teor de HbA1c situava-se no intervalo de 4,7% e 15,2%.

A comparao entre os produtos deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= -0,357 + 1,05x. O coeficiente de correlao foi de 0,995. Evidenciou-se recuperaes na faixa de linearidade do mtodo de 98,3% a 104,4%. Repetitividade Foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 03 amostras, obteve-se os seguintes resultados:
Parmetro Estatstico Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3

Mdia DP CV%

4,80 0,06 1,25

7,30 0,07 1,02

10,90 0,16 1,47

Reprodutibilidade Foram realizadas 20 dosagens, em cada amostra, durante 20 dias consecutivos, obteve-se os seguintes resultados:
Parmetro Estatstico Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3

Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978). Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders Company, p.794-795 (1999). Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982). Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986). Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981). Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983). Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989). American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001). Atualizao sobre Hemoglobina Glicada (A1C) para avaliao do controle glicmico e para o diagnstico do diabetes: Aspectos Clnicos e Laboratoriais. http://www.diabetes.org.br/ attachmentes/502_posicionamentos_SBD_3_ jan09.pdf. Acesso em 04/2010. Doles: Dados de Arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Todos os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos sem nus para o consumidor. Doles Reagentes e Equipamentos para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Conjunto Palmares CEP: 74.775-027 Goinia - GO - Brasil e-mail: doles@doles.com.br www.doles.com.br M.S.: 10231810100 Reviso: 01 (06/2010)

HEMOGLOBINA HbA1c
FINALIDADE Sistema para determinao quantitativa de HbA1c no sangue humano. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO O mtodo baseia-se na interao de antgeno e anticorpo para a determinao direta da HbA1c no sangue total. Hemoglobina total e HbA1c se ligam igualmente s partculas de ltex. Quando o anticorpo monoclonal de camundongo antiHbA1c (R2) adicionado, forma-se o complexo: [ltex + HbA1c (amostra) + anticorpo monoclonal anti-HbA1c]. Em seguida acontece a aglutinao, devido presena de anticorpo de cabra anti-IgG de camundongo, que interage com o anticorpo monoclonal. A aglutinao formada proporcional concentrao de HbA1c na amostra. O valor de HbA1c obtido atravs da curva de calibrao. PARTICULARIDADES DO SISTEMA O kit de Hemoglobina HbA1c Doles permite quantificar de forma rpida e simples a HbA1c, dispensa a determinao da HbT e aplicvel em sistemas semiautomticos e automticos. METODOLOGIA Imunoturbidimetria. REAGENTES E APRESENTAO Reagentes: R1 Ltex contm partculas de ltex 0,13% e preservativo. R2A Tampo contm tampo 80mmol/L, pH 7,3 e preservativo. R2B Anticorpo contm tampo 20mmol/L, pH 7,1; anticorpo monoclonal de camundongo antiHbA1c humana; anticorpo policlonal anti-IgG de camundongo e azida sdica 14,6mmol/L. Reagente Hemolisante contm azida sdica 7,3mmol/L. Apresentao Ref.A/ 24 testes (manual) 120 testes (automao) R1 Ltex 1 x 18mL R2A Tampo 2 x 2,85mL R2B Anticorpo 2 x 0,15mL Reagente Hemolisante 1 x 80mL Ref.B/ 40 testes (manual) 200 (automao) R1 Ltex 1 x R2A Tampo 2 x R2B Anticorpo 2 x Reagente Hemolisante 1 x testes 30mL 4,75mL 0,25mL 125mL

TURBIDIMETRIA

EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Calibradores HbA1c Doles Analisador capaz de medir a absorvncia entre 600 e 660nm. Tubos de ensaio. Pipetas graduadas. Pipeta semiautomtica 20mL. Ponteiras descartveis. Pera para pipetagem. ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Conservar o kit entre 2 e 8C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do produto, obedecidas as condies de armazenamento. O reagente R2 (2A+2B) possui estabilidade de 30 dias se armazenado na temperatura de 2 a 8C. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se o contato com pele e mucosas. Os reagentes 2B e hemolisante contm azida sdica (irritante). No pipetar o reagente com a boca. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar a simbologia constante nos rtulos do produto:

Mdia DP CV%

4,70 0,06 1,31

7,30 0,08 1,13

11,10 0,17 1,50

Interferentes Concentraes de bilirrubina at 50mg/dL, cido ascrbico at 50mg/dL, triglicrides at 2000mg/dL, hemoglobina acetilada at 5,0mmol/L e hemoglobina carbamilada at 7,5mmol/L no produzem interferncia significativas. Resultados inconsistente foram reportados em pacientes que fizeram uso de opiceos, envenenamento por chumbo, alcoolismo e ingesto de elevadas doses de aspirina (cido acetilsaliclico). Resultados falsamente diminudos podem ocorrer em amostras com nveis elevados de HbF e em condies que promovem reduo real da A1C em funo da diminuio do nmero de eritrcitos, dos nveis de hemoglobina e do hematcrito. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971). Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978). Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop,P.M., J. Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).

Irritante

AMOSTRA Preparo do paciente - O paciente no precisa estar em jejum, porm resultados mais precisos so obtidos em amostras isentas de turbidez decorrentes da hipertrigliceridemia. recomendada a coleta de sangue, pelo menos, duas horas aps a ingesto de alimentos. Coleta - Sangue total colhido por puno venosa ou capilar. Utilizar como anticoagulante o EDTA (Anticoagulante Universal ou Anticoagulante Glicose Doles). Estabilidade - A amostra permanece estvel por uma semana temperatura de 2 a 8C. O sangue total armazenado a 70C estvel por pelo menos 18 meses. O armazenamento a 20C por longos perodos, ocasiona o aumento de HbA1a+b, no sendo recomendvel. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes.

Protocolos para equipamentos semiautomticos e automticos, esto disponveis no site Doles ou atravs do Servio de Atendimento ao Consumidor.

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PROCEDIMENTO TCNICO A- Hemolisado O procedimento a seguir dever ser realizado para as amostras, controles e calibradores, conforme o descrito a seguir: 1. Pipetar 1mL do reagente hemolisante (pronto para uso) em tubos (vidro ou plstico), para cada tipo de amostra (paciente, controle e calibradores). 2. Homogeneizar a amostra e pipetar 20mL no tubo respectivo. 3. Agitar bem. 4. Aguardar cinco minutos para a hemlise completa (ausncia de turvao). Nota: o hemolisado preparado pode ser armazenado por 10 dias a uma temperatura de 2 a 8C. B- Preparo dos Reagentes 1. O reagente R1 Ltex pronto para uso. 2. O reagente R2 consiste na mistura do reagente 2A + 2B. Este reagente deve ser preparado pela adio do reagente 2B ao volume do reagente 2A. Homogeneizar suavemente. Depois de preparado o reagente estvel por 30 dias se mantido temperatura de 2 a 8C. C- Ensaio Curva de Calibrao Utilizar os Calibradores HbA1c Doles e proceder de maneira idntica ao estabelecido para as amostras de pacientes. O ltimo ponto da curva (maior valor) o ponto limite de determinao da reao. Ensaio em sistemas manual ou semiautomtico pipetar em tubo de ensaio:
Calibradores Amostra R1 Ltex homogeneizado 750mL 750mL

Zerar o espectrofotmetro/fotmetro com gua, no comprimento de onda de 600 a 660nm e obter as absorvncia dos calibradores (ordem crescente) e das amostras. Clculos: Definir a concentrao das amostras atravs da interpolao dos valores obtidos na curva de calibrao. Para construo da curva utilizar papel linear ou programas de computao para construo de grficos do tipo Excel/equipamento de semiautomao. A seguir um exemplo de curva de calibrao:
2,5
Absorvncia

Ponto da Curva (HbA1c) 0 5 8,3

0 2 4 6 8 10 12 14 16 HbA1c (%)

Absorvncia 0,648

2 1,5 1 0,5 0

0,999 1,555 1,899 1,940

12,0 15,2

CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Ler cuidadosamente as instrues de uso antes de realizar o teste. A data de validade do kit fechado corresponde ao ltimo dia do ms assinalado na etiqueta da caixa do kit. Ateno para o prazo de estabilidade do reagente R2. No utilizar aps 30 dias do preparo. No usar componentes do kit aps a data de validade. Utilizar as Boas Prticas de Laboratrio (BPLs) na conservao, manuseio e descarte dos materiais. No substituir componentes deste kit com o de outros fabricantes, nem usar componentes de lotes e cdigos diferentes. O uso de amostra controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. VALORES DE REFERNCIA Pacientes no diabticos 4,0% a 6,0% Pacientes diabticos em controle glicmico na Infncia e Adolescncia (seg. American Diabetes Association) Idade ( 0 - 6) anos 7,5% a 8,5% Idade ( 6 - 12) anos < 8,0% Idade (13 - 19) anos < 7,5% Adultos diabticos em controle glicmico At 7,0% ADA (American Diabetes Association) At 6,5% SBD (Sociedade Brasileira de Diabetes) Idosos diabticos em controle glicmico At 8,0% Importante ressaltar que os valores estabelecidos para pacientes diabticos no so de referncia. Trata-se de valores acima dos quais os riscos de desenvolvimento de complicaes micro e macrovasculares da doena so significativamente elevados. SIGNIFICADO CLNICO O termo genrico Hemoglobina Glicada ou A1C se refere a um conjunto de substncias formadas a partir de reaes entre a Hemoglobina A (HbA) e alguns acares. A ligao entre a HbA e a glicose um tipo de glicao no-enzimtica, contnua, lenta e irreversvel. Entretanto, a primeira fase da reao entre a

glicose e a hemoglobina reversvel e origina um composto intermedirio denominado pr-A1C, HbA1c lbil ou instvel, aldimina ou, ainda, base de Schiff. A segunda fase resulta em um composto estvel tipo cetoamina, no mais dissocivel, agora denominado de HbA1c ou, simplesmente, A1C. No indivduo normal a frao HbA1c representa, aproximadamente, 80% da hemoglobina A1 total. A hemcia livremente permevel molcula de glicose, ficando a hemoglobina, praticamente, exposta s mesmas concentraes da glicose plasmtica. A hemoglobina glicada se acumula dentro das hemcias, apresentando, portanto, uma meia-vida dependente da delas. Tradicionalmente, a A1C tem sido considerada como representativa da mdia ponderada global das glicemias mdias dirias (incluindo glicemias de jejum e ps-prandial) durante os ltimos 2 a 3 meses, uma vez que os eritrcitos tm um tempo de vida de, aproximadamente, 120 dias. A medida da quantidade de glicose ligada hemoglobina pode fornecer uma avaliao do controle glicmico mdio no perodo de 90 a 120 dias antes do exame. Em virtude dos resultados do exame fornecerem informaes retrospectivas sobre dois a quatro meses precedentes, a realizao de um teste de HbA1C, a cada trs meses, fornecer dados que expressam a glicose sangunea mdia no passado recente (2 a 4 meses antes do exame). No decorrer dos anos ou dcadas, o quadro de hiperglicemia prolongada acelera leses tero e arterioloesclerticas com extenso comprometimento do sistema vascular arterial e desenvolvimento de leses secundrias, com predominncia ao nvel dos rins, corao, sistema nervoso central e globo ocular. Os testes de HbA1c devem ser realizados regularmente em pacientes diabticos. Primeiramente, para documentar o grau de controle glicmico em sua avaliao inicial e, subsequentemente, como parte do atendimento contnuo do paciente. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Sensibilidade Clnica e Especificidade Foram realizados 45 testes em amostras cujo

Protocolos para equipamentos automticos, esto disponveis no site Doles ou atravs do Servio de Atendimento ao Consumidor. LINEARIDADE O mtodo possui intervalo de medio de 2,0% a 16,0%. Contudo a faixa de linearidade do sistema definida pelo ltimo ponto do calibrador utilizado na curva de calibrao. Amostras com valores acima do intervalo de calibrao no devem ser diludas. Sendo assim, o resultado dever ser reportado como superior a ... (relatar o valor de concentrao do ltimo ponto da curva de calibrao). LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. Este ensaio no deve ser utilizado como diagnstico da Diabetes Mellitus. Os resultados das amostras dos pacientes devem sempre ser obtidos atravs da curva de calibrao. Resultados inconsistentes foram reportados em pacientes que fizeram uso de opiceos, envenenamento por chumbo, alcoolismo e ingesto de elevadas doses de aspirina (cido acetilsaliclico). Resultados falsamente diminudos podem ocorrer em amostras com nveis elevados de HbF e em condies que promovem reduo real da A1c em funo da diminuio do nmero de eritrcitos, dos nveis de hemoglobina e do hematcrito.

Aquecer em banho maria a 37C por 3 minutos.

Ponto 01 da Curva de Calibrao

gua/salina 0,9%

20mL 20mL

Ponto 02 da Curva de Calibrao

Hemolisado do Calibrador Nvel 01 Hemolisado do Calibrador Nvel 02 Hemolisado do Calibrador Nvel 03 Hemolisado do Calibrador Nvel 04

Ponto 03 da Curva de Calibrao

20mL

Ponto 04 da Curva de Calibrao

20mL

Ponto 05 da Curva de Calibrao

20mL -

20mL

Hemolisado amostra/paciente

Homogeneizar e incubar em banho maria a 37C por 5 minutos. R2 homogeneizado 250mL 250mL

Homogeneizar e incubar em banho maria a 37C por 5 minutos.

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