ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA INGENIERA EN BIOTECNOLOGA INMUNOLOGA Integrantes: Alejandro Olmedo, Andrea Vaca

Informe de Laboratorio N2 Prctica 2 TEMA: Grupo sanguneo Rh; efectos indeseables de la inmunidad OBJETIVO Determinar el grupo sanguneo y Rh, someterlos a compatibilidad con otros tipos y observar la reaccin Ag-Ac FUNDAMENTOS El descubrimiento del sistema ABO para el grupo sanguneo fue fundamental en la evolucin de la transfusin sangunea. Se supo entonces que si los eritrocitos de un grupo eran mezclados con el suero de otro grupo, sera aglutinados o hemolisados, aun cuando provinieran de individuos con un parentesco cercano. Tiempo despus, se descubri el factor Rh Rhesius en honor al mono donde fue investigado. La inmunidad humoral comprende la produccin de inmunoglobulinas Ac por linfocitos B, en respuesta a estmulos antignicos especficos. La inmunidad celular comprende la interaccin directa de los linfocitos T con las clulas de extraas. Al entrar en contacto con eritrocitos de un grupo sanguneo distinto al propio, el sistema inmunolgico libera anticuerpos que se fijan a las clulas y las destruyen. MUESTRA Sangre total Material Agujas Jeringas Torundas Torniquetes Alcohol Placa de vidrio con crculos MTODO Grupo sanguneo y Rh 1. 2. 3. 4. 5. En caso de no contar con una placa marcada, trazar tres crculos en una placa de vidrio Colocar una gota de sangre en cada crculo Agregar a cada crculo una gota de reactivo a distinto ac Anti A, B, D Mezclar el contenido de cada crculo con aplicadores de madera a distintos Observar la presencia o ausencia de aglutinacin. La aglutinacin indica la presencia del antgeno para el anticuerpo agregado. Tubos de ensayo de 12 x 75 mm Aplicadores de madera Ac anti A, anti B, anti D Antiglobulina especfica IgG Solucin salina Pipetas desechables Fecha: 12 09 2013

RESULTADOS Y DISCUSIN Se observ para cada tipo de muestra de sangre (A y B) las reacciones de aglutinacin que ocurran al agregar los distintos sueros con anticuerpos anti A, B y D y as se determina si una persona es del tipo sanguneo A, B, AB, O y si presenta un factor Rh positivo o negativo. Esto ocurre porque en humanos, los eritrocitos poseen un conjunto de glucoprotenas y glucolpidos que pueden actuar como antgenos, que son sustancias capaces de estimular formacin de anticuerpos reaccionando con el propio antgeno. Existen al menos 24 grupos sanguneos con ms de 100 antgenos que pueden ser detectables en la superficie de glbulos rojos pero, los de inters general son los antgenos A, B y D (Rh) debido a la importancia a tomar en transfusin sangunea, transplante de tejidos y enfermedades hemolticas del recin nacido (Grispn, 2003). En la figura 1, se puede observar las reacciones de aglutinacin correspondientes para una persona de sangre A con factor Rh positivo, en la que en la primera gota desde la izquierda se puede observar aglutinacin debido a una reaccin antgeno-anticuerpo debido a los anticuerpos anti-A agregados demostrando la presencia de antgenos A, en la que los eritrocitos han sido destruidos; en la gota del centro no se observa nada debido que se agreg anticuerpos anti-B que reaccionaran con la presencia de antgenos B (ausentes en sangre A) y finalmente en la gota de la derecha se observa la aglutinacin debido a los anticuerpos anti-D agregados demostrando la presencia de antgenos D (factor Rh positivo) (Gonzlez, 2006).

Figura 1. Aglutinacin por adhesin anticuerpos anti-A y anti-D (izquierda y derecha respectivamente)

En la figura 2, se puede observar las reacciones de aglutinacin correspondientes para una persona de sangre B con factor Rh positivo, en la que en la primera gota desde la izquierda no se observa aglutinacin con anticuerpos anti-A, indicando ausencia de antgenos A; en la gota del centro se observa aglutinacin con anticuerpos anti-B indicando la presencia de antgenos B (caracterstica de sangre B) y finalmente en la gota de la derecha se observa la aglutinacin debido a los anticuerpos anti-D agregados demostrando la presencia de antgenos D (factor Rh positivo) (Arbelez, 2009).

Figura 1. Aglutinacin por adhesin anticuerpos anti-B y anti-D (centro y derecha respectivamente)

En la figura 3, se pueden observar los anticuerpos empleados para la determinacin de grupo sanguneo y factor Rh, desde izquierda a derecha se observa los anticuerpos anti-A, anti-B y anti-D respectivamente donde los anticuerpos anti A y B son anticuerpos monoclonales, anticuerpos provenientes de una lnea germinativa celular de una sola clula, mientras que el anticuerpo anti D empleado es una mezcla de anticuerpos monoclonales con anti-D IgM que produce la aglutinacin directa con los glbulos rojos con antgeno D normal, que en caso de D

dbiles (disminucin de expresin de antgeno D) no aglutinan directamente para lo cual complementa el anti-D IgG (wiener-lab, 2007). CUESTIONARIO Cul es la estructura de los grupos sanguneos El grupo sanguneo en humanos posee clasificaciones segn los antgenos y anticuerpos del sistema ABO y el factor Rh. El sistema ABO recibe su nombre debido a los antgenos A, B y O que indica una ausencia, mientras Rh se refiere al factor Rho, descubiertos en monos Rhesus, con 50 antgenos descubiertos hasta el momento. Sistema ABO: Las personas con sangre tipo A, poseen eritrocitos con antgenos A en su superficie y anticuerpos contra antgenos B (anti-B) en el plasma. Las personas con sangre tipo B, poseen eritrocitos con antgenos B en su superficie y anticuerpos contra antgenos A (anti-A) en el plasma. Las personas con sangre tipo O, poseen eritrocitos sin antgenos A o B en su superficie por lo que se considera donadores universales y poseen anticuerpos tanto anti-A como anti-B. Las personas con sangre tipo AB, poseen eritrocitos con ambos antgenos A y B, pero no poseen anticuerpos anti-A o anti-B por lo que se les considera receptores universales Factor Rh: Personas con factor Rh negativo, no poseen antgeno D y pueden formar anticuerpos contra el factor Rh (antgeno D) si estn expuestas a sangre Rh positiva. Personas con factor Rh positivo, poseen el antgeno D y no poseen algn tipo de anticuerpo de este factor. (Universidad de Arizona, 2004) Cules son las caractersticas estructurales de los antgenos del sistema ABO Los antgenos del sistema ABO corresponden a los antgenos A, B y H que en este caso corresponde al grupo sanguneo O. Estructura Antgeno A.- posee una -D-galactosa ligada a la protena y asociada a una -D-Nacetilglucosamina, que se asocia con una -D-galactosa y sta asociada a una -L-fucosa y una -N-acetylgalactosamina. Estructura Antgeno B.- posee una -D-galactosa ligada a la protena y asociada a una -D-Nacetilglucosamina, que se asocia con una -D-galactosa, y sta asociada a una -L-fucosa y una -D-galactosa, a diferencia de antgeno A. Estructura Antgeno H (Precursor presente en sangre tipo O).- posee una una -D-galactosa ligada a la protena y asociada a una -D-N-acetilglucosamina, que se asocia con una -Dgalactosa, y sta asociada a una -L-fucosa. Cules son los precursores de estos antgenos Una glicoprotena SP, llamada sustancia precursora, produce una sustancia H en presencia del gen H. Este gen se localiza en el cromosoma 19 compuesto de 3 exones y produce una enzima fucosil-transferasa que aadir un azcar a la glicoprotena SP, produciendo el antgeno H consistiendo de una cadena ligada a la protena de galactosa, N-acetilglucosamina, y galactosa ligada a una fucosa (Calafell, 2008).

De qu manera se van formando las estructuras glicosdicas de los tipos ABO Una vez que se ha formado el antgeno precursor H, acta el gen del locus ABO que se encuentra en el cromosoma 9 compuesto de 7 exones conteniendo 3 formas allicas: A, B y O; el alelo A codifica una glicosil-transferasa que unir una N-acetilgalactosamina a la Galactosa del fin en el antgeno H precursor, produciendo el antgeno A. El alelo B codifica una glicosiltransferasa que unir una Galactosa ms a la Galactosa del fin en el antgeno H precursor, produciendo el antgeno B. El alelo O, posee una falta de un nuclotido comparado con el alelo A que ocasiona un desplazamiento en el marco lectura resultando en una terminacin prematura de la traduccin ocasionando la degradacin del mRNA, no codificando enzima alguna por lo que el precursor antgeno H queda intacto para este grupo sanguneo (Calafell, 2008). Cul es el tipo sanguneo BOMBAY y como se forma Es un tipo de sangre muy poco frecuente que no presenta ningn antgeno A, B o H en membrana de glbulos rojos. Esto ocurre debido a que una persona es homocigota recesiva para el gen H por lo que no puede transformar la glicoprotena SP en precursor antgeno H que es necesaria para luego dar lugar a los antgenos A o B. Este tipo de personas rechaza transfusiones de cualquier tipo de sangre normal A, B, O, AB debido a que posee adems de anticuerpos anti-A y Anti-B, un adicional anti-H rechazando incluso sangre O; siendo la solucin que esta persona reciba la transfusin de sangre de otra persona con sangre Bombay (Mellado et al., 2009). Que son las pruebas cruzadas Son pruebas de compatibilidad que fijan la seguridad transfusional entre donante-receptor, es entre el suero del receptor y clulas del donante (eritrocitos o plaquetas) e investiga posible presencia de anticuerpos en el suero mediante su reaccin en diferentes medios fsicoqumicos. En una prueba cruzada mayor completa (PCM) se investiga posibles anticuerpos frente a Antgenos tanto en ABO como el resto de antgenos eritrocitarios en el suero del receptor. En una prueba cruzada mayor en medio salino (PC en salino) determina generalmente presencia IgM-Ac, en el suero del receptor frente a eritrocitos del dador (Barbolla y Contreras, 2007) Que son las pruebas directa e indirecta de Coombs Son pruebas empleadas en inmunologa y hematologa que detectan anticuerpos en suero de sangre que reaccionan con antgenos de superficie de eritrocitos. La prueba directa se emplea para determinar si existen anticuerpos ya fijados a eritrocitos que son tomados de manera directa del paciente, estas clulas sacadas de la vena se lavan e incuban con un reactivo propio Coombs que poseen anticuerpos y se unirn a IgG, IgM. Indica un resultado positivo cuando se produce aglutinacin de un grupo de clulas indicando distintos posibles trastornos. Mientras que la prueba indirecta detecta anticuerpos especficos de antgenos que pueden no estar presentes en los eritrocitos del paciente pero, si en eritrocitos de otras personas que puede ser como en el caso de madre-hijo por eritroblastosis fetal (Walport, Travers y Murphy, 2008). Qu tipo de herencia se da en el sistema ABO y qu fenotipos se tendran a partir de los genotipos: Este sistema es controlado por un gen en el locus ABO, que se hereda de manera mendeliana simple, con 3 formas de sus alelos ya explicados donde alelos A y B son dominantes sobre O y codominantes entre s. Por lo que una persona fenotipo A puede ser de genotipo A/A o A/o, fenotipo B puede ser genotipo B/B o B/o, fenotipo O solo puede ser o/o, y fenotipo AB solo puede ser A/B resumidos en el cuadro a continuacin (Calafell, 2008).

Cuadro 1. Genotipos y Fenotipos diferentes Sangre Genotipos AA Ao BB Bo AB oo Fenotipos A A B B AB O Qu tipo de anticuerpos se forman contra los antgenos del sistema ABO En el sistema ABO, existe un anticuerpo para cada tipo de antgeno, es as que para el antgeno A hay el anti-A, para el antgeno B hay el anti-B, por lo que un individuo que carezca de ambos antgenos producir ambos anticuerpos (Sangre O). Dichos anticuerpos son predominantes del tipo IgM y menos frecuentes del tipo IgG. Existe un anti A-B que presenta una reaccin cruzada con un antgeno presente en eritrocitos A y B, que es denominado antgeno C o complejo A,B. Existe a la par un anti-H que ser el anticuerpo correspondiente para el antgeno H precursor de los antgenos A y B y antgeno presente en sangre tipo O (Universidad de Arizona, 2004). Porque un individuo con fenotipo A o B tiene anticuerpos contra el fenotipo que no posee Debido a que si poseyera anticuerpos contra los antgenos que posee existiera constantemente hemlisis en su sangre (algo absurdo contra la naturaleza) adems se cree que este tipo de anticuerpos nacen contra defensa bacteriana que poseen antgenos similares que se adquiri la defensa acorde la evolucin del humano (Grispn, 2003). Cules son los mecanismos que participan en la eritroblastosis fetal Este trastorno proviene de la incompatiblidad Rh principalmente aunque en ocasiones puede deberse tambin a reacciones contra otros antgenos como Kidd, Kell. Una incompatiblidad ABO hemlisis grave en el feto con muy baja frecuencia ya que antgenos ABO generan una respuesta inmune con anticuerpos tipo IgM, anticuerpos que no cruzan la placenta y por ende no pueden atacar el feto. Se produce cuando una madre posee sangre Rh negativa y el feto por herencia del padre tiene Rh positiva, debido a esto la madre al poseer anticuerpos contra Rh el organismos de la madre no tolera los eritrocitos del feto tratndoles como agentes extraos creando anticuerpos tipo IgG que cruzan la placenta hasta el feto y atacan las clulas sanguneas del mismo (Gonzlez, 2006) Cul es la alternativa para evitar la isoinmunizacin materno fetal y como acta Una vez que se ha determinado el caso de eritroblastosis fetal se puede realizar una accin preventiva ante la incompatiblidad Rh, la madre debe tomar un medicamento llamado RhoGAM durante y despus del embarazo que es un globulina hiperinmune Rh (RhIg) que ocasiona la destruccin rpida de los eritrocitos del feto o beb que puedan haber entrado en la circulacin sangunea materna, previniendo as que la madre genere anticuerpos Rh que pueden ser peligrosos para el feto o causar posibles futuras complicaciones del embarazo (Gonzlez, 2006). CONCLUSIONES Los grupos sanguneos ABO y factor Rh se determinan mediante pruebas con anticuerpos que aglutinan los eritrocitos en la sangre indicando el grupo sanguneo correspondiente. Los antgenos que determinan el grupo sanguneo ABO que estn presentes o ausentes en las membranas de los eritrocitos se encuentran regulados su expresin por 3 alelos de un gen. La determinacin del grupo sanguneo ABO como factor Rh es muy importante especialmente en enfermedades que requieran transfusiones sanguneas o determinacin de histoinmunocompatibilidad para

transplante de rganos, as como madres embarazadas en prevencin de una isoinmunizacin materno fetal. Los anticuerpos son clulas del sistema inmune que sirven de deteccin y defensa contra cuerpos extraos como son agentes patgenos. Los antgenos son molculas como glicoprotenas, glicolpidos o lipoprotenas donde el receptor o molcula fijadora en antgenos ABO consiste en un carbohidrato.

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