Abstraksi: Mengingat kurang diakui metode klinis prenatal untuk diagnosis awal kelahiran prematur,iugr, preeklampsia dan diabetes

mellitus gestasional, dan metode diagnosis spesifik untuk kelainan kromosom (misalnya trisomi 21) dan malformasi janin, pekerjaan ini mencari tanda metabolisme tertentu di urin ibu trimester kedua, menggunakan 1H Resonansi Magnetik Nuklir (1H NMR) metabolomik. Beberapa variabel penting untuk proyeksi (VIP) - dan b-koefisien berbasis metode seleksi variabel yang diuji, baik secara individu maupun melalui persimpangan mereka, dan data yang dihasilkan di set dan dianalisis secara parsial kuadrat-analisis diskriminan (PLSDA) dan diserahkan ke Monte Carlo lintas validasi (MCCV) dan tes permutasi untuk mengevaluasi model yang daya prediksi. Data NMR subset diproduksi secara signifikan meningkatkan model PLS-DA untuk semua kondisi kecuali pecah pra-membran prematur. tanda metabolisme Spesifik kemih yang unveiled (membuka) malformasi sistem saraf pusat, trisomi 21, kelahiran prematur,gestational diabetes, pembatasan pertumbuhan intrauterin dan preeclampsia, dan interpretasi biokimia yang diusulkan. karya ini menunjukkan, untuk pertama kalinya, nilai profil urin ibu sebagai sarana pelengkap diagnostik prenatal dan awal prediksi beberapa hasil kehamilan yang buruk. PENDAHULUAN Perawatan prenatal mencakup sejumlah prosedur klinis untuk mendiaga kelaianan janin dan ibu Terlepas dari luar biasa kemajuan dalam pembukaan biomarker diagnostik baru, namun masih kurangnya ideal reliabilitas sehubungan dengan diagnosis yang akurat dari janin malformasi (FM) (mempengaruhi 3-4% kelahiran hidup) dan intrauterine pembatasan pertumbuhan (IUGR) (mempengaruhi 7-15% kehamilan), 2,3 sedangkan konfirmasi kelainan kromosom (CD) (0,5% kelahiran hidup) 1 masih memerlukan prosedur invasif (amniosentesis, chorion biopsi, kordosentesis). Juga, penting gangguan prenatal, yang biasanya berkembang selama akhir kedua dan ketiga trimester, kekurangan metode prediksi yang memadai. ini terdiri kelahiran prematur (PTD) (9,6% kelahiran hidup), preeklampsia (PE) (5-8% kehamilan) dan diabetes mellitus gestasional (GDM) (1-14% kehamilan). 0,4-6 urin ibu muncul sebagai berharga matriks biologis di mana untuk mencari indikator ibu dan status kesehatan janin, karena noninvasiveness nya. Penggunaan urin ibu dalam praktek klinis prenatal sejauh ini telah terbatas, termasuk pengukuran ekskresi protein urin (proteinuria) untuk membantu diagnosis PE, atau penanda spesifik kemih infeksi saluran dan ibu ginjal function. metabonomics (atau metabolomik), metodologi yang sangat berharga untuk mengidentifikasi perubahan metabolit dalam biofluids sehubungan dengan patofisiologi atau gangguan eksternal, telah menunjukkan dampak yang kuat FM pada urin ibu dan cairan ketuban (AF) komposisi, sugestif ditingkatkan glukoneogenesis dan siklus Krebs permintaan, di bawah janin hypoxia.8, 9 perubahan subtil dalam urin metabolome telah disarankan untuk wanita membawa janin dengan CD dan wanita kemudian menderita GDM atau PTD.8, 9 Sebuah studi baru pada kohort besar (n = 823 total) menunjukkan bahwa GDM pasca-diagnostik berhubungan dengan peningkatan kemih sitrat ekskresi, meskipun ini tidak diakui sebagai handal.

Sebuah penggunaan yang lebih luas urin dalam diagnosis penyakit perlu mengatasi fakta bahwa kekayaan informasi metabolik yang dicirikan oleh biofluid membuat matriks yang sangat menantang dengan yang untuk bekerja. Penyederhanaan dikendalikan dari data asli ditetapkan oleh menghapus variabel yang tidak relevan, tidak dapat diandalkan, atau variabel pengngaangu. metode seleksi dapat meningkatkan kinerja dalam multivariat analisis, mengurangi kerumitan model dan membantu biokimia interpretation.11 Memang, beberapa studi metabonomic (pada urin,plasma / serum, darah jaringan hati, bahan makanan) telah memperoleh manfaat dari metode seleksi variabel yang berbeda, sebagian besar didasarkan pada variabel penting bagi (VIP) nilai proyeksi, 12,13 regresi koefisien, 12 tidak informatif variabel penghapusan (SB), 13 genetik algoritma (GA) ,14-16 Interval parsial kuadrat-diskriminan. analisis (i-PLS), 15 hutan acak (RF), 16,17 dan dukungan vektor Mesin rekursif penghapusan fitur (SVM-RFE) .16 Sebuah varian dari strategi ini bergantung pada pertimbangkan subset dari variabel umum yg dipilih dengan metode seleksi yang berbeda (yaitu, yang dihasilkan dari mereka persimpangan), sehingga informasi yang relevan secara konsisten mungkin diambil dan dianalisis sebagai profil potensi kondisi bawah study.12 Prinsip ini telah membantu studi nonalkohol penyakit hati berlemak, 12 di mana variabel yang dipilih melalui kedua koefisien regresi dan nilai-nilai VIP dianggap sebagai potensi biomarker. Kombinasi variabel yang dipilih adalah konsep alternatif, yang telah diterapkan untuk penyakit hati (Variabel yang dipilih oleh SVM-RFE, GA dan RF), 16 dan tipe 2 diabetes mellitus (variabel yang dipilih berdasarkan pemuatan korelasi p [corr] dan RF) .17 Dalam tulisan ini, kami melaporkan studi pertama yang menunjukkan bahwa urin ibu trimester kedua membawa tanda metabolisme didiagnosis FM (dan secara khusus dari sistem saraf pusat malformasi) dan CD (dan khusus untuk trisomi 21), serta sebagai tanda tangan prediktif untuk nanti-berkembang PTD, GDM dan, putatively, PE dan IUGR, sementara menunjukkan tidak ada indikasi awal PROM (8-10% dari pregnancies18). Hasil yang dicapai oleh mempertimbangkan 1HNMR data set yang dihasilkan dari persimpangan tiga metode seleksi variabel, berdasarkan VIP> 1 dan rendah VIP dan b-koefisien kesalahan standar, dengan demikian, menghasilkan PLS-DA model dengan daya prediksi ditingkatkan dan tanda NMR untuk setiap kondisi. Pertimbangan bersamaan beberapa gangguan kehamilan memungkinkan isu penting tanda tangan kekhususan untuk ditangani. Untuk pengetahuan kita, ini adalah pertama Studi metabolomic skala besar urin ibu, setelah laporan eksplorasi sebelumnya, 9 yang menunjukkan menarik kemungkinan diagnostik komplementer dan prediksi awal hasil kehamilan yang buruk. BAGIAN EKSPERIMENTAL Sampel 1. Trimester kedua (14-26 minggu kehamilan, gw) sampel urin dikumpulkan untuk 1.361 perempuan, sekitar 300 sampel ditemukan memenuhi syarat untuk penelitian ini (Tabel Pendukung Informasi S1 menunjukkan angka pastinya), 2. meninggalkan kasus dengan lengkap catatan medis dan kondisi medis seperti depresi, Asupan obat-obatan, gangguan tiroid, medis tertentu sejarah, dll, serta mata pelajaran kemudian berkonsultasi di rumah sakit lain pusat. 3. Sampel dikumpulkan berdasarkan persetujuan etis dari Rumah Sakit Pusat Coimbra (refs.18/04 dan 29/09) dan informed consent diperoleh dari masing-masing subjek.

4.

Karena pembatasan medis dalam mengendalikan pola makan wanita hamil, nonfasting sampel urin dikumpulkan pada pagi hari periode (spesimen acak tunggal). 5. Informasi klinis tentang setiap kehamilan diperoleh dari kandungan dan neonatal catatan medis, serta dari kuesioner individu selesai pada saat pengumpulan. Pada akhir kehamilan, Sampel dikelompokkan menjadi: (a) kontrol, jangka sehat kehamilan, (b) gangguan didiagnosis, FM didiagnosa oleh USG morfologi setelah 12 gw, yang terdiri dari pusat sistem saraf (SSP), perut, urogenital, jantung, kaki dan poli-malformasi (Pendukung Tabel Informasi S2), dan CD didiagnosis ca. 2 minggu setelah amniosentesis, yang terdiri dari trisomi 18 dan 21 (T18 dan T21), sindrom Kleinfelter, mosaicisms, inversi dan translokasi kromosom (Pendukung InformationTable S2), (c) tidak terdiagnosis kemudian-berkembang gangguan kelompok berikut: pra-PTD, pengiriman sebelum 37 gw, GDM pra-diagnostik, diagnosis GDM pada 19 - 38 gw, pra-PE, pengembangan PE pada 31-37 gw (darah Tekanan 140/90 mmHg setelah 20 minggu kehamilan dan proteinuria 0.3g / L dalam 24 jam urin), pra-IUGR, diagnosis IUGR pada 22-39 g.w. (Pertumbuhan janin di bawah persentil 5%) dan pra-PROM, ketuban pecah dini, setelah 37 gw. LihatPendukung Informasi, Tabel S1 untuk nomor sampel, ibu dan usia kehamilan, prakehamilan indeks massa tubuh ibu (BMI) dan waktu antara pengumpulan dan diagnosis sampel (untuk gangguan prediagnosa). Sampel urin (50 ml) disimpan pada suhu -20 C hingga 2 jam dan kemudian ditransfer ke -80 C. Sebelum analisis, sampel dicairkan dan 800 uL masing-masing sampel disentrifugasi (4500g, 5 menit). Kemudian, 60 uL 1,5 M KH2PO4/D2O penyangga, pH 7, 0,1% Na + / 3-trimetilsilil-propionat (TSP) ditambahkan ke 540 uL supernatan, diikuti oleh pH penyesuaian sampai 7 0,02 dengan KOD (4 M) atau DCl (4 M). Campuran disentrifugasi lagi (4500g, 5 menit) dan 550 uL dipindahkan ke tabung NMR 5 mm. Spektroskopi NMR Spektrum NMR direkam pada Bruker Avance DRX 500 spektrometer pada 300 K. spektrum 1D Standar diperoleh, dengan menggunakan a noesy 1D urutan pulsa dengan tm 100 ms, fixed 3 mikrodetik t1 penundaan, dan penekanan air selama relaksasi penundaan dan waktu pencampuran. total 128 transien diperoleh menjadi data yang kompleks 64k poin, dengan 10080,65 Hz lebar spektral, 4 s relaksasi penundaan dan 3,25 s waktu akuisisi. Setiap induksi pembusukan gratis ini zerofilled untuk poin 64k, dikalikan dengan 0,3 Hz eksponensial linebroadening berfungsi sebelum Fourier transform. Spektrum yang bertahap manual dan baseline dikoreksi dan kimia pergeseran direferensikan internal untuk TSP pada = 0,0 ppm. Puncak tugas dilakukan dengan dasar sastra, 2D NMR percobaan (Total correlation spektroskopi, TOCSY; tunggal heteronuklir koherensi kuantum, HSQC, dan J-diselesaikan), konsultasi database spektral (Bruker Biorefcode dan metabolome manusia Database, HMDB, 19 database), spektrum senyawa standar, spiking eksperimen dan spektroskopi korelasi statistik jumlah (STOCSY) .20 Analisis Data Analisis multivariat dan Validasi Model. Spectra yang selaras dengan menggunakan rekursif puncak segmen-bijaksana untuk alignment21 meminimalkan variasi pergeseran kimia, dinormalisasi dengan probabilistik quotient normalisasi (PQN) 22 (MATLAB 7.12.0, The Math- Works, Inc) dan ditingkatkan oleh satuan varians (UV) (Simca-P 11,5). Analisis komponen utama (PCA) dan parsial kuadrat-

analisis diskriminan (PLS-DA) yang diterapkan untuk spektrum, dengan pengecualian air (4,60-5,05 ppm) dan urea (5,50-6,45 ppm) daerah. Validasi Model PLS-DA dilakukan oleh Monte Carlo lintas validasi (MCCV) (7 blok) dengan menggunakan 500 berjalan, dengan pemulihan nilai Q2 dan matriks kebingungan benar dan kelas permuted. Tarif Klasifikasi (CR), spesifisitas (spec) dan sensitivitas (sens) dihitung dan model prediktif daya selanjutnya dinilai menggunakan penerima operasi karakteristik (ROC) peta, fungsi dari positif sejati Tingkat (TPR atau sensitivitas) dan tingkat positif palsu (FPR atau 1-spesifisitas). Model PLS-DA dianggap kuat ketika minimal tumpang tindih distribusi benar dan permuted Q2 adalah obtained.23, 24 Untuk model ini, puncak yang relevan diintegrasikan dari spektrum asli (Amix 3.9.5, BrukerBioSpin, Rheinstetten, Jerman) dan PQN dinormalisasi. Semua integral dibandingkan melalui uji Wilcoxon (Relevansi statistik dipertimbangkan untuk p <0,05) dan ukuran efek dihitung mengikuti definisi yang diberikan dalam sebelumnya work.25 Variabel Metodologi Seleksi. Empat variabel pilihan metode yang digunakan, didasarkan pada pemilihan variabel (spektral titik data) dengan VIP> 1,12,13 variabel yang terkait dengan rendah kesalahan standar dalam kaitannya dengan VIP (VIPcvSE) dan b-koefisien (BcvSE) 11 (diberikan, masing-masing, oleh VIP / VIPcvSE> 1 dan | b / bcvSE |> 1) dan, akhirnya, variabel yang dipilih melalui persimpangan semua tiga metode sebelumnya, yaitu, bersamaan dengan tinggi VIP, VIPcvSE rendah, dan bcvSE rendah. Setelah penerapan masing-masing Metode pemilihan variabel, PLS-DA diulang dan dikirim ulang untuk MCCV. Semua parameter kualitas PLS-DA tercantum dalam Informasi Pendukung, Tabel S3 untuk model yang diperoleh dengan (A) tidak ada variabel seleksi dan variabel seleksi oleh (b) VIP> 1, (C) VIP / VIPcvSE> 1, (d) | b / bcvSE |> 1 dan (e) perpotongan metode b, c, dan d. HASIL 1H NMR Spektrum Trimester Kedua Urine Ibu dan Hasil Seleksi Variabel Gambar 1a menunjukkan rata-rata 1H NMR urin kontrol dan subyek dengan janin FM, kondisi yang sebelumnya dilaporkan untuk mendorong perubahan signifikan dalam profil metabolik AF, 8,26 plasma ibu dan urine.8, 9 Beberapa perubahan memang dilihat oleh pemeriksaan langsung dari spektrum dan ekspansi mereka (anak panah di Gambar 1a, b), namun, model yang sesuai PLS-DA (Gambar 2a) tidak memiliki kekuatan prediktif, seperti yang ditunjukkan oleh Q2 besar distribusi tumpang tindih dan ROC hasil yang buruk untuk benar dan kelas permuted (Gambar 2c, e). Penerapan variabel. Metode persimpangan seleksi (e) (yaitu, persimpangan (b) VIP> 1, (c) VIP / VIPcvSE> 1 dan (d) | b / bcvSE |> 1) dikurangi jumlah variabel yang lebih 5700 (dibandingkan dengan awal ca. 25K) (lihat Informasi Pendukung, Tabel S3), dan PLSDA kemudian diberikan model dengan pengurangan yang signifikan dalam sampel skor dispersi, meningkatkan daya prediksi (Q2 0.444 dan

bawah tumpang tindih dalam distribusi Q2 model benar dan permuted) dan CR tinggi, sensitivitas dan spesifisitas (masing-masing, 84%, 74%, dan 87%, dibandingkan dengan 69%, 49%, dan 75%, lihat Pendukung Informasi, Tabel S3) (Gambar 2b, d, f). Subset dari spektral variabel yang dipilih diindikasikan untuk 0,5-4,5 ppm wilayah, oleh titiktitik abu-abu di bawah spektrum bawah (Gambar 1b), yang insets menggambarkan bahwa variabel yang dipilih dapat jatuh sinyal rendah daerah intensitas, dikonfirmasi untuk selalu menanggung resonansi terlihat pada tingkat yang tepat dari ekspansi vertikal. Hal ini menunjukkan pentingnya intensitas rendah (sering unassignable). Sinyal NMR dalam menggabungkan sidik jari potensi gangguan. Mengingat semua kelompok mata pelajaran dalam pekerjaan ini, performa terbaik model PLS-DA secara konsisten diperoleh dengan menggunakan metode (e) (lihat Informasi Pendukung, Tabel S3) dan model ini dianggap untuk lebih lanjut analisis metabolit, seperti yang dijelaskan di bawah ini. Pra-PROM Kondisi adalah pengecualian yang jelas karena semua metode menghasilkan model prediksi non (lihat Informasi Pendukung, Tabel S3), dengan demikian, menunjukkan bahwa kelompok mata pelajaran tidak dapat dibedakan dari kontrol dalam hal kemih trimester kedua mereka metabolome. Trimester Kedua Kemih Signatures dari Didiagnosis FM dan Kasus CD Kelompok variabel yang dipilih mendukung model PLS-DA di Gambar 2b memungkinkan tanda NMR untuk diidentifikasi FMcases, terdiri dari 17 senyawa yang ditugaskan, 7 ditugaskan sistem berputar (Ui) dan beberapa daerah spektral tumpang tindih ditugaskan, yang variasi yang ditandai (arah, efek ukuran dan signifikansi statistik) (Tabel 1). Metabolit ditandai dengan catatan kaki b pada Tabel 1 dapat berasal dari diet, baik secara langsung, misalnya, xilosa, 3-methylhistidine (3-MH), atau melalui interaksi mereka dengan mikroflora usus, misalnya, 4-hydroxyphenylacetate (4-HPA), scyllo-inositol. Secara keseluruhan, 18 sinyal ditemukan varywith statistik relevansi (p <0,05), namun ketika hanya itu set integral adalah dipertimbangkan untuk PLS-DA, ada pemisahan kelompok handal dicapai. dengan demikian, menunjukkan bahwa resolusi spektral penuh dan detail dari NMR (termasuk unassigned sinyal) yang sangat penting bagi efekti signature penyakit yang harus dicapai. Kemungkinan menentukan FM Jenis melalui profil urin dipertimbangkan dan, memang, SSP malformasi dibedakan dari sisa FM jenis (Gambar 3a), dengan daya prediksi tinggi (Q2 0,705) dan kinerja (dengan 87% CR, sensitivitas 83%, spesifisitas 90%, lihat Pendukung Informasi, Tabel S3). Ini mengungkapkan potensi urinemetabolomics untuk membantu dan melengkapi tekad klinis ofFMtype. Perubahan spesifik ApparentCNS (catatan kaki c pada Tabel 1, kanan) yang dicatat selama 13 metabolit dan sejumlah ditugaskan resonansi (perubahan dianggap spesifik termasuk terbalik variasi seperti dicatat untuk Ala: Ala di vs kontrol FM dan Ala di SSP vs lainnya Menlu). Menggunakan representasi melingkar baru nilai VIP untuk variabel spektral yang dipilih (bernama sini sebagai Representasi VIP-roda) (Gambar 5a), FM umum Profil metabolit (merah) dilapisi dengan sampel SSP (Oranye), dengan demikian, menggambarkan visual fitur khusus dari \yang terakhir. Untuk CD, perbedaan kasus CD dari kontrol dicapai dengan dasar 25 senyawa, 4 diketahui dan daftar ditugaskan daerah spektral (Tabel 2, kiri), di mana 7 fitur yang statistik yang relevan secara individual. Kinerja Model PLS-DA meningkat menjadi 94% CR, sensitivitas 92%, sensitivitas 95%, bila

mencoba untuk membedakan T21 kasus dari CD lain (Gambar 3b, Tabel 2), dengan demikian, mengungkapkan keandalan yang lebih tinggi dibandingkan dengan yang ada metode klinis untuk T21 diagnosis pada trimester kedua (darah biomarker serum, tingkat klasifikasi 55-75%), dan dapat dibandingkan kinerja dengan metode diagnosis trimester pertama (serum darah biomarker seiring dengan USG; tingkat klasifikasi 60-96%) .27 T21 kasus tampaknya memegang tanda tangan NMR yang berbeda dari CD lain, khususnya mengenai variasi 9 senyawa dan beberapa resonansi ditugaskan (catatan kaki c di Tabel 2 dan Gambar 5b). Hasil kehamilan Pencarian untuk perubahan metabolit prediksi awal untuk PTD, GDM, IUGR dan PE merupakan tantangan klinis tertentu relevansi. PLS-DA dan hasil MCCV yang dapat diandalkan untuk semua empat kelompok mata pelajaran (Gambar 4, Tabel 2), meskipun kohort yang lebih besar diinginkan untuk pra-IUGR dan pra-PE dalam rangka untuk memastikan representasi yang memadai dari setiap kondisi. Tabel 3 menunjukkan tanda tangan NMR deskriptif masing-masing kelompok, masingmasing set resonansi / wilayah yang terdiri dari beberapa rupanya spesifik variasi (catatan kaki c dalam Tabel 3), dibandingkan dengan sisa kondisi pra-diagnostik, sedangkan perubahan tertentu dalam 4 - Asam deoxyerythronic (4-DEA) () dan kreatinin () tampaknya menjadi kejadian biasa. Superior kinerja PLS-DA menggunakan spektrum NMR variabel yang dipilih penuh dikonfirmasi untuk semua kondisi, dengan demikian, menunjukkan pentingnya deskripsi sidik jari multivariat daripada satu semata-mata didasarkan pada kelompok terbatas metabolit signifikan secara statisti Temuan sidik jari prediagnosa prediktif untuk PEMBAHASAN Fitur ditugaskan dari setiap tanda tangan NMR (Tabel 1-3) dapat akan putatively ditafsirkan dalam hal gangguan metabolisme menyertai setiap gangguan, meskipun pengujian lebih lanjut dan konfirmasi diperlukan, misalnya dengan analisis jalur tertentu metode. Mengenai tanda tangan FM umum (Tabel 1, kiri), perubahan yang konsisten dengan hipotesis sebelumnya canggih, yaitu glukosa yang menurun di AF26 diperkirakan akan memi`cu glukoneogenesis dan produksi energi melalui oksidasi lipid dan keton tubuh synthesis.8, 9,26 Ini sesuai dengan tinggi ekskresi dari ketiga badan (aseton, asetoasetat dan 3-hidroksibutirat, 3-HBA) diamati di sini. Yang dihasilkan asetil-CoA feed siklus Krebs dalam jaringan ekstrahepatik, meningkatkan aktivitas seperti yang disarankan oleh ekskresi cis-aconitate tinggi. Peningkatan diekskresikan asetil-karnitin menunjukkan bahwa kelebihan asetil-CoA adalah terbentuk, mengunci karnitin dalam bentuk asetat nya. Asam amino perubahan mungkin mencerminkan penggunaan selektif mereka sebagai glukoneogenesis substrat, mungkin istimewa untuk Ala, Lys, dan Tyr (kurang diekskresikan), dibandingkan dengan Ile dan THR. Perubahan lain termasuk ekskresi tinggi dari Nmetil-nicotinamide (NMND) (nukleotida metabolisme), ekskresi rendah suksinat (mungkin dialihkan ke janin, dalam perjanjian dengan peningkatan tingkat di AF26), dan ekskresi laktosa lebih tinggi, terlihat pada hamil yang sehat women10, 28 tetapi tidak dalam kaitannya dengan gangguan kehamilan.

SSP malformasi tampak ditandai oleh perubahan acetyl-carnitine/carnitine ini keseimbangan, mencerminkan agak lebih tinggi tingkat sirkulasi asetil-CoA dan underuse karnitin, mungkin mencerminkan relatif lebih rendah tingkat oksidasi lipid dibandingkan dengan jenis FM lainnya. Itu penurunan asetat menunjukkan kemungkinan penggunaan sebagai substrat untuk asetilCoA sintesis, memberikan kontribusi untuk meningkatkan siklus Krebs kegiatan (catatan peningkatan ekskresi intermediet 2-ketoglutarat (2-KG), sitrat dan suksinat). Kasus SSP juga menunjukkan gangguan tertentu dalam asam amino rantai cabang (BCCA) metabolisme (ekskresi tinggi Leu, Ile, Val) dan amino lainnya asam (Ala, Gln) dan turunan asam 4-deoxythreonic (4-DTA) dan dimethylglycine (DMG). DMG mungkin berhubungan dengan metionin metabolisme, yang dikenal untuk diubah dalam kasus tabung saraf efek, antara lain disorders.29 Peningkatan diekskresikan allantoin dan indoxyl sulfat (IS) menunjukkan stres oksidatif (yang Senyawa yang terakhir yang telah disarankan untuk menengahi process30), bersama dengan kontribusi jelas dari usus metabolit mikroflora 4hydroxyhippurate, kolin, trigonneline dan trimetilamina (TMA). Secara umum, kasus CD ditandai dengan beberapa efek yang sama dgn FM (yaitu peningkatan badan keton dan ekskresi NMND, dan bukti siklus Krebs aktivasi melalui sitrat yang lebih tinggi dan Ekskresi 2-KG), dengan demikian, mengisyaratkan semacam mendasari umum Mekanisme stres. Perbedaan yang jelas, bagaimanapun, berada dalam ekskresi tinggi glukosa, yang menunjukkan katabolik nya sedikit digunakan, baik karena gangguan metabolisme (perhatikan ekskresi spesifik piruvat pada kelompok CD) dan / atau sebagai refleksi adaptasi ginjal (seperti yang diharapkan dalam perkembangan yang sehat kehamilan, 7 tetapi tidak untuk pengetahuan kita dalam koneksi ke CD). Perubahan tambahan berhubungan dengan metabolisme asam amino, seperti yang diharapkan berdasarkan AF analysis31 dan mempengaruhi Gln, Nya, Ile, Tyr, Thr (dan prekursor 4DTA). GAA dan creatine perubahan mungkin berhubungan dengan urea gangguan siklus). Kelompok T21 dibedakan dari jenis CD lainnya oleh perubahan dalam metabolisme energi (kurang ekskresi glukosa), serta nukleotida (penurunan seiring dalam NMND dan N-metil-2-pyridone5-karboksamida (2-Py)) dan metabolisme asam amino (perubahan glisin dan taurin). Taurin keuntungan relevansi tambahan dalam kaitannya dengan metionin kondisi ini trimester ketiga (khususnya untuk PTD, PE dan IUGR, yang membawa risiko yang lebih tinggi dari kehamilan yang buruk outcome) adalah nilai tak terbantahkan dalam kesehatan prenatal, terutama jika kekhususan mereka jelas (Gambar 5c-f) dikonfirmasi untuk lebih besar kohor peningkatan aktivitas dari cystathionine beta sintase (CBS) (Mengkatalisis konversi homosistein untuk cystathionine) .32 Sebagai dalam kelompok SSP, ekskresi allantoin dan IS konsisten dengan peran dikenal dari stres oksidatif pada T21, 33 mantan Senyawa yang telah ditemukan dalam plasma anak-anak dengan T21.34 malonat, inhibitor kompetitif suksinat dalam rantai pernapasan, 35 adalah pengamatan tambahan khusus untuk T21. Mengenai pra-kondisi didiagnosis, meningkat 4-DEA ekskresi dan penurunan ekskresi kreatinin bersifat umum kejadian spesifik. Selain itu, subyek pra-PTD menunjukkan peningkatan badan keton, bersama dengan penurunan karnitin, sugestif ditingkatkan oksidasi lipid yang terjadi beberapa minggu sebelum PTD. Perubahan kadar lipid plasma memang telah diamati pada persalinan untuk bayi prematur dan ibu, 36 mungkin mencerminkan efek metabolik dan lipid

transfer ke janin. Perubahan lain termasuk penurunan askorbat, mungkin dalam sehubungan dengan stres oksidatif, 26,37 perubahan kecil pada betaine dan perubahan GAA diekskresikan, Nya, Ile dan THR. Dalam prediagnostic GDM, peningkatan yang ditandai dalam glukosa urin, juga dicatat dalam AF, 26 adalah tanda awal kemungkinan glikemia. Sisanya penting perubahan kemih telah diamati untuk diabetes tipe 2 (tapi, untuk pengetahuan kita, bukan untuk GDM), yaitu meningkat asetat, NMND dan 2-Py, perubahan creatine dan creatinine38 dan penurunan kenaikan hippurate dan phenylacetylglutamine (PAG), yang yang terakhir dua senyawa yang mencerminkan pentingnya usus mikroflora dalam kaitannya dengan jenis prediagnosa 2 diabetes.39 Peningkatan kolin diekskresikan menegaskan laporan sebelumnya, 9 dengan demikian, mendukung Hubungan mungkin untuk tahap awal GDM. Kami eksplorasi Hasil pra-IUGR menunjukkan gangguan utama dalam asam amino profil, ditandai dengan banyak asam amino menurun (Ala, Gln, Gly,Leu, Lys, THR, Tyr). Terlepas dari sifat eksplorasi pra- IUGR Model PLS-DA, ini sesuai dengan yang sebelumnya KESIMPULAN Kami melaporkan pemeriksaan pertama dari trimester kedua ibu melalui urin yang memperkenalkan tanda metabolisme tertentu dari kedua diagnosis gangguan prenatal dan mereka yang tidak terdiagnosis pada sampel waktu. FM (dan khususnya SSP malformasi) dan CD (dan khusus T21) diidentifikasi dengan dasar kemih ibu.Tanda NMR, sedangkan tanda NMR ternyata prediktif ditemukan beberapa minggu sebelum diagnosis pra-PTD, prediagnostic GDM dan, putatively, pra-PE dan pra-IUGR (dengan ada bukti awal PROM). Hasil ini diraih oleh pengurangan Data asli NMR 1H set untuk subset yang dipilih variabel sesuai dengan persimpangan pemilihan variabel metode berdasarkan VIP> 1, VIP / VIPcvSE> 1, dan | b / bcvSE |> 1. PLS-DA kemudian menghasilkan model dengan peningkatan daya prediksi dan kinerja MCCV, meluncurkan tanda tangan NMR tertentu, luas mengkonfirmasikan pengetahuan biokimia yang ada dan memberikan Informasi newmetabolic. Sebuah hasil penting dari pekerjaan ini adalah pengakuan bahwa resolusi senyawa indah yang disediakan oleh NMR menghasilkan sidik gangguan tertentu dari kompleksitas yang besar, yang mencakup banyak intensitas rendah, daerah masih ditugaskan dari teramat penting untuk klasifikasi sampel di PLS-DA. Bahkan, set diskrit metabolit signifikan secara statistik / resonansi tidak cukup untuk membedakan gangguan dari kontrol, sedangkan pertimbangan spektrum NMR variabel yang dipilih penuh diproduksi model klasifikasi yang baik. Meskipun dipertimbangkan aplikasi klinis hasil ini akan memerlukan konfirmasi dalam kohort yang lebih besar (akhirnya menampung populasi geografis / budaya yang berbeda) dan validasi model melalui eksternal yang independen set sampel (bukan hanya validasi internal), untuk kami pengetahuan, ini adalah pertama studi profiling besar trimester keduaurin ibu yang menunjukkan nilai menarik dalam melengkapi diagnostik dan prediksi awal kehamilan miskin hasil sama pentingnya dengan T21, PTD, IUGR, dan PE.