La apoptosis provee un mecanismo para la eliminacin de clulas que se han producido en exceso, desarrollado impropiamente y/o con daos

genticos. El dato distintivo de la apoptosis es la autodigestin controlada de la clula. La muerte celular es llevada a cabo por la activacin de proteasas endgenas (caspasas), stas degradan el citoesqueleto y la clula pierde volumen y comienza a encogerse, la membrana comienza a plegarse y a perder la asimetra normal de los lpidos. Tambin se activan las endonucleasas degradadoras del DNA para formar oligonucleosomas, el ncleo se encoge y se torna picntico. La funcin de los dems organelos tambin es eliminada.

La decisin de experimentar apoptosis se toma en el citoplasma. La prdida de funcin mitocondrial es un evento temprano irreversible durante la apoptosis y se caracteriza por redistribucin del citocromo C del espacio intermembranal y prdida del potencial de membrana mitocondrial. Las alteraciones en la membrana celular sealizan a los macrfagos tisulares vecinos a englobar la clula y a completar la degradacin.
William E. Paul, Fundamental Inmunology, Lippincott-Raven, 4th Edition.

La fagocitosis de las clulas apoptticas no se acompaa de inflamacin debido a que no hay rupturas en la membrana celular de la clula apopttica. En contraste con esto, la necrosis y la muerte celular traumtica son formas patolgicas de muerte celular y se caracterizan por hinchazn celular y lisis con liberacin del contenido citoplsmico y la induccin de inflamacin. Aqu la clula no juega un rol activo en la muerte.

Por lo tanto, la habilidad de una clula para responder a una lesin determina si hay inflamacin o no. Si el dao se sobrepone a la clula, sta experimentar necrosis y habr inflamacin. En cambio, si la clula puede responder con mecanismos fisiolgicos al dao y es capaz de dirigir su propia muerte, experimentar apoptosis. Por lo tanto, la muerte celular programada (apoptosis) es un mecanismo para regular la cantidad de respuesta inflamatoria a la lesin de los tejidos. Los genes que controlan la apoptosis son: Bcl-2, y Apoptotic protease activating factor 1 (Apaf-1), entre otros.
Ibid

Las protenas que llevan a cabo la apoptosis se expresan constitutivamente en todas las clulas. Todas las clulas dependen de la provisin constante de seales de supervivencia de las clulas vecinas, la matriz extracelular o los factores de crecimiento, de modo que todas las clulas estn programadas para morir si las seales de supervivencia no son recibidas.

Esta dependencia existe entre cada una de las clulas de cualquier organismo multicelular, de modo que no pueden subsistir de manera autnoma. La apoptosis puede ser iniciada por receptores de membrana en respuesta a un ligando, stos son miembros de la familia del receptor del factor de necrosis tumoral (TNF), como el Fas. Las vas de sealizacin intracelular que activan la apoptosis por ligandos no se expresan de manera constitutiva, de modo que se requiere su sntesis de novo en respuesta a diversos estmulos estresores.

Adems de los estmulos extracelulares para el inicio de la apoptosis, los eventos intracelulares tambin pueden iniciarla. El dao al DNA induce apoptosis por la va del gen p53, ste se encuentra mutado en muchas neoplasias.

Ibid

Cualquier perturbacin bioqumica puede inducir apoptosis. La predisposicin para experimentar apoptosis est regulada por la interaccin de varias vas. De modo general, la elevacin del calcio intracelular, la disminucin del pH intracelular, alteraciones en el estado Redox, son condiciones que predisponen a la apoptosis.
Todas las clulas dependen de los factores de crecimiento, su ausencia produce perturbaciones agudas en el metabolismo celular y la suspensin de su ciclo celular conduciendo a apoptosis. De modo alternativo, la privacin de los factores de crecimiento pueden inducir una respuesta al estrs que resulta en sensibilizacin para la transduccin de seales por medio de receptores de apoptosis los cuales activan a proteasas especficas: las caspasas.

Estas son cisteinproteasas intracelulares las cuales escinden protenas despus de residuos de cido asprtico. Existen 10 caspasas y todas las clulas expresan una o mas de ellas.

Ibid

Las caspasas son proenzimas que se activan cuando son escindidas de su porcin amino terminal y la protena restante es procesada en 2 subunidades generando la proteasa activa. Las caspasas activas son heterotetrmeros compuestos de 2 copias de cada uno de las subunidades activas. Las caspasas tambin pueden autoactivarse o requerir otras protenas para ello.

Una vez activadas, stas activan a otros miembros de la familia de las caspasas, resultando en una reaccin amplificada de proteolisis. Algunos sustratos de las caspasas durante la apoptosis incluyen:

Protenas que tienen que ver con la reparacin celular como la poli-ADP ribosa polimerasa (PARP), proteincinasa dependiente de DNA. Protenas que controlan el ciclo celular, como la protena del retinoblastoma, cinasas dependientes de ciclinas (CDKs), la tirosincinasa c-Abl. Protenas relacionadas con la transduccin de seales, como la PAK2, y protenas relacionadas con el mantenimiento de la integridad estructural, como las lamininas nucleares, fodrina, gelsolina y actina.
Ibid

En la mayora de los casos, la escisin de las caspasas resulta en la inactivacin del sustrato, pero en algunos, resulta en la activacin de un sustrato, ejemplo, la activacin de la IL-1.

Adems de las caspasas, otras proteasas intracelulares son capaces de iniciar la aopotosis y tambin, otras proteasas pueden activar a las caspasas para iniciarla. La tasa a la cual las seales apoptticas inician o amplifican la actividad de las caspasas, es regulada por protenas de la familia Bcl2.

Estas protenas no inhiben un paso especfico en la apoptosis, mas bien, alteran el umbral de apoptosis de una clula. Clulas que expresan gran cantidad de protenas Bcl2 an pueden experimentar apoptosis en respuesta a varios estmulos, cuya dosis debe ser mucho mayor en presencia de protenas Bcl2 que sin ellas. Algunas protenas Bcl2 promueven la vida celular, mientras que otras sensibilizan a la clula para la apoptosis:
Ibid

Subfamilia de protenas Bcl2 antiapoptticas: Bcl2, Bcl-XL, Bcl-W, Mcl-1, NR-13 y A1. Subfamilia de protenas Bcl2 proapoptticas: Bax y Bak. Estas ltimas pueden antagonizar la actividad de la Bcl-XL y la Bcl2. Las protenas Bcl2 pueden formar tanto homo o heterodmeros con otros miembros de la familia, ejemplo: Bcl2 y Bcl-XL forman heterodmeros con Bax.

La razn Bcl2 a Bax se relaciona con el umbral apopttico, de modo que si hay mas Bcl2 se promueve la vida celular, pero si hay mas Bax se promueve la apoptosis. Aunque las protenas Bcl2 se han dividido en subfamilias que inhiben o promueven la apoptosis, dependiendo de las circunstancias celulares, una misma familia puede tener efectos pro o antiapoptticos.

Una caracterstica comn a las protenas Bcl2 es que todas ellas poseen un dominio carboxilo terminal hidrfobo, el cual puede insertarse en las membranas del retculo endoplsmico, la membrana externa mitocondrial y la membrana nuclear externa, para ejercer sus efectos antiapoptticos.
Ibid

Tiene dos dominios adicionales, el primero es una asa grande flexible que media la funcin antiapopttica, ocupa la cuarta parte de la protena y es una regin importante para la regulacin postraslacional de su funcin. El resto de la protena se compone de 7 -hlices y 2 hlices hidrfobas centrales rodeadas de 5 hlices anfipticas. La parte mas alta de la protena contiene una hendidura hidrfoba que es necesaria para la unin de la protena Bcl-XL a la -hlice de 16 aminocidos presente en las protenas proapoptticas Bax y Bak. Esta regin -hlice se le ha llamado dominio 3 homologo Bcl2 (BH3).

Los dominios BH3 estn presentes en otras protenas adicionales que pueden formar heterodmeros con Bcl-XL, stas incluyen: Bad, Bik, Hrk y Bid, las cuales promueven la apoptosis inactivando a la porcin antiapopttica de la Bcl-XL por medio de su unin a los dominios BH3. Mutaciones en la hendidura hidrfoba impide la unin de la protena Bcl-XL a las protenas que contienen dominios BH3, impidiendo la apoptosis, contribuyendo al desarrollo de neoplasias.
Ibid

Las protenas Bcl2 y Bcl-XL promueven la vida celular formando heterodmeros con protenas que tienen que ver con la activacin de las caspasas, como la Apaf1. Sin embargo, la unin de Bax previene la unin de Apaf1 a las Bcl2 y/o BclXL, permitiendo la activacin de las caspasas por medio de Apaf1.

El efecto antiapopttico de la Bcl-XL es por medio de la formacin de poros en las membranas (del retculo endoplsmico, mitocondrial y nuclear externas), los cuales mantienen la permeabilidad de stas en las cuales se distribuyen las BclXL. Dependiendo de las propiedades del poro, promovera la apoptosis disipando gradientes elctricos y de concentracin dentro de la clula (efecto letal caracterstico de la apoptosis) o promovera la vida celular por el mantenimiento de la homeostasis de iones y protenas entre los compartimientos intracelulares. Por lo tanto, la expresin de Bcl2 favorece la integridad mitocondrial. El citocromo C induce apoptosis.
Ibid

Normalmente ste citocromo est en el espacio intermembranal mitocondrial; tempranamente en la apoptosis escapa al citoplasma, en la presencia de ATP y Apaf1, el citocromo C es un potente activador de caspasas. nicamente las mitocondrias que tienen unido Bcl2 no experimentan lisis membranal y escape de citocromo C al citoplasma.

Para que stos puedan sostenerse a si mismos, la clula husped debe sobrevivir hasta que el virus complete su ciclo de vida. La habilidad de las clulas infectadas para experimentar apoptosis en respuesta a una perturbacin metablica provee a los organismos multicelulares una primera lnea de defensa que limita la expansin del virus.

Debido a que la apoptosis implica la destruccin ordenada del contenido intracelular, invariablemente resultara en la destruccin del genoma y partculas virales, pero los virus contienen en sus genomas, genes cuyos productos inhiben la apoptosis de la clula husped.

Ibid

CASPASAS

Citocromo C
APAF 1

Bcl-XL previene la redistricucin del citocromo C manteniendo la integridad de la membrana externa mitocondrial. Adems, Bcl-XL se une a la protena proapottica APAF1, sta es un activador directo de las caspasas en la presencia de citocromo C. Por lo tanto, Bcl-XL previene la apoptosis por su unin a APAF1, de este modo impidiendo su interaccin con el citocromo C y por lo tanto impide la activacin de las caspasas. Ibid

Algunos de stos productos actan en la modulacin de las vas de sealizacin intracelular, otros, suprimen la funcin de los receptores de apoptosis, ejemplo: varios poxvirus codifican formas secretorias del receptor TNF, impidiendo la unin del TNF para inducir la apoptosis de las clulas infectadas.

Los herpes virus codifican protenas que bloquean las vas de sealizacin intracelular del receptor Fas y TNF, adems, codifican protenas homologas a Bcl2 en exceso, las cuales son antiapoptticas.

Los blancos intracelulares antiapotticos mas comunes son las caspasas. Los pox virus codifican la protena crmA, inhibidora de la caspasa 1, lo cual no solo bloquea la apoptosis, sino la activacin de la IL-1, de ese modo limitando la respuesta inmunitaria.
Ibid

P O R

R E C E P T O R E S

T N F

El ligando del receptor Fas es la protena Fas-L (ligando). Cuando se une el Fas-L a su receptor, ste experimenta trimerizacin, lo cual resulta en el reclutamiento de un adaptador, la molcula FADD (Fas associated death domain-containing protein), tambin llamada MORT1. FADD contiene una interaccin protenaprotena llamada dominio efector de muerte, que es la caspasa 8. La caspasa 8 contiene 2 dominios efectores de muerte en su regin amino terminal.

El reclutamiento de la caspasa 8 por el ligando Fas por medio de FADD resulta en la escisin autocataltica de la caspasa 8, liberando las subunidades catalticas de proteasa. Una vez activada la caspasa 8, funciona para activar caspasas adicionales asi como degradar sustratos intracelulares. El mecanismo por el cual Bcl2 o Bcl-XL impiden la apoptosis incluye el secuestro de la caspasa 8 por Bcl-XL en organelos intracelulares impidiendo su amplificacin o protegiendo los organelos intracelulares como la mitocondria de los efectos proteolticos de sta.
Ibid

FAS - L FAS

PRO CASPASA 8

FADD

CASPASA 8 ACTIVA

Ibid

De este modo, las protenas antiapoptoticas de la familia Bcl2 se unen a las protenas proapotticas para evitar la muerte celular.

Algunos miembros de la familia del receptor TNF contienen dominios de apoptosis como Fas, TNF-R1, DR3, DR4 y DR5 y permiten a stos reclutar y activar caspasas. Otros receptores relacionados con el TNF son inductores potentes de la vida celular. La transduccin de seales por el receptor CD40 es un estmulo potente para la vida de los linfocitos B, proliferacin y diferenciacin.

En respuesta a la unin de su ligando (CD40-L), la trimerizacin del CD40 recluta un grupo de molculas adaptadoras: factores asociados al receptor TNF (TRAFs). Existen 6 protenas TRAF que comparten el mismo dominio carboxilo terminal (dominio TRAF), el cual es necesario para el reclutamiento de las molculas de sealizacin intracelular.

Ibid

La interaccin del dominio TRAF resulta en el reclutamiento de inhibidores de la apoptosis (IAPs) para formar complejos con el receptor. Existen 3 IAPs: cIAP1, cIAP2 e ILP (x-IAP). Adems, el dominio amino terminal de las protenas TRAF es importante en la activacin del factor de transcripcin NF-B y la cinasa Jun C terminal. Esto como resultado de la interaccin de CD40L con CD40.

Adems del receptor CD40, el CD30, OX-40 y 4-1BB, son receptores que favorecen la vida celular, y se acoplan a la activacin del factor NF-B, por medio de las molculas adaptadoras de la familia TRAF. Una consecuencia importante de la transduccin de seales por CD40 y CD30 es que aunque el efecto primario es promover la vida del linfocito, un efecto secundario es la sensibilizacin de las protenas efectoras de apoptosis de los miembros del receptor TNF, incluyendo Fas y TNF-R1. Ibid

CD40 - L CD 40

TRAF 2

IAP

DE

NF B

DE CASPASAS

C E L U L A R

Ibid

Esto sugiere que la transduccin de seales a travs de CD40 y CD30 aunque inicialmente favorecen la vida celular, tambin funcionan para establecer mecanismos que faciliten la terminacin de la vida de una clula al final de una respuesta inmunitaria. La activacin del factor NF-B induce la transcripcin de genes que promueven la vida celular.

En contraste, los glucocorticoides, los cuales promueven la la apoptosis de los linfocitos, inhiben la activacin del NF-KB por medio de la regulacin a a la alta del inhibidor del NF- B (IB) y la inhibicin de la unin del NF- B al DNA.

La transduccin de seales por el receptor TNF-R1 incluye el reclutamiento de la molcula TRADD, la cual tiene la habilidad de sealizar tanto por la protena TRAF2, lo cual resulta en la activacin del NF- B o por el reclutamiento de la protena FADD, lo cual activa a la molcula FLICE. As, la habilidad de algunos receptores TNF para promover la vida o la apoptosis dependera del estado celular y los niveles de los adaptadores intracelulares disponibles.
Ibid

TNF TNF R1

TRADD

TRADD

FADD
PRO CASPASA 8

TRAF 2 IAP
Activacin de NF B Inactivacin de Caspasas

CASPASA 8 ACTIVA

CELULAR

Ibid