1. Ejercicios sobre Glcidos 2. Test de Conocimientos Adquiridos sobre Glcidos 3. Ejercicios sobre Lpidos 4.

Test de Conocimientos Adquiridos sobre Lpidos 5. Ejercicios sobre Protenas 6. Test de Conocimientos Adquiridos sobre Protenas 7. Ejercicios sobre cidos Nuclicos 8. cidos Nuclicos: Duplicacin, Transcripcin y Traduccin 9. Ejercicios Numricos y Problemas sobre Bioenergtica y Metabolismo

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Te planteamos una serie de preguntas relacionadas con el tema. 1.- Cuales son las principales funciones biolgicas de los glcidos? 2.- Polisacridos. Clasificacin, caractersticas e inters biolgico. 3.- Cita un polmero de inters biolgico para las clulas animales que est constituido por glucosa e indica la funcin que desempea. 4.- Monosacridos: concepto, nomenclatura, propiedades fsicas y qumicas. 5.- Explica la importancia biolgica de los siguientes glcidos: glucosa, ribosa y celulosa. 6.- Disacridos: Concepto. Citar dos disacridos uno que tenga poder reductor y otro que no lo tenga. Indicar la funcin biolgica de cada uno de los disacridos citados anteriormente. 7.- Definir e indicar la funcin biolgica de la sacarosa. 8.- Transforma en cclica la frmula lineal de la glucosa. Debes indicar los pasos intermedios de la transformacin. Escribir los ismeros y . 9.- Tipos de enlaces para constituir polisacridos. 10.- Cita alguna prueba para reconocer los glcidos.

1) Qu tres elementos son siempre constituyentes de los principios inmediatos? C, H, N O, H, C O, H, N 2) Por qu tienen carcter reductor los monosacridos? Por la presencia del grupo carbonilo (aldehdo y cetona) Por la presencia del grupo amino No tienen carcter reductor 3) Escrbela forma lineal de la D-glucosa

4) Define la Ribosa. Monosacrido de tipo aldohexosa que tiene un grupo carbonilo aldehdo y 6 carbonos. Es una cetopentosa que posee un grupo cetona y 5carbonos en su estructura. Un monosacrido del tipo aldopentosa con un grupo aldehdo y 5 carbonos 5) Cuando se dice que un carbono es asimtrico? Cuando presenta sus cuatro sustituyentes iguales. Cuando presenta sus cuatro sustituyentes iguales dos a dos. Cuando presenta sus cuatro sustituyentes distintos. 6) Los polisacridos .... No poseen poder reductor. Tienen sabor dulce. Tienen funciones estructurales con enlace -Glucosdico. 7) Escribe la forma cclica de la -D-glucopiranosa

8) La condroitina se encuentra en... La pared bacteriana. El tejido conjuntivo. En los ptalos de las flores. 9) El Agar-agar se utiliza como .... anticoagulante. goma vegetal. espesante. 10) El almidn es un polmero de la glucosa formado por... 20% amilosa y 80% amilopectina. 30% amilosa y 70% amilopectina. 70% amilosa y 30% amilopectina.

Te planteamos una serie de preguntas relacionadas con el tema.

1.- Caractersticas generales de los lpidos 2.- Lpidos saponificables. Estructura. 3.- Funciones ms importantes de los lpidos. 4.- cidos grasos: caractersticas y tipos. Formula un cido graso saturado y otro insaturado. 5.- Son correctas las denominaciones de colesterol "bueno" y colesterol "malo". Qu significan realmente?Qu ventajas tiene la dieta mediterrnea en este sentido? 6.- Lpidos no saponificables. Pon ejemplos de cada tipo que menciones . 7.- Lpidos complejos o de membrana.

Componentes qumicos Clasificacin Inters biolgico.

8.- Esteroles. Estructura.

Formula qumicamente el colesterol Importancia biolgica de los esteroles.

9.- Cridos. Defnelos qumicamente

A qu se debe su funcin impermeabilizante? Menciona tres ejemplos Donde se localizan en vegetales y animales?

10.- Menciona varios ejemplos y clasifica el lpido mencionado, atendiendo a las siguientes funciones: - De reserva - Estructural - Transportadora.

1) Un cido graso saturado tiene Dobles o triples enlaces en su cadena Aspecto aceitoso slo enlaces sencillos C-C 2) Un jabn se disuelve en agua dando lugar a micelas. Es debido a: Un proceso de saponificacin Un proceso de esterificacin Un comportamiento hidrfobo 3) La esterificacin del glicerol con cidos grasos produce: Lpidos complejos Glicerolpidos Acilglicridos 4) Un aceite est formado por: cidos grasos insaturados de cadena corta cidos grasos saturados de cadena larga cidos grasos saturados de cadena muy corta 5) Identifica el cido olico:

6) Los esteres de un cido graso de cadena larga con sus dos extremos hidrfobos puede ser: Glicerina. Cera de Abeja. Lecitina. 7) La Lecitina... Es un derivado del cido fosfatdico con colina Es la fosfatidilserina Tiene un estructura derivada de un cido graso con la esfingosina. 8) Un cerebrsido es... Ceramida + glucosa o galactosa. Ceramida + cido fosfrico. Una esfingomielina.

9) Las sales que emulsionan las grasas favoreciendo la digestin y absorcin intestinal se denominan: Esteroles. Terpenos. cidos biliares. 10) En el transporte por sangre y linfa de los lpidos est implicado: El mentol El gonano. El colesterol.

Te planteamos una serie de preguntas relacionadas con el tema.

1.- Comente las propiedades de los aminocidos. Qu son y cmo se forman los pptidos?. 2.- Describa las caractersticas de los niveles de organizacin estructural de las proteinas. Qu diferencias hay entre las alfa-hlice y las lminas plegadas de la estructura secundaria de las protenas? 3.- Explique la desnaturalizacin de las protenas, contestando razonadamente a las siguientes cuestiones: concepto; factores que pueden desnaturalizar a las protenas; tipos de enlaces que se rompen durante el proceso; posibilidades de ser reversible. 4.- Explique a qu se refiere la especificidad de las protenas y por qu puede plantear problemas en los transplantes de rganos. 5.- Funciones de las protenas. Cite ejemplos de protenas y funciones concretas que desempeen en el organismo.

1) Las protenas son macromolculas biolgicas constituidas bsicamente por: C, H, O, P. C, H, O, N. C, H, O, Fe 2) Los -L-aminocidos se caracterizan por: la disposicin del grupo carboxilo (-COOH) a la izquierda del carbono . la disposicin del grupo amino (-NH2) a la derecha del carbono . la disposicin del grupo amino (-NH2) a la izquierda del carbono . 3) El comportamiento anftero de los aminocidos se refiere a que: El pH que exista en una disolucin acuosa determina su ionizacin. El pH que exista en una disolucin acuosa determina su actividad ptica. El pH impide que se solubilicen en una disolucin acuosa. 4) Un ejemplo de polipptido es la unin de: Ala - Glu - Tyr - Met - Pro Cys - Pro - His - Ala - Ile - Phe - Gly ninguna respuesta es correcta. 5) En cuanto al enlace peptdico, es cierto que: se establece entre los grupos amino (-NH2) de dos aminocidos contiguos. se establece entre los grupos carboxilo (-COOH) de dos aminocidos contiguos. se establece entre los grupos amino (-NH2) y carboxilo (-COOH) de dos aminocidos 6) La configuracin o de lmina plegada de una protena, se refiere a: su estructura primaria. su estructura secundaria. su estructura terciaria. 7) Si la mioglobina es una protena formada por un nico polipptido, puede tener estructura cuaternaria? nunca si a veces 8) Cuando una protena se desnaturaliza, quedan libres sus aminocidos? si nunca

a veces 9) :La especificidad de las proteinas es consecuencia de: la capacidad de cada ser vivo para fabricar sus propias proteinas. la capacidad de cada ser vivo para rechazar sus propias proteinas. ambas respuestas son correctas. 10) El colgeno es una protena con funcin: estructural. enzimtica. hormonal.

Te planteamos una serie de preguntas relacionadas con el tema. .

1.- El ARNt : estructura, localizacin y funcin en la biosntesis de proteinas. 2.- Nucletidos: concepto, composicin qumica y molculas ms frecuentes. 3.-Estructura y funciones del ADN. 4.-Localizacin y funcin del ARNm en la clula eucarionte. 5.- Cuntas clases de ARN conoces y en que procesos intervienen? 6.-Existen una serie de nucletidos como son el ATP, el NAD, el FAD, etc...que tienen alguna relacin estructural con los constituyentes del material gentico estn relacionados estos compuestos con otros procesos celulares que no sean de transmisin gentica ? 7.- Qu diferencias estructurales, de composicin,etc. existen entre el ADN y el ARN?

Te planteamos una serie de preguntas relacionadas con el tema.

1.- En qu consiste la trascripcin ? 2.-Indica las cuatro etapas que consideres ms relevantes en el proceso de duplicacin del material gentico. 3.- Qu significa que la duplicacin del ADN es semiconservativa ? 4.-Comenta detalladamente que se observa en la siguiente figura:

5.-Comenta el siguiente grfico:

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6.- Explica todos los pasos del siguiente proceso:

1. Se ha purificado una enzima a partir de hgado de rata. En la purificacin se parti de 500 ml de extracto crudo que contena 2.000 mg de protena. 50 l de ese extracto crudo catalizaban, en condiciones ptimas de ensayo, la produccin de 1 nmol de producto en 1 segundo. Tras varios pasos de purificacin se obtuvieron 2 ml de una preparacin de enzima pura que contena 3 mg de protena por mililitro y presentaba una actividad total de 120 U.

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Calcular la concentracin de la enzima en el extracto crudo en U/ml y katales/ml. b) Determinar la actividad especfica, en U/mg de protena, en el extracto crudo. c) Calcular la recuperacin del proceso de purificacin y el nmero de veces que se ha purificado la enzima. Sol.: a) 1,2 U/ml o 0,02 katales/ml; b) AE = 0,3 U/mg; c) R= 20%, FP= 66,7 veces. 2. La descarboxilacin enzimtica de un -cetocido, ensayada en 1 ml de mezcla de reaccin, procede con las siguientes velocidades iniciales a las concentraciones de sustrato que se citan: vo (moles CO2/2 min) 0,588 0,500 0,417 0,370 0,252 [cetocido] (M) 2,500 x 10-3 1,000 x 10-3 0,714 x 10-3 0,526 x 10-3 0,250 x 10-3

a)

A partir de estos datos calcular Vmx y KM de esta reaccin enzimtica. Sol.: KM = 0,5 mM; Vmx = 0,35 mol/min. 3. La velocidad inicial de una reaccin enzimtica se determin a distintas concentraciones de sustrato. Calcular KM y Vmx por los distintos mtodos grficos a partir de los datos que se relacionan a continuacin: [S] (M) 2,3 x 10-3 3,0 x 10-3 4,5 x 10-3 12,0 x 10-3 38,0 x 10-3 vo(mmol/l min) 0,95 1,13 1,42 2,14 2,64 Sol.: KM = 5 mM; Vmx = 3 mmol/l min. 4. Para estimar los parmetros cinticos de una determinada enzima se realizaron una serie de ensayos utilizando 20 l de una preparacin de la misma y distintas concentraciones de su sustrato. Los valores de vo obtenidos se recogen en la tablasiguiente: [S] (M) 3,15 4,16 8,30 12,50 vo (nmol/ml min) 10,0 12,5 20,0 25,0

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Calcular las actividades total y especfica de la preparacin enzimtica, sabiendo que su volumen total era de 10 ml y su contenido en protena de 200 g/ml. Sol.: AT= 25 U, AE= 12,5 U/mg. 5. Disponemos de una preparacin de una enzima de la que queremos conocer sus parmetros cinticos. Para ello realizamos varios ensayos en los que cambiamos la concentracin del sustrato y obtenemos los siguientes resultados: [S] (mM) 0,33 0,50 1,00 2,00 vo (nmoles ml-1 min-1) 24,98 33,33 50,00 66,67

Cules son la KM y la Vmx de la enzima? Si para los ensayos habamos utilizado 20 l de la preparacin enzimtica y sabemos que sta tiene una concentracin de protena de 5 mg/ml, cul es la actividad especfica de dicha preparacin? qu volumen de ella hemos de aadir a 1 ml de mezcla de reaccin con [S] = 0,2 M para que se formen 4,5 moles de producto en 10 min? Sol.: KM = 1 mM, Vmx = 0,1 mM/min., AE = 1 U/mg protena; 90 l. 6. La KM de cierta enzima para su sustrato es 75 M. Cuando se ensaya con una concentracin inicial de sustrato de 50 mM, se observa que al cabo de 15 minutos se ha transformado el 30% de sustrato. a) Calcular la velocidad mxima de la reaccin b) Cuando se ensaya la actividad con distintas concentraciones de sustrato, en presencia de un cierto inhibidor a una concentracin de 50 M, y se representan grficamente los resultados mediante la representacin de dobles inversos, la pendiente de la recta obtenida es la misma que cuando el experimento se hace en ausencia del inhibidor, pero la ordenada en el origen aumenta al doble. Qu tipo de inhibicin se ha producido? Calcular la Ki. c) Calcular el grado de inhibicin cuando el ensayo se hace con una concentracin de sustrato de 150 M, en presencia de 100 M del inhibidor anterior. Sol.: a) 1 mM min-1; b) Incompetitiva; Ki = 50 M; c) i = 0,57.

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7. Una reaccin enzimtica se lleva a cabo, a distintas [S], en ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes. Decir qu tipo de inhibidor es cada uno y hallar todos los parmetros cinticos. [S] (mM) 0,2 0,4 0,8 1,6 3,2 v0 va'(+ Ia = 1,5 mM) vb'(+ Ib = 1,5 mM) (mol/l min) (mol/l min) (mol/l min) 1,67 0,625 0,83 2,86 1,176 1,43 4,44 2,110 2,22 6,15 3,48 3,08 7,62 5,16 3,81

Sol.: KM = 1 mM; Vmx = 10 mol/l min; K'M(a) = 3 mM; Vmx(b) = 5 mol/l.min; Ki(a) =0,75 mM; Ki(b) = 1,5 mM. 8. Una enzima se ensay a distintas en ausencia y presencia de un resultados que se presentan en la casos y la Ki para el inhibidor. [S] (mM) 0,02 0,05 0,10 0,50 0,80 concentraciones de su sustrato especfico inhibidor ([I]= 1 mM), obtenindose los tabla. Calcular la KM y la Vmx en ambos v0 (mol/1 min) -Inhibidor 8,33 16,67 25,00 41,67 44,44 v'0 (mol/1 min) +Inhibidor 6,25 10,00 12,50 15,62 16,00

Sol.: KM = 0,1 mM; Vmx = 50 mol/l.min; K'M = 33,3 M; V'mx = 16,6 mol/l.min; Ki = 0,5 mM. 9. Al ensayar la actividad de una enzima con concentraciones saturantes de sustrato se obtuvo una velocidad de catlisis de 300 mol/l min en ausencia de inhibidores, y de 160 mol/l min en presencia de 10 M de un cierto inhibidor incompetitivo. Para [S] = 10 mM y en ausencia del inhibidor se obtuvo una velocidad de 125 mol/l min. Calcular KM y Vmx, K'M, Ki y el grado de inhibicin para [I] = 10 M y [S] = 10 mM. Qu concentracin de inhibidor conseguira un grado de inhibicin de 0,9 para la misma [S]? Sol.: Vmx = 300 mol/l min, V'mx = 160 mol/1.min, KM = 14 mM, K'M = 7,46 mM, Ki = 11,42 M, i = 0,27. I = 0,246 mM. 10. Se ha estudiado cinticamente la reaccin catalizada por la muermasa. Tras llevar a cabo una serie de ensayos enzimticos los datos de concentracin de sustrato y vo fueron analizados mediante una representacin de dobles inversos y se obtuvo una recta que cortaba al eje Y en el valor 0,8 (M/min)-1 y al eje X en el valor -0,02 (M)-1. Se ha estudiado igualmente el efecto del -muermol y la muermirulina, sustancias supuestamente inhibidoras, sobre el transcurso de la reaccin. En ambos casos la representacin de los datos por el mtodo de dobles inversos daba como resultado una recta que cortaba al eje Y en el valor 1,6 (M/min)-1. Las

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rectas se diferenciaban en el valor de sus pendientes, que era de 40 min para el -muermol y de 80 min para la muermirulina. a) Cules son la KM y la Vmx de la reaccin sin inhibidor? b) Qu tipo de inhibidores son la muermirulina y el -muermol? c) Si para los ensayos con inhibidor la concentracin de stos era de 5 mM (en ambos casos) cules son los valores de las Ki de estos inhibidores? d) Calcula el grado de inhibicin a una concentracin de sustrato de 0,1 mM para el caso del -muermol. Sol.: a) Vmx = 1,25 mol/l.min, KM = 50 M. b) Muermirulina, no competitivo; muermol, incompetitivo. c) Ki = 5 mM ambos casos. d) i = 0,4. 11. Un extracto enzimtico crudo contiene 20 mg de protena/ml. 20 l de ese extracto crudo catalizan la produccin de 3 moles de producto en 1 min, en condiciones ptimas de ensayo. Calcular a) la concentracin de la enzima en el extracto crudo en U/ml; b) la actividad especfica de esta enzima en el extracto en U/mg de protena; c) la actividad total del extracto si tenemos 100 ml del mismo. Sol.: a) 150 U/ml; b) 7,5 U/mg de protena; c) 15.000 U. 12. Se ha purificado la glutamina sintetasa de la cianobacteria Anabaena cylndrica. En un extracto crudo que contena 4.200 mg de protena haba una actividad total de esta enzima de 186 U. Tras varios pasos de purificacin se obtuvo una preparacin en la que la enzima estaba pura. En esta preparacin, que contena 4 mg de protena, la actividad total de glutamina sintetasa era de 37,5 U. Calcular cual ha sido la recuperacin en el proceso de purificacin de la enzima y el nmero de veces que sta se ha purificado. Sabiendo que el peso molecular de la glutamina sintetasa es de 600.000, calcular su nmero de recambio (Kcat). Sol.: R: 20%; P: 212 veces; N.R.: 5.625 -1 min . 13. Se dispone de dos preparaciones distintas de una enzima cuyo PM= 40.000. Una de las preparaciones constituye un extracto crudo celular y en ella la actividad especfica que se detecta es de 0,4 U/mg de protena. La otra constituye una preparacin de la enzima pura y su actividad especfica es de 65 U/mg protena. Cul de las dos preparaciones utilizaras para calcular el nmero de recambio de la enzima? Justifica tu respuesta. Calcula el valor del mismo. Sol.: En preparacin de enzima pura; N.R. = 2.600 min-1. 14. Una enzima tiene un peso molecular de 60.000 y 6 sitios activos por molcula. La actividad enzimtica de una preparacin pura es de 12 moles de sustrato cada 2 min en presencia de 18 g de enzima. Calclese la actividad molar por centro cataltico de la enzima. Sol.: 3,3 x 10 3 min-1.

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15. Una preparacin enzimtica de glutamato deshidrogenasa (P.M.= 60.000) contiene 10 mg de protena por ml. Si 20 l de esta preparacin se ensayan en condiciones estndar ptimas, pero variando la concentracin de sustrato, se obtienen las velocidades que se indican en la tabla para los casos de ausencia y presencia de un inhibidor ([I] = 2 mM). [S] (mM) 0,25 0,33 0,50 1,00 2,00 vo(mol/ml min) -I +I (2 mM) 2,00 0,47 2,48 0,63 3,33 0,91 5,00 1,67 6,67 2,8

a) Determinar la Vmx y la KM de la enzima en presencia y ausencia del inhibidor. Decir de qu tipo de inhibicin se trata. b) Calcular la actividad enzimtica de la preparacin de glutamato deshidrogenasa, expresada como U/ml. c) Cul es la actividad especfica de la glutamato deshidrogenasa en la preparacin enzimtica? d) Considerando que la preparacin enzimtica es pura, calcular el nmero de recambio de la glutamato deshidrogenasa. e) Se llevan a ensayo 50 l de la preparacin enzimtica, en presencia de 0,5 M de sustrato. Calcular la cantidad de sustrato desaparecido en 3 min (el volumen estandar de reaccin es de 1 ml). Sol.: a) Vmx = 10 mol/mlmin; KM = 1 mM; V'mx = 8 mol/mlmin; K'M = 4 mM; b) 500 U/ml; c) 50 U/mg protena; d) 3.000 min-1; e) 75 moles/ml. 16. Una muestra de 0,25 ml de una preparacin de una enzima pura (PM: 100.000) contiene 10 mg de protena/ml y presenta una actividad total de 1000 U. La KM de la enzima para su sustrato especfico es de 10-5 M. Al ensayar 10 l de la preparacin en presencia de 20 M de un inhibidor incompetitivo, con [S] = 2 x 10-3 M, se obtiene una velocidad inicial de 20 mol/min.ml. a) Calcular la Ki del inhibidor. b) Cul ser el grado de inhibicin de la reaccin enzimtica cuando [S] = K'M? c) Y si aumentamos 3 veces la [I]? d) Si partimos de [S] = 10-2 M, qu cantidad de sustrato podrn transformar 50 l de la preparacin en 5 minutos? e) Hallar la actividad especfica de la preparacin y el nmero de recambio de la enzima. Sol.: a) Ki = 20 M. b) 0,25. c) 0,73. d) 1 mmol. e) AE = 400 U/mg, NR = 40.000 min-1. 17. Un grupo de jvenes investigadores ha conseguido purificar una enzima a partir de cloroplastos de espinaca. En el proceso de purificacin se parta de 250 ml de un extracto crudo que contena 5.200 mg de protena. 100 l de
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este extracto catalizaban la produccin de 1,5 moles por minuto del producto de la reaccin enzimtica en condiciones ptimas de ensayo. Al acabar la purificacin se obtuvieron 5 ml de una preparacin que contena 5 mg de la enzima pura. 10 l de esta ltima preparacin catalizaban la aparicin de 5 moles de producto en un minuto por ml de mezcla de ensayo. Calcular la actividad total y especfica antes y despus de la purificacin, la recuperacin del proceso y el grado de purificacin. Si el PM determinado para la enzima es de 40.000, calcular su nmero de recambio. Al ensayar la actividad de la enzima a distintas concentraciones de sustrato, y en presencia o ausencia de 1 mM del inhibidor 2'-ADP, se obtuvieron los siguientes resultados: [S] mM 200 100 10 1 v0(M/min) 300 299 291 231 vi (M/min) 299 297 273 150

Determinar qu tipo de inhibicin ejerce el 2'-ADP sobre la enzima, la Ki y el grado de inhibicin para [S] = 1 mM. Sol.: AT inicial= 3.750 U, AE inicial= 0,72 U/mg, AT final= 2.500 U, AE final= 500 U/mg. Recuperacin= 66,66%, purificacin = 694 veces. NR = 20.000 min-1. Competitiva. KM = 0,3 mM, Ki = 430 M. 18. Una enzima (PM: 50.000) tiene una actividad por centro cataltico de 10.000 min-1 y presenta tres sitios activos. Se ha purificado la enzima, obtenindose 1,5 ml de solucin, que contiene 2 mg de protena/ml. La enzima presenta una KM para su sustrato de 1 mM. Se ensayan 40 l de esta solucin, en un volumen de ensayo de 10 ml, con [S] = 0,1 M, y en presencia de 1 mM de un inhibidor no competitivo, obtenindose una velocidad de transformacin de sustrato de 2,4 mM/min. a) Determinar Ki y el grado de inhibicin de la reaccin. b) Si en la purificacin se parti de 5 litros de extracto crudo, con una actividad de 0,6 U/ml y 1 mg de protena/ml, determinar la recuperacin del proceso y el nmero de veces que se ha purificado la enzima. c) Determinar el tiempo de un ciclo cataltico. Sol.: a) Ki = 1 mM; 0.5; b) 60%; 1000 veces; c) 2.103 s.

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19. La actividad de una enzima se ensay a distintas concentraciones de sustrato y de un compuesto X, que inhiba la reaccin, a una concentracin de 50 mM. Los resultados obtenidos fueron: [S] M 12,5 16,7 25,0 50,0 100,0 v0 (moles/ml min) -X +X 13,3 3,45 17,2 4,55 22,2 6,45 33,3 11,76 40,0 20,00

a) Calcular la KM y la Vmx de la reaccin. b) Determinar el tipo de inhibicin que ejerce X. c) Determinar la Ki y el grado de inhibicin para una [S] = KM. Sol.: a) KM = 43 M; Vmx = 60 mM/min; b) competitiva; c) Ki = 14,4 mM; 64%. 20. Una preparacin homognea de triosa-fosfato isomerasa (PM: 60.000) contiene 10 mg de protena por ml. Para determinar los parmetros cinticos de la enzima se midi la velocidad inicial de la reaccin a distintas concentraciones de sustrato, utilizando 20 l de la preparacin de enzima en 1 ml de volumen de ensayo. En las mismas condiciones se analiz tambin el efecto de un inhibidor. Los resultados obtenidos fueron: [S] (mM) 0,25 0,33 0,50 1,00 2,00 vo (mol/ml.min) -I +I (2mM) 2,00 0,47 2,48 0,62 3,33 0,91 5,00 1,67 6,67 2,75

Determinar: a) La KM y la Kcat de la enzima. b) La actividad especfica de la preparacin de triosa-fosfato isomerasa. c) El tipo de inhibicin que se ha producido. d) La Ki de la enzima para el inhibidor ensayado. Sol.: a) KM = 1 M, Kcat = 3.000 min-1; b) 50 U/mg; c) competitiva; d) Ki = 0,5 mM.

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21. Una aldolasa de msculo de rata se ensay a diversas concentraciones de sustrato, en presencia y ausencia de iodoacetamida, obtenindose los siguientes resultados: [Fru 1,6 BP] (M) 5 10 20 50 100 v0(moles/ml min) -I 0,063 0,102 0,160 0,244 0,286 +I 0,0156 0,0267 0,0410 0,0620 0,0710

Sabiendo que la concentracin de enzima en el ensayo fu de 10 nM y la del inhibidor fu de 7,5 nM: a) determinar la KM y la Kcat de la enzima. b) discutir el posible tipo de inhibicin que ejerce la iodoacetamida en esta reaccin, y cmo podra demostrarse esa hiptesis experimentalmente. 22. Se han determinado las velocidades iniciales de una reaccin enzimtica a distintas concentraciones del nico sustrato de la reaccin. Los resultados obtenidos fueron: [S] (mM) 2,0 3,0 4,0 10,0 15,0 vo (mol/ml.min) 13,9 17,9 21,3 31,3 37,0

Sabiendo que la concentracin de enzima en el ensayo era de 0.5 nM, determina la KM y la Kcat de la enzima y la Vmx de la reaccin, y discute como se afectaran cada uno de estos parmetros cuando: a) La concentracin de enzima en el ensayo se triplica. b) La reaccin se lleva a cabo en presencia de un inhibidor competitivo a una concentracin equivalente a la Ki. c) La reaccin se lleva a cabo en presencia de un inhibidor no competitivo a una concentracin equivalente a la Ki. d) La reaccin se lleva a cabo en presencia de un inhibidor incompetitivo a una concentracin equivalente a la Ki. Sol: Vmx = 48 mM min-1; KM = 5 mM; Kcat = 96.106 -1 min .

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23. Una enzima monosustrato se ensay a diversas concentraciones de sustrato en ausencia y presencia de un inhibidor. Los resultados obtenidos fueron: [S] (M) 2,5 5,0 10,0 25,0 50,0 v0 (nmol/ml.min) -I +I 31,5 7,8 51,0 13,3 80,0 20,5 122,0 31,0 143,0 35,7

Calcular: a) La KM de la enzima y la Vmx de la reaccin. b) La concentracin de enzima (actividad enzimtica en U/ml) utilizada en el ensayo. c) El tipo de inhibicin producida. Sol: a) KM = 11 M; Vmx = 167 M min-1; b) 0,167 U/ml; c) no competitiva. 24. Se ha conseguido purificar una enzima 2000 veces, obtenindose al final del proceso 2 ml de preparacin enzimtica pura, que contiene 3 mg de protena, a partir de un extracto crudo de 1000 ml de volumen, que tena una actividad enzimtica de 5 U/ml y una concentracin de protena de 10 mg/ml. El PM de la enzima es 30.000 y presenta 3 sitios activos. Se toman 20 l de esta preparacin y se ensayan a una [S] = 5x10-5 M. La KM de la enzima para su sustrato especfico es de 10-5 M: a) Suponiendo que la enzima sigue una cintica hiperblica, calcular v0 en estas condiciones. b) Qu concentracin de inhibidor competitivo (Ki=2x10-5 M) ser necesaria para conseguir el 40% de inhibicin de la actividad enzimtica? c) Cuntas veces habra que aumentar la concentracin de inhibidor para doblar el procentaje de inhibicin? d) Si ensayamos 5 l de la preparacin a [S] = 0,1 M, y en un volumen de reaccin de 2 ml, qu concentracin de sustrato quedar a los 5 minutos de reaccin? e) Cul ha sido la recuperacin en el proceso de purificacin? f) Calcular la actividad por centro cataltico de la enzima. Sol.: a) vo = 25 moles/min; b) [I] = 8 x10-5 M; c) 6 veces; d) 81,25 mM; e) 60%; f) 10.000 min-1 25. Se ensayan 20 l de una preparacin de enzima pura en un volumen de ensayo de 3 ml que contiene 0,1 M de sustrato, obtenindose una velocidad mxima de 0,1 moles min-1 ml-1. a) Qu cantidad de enzima hay en el ensayo? b) Calcula la actividad total de la preparacin enzimtica si su volumen es de 5 ml. KM = 0,1 mM. Sol.: a) 0,3 U; b) 75 U

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26. Cuando se ensaya la actividad de una enzima con distintas [S], en presencia de un cierto inhibidor a una concentracin de 90 M, y se representan grficamente los resultados mediante la representacin de dobles inversos, la pendiente de la recta obtenida es cuatro veces mayor que cuando el experimento se hace en ausencia del inhibidor, pero la interseccin en el eje de abcisas es la misma. a) Qu tipo de inhibicin se ha producido? b) Calcula la Ki del inhibidor. Sol: a) no competitiva; b) KI = 30 M. 27. Cuando se ensaya la actividad de una enzima con distintas [S], en presencia de un cierto inhibidor a una concentracin de 50 M, y se representan grficamente los resultados mediante la representacin de dobles inversos, la pendiente de la recta obtenida es cuatro veces menor que cuando el experimento se hace en ausencia del inhibidor, pero la interseccin en el eje de ordenadas es la misma. Qu tipo de inhibicin se ha producido? Calcula, si procede, la Ki del inhibidor. Sol: El comportamiento no corresponde a ningn tipo de inhibicin reversible. 28. Se han determinado algunos parmetros cinticos de dos enzimas, A y B. As, sus valores de KM resultan ser de 100 M para A y 20 mM para B, mientras que los valores de kcat son de 20.000 min-1 y 60.000 min-1, respectivamente. Cul de las dos enzimas presenta mayor eficiencia cataltica? Justifica brevemente tu respuesta. Sol: A. 29. Completa la siguiente tabla de purificacin: Paso de de purif. purificacin Extracto crudo SA 45% CM-celulosa Cromatoenfoque Protena (mg) A.T. (U) A.E. (U/mg) Recuperacin Factor (%)

1000 0,030 100 0,024 17 0,017 3,4 0,013

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