Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0,004, corresponde a 0,1mg/dL de concentrao de creatinina, quando realizados os testes em espectrofotmetro, a 520nm.

A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio. Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia de Jaff modificado. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Owen, J.A. Iggo, B, Scandrett. F.J. e Steward, C.P.: Biochem. J.:58: 426,1954. Pesce, A J.; Kaplan, L.A.: Methods In clinical chemistry, 1017,1987, 1a edio, Mosby. Ravel R.: Laboratrio clnico - aplicaes clnicas dos achados laboratoriais, 4a edio, 429, 1988. Pagana K.D.: Morbys diagnostic and laboratory test reference, 243-247, 1992. Tibrcio, H.M.: Controle interno da qualidade analtica, 1aed. maro/1995. Henry, J.B.: Clinical diagnosis and management by laboratory methods,19a ed, 164-165, 1996. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: no 10231810014 Reviso: 24 (10/2010)

CREATININA
FINALIDADE Sistema colorimtrico para quantificao da creatinina no soro e urina. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO A creatinina reage com picrato alcalino, formando um complexo de cor amarelo avermelhado (reao de Jaff). PARTICULARIDADES DO SISTEMA O kit de Creatinina Doles pode ser utilizado para dosagem pelas metodologias Cintica e Ponto Final. METODOLOGIA Jaff modificado. REAGENTES Reagente pcrico: cido Pcrico 0,028M. Soluo alcalina: Hidrxido de Sdio 6M. Soluo Padro creatinina 5mg/dL Soluo Padro creatinina 50mg/dL Reagente tngstico: cido Tngstico 0,034M. APRESENTAO Ref. A Reagente pcrico Soluo alcalina Soluo padro creatinina 5mg/dL Soluo padro creatinina 50mg/dL Reagente tngstico Ref. B Reagente pcrico Soluo alcalina Soluo padro creatinina 5mg/dL Soluo padro creatinina 50mg/dL Reagente tngstico 1 1 1 1 1 x 50mL x 10mL x 3mL x 3mL x 30mL

BIOQUMICA CLNICA
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Reagente pcrico: armazenar em temperatura ambiente (2030oC). Estvel at a data de vencimento. Soluo alcalina: armazenar em temperatura ambiente (2030oC). Estvel at a data de vencimento. Soluo padro creatinina 5mg/dL: armazenar em temperatura ambiente (20-30 o C). Estvel at a data de vencimento. Aps aberto manter sob refrigerao (2-8C), afim de evitar evaporao. Soluo padro creatinina 50mg/dL: armazenar em temperatura ambiente (20-30 o C). Estvel at a data de vencimento. Aps aberto manter sob refrigerao (2-8C), afim de evitar evaporao. Reagente tngstico: armazenar em temperatura ambiente (2030oC). Estvel at a data de vencimento. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e mucosas. Os reagentes so corrosivos. Havendo contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais. Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto:

Corrosivo

Irritante

1 x 100mL 1 x 20mL 1 x 3mL 1 x 3mL 1 x 60mL

NMERO DE TESTES Ref. A Manual Reao de Jaff sem precipitao (cintico) 250 testes Reao de Jaff com precipitao (ponto final) 30 testes Ref. B Manual Reao de Jaff sem precipitao (cintico) 500 testes Reao de Jaff com precipitao (ponto final) 60 testes Automao (*) - modo Cintico Ref. A - 1.200 testes (mdia) Ref. B - 2.400 testes (mdia) (*) A quantidade de testes na automao varivel de acordo com o equipamento. Protocolos de automao encontram-se disponveis no site Doles ou atravs do Servio de Atendimento ao Consumidor. EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NO FORNECIDOS Fotocolormetro com filtro de 505nm e cubeta termostatizada (cintico). Espectrofotmetro ou fotocolormetro, capaz de medir a absorvncia em 520nm (ponto final). Tubos para centrfuga. Pipetas graduadas. Pipeta semiautomtica. Ponteiras descartveis. gua destilada ou deionizada. Cronmetro.

AMOSTRA Soro, plasma e urina. Evitar hemlise, pois existem quantidades significativas de cromgenos no especficos nos eritrcitos. A creatinina permanece estvel por 7 dias, entre 2-8oC. Urina de 24 horas dever ser colhida sem conservantes e mantida sob refrigerao durante a coleta. Centrifugar no momento do teste. Lquido amnitico deve ser mantido sob refrigerao e ao abrigo da luz. Centrifugar no momento do teste. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectante. PROCEDIMENTO TCNICO CINTICO JAFF ( adequado para equipamentos de semiautomao e automao completa). Preparo do Reagente de Trabalho: Em um bquer adicionar os seguintes reagentes: 2,0mL de Reagente Pcrico 8,0mL de gua destilada ou deionizada 8 gotas de soluo alcalina Homogeneizar e aguardar 5 minutos. A soluo suficiente para a realizao de 10 testes e permanece estvel por 05 dias se mantida entre 2-8C. Realizao do Teste no Soro/Plasma: 1.Transferir 1mL do reagente de trabalho para um tubo de ensaio. 2.Adicionar 100L de padro (5mg/dL) ao reagente de trabalho e homogeneizar com ligeira agitao. 3.Transferir para cubeta termostatizada a 37C (por aspirao em equipamentos dotados de cubeta de fluxo), comprimento de onda de 505nm, zerado contra gua. 4.Esperar 30 segundos. 5.Fazer a leitura inicial (A inicial) em absorvncia, disparando simultaneamente o cronmetro. Anotar o achado. 6.Repetir a leitura (A final) 60 segundos aps a primeira leitura. Anotar o achado 7.Para dosagem das amostras repetir as etapas acima substituindo o padro pela amostra.

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SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

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Realizao do Teste na Urina 1.Transferir 1mL do reagente de trabalho para um tubo de ensaio. 2.Adicionar 10L de padro (50mg/dL) ao reagente de trabalho e homogeneizar com ligeira agitao. 3.Transferir para cubeta termostatizada a 37C (por aspirao em equipamentos dotados de cubeta de fluxo), comprimento de onda de 505nm, zerado contra gua. 4.Esperar 30 segundos. 5.Fazer a leitura inicial (A inicial) em absorvncia, disparando simultaneamente o cronmetro. Anotar o achado. 6.Repetir a leitura (A final) 60 segundos aps a primeira leitura. Anotar o achado. 7.Para dosagem da amostra repetir as etapas acima substituindo o padro pela amostra. CLCULOS - CINTICO SORO/PLASMA: 5 F= (A final A inicial) padro Padro: (A final A inicial) = 0,131 F= 5 = 38,17 0,131 Creatinina (mg/dL) = (A final A inicial) amostra x F Exemplo: Amostra (A final A inicial) = 0,020 Creatinina (mg/dL) = 0,020 x 38,17 = 0,8 URINA: 50 F= (A final A inicial)padro Padro: (A final A inicial) = 0,131 F= 50 = 381,68 0,131 Creatinina (mg/dL) = (A final A inicial) amostra x F Exemplo: Amostra (A final A inicial) = 0,250 Creatinina (mg/dL) = 0,250 x 381,68 = 95

2 Etapa Colorimetria

B
- 1mL -

T
Decantar todo o sobrenadante da etapa anterior para um tubo limpo e prosseguir a reao com o mesmo. Descartar o tubo com o precipitado

DEPURAO (CLEARANCE) DA CREATININA ENDGENA (24HORAS) 1. Instruir o paciente para que faa uma coleta correta da urina de 24 horas. 2. Dosar a creatinina no soro e na urina. Depurao da creatinina endgena = U P x VM x 1,73 S (mL/minuto/1,73m2 superfcie corporal)

Amostra gua destilada

VALORES DE REFERNCIA Soro Adultos Mulheres Homens Recm-nascido Urina Mulheres Homens

0,5 - 1,1mg/dL 0,6 - 1,2mg/dL 0,3 - 1,2mg/dL

1mL

- - 0,25mL 1 gota

Soluo padro 100L 5mg/dL Reagente Pcrico 0,25mL 0,25mL Soluo Alcalina 1 gota 1 gota

16 a 22mg/kg peso/24 horas 21 a 26mg/Kg peso/24 horas

Homogeneizar e deixar repousar temperatura ambiente (2030C) durante 7 minutos. Ler as absorvncias em 520nm, acertando o zero com o branco. No realizar leituras em outro comprimento de onda. A cor final permanece estvel por 20 minutos, temperatura ambiente (20-30C). Realizao do Teste na Urina B gua destilada Urina Soluo padro 50mg/dL Reagente Pcrico Soluo Alcalina 1mL - 0,25mL 1 gota P 1mL 10L 0,25mL 1 gota T 1mL 10L 0,25mL 1 gota

U = creatinina urina mg/dL. P = creatinina soro mg/dL. VM = volume minuto urinrio: dividir o volume urinrio (colhido) em mL por 1440, para se obter o volume minuto. S = superfcie corporal do paciente. Nomograma para clculo da superfcie corporal. No o tendo, tire uma cpia em <http://intranet.doles.com.br/temp/ produtos/nomograma.pdf>. Exemplo: Creatinina/soro (mg/dL) Creatinina/urina (mg/dL) Volume de 24 horas Volume minuto Peso = 70Kg Altura = 1,08 = 109 = 1500mL =1500 1440 = 1,042. = 175cm S= 1,85m2 x 1,042 x 1,73 1,85

DEPURAO DE CREATININA Adultos (< 40 anos) : Mulheres Homens Recm-nascidos

88 - 128mL/min/1,73m2 97 - 137mL/min/1,73m2 40 - 65mL/min/1,73m2

Acima dos 40 anos, a taxa de depurao da creatinina diminui na ordem de 6,5mL/minuto/dcada. SIGNIFICADO CLNICO A creatinina eliminada pelos rins em velocidade relativamente constante, atravs de filtrao glomerular e excreo tubular ativa. Sua concentrao, independe da ingesto de protenas na alimentao, no afetada pelo volume urinrio. A concentrao de creatinina srica mais sensvel e especfica do que a concentrao de ureia srica no estudo da funo renal. Valores aumentados indicam problemas de funo renal. Geralmente o nvel srico de creatinina proporcional severidade da enfermidade. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 45 testes em amostras cujo teor de creatinina se situava no intervalo de 0,6 a 10mg/dL. Esses ensaios foram realizados em paralelo com uma metodologia de referncia. A comparao do kit de Creatinina Doles (Y) com a metodologia mencionada (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 0,11 + 0,983X, sendo o coeficiente de correlao r = 0,98. Testes mostram uma recuperao de 96 - 104%. Erro da mdia foi de 2,34%. Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 2 amostras, obtendo-se os seguintes resultados: Amostra 1 Concentrao (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 1,11 0,04 3,60 Amostra 2 5,77 0,14 2,42

109 Creatinina endgena (depurao) = 1,08

Creatinina endgena (depurao) = 98,5 (mL/minuto/1,73m2 superfcie corporal) CLCULO CREATININA URINRIA mg/kg de peso/24horas Creatinina Urina= 105mg/dL Volume Urinrio de 24 Horas = 1500mL Peso kg = 70 1 Passo - Calcular a quantidade em mg/24horas Creatinina urina (mg/dL) x Vol. Urin. 24horas(mL) Urina mg/24horas = 100 Urina mg/24horas = 105 x 1.500 100 = 1575

Homogeneizar e deixar repousar temperatura ambiente (2030C) durante 7 minutos. Ler as absorvncias em 520nm, acertando o zero com o branco. No realizar leituras em outros comprimentos de onda. A cor final permanece estvel por 20 minutos, temperatura ambiente (20-30C). CLCULOS - PONTO FINAL SORO/PLASMA: Creatinina (mg/dL) = absorvncia do teste x F Fator (F) = Exemplo: Leituras 5 absorvncia padro (mdia) 0,033

2 Passo Calcular a quantidade mg/kg de peso/24horas Urina mg/kg de peso/24 horas = Creatinina Urina mg/24horas Peso (Kg) 1575 = 22,5

LIMITAO DO SISTEMA Bilirrubina srica acima de 10mg/dL geram resultados artificialmente baixos de creatinina srica. cido Ascrbico, srico, acima de 20mg/dL (situao rara) e soros turvos, elevam falsamente os resultados de creatinina. Reao ponto final com desproteinizao contorna os problemas acima.

Padro: 0,160; 0,161; 0,168 - Teste: 0,160 + 0,161 + 0,168 3

Urina mg/kg de peso/24 horas =

Mdia (padro) = F= 5 0,163

= 30,67

70 LINEARIDADE A reao linear at 10mg/dL para dosagem srica e at 200mg/dL para dosagem urinria. EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADES S.I. Creatinina (mol/L) = Creatinina (mg/dL) x 88,4. Depurao da creatinina (mL/s) = Depurao da creatinina (mL/ min) x 0,0167. CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1. A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2. A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3. Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes que deterioram os reagentes. 4. As pipetagens devem ser precisas. 5. O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles).

Creatinina (mg/dL) = 0,033 x 30,67 = 1,0 PONTO FINAL JAFF Realizao do Teste no Soro/Plasma 1 Etapa Desproteinizao Em um tubo de ensaio proceder como segue: Reagente Tngstico Amostra 1,0mL 100L URINA: Creatinina (mg/dL) = absorvncia x F 50 Fator (F) = absorvncia padro (mdia) Exemplo: Leituras - Padro: 0,160; 0,161; 0,169 - Teste:

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguinte resultados:

Amostra 1 Concentrao (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 1,29 0,05 3,88

Amostra 2 6,52 0,20 3,07

0,350

Agitar e centrifugar, em alta rotao, durante 5 minutos. *O sobrenadante pode apresentar-se turvo. A ocorrncia de turvao no interfere nos resultados finais.

0,160+ 0,161 + 0,169 Mdia (padro) = = 0,163 3 50 F= = 306,75 0,163 Creatinina (mg/dL) = 0,350 x 306,75 = 107

Especificidade: a presente metodologia est sujeita interferncia de algumas substncias cromgenas (ver em substncias interferentes).

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SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

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