmplFI STR Identifiler (Applied Biosystems) utiliznd 682 de profile de referin ale persoanelor. Frecvenele alelelor corespunztoare celor 15 loci STR studiai i puterea de discriminare a persoanelor (PD) pe baza acestora au fost publicate n Revista de Criminalistic. Profilele genetice analizate pentru persoanele nenrudite genetic din eantionul de indivizi studiat, respect echilibrul Hardy-Weinberg, neobservndu-se deviaii, iar puterea de discriminare pentru cei 15 loci studiai este de 0.9999999978. Dac interpretarea i exprimarea rezultatelor n cazul profilelor genetice unice este mai puin laborioas, deoarece se calculeaz frecvena regsirii acestuia n grupul populaional studiat, n cazul amestecurilor sunt necesare abordri din punct de vedere statistic mai complexe. n calculele statistice efectuate expertul folosete o estimare a proporiei din populaie care are un anumit genotip pentru a aprecia probabilitatea ca un anumit profil genetic s poat aparine unei alte persoane dect cea n cauz. S presupunem c profilul unei urme biologice de la faa locului este identic cu al unei persoane din cercul de suspeci i are frecvena de 2,8x10-13, ceea ce semnific un grup populaional n care este unic de 3,57x1012 indivizi. Pentru explicarea acestui rezultat poate fi folosit cazul ipotetic a dou insule, populate fiecare cu cte 3,57x1012 indivizi, iar persoana n cauz locuiete pe insula A i conform calculelor biostatistice are un profil unic n acest grup populaional (Figura 23). Dac sunt reunite populaiile celor dou insule obinndu-se 2x3,57x1012 indivizi, atunci, vor exista dou persoane cu acelai profil genetic, conform teoriei probabilitilor.
Mulimea A: 3,57x1012 persoane profilul genetic al suspectului 3 este unic

Mulimea A+B: 2x(3,57x1012 ) persoane suspectul 3 i o alt persoan pot avea acelai profil genetic

Mulimea B: 3,57x1012 persoane

Figura 23. Teoria insulelor pentru exprimarea prupului populaional

237

Raionamentul Bayesian este cel mai bun model de care dispunem pentru interpretarea probelor tiinifice. El permite nelegerea unor aspecte altfel greu de sesizat. Desfurarea procesului n instan impune respectare a trei principii: 1. evaluarea incertitudinii oricrei propoziii se face comparativ cu examinarea a cel puin unei propoziii alternative - vor exista minimum dou puncte de vedere opuse: unul al aprrii i cellalt al acuzrii. n aceast situaie este valabil forma teoremei lui Bayes n care sunt menionate ansele fiecrei dintre acestea i posibilitatea calculrii veridicitii acestora, una n raport cu cealalt; 2. n interpretarea tiinific a probelor exist ntrebri de genul: Care este probabilitatea datelor obinute dac se accept ca real o anumit propoziie? 3. interpretarea tiinific a rezultatelor este condiionat nu numai de propoziiile opuse ci i de cadrul circumstanelor n care acestea sunt evaluate. Pentru interpretarea amestecurilor de profile genetice se consider ntotdeauna dou ipoteze: ipoteza acuzrii (Hp) i ipoteza aprrii (Hd). Aceasta semnific faptul c putem folosi forma de calcul a anselor, conform teoremei lui Bayes, iar informaiile aduse de analiza genetic judiciar se pot trata separat de celelalte informaii, care sunt evaluate prin ansele anterioare (preliminare). Interpretarea unui amestec depinde foarte mult de mprejurrile crimei. Calculele care se efectueaz trebuie s in cont c trebuie s se demonstreze prezena materialului biologic al unui individ (victim sau suspect) pe un obiect n litigiu sau pe o alt persoan (suspect sau victim). Pentru interpretarea acestor rezultate sunt formulate dou ipoteze : i. suspectul sau victima, n funcie de caz, este contribuitor n amestecul de profile genetice obinut din materialul biologic studiat; ii. nu suspectul sau respectiv victima a fost cea care a contribuit la crearea urmei biologice genotipate, ci o alt persoan necunoscut, al crei profil genetic n combinaie cu cellalt considerat inclus, a determinat obinerea amestecului. n urma calculelor de biostatistic aferente i al raportului dintre ipoteza i. i ii. se concluzioneaz printr-o valoare numeric varianta posibil. Aceast valoare este denumit LR (Likelihood Ratio) i exprim raportul celor dou anse. Pot fi totui situaii n care aceast prezumie nu este valabil, de exemplu o prob n cazul unui viol care poate fi constituit dintr-un amestec de snge i sperm. Dac profilul genetic al probei include genotipurile victimei i suspectului, iar victima identific obiectul respectiv, propoziia acuzrii va fi similar cu cea de mai sus: Hp: proba n litigiu conine ADN provenind de la victim i de la suspect, iar pentru propoziia aprrii pot fi admise urmtoarele variante: Hd1: proba n litigiu conine ADN provenind de la victim i de la o persoan necunoscut; Hd2: proba n litigiu conine ADN provenind de la suspect i de la o persoan necunoscut; Hd3: proba n litigiu conine ADN provenind de la dou persoane necunoscute. Raportul anselor poate fi folosit analiznd simultan dou ipoteze: - urma conine ADN provenind de la victim i de la o persoan necunoscut. - urma conine ADN provenind de la dou persoane necunoscute. Evaluarea raportului anselor se face ca n cazurile de mai sus, astfel c specialistul va avea posibilitatea s concluzioneze: Probele pledeaz pentru faptul c este de LR ori mai probabil ca prima dintre aceste ipoteze s fie adevrat dect ca cea de-a doua ipotez s fie adevrat. Stabilirea faptului c victima a fost sau nu violat pe obiectul respectiv pe care exist urma depinde nu numai de probele biologice genotipate, ci i de alte circumstane pe care instana le va lua n considerare. Dac instana va stabili c, ntr-adevr obiectul de pe pat este asociat cu violul, atunci este util s se analizeze urmtoarele ipoteze: - urma conine ADN provenind de la victim i de la suspect; - urma conine ADN provenind de la victim i de la o persoan necunoscut. Evaluarea raportului anselor pentru aceast alternativ decurge ca mai nainte. Concluzia specialistului va fi de forma: Probele ADN demonstreaz faptul c este de LR ori mai probabil ca prima dintre aceste afirmaii s fie adevrat. Pentru exemplificare s lum amestecul de profile genetice provenit de la dou persoane, notate cu P1 i P2, prezentat mai jos i s calculm ansele ca P2 s fie contribuitor la crearea acestuia. n acest sens putem formula urmtoarele ipotez a acuzrii: Hp: Proba n litigiu conine ADN provenind de la persoana 1 i de la persoana 2. n acest caz pentru propoziia aprrii pot fi admise urmtoarele variante: Hd1: Proba n litigiu conine ADN provenind de la persoana 1 i de la o persoan necunoscut. Hd2: Proba n litigiu conine ADN provenind de la persoana 2 i de la o persoan necunoscut. Hd3: Proba n litigiu conine ADN provenind de la dou persoane necunoscute a cror profile genetice combinate determin obinerea amestecului respectiv.

238

Pentru exprimarea raportului anselor vor fi anlizate simultan cte dou ipoteze: - urma conine ADN provenind de la persoana 1 i de la o persoan necunoscut. - urma conine ADN provenind de la dou persoane necunoscute. sau - urma conine ADN provenind de la persoana 2 i de la o persoan necunoscut. - urma conine ADN provenind de la dou persoane necunoscute. Electroferogramele obinute sunt prezentate n Figurile 24 27.

Figura 24. Amestec de profile genetice ce provine de la doi contributori pentru markerii D8S1179, D21S11, D7S820 i CSF1PO.

Figura 25. Amestec de profile genetice ce provine de la doi contributori pentru markerii D3S1358, TH01, D13S317, D16S539iD2S1338.

239

Figura 26. Amestec de profile genetice ce provine de la doi contributoripentrumarkeriiD19S433,vWA,TPOXiD18S51.

Figura27.Amestecdeprofilegeneticereproductibileceprovine de la minim doi contributori pentru markerii AMEL, D5S818 i FGA.

Conform calculelor biostatistice efectuate, se poate afirma c prima ipotez, aceea c persoana 2 a contribuit la crearea urmei biologice genotipat, este de 2,14x1013 ori mai posibil dect a doua. Aceasta semnific faptul c un individ necunoscut al crui profil genetic poate substitui pe cel al persoanei 2 din amestec, va fi regsit la un numr mai mare de 2,14x1013 persoane. Am ignorat n explicaiile date mai sus orice informaie, cum ar fi intensitatea (aria) sau nlimea picurilor care ar putea fi un indicator al cantitilor relative de ADN ce provine de la un contributor din cadrul unui amestec. Lund n calcul diferenele de intensitate dintre picurile unei electroforegrame ce conine un amestec de dou profile genetice, se poate crete capacitatea de discriminare a analizei. Studiile recente au demonstrat utilitatea interpretrii amestecurilor de profile genetice utiliznd pe lng metodele numerice, cunoscute ca Linear Mixture Analysis (LMA) i tehnica Least Square Deconvolution (LSD), pentru separarea persoanelor contributoare. Least-square deconvolution este un algoritm matematic prin care se pot stabili cu certitudine combinaiile numrului de participani (date sub form de vectori), funcie de masa materialului genetic al fiecruia din amestec. La interpretarea amestecului prin tehnica LSD, se obin separat cele dou profile genetice, iar specialistul poate utiliza n calculele biostatistice frecvenele profilelor genetice deoarece cele dou ipoteze se reduc la: Hp1: Persoana 1 a creat urma de la faa locului, iar aprarea: Hd1 : o alt persoan a creat urma existent la faa locului. i Hp2: Persoana 2 a creat urma de la faa locului, iar aprarea: Hd2 : o alt persoan a creat urma existent la faa locului. n mod clar, Hp i Hd se exclud reciproc i sunt exclusive (nu mai poate fi o alt propoziie adevrat). Specialistul va folosi o estimare a proporiei din populaie cu genotipul G pentru a aprecia probabilitatea ca proba de la locul faptei s fi fost creat de ctre persoana 1 i 2. Utiliznd frecvenele alelelor markerilor genotipai se poate afirma c: - frecvena profilului genetic al persoanei 1 n populaia caucazian este de 9,18x10-22, ceea ce nseamn c ntrun grup format din 2,78x1022 de indivizi, profilul genetic al persoanei 1 este unic;

240

- frecvena profilului genetic al persoanei 1 n populaia caucazian este de 4,05x10-23, ceea ce nseamn c ntrun grup format din 3,59x1022 de indivizi, profilul genetic al persoanei 2 este unic. 6. LIMITELE METODEI DE ANALIZ GENETIC n momentul actual, limitele metodei i mai pot face simit prezena doar n cazurile unde urmele biologice se gsesc ntr-o stare de degradare biologic sau chimic total sau se gsesc ntr-un amestec, unde numrul de contribuitori este mai mare de patru persoane sau contribuitorul de interes este n cantitate foarte mic (minoritar) n amestec cu unul sau mai muli contribuitori care sunt n cantitate mare (majoritar). Aceasta are ca rezultat o cretere a valorii LR (Likelihood Ratio) pentru profilul genetic vizat, concomitent cu o scdere a grupului populaional n care acesta este unic. Vom analiza comparativ cteva amestecuri de profile genetice analiznd rezultatele calculelor biostatistice obinute. Vom considera c pe suprafaa unui mner al unei ui de acces ntr-o incint am identificat urme de celule epiteliale remanente n urma contactului cu minile persoanelor care l utilizau pentru deschiderea sau nchiderea acesteia. S presupunem c n incinta respectiv aveau acces n mod normal, trei persoane, notate aici cu persoana 1, 2 i 3. n urma unei infraciuni, autorul a deschis ua, lsndu-i pe aceeai suprafa celule epiteliale de pe palm. Recoltarea celulelor a fost efectuat din trei regiuni ale mnerului, iar genotiparea ADN extras din acestea au evideniat trei amestecuri de profile genetice: - urma a - un amestec de profile genetice ce provin de la minim dou persoane; - urma b - un amestec de profile genetice ce provin de la minim trei persoane; - urma c - un amestec de profile genetice ce provin de la minim patru persoane. Profilele genetice ale probelor de referin recoltate de la cele trei persoane i de la suspect sunt prezentate n tabelul nr 2. Tabel 2. Profilele genetice ale probelor de referin recoltate de la cele trei persoane i suspect Categoria Marker D8S1179 D21S11 D7S820 CSF1PO D3S1358 TH01 D13S317 D16S539 D2S1338 D19S433 vWA TPOX D18S51 AMEL D5S818 FGA Profil genetic Persoana 1 Al. 1 Al. 2 12 14 29 30 8 11 10 11 18 18 7 7 8 9 11 13 17 23 14 15 16 17 8 9 13 16 X Y 11 12 22 26 Profil genetic Persoana 2 Al. 1 Al. 2 13 15 30 32.2 10 11 10 13 14 15 8 9.3 11 11 11 12 19 23 14 15 15 18 8 8 15 19 X X 11 11 23 24 Profil genetic Persoana 3 Al. 1 Al. 2 13 14 29 30 12 13 10 14 15 17 9 9.3 8 12 11 12 20 25 16 17 17 18 8 11 13 17 X X 11 13 20 21 Profil genetic suspect Al. 1 Al. 2 12 15 30 32.2 10 11 11 11 15 18 7 9.3 8 12 12 13 19 20 14 14 15 16 8 11 12 14 X Y 12 12 20 25

Frecvena de regsire a profilului genetic al suspectului, n populaia european este de 3,82x10-21, calculat pentru rezultatele obinute cu kitul Multiplex ABI IDENTIFILER. Probabilitatea de regsire a acestui profil genetic n populaia european este de 1 la un numr de 2,62x1020 persoane, calculat pentru rezultatele obinute cu kitul Multiplex ABI IDENTIFILER. Vom analiza i efectua calculele biostatistice aferente, separat pentru cele trei amestecuri de profile genetice. a. n amestecul de profile obinut din ADN extras din urma a prelevat de pe mner sunt regsite la locii corespunztori profilele genetice ale probelor de referin recoltate de la persoana 1 i suspect Tabelul 2.

241

Tabelul 3. Amestecul de profile genetice obinut din ADN extras din urma a prelevat de pe mner i profilele de referin ale persoanei 1 i suspect. Categoria Marker D8S1179 D21S11 D7S820 CSF1PO D3S1358 TH01 D13S317 D16S539 D2S1338 D19S433 vWA TPOX D18S51 AMEL D5S818 FGA Profil genetic Persoana 1 Al. 1 Al. 2 12 14 29 30 8 11 10 11 18 18 7 7 8 9 11 13 17 23 14 15 16 17 8 9 13 16 X Y 11 12 22 26 Profil genetic suspect Al. 1 Al. 2 12 15 30 32.2 10 11 11 11 15 18 7 9.3 8 12 12 13 19 20 14 14 15 16 8 11 12 14 X Y 12 12 20 25 Amestecul rezultat 12 29 8 10 15 7 8 11 17 14 15 8 12 X 11 20 14 30 10 11 18 9.3 9 12 19 15 16 9 13 Y 12 22 15 32.2 11

12 13 20 17 11 14

23

16

25

26

n urma calculelor de biostatistic aferente i al raportului dintre prezumia i. i ii. se poate concluziona c suspectul are de 1,7x1016 mai multe anse s fie prezent n amestecul obinut dect o person necunoscut din populaie. Altfel spus, o alt persoan necunoscut care n combinaie cu profilul genetic al persoanei 1 s rezulte acelai amestec, poate fi regsit la un numr mai mare de 1,7 x1016 persoane. Pentru rezultatele obiunute cu kit-ul SGM+ (10 loci utilizai pentru calcule), grupul populaional este 3,8x1012. b. n amestecul de profile obinut din ADN extras din urma b prelevat de pe mner sunt regsite la locii corespunztori, profilele genetice ale probelor de referin recoltate de la persoanele 1, 2 i suspect Tabelul 4. Tabelul 4. Amestecul de profile genetice obinut din ADN extras din urma b prelevat de pe mner i profilele de referin ale persoanei 1, 2 i suspect. Categoria Marker D8S1179 D21S11 D7S820 CSF1PO D3S1358 TH01 D13S317 D16S539 D2S1338 D19S433 vWA TPOX D18S51 AMEL D5S818 FGA Profil genetic Persoana 1 Al. 1 12 29 8 10 18 7 8 11 17 14 16 8 13 X 11 22 Al. 2 14 30 11 11 18 7 9 13 23 15 17 9 16 Y 12 26 Profil genetic Persoana 2 Al. 1 13 30 10 10 14 8 11 11 19 14 15 8 15 X 11 23 Al. 2 15 32.2 11 13 15 9.3 11 12 23 15 18 8 19 X 11 24 Profil genetic suspect Al. Al. 1 2 12 15 30 32.2 10 11 11 11 15 18 7 9.3 8 12 12 13 19 20 14 14 15 16 8 11 12 14 X Y 12 12 20 25 Amestecul de profile rezultat Al. 1 12 29 8 10 14 7 8 11 17 14 15 8 12 X 11 20 Al. 2 13 30 10 11 15 8 9 12 19 15 16 9 13 Y 12 22 Al. 3 14 32.2 11 13 18 9.3 11 13 20 17 11 14 23 Al. 4 15 Al. 5 Al. 6

12 23 18 15 24 16 25 19 26

242

Rezultatele obinute n urma calculelor biostatistice afirm c ansele suspectului sunt de 5,98x1010 mai mari dect ale altei persoane necunoscute din populaie. Altfel spus, o alt persoan necunoscut care n combinaie cu profilele genetice ale persoanelor 1 i 2 s rezulte acelai amestec, poate fi regsit la un numr mai mare de 5,98x1010 persoane. Pentru rezultatele obiunute cu kit-ul SGM+ (10 loci utilizai pentru calcule), grupul populaional este 4,34x108. c. n amestecul de profile obinut din ADN extras din urma c prelevat de pe mner sunt regsite la locii corespunztori profilele genetice ale probelor de referin recoltate de la persoanele 1, 2, 3 i suspect Tabelul 5. Tabelul 5. Amestecul de profile genetice obinut din ADN extras din urma c prelevat de pe mner i profilele de referin ale persoanei 1, 2, 3 i suspect. Profil genetic Persoana 1 Al. 1 12 29 8 10 18 7 8 11 17 14 16 8 13 X 11 22 12 26 Al. 2 14 30 11 11 18 7 9 13 23 15 17 9 16 Y Profil genetic Persoana 2 Al. 1 13 30 10 10 14 8 11 11 19 14 15 8 15 X 11 23 Al. 2 15 32.2 11 13 15 9.3 11 12 23 15 18 8 19 X 11 24 Profil genetic Persoana 3 Al. 1 13 29 12 10 15 9 8 11 20 16 17 8 13 X 11 20 13 21 Al. 2 14 30 13 14 17 9.3 12 12 25 17 18 11 17 X Profil genetic suspect Al. 1 12 30 10 11 15 7 8 12 19 14 15 8 12 X 12 20 Al. 2 15 32.2 11 11 18 9.3 12 13 20 14 16 11 14 Y 12 25 Al. 1 12 29 8 10 14 7 8 11 17 14 15 8 12 X 11 20

Categoria

Amestecul de profile rezultat Al. 2 13 30 10 11 15 8 9 12 19 15 16 9 13 Y 12 21 Al. 6 Al. 7

Marker D8S1179 D21S11 D7S820 CSF1PO D3S1358 TH01 D13S317 D16S539 D2S1338 D19S433 vWA TPOX D18S51 AMEL D5S818 FGA

Al. 3 14 32.2 11 13 17 9 11 13 20 16 17 11 14 13 22

Al. 4 15 12 14 18 9.3 12 23 17 18 15 23

Al.5

13

25

16 24

17 25

19 26

Efectuarea calculelor biostatistice aferente demonstreaz c suspectul are de 10,1x106 mai multe anse s fie contribuitor la forarea amestecului dect o alt persoan necunoscut din populaie. Altfel spus, o alt persoan necunoscut care n combinaie cu profilele genetice ale persoanelor 1, 2 i 3 s rezulte acelai amestec, poate fi ntlnit la un numr mai mare de 10,1x106 persoane. Pentru rezultatele obiunute cu kit-ul SGM+ (10 loci utilizai pentru calcule), grupul populaional este 6,33x105. Calculele comparative pentru situaiile utilizrii kit-ului Identifiler sunt prezentate n Fig. 28. Se poate observa o scdere semnificativ a grupurilor populaionale n care profilul suspectului este unic. Utilizarea kit-ului SGM+, care conine un numr de 10 loci, duce deasemeni, la o scdere a grupurilor populaionale Fig. 29. Dac se vor lua n calcul, din anumite considerente de siguran, doar 8 loci atunci grupul populaional va fi de 3311 persoane. n condiiile utilizrii n calcule doar a 5 loci, grupul populaional va fi de 181 persoane, iar pentru 3 loci 44 persoane Fig 30.
Fig. 28. Calculele comparative n cazul utilizrii kitului Identifiler pentru amestecuri deprofilegeneticeprovenitedelaminim2,3irespectiv4persoane.

243

Fig. 29. Calculele comparative n cazul utilizrii kitului SGM+ pentru amestecuri de profile genetice provenite de laminim 2, 3i respectiv4persoane.

Fig. 30. Calculele comparative n cazul utilizrii unui numr de 8, 5 i respectiv 3 markeri genetici pentru un amestec de profile genetice provenitedelaminim4persoane.

Dac mprim populaia studiat n gupuri de cte P, unde P este grupul populaional n care suspectul este unic, vom obine numrul de alte profile genetice, respectiv persoane, care mai pot fi regsite astfel nct n combinaie cu cel al persoanelor 1, 2 sau 3, pe care le-am considerat incluse, deoarece utilizau frecvent acel mner, se va obine acelai amestec pentru locii analizai. 7. CONCLUZII Genetica judiciar poate furniza informaii individuale despre evenimentele petrecute n scena infraciunilor sau s suplimenteze alte metode de identificare criminalistic. Corelarea probelor biologice prezente n scena crimei cu identificarea, selectarea i factorul probant urmrit, este primul aspect de care trebuie inut seama n procesul de analiz genetic judiciar. Pentru a intra n scena infraciunii i n mod expres pentru a efectua cercetarea n vederea identificrii i recoltrii probelor biologice, este obligatoriu purtarea mijloacelor de protecie anticontaminare. n prezent, este posibil genotiparea tuturor tipurilor de urme sau microurme biologice care conin celule nucleate, dac acestea nu sunt n totalitate distruse chimic sau bacterian. Puterea de discriminare a persoanelor n funcie de profilul genetic al acestora este cuprins ntre 1/1012 23 1/10 , n funcie de numrul de loci utilizat pentru genotipare. Aceasta semnific faptul c la un numr de 1012 1023 persoane, un profil este unic. O mrire a numrului de profile genetice aflate ntr-un amestec, duce la o cretere a valorii LR i implicit o micorare a grupului de persoane n care care profilul suspectului este unic. Peste acest numr de persoane, n grupuri de cte P a populaiei interogate, vor fi regsite alte persoane a cror profile genetice n combinaie cu al persoanelor cunoscute incluse, se va obine acelai amestec de profile genetice. Au fost dezvoltate metode care ofer posibilitatea de genotipare a microurmelor biologice remanente n diverse tipuri de suporturi. Un exemplu este cel al hrtiei pe care au fost efectuate nscrisuri cu vechime de pn la aproape 26 ani. Aceste rezultate relev faptul c analizele genetice pot sprijini n anumite circumstane determinrile grafoscopice, fie la identificarea falsurilor, fie al persoanei creatoare.

244

Bibliografie 1. Interpreting DNA evidence. Statistical Genetics for Forensic Scientists, Ian W. Evett and Bruce S. Weir 2. Butler, J. M., Schoske, R., Vallone, P. M., Redman, J. W., and Kline, M. C.(2003). Allele frequencies for 15 autosomal STR loci on U.S. Caucasian, 3. Evett, I., Gill, P., and Lambert, J. (1998). Taking account of peak areas when interpreting mixed DNA profiles. Journal of Forensic Sciences, 43, 629. 4. Mortera, J., Dawid, A. P., and Lauritzen, S. L. (2003). Probabilistic expert systems for DNA mixture profiling. Theoretical Population Biology, 63, 191205. 5. Perlin, M. and Szabady, B. (2001). Linear mixture analysis: a mathematical approach to resolving mixed DNA samples. Journal of Forensic Sciences, 46, 13728. 6. Wang, T., Xue, N., and Wickenheiser, R. (2002). Least square deconvolution(LSD): A new way of resolving STR/DNA mixture samples. Presentation at the 13th International Symposium on Human Identification, October 710, 2002, Phoenix, AZ. 7. Mixture STR/DNA Interpretation Using the Least-Square-Deconvolution (LSD) Method by Tsewei Wang, Ph.D. Associate Professor Laboratory of Information Technology Department of Chemical Engineering The University of Tennessee, Knoxville, TN 8. MANUALUL CALITATII LABORATOARELOR, Cod: MCL IC-01, Editia 1, revizia 0. 9. ISO/IEC 17025/2005 General requirements for the competence of testing and calibration laboratories 10. SR EN-ISO 9001/2001 - Sisteme de management al calitatii. Cerinte. 11. Standardele de asigurare a calitii n laboratoarele de analize ADN recomandate de EDNAP Departamentul de Standardizare. 12. Genetic Judiciar, 2005, Ed. ETEA, Romic Potorac, Magdalena Potorac 13. Hofreiter M, Serre D, Poinar HN, Kuch M, Pbo S., Ancient DNA.Nat Rev Genet 2001;2:353-9. 14. Antonio Alonso, Pablo Martn, Cristina Albarrn, Pilar Garca,Dragan Primorac, Oscar Garca, Lourdes Fernndez de Simn, Julia Garca-Hirschfeld, Manuel Sancho, Jose Fernndez-Piqueras, Specific Quantification of Human Genomes from Low Copy Number DNA Samples in Forensic and Ancient DNA Studies. Croatian Medical Journal, 44 (3): 273 280 (2003). 15. Gill P., Whitaker J., Flaxman C., Brown N., Buckleton J. An investigation of the rigor of interpretation rules for STRs derived from less than 100 pg of DNA.Forensic Sci Int 2000;112:17-40. 16. Budowle, B. Et al, Low copy number consideration and caution. In Twelfth International Symposium on Human Identification, 2001; Biloxi, Mossouri. 17. Gill, P. et al, Application of low copy number DNA profiling, Croat. Med. J, 2001; 42; 229 - 232 18. Buckleton J., Triggs C.M., Walsh S.J., Forensic DNA Evidence interpretation, CRC Press 2005 19. Rutty, G.N., Hopwood, A., Tucker, V, The effectiveness of protective clothing in the reduction of potential DNA contamination of the scene of crime, Int. J.Legal. Med.(2003), 117: 170 174 20. Lowe, A., Murray, C., Whitaker, J., Tully, G., Gill, P., Forecsic Sci. Int. (2002), The propensity of individuals to deposit DNA and secondary transfer of low level DNA from individuals to inert surfaces. 21. Cotton, E.A., Allsop, R., Guest, J., Frazier, R., Koumi, P., Callow, I.P., Seager, A., Sparkes, R. (2000), Validation of the AmpFlSTR SGMplus system for use in forensic casework. Forensic Sci. Int. 112: 151 161 22. Gill, P., Whitaker, J.P., Flaxman, c., Brown, N., Buckleton, J. (2000) An investigation of the rigor of interpretation rules for STRs derived from less than 100 pg of DNA. Forensic Sci. Int. 112: 17 40 23. Gill, P., comunicare oral n cadrul grupului de lucru ENFSI (European Network of Forensic Science Institute), aprilie 2007, Polonia

245