Espectrofotometria

Espectrofotometria
Mtodo de anlise baseado em medidas de absoro de radiao eletromagntica. Espectrofotometria ptica
Comprimento de onda corresponde a luz visvel ou ultra-violeta:
faixa entre aproximadamente 180 a 800 nm

Absoro de Radiao
Vrios fenmenos podem ocorrer com a radiao luminosa, como: reflexo, refrao, espalhamento ou ser absorvida pelo material.

Transmitncia
Transmitncia a frao da luz incidente em um comprimento de onda especfico, que passa por uma amostra de matria.

T = I / I0

Absorbncia
a capacidade do material em absorver radiaes em frequncia especfica.

A = - log10 T

Absoro de Radiao
Os comprimentos de onda que uma certa substncia absorvero so caractersticos da sua estrutura, diferindo de substncia para substncia.
DNA e RNA = 260nm Protenas = 280nm Clulas bacterianas= 600nm

Absorbncia X Transmitncia

Lei de Lambert-Beer
Atravs dessa lei, intensidades da radiao incidente e emergente podem ser relacionadas com as concentraes do material presente na soluo.
Efeitos de reflexo, refrao e espalhamento no so considerados nessa lei. A radiao incidente deve ser monocromtica

Lei de Lambert-Beer
I0 = intensidade da radiao incidente I = intensidade transmitida pela amostra l = comprimento

I = I0 10-lc

Lei de Lambert-Beer
Transmitncia:

T = I / I0
Na lei de Lambert-Beer

T = 10-lc

Lei de Lambert-Beer
Absorbncia

A = - log10 T
Na lei de Lambert-Beer

A = - log10 T = log10(1/T ) = log10(10-lc)

Espectrofotmetro
um instrumento que serve para medir a intensidade da luz em funo de um comprimento de onda especfico.

Diagrama de um espectrofotmetro

(a) lmpada de deutrio/tungstnio; (b) lente da fonte; (c) obturador; (d) amostra; (e) lente espectrogrfica; (f) fenda; (g) rede de difrao; (h) arranjo de detectores

Fontes Luminosas
Luz UV
Lmpada de gs hidrognio Mercrio

Luz Visvel
Tungstnio

Cubetas
Espectrofotometria de Luz Visvel
Cubeta de Vidro ou Plstico

Espectrofotometria de Luz Ultra- Violeta

Cubeta de Quartzo

Paulo Damaceno Luis Eduardo Jos Leonardo Loubet Guass Reginaldo Azevedo