TRABAJO DE INVESTIGACIN

I.- GENERALIDADES TTULO

Staphylococcus aureus oxacilino resistentes en alumnos portadores, estudiantes del primer y segundo ao en la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de Cajamarca, en los meses de Mayo-Julio del ao 2013. AUTORES DIAZ RAMREZ, Susety Yeni LPEZ CHAFLOQUE, Juan Jos RUIZ ORDINOLA, Gary Omar SENZ BERNAL, Pal Alexis VQUEZ GUEVARA, Veirmer VEGA BECERRA, Milton Alex Estudiantes del V ciclo en la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de Cajamarca. ASESOR LPEZ ORBEGOSO, Jhon TIPO DE INVESTIGACIN Descriptiva

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Semana

Actividad a Desarrollar Capacitacin sobre la Metodologa a desarrollar, compra de instrumentos, materiales y reactivos, as como el conocimiento del uso de estos, se presentar el avance del Proyecto de Investigacin, con ayuda del asesor. Preparacin y esterilizacin del medio de cultivo y esterilizacin de materiales para la respectiva toma de muestras a travs del hisopado nasal. Hisopado nasal. Preparacin y esterilizacin del medio de cultivo donde se cultivar colonias de Staphylocoocus aureus. Incubacin del cultivo. Preparacin y esterilizacin del medio de cultivo donde se aislar colonias de Staphylocoocus aureus. Aislaremos y cultivaremos Staphylocoocus aureus. colonias de

Lunes 10 al Viernes 14 de Junio

Lunes 17 de Junio

Martes 18 de Junio

Mircoles 19 de Junio

Jueves 19 de Junio

Viernes 20 de Junio

Obtencin de plasma sanguneo, preparacin y esterilizacin del medio de cultivo donde se cultivar colonias de Staphylocoocus aureus para el posterior cultivo para la prueba de sensibilidad y coagulasa. Realizaremos la prueba de coagulasa, catalasa y cultivaremos Staphylocoocus aureus con las pastillas de oxacilina, Analizaremos las pruebas realizadas. Revisaremos, as mismo corregiremos, nuestro trabajo de investigacin. Presentaremos nuestro trabajo de investigacin ante el Docente, nuestra promocin y asesores.

Sbado 21 de Junio Domingo 22 de Junio Lunes 23 de Junio al Domingo 28 de Julio

Lunes 29 de Julio al Viernes 02 de Agosto

PRESUPUESTO

MATERIALES, REACTIVOS Y/O INSTRUMENTOS Manitol rojo salado de fenol (110g) Medio de cultivo BHI Medio de cultivo TSA Medio de cultivo peptona Discos de Oxacilina Placas Petri Agua oxigenada Hisopos de madera Agua destilada Guantes Tubos de ensayo Portaobjetos Cubreobjetos Violeta de Genciana Safranina Lugol de GRAM Alcohol acetona Alcohol Frascos vacos de penicilina Jeringas nmero 21 Hojas Bond Impresiones y anillados Internet Transporte Algodn Marcador Papel toalla Ron de quemar Encendedor Jabn lquido antibacterial

PRECIO S/ 80 Brindado por el laboratorio Brindado por el laboratorio Brindado por el laboratorio S/ 45 S/ 80 S/ 1.50 S/ 10 S/ 21 S/ 4 Brindado por el laboratorio S/ 3 S/ 1 Brindado por el laboratorio Brindado por el laboratorio Brindado por el laboratorio Brindado por el laboratorio S/ 6.50 Brindado por el laboratorio S/ 4 S/ 5 S/ 15 S/ 0 S/ 20 S/ 2 S/ 2 S/ 2 S/ 6 S/ 1 S/ 8

II.-GENERALIDADES
ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIN Perfil de sensibilidad y resistencia de Staphylococcus aureus. Experiencia en el Hospital Nacional Hiplito Unanue EL objetivo de este trabajo es documentar la susceptibilidad de Staphylococcus aureus a diversos antimicrobianos, entre pacientes hospitalizados y ambulatorios. Se aisl y evalu 217 cepas de Staphylococcus aureus provenientes de vas respiratorias. La resistencia encontrada en cepas provenientes de pacientes hospitalizados a oxacilina fue de 32%, a gentamicina 35% y a ciprofloxacina 58% y se registr un 100% de sensibilidad a vancomicina. Se encontr una resistencia baja a oxacilina.

Staphylococcus aureus resistente a meticilina adquirido en la comunidad aislados en tres hospitales de Lima-Per En este trabajo se determin la frecuencia de Staphylococcus aureus meticilino resistente adquiridos en la comunidad, en hospitales de Lima- Per. Se aislaron 276 cepas de Staphylococcus aureus, 160 fueron resistentes a meticilina (58%), 9 de ellas fueron identificadas como adquiridas en la comunidad (5,6%). La PVL fue identificada en 25 cepas (9,1%), 14 fueron MSSA y 11 MRSA, de stas ltimas solo 4 fueron MRSAcom, 7 fueron MRSAhosp (p<0,001). El estudio revela niveles elevados de resistencia a meticilina, pero niveles bajos de MRSAcom. En nuestro medio la presencia de PVL no constituira un marcador para la identificacin de los MRSAcom Staphylococcus aureus resistente a meticilina: bases moleculares de la resistencia, epidemiologa y tipificacin Los estudios de epidemiologa molecular han permitido entender mejor las relaciones evolutivas de las cepas y definir el origen de los clones durante brotes epidmicos. En Colombia se sabe poco sobre la epidemiologa de Staphylococcus aureus y an menos sobre su comportamiento en la comunidad. Por ello, estudios de vigilancia epidemiolgica que involucren la tipificacin molecular de las cepas permitirn comprender mejor su epidemiologa y establecer estrategias ms certeras de tratamiento y control.

PROBLEMA Y JUSTIFICACIN Cul es la frecuencia con que se presenta el Staphyloccus aureus resistente a la oxacilina en alumnos portadores de primer y segundo ao de la FACULTAD DE MEDICINA HUMANA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA en los menos mayo julio del 2013? Staphylococcus aureus ha sido considerado clsicamente un patgeno nosocomial. Sin embargo, tambin est presente en muchos centros de larga estancia, y en los ltimos aos ha aumentado su importancia como patgeno comunitario. La trascendencia clnica de este microorganismo radica en que dificulta el tratamiento de las infecciones que produce y obliga a establecer una serie de medidas de control en el mbito nosocomial. Adems, con frecuencia es motivo de alarma entre los pacientes y sus familiares, e incluso entre el personal sanitario que desconoce el problema. El objeto de este trabajo de investigacin es establecer el grado de resistencia de Staphylococcus aureus a la oxaciclina. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Determinar la presencia de Staphyloccus aureus, encontrados en las muestras de hisopado nasal en alumnos portadores de primer y segundo ao de la

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA OBJETIVO ESPECFICO Determinar la resistencia de Staphyloccus aureus, a la oxacilina.

MARCO TERICO Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) ha sido considerado clsicamente un patgeno nosocomial. Sin embargo, tambin est presente en muchos centros de larga estancia, y en los ltimos aos ha aumentado su importancia como patgeno comunitario. La trascendencia clnica de este microorganismo radica en que dificulta el tratamiento de las infecciones que produce y obliga a establecer una serie de medidas de control en el mbito nosocomial. Adems, con frecuencia es motivo de alarma entre los pacientes y sus familiares, e incluso entre el personal sanitario que desconoce el problema.
Evolucin a la resistencia de Staphylococcus aureus

En los ltimos 60 aos, S. aureus ha evolucionado de forma ininterrumpida a la resistencia, coincidiendo con la introduccin de los distintos antibiticos. La resistencia de S. aureus a la penicilina, debida a la produccin de betalactamasas plasmdicas, se describi poco tiempo despus de la aparicin de aquella (1942). Igualmente, la utilizacin de otros antiestafiloccicos, como la estreptomicina, tetraciclinas, sulfamidas, cloranfenicol y eritromicina, favoreci la resistencia de S. aureus a dichos frmacos en los aos cincuenta. La introduccin de la meticilina y oxacilina en 1960 supuso un gran avance en el tratamiento de las infecciones estafilococcicas. Sin embargo, tan slo un ao despus se describieron cepas de S. aureus resistentes a la meticilina, que tenan una protena fijadora de penicilina (penicillin-binding protein, PBP) supernumeraria (PBP2a) con menor afinidad por los betalactmicos. Esta resistencia, tambin denominada intrnseca para diferenciarla de la mediada por betalactamasas o extrnseca, est codificada por el gen mecA cromosmico. Puede tener una expresin homognea o ms frecuentemente heterognea (dependiente de las condiciones de incubacin y de las concentraciones del antibitico). Las primeras cepas de S. aureus oxacilino resistente que se describieron eran slo resistentes a los antibiticos betalactmicos y se presentaron de forma espordica en los hospitales. Sin embargo, a finales de los aos sesenta aparecieron cepas multirresistentes, que se diseminaron ampliamente y causaron brotes nosocomiales en numerosos pases. Este patrn de resistencia a mltiples antibiticos es lo que caracteriza a los S. aureus oxacilino resistente que conocemos en la actualidad. As pues, S. aureus resistente a todos los betalactmicos (incluyendo cefalosporinas y carbapenemes) y habitualmente a aminoglucsidos, eritromicina, clindamicina, tetraciclinas, sulfamidas, quinolonas y rifampicina, mientras que suele ser sensible a los glucopptidos. En nuestro pas, segn el ltimo estudio nacional de prevalencia de la resistencia de S. aureus (1996), el 72% de las cepas de S. aureus eran resistentes a la

gentamicina, el 83% a la eritromicina y clindamicina, el 96% a ciprofloxacino y el 35% a rifampicina. En cambio, slo el 4% eran resistentes al cloranfenicol y el 7% a cotrimoxazol, mientras que todos eran sensibles a vancomicina y teicoplanina. Sin embargo, en los ltimos aos han aparecido en distintos pases cepas sensibles a los aminoglucsidos, que tienden a sustituir a las resistentes a stos. Asimismo, en Japn, EE.UU. y Europa se han detectado desde 1996 cepas de S. aureus oxacilino resistente con sensibilidad disminuida a la vancomicina (CIM: 2-8 g/ml). Estas cepas se denominan VISA (vancomycin intermediate S. aureus) o, mejor, GISA (glycopeptide intermediate S. aureus) y se han asociado a fracasos teraputicos con estos antibiticos

Deteccin en el laboratorio
Los mtodos utilizados para la deteccin de S. aureus en el laboratorio se basan en la modificacin de las condiciones de cultivo para facilitar la expresin de las cepas con resistencia heterognea a la oxacilina. La temperatura de incubacin se reduce a 35 C, se aporta ClNa al medio de cultivo y se prolonga el tiempo de incubacin a 24 h. El estudio de la sensibilidad de S. aureus a la oxacilina se realiza generalmente despus de aislar el microorganismo de una muestra clnica. El NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards) recomienda el uso de placas de agar Mueller-Hinton con ClNa al 4% suplementado con 6 g/ml de oxacilina11. Las cepas con CIM de 2 g/ml o menos se consideran sensibles a la oxacilina y las de 4 g/ml o mayores, resistentes. Los mtodos automticos son menos sensibles y especficos para detectar la resistencia heterognea, debido a que utilizan condiciones de incubacin diferentes y concentraciones de antibitico menores. Por ello, es necesario confirmar sus resultados con un mtodo estndar. Tambin existen mtodos de deteccin directa de S. aureus oxacilino resistente a partir de muestras clnicas, como el de medio de Chapman (manitol al 1% y ClNa al 7,5% con 6 g/ml de oxacilina) en que slo crecen las cepas resistentes a la oxacilina dando colonias amarillentas. Estos mtodos son tiles cuando se procesa un gran nmero de muestras, como ocurre en los brotes nosocomiales, aunque son menos especficos que los mtodos habituales. En la actualidad tambin se dispone de mtodos de diagnstico rpido fenotpicos, como la aglutinacin con anticuerpos monoclonales especficos, o genmicos, como la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), que detecta el gen mecA

Formas de presentacin del SARM

Un individuo que entra en contacto con una cepa de S. aureus puede resultar colonizado, desarrollar una infeccin y/o convertirse en portador. Se habla de colonizacin por S. aureus cuando se asla este microorganismo en una muestra clnica en ausencia de signos de infeccin. Las reas de colonizacin ms frecuentes son las lesiones cutneas (heridas quirrgicas, lceras de decbito), el tracto respiratorio (habitualmente en enfermos intubados o portadores de traqueostomas) y el tracto urinario (generalmente en pacientes sondados). La colonizacin por S. aureus puede ser transitoria o prolongada (generalmente en presencia de cuerpos extraos o lceras crnicas) y presentarse en una o mltiple localizaciones.

Los S. aureus oxacilino resistente causan las mismas infecciones que las cepas sensibles a la meticilina, aunque habitualmente en el mbito hospitalario y en pacientes con determinados factores de riesgo que comentaremos ms adelante. En los brotes nosocomiales desarrollan infecciones entre el 30 y el 70% de los casos en que se asla este microorganismo, dependiendo de las caractersticas de los pacientes y de la situacin de endemia o epidemia en el centro. Las infecciones ms frecuentes son las de herida quirrgica (10-28% de los casos de S. aureus oxacilino resistente), bacteriemia (10-21%), generalmente a partir de catter, y la neumona (15-40%), que se produce habitualmente en el enfermo ventilado. Otras infecciones menos frecuentes son las de partes blandas (lceras de decbito, celulitis), urinarias, intraabdominales (generalmente posquirrgicas), cardiovasculares y las osteomielitis. Un individuo se considera portador de S. aureus cuando este microorganismo se asla en una localizacin donde no suele causar infeccin y que facilita la persistencia del mismo en el organismo. En los brotes nosocomiales por S. aureus hasta la mitad de los pacientes pueden ser portadores. La localizacin ms frecuente es el vestbulo nasal, que constituye el reservorio de S. aureus en el individuo, seguido de la orofaringe y las regiones perineal, inguinal, axilar y rectal. La importancia del estado de portador radica en que con frecuencia precede o se asocia a la colonizacin y a la infeccin por S. aureus. As, en un estudio realizado por Coello et al16 durante un brote nosocomial por S. aureus, el 55% de los pacientes colonizados y el 67% de los infectados eran tambin portadores, y de ellos el 32 y el 37%, respectivamente, en las fosas nasales.

Epidemiologa de la infeccin por S. aureus

S. aureus se presenta habitualmente en el mbito hospitalario causando brotes nosocomiales o, con menos frecuencia, de forma espordica. Para que se produzca un brote nosocomial por S. aureus es necesario que se establezca la denominada cadena epidemiolgica de la infeccin.La introduccin del S. aureus en el hospital se produce generalmente a travs del denominado caso ndice, aunque en la mayora de las ocasiones suele pasar inadvertido. Habitualmente se trata de un paciente colonizado o infectado por este microorganismo, que procede de otro hospital o de un centro de larga estancia. Ms raramente el caso ndice procede de la comunidad o S. aureus es introducido en el hospital por personal sanitario que trabaja a tiempo parcial en otro centro. Una vez en el centro, S. aureus puede transmitirse de forma limitada, dando lugar a una situacin de endemia, o diseminarse rpidamente por todo el hospital, ocasionando un brote epidmico. Para explicar este diferente comportamiento, algunos autores distinguen entre cepas epidmicas y endmicas. Las primeras, que poseeran ciertos determinantes de patogenicidad, tendran mayor capacidad de diseminarse causando brotes nosocomiales e infectaran ms que colonizaran. Las segundas se transmitiran de forma menos eficiente, produciendo nicamente casos espordicos y colonizando generalmente a los pacientes. En cambio, otros autores consideran que todas las cepas de S. aureus tienen la misma capacidad de propagacin e infeccin. Su comportamiento epidmico o endmico dependera de las circunstancias de cada hospital, de las caractersticas del caso ndice y de la susceptibilidad de los pacientes. En concreto, las lesiones cutneas generalizadas y la colonizacin respiratoria del paciente favorecen la contaminacin ambiental y de las manos del personal sanitario, y facilitan la diseminacin del S. aureus.

Una vez que S. aureus es introducido en un hospital, se establece un reservorio del mismo, formado por los pacientes colonizados e infectados, el personal sanitario y los objetos del entorno. Los pacientes constituyen el principal reservorio del S. aureus, aunque slo un tercio de los casos se detecta por los cultivos sistemticos. Los otros dos tercios, que suelen permanecer ocultos, corresponden a pacientes portadores o colonizados de forma asintomtica y a los reingresos que se haban colonizado previamente. Este reservorio oculto tiene gran importancia en el mantenimiento de los brotes nosocomiales por S. aureus. Se ha descrito una serie de factores de riesgo de los pacientes que favorecen la adquisicin del S. aureus: una estancia hospitalaria prolongada (generalmente mayor de 10 das), en especial en unidades de cuidados intensivos, el tratamiento prolongado con antibiticos de amplio espectro, la edad avanzada, enfermedades subyacentes graves, como marcadores de debilidad y dependencia del personal sanitario, la prctica de procedimientos invasivos (catteres intravenosos, sondas urinarias, traqueostomas, la ciruga) y las lceras de decbito. El personal del hospital suele colonizarse de forma transitoria en las manos al atender a los pacientes con S. aureus. Las tasas de colonizacin ms elevadas se producen en los brotes epidmicos y en el personal que tiene ms contacto con los pacientes (enfermeras y auxiliares clnicas). En cambio, la tasa de portadores nasales entre el personal sanitario suele ser baja (2-6%), incluso en los brotes nosocomiales. Las infecciones por S. aureus en este colectivo son poco frecuentes, aunque se han descrito formas cutneas con factores locales predisponentes Los fmites del entorno del paciente constituyen otro reservorio potencial del S. aureus. Este microorganismo se ha aislado en la mayora de las superficies y objetos de la habitacinde los pacientes afectados, incluyendo estetoscopios y esfigmomanmetros, pero no en otras reas frecuentadas por ellos ni en el aire. En un estudio, las tasas de contaminacin ms elevadas se produjeron en las unidades de quemados (el 64 frente al 5% en reas de hospitalizacingeneral), en las habitaciones de los pacientes con infecciones (32 frente al 20% en colonizados) y con en heridas o en orina (36 frente al 6% en otras localizaciones). La transmisin nosocomial del S. aureus se produce generalmente a travs de las manos del personal sanitario, contaminadas de forma transitoria al atender a un paciente con S. aureus. Varios hechos apoyan este mecanismo de transmisin; en primer lugar: los pacientes prximos a un individuo infectado o colonizado por S. aureus tienen mayor riesgo de adquirirlo; en segundo lugar, la colonizacin de las manos puede persistir hasta varias horas despus de curar heridas infectadas por S. aureus, aunque se elimina con su lavado. La transmisin del S. aureus est favorecida por algunas circunstancias del hospital, como un ndice de ocupacin elevado,la sobrecarga de trabajo y la falta de personal Los fmites no se consideran un mecanismo eficiente de transmisin del S. aureus, salvo en reas con un alto grado de contaminacin ambiental como las unidades de quemados. Del mismo modo, la transmisin area, aunque se ha descrito en pacientes portadores nasales con infeccin vrica concomitante de las vas respiratorias altas, slo debe ser tenida en cuenta en reas con alto grado de contaminacin ambiental o en enfermos con neumona

Brotes nosocomiales por S. aureus

Los primeros brotes nosocomiales por S. aureus se describieron en los aos setenta en Gran Bretaa y EE.UU., y a partir de entonces se han producido en todo el mundo. En Espaa el primer brote ocurri en 1981 en una unidad de neonatologa de San Sebastin, y fue erradicado rpidamente. Despus hubo un perodo de calma hasta finales de los aos ochenta, cuando surgieron de forma simultnea brotes de S. aureus en diversos hospitales, principalmente de Madrid y Barcelona. Estos brotes tuvieron una serie de caractersticas comunes: ocurrieron en hospitales con ms de 600 camas y un nivel asistencial elevado; tuvieron un elevado nmero de casos de S. aureus, la mayora de ellos nosocomiales y originados en la unidad de cuidados intensivos (UCI); el caso ndice fue un paciente procedente de otro centro y, finalmente, la mayora estuvieron causados por un clon predominante. Sin embargo, en la ltima dcada se ha producido un aumento de la prevalencia de S. aureus en los hospitales pequeos respecto a los de ms de 500 camas y han aumentado los casos originados fuera de las UCI y en la comunidad. Desde que surgieron los primeros brotes, se ha producido un aumento de la prevalencia de S. aureus en todo el mundo, aunque con amplias variaciones geogrficas. En Europa oscila entre menos del 1% en los pases escandinavos y ms de un 30% en Espaa, Francia e Italia, segn un estudio realizado en 1990 con cepas procedentes de 43 hospitales universitarios. En nuestro pas, pas del 1,5% de los S. aureus en 1986 al 17,9% en 1996; las tasas ms elevadas ocurran en Catalua (30,4%) y Madrid (27,7%), y las ms bajas en Galicia, Asturias y Cantabria (8,3%).

METODOLOGA Para los efectos del siguiente trabajo de investigacin la poblacin ser: Alumnos del primer y segundo ao de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de Cajamarca. La muestra ser 40 alumnos de toda edad con o sin problemas respiratorios, en los meses de junio y julio del ao 2013. Para acceder a tomar las muestras se solicitud el debido permiso a cada uno de los alumnos muestreados a travs de una carta de consentimiento. Criterios de Inclusin Para la seleccin de los estudios se definieron los siguientes criterios de inclusin. Poblacin: Alumnos de la Facultad de Medicina Humana de la UNC. Alumnos que cursen el primer o segundo en la Facultad. Alumnos ambos sexos y cualquier edad. Alumnos que presenten o hayan presentado alguna infeccin respiratoria das atrs. Criterios de Exclusin

 Alumnos de la FMH de la UNC que no sean del primer o segundo ao acadmico. TCNICAS Y PROCEDIMIENTOS Tcnica de Recoleccin de muestra y su procesamiento. Para el presente proyecto de investigacin se realizar la tcnica de HISOPADO NASAL en los alumnos de primer y segundo ao de la Facultad de Medicina Humana de la UNC. Se preparo un caldo nutritivo con BHI que se introdujo en tubos de ensayo y esteriliz en el autoclave, con lo que se procedi a tomar la muestra con hisopos estriles para su posterior siembra en un medio de cultivo selectivo. Aislamiento e Identificacin de Staphyloccus aureus Para aislar nicamente Staphylococcus aureus utilizaremos: Agar Manitol Salado Rojo de Fenol El medio contiene manitol 1%, cloruro de sodio 7,5%, rojo de fenol y peptonas. Para prepar el medio de cultivo para 40 placas petri esteriles se utiliz 700ml de agua destilada y 75g de agar manitol rojo de fenol, se esterilizo el medio en el autoclave y se procedi a servir en cada placa petri con las medidas necesarias para que no se contamine. Con las medidas de laboratorio correctas con el hisopo contenido en el caldo se sembro la bacteria mediante la tcnica del estriado en placas y se dejo incubar en la estufa a una temperatura entre 34y 35C por un tiempo de 24 horas. La alta concentracin de sal inhibe otros microorganismos excepto Estafilococos. Se observara en la placa la presencia de colonias en forma puntiaguda y de color amarillo que indicara presencia de Estafilococos. Prueba de Coloracion GRAM Despus de incubar la bacteria durante 24 horas se procedi a relaizar la prueba de coloracin GRAM. Primero con la ayuda de un asa siembra y un mechero cerca se coloc una gota de Solucin Salina Fisiolgica y una porcin pequea de muestra (cultivo) en el centro de un portaobjeto. Se hace el frotis y se deja fijar a temperatura ambiente o con el calor del mechero, se cubri los extendidos con cristal violeta y se dejo 2 minutos, se elimin el exceso de colorante y se lav con agua. Posteriormente se cubri con lugol Gram y se dejo actuar por 2minutos y se lav nuevamente. Se decolora con alcohol-

acetona durante 15 a 30 segundos y se lava nuevamente. Se procede a cubrir con colorante de contraste (safranina) y se dejo actuar por 1 minuto y se lava con agua por ltima vez se dejo secar y se observ a microscopio con el objetivo de inmersin. Las bacterias grampositivas son violetas o azules y las gramnegativas son rosadas. Despus de la coloracin Gram se prepar un medio para que cultivar cepas y poder utilizarlas para las siguientes pruebas relaizadas en el laboratorio . Se utiliz 150 ml de agua destilada y 6g de TSA , se esterilizo en el autoclave y se coloco en 40 frascos de penicilina y se dejo enfriar de forma inclinada (pico de flauta). Se sembro la bacteria en estos frascos se llevo a incubar entre 34-35C por 18-24 horas.

Prueba de la catalasa Con un asa de Kolle se coloc una gota de agua oxigenada y una porcin pequea de muestra de la cepa en una lmina portaobjeto y se observ la reaccin. La liberacin de burbujas rpida y sostenida indica la produccin de oxigeno mlecular. Prueba de la Coagulasa Con un asa de Kolle se coloc una porcin de la colonia de la cepa bacteriana en un tubo con plasma sanguneo y se dejo incubar inicialmente por 4 horas a una temperatura entre 34-35C. Prueba de Susceptibilidad Antibitica y Determinacin de SARO. Inicialmente se prepar un medio de cultivo para lo que se utiliz 350 ml de agua destilada y 14g de TSA y a la vez se preparo un caldo pectonado para lo que se utiliz 50ml de agua destilada y ---- de pectona , los cuales se esterilizaron en el autoclave y posteriormente se sirvieron, el primero en placas petris estriles y el segundo en tubos de ensayos pequeos esterilizados previamente, en estos posteriormente se preparo una suspensin con colonias aisladas de las cepas ya obtenidas con anterioridad y se incub por 4 horas a una temperatura entre 34-35C. Se utiliz la Tcnica del Antibiograma

Se sumerge un hisopo estril a la suspensin ya incubada, rotar el hisopo varias veces presionando firmemente sobre la pared anterior por encima del nivel del lquido para remover el exceso de inculo. Inoculamos la superficie de la placa con TSA , estriando con el hisopo en dos direcciones y dejamos secar unos minutos a temperatura ambiente antes de colocar los discos de oxacilina. Una vez seca la placa colocamos los discos individuales sobre la superficie del agar con la ayuda de una pinza estril presionando suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar. Los discos los distribuimos uniformemente a una distancia apropiada una del otro. Colocamos de 2 a 3 discos de oxacilina por placa. Dejamos incubar entre 34-35C POR 24 horas. ALUMNOS MUESTREADOS CDIGO 1 2 3 4 5 6 7 8 DNI 70199643 70929149 47170104 73957452 70205964 75914674 47594487 70110379 NOMBRES Y APELLIDOS ESTELA GUERRA JOS FRANCISCO CABANILLAS PADILLA CHRISTIAN VERA BAUTISTA JUAN JULIN ADRIN DE LA CRUZ AYAY ALEX PAL RAMOS PIZARRO JONATHAN ABEL HERRERA PERALTA LEYLA AREL PONCE MALCA GIAN PIERRE TEJADA AVIAR ANTONIO CRISTIAN LUIS

9 10 11

72737475 47106792 46909792

NIMBONA SNCHEZ LUIS ENRIQUE CUBAS GAMARRA JOS WALTER CASAHUAMN CARMEN URQUA MARY

12 13 14 15

70018516 71921841 72882521 72165031

MORI CHVEZ OLGA SALDAA SALDAA KAROL IRENE URCIA MIRANDA SILVIA PAOLA VILLAR MURGA YESENIA

16 17 18 19 20 21

47608405 46470263 70203564 71563076 72103950 46860474

LOZANO JARA CARLOS ALBERTO CABANILLAS MOSQUERA HUGO CSAR ANGULO PASTOR YOLANDA MARIMAR CUEVA SALAZAR MARTHA ISABEL HOYOS SENZ ANGELITA MARGOT SAUCEDO ALEJANDRO ABANTO JANNER

22 23 24 25 26 27 28 29 30 31

70038503 71869815 47601873 46634650 70241704 72887041 71740946 46059029 75148050 73987962

MRQUEZ GOICOCHEA SHEYLA JULCA YUPANQUI BRIAN DURAND CERQUIN LUIS ALBERTO BAUTISTA RAMOS NICK EDINSON SALAZAR LLOVERA EVELIN VSQUEZ SENZ BRYAN ANDRS CARRANZA BERNA GIANMARCO CHILN CASTREJN ERLING MAXWELL CASTREJN OCN JHERSON RIDER ANGULO JOSU SEVILLANO GIAN DANY

32 33 34 35 36

71619910 48016402 48168717 48009994 48080632

CORTEZ RODRIGUEZ JEANCARLOS BECERRA HUAMN MANUEL ANTONIO HERRERA IGNACIO JOS MIGUEL MENDOZACOTRINA GARY WILLIAN CERNA GALLARDO JERSON MARTN

RESULTADOS OBTENIDOS CDIGO DNI NOMBRES Y APELLIDOS coloracion gram negativo catalasa coagulasa

70199643

ESTELA GUERRA JOS FRANCISCO CABANILLAS PADILLA CHRISTIAN VERA BAUTISTA JUAN JULIN ADRIN DE LA CRUZ AYAY ALEX PAL RAMOS PIZARRO JONATHAN ABEL HERRERA PERALTA LEYLA AREL PONCE MALCA GIAN PIERRE TEJADA AVIAR CRISTIAN LUIS ANTONIO NIMBONA SNCHEZ LUIS ENRIQUE CUBAS GAMARRA JOS WALTER CASAHUAMN URQUA MARY CARMEN MORI CHVEZ OLGA SALDAA SALDAA KAROL IRENE URCIA MIRANDA SILVIA PAOLA VILLAR MURGA YESENIA LOZANO JARA CARLOS ALBERTO

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70929149

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47170104

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73957452

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70205964

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75914674

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47594487

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70110379

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positivo

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10

47106792

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11

46909792

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positivo

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12 13

70018516 71921841

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negativo negativo negativo negativo

14

72882521

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15 16

72165031 47608405

negativo positivo

negativo negativo positivo negativo

17

46470263

CABANILLAS MOSQUERA HUGO CSAR ANGULO PASTOR YOLANDA MARIMAR CUEVA SALAZAR MARTHA ISABEL HOYOS SENZ ANGELITA MARGOT SAUCEDO ABANTO JANNER ALEJANDRO MRQUEZ GOICOCHEA SHEYLA JULCA YUPANQUI BRIAN DURAND CERQUIN LUIS ALBERTO BAUTISTA RAMOS NICK EDINSON SALAZAR LLOVERA EVELIN VSQUEZ SENZ BRYAN ANDRS CARRANZA BERNA GIANMARCO CHILN CASTREJN ERLING MAXWELL CASTREJN OCN JHERSON RIDER ANGULO SEVILLANO GIAN DANY JOSU CORTEZ RODRIGUEZ JEANCARLOS BECERRA HUAMN MANUEL ANTONIO

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18

70203564

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21

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70038503

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23 24

71869815 47601873

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positivo positivo

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25

46634650

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26

70241704

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72887041

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positivo

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71740946

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46059029

negativo

negativo negativo

30

75148050

negativo

negativo negativo

31

73987962

negativo

negativo negativo

32

71619910

positivo

positivo

positivo

33

48016402

negativo

negativo negativo

34

48168717

HERRERA IGNACIO JOS MIGUEL positivo

positivo

positivo

negativo

35

48009994 MENDOZACOTRINA GARY WILLIAN 48080632 CERNA GALLARDO JERSON MARTN

positivo

negativo

36

positivo

positivo

negativo

Prueba catalasa positivos catalasa negativos

resultados obtenidos 16 20

catalasa positivos catalasa negativos

Prueba coloracion gram positivos coloracion gram negativos

resultados obtenidos 16

20

coloracion gram positivos coloracion gram negativos

Prueba coagulasa positivos coagulasa negativos

resultados obtenidos 7

coagulasa positivos coagulasa negativos

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS FranchiD, Climo MW, Wong AHM, Edmon MB, Wenzel RP. Seeking vancomycin resistant Staphylococcus auereus among patients with vancomycin resistant Enterococci. Clin Infect Dis. 1999;29:1566-1568. French G. Enterococci and vancomycin resistance. Clin Infect Dis. 1998;27 (Suppl1):S75-83. Phillips I. Lessons from the past: a personal view. Clin Infect Dis. 1998;27 (Suppl1):S2-4. Kenodle DS, Classen DC, Stratton ChW, Kaiser AB. Association of borderline oxacilin susceptible strains of Staphylococcus aureus with surgical wound infections. J Clin Microbiol. 1998; 36:219-222. Velazco E, Nieves B, Araque M, Calderas Z. Epidemiologia de infecciones nosocomiales por Staphylococcus aureus en una unidad de alto riesgo neonatal. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2002; 20:321-325. Rubio M, Romero J, Corral O, Roca V, Picazo J. Bacteriemia por Staphylococcus aureus: anlisis de 311 episodios. Enferm Infecc Microbiol Clin. 1999; 17:56-64. Kuroda M, Ohta T, Uchiyama I, Baba T, Yuzawa H, Kobayashi I, et al. Whole genome sequencing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Lancet 2001;357: 12181219. Beba T, Takeuchi F, Kuroda M, Yuzawa H, Aoki K, Oguchi A, et al. Genome and virulence determinants of high virulence community acquired MRSA. Lancet 2002; 359: 1819-1827. Nimmo G, Bell J, Mitchell D, Gosbell I, Perman J, Turnidge J, et al. Antimicrobial resistance in Staphylococcus aureus in Australian teaching hospitals, 1989-1999. Microb Drug Resist 2003; 9: 155-160. Zetola N, Francis J, Nuermberger E, Bishai w. Communityacquired methicillin resistant Staphylococcus aureus: an emerging threat. Lancet Infet Dis 2005; 5:275-186.