Manual Practicas Biol Cel Final

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS
PROGRAMA EDUCATIVO DE QUMICO BILOGO PARASITLOGO ACADEMIA DE:
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE GUERRERO
CUARTO TRIMESTRE (Agosto-Noviembre)
MA NU AL DE PR C TIC AS DE
BIOLOGIA CELULAR
Dra. Amalia Vences Velzquez Dr. Oscar del Moral

PROGRAMA EDUCATIVO DE QUMICO BILOGO PARASITLOGO ACADEMIA DE: MANUAL DE PRACTICAS DE BIOLOGIA CELULAR
Programa Educativo de Qumico Bilogo Parasitlogo Septiembre de 2011
Programa Educativo de Qumico Bilogo Parasitlogo Unidad Acadmica de Ciencias Qumico Biolgicas Universidad Autnoma de Guerrero
DIRECTORIO
Dra. Berenice Illades Aguiar Directora Dra. Gloria Fernndez Tilapa Subdirectora de Integracin de las Funciones Sustantivas Dra. Amalia Vences Velzquez Subdirectora Administrativa y de Control Escolar M en C. Jorge Bello Martnez Subdirector de Planeacin y Evaluacin M en C. Julio Ortiz Ortiz Coordinador del Programa Educativo de QBP
Presidente de la Academia de

Contenido Pgina I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XVII XVIII Presentacin Introduccin Competencias que desarrollar el estudiante y su ubicacin dentro del mapa curricular vigente Medidas de Bioseguridad Prctica 1 MICROSCOPIA
Prctica 2 CELULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS Prctica 3 Prctica 4 DIVERSIDAD CELULAR PERMEABILIDAD CELULAR
Prctica 5 FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS Prctica 6 Prctica 7 OBSERVACION DE CROMOSOMAS MITOSIS
Prctica 8 OBSERVACION DE PLASTOS Y ESTOMAS Prctica 9 VACUOLAS DIGESTIVAS Bibliografa Anexos

I.
Presentacin
Este manual de prcticas de Biologa Celular pretende ser un elemento til para los estudiantes de la carrera de Qumico Bilogo Parasitlogo. Est diseado para dar a los alumnos los elementos necesarios que les permitan entender y aplicar sus conocimientos de la estructura y funcin celular en laboratorio. En cada prctica se describen los aspectos tericos que se han considerado ms importantes e indispensables para la interpretacin de los resultados de cada prueba, los objetivos que se esperan lograr, los materiales necesarios en funcin de las tcnicas que se proponen, los datos y clculos que deben tenerse presentes al interpretar los resultados y las referencias bibliogrficas. El manual tambin es til para el profesor como un apoyo didctico y como fuente para consultar algunos procedimientos sencillos y conceptos de inters en el rea de la biologa. Tambin responde a las necesidades del nuevo plan de estudios basado en competencias y esta adecuado al contenido de la parte terica actual de la biologa celular. Por otro lado este manual contribuye a la bien conocida preocupacin de los profesores por el aprovechamiento de los alumnos, por motivarlos y orientarlos para que a travs de la bsqueda y aplicacin de los fundamentos teoricos de cada experimento que desarrollan en la prctica, la manipulacin cuidadosa y el cumplimiento de las normas del laboratorio, se vayan formando una disciplina de trabajo dentro de los lineamientos del mtodo cientfico que les ser de gran utilidad tambin en otras unidades de aprendizaje y sobre todo en el desempeo de su vida profesional. Esperamos que sea de gran utilidad en el curso y se convierta en una herramienta indispensable para el desarrollo de las competencias propuestas en el programa de la unidad de aprendizaje.

II.
INTRODUCCION
La Biologa Celular es un rea muy rica visualmente. Sin embargo muchas de las estructuras y eventos biolgicos ms interesantes son ms pequeas de lo que el ojo humano puede ver sin ayuda. Es por ello que una parte esencial de las prcticas de laboratorio es la microcoscopia como herramienta indispensable en el anlisis de la estructura celular. El programa, la gua de estudio y el presente manual se han diseado para que los alumnos aprendan los conceptos bsicos de la materia y para potenciar una serie de competencias profesionales que les sern de gran utilidad en su formacin como Qumicos Bilogos Parasitologos. El curso de Biologia Celular es un curso teorico-practico por lo tanto el tiempo dedicado al laboratorio es tan importante como el dedicado a la teora. Este curso aporta las bases tericas y prcticas para comprender la estructura, el funcionamiento y la interrelacion entre los diferentes componentes de las clulas. Tambin prepara el camino para complementar y dar sentidos a los conceptos que se desarrollaran en las unidades de aprendizaje: biologa molecular, gentica, hematologa de los prximos trimestres. Los alumnos debern entregar un reporte como complemento de cada prctica que debe contener lo siguiente: Nmero y Ttulo de la Prctica Objetivos Resultados Discusin Conclusiones Bibliografa

III.
Medidas de Bioseguridad
Las muestras biolgicas provenientes de pacientes o donantes constituyen uno de los ms peligrosos reactivos al que puede estar expuestos el personal que trabaja en el laboratorio. Por tal razn, se proponen ciertas normas que deben cumplirse cuando se est en el laboratorio o se est trabajando con muestras biolgicas. El personal del laboratorio en general, debe evitar el contacto indebido con cualquiera de las sustancias que se usan en las distintas prcticas, evitando especialmente el contacto con la piel, mucosas y heridas abiertas o lceras. As se evitaran riesgos para la salud. A continuacin se propone una serie de normas mnimas de seguridad con la intencin de preservar la salud de quienes conviven en el laboratorio, pero tambin con la de invitar a los estudiantes a trabajar de forma adecuada y profesionalmente. Precauciones que deben tenerse en el laboratorio 1. Usar bata blanca, manga larga y abotonada. 2. No comer, beber, fumar, maquillarse y en general no llevarse cosas en la cara. 3. No humedecer etiquetas con la lengua, morder los lpices ni llevarse objetos en la boca. 4. Usar guantes si existen heridas en las manos o si existe el riesgo de que durante el procedimiento pueda derramarse el reactivo. Limpiar inmediatamente los reactivos y muestras que se derramen sobre la mesa de trabajo o el piso, con una solucin de hipoclorito de sodio al 1% y de preferencia incinerar o sumergir en la misma solucin el material usado (algodn, franela). 5. Mantener una adecuada ventilacin del rea de trabajo, para evitar la inhalacin de compuestos voltiles. 6. Evitar salpicaduras o formacin de aerosoles.

7. Esterilizar con calor hmedo (autoclave a 121.5C) aquellos materiales que consideren susceptibles de transmitir alguna infeccin. 8. Usar hipoclorito de sodio (al 1% con el lquido a desechar) en lquidos que no contengan cido, dejando transcurrir 30 min para que ocurra la desinfeccin. 9. Lvese meticulosamente las manos despus de cada prueba. 10. En caso de accidente (derrame de sangre o reactivos, contacto con ellos etc.) avisar al profesor o encargado. 11. Aplicar adecuadamente la NORMA Oficial Mexicana NOM087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental Salud ambiental Residuos peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y especificaciones de manejo.

IV.
Competencias que desarrollar el estudiante al finalizar la unidad de aprendizaje teorico-practica de biologa celular.
La unidad de aprendizaje de Biologa Celular se imparte en el cuarto trimestre de la carrera de Qumico Bilogo Parasitlogo y su ubicacin dentro del mapa curricular vigente es en la etapa de formacin especfica. Las competencias que el alumno desarrollara al final del curso son:
Interpreta los resultados de sus observaciones en el laboratorio mediante discusiones grupales y en equipo, para reforzar sus conocimientos tericos y contextualizarlos en el campo laboral, con una actitud de cooperacin y entusiasmo.
Trabaja junto con sus compaeros de equipo en el anlisis de resultados experimentales discutiendo y debatiendo sus puntos de vista, para enriquecer las discusiones y conclusiones de sus reportes de laboratorio.
Aplica sus conocimientos tericos de la estructura y funcin celular en la resolucin de problemas prcticos de laboratorio, adiestrndose en el manejo del material y equipo para familiarizarse con el ambiente de trabajo de un laboratorio de 9

anlisis y diagnostico; mediante la observacin. Anlisis y reporte de resultados.
PRACTICA No. 1 MICROSCOPIA Introduccin El microscopio es un instrumento ptico que aumenta la imagen de los objetos. En los ltimos tres siglos ha permitido ampliar el campo de las investigaciones biolgicas y se ha convertido en el instrumento bsico para abrir nuevas fronteras en la biologa. La lupa puede considerarse como el microscopio ms simple y fue usada inicialmente por algunos investigadores para adquirir los primeros conocimientos del mundo microscpico. Posteriormente se perfeccion y en la actualidad existen varios tipos de microscopios, algunos de ellos altamente especializados para una gran variedad de usos. Entre los diferentes tipos podemos citar: microscopio simple, de fluorescencia, compuesto, de luz ultravioleta, de luz polarizada y electrnica. Anton Van Leeuwenhoek, Hans y Zacharias Jansen fueron tres holandeses que contribuyeron significativamente al desarrollo de la microscopa a principios del siglo XVII. Leeuwenhoek fue uno de los primeros en dejar constancia de sus observaciones, describiendo bacterias, protozoarios, glbulos rojos y espermatozoides. El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura interna de clulas, tejidos y organismos, hacer mediciones y estimar el tamao de una poblacin de microorganismos. El ojo humano solo puede discriminar (resolver) dos puntos separados por ms de 0,1mm (= 100m). La mayora de las clulas miden menos de ese tamao y las estructuras celulares son ms 10

pequeas an; por eso, para el estudio de las clulas, es necesario usar instrumentos que permitan observarlas de mayor tamao. Este instrumento es el microscopio. Los avances logrados en el campo de la microscopa han permitido examinar detalladamente la estructura ntima de las clulas. Los microscopios ms potentes que se han construido hasta el momento son los microscopios electrnicos; con stos se puede obtener una informacin directa de estructuras que oscilan entre 0,4 y 200 nm. Sin embargo, este tipo de microscopio es muy costoso y es difcil conseguir uno. El tipo de microscopio que es usado rutinariamente en el laboratorio de biologa es el microscopio ptico el cual se usara en las prcticas de este curso. Este microscopio combina dos lentes, el ocular y el objetivo, para aumentar la imagen. Objetivos: Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas funciones con la finalidad de manejarlo correctamente. Hacer el montaje de placas temporales y observar muestras. Determinar el tamao del campo visual del microscopio y adquirir destreza para calcular las medidas de estructuras celulares, clulas y organismos. Dar a conocer las unidades de medida de mayor uso en micrometra y reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biolgicas. Materiales Microscopio compuesto Portaobjetos Cubreobjetos Papel delgado con letras impresas Goteros Papel milimtrico Portaobjetos con escala micromtrica Ocular micromtrico Flor, una por mesa de trabajo (para observar granos de polen) Muestra fija en un portaobjetos
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Metodologa Es importante tener en cuenta los siguientes cuidados y precauciones al usar el microscopio:

Cuando se transporte el microscopio tmelo siempre con las dos manos. Nunca tenga objetos adicionales en sus manos. Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitelo a unos 10 o 15 cm del borde. Si se requiere limpiar los lentes utilice slo el papel y solucin destinada para tal fin. No utilice ningn otro tipo de papel. Nunca use el lente de inmersin si no se le ha solicitado hacerlo. Recuerde que se requiere el uso de aceite, y si no lo hace puede daar el lente. Cuando termine de trabajar deje el microscopio en el lente objetivo de 4X.
Preparacin de una placa temporal

Tome un portaobjetos y un cubreobjetos. Asegrese de que estn limpios. Coloque el portaobjetos sobre la mesa y deje caer una gota de agua en el centro de la placa. Recorte una o dos letras del papel suministrado y colquelo sobre la gota. Coloque el cubreobjetos sobre el portaobjetos formando un ngulo de 45 grados entre el portaobjetos y el cubreobjetos. Djelo caer lentamente para evitar la formacin de burbujas en la placa.
Observacin al microscopio
Recorte un trozo de diario de alrededor de 3x3 mm que incluya una letra e. Si es posible busque un trozo de diario impreso de un solo lado. Coloque una gota de agua en el centro del portaobjeto y deposite en ella el trozo de diario con la letra e. Apoye uno de los lados del cubreobjeto en el agua e inclnelo lentamente hasta que quede horizontal cubriendo el preparado.
Enfoque 12

Coloque el portaobjeto con el cubreobjeto sobre la platina del microscopio. Ubique el portaobjeto de modo que la letra e quede en el centro de la abertura de la platina. Emplee las pinzas de la misma para sostener el portaobjeto en posicin fija. Usando el tornillo macromtrico, baje lentamente el lente objetivo de menor aumento hasta que su extremo inferior est aproximadamente a 1 mm de la superficie superior del cubreobjeto. Evite que el lente objetivo golpee el preparado. Ahora mire a travs del ocular y eleve lentamente el tubo hasta que la impresin del peridico se haga visible. Si usted todava no ve ninguna imagen despus de haber elevado el objetivo hasta el tope superior significa que se ha pasado de la posicin de foco correcta. De ser as, vuelva a enfocar (nunca baje el tubo con el tornillo macromtrico, mientras estmirando por el ocular). Para ajustar el foco de manera ms precisa utilice el tornillo micromtrico. Un ajuste.
Conteste las siguientes preguntas:
Compare la posicin de la imagen de la letra e en el ocular, con la posicin de la letra e impresa (el objeto) sobre el portaobjeto. Mirando por el ocular, mueva lentamente el portaobjeto de derecha a izquierda y de arriba hacia abajo. Para qu lado se mueve la imagen en cada caso? Ahora haga girar el revlver porta-objetivos de modo que el objetivo de 40X este alineado al ocular. Al hacer esto, asegrese que el extremo inferior del objetivo no toque el cubreobjeto. Cuando el objetivo de gran aumento est en el foco correcto, su extremo inferior estar mucho ms cerca del cubreobjeto de lo
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que estaba el de menor aumento. La distancia entre el objetivo y el cubreobjeto se llama distancia libre de trabajo.
Al pasar a un aumento mayor qu sucede con el campo de visin, la posicin de la imagen y la iluminacin?
Calculo del aumento
Los distintos aumentos se refieren a la ampliacin de la imagen con respecto al objeto. Por ejemplo, si un microscopio aumenta el objeto 50 dimetros (50X) la imagen que usted ve es 50 veces ms larga y ancha que el objeto observado a simple vista, a una distancia de 25,4 cm. Grabado en cada objetivo y ocular hay un nmero que indica el grado de aumento que este suministra. El aumento combinado, producido por el objetivo y el ocular, es igual al producto de estos nmeros. Si, por ejemplo, el nmero del ocular es 5X y el del objetivo es de 12X, la ampliacin combinada es 12 x 5 = 60 dimetros (60X). Encuentre los nmeros de aumento sobre el ocular y los objetivos de un microscopio y calcule las ampliaciones obtenidas en cada combinacin ocular-objetivo.
Medicin con microscopio
Podemos medir de manera directa el dimetro del campo de visin correspondiente al menor aumento utilizando una regla milimetrada. De esta manera es posible estimar los objetos microscpicos que observamos con este aumento. (En microscopa, una de las unidades usadas comnmente es el micrmetro, cuyo smbolo es la letra griega seguido por una m 1/1000 mm = 1m) Cul es en mm, el dimetro del campo de menor aumento del microscopio utilizado? y en m? Cmo calculara el tamao del campo de visin de aumentos mayores de manera indirecta?
Tcnicas para el anlisis citolgico 14


El anlisis de las muestras con el MO puede realizarse de dos maneras diferentes dependiendo de la naturaleza del material y de los fines del estudio. Se denomina examen inmediato a la observacin de una clula o tejido, en estado vivo. Este permite tambin la observacin de movimientos celulares. Su aplicacin est restringida a lmites estrechos, pues se pueden emplear solamente con objetos muy delgados y transparentes. No permite realizar observaciones muy prolongadas, y muestra pocos detalles de la estructura celular.
Preparacin, observacin y estimacin del tamao de clulas (examen inmediato)

Clulas epiteliales humanas: - Limpiar con alcohol el portaobjetos y raspar con un borde la mejilla. - Extender el material recogido con el portaobjetos. - Colocar una gota de agua y una de azul de metileno. - Aplicar el cubreobjetos. - Observar al microscopio y dibujar las estructuras que observa. (Observar los preparados incrementando progresivamente el aumento). - Estimar de manera aproximada los tamaos de las clulas observadas, considerando la medida del dimetro del campo de visin calculado previamente.
Observacin de la muestra Colocar la placa ya preparada sobre la platina de tal manera que quede bien ajustada. Enfoque con el objetivo de 4X utilizando el tornillo macromtrico. Abra el diafragma hasta que obtenga una buena iluminacin de la muestra. Utilice el tornillo micromtrico para obtener mayor nitidez. 15

Luego gire lentamente el revlver para colocar el objetivo 10X. Utilice el tornillo micromtrico para obtener una imagen ntida. No utilice el tornillo macromtrico; ste no es necesario si usted enfoc correctamente con el objetivo de 4X. Si se requiere abra un poco el diafragma para aumentar la entrada de luz. Repita la operacin con el lente de 40X. Al terminar su observacin gire lentamente el revlver y coloque el objetivo de 4X y retire el portaobjetos. Cuando termine de usar el microscopio coloque el control de la luz en 0 y apague el microscopio. Desconctelo, enrolle el cordn y cbralo con el cobertor plstico. Guarde el microscopio en el locker correspondiente. Determinacin del poder de aumento: El poder de aumento es la capacidad que posee el microscopio para dar una imagen aumentada de un objeto. El microscopio compuesto consta de dos lentes que aumentan la imagen, los oculares y los objetivos. El poder de aumento del microscopio se calcula multiplicando el aumento del ocular por el aumento del objetivo utilizado. El ocular de los microscopios que se utilizarn en el laboratorio es de 10X. Cul ser el poder de aumento cuando se estn utilizando cada uno de los objetivos de 4X, 10X, 40X y 100X? Determinacin del dimetro del campo visual del microscopio: La informacin del tamao del dimetro del campo visual se utiliza para estimar el tamao de las estructuras o de los organismos que se estn observando en el microscopio. Es importante tener las medidas correspondientes para cada uno de los objetivos. Prepare una placa temporal con un pedacito de papel milimitrado. Enfoque con el objetivo de 4X y enfoque una lnea de tal forma que se visualice. Determine a cuntos milmetros y fracciones de milmetro corresponde el dimetro del campo visual. Anote este dato. _______________________ 16

Coloque la muestra en el objetivo de 10X y haga el mismo ejercicio. A cuntos milmetros o fracciones corresponde el dimetro? __________________________ Es la relacin entre el dimetro y el poder de aumento directa o inversa? __________________________ Cmo podra calcularse el dimetro de los lentes de 10X, 40X y 100X conociendo el valor del dimetro hallado utilizando el objetivo de 4X? _______________________ Anote los datos del dimetro del campo visual para cada uno de los objetivos. ______________________ Unidades ms utilizadas en mediciones microscpicas La mayora de organismos y estructuras que se estudian con el microscopio son muy pequeos. Las medidas ms comnmente usadas en microscopa son el angstrom (), la milimicra (m), la micra () y el milmetro. Las relaciones entre ellas son las siguientes:

1 mm = 1000 1 = 1000 m 1 m = 10
Teniendo en cuenta estos datos resuelva los siguientes ejercicios: A cuntas m equivale 1 ? ______________________
c. El dimetro del campo visual de un microscopio es de 1500 cuando se observa con un ocular de 10X y un objetivo de 10X. Cul ser el dimetro del campo visual si se observa con un objetivo de 40 X y el mismo ocular? 17

_______________ d. Un estudiante observ una clula al microscopio utilizando un objetivo de 10X y un ocular de 10X y se dio cuenta de que su tamao aproximado era de una cuarta parte del dimetro de ese campo visual. Si tal dimetro mide 1600 : Cunto mide la clula? Se observar completamente esa clula si se utiliza un objetivo de 40X y el mismo ocular de 10X? ______________________________________________________________________ Resultados Discusin Conclusiones Cuestionario 1) Por qu la denominacin de microscopio ptico compuesto? 2) Indique cules son los componentes de la parte mecnica y ptica de un microscopio ptico compuesto. 3) Con el microscopio ptico compuesto observamos mejor tejidos vivos o muertos? Fundamente su respuesta. 4) Qu objetivo utilizara para enfocar el preparado y obtener mayor campo visual? 5) Qu funcin cumple el condensador y el diafragma? 6) Qu objetivo utilizara para observar los detalles del campo visual? 7) Qu aumento obtendra con un ocular de 5X y un objetivo de 10 X? 8) Si usted mueve el portaobjetos hacia la derecha, hacia dnde se desplaza la imagen? 9) Cul es la diferencia entre aumento y poder de resolucin? 10) Qu es el poder de resolucin? 11) Cules son las caractersticas esenciales de las preparaciones para poder ser observadas correctamente con el microscopio ptico compuesto? Bibliografa
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1. Alberts, B. 2006. "Introduccin a la biologa celular". Madrid. Segunda edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pgs. 53572.Callen J. 2003. 2. Biologa celular: de las molculas a los organismos. Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 41-463.Cooper, G. 2002. 3. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.23254.Nelson J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 10125.Madigan, M. 2003.
PRCTICA No. 2 CLULAS PROCARITICAS Y EUCARITICAS INTRODUCCION Desde que Robert Hooke observ las celdas de corcho, otros cientficos se dieron a la tarea de investigar cmo estaban formados los seres vivos. Fueron tres de ellos quienes conformaron lo que conocemos ahora como la Teora Celular: el botnico Matthew Schleiden quien propuso a la clula como la unidad estructural de las plantas, el zologo Theodor Schawn que hizo lo mismo con los animales, y el mdico y fisilogo Rudolph Virchow que conjunt las propuestas anteriores y propuso que la clula se origina de otra 19

clula. Existen dos tipos de clulas en la naturaleza: las procariticas como las bacterias, que estn conformadas por una membrana celular, citoplasma, material gentico y ribosomas. Y las eucariticas como los protistas, hongos, plantas y animales, que adems de las estructuras de las bacterias, tienen organelos membranosos, con material gentico encapsulado en un ncleo. Todo esto se conoce gracias a la microscopa electrnica. Las clulas comparten muchas caractersticas estructurales, pero hay una clara diferencia entre la organizacin de las clulas procariticas y las eucariticas. En particular, las clulas de los procariotes (bacterias, algas verde-azules) son pequeas y simples. Tienen una membrana citoplsmica, generalmente delimitada por una pared celular rgida; un nucleoide que consta de una sola molcula de ADN circular y que representa todos los genes del organismo (genoma); y un citoplasma que contiene ribosomas y una gran variedad de molculas que median el metabolismo pero carecen de membranas internas permanentes. Al carecer de estas membranas sus clulas no poseen un ncleo, no poseen mitocondrias, ni cloroplastos, ni retculo endoplsmico, ni aparato de Golgi, ni lisosomas, ni peroxisomas, ni vacuolas. Si bien, algunas bacterias poseen flagelos, estos constan de un solo filamento, a manera de un solo microtbulo. No est presente, pues, el ordenamiento multifilar que se encuentra en los cilios y flagelos de otros organismos. El trmino procaritico se utiliza a menudo para distinguir las clulas de las bacterias y de las algas, de las clulas provistas de ncleo o eucariticas, de todos los dems organismos. Todos los procariotes son organismos unicelulares. En contraste, las clulas de los cuatro reinos de los organismos eucariticos (protistas, hongos, animales y vegetales) son ms grandes y estn caracterizadas por muchos compartimientos membranosos. La caracterstica primaria de las clulas eucariticas es el ncleo con sus cromosomas. El citoplasma que rodea al ncleo, limitado a su vez por la membrana, incluye una variedad de organelos, teniendo cada clase su propia organizacin estructural y funcin o funciones particulares en la clula. Adems de los organelos membranosos, como el retculo endoplsmico, al aparato de Golgi, las mitocondrias, los lisosomas, los cloroplastos (en las clulas fotosintticas) y otros, tambin hay ribosomas, centriolos, microfilamentos, microtbulos y una multitud de protenas suspendidas en la porcin citoslica del citoplasma. Una membrana rodea al citoplasma y sta misma puede estar delimitada por una pared celular rgida o por cubiertas superficiales de otras clases. En muchas clulas la superficie celular incluye especializaciones caractersticas, como los cilios o flagelos, las microvellosidades y las uniones con otras clulas en los tejidos. 20

Todas las clulas ofrecen similitud en la estructura de su membrana, en sus mecanismos para almacenamiento y transferencia de informacin y en su metabolismo; de modo que es posible que estos aspectos hayan evolucionado muy temprano y hayan sido retenidos desde entonces en todos los linajes descendientes. Los nuevos mtodos del anlisis molecular podrn aclarar estos hechos evolutivos fundamentales. OBJETIVO Establecer algunas diferencias morfolgicas entre clulas procariticas y eucariticas, as como entre clulas vegetales y animales mediante la observacin de las mismas. MATERIAL Lupa Microscopios Porta y cubreobjetos Hisopos estriles Mechero Bunsen Caja Petri Gotero Aguja de diseccin Navaja Asa bacteriolgica MATERIAL BIOLOGICO Agua de estanque o de acuario (agua verde) Pan y frutas con mohos Cultivo bacteriano Raspado de carrillo REACTIVOS: Lugol Fucsina bsica Cristal violeta Alcohol de 90 Azul de metileno TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE BACTERIAS: 1. Disolver en una gota de agua sobre un portaobjetos, una pequea porcin de colonia bacteriana y con sta se realiza un frotis o extensin. Enseguida fijarlo a la llama de un mechero bunsen, para 21

esto pasar varias veces el portaobjetos sobre la flama cuidando que no hierva la preparacin. 2. Coloca dentro de una caja Petri el portaobjetos, cubrindolo con la solucin de cristal violeta por un minuto. Lavar al chorro de agua cuidando que no se arrastre la muestra. 3. Agrega una gota de lugol, dejar 1 minuto y lavar al chorro de agua. 4. Decolorar con alcohol de 90. Esta operacin debe ser rpida para que no se elimine todo el colorante. 5. Cubrir con fucsina bsica por medio minuto. Escurrir el colorante y lavar al chorro de agua. 6. Dejar secar la preparacin al aire. 7. Observar al microscopio con objetivo de inmersin. Algunas bacterias se vern teidas de color rosa y otras de violeta. 8. Hacer esquemas de las observaciones, sealando con su nombre las estructuras que se puedan distinguir. TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE PROTOZOARIOS Y ALGAS: 1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de agua verde de estanque o bien raspar las paredes de un acuario con un portaobjetos. 2. Colocarle un cubreobjetos para observar en el microscopio con los objetivos seco dbil y seco fuerte. 3. Realizar esquemas de los organismos observados y sealar los nombres de las estructuras que se puedan visualizar. TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE MOHOS (HONGOS PLURICELULARES) 1. Colocar algunas hifas sobre un portaobjetos (desprender el moho del pan y verduras mediante una aguja de diseccin, con movimientos suaves para no destruirlo). 2. Cubrirlas con una solucin de azul de metileno por 2 minutos. 3. Escurrir el colorante con cuidado y colocar un cubreobjetos sobre las hifas. Observar a seco dbil. Realizar los esquemas correspondientes, sealando las estructuras visibles. OBSERVACIONES CON DIBUJOS CONCLUSIONES 22

CUESTIONARIO 1. Cules fueron las diferencias que observaste al microscopio entre las clulas eucariontes y procariontes? 2. Clasifica las clulas observadas en: Procariotas y Eucariotas 3. Mencionar una diferencia estructural entre las clulas vegetales y animales observadas al microscopio.
BIBLIOGRAFIA Alberts, B. 2006. "Introduccin a la biologa celular". Madrid. Segunda edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pgs. 53-572.Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos. Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 41-463.Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.23-254.Nelson J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 10-125.Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Dcimaedicin. Editorial Prentice-Hall. Pgs. 17-22
PRACTICA No. 3 DIVERSIDAD CELULAR
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INTRODUCCION La clula es la unidad bsica funcional y estructural ms pequea de los organismos vivos. Se compone de partes caractersticas, cuyo trabajo est coordinado de tal manera que cada tipo de clula lleva a cabo una funcin estructural bioqumica nica. Las clulas realizan numerosas reacciones qumicas para dar origen al proceso vital que se lleva a cabo de manera compartamentalizada; es decir, estructuras especializadas dentro de la clula efectan reacciones qumicas aisladas, las cuales estn coordinadas unas con otras para mantener con vida tanto la clula como los tejidos, rganos, sistemas y todo el organismo. Regulan el flujo de entrada y de salida de los materiales a fin de asegurar las condiciones ptimas para el proceso vital prevaleciente dentro de ellas. Asimismo, utilizan su informacin gentica para guiar la sntesis de la mayora de sus componentes y dirigir gran parte de sus actividades qumicas; entre stas, la generacin de ATP, por desdoblamiento de los nutrientes, la sntesis molecular, la transportacin de las molculas dentro y entre las clulas, la remocin de los desechos y el movimiento parcial o incluso de toda la clula. Las unidades bsicas de todos los organismos tienen muchas caractersticas en comn, pero no todas ellas poseen todo el conjunto de componentes. Caractersticas de las clulas animales, clulas vegetales y protistas. Las clulas animales se pueden distinguir fcilmente de las vegetales en virtud de marcadas diferencias. Los animales poseen ciertos sistemas organizados caractersticos, son capaces de moverse por s mismos y dependen completamente de sustancias preformadas para obtener energa y carbono; stas son nicamente algunas de sus caractersticas ms notorias. Las plantas superiores contienen el pigmento verde llamado clorofila, lo que les permite efectuar la fotosntesis, son generalmente inmviles y tienen sistemas organizados de manera peculiar. Un nmero considerable de organismos unicelulares exhiben caracteres tanto de plantas como de animales, a estos como poseen esta peculiaridad los clasifican como protistas. Caractersticas exclusivas de la clula animal. Centrosoma, cilios y flagelos. Virtualmente todas las clulas animales y un escaso nmero de clulas vegetales muy primitivas o inferiores, tienen una estructura citoplasmtica, llamada centrosoma. En la clula en reposo se presenta usualmente cerca del ncleo a manera de una pequea regin ms clara con fibras radiadas a manera de una estrella y una o dos pequeas granulaciones que se tien profundamente en su parte central, a las que se les ha dado el nombre de centriolos. 24

Las clulas de las plantas superiores no tienen centrosoma, aunque en su lugar presentan dos pequeas reas claras durante la divisin celular a las que se les llama casquetes polares, que aparentemente tienen la misma funcin que el centrosoma durante la divisin celular. Adems, el centrosoma controla la actividad y la formacin de los cilios y flagelos, estructuras citoplasmticas filamentosas y distendidas que se proyectan a partes de la superficie externa de la membrana celular en cierto tipo de clulas. Los cilios son relativamente cortos y se presentan en gran cantidad, mientras que los flagelos son considerablemente ms largos y en menor nmero. Ciertos organismos unicelulares poseen un gran nmero de cilios o flagelos que se mueven rtmica y coordinadamente; pueden contarse por cientos y son los causantes de la movilidad de estas formas unicelulares. Ciertos epitelios que tapizan las superficies internas del organismo, tales como la trquea humana, poseen grandes cantidades de cilios. Estos movimientos coordinados originan corriente de fluidos y de aire hacia el exterior de la superficie celular, expulsando partculas extraas pequesimas que penetran a la trquea. Los flagelos tambin se encuentran en muchos organismos unicelulares y en la gran mayora de las clulas espermticas de animales y vegetales. Su accin, a manera de ltigo, favorece la movilidad de estas clulas. OBJETIVO: Establecer las semejanzas y diferencias entre las clulas vegetales y animales. MATERIAL: Microscopio compuesto. Porta y cubreobjetos. Gotero con bulbo. Corcho de botella. Navaja de rasurar nueva. Pinzas. Lancetas estriles. Torundas con alcohol. Tubos al vaco Vacutainer de tapa morada. Ligadura Tubos de ensayo de 13 x 100 mm. Centrfuga clnica. Frascos de boca ancha limpios y secos Pipeta Pasteur MATERIAL BIOLGICO 25

Bulbo de cebolla. Sangre Semen Orina Polen de diferentes flores Elodea REACTIVOS Solucin de Locke Azul de metileno al 1% Colorante de Wright Buffer de Fosfatos Aceite de inmersin TCNICA PARA LAS CLULAS DEL CORCHO 1. Toma el corcho con la mano izquierda, sujeta firmemente y corta una rebanada muy fina colocando la navaja un poco oblicua a la superficie. 2. Cuando se haya obtenido el corte lo suficientemente delgado, se coloca en un portaobjetos y se le agrega una gota de agua y se cubre. 3. Debe evitarse las burbujas de aire. 4. Obsrvese con menor aumento sobre todo las orillas del corte donde habitualmente es ms delgado. 5. Dibuja una pequea porcin de este material e indica la forma y el tamao de las clulas.6.Responde lo siguiente: a) Qu estructura se ve dentro de ella? b) Qu parte de la clula es la que evita que el agua penetre en las clulas? TCNICA PARA LAS CLULAS DE CEBOLLA 1. Corta un bulbo de cebolla en 4 partes, se observar que cada parte se separa por s sola en capas llamadas envolturas u hojas. 2. Toma una de estas escamas con la superficie cncava y rmpela. Entonces observars que se desprende con facilidad una capa muy delgada y transparente que es la epidermis. 3. Toma un fragmento y colcalo sobre un portaobjetos con una gota de agua de modo que la superficie que estaba en contacto con la escama quede hacia arriba. Usa un fragmento de epidermis de no ms de 1 cm2 y cbrelo con un cubreobjetos. 4. Observa con menor aumento y contesta lo siguiente: a) Cmo se aprecia la morfologa de las clulas y sus paredes? 5. Retira la preparacin de la platina del microscopio y coloca una gota de azul de metileno de un lado de la preparacin, en el borde del cubreobjeto para que la solucin entre por capilaridad. Observa primero con el objetivo 10X y despus pasea 40X. 26

Conteste lo siguiente: a) Cul es el color y la forma del ncleo? Observa los ncleos con seco fuerte. b) Cul es la ubicacin de este organelo en la clula? Alrededor del ncleo se encuentra una sustancia granular que se ha teido ligeramente que es el citoplasma, descrbelo. Compara las clulas de la cebolla con las del corcho, En qu difieren? En qu se asemejan? c) Consideras que las formas y tamaos celulares estn relacionados con las funciones de las mismas? TCNICA PARA LAS CLULAS DE POLEN: 1. Colocar unas partculas de polen sobre un portaobjetos 2. Agregar una gota de alcohol al 96 para disolver el aceite 3. Quitar el aceite que queda alrededor del portaobjetos con un papel filtro 4. Agregar una gota de verde de metilo 5. Colocar el cubreobjetos y observa al microscopio Dibuje sus observaciones y compare diferentes granos de polen. TCNICA PARA LAS CLULAS DE ELODEA Tomar un pequeo fragmento de la hoja y colocarlo sobre el portaobjetos Agregar una gota de agua, poner un cubreobjetos y observar a seco dbil y seco fuerte. TCNICA PARA EXTRACCIN DE SANGRE VENOSA Se fija la vena en posicin, sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen los tejidos blandos situados debajo de donde se va a puncionar. Se toma el material del vacutainer y haciendo un ngulo de 15con el brazo, se perfora la piel a lo largo de la cara lateral de la vena.
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Se hace avanzar la punta de la aguja debajo de la piel de 0.5 a 1 cm y luego se perfora la pared de la vena. La introduccin se hace con suavidad pero con suficiente rapidez para reducir las molestias. Una vez que est saliendo la sangre, se retira la ligadura para evitar hemlisis. Cuando la aguja haya penetrado la vena, se introduce el tubo en el maneral de sujecin, el que se mantiene fijo con la otra mano, hasta que el tapn del tubo sea atravesado por la aguja situada dentro del maneral. Una vez que el tubo se llen, se extrae y se repite la operacin con tantos tubos como sea necesario. Se invita al paciente a abrir su puo. La aguja se retira en sentido inverso a como se introdujo tambin de manera suave pero con un solo movimiento. De inmediato, se coloca una torunda impregnada de alcohol en el sitio de puncin, ejerciendo presin sobre la zona y mantenindola as por lo menos de 3 a 4 minutos para evitar la formacin de hematomas. Una vez extrada la muestra, es indispensable mezclarla, invirtiendo la muestra para que se mezcle con el anticoagulante y de esta manera evitar una posible coagulacin de la misma. FROTIS DE SANGRE: 1. Coloca una gota de sangre en el extremo de un portaobjetos y con otro extiende hacia el otro extremo. Secar el frotis al aire. 2. Una vez seco el frotis se coloca en un puente de tincin, para realizar la tincin de Wright de la siguiente manera: con un gotero, agregar colorante de Wright a todo el frotis y dejarlo reposar 5 minutos, una vez pasado el tiempo agregar sobre el mismo colorante con otro gotero buffer de fosfatos y dejarlo reposar durante 15 minutos, a intervalos de 5 minutos, soplar sobre el frotis con una pipeta Pasteur hasta observar la presencia de capa verde metlica. 3. Una vez cumplido el tiempo, quitar el colorante al chorro de agua durante 5 30 segundos. Despus del lavado, quitar el exceso de agua inclinando el frotis y tocando con un papel secante el borde inferior. Limpiar la parte posterior del portaobjetos. 4. Secar las preparaciones al aire. 28

5. Para montar la preparacin al microscopio, se deber agregar una gota de aceite de inmersin y observar a 100X. Dibuje las diferentes clulas sanguneas que pueden ser observadas en un frotis. a) Cul es el color y la forma del ncleo? Observa los ncleos con seco fuerte, b) Cul es la ubicacin de este organelo en la clula? Alrededor del ncleo se encuentra una sustancia granular que se ha teido ligeramente que es el citoplasma, descrbelo. TCNICA PARA LA TINCIN DEL SEMEN Esta muestra preferentemente deber estar lista pocos minutos antes de la realizacin de la prctica, para observar la movilidad de los espermatozoides. Una vez que se tiene la muestra, colocar una gota de semen en el centro de un portaobjetos, agregar una gota de azul de metileno al 1% y cubrirla con un cubreobjetos. Observar la muestra a 10 y 40X, realizando dibujos de las estructuras observadas. TECNICA PARA LA OBSERVACION DE SEDIMETNO URINARIO
ELABORE UNA OBSERVADAS
TABLA
COMPARATIVA
DE
LAS
CELULAS
OBSERVACIONES CON DIBUJOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1) Qu diversidad celular se encuentra en el frotis de sangre? 2) En el frotis de semen Qu clulas identificas? Todos son normales? 3) Qu funcin tienen cada una de las clulas sanguneas? 4) Qu analoga estructural existe entre los espermatozoides y los protozoarios?
Solucin de Locke: solucin para estudios in vitro con corazn aislado compuesto por cloruro sdico 0.9%, cloruro de calcio 0.0024%, bicarbonato de sosa 0.01% y glucosa 0.1% BIBLIOGRAFA 29

Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Panamericana. Pgs. 42-472.Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segunda edicin. Editorial Revert. Pgs. 23-293.Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial Limusa. Pgs. 176-1844.Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial McGraw Hill. Pgs. 5658, 121-124, 1285.Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial Nueva Imagen. Pgs. 101-108
PRCTICA No. 4 PERMEABILIDAD CELULAR INTRODUCCION Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor parte son fsicos. Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria como al celofn, por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos utilizando clulas vivas, como en este caso sern glbulos rojos. El movimiento de agua de adentro hacia afuera de las clulas est influido por la semipermeabilidad de la membrana celular, o sea, su capacidad de permitir el paso de ciertas molculas o bien impedrselo (Fig. 1). El trmino smosis se deriva de la palabra griega que significa empujar. La tendencia de empujar sus molculas desde la porcin 30

ms concentrada hacia la menos concentrada, puede ser el resultado de una fuerza que llamamos presin osmtica. Puesto que la presin osmtica depende de la concentracin de los materiales en suspensin, mientras ms grande es la concentracin mayor es la presin osmtica y, el objetivo de esta es igualar la concentracin de las molculas de agua en ambos lados. En los lquidos de cualquier clula viva se encuentran sales, azcares y otras sustancias en solucin; el liquido tiene, pues, cierta presin osmtica. Cuando la clula se sumerge en un lquido con la misma presin osmtica, no hay movimiento neto de molculas de agua dentro ni fuera de la clula; esto es que la clula ni se hincha ni se encoge, por lo que se dice que se encuentra en un medio isotnico o isosmtico respecto a la clula. Normalmente el plasma sanguneo y todos los lquidos del organismo son isotnicos pues contienen la misma concentracin de sustancias disueltas que en las clulas. Si la concentracin de las sustancias disueltas en el lquido circundante es mayor que la existente dentro de la clula el agua tiende a salir de la clula, por lo que esta se contrae. Este lquido es hipertnico respecto a la clula, es decir, que tiene una concentracin mayor de solutos. Si el lquido tiene menos sustancias disueltas que la clula, es hipotnico, es decir que tiene menor concentracin de solutos. Cuando una clula se coloca en una solucin no isotnica, puede ajustarse al nuevo medio por modificacin de su contenido de agua, para lograr finalmente la misma concentracin que el medio; a esto se le conoce como regulacin del volumen intracelular. Muchas clulas pueden impeler agua o ciertos solutos hacia uno u otro lado de la membrana plasmtica, de manera que en esta forma mantienen una presin osmtica distinta de la del medioambiente. La existencia de la membrana plasmtica que rodea las clulas, funciona como una especie de "muro comunicante" que separa dos compartimentos, el extracelular y el intracelular. Esta separacin trae como consecuencia que las diferentes molculas e iones se distribuyan de manera asimtrica estableciendo diferenciales de concentracin y cargas elctricas que promueven el intercambio entre ambos compartimentos. Estas molculas e iones, pueden atravesar las membranas biolgicas mediante diferentes mecanismos, dependiendo de la naturaleza polar, el tamao de ellas y la diferencia de concentracin. Dentro del grupo de molculas que pueden atravesar las membranas, el paso de agua es muy importante para las clulas, porque utiliza un mecanismo particular que puede contribuir a disminuir diferencias extremas en las concentraciones de las sustancias disueltas entre los compartimentos, permitir la adaptacin celular al medio ambiente o causar la destruccin de la misma. Este flujo de agua y/o de diferentes sustancias puede traer 31

como consecuencia cambios en la morfologa de clula que pueden ser apreciables al microscopio y que el estudiante aprender a identificar en esta prctica. Es por esto, que antes de iniciar este laboratorio los alumnos debern consultar con anterioridad acerca de los diferentes mecanismos de transportes de molculas por las membranas con permeabilidad selectiva.
Fig. 1 Permeabilidad de la membrana OBJETIVOS: Observar y comparar el efecto de diversas sustancias qumicas a travs de la difusin en una membrana celular por medio de la hemlisis. Comparar los procesos fsicos de difusin y osmosis con el proceso fisiolgico mediante el cual las molculas se transportan a travs de las membranas celulares.
MATERIAL 5 tubos de ensayo 13 x100 mm 1 gradilla 2 pipetas graduadas de 5 ml Cronmetro Equipo para venopuncin Porta y cubre objetos Papel milimetrado Lancetas estriles Hojas de bistur Alcohol antisptico Algodn
Goteros
MATERIAL BIOLOGICO Sangre Hojas de Elodea 32


Hojas de lirio REACTIVOS Glicerol 0.5 M Glucosa 0.5 M Solucin de urea 0.5 M Solucin de etilenglicol 0.5 M
Solucin de permanganato de Potasio
Solucin isotnica (NaCl 0.9%) Solucin Hipertonica (NaCl 2.5 %) Solucin Hipontonica (NaCl 0.2 %) TCNICA PARA DETERMINAR EL PESO MOLECULAR Preparar una serie de 4 tubos marcados de la siguiente manera, utilizando la sangre que se extrajo por venopuncin con previas indicaciones del maestro. Tubo No. 1 2 3 4 2 ml de sol. 0.5 M Urea Etilenglicol Glicerol Glucosa Peso molecular Suspensin de eritrocitos 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas Tiempo de hemolisis
Es importante utilizar una pipeta limpia y diferente para cada sustancia. Centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos y observar tanto macroscpica como microscpicamente si se presenta la lisis.
PROCEDIMIENTO: Difusin: Coloque en tres tubos de ensayo 5 ml de agua destilada, a igual temperatura y numrelos. Agregue en cada tubo un nmero de gotas de permanganato de potasio en la siguiente forma: Tubo No. 1 = 1 gota 33

Tubo No. 2 = 3 gotas Tubo No. 3 = 5 gotas Mida el tiempo de difusin en cada caso (ver Figura No. 1). Para ello anote el tiempo inicial cuando se agreg el colorante y el tiempo final en que se difundi totalmente. La diferencia entre ambos es el tiempo de difusin. Haga una grfica en papel milimetrado de concentracin No. De gotas contra tiempo de difusin.
Figura No 2. Tiempo de difusin de KMnO4 Osmosis: a) Deposite una hojita de Elodea en un portaobjeto, adicione tres gotas de solucin hipotnica, pngale el cubreobjetos y observe con menor y mayor aumento. Fig. 2. Dibuje. Observa algn movimiento en los cloroplastos? Qu nombre recibe este fenmeno? Segn el concepto de osmosis en qu sentido se debe difundir el agua? b) Deposite una hoja de Elodea en un portaobjetos y agrguele tres gotas de una solucin hipertnica de cloruro de sodio, pngale el cubreobjetos y observe con menor y mayor aumento. Haga un esquema de lo observado. Qu cambios se presentan en el citoplasma de las clulas que usted observa? Qu nombre recibe este fenmeno?
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a b c Figura No. 3 Clula vegetal en: a. Medio hipertnico; b. Medio isotnico y c. Medio hipotnico Plasmlisis: a. Extraiga con un bistur un pedacito de epidermis del envs de una hoja de lirio, trate que quede libre de clorofila. Cuidando que no se arrugue depostela en el portaobjetos y adicinele tres gotas de solucin hipotnica. Ponga el cubre objeto y observe. Dibuje b. Haga un nuevo montaje de epidermis de hoja de lirio, pero con una solucin hipertnica. Observe y dibuje. En cul de las dos muestras, elodea y epidermis de hoja de lirio, se observa mejor el fenmeno de plasmlisis? Explique Por qu? Interprete que sucede en cada una de las preparaciones sanguneas. OBSERVACIONES CON DIBUJOS DISCUSION CONCLUSIONES CUESTIONARIO Por qu se dice que la membrana tiene permeabilidad selectiva? Por qu se dice que la bicapa de la membrana constituye una barrera natural? Cules con los factores que afectan la velocidad de difusin a travs de la membrana celular Cmo est constituida la membrana celular de tal manera que permite la permeabilidad? Si se vara la temperatura del agua en los tubos de la figura No.1: a) Qu efecto tiene la temperatura sobre la velocidad de difusin? b) Cul es el efecto de la concentracin sobre la velocidad de difusin? c) Investigue la ley de difusin de Graham y la primera ley de Fick. 35

Qu diferencia observ entre las clulas de elodea y la epidermis de lirio? Cmo se llaman las estructuras respiratorias que hacen parte del tejido de epidermis de lirio? Defina qu son soluciones iso, hipo, e hipertnicas? Por qu no estalla una clula vegetal cuando se encuentra en un medio hipotnico? Qu es permeabilidad diferencial? Qu es presin osmtica? Qu es presin de turgencia? Por qu no estallan los glbulos rojos cuando estn circulando por nuestros vasos sanguneos? Qu es crenacin? Qu es homestasis? A que se le llama transporte pasivo? En qu consiste el transporte activo y el facilitado? Cul es la diferencia entre smosis y dilisis? Cmo regula el organismo humano el mantenimiento de la concentracin de sales en la sangre? BIBLIOGRAFA Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Decima edicin. Editorial Prentice-Hall. Pgs. 63-682.Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segunda edicin. Editorial Revert. Pgs. 55-613.Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F. Primera edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 89-914.Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial McGraw Hill. Pgs. 3439
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PRCTICA No. 5 FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS INTRODUCCION Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor parte son fsicos. Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria como al celofn, por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos utilizando clulas vivas, como en este caso sern glbulos rojos. La forma de disco bicncavo del eritrocito normal, implica un exceso de extensin superficial con relacin a su volumen, lo que le proporciona una gran capacidad de deformabilidad. Como la membrana eritrocitaria es semipermeable, cuando los eritrocitos son colocados en una solucin hipotnica, el agua entra osmticamente haciendo que aumente el volumen y adquiere la forma esfrica. Con ello, la superficie disminuye respecto a su volumen dando a la clula cierto grado de rigidez que interfiere con el paso de la misma a travs de pequeas aberturas, por lo que fcilmente se rompe. Otro fenmeno adicional es la salida de hemoglobina, que es permitida por el estiramiento de la membrana eritrocitaria. En esta prctica se harn una serie de diluciones de NaCl, de concentracin progresiva, en las que los eritrocitos problema se sometern a diferentes concentraciones y se valorar la concentracin de NaCl que produce la hemlisis en comparacin con una sangre normal. La prueba de fragilidad osmtica es una medida de la resistencia del eritrocito, a la hemlisis por estrs osmtico, la cual depende principalmente del volumen de la clula, del rea de su superficie y de la funcin de su membrana (Ver Fig. 8.1). Los eritrocitos se incuban en solucin hipotnica de NaCl, los eritrocitos absorben agua en un esfuerzo para conservar o para lograr el equilibrio osmtico, y las clulas se hinchan hasta que se forma un esferocito. La captacin adicional del agua produce una membrana porosa que permite la liberacin de hemoglobina (hemlisis). Las clulas normales comienzan a hemolizar a concentraciones de NaCl cercanas a 0.50% y la hemlisis es completa a una concentracin aproximadamente de 0.30 % de NaCl. Debido a la disminucin en la proporcin de superficie a volumen, los esferocitos son incapaces de expandirse tanto como las clulas normales de forma discoide. Se necesita absorber muy poco lquido antes que las clulas se hemolicen. Los esferocitos tambin tienen un aumento en la 37

permeabilidad de la membrana, la cual contribuye al aumento de su fragilidad. OBJETIVO: Aprender a realizar la determinacin de la fragilidad osmtica de los eritrocitos para demostrar el fenmeno de osmosis. MATERIAL Centrfuga Gradilla 16 tubos de ensayo de 13 x 100 mm Equipo de venopuncin Papel parafilm Pipetas graduadas de 5 ml Pipeta graduada de 0.2 ml MATERIAL BIOLGICO Sangre obtenida con EDTA REACTIVOS: Solucin salina al 1% tamponada, pH 7.4 TECNICA
Se obtienen 5 ml de sangre venosa y se mezclan perfectamente. Se colocan 16 tubos de ensayo en una gradilla y se numeran de izquierda a derecha. Montar la prueba de la siguiente manera:
No. de tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 38
ml de sol salina ml de agua destilada al 1% tamponada 3.8 3.6 3.4 3.2 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0
Concentracin de la solucin (%) 0.76 0.72 0.68 0.64 0.60 0.56 0.52 0.48 0.44 0.40

11 12 13 14 15 16
1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8
3.2 3.4 3.6 3.8 4.0. 4.2
0.36 0.32 0.28 0.24 0.20 0.16
Mezclar del contenido de los tubos.5.Agregar a cada tubo 0.2 ml de sangre. Invertir cuidadosamente cada tubo con papel parafilm, para asegurar la mezcla. Las gradillas que contienen los tubos se dejan reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Transcurrido el tiempo indicado se mezcla cuidadosamente su contenido y se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 5 minutos. Examinar los tubos observando macroscpicamente en qu punto comienza la hemlisis y en qu punto es completo. El menor indicio de color rojo en el lquido sobrenadante indica el inicio de la hemlisis de los glbulos menos resistentes; la hemlisis completa queda indicada por una solucin rojo claro y ausencia de eritrocitos residuales en el fondo del tubo enturbiamiento al agitar el tubo ligeramente.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1) Qu es la fragilidad osmtica? 2) Qu es osmolaridad? 3) Qu importancia clnica tiene la fragilidad osmtica? BIBLIOGRAFA
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Balcells, A. 1998. La ciencia y el laboratorio. Medicina. Barcelona,Espaa. 18 Edicin. Editorial Masson-Salvat. Pgs. 87932.Mckenzie, S. 2000. Hepatologa clnica Editorial El Manual Moderno. Segunda edicin. Mxico D.F. Pgs. 104-1123.Lynch, M. 1992. Mtodos de laboratorio. Mxico. Segunda edicin.Editorial interamericana. Pgs. 358-3654.Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena edicin. Editorial Oxford. Pgs. 68-70, 622-626.
PRACTICA No. 6 OBSERVACION DE CROMOSOMAS INTRODUCCION Todos los seres vivos, uni- y pluricelulares tienen como misin fundamental la de reproducirse preservando sus caractersticas esenciales a travs de las generaciones. Los fenmenos que tienen lugar durante la reproduccin celular corresponden a una de las etapas del proceso conocido como ciclo celular. Este ciclo resulta de la coordinacin de una serie de procesos que involucran la integracin de diferentes seales que conducen a la duplicacin de DNA, su condensacin, segregacin y posterior des condensacin. Dentro de este ciclo, la mitosis es la etapa durante la cual una clula da origen a dos clulas hijas con igual dotacin de cromosomas. Aunque la mitosis, de por s es un proceso continuo, para su estudio se divide en diferentes etapas consecutivas de acuerdo a los cambios morfolgicos que va experimentando la clula y que se continan con la citocinesis. Se conocen dos tipos de cromosomas de gran tamao, los politnicos y los plumulados, la caracterstica es su enorme tamao de unas 1000 veces ms que los cromosomas somticos, la longitud va desde las 1200 a 2000 y su dimetro entre las 4 y 5 . Para encontrar a estos cromosomas vamos a tener que conseguir larvas de una mosca muy difundida en todo el mundo, la Drosophila, es la mosquita de la fruta. Estas larvas en sus glndulas salivales tienen cromosomas gigantes politnicos. Esta mosca es muy frecuente verla cuando dejamos a la sombra algn cesto con frutas, inmediatamente 40

estas estn merodeando y revoloteando sobre ellas, son muy pequeitas comparadas con las moscas comunes y en general tienen los ojos rojos. La hembra es ms grande que el macho. Esta mosca desde 1909 luego de un trabajo de Thomas Morgan pas a ser el insecto ms usado en gentica experimental debido a su econmica reproduccin, rpida descendencia y amplia distribucin en todo el mundo. OBJETIVO Observar e identificar los cromosomas por su tamao y posicin centromrica en Drosophila. Como conseguir las larvas Medio de cultivo Para ver los cromosomas gigantes necesitamos larvas, las cuales cultivaremos en un medio casero que podemos preparar as: 1 banana o pltano 1 cucharada grande de levadura de cerveza 1,5 cucharada grandes de Maicena o fcula 1 cucharada de yogur natural 1,5 cucharada de vinagre de alcohol taza de agua caliente. Se colocan todos los ingredientes haciendo una papilla, luego se le agrega a la misma la media taza de agua bien caliente, se mezcla y se reparte en botes de unos 10 cm de dimetro, el lquido debe alcanzar 1,5 a 2 cm en el bote. Antes de colocar la mezcla en el bote conviene hervir la papilla antes que leude la levadura. Hay otros medios de cultivos, pero este funciona bien y los ingredientes los tenemos en casa. El ciclo de la mosca a unos 25 C es de unos 10 das, de huevo pasa a larva de larva a pupa y de pupa a adulto, ms o menos a partir de los 6 o 7 das veremos el movimiento de las larvas que suben por las paredes del bote. MATERIAL 41 Larvas de Drosophila

Agujas de diseccin Portaobjetos y cubreobjetos Papel filtro Mechero de alcohol Cajas de Petri
REACTIVOS Solucin salina fisiolgica Orceina actica Alcohol- actico (3:1) Alcohol absoluto Resina sinttica
TECNICAS PARA OBTENER LAS GLANDULAS SALIVALES

1. Poner la larva sobre un portaobjetos en una gota de solucin salina 2. Separar la cabeza con una aguja de diseccion en la mano derecha, mientras se presiona el cuerpo con otra aguja en la mano izquierda. 3. Las glndulas salivales saldrn cuando cesa la presin. Pasralas a un portaobjetos limpio.
METODO DEL SQUASH-ORCEINA-ACETICA (para glndulas salivales de larvas de Drosophila)

colocar las glndulas en una gota de colorante (orceina-actica), durante 10 minutos, en este tiempo calentar muy suavemente 3 o 4 veces. El colorante no debe hervir ni secarse. Cubrir con un cubreobjetos, invertir la preparacin sobre papel filtro y presionar ligeramente con el dedo pulgar.
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Observar al microscopio compuesto a 10x y 40x
Para hacer permanente instrucciones
la
preparacin
siga
las
siguientes
a) Invertir la preparacin en una caja de Petri con tapadera, que contiene papel filtro humedecido con alcohol-actico (3:1), el cubreobjetos se podr separar, con ayuda de la aguja de diseccin, despus de 5 a 15 minutos. b) Pasar porta y cubreobjetos por alcohol absoluto (dos cambios de un minuto cada uno) c) Montar en resina
OBSERVACIONES CON DIBUJOS DISCUSION CONCLUSIONES CUESTIONARIO

1. Cul es el objetivo de la practica? 2. Explique que es un cromosoma gigante 3. En qu organismos se pueden encontrar los cromosomas gigantes? 4. Qu es la orceina y de donde se obtiene? 5. Explique el mecanismo de accin de la orceina actica
BIBLIOGRAFIA Ashburner, M., 1989. Drosophila: A laboratory Handbook. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Darlington, C.D. y L.F. La Cour 1962. The Hnading of Chromosomes. Fourth Edition, Geroge Allen and Whwin Ltd., pp. 7-71, 158. 43

PRACTICA No. 7 MITOSIS (OBSERVACION EN CELULAS VEGETALES) INTRODUCCION
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Todos los seres vivos, uni- y pluricelulares tienen como misin fundamental la de reproducirse preservando sus caractersticas esenciales a travs de las generaciones. Los fenmenos que tienen lugar durante la reproduccin celular corresponden a una de las etapas del proceso conocido como ciclo celular. Este ciclo resulta de la coordinacin de una serie de procesos que involucran la integracin de diferentes seales que conducen a la duplicacin de DNA, su condensacin, segregacin y posterior descondensacin. Dentro de este ciclo, la mitosis es la etapa durante la cual una clula da origen a dos clulas hijas con igual dotacin de cromosomas. Aunque la mitosis, de por s es un proceso continuo, para su estudio se divide en diferentes etapas consecutivas de acuerdo a los cambios morfolgicos que va experimentando la clula y que se continan con la citocinesis. Durante esta prctica, el estudiante identificar los principales cambios morfolgicos que se presentan durante la profase, metafase, anafase, telofase y citocinesis en clulas meristmaticas de races de cebolla; OBJETIVOs Valorar la importancia de la divisin celular en el desarrollo, el crecimiento y la reposicin de clulas en tejidos desgastados. Ejecutar adecuadamente la tcnica de laboratorio en la preparacin de placas permanentes de mitosis, con la finalidad de identificar mediante observacin microscpica las diferentes fases de la mitosis en raz de cebolla. MATERIAL
Meristemos de races terminales de Allium cepa Agujas de diseccin con la punta quemada y oxidada Hojas de afeitar Vidrio de reloj Tubos de ensayo Portaobjetos Cubreobjetos
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Papel filtro Mechero de alcohol
REACTIVOS
Orceina-acetica al 1% Acido actico al 30% Alcohol de 96 Fijador ablandador de Hernndez-Corzo Alcohol 96-acido actico 1:1 Alcohol Absoluto-acido actico 3:1 Alcohol absoluto Xilol
TECNICA
1. Cortar aproximadamente dos milmetros de las puntas de los meristemos, ponerlas en un tubo de ensayo con 2 ml de fijador ablandador y calentar a ebullicin suave por 1 minuto, verter el contenido del tubo en un vidrio de reloj, escurrir el lquido y secar las puntas de los meristemos con papel filtro. Poner uno o dos meristemos en un portaobjetos y agregarles una gota de orceinaacetica, con la hoja de afeitar hacer cortes transversales y longitudinales, terminar de desgarrar el tejido con las agujas. Retirar los restos gruesos y cubrir con un cubreobjetos. Pasar la preparacin con el cubreobjetos hacia arriba, por la llama del mechero varias veces sin permirti que hierva. 2. Invertir la preparacin, con el cubreobjetos hacia abajo sobre dos otres pedazos de papel filtro; cubrir con otro pedazo de papel filtro y con el dedo pulgar hacer presin firme y uniforme. 3. Colocar la preparacin con el cubreobjetos hacia abajo sobre el triangulo de vidrio en una caja de Petri con alcohol-acido actico (1:1), si el cubre no se desprende y cae al fondo de la caja en 30 minutos desprender suavemente con la ayuda de una aguja de diseccion.
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4. Pasar porta y cubreobjetos a un vaso de Coplin con alcohol acido actico (3:1) por 5 minutos. Marcar las caras del porta y cubreobjetos que estaban en contacto. 5. Pasar porta y cubreobjetos a un vaso de Coplin con alcohol absoluto por 5 minutos. 6. Pasar porta y cubreobjetos a un vaso de Coplin con alcohol absolutoacetona (1:1), por 5 minutos. 7. Pasar a acetona por 5 minutos 8. Pasar a acetona-xilol (1:1), 5 minutos 9. Pasar a u vaso de Coplin con xilol por 5 minutos 10.Montar en resina sintetica, poniendo porta y cubreobjetos sobre laminillas limpias. Dejar secar las preparaciones sobre una superficie plana. 11.Observar al microscopio a seco dbil y seco fuerte buscando las diferentes fases de la mitosis.
RESULTADOS DISCUSION CONCLUSIONES CUESTIONARIO 1. Por qu se usan meristemos de races terminales para observar las diferentes etapas de la mitosis? 2. Explique cmo acta la orceina actica para teir los cromosomas 3. Esquematice sus observaciones correspondientes a las diferentes etapas de la mitosis y explique brevemente en qu consiste cada una. 4. Cul es la funcin de la solucin fijadora? 5. Cuntos cromosomas tienen las clulas de cebolla? 6. Qu diferencias existen entre la mitosis de una clula vegetal y una animal? 7. Qu tipo de tejido vegetal se utiliz para observar la mitosis? 8. En qu fase de la mitosis, los cromosomas llegan a su mxima condensacin? 47

9. En la metafase de la mitosis, como se llama la parte de la clula donde se localizan los cromosomas? 10. En qu fase de la mitosis se separan las cromtidas?
BIBLIOGRAFIA El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segunda edicin. Editorial Revert. Pgs. 55-613.Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F. Primera edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 89-914.Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial McGraw Hill. Pgs. 3439
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PRCTICA No.8 OBSERVACIN DE PLASTOS Y ESTOMAS INTRODUCCION Las superficies de hojas y otros vegetales expuestas estn cubiertas con una capa impermeable que ayuda a impedir la prdida excesiva de vapor de agua. De este modo, la entrada y salida de gases se limita a poros diminutos, denominados estomas, que suelen contraerse en las caras inferiores de las hojas. Tales aberturas conducen al interior de la hoja, constituido por una capa de clulas que contienen cloroplastos llamada mesfilo, con muchos espacios areos y muy alta concentracin de vapor de agua. Las clulas epidrmicas estn bien adaptadas para proteger las clulas subyacentes y disminuir las prdidas de agua, pero sin impedir del paso de la luz. Sobre toda la superficie epidrmica hay repartidos poros pequeos llamados estomas, cada uno rodeado por dos clulas de proteccin (Ver Fig.13.1). Estas clulas, al cambiar su forma, pueden modificar el tamao de la abertura y regular as la salida de agua y el intercambio de gases. A diferencia de otras clulas epidrmicas, las clulas de proteccin contienen cloroplastos. Hay de 50 a 500 estomas por mm2de hoja; son mucho ms numerosos en la superficie inferior, en las hojas de casi todas las especies. (1)Las clulas de proteccin en forma de haba poseen paredes ms gruesas hacia el lado del estoma que hacia los otros. En general, los estomas se abren en presencia de luz y se cierran en la oscuridad, la abertura y cierre son regulados por cambios de la presin de turgencia en el interior de las clulas de proteccin. El aumento de la presin de turgencia cambia lasparedes externas, y curva las internas, separando unas de otras y creando la abertura del estoma entre ellas. Cuando disminuye la presin de turgencia en las clulas de 49

proteccin, las paredes internas, elsticas, recuperan su forma original y la estoma se cierra. El mecanismo que aumenta la presin de turgencia es complejo, e implica en parte la produccin de glucosa y otras sustancias osmticamente activas por fotosntesis en las propias clulas de proteccin. Los plastos son estructuras citoplasmticas unidas que se encuentran en las clulas de las plantas superiores y en ciertos organismos unicelulares, pero nunca en las clulas de animales superiores. Aunque su tamao, forma y color pueden variar de manera considerable, segn el tejido de que se trate, del organismo y de las condiciones de desarrollo, a menudo se presentan en forma de cuerpecillos discoides o esfricos que se encuentran libremente en el citoplasma. Los plastos estn agrupados generalmente en dos clases: los incoloros o leucoplastos y los pigmentados o cromoplastos. Los primeros se encuentran a menudo en las plantas que no estn expuestas a la luz e intervienen en la formacin y almacenamiento de grnulos de almidn y gotas de grasa.(3)Los cloroplastos de las clulas vegetales son estructuras aplanadas cuya longitud promedio alcanza 7 m y 3-4 m de ancho. Cada cloroplasto est rodeado por una membrana lisa. Dentro de la membrana exterior se halla una segunda membrana interior y una matriz lquida denominada estroma. Las membranas, al igual que otras membranas de la clula, son capas bi estratificadas de lpidos que contienen cantidades sustanciales de protenas intrnsecas. Entre tales protenas se encuentra una gran variedad de enzimas, tanto enzimas citocrmicas como enzimas sintetizadoras de ATP. Las membranas de los cloroplastos contienen tambin la clorofila y algunos carotenoides. La clorofila es una molcula anfiptica, siendo su cadena hidrocarbonada fuertemente hidrofbica, mientras parte del anillo porfirnicoes hidroflico. Posiblemente la cadena fitlica y parte del anillo porfirnico estn embebidos en el lpido bi estratificado y el resto del anillo porfirnico se proyecta hacia arriba. Los carotenoides son molculas fuertemente hidrofbicas y se supone que se encuentran totalmente sumergidas en el lpido biestratificado. El estroma del cloroplasto es rico en enzimas, contiene tambin ADN y muchos ribosomas. Estos ribosomas son ms pequeos que los del citoplasma de la clula vegetal. La presencia de ADN permite explicar la peculiar anatoma de los cloroplastos. Los cloroplastos se originan ya sea por divisin de un cloroplasto en dos o por medio del desarrollo de una estructura incolora diminuta denominada proplstido. Para la conversin de los proplstidos en cloroplastos se requiere la presencia de luz. De ah el color plido de las plntulas que crecen en la oscuridad. Los proplstidos tiene la capacidad de autoreplicarse. 50

En efecto, esta es la nica manera de que pueden formarse nuevos proplstidos. Los ncleos de las clulas vegetales no intervienen en la produccin de nuevos proplstidos. Por tanto, es importante que cuando las clulas vegetales sufran mitosis, cada clula hija reciba proplstidos en su citoplasma, de las mima manera que cada clula hija recibe el contenido cromosmico del ncleo. OBJETIVO Observar los diferentes plstidos que integran a las clulas vegetales, as como tambin identificar los estomas presentes en las clulas de origen vegetal MATERIAL Portaobjetos. Cubreobjetos. Frasco gotero con agua. Microscopio compuesto. Navaja de un solo filo o de doble filo. MATERIAL BIOLGICO Epidermis de limn y/o nopal. Ptalos de flores (colores y blancos). Hojas recin cortadas. Manzana. REACTIVOS Lugol de Gram TCNICA 1. Realizar un corte en la epidermis del limn y/o nopal procurando que sea lo ms delgado posible y hacer lo mismo con el resto de las muestras. 2. Colocar el corte sobre un portaobjetos y agrgale una gota de lugol procediendo posteriormente a colocarle el cubreobjetos. 3. Observar al microscopio la preparacin y realiza dibujos de lo que observes. Identificar si se trata de cloroplastos, leucoplastos o cromoplastos. 4. Utilizando la navaja, corta una porcin muy delgada de la superficie inferior de la hoja recin cortada, al igual que de la hoja de lechuga fresca. 5. Colocar la porcin de las hojas en portaobjetos limpios y aadirles una gota de agua a cada portaobjetos y colocarles un cubreobjetos respectivamente. 6. Observar al microscopio utilizando diferentes aumentos. 51

7. Realizar dibujos de lo observado. OBSERVACIONES CON DIBUJOS CONCLUSIONES CUESTIONARIO 2) Qu color toman los cloroplastos con el lugol y porqu? 3) Cmo regulan las clulas protectoras las aberturas y los cierres de los estomas? 4) Existe alguna relacin entre la apertura y cierre de los estomas con la fotosntesis? 5) Realiza un dibujo de un estoma poniendo en evidencia la circulacin de agua y dixido de carbono. 6) Qu es un ostiolo?
BIBLIOGRAFA Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial Limusa. Pgs. 67-68, 364, 372-3732.Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial McGraw Hill. Pg. 543.Young, G. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. EditorialNueva Imagen. Pgs. 74-75 PRACTICA No. 9 VACUOLAS DIGESTIVAS INTRODUCCION Los ciliados son organismos unicelulares, que por medio del proceso de fagocitosis pueden digerir a las levaduras (hongos unicelulares). La vacuola digestiva con las levaduras en su interior se fusiona con los lisosomas y por la accin de las enzimas hidroliticas que se encuentran en su interior las levaduras son digeridas. Este proceso de digestin celular se pone de manifiesto por el cambio de color del colorante rojo congo. En las levaduras muertas el colorante presenta 52

un color rojo (por arriba de un pH de 5) pero cuando las vacuolas digestivas se fusionan con los lisosomas; que tienen un pH ms cido; este vira al purpura y luego al azul a un pH de 3. OBJETIVO Observar e identificar vacuolas digestivas mediante el proceso de maduracin de los fagosomas. MATERIAL Microscopio Tubos de ensayo de 13x100 Centrifuga clnica Pipetas Pasteur Bulbo Portaobjetos Cubreobjetos Agua destilada Rojo Congo Palillos MATERIAL BIOLOGICO Agua de charco o de florero
TECNICA
1. Colocar en un tubo de ensayo 10 ml de agua de charco 2. Concentrar los ciliados centrifugando a 2000 rpm durante 5 minutos 3. Descartar la mayor parte del sobrenadante, dejando en el tubo aproximadamente 1 ml. 4. Resuspender el precipitado agitando el tubo 5. Tomar dos gotas y colocarlas en un portaobjetos 6. Tomar una pequea cantidad de una suspensin de levaduras coloreadas con rojo Congo (30% de levaduras y 0.3 % de colorante), sumergiendo el extremo de un palillo en dicha suspensin y mezclarla
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con las gotas de agua de charco hasta que adquiera un color rosa plido. 7. Colocar un cubreobjeto y observar al microscopio con el objetivo de 10x y 40x 8. Reporte lo observado
Preparacin de levaduras teidas con rojo Congo

A tres gramos de levaduras agregarles 10 ml de agua destilada y 3 miligramos de rojo Congo. Calentar a bao mara durante 10 minutos para matar las levaduras. Si se evapora mucho el agua llevar nuevamente con agua destilada hasta obtener una suspensin estimada del 30% de levaduras.
BIBLIOGRAFIA Lodish H. Molecular Cell Biology. Scientific American Books. New York 2007
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1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8

3.2 3.4 3.6 3.8 4.0. 4.2

0.36 0.32 0.28 0.24 0.20 0.16

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