UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente- ECAPMA Programa: Agronoma PREINFORME:

Laboratorio Bioqumica Metablica-LBM Nombre y Apellido: Leonardo Fabio Moreno Romero Cdigo: 11444092 Fecha: 28 Octubre de 2013

PRACTICA N1 ACTIVIDAD URESICA EN MUESTRAS DE ORIGEN BIOLGICO

INTRODUCCION Como regla general, se considera que cuando la actividad de la ureasa es mnima los dems factores anti nutricionales tambin han dejado de ser activos o se encuentran presentes en bajas proporciones. La tcnica para determinar la actividad de la ureasa es rpida y sencilla, razones por las que su uso se ha generalizado. Los resultados se expresan en unidades de pH, pudiendo variar desde 0,0 hasta un mximo de 2,0 a 2,5 unidades (grano crudo). La actividad uresica tolerable en trminos comerciales para la harina de soja es de 0,2 a 0,5 unidades de pH.

1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Ureasa Urea Cloruro de mercurio cido clorhdrico Buffer fosfato Indicador de Tashiro 1.3 Procedimiento Frmula CO(NH2)2 HgCl2 HCl 0,1N Conc. 0.1% 0,25M 1% pH 7.0

1.3.1 Toma de muestra (cuando se requiere) Se requiere cuando se quiere saber cul es la calidad de la materia prima con la que estamos trabajando, o cuando se quiere analizar el contenido de urea que contienen los alimentos, la sangre, orina, o tejidos vegetales. 1.3.2 En laboratorio

Mentefacto diagrama conceptual

Peso muestras: Wm; Extraccin con NaCl 1%; Centrifugacin; Filtracin; medida sobrenadante: Vs; Titulacin con HCl; Registro de mL gastados: VHCl; Tabla de datos 1.3.3. Diagrama de Flujo

1. MATERIALES Y MTODOS

1.1. Materiales y equipos requeridos

Materiales Tubos de ensayo con gradilla. Erlenmeyer de 125mL Pipetas de 5 y 10mL matraz aforado de 100mL Bao termostatado Beaker de 400mL Bureta de 25mL Soporte universal Pinzas para bureta Probeta Equipos Balanza analtica Agitadores magnticos Cronometro Cmara fotogrfica 2. TABLA DE DATOS TUBOS B St 1 2 3 4 TIPO DE MUESTRA ML GASTADOS DE HCl 0.1 N

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3. RESULTADOS ESPERADOS Al aparecer un color rosado-violceo, en la muestra que contiene el color blanco indica que los equivalentesgramo del hidrxido de amonio fueron neutralizados por los equivalentes-gramo del cido clorhdrico. Realizar el procedimiento con los dems tubos y registrar el HCl que fue empleado para cada tubo. 4. GLOSARIO Ureasa: es una enzima amidohidrolasa de peso molecular: 480.kD, punto isoelctrico: 5.0 y pH ptimo entre 6 y 7, cataliza la hidrlisis de la urea produciendo gas carbnico, hidrxido de amonio, segn la reaccin Sustrato: El trmino sustrato se refiere al material que utilizamos para llenar el recipiente de cultivo y que, en cierto modo, es el sustituto de la tierra Hidrlisis: es una reaccin qumica entre una molcula de agua y otra molcula, en la cual la molcula de agua se divide y sus tomos pasan a formar parte de otra especie qumica. Esta reaccin es importante por el gran nmero de contextos en los que el agua acta como disolvente. 5. BIBLIOGRAFA Jairo Enrique Granados Moreno. MSc. Protocolo de prctica. Bioqumica Metablica. Universidad Nacional Abierta y a Distancia. UNAD. 2011. es.wikipedia.org/wiki/Urea es.wikipedia.org/wiki/cido clorhdrico www.juntadeandalucia.es/averroes/.../06/.../apuntes _formulacion.pdf www.horturba.com/castellano/cultivar/ficha_manejo. php?ID=19 quimicacotidiana.blogspot.es/1243907160/ es.wikipedia.org/wiki/Hidrlisis

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PRACTICA N2 CAPACIDAD AMORTIGUADORA Y POTENCIAL AMORTIGUADOR DE MUESTRAS BIOLGICAS

INTRODUCCION Capacidad amortiguadora y potencial amortiguador, nos ayuda a evaluar si el Ph se mantiene constante en las reacciones enzimticas, las cuales pueden ser con sustancias acidas o bases, con las cuales debemos tener mucho cuidado ya que las especies vegetales y animales deben tener un pH adecuado de tal manera que se podr obtener un ptimo rendimiento y desarrollo de los organismos, en el caso de las plantas si el cultivo establecido no cuenta con un pH optimo ser muy difcil lograr que las plantas asimilen los nutrientes, causando que las reacciones catalizadas por enzimas no tengan una velocidad constante y se dificulte el proceso de sobrevivencia en la planta

Agitador De vidrio Probeta graduada 100ml Balanza digital 1.2 Reactivos a utilizar
REACTIVO (NOMBRE) FRMULA MOLECULAR CONC.

cido Clorhdrico Fenolftalena Rojo de metileno Hidrxido de sodio Buffer fosfato pH=6,8-7,0

HCl C20H14O4 C6H4COOC(C6H4--HOH)2 C15H15N3O2 NaOH

0.1 N

0.1 N

HPO4/H3PO4

Mentefacto diagrama conceptual

1.3 Procedimiento 1.3.1Tecnicas analticas Variable(indicador) evaluada(o) pH Capacidad Amortiguadora Tcnica analtica utilizada

Mtodo potenciomtrico Mtodo titulacin volumtrica 1.3.2 En laboratorio: Protocolos de muestras analizadas (Elaborar una ficha formato que muestre la informacin fundamental sobre el origen de cada una. Por ej.: especie, nombre cientfico, lugar de muestreo, datos agros climatolgicos, animales, etapa productiva, alimentacin etc.) 1.3.3. Diagrama de Flujo
Adicionar 100ml de agua destilada Agitar y filtrar

1. MATERIALES Y MTODOS

Pesar las muestra s Medir PH y tomar datos y

Colocarlas en el erlenmeyer 5 g Agitar por 1 min

1.1. Materiales y equipos requeridos

Material/Equipo Potencimetro Pipetas graduadas Equipo de titulacin Bureta graduada Erlenmeyer Beaker Soporte universal Muestras Esptula Caractersticas. 10 mL Pyrex medianos 25mL De 125mL 250 ml Metlico, con pinza para bureta Concentrado, orina, sangre y forraje. metlica

Agregar 5 ml de HCL

Medir PH PH

2. TABLA DE DATOS: TABLA 1: Datos volumtricos para amortiguadora de muestras biolgicas. Muestras Agua destilada Buffer fosfato Leche Vm (ML) capacidad

V NaOH 0,1N (mL)

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TABLA 2: Datos potenciomtrico para capacidad amortiguadora de muestras biolgicas Muestras Wm (g) Concentrado Harina Forraje Sangre Orina Valores Evaluados Vm (ml) pH 1

del pKa (la constante de disociacin del cido) y de las concentraciones de equilibrio del cido o base, del cido o la base conjugada. 5. BIBLIOGRAFA Mdulo de bioqumica metablica, AUTOR: JAIRO ENRIQUE GRANADOS MORENO., MSc. DOCENTE ECAPMA es.wikipedia.org/wiki/Bicarbonato es.wikipedia.org/wiki/Respiracin_celular www.ehu.es/biomoleculas/1b/pdf/5_buffers.pdf aguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/.../amortiguador es%20celulares.h... Artculo cientfico Evaluacin in vitro de dos amortiguadores y un ionforo sobre variables fermentativas y microbiolgicas.

pH 2

TABLA 3. Valores de capacidad y amortiguador para las muestras analizadas. Muestras (mEq HCl /pH) (mEqNaOH /pH) P () HCl

potencial

P () NaOH

Concentrado Harina Forraje Sangre Orina 3. RESULTADOS ESPERADOS Al realizar el procedimiento de la capacidad amortiguadora por el mtodo de titulacin y con la ayuda del potencimetro llegar a siguientes concluir: Si los procesos biolgicos son dependientes del pH; Si un pequeo cambio en el pH lleva a un gran cambio en la velocidad de un proceso. 4. GLOSARIO Capacidad Amortiguadora: La capacidad amortiguadora de un tampn es la cantidad de cido o de base que se puede agregar, antes de que el pH comience a cambiar de modo apreciable, y est determinada por el valor real de las concentraciones de los componentes del par cido/base conjugado. Solucin Buffer: Es una o varias sustancias qumicas que afectan a la concentracin de los iones de hidrgeno (o hidronios) en el agua. Siendo que pH no significa otra cosa que potencial de hidrogeniones (o peso de hidrgeno), un "buffer" (o "amortiguador") lo que hace es regular el pH. Cuando un "buffer" es aadido al agua, el primer cambio que se produce es que el pH del agua se vuelve constante. De esta manera, cidos o bases (lcalis = bases) adicionales no podrn tener efecto alguno sobre el agua, ya que esta siempre se estabilizar de inmediato. La ecuacin de Henderson-Hasselbalch es una frmula qumica que se utiliza para calcular el pH, de una solucin buffer, o tampn, a partir

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PRACTICA N3: DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES (CNE), POR EL MTODO DE FENOL-ACIDO SULFURICO.
INTRODUCCION INTRODUCCIN El proceso de determinacin de carbohidratos no estructurales (CNE), por el mtodo de fenol-cido sulfrico es un procedimiento que nos ayuda a conocer dichas proporcionas en alimentos lquidos, extractos lquidos, materiales de celulosa, entre otros, esto se logra gracias a las reacciones llevadas en laboratorio, ya que los azucares simples, oligosacridos, polisacridos, y sus derivados dan una coloracin al entrar en contacto con fenol cido sulfrico.

Pesar +/- 1.0g de muestra de forraje, en balanza analtica y registrar como: (Wm) depositarla luego en un vaso de precipitado y agregar 50 mL de solucin de HCl 0,6N. Agitar constantemente con la varilla de vidrio durante 3 minutos. Llevar el breaker con la solucin al bao termostatado y calentar a 90C, durante 10 min. Dejar enfriar por 5 min y filtrar sobre papel filtro. Medir el volumen del filtrado (Vf) y pasar 5mL a un tubo de ensayo, adicionar a ste 5mL de NaOH 0,6N, agitar por 15 segundos, tapar y rotular as: FCNE: Filtrado para carbohidratos no estructurales.

1.3.2 EN LABORATORIO 1.3.3. Diagrama de Flujo

Mentefacto diagrama conceptual

1. MATERIALES Y MTODOS

1.1. Materiales y equipos requeridos

Materiales Vidriera Equipos Tubos de ensayo Gradilla pinzas para bureta erlenmeyer de 125mL pipetas de 5 y 10mL matraz aforado de 100mL bao termostatado Beaker de 400mL bureta de 25mL soporte universal

Filtrado para carbohidratos no estructurales

2. Tabla de datos Tabla 1: Datos para la cuantificacin CNE

1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Fenol cido sulfrico Hidrxido de sodio Agua destilada Frmula C6H5OH H2SO4 NaOH H2O Concentracin 5% 1N O,6N 20 mL

Indicadores Wm Vf Ast Am

Descripcin Peso de la muestra Volumen del filtrado Absorbancia del estndar Absorbancia del tubo que contena el FCNE

Valor

1.3 Procedimiento 1.3.1 Extraccin:

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3. RESULTADOS ESPERADOS

Determinar los carbohidratos no estructurales

4. GLOSARIO Mtodo de fenol-sulfrico: Este mtodo propuesto por Dubois en 1956 se fundamenta en que los carbohidratos son particularmente sensible a cidos fuertes y altas temperaturas. Bajo estas condiciones una serie de reacciones complejas toman lugar empezando con una deshidratacin simple, si se contina el calentamiento y la catlisis cida se producen varios derivados del furano que condensan consigo mismos y con otros subproductos para producir compuestos coloridos producto de la condensacin de compuestos fenlicos y con heterociclos con el nitrgeno como heterotomo. Termostato: Es el componente de un sistema de control simple que abre o cierra un circuito elctrico en funcin de la temperatura. Su versin ms simple consiste en una lmina bimetlica como la que utilizan los equipos de aire acondicionado para apagar o encender el compresor. cido sulfrico: Es un compuesto qumico extremadamente corrosivo cuya frmula es H2SO4. Es el compuesto qumico que ms se produce en el mundo, por eso se utiliza como uno de los tantos medidores de la capacidad industrial de los pases. 5. BIBLIOGRAFA Mdulo de bioqumica metablica, AUTOR: JAIRO ENRIQUE GRANADOS MORENO., MSc. DOCENTE ECAPMA. Granados, J.,(2010),Protocolo prcticas de laboratorio, ECAPMA; UNAD.

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PRACTICA N5: CUANTIFICACIN DE NITRGENO NO PROTEICO (NNP) (Fraccin A de Van Soest) INTRODUCCION El
Corresponde a los compuestos que poseen nitrgeno en su molcula en formas diferentes a la que es propia de las protenas (cadenas peptdicas). (Aminocidos libres, Purinas, Amidas, Alcaloides, Sales de amonio, Compuestos ntricos y Urea). Su utilizacin queda limitada a nivel del ciego y colon principalmente. La urea en el intestino delgado es absorbida como tal y solamente es desdoblada en los sacos fermentadores. ANALISIS DE VAN SOEST Mediante este mtodo se diferencian los componentes estructurales presentes en las paredes celulares, de aquellos que constituyen los contenidos celulares.

1.2 Reactivos a utilizar Reactivo cido Tricloroactico (ATA) Frmula CI3- CCOOH) H2O Concent. 10 %. 20 mL

nitrgeno

no

proteico

Agua destilada 1.3 Procedimiento

Pesar +/- 1,0 g de muestra (forraje) y colocar en vaso de precipitado. Adicionar 30 mL de agua destilada, agitar por un minuto. Dejar reposar la mescla por un minuto. Adicionar 20 mL de solucin de ATA, agitar por un minuto. Reposar a temperatura ambiente 15 minutos. Filtrar con papel filtro sobre probeta. Medir el volumen de filtrado (VF). Recolectar 5 Ml del filtrado, colocarlos en un tubo de ensayo y rotularlo: FNNP- filtrado para nitrgeno no proteico. Tuvo con la muestra de forraje y Proceso de filtrado nitrgeno no proteico (NNP) 1.3.2 EN LABORATORIO 1.3.3. Diagrama de Flujo

Mentefacto diagrama conceptual

1. MATERIALES Y MTODOS 1.1 Materiales y Equipos requeridos Materiales Equipos Vidriera Tubos de ensayo gradilla pinzas para bureta Erlenmeyer de 125mL Filtrado pipetas de 5 y 10mL para carbohidratos no matraz aforado de 100mL estructurales bao termostatado Beaker de 400mL bureta de 25mL soporte universal

2. Tabla de datos Tubos Wm (g)

Estndar (st) m tipoy origen de la muestra

Vf (mL)

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3. RESULTADOS ESPERADOS (segn lo planteado en las guas de laboratorio)

BIBLIOGRAFA http://quimicosfarmacobiologos.bligoo.com.mx/m edia/users/10/523320/files/51871/ManualBioqu_mica_II.pdf http://es.scribd.com/doc/20270275/InformeN%C2%BA1-laboratorio-de-bioquimica-II http://www.elergonomista.com/quimica/q9.html http://es.wikipedia.org/wiki/Hidr%C3%B3lisis MODULO BIOQUIMICA METABOLICA, UNAD http://www.a14.san.gva.es/laboratorio/web/poten ciometricas.htm http://espanol.answers.yahoo.com/question/inde x?qid=20101014210010AADGjg6 http://www.slideshare.net/ekathy80/mentefactoconceptual

Con este laboratorio se lograra mostrar definiciones de algunos conceptos, procedimientos, datos y soluciones que debemos tener y manejar como la base fundamental del conocimiento de la bioqumica metablica. Debido a que cerca del 90 % del nitrgeno total (NT) se encuentra en forma insoluble con el desarrollo del laboratorio se busca conocer el contenido de este en una muestra de forraje y concentrados. Se busca comprender la manera en la que en nitrgeno a travs de muchos procesos internos del animal se convierte en amoniaco o gas carbnico. Se espera que los resultados obtenidos sean similares a los encontrados en la literatura. Cuantificar el Nitrgeno en el filtrado, por mtodo espectrofotomtrico de BiuretLowry. Se busca desarrollar los clculos siguiendo las formulas propuestas en la gua de laboratorio. 4. GLOSARIO Nitrgeno no proteico: Se denomina Nitrgeno no proteico a los compuestos de nitrgeno que pueden ser convertidos en protenas por algunos organismos vivos. Muchos organismos superiores no pueden obtener aminocidos de otras formas, ms que absorbindolos de la dieta. Los cuales pueden ser convertir algunos aminocidos en otros diferentes. Los compuestos que forman el NNP son los que contienen amonaco, nitritos y nitratos y otros como la urea, el biuret o el cido rico. Los organismos que puede utilizar el NNP son los hongos, las plantas y algas, bacterias y organismos que viven en simbiosis con ellos. Espectrofotomtricas: Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis qumico que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentracin o reacciones qumicas que se miden en una muestra. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y microorganismos. Anlisis Kjeldahl: Las determinaciones de nitrgeno de Kjeldahl se realizan sobre una variedad de sustancias alimentarias. El mtodo Kjeldahl se puede desglosar en tres pasos principales: digestin, destilacin y valoracin. Forraje: Pasto puede ser el verde plantado o el seco. El forraje es cualquier hierba seca que sirva de alimento a los animales.