Professional Documents
Culture Documents
Preg/rea
preparatului
pentru
microscopie
op/c
Posibiliti de preparare - seciuni - in toto (structuri/organisme mici, suficient de subiri pt. a fi ntinse pe o lam) - zdrobire (pt. studiul coninutului celulei) - frotiuri (celule suspendate n fluid) - culturi celulare
2013
Dr.
M.I.
Nicolescu,
Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
Permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale celulelor i a modului lor de organizare
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
hGp://www.agtcbioproducts.com/images/slide.jpg
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
Scopul realizrii de a conserva - structurile celulare i - raporturile dintre ele pe un timp nelimitat.
Este folosit n: -clinic -laboratorul de anatomie patologic -medicin legal -cercetare -scop didactic
2013
Dr.
M.I.
Nicolescu,
Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
1. RECOLTAREA
= Operaia prin care fragmentul de esut/organ este prelevat de la om, animal viu sau de la cadavru
1. dimensiunea pieselor s nu depeasc 5 mm 2. instrumentele bine ascuite pentru a evita zdrenuirea i pierderea paralelismului dintre planuri 3. adecvat n funcie de tipul organului; se vor evita modificrile de volum, form i relief
RECOLTAREA BIOPSIC
Se recolteaz de la om sau animal viu i se practic n scop diagnostic. Se realizeaz prin : 1. raclare 2. puncie-biopsie 3. aspiraie cu ac fin 4. intervenie chirurgical
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
1. RECOLTAREA
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
A. raclare
Recoltarea biopsic
A
B
B. puncie biopsie
C
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
2. FIXAREA
- sunt oprite rapid procesele vitale (celulare), - pstrndu-se, cu alterri minime:
- - - - volumul, hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0004_d0f91f3944.jpg
forma, relieful i raporturile moleculare (n structuri/ultrastructuri) i spaiale (ntre structuri/ ultrastructuri)
etap critic pentru un bun preparat proces fizic sau chimic prin care:
Prin fixare urmrim: 1.Conservarea esuturilor 2.Prevenirea pierderii de constitueni celulari 3.Creterea diferenierii optice a structurilor celulare 4.Mrirea consistenei esuturilor n scopul de a facilita trecerea lor prin celelalte etape i mai ales pentru secionare
2013
Dr.
M.I.
Nicolescu,
Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
3. DESHIDRATAREA i CLARIFICAREA
Serie
de
soluii
alcoolice
de
concentraii
crescnde
(pn
la
100%)
pentru
ndeprtarea
apei
i
nlocuirea
ei
cu
alcool
ndeprtarea
alcoolului
cu
ajutorul
unor
ageni
n
care
i
alcoolul
i
parana
sunt
miscibli
(ex:
toluen)
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
4. INCLUDEREA
-
etapa
care
asigur
condiii
op)me
pentru
secionarea
pieselor
Cea
mai
folosit
mas
de
incluziune:
parana
hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Embedding_028_sized_31fe12192c.jpg hGp://www.leicabiosystems.com/typo3temp/pics/Sci_Lab_Histo_Lead0008_03_a9cda89157.jpg
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
5. SECIONAREA
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
6. COLORAREA
- etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre elementele celulare/)sulare, prin capacitatea substraturilor morfologice (care conin proteine, acizi nucleici sau alte macromolecule) de a lega diferit coloranii
Prin metode compa)bile cu metoda de xare Pot metode universale (HE) sau specice esutului studiat (Nissl)
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
8. ETICHETAREA
Pe fiecare lam se noteaz:
tipul celular/tisular sursa de recoltare fixatorul metoda de colorare data realizrii preparatului
2013
Dr.
M.I.
Nicolescu,
Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
PAUZ
COLORANTUL HISTOLOGIC
Substan colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani! Coloranii prezint, d.p.d.v. chimic: - Grupri cromofore (purttoare de culoare) - Grupri auxocrome (cu capacitatea de a colora)
- Ionizate (principale) formeaz leg. electrochimice cu substratul - Neionizate (secundare) formeaz leg. de hidrogen cu substratul Clasicare:
- dup
provenien:
naturali
(vegetali/animali)
sau
sinte)ci
- dup
caracterul
chimic:
-
acizi:
gr.auxocr.
sarcin
-
se
ataeaz
pe
substrat
(+)
-
bazici:
gr.auxocr.
sarcin
+
se
ataeaz
pe
substrat
(-)
-
neutri
(amestecuri
de
col.
acizi
i
bazici)
2013
Dr.
M.I.
Nicolescu,
Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
METODE DE COLORARE
Criterii de clasificare: 1. Momentul colorrii (vitale / permanente) 2. Nr. de colorani utilizai (simple / combinate) 3. Mecanismul colorrii (directe / indirecte cu intermediar) 4. Metoda de obinere a coloraiei optime (progresive / regresive cu decolorant) 5. Raportul dintre rezultatul colorrii i (ortocromatic / metacromatic) culoarea colorantului
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
METACROMAZIA
Capacitatea unui substrat de a se colora ntr-o alt culoare dect cea a colorantului. PRINCIPIU: - existena unor grupri funcionale aflate la o distan foarte mic una de alta. - colorantul se dispune ordonat i foarte aproape molecul de molecul permind reaezri ale electronilor la alte nivele energetice i absorbia de alte lungimi de und din spectrul vizibil
Mastocite
Ob.
100x
cu
imersie
Col.:
Albastru
de
toluidin
--
granulaii
rou
-
violet
2013 Dr. M.I. Nicolescu, Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti
COLORAII UZUALE
Hematoxilin-eozin
(HE)
Giemsa
Mallory
Coloraii
tricrome:
Masson,
Azan,
Van
Gieson
Impregnarea
argen)c
Metode
speciale
(Cajal
/Da
Fano,
Hematoxilin
feric
Regaud)
Sudan
(III,
IV,
B,
BB)
1. Compoziie
2. Rezultate
(text
+
imagini
+
surs)
3. Par/culariti
2013
Dr.
M.I.
Nicolescu,
Disciplina de citologie i histologie, UMF Carol Davila Bucureti