VICERRECTORADO DE INVESTIGACIN

Metales Pesados en Suelos y Plantas: Contaminacin y Fitotoxicidad

Cecilia Maura Meja Dominguez

M(o) Ciencia de Alimentos Departamento Acadmico de Bromatologa y Nutricin

AGRADECIMIENTO:
A mis alumnos quienes me incentivan cada da a ser mejor.

INDICE

Pag PRLOGO I. METALES PESADOS Y FITOTOXCIDAD

1.1 Caractersticas de los metales pesados 1.2 Origen y destino de los metales pesados en el suelo 1.2.1 Presencia de Metales en los suelos 1.3 Estrs por metales pesados 1.4 Absorcin y traslocacin de metales pesados en las plantas 1.5 El problema de la entrada de metales pesados en la planta 1.5.1 Contaminacin del suelo 1.5.2 Dinmica de los metales pesados en el suelo 1.5.3 Transporte 1.5.4 Toxicidad de los metales pesados

5 6
6 6 6 11 15 16 16 16 16 16

1.6 Clasificacin de los cultivos en relacin al riesgo alimentario 1.7 Fitotoxicidad 1.7.1 Metales en plantas y fitotoxicidad II. CADMIO: INGRESO, TRANSPORTE Y ACUMULACIN EN SUELOS Y PLANTAS
2.1 Generalidades. 2.2 Aspectos del cadmio 2.2.1 Caracterizacin 2.2.2 Aportes al ambiente 2.2.3 Efectos sobre la salud humana 2.2.4 Relacin con el medio ambiente 2.3 Fuentes de contaminacin de cadmio 2.4 Ingreso del cadmio en la cadena trfica 2.5 Ingreso, transporte y acumulacin de cadmio 2.6 Toxicidad del cadmio 2.7 Estrategias de tolerancia al cadmio 2.8 Hiperacumulacin y fitoextraccin de cadmio 2.9 Modelo de evaluacin y manejo del riesgo del cadmio en el suelo 2.9.1 Descripcin general del modelo de acumulacin 2.9.2 Concentraciones de cadmio en suelos agrcolas 2.9.3 Tasa anual de entrada de Cd a los suelos agrcolas ( Ke) 2.9.4 Extraccin de cadmio va cultivos 2.9.5 Lixiviacin de cadmio en suelos agrcolas FITOTOXICIDAD

19 21 23

26 27 27 28 28 29 31 32 32 33 35 35 36 37 38 39 39 39 42 42 42 45 45 45

III.

FITOTOXICIDAD DEL PLOMO

3.1 Generalidades 3.2 Estrs por plomo 3.3 Distribucin de plomo en la raz
3.4 Plomo en el apoplasto 3.4.1 Pared celular

3.4.2 Membrana plasmtica 3.5 Transporte de plomo 3.6 Efectos fisiolgicos 3.6.1 A altas concentraciones de Pb 3.6.2 A bajas concentraciones de Pb 3.6.3 Efectos ultraestructurales 3.7. Efectos bioqumicos 3.7.1 Efectos sobre las actividades enzimticas 3.7.2 Efectos sobre la fotosntesis. 3.7.3 Efectos sobre la respiracin y contenido en ATP 3.7.4 Efectos sobre la absorcin de nutrientes 3.7.5 Efectos sobre las relaciones hdricas 3.8. Tolerancia al plomo 3.8.1 Metabolismo oxidativo 3.8.2 Mecanismos de proteccin vegetal 3.8.3 Mecanismos de tolerancia al plomo 3.9 Remediacin de suelos contaminados con plomo

45 46 48 49 49 50 50 51 51 53 54. 55. 56 56 56. 57 59

IV. OTROS METALES 4.1 Cromo 4.2 Manganeso 4.3 Nquel 4.4 Cobre 4.5 Cinc 4.6 Arsnico 4.7 Selenio 4.8 Molibdeno 4.9 Mercurio

62 62 62 63 65 66 67 67 72 72

V. MECANISMOS CELULARES PARA TOLERANCIA Y DETOXIFICACIN DE METALES PESADOS EN PLANTAS 5.1 Aspectos de interaccin planta- metal relacionado con tolerancia y detoxificacin 75 5.1.1 Micorrizaas 75 5.1.2 Pared celular y exudados de raz 76 5.1.3 Membrana Plasmtica 77 5.1.4 Quelacin 78 5.1.5 Compartimentalizacin vacuolar 82 5.1.6 Biotransformacin 84 5.1.7 Mecanismo de reparacin celular 84 5.2 Mejora de la entrada y acumulacin de los metales pesados en plantas 85 EPLOGO APNDICE GLOSARIO BIBLIOGRAFIA 86 88 89 90

Metales Pesados en Suelos y Plantas: Contaminacin y Fitotoxicidad

RESMEN

Debido a la diversidad de fuentes que pueden incrementar el contenido de metales pesados en los suelos agrcolas, se requieren estudios que evalen el contenido y la distribucin de los metales pesados en las distintas zonas geogrficas, para estimar la calidad medioambiental de estas reas y evitar su continuo deterioro. Asimismo, el estudio del contenido de metales pesados en los cultivos hortcolas permite evaluar la calidad de una parte de los alimentos consumidos, que pueden incrementar los niveles de estos elementos en el cuerpo humano con las posibles repercusiones para la salud. En el humano las tres principales vas entrada al cuerpo son: la inhalatoria ya sea en forma de partculas (gas o vapor) en forma elemental o como combinaciones inorgnicas u orgnicas, la drmica a travs de la piel y la oral cuando se ingiere bebidas o alimentos contaminados. Por lo mencionado es necesario contar con informacin actualizada sobre los contaminantes metlicos en el medio ambiente y los mecanismos que ocurren en el los sistemas biolgicos y que factores pueden afectar la absorcin y acumulacin de estos metales en el suelo y plantas y por consiguiente en los alimentos los cuale son utilizados por el hombre y animales, siendo una fuente de exposicin a estos contaminantes metlicos. En el presente se han considerado cinco captulos: I. Metales pesados y su fitotoxcidad; II. Ingreso, absorcin y acumulacin del cadmio en suelos y plantas; III. Fitotoxicidad del plomo; IV. Otros metales pesados; V. Aspectos de Interaccin de planta-metal relacionadas con tolerancia y detoxificacin.

PRLOGO

Los metales pesados han sido ampliamente utilizados en muchas actividades, tales como la agricultura, la minera, la fundicin, la galvanoplastia y el refinado del oro. Por lo tanto, se han documentado serios problemas asociados a la contaminacin de los suelos en estas actividades. La acumulacin de metales pesados en las plantas inhibe o activa algunos procesos enzimticos que afectan su productividad tanto cualitativa como cuantitativamente. El plomo (Pb), el arsnico (As), el cadmio (Cd) y el zinc (Zn) y otros metales pesados pueden ser absorbidos por las plantas (Rodrguez-Ortz et al., 2006) hasta concentrarse en sus tejidos a niveles txicos. Tal situacin puede ser una posible va de entrada de estos metales en la cadena alimentaria humana a travs del consumo de plantas, directa o indirectamente por los seres humanos. Hay evidencias de que el Pb y Cd han sido la causa de efectos negativos sobre la salud humana, de la mortandad en animales, y la perturbacin de los ecosistemas naturales y los agro-ecosistemas. En general, los metales pesados pueden ser potencialmente txicos para la salud humana. Los metales pesados acumulados en el suelo superficial se reducen lentamente mediante la lixiviacin, el consumo por las plantas, la erosin y la deflacin. Sin embargo, los niveles de contaminacin y su impacto en algunas reas requieren de alternativas que en periodos relativamente cortos reduzcan los niveles de contaminacin por metales pesados y otros contaminantes. Debido a la diversidad de fuentes que pueden incrementar el contenido de metales pesados en los suelos agrcolas, se requieren estudios que evalen el contenido y la distribucin de los metales pesados en las distintas zonas geogrficas, para estimar la calidad medioambiental de estas reas y evitar su continuo deterioro. Asimismo, el estudio del contenido de metales pesados en los cultivos hortcolas permite evaluar la calidad de una parte de los alimentos consumidos, que pueden incrementar los niveles de estos elementos en el cuerpo humano con las posibles repercusiones para la salud. En el humano las tres principales vas entrada al cuerpo son: la inhalatoria ya sea en forma de partculas (gas o vapor) en forma elemental o como combinaciones inorgnicas u orgnicas, la drmica a travs de la piel y la oral cuando se ingiere bebidas o alimentos contaminados. Por lo mencionado es necesario contar con informacin actualizada sobre los contaminantes metalicos en el medio ambiente y los mecanimsos que ocurren en los sistemas biolgicos y que factores pueden afectar la absorcin y acumulacin de estos metales en el suelo y plantas y por consiguiente en los alimentos los cuale son utilizados por el hombre y animales, siendo una fuente de exposicin a estos contaminantes metlicos. En el presente texto, se han considerado cinco captulos: I. Metales pesados y su fitotoxcidad; II. Ingreso, absorcin y acumulacin del cadmio en suelos y plantas; III. Fitotoxicidad del plomo; IV. Otros metales pesados; V.Aspectos de Interaccin de planta-metal relacionadas con tolerancia y detoxificacin. Para el desarrollo de estas unidades se han considerado los trabajos de investigacin de diferentes autores, los cuales se mencionan en el desarrollo de este texto, asi como en las referencias bibliogrficas.

I.

METALES PESADOS Y FITOTOXICIDAD

1,1 Caractersticas de los metales pesados El trmino de metal pesado refiere a cualquier elemento qumico metlico que tenga una relativa alta densidad y sea txico o venenoso en concentraciones incluso muy bajas. Los ejemplos de metales pesados o algunos metaloides, incluyen el mercurio (Hg), cadmio (Cd), arsnico (As), cromo (Cr), talio (Tl), y plomo (Pb), entre otros ( Lucho et al., 2005a). Los metales pesados se encuentran generalmente como componentes naturales de la corteza terrestre, en forma de minerales, sales u otros compuestos. No pueden ser degradados o destruidos fcilmente de forma natural o biolgica ya que no tienen funciones metablicas especficas para los seres vivos ( Abollino et al., 2002 ). Los metales pesados son peligrosos porque tienden a bioacumularse en diferentes cultivos. La bioacumulacin significa un aumento en la concentracin de un producto qumico en un organismo vivo en un cierto plazo de tiempo, comparada a la concentracin de dicho producto qumico en el ambiente ( Angelova et al., 2004 ). En un pequeo grado se pueden incorporar a organismos vivos (plantas y animales) por va del alimento y lo pueden hacer a travs del agua y el aire como medios de traslocacin y dependiendo de su movilidad en dichos medios ( Lucho et al., 2005 ). Como elementos traza, algunos metales pesados [por ejemplo, cobre (Cu), selenio (Se), zinc (Zn)] son esenciales para mantener un correcto metabolismo en los seres vivos y en particular en el cuerpo humano. Sin embargo, en concentraciones ms altas pueden conducir al envenenamiento. Los metales pesados pueden incorporarse a un sistema de abastecimiento de agua por medio de residuos industriales que son vertidos sin previos tratamientos, los que posteriormente se depositan en lagos, ros y distintos sistemas acuferos ( Garca et al., 2005). La absorcin de metales pesados por las plantas es generalmente el primer paso para la entrada de stos en la cadena alimentaria. La absorcin y posterior acumulacin dependen en primera instancia del movimiento (movilidad de las especies) de los metales desde la solucin en el suelo a la raz de la planta. En plantas, el concepto de bioacumulacin se refiere a la agregacin de contaminantes; algunos de ellos son ms susceptibles a ser fitodisponibles que otros (Kabata-Pendias, 2000). 1.2 Origen y Destino de los Metales en el suelo 1.2.1 Presencia de Metales en los suelos Los metales pesados estn presentes en el suelo como componentes naturales del mismo o como consecuencia de las actividades antropognicas. En los suelos se pueden encontrar diferentes metales, formando parte de los minerales propios; como son silicio (Si), aluminio (Al), hierro (Fe), calcio (Ca), sodio (Na), potasio (K), magnesio (Mg).

Tambin puede encontrarse manganeso (Mn), que generalmente se presenta en el suelo como xido y/o hidrxido, formando concreciones junto con otros elementos metlicos. Algunos de estos metales son esenciales en la nutricin de las plantas, as son requeridos algunos de ellos como el Mn, imprescindible en el fotosistema y activacin de algunas enzimas ( Mahler, 2003) para el metabolismo vegetal. Se consideran entre los metales pesados elementos como el plomo, el cadmio, el cromo, el mercurio, el zinc, el cobre, la plata, entre otros, los que constituyen un grupo de gran importancia, ya que algunos de ellos son esenciales para las clulas, pero en altas concentraciones pueden resultar txicos para los seres vivos, organismos del suelo, plantas y animales (Spain et al., 2003), incluido el hombre. En la corteza terrestre existe una similitud entre la distribucin de nquel (Ni), cobalto (Co) y hierro (Fe). En los horizontes superficiales del suelo (capa arable), el Ni aparece ligado a formas orgnicas (Corinne et al., 2006), parte de las cuales pueden encontrarse formando quelatos fcilmente solubles. El nquel (Ni) es tambin un elemento esencial para el metabolismo de las -1 plantas, an cuando stas requieren menos de 0.001 mg kg de peso seco ( Mahler, 2003). Tambin de forma natural puede encontrarse el zinc (Zn) en los suelos, y es un nutriente requerido por las plantas para su desarrollo.. Las actividades geolgicas naturales, como desgastes de cerros y volcanes, constituyen una fuente de aportaciones importante de metales pesados al suelo. Tambin las actividades antropognicas como la industria minera, que est catalogada como una de las actividades industriales ms generadora de metales pesados. En el suelo, los metales pesados, pueden estar presentes como iones libres o disponibles, compuestos de sales metlicas solubles o bien, compuestos insolubles o parcialmente solubilizables como xidos, carbonatos e hidrxidos, (Pineda, 2004). La movilidad relativa de los elementos traza en suelos es de suma importancia en cuanto a su disponibilidad y su potencial para lixiviarse de los perfiles del suelo hacia las agua subterrneas y difiere de si su origen es natural o antrpico y, dentro de este ltimo, al tipo de fuente antrpica ( Burt et al., 2003). Dentro de los metales pesados, los denominados oligoelementos, y que pueden servir como micronutrientes para los cultivos, ya que son requeridos en pequeas cantidades y son necesarios para que los organismos completen su ciclo vital. Pasado cierto umbral se vuelven txicos, como el B, Co, Cr, Cu, Mo, Mn, Ni, Fe, Se y Zn y el metaloide As. Tambin hay metales pesados sin funcin biolgica conocida, cuya presencia en determinadas cantidades en seres vivos lleva aparejada disfunciones en el funcionamiento de sus organismos. Resultan altamente txicos y presentan la propiedad de acumularse en los organismos vivos, elementos tales como el Cd, Hg, Pb, Sb, Bi, Sn, Tl. (Garca y Dorronsoro, 2005). Cuando el contenido de metales pesados en el suelo alcanzan niveles que rebasan los limites mximos permitidos causan efectos inmediatos como inhibicin del crecimiento normal y el desarrollo de las plantas, y un disturbio funcional en otros componentes del ambiente as como la disminucin de las poblaciones microbianas del suelo, el trmino que se usa o se emplea es polucin de suelos (Martn, 2000).

En el suelo, los metales pesados como iones libres, pueden tener accin directa sobre los seres vivos lo que ocurre a travs del bloqueo de las actividades biolgicas, es decir, la inactivacin enzimtica por la formacin de enlaces entre el metal y los grupos SH (sulfhidrilos) de las protenas, causando daos irreversibles en los diferentes organismos. La contaminacin en suelos por metales pesados ocurre cuando estos son irrigados con aguas procedentes de desechos de minas, aguas residuales contaminadas de parques industriales y municipales y filtraciones de presas de jales (Wang et al., 1992). Una vez en el suelo, los metales pesados pueden quedar retenidos en el mismo pero tambin pueden ser movilizados en la solucin del suelo mediante diferentes mecanismos biolgicos y qumicos (Pagnanelli et al., 2004). Los metales pesados adicionados a los suelos se redistribuyen y reparten lentamente entre los componentes de la fase slida del suelo. Dicha redistribucin se caracteriza por una rpida retencin inicial y posteriores reacciones lentas, dependiendo de las especies del metal, propiedades del suelo, nivel de introduccin y tiempo (Han et al., 2003). Los factores que influyen en la movilizacin de metales pesados en el suelo son caractersticas del suelo: pH, potencial redox, composicin inica de la solucin del suelo, capacidad de intercambio (catinico y/o aninico), presencia de carbonatos, materia orgnica, textura, entre otras. La naturaleza de la contaminacin y el origen de los metales y formas de deposicin y condiciones medio ambientales producen acidificacin, cambios en las condiciones redox, variacin de temperatura y humedad en los suelos (Sauquillo et al., 2003). En general, los metales pesados incorporados al suelo pueden seguir cuatro diferentes vas: la primera, quedar retenidos en el suelo, ya sea disueltos en la fase acuosa del suelo u ocupando sitios de intercambio; segunda, especficamente adsorbidos sobre constituyentes inorgnicos del suelo; tercera, asociados con la materia orgnica del suelo y cuarta, precipitados como slidos puros o mixtos. Por otra parte, pueden ser absorbidos por las plantas y as incorporarse a las cadenas trficas; pueden pasar a la atmsfera por volatilizacin y pueden ser movilizados a las aguas superficiales o subterrneas (Garca y Dorronsoro, 2005). Para elucidar el comportamiento de los metales pesados en los suelos y prevenir riesgos txicos potenciales se requiere la evaluacin de la disponibilidad y movilidad de los mismos (Banat et al., 2005). La toxicidad de los metales depende no slo de su concentracin, sino tambin de su movilidad y reactividad con otros componentes del ecosistema (Abollino et al., 2002). Los metales pesados contribuyen fuertemente a la contaminacin ambiental, la cantidad de metales disponibles en el suelo est en funcin del pH, el contenido de arcillas, contenido de materia orgnica, la capacidad de intercambio catinico y otras propiedades que las hacen nicas en trminos de manejo de la contaminacin (Sauve et al., 2000). El plomo (Pb), por ejemplo, es un contaminante ambiental altamente txico, su presencia en el ambiente se debe principalmente a las actividades antropognicas como la industria, la minera y la fundicin. En los suelos contaminados con Pb se suele encontrar tambin Cd y Zn (Hettiarchchi y Pierzynski, 2002) por analoga entre sus propiedades y caractersticas metlicas algo similar a lo que ocurre para la triada de Fe-Ni-Co. En estos casos la barrera suelo-planta limita la traslocacin de Pb a la cadena alimenticia, ya sea por procesos de inmovilizacin qumica en el suelo segn se ha reportado (Laperche et al., 1997) o limitando el crecimiento de la planta antes de que el Pb

absorbido alcance valores que puedan ser dainos al ser humano. El Pb presente en suelos contaminados puede llegar a inhibirse mediante la aplicacin de fsforo y xidos de magnesio; sin embargo estos tratamientos pueden llegar a afectar la biodisponibilidad de otros metales esenciales como el Zn ( Hettiarchchi y Pierzynski, 2002). Por otra parte, en lugares donde se han venido utilizando aguas residuales para el riego agrcola, se reporta una tendencia creciente en las concentraciones de metales en los suelos, por efecto en el tiempo (aos) de uso de esta agua, donde las cantidades de metal que se extraen y se miden en estos suelos, se han asociado positivamente con el tiempo de uso de agua residual; mostrando una mayor tasa anual de acumulacin el Ni y Pb. En suelos estudiados con diferente pH y contenidos de arcilla y materia orgnica, y donde se han aadido intencionalmente concentraciones de Pb y Zn, ha sido determinada la capacidad de la absorcin de los mismos en cada tipo de suelo. Se sembr lechuga y despus de cosechar las mismas se evaluaron nuevamente los suelos y se observ que disminuy la concentracin de estos metales en los suelos (Stevens, et al., 2003), lo que pone de manifiesto que stos suelos contaminados son un riesgo para la salud porque las plantas pueden absorber estos metales. Tambin el uso de fertilizantes ha venido a causar incremento de algunos compuestos en los suelos, que en ocasiones han causado algunos cambios en las caractersticas. Algunos fertilizantes como los nitrogenados que incluyen los nitratos, de amonio (NH 4NO3) y de sodio (NaNO3); la urea ((NH2)2CO); el fosfato de amonio (NH4H2PO4); los polifosfatos amnicos, entre otros, aportan al suelo los nutrientes bsicos para el desarrollo de las plantas (Baur, 2004), permitiendo que aumenten la disponibilidad de los mismos, ya que son productos todos solubles en agua. Estos tienen algunos inconvenientes para los suelos, entre ellos, que pueden contener residuos de metales pesados como impurezas y que pueden quedar igualmente disponibles para las plantas y provocar daos en las mismas. Actualmente existen estudios tendientes a resolver la contaminacin originada por metales pesados en suelos, mediante estrategias basadas en el uso de plantas que tienen la propiedad de acumular metales pesados; proceso denominado fitorremediacin que consiste en la remocin, transferencia, estabilizacin y/o degradacin y neutralizacin de compuestos orgnicos, inorgnicos y radioactivos que resultan txicos en suelos y agua. Como ejemplo, Rodrguez-Ortiz et al., (2006) estudiaron la extraccin de Cd y Pb en plantas de tabaco encontrando potencial en dicha planta para este fin. Esta novedosa tecnologa tiene como objetivo degradar y/o asimilar los metales pesados presentes en el suelo, lo cual tiene muchas ventajas con respecto a los mtodos convencionales de tratamientos en lugares contaminados. En primer lugar es una tecnologa de bajo costo, en segundo lugar, posee un impacto regenerativo en lugares en donde se aplica y en tercer lugar su capacidad extractiva se mantiene debido al crecimiento vegetal (Harvey et al., 2002). La fitorremediacin no es un sencillo remedio o receta que sea aplicable para todos los suelos contaminados, antes de que esta tecnologa pueda volverse tcnicamente eficiente y econmicamente viable, hay algunas limitaciones que necesitan ser superadas. Por ejemplo, sus mecanismos tanto moleculares, bioqumicos y fisiolgicos, son pocos conocidos e insuficientemente

entendidos; sin embargo, a pesar de esto, un gran nmero de plantas definidas como hiperacumuladoras, todava pueden darse a conocer e identificarse (Freitas et al., 2004). La fitoremediacin de suelos contaminados es una tcnica con grandes posibilidades. El uso de especies vegetales tolerantes a altos niveles de metales en suelos y agua, permite actividades de restauracin con menor impacto ambiental sobre los terrenos que otras tcnicas tradicionales, ms invasivas y con efectos secundarios adversos. Las enmiendas orgnicas pueden utilizarse igualmente para la remediacin de suelos contaminados. La unin entre la materia orgnica y los metales (formacin de molculas complejas de elevada estabilidad), puede disminuir la capacidad de fitoextraccin, disminuyendo as la fitotoxicidad y permitir que se pueda reestablecer la vegetacin de sitios contaminados (Robinson et al., 1997). Desde 1991, el gobierno de China desarroll y se han reportado pautas, para monitorear y evaluar los niveles de metales pesados en lugares contaminados (Chen et al., 1996; Wang et al., 1994). Estas pautas estn basadas principalmente en las propiedades del suelo y el efecto de los metales pesados sobre la calidad de agua, en la actividad de los microorganismos en los suelos, en la salud humana y en los rendimientos y calidad de las cosechas. Han sido formulados tres valores para evaluar la calidad de los suelos. Los Valores A (definidos como el lmite superior de concentracin frecuente de metales pesados encontrados en suelos), Valores de B (definidos como el nivel aceptable de metales pesados en suelos), y Valores de C (niveles excesivos en muy altas concentraciones de metales que indican la necesaria intervencin para soluciones, es decir, se hace necesario y obligatorio el control de la contaminacin). Los niveles de concentracin de metales pesados consideran no slo el contenido total en suelos, si no tambin el nivel asimilable por las plantas, por ejemplo, por extraccin con HCl de 0.1M (Wang et al., 1994). En el Tabla 1 se pueden apreciar algunos de estos valores propuestos para tres metales txicos (Cd, Cr y Pb) y para el metaloide As. Por su parte algunos trabajos, indican valores como los que se muestran en el Tabla 2, sobre las concentraciones tpicas de metales pesados encontradas en hortalizas (Lin, 1991). Como se observa de las dos tablas, los valores que reporta Lin (1991) son varias veces inferiores a los valores indicados como A, B y/o C en el sentido de estndares de metales pesados para suelos. Tabla 1. Estndares de evaluacin para suelos contaminados por metales pesados Valor A Elemento Extraccin Concentracin HCl 0,1 M Total Arsnico Cadmio Cromo Plomo --0,4 12,0 18,0 16,0 2,0 100,0 50,0 Valor B Extraccin Concentracin HCl 0,1 M Total ppm (base seca) --30,0 1,0 4,0 25,0 250,0 150,0 300.0 Valor C Extraccin Concentracin HCl 0,1 M Total --2,0 40,0 200.0 40,0 5,0 400,0 500,0

Valor A Lmite superior de concentracin frecuente de metales pesados en suelos Valor B Nivel aceptable Valor C Lmite requerido para intervencin. Es necesario el control de la contaminacin Fuente: ( Chen 1992; Wang et al. 1994; Chen et al 1996).

Tabla 2. Estndares de evaluacin de contaminacin por metales pesados en hortalizas (Lin 1991). Elemento Arsnico Cadmio Cromo Plomo Hortalizas de fruto (n=90) 0,05 (0,002) 0,11 (0,004) 0,26 (0,010) 2,11 (0,060) Hortalizas de hojas (n=44) 0,12 (0,003) 0,24 (0,006) 0,02 (0,001) 3,69 ( 0,050) Hortalizas de raz ( n= 112) 0,05 (0,001) 0,21 (0,006) 0,03 (0,002) 2,58 (0,035)

1.3 Estrs por metales Pesados. Algunos metales como el Mn+2, el Fe+3, el Zn+2 o el Cu+2 son esenciales para el desarrollo normal de las plantas ya que son componentes estructurales y/o catalticos de protenas y enzimas. Algunos metales, como el Cr+3, V, Ti, Co y Se, a pesar de no ser esenciales, son beneficiosos. Sin embargo, la actividad humana libera, sobre todo al suelo, grandes cantidades de metales. El exceso de Al+3, Cd+2, Hg+2, As+3 o Pb+2, resultan de especial relevancia txica para las plantas. La fitotoxicidad por metales txicos se manifiesta particularmente en suelos cidos y afecta tanto el crecimiento como a la formacin de races laterales y secundarias. Adems, la acumulacin de Cd+2 o Pb+2 supone un peligro adicional al integrarse en la cadena trfica. Actualmente se conocen aun poco los mecanismos especficos de absorcin de metales pesados por las membranas vegetales. Sin embargo, se sabe que por difusin, flujo en masa e intercambio catinico, los metales alcanzan fcilmente la raz para seguir la ruta apoplstica o la ruta simplstica. Este rgano constituye la entrada principal de metal pesado en plantas superiores. La raz posee cargas negativas en sus clulas rizodrmicas, pertenecientes a polmeros como los grupos carboxilo del cido pctico y diversas protenas estructurales y enzimticas. Estas cargas negativas, al unirse en el espacio de la rizosfera a cargas positivas, como las de los cationes metlicos Pb+2, forman una interfase en equilibrio. Estos cationes entraran por la pared celular, que es hidrfila y facilita el transporte e intercambio de iones y una vez all, se unirn a las cargas negativas de la pared celular y sern transportados radialmente, en parte por la va apoplstica y en parte por la va simplstica. En las zonas apicales jvenes la banda de Caspari no se ha formado y todo el metal pasa apoplsticamente hasta la zona vascular, lo que no sucede con races adultas, donde la diferenciacin de tejidos y formacin de endodermis y exodermis obliga a abandonar la va apoplstica y utilizar la simplstica (Barcel et al., 2005). Recientes estudios han demostrado el uso de transportadores en membrana, los cuales tienen diferente afinidad por algunos metales y facilitan su paso a travs de la misma. La principal familia se denomina ZIP (ZRT, IRT-like Proteine) (Guerinot, 2000). Respecto al transporte a larga distancia, se considera que los metales viajan desde la raz hasta el xilema de las hojas como iones libres o acomplejados con un cido orgnico, siguiendo la corriente de la transpiracin (Longnecker y Robson, 1993). En el floema se considera la translocacin sistmica de metales absorbidos por las hojas desde la atmsfera y la acumulacin va floema en semillas y/o

frutos. La solubilidad del metal en el floema se dificulta por la presencia de P y por el pH alcalino. Sin embargo, se pueden formar complejos con aminocidos o con la nicotinamida. El primer compartimento celular en contacto con los metales pesados en el espacio del apoplasto es la pared celular, donde los iones se adsorben a las cargas negativas de la misma y se almacena gran proporcin de los metales pesados antes de ser absorbidos por las races. Estos metales se almacenan como precipitados o en forma cristalina en las paredes de las clulas epidrmicas o del crtex exterior y se ha observado que se puede favorecer in vitro el desplazamiento de los iones adsorbidos en la pared celular con soluciones de intercambio catinico. Algunos metales pueden ocasionar reduccin de la elasticidad y de la extensibilidad de las paredes celulares (Guns et al., 1997). Estas alteraciones fisicoqumicas de las paredes celulares se sugiere que pueden deberse a trastornos enzimticos en la biosntesis de los constituyentes macromoleculares de la pared, cambios en la distribucin de cargas y en el ensamblaje de los polmeros, cambios en la distribucin de los microtbulos y del sistema endomembranoso (aparato de Golgi) y/o cambios en la adhesin entre pared y membrana citoplasmtica. El segundo compartimento celular en contacto con los iones metlicos es la membrana plasmtica; por lo tanto, el centro controlador del sndrome txico de la absorcin de ion metlico hacia el interior de las clulas es el plasmalema. Los efectos iniciales sobre la membrana citoplasmtica dependen de la actividad inica en la superficie externa del plasmalema de las clulas radiculares segn clculos utilizando el mtodo de Gouy-Chapman-Stern (Kinraide, 1994), aunque generalmente los efectos observados se traducen en rotura de membranas, prdida de la compartimentacin celular y, como sntomas finales, apoptosis y necrosis. En condiciones normales, las cargas negativas del plasmalema estn neutralizadas por cationes +2 +2 +2 como Ca y Mg proporcionando estabilidad a la membrana. Cationestxicos como el Hg , con elevada afinidad por los grupos sulfhidrilo de las membranas ocasionan cierre de las acuaporinas o + canales hdricos y excesivo flujo de K (Ernst, 1998), a la vez que puede ocasionar la inhibicin +2 competitiva de canales inicos como el canal de Ca . Aunque el mecanismo primario responsable de la disfuncin de las membranas es la peroxidacin de lpidos, no se puede confundir el estrs oxidativo de la fase degenerativa con el metabolismo oxidativo causado por cationes metlicos. Existen varias estrategias de accin directa e indirecta de los iones metlicos para generar radicales libres de oxgeno y de especies reactivas al oxgeno (ROS) que, a su vez, daan crnicamente las membranas, los cidos nucleicos y la fotosntesis (Dietz et al., 1999). Los metales pesados inhiben el flujo de electrones de la cadena de transporte o del Ciclo de Calvin; por lo tanto, cuando la intensidad lumnica es alta, el aparato fotosinttico absorbe ms energa lumnica que la que suele utilizarse en reacciones metablicas normales. Como consecuencia, el aparato fotosinttico transfiere la energa a los nicos aceptores disponibles en los cloroplastos: los radicales de oxgeno, donde sucede la reaccin de Mehler, cuyo producto, el radical anin superxido, forma perxido de hidrgeno. El exceso de perxido de hidrgeno fomenta la formacin de radicales hidroxilo (OH-), oxidantes fuertes de cidos orgnicos que pueden iniciar la formacin en cadena de nuevos radicales altamente txicos para las clulas.

Adicionalmente, la inhibicin de la cadena de transporte electrnico fotosinttico tambin puede favorecer la transferencia de energa desde la clorofila excitada por la luz hacia el O 2 formndose oxgeno en estado de singlete, el cual, debido a su elevada reactividad es altamente txico para las clulas. La reaccin de defensa de las clulas consiste en la produccin de enzimas antioxidantes como la peroxidasa y superxido dismutasa (SOD), mediante la cadena redox ascorbato-glutatin; sin embargo, la toxicidad de los metales pesados ocasiona disminucin de la capacidad antioxidante de las clulas (Van Assche y Clijters, 1990). Tambin se ha observado la inhibicin de la asimilacin de CO2, tanto por aumento en la resistencia estomtica, como de la resistencia mesoflica. Plantas expuestas a Cd, Al, Cu, Cr, Ni, Zn o Hg mostraron cierre estomtico por dficit hdrico inducido por los metales a causa de sus efectos txicos iniciales en las races y su interferencia con la absorcin y translocacin del agua. La reduccin de la apertura estomtica en la inhibicin de la fotosntesis inducida por metales pesados seguramente depende del tipo de metal (Poschenrieder y Barcel, 1999). El Cd y el Al inhiben, con similar intensidad, la fotosntesis y la transpiracin, mientras que Zn, Pb y Cu pueden causar una drstica reduccin en la eficiencia del uso del agua, lo que sugiere que factores diferentes a los propios del cierre de estomas juegan un papel en la inhibicin de la fotosntesis por estos metales. Las adaptaciones especficas de las plantas al estrs por metales se basan en mecanismos de resistencia que reducen su entrada en la planta, o que, una vez absorbidos, permiten su almacenamiento en lugares no perjudiciales para las clulas. Inicialmente se manifiestan los mecanismos de prevencin o .avoidance. segn Levitt (1980), que permiten mantener una baja concentracin de metal en el simplasto tales como: la exudacin de sustancias hacia la rizosfera. la inmovilizacin en el apoplasto. la secrecin foliar. la volatilizacin. el eflujo. La absorcin de metales puede disminuir por unin a cidos orgnicos exudados al suelo por los pices radiculares o por los localizados en las paredes celulares, as como por la restriccin de su transporte a travs de la membrana plasmtica. La naturaleza quelante de metales de los cidos orgnicos es caracterstica de cada especie. Para el maz y la juda es el citrato, y para el trigo es el malato (Tudela y Tadeo, 1993). Adicionalmente, los metales tambin tienen afinidad por fenoles y ciertos aminocidos tales como los siderforos de origen microbiano y los fitosiderforos exudados por las propias plantas. El muclago (mucopolisacridos) segregado por la cofia, mantiene hmeda la zona apical radicular y favorece la penetracin de la raz a travs del suelo; adems, puede retener en sus cargas negativas cationes como Pb2+, Cu2+ o Cd2+ previniendo la entrada de estos iones txicos al pice radicular (Marschner, 1995).

La inmovilizacin acumula una proporcin importante del contenido total de metales de una planta en tres fracciones apoplsticas radiculares: en el espacio libre dagua para las formas solubles; en el espacio libre de Donnan formado por cargas negativas de los cidos poligalacturnicos, los cuales se unen a los cationes metlicos en funcin de la secuencia Al > Pb > Cr > Cu > Zn = Mn (Ernst et al., 1992, Rengel, 1997) y en la superficie, pared o espacios intercelulares de las races como depsitos slidos (Barcel y Poschenrieder, 1999). El eflujo activo a travs del plasmalema puede cambiar las propiedades fisicoqumicas del suelo y la especiacin de los metales manteniendo bajas concentraciones de metales en el simplasto. Una vez han entrado los metales en la clula, empiezan a funcionar los mecanismos de tolerancia que permiten soportar altas concentraciones de metal en el simplasto y facilitan el almacenamiento de los iones txicos en lugares no perjudiciales para las clulas. Estos mecanismos son: Desintoxicacin (complejos con cidos orgnicos). Compartimentacin (acumulacin en vacuola). Actividad de enzimas tolerantes. Los metales absorbidos en la clula pueden ser eliminados del citoplasma por unin a los mismos cidos que tambin estn presentes en la pared, o mediante enlaces tiol a pptidos de bajo peso molecular ricos en el aminocido cistena (fitoquelatinas). Posteriormente, los metales unidos a estos compuestos son almacenados en la vacuola (Ernst, 1975). Las fitoquelatinas son ricas en grupos SH, por lo que tambin se les conoce como cadistinas.y presentan elevada afinidad para cationes de metales. Los diferentes iones metlicos tienen diferente capacidad de inducir la sntesis de fitoquelatinas, segn la progresin Hg > Cd > As > Ag > Cu > Ni > Pb > Zn. La sensibilidad al Cd aumenta en plantas tratadas con BSO (un inhibidor de la sntesis de fitoquelatinas) y en mutantes de Arabidopsis thaliana con bajos niveles de glutatin el cual es un precursor de la sntesis de fitoquelatinas. Parece que la sntesis de fitoquelatinas es esencial para niveles constitutivos normales de tolerancia al Cd, Hg y As, pero no para la tolerancia normal al Cu o Zn. La hiptesis de que las fitoquelatinas acten como posible forma de transporte de metales, especialmente del Cd, las relaciona, adems, con la compartimentacin vacuolar. No obstante, la elevada tolerancia al Cd seleccionada bajo condiciones naturales en metalofitas no se debe, aparentemente, a las fitoquelatinas. As, a igual concentracin externa, algunos ecotipossensibles al Cd de Silene vulgaris sintetizan ms fitoquelatinas que los tolerantes. El estmulo de la sntesis de fitoquelatinas es una respuesta a la presencia de elevadas concentraciones internas de iones metlicos txicos de forma que ms que un sntoma de tolerancia, parece ser un marcador bioqumico de la tensin sufrida por la planta (De Knecht et al., 1994). El anlisis de la actividad enzimtica en medios con concentraciones crecientes de metales pesados, por regla general, muestra que no hay diferencias sustanciales entre metalofitas y plantas no tolerantes en la sensibilidad de las enzimas citoplasmticas a la toxicidad de iones metlicos (Ernst et al, 1992). Sin embargo, se han observado diferencias en la actividad de enzimas extracelulares tales como fosfatasa cida en ecotipos de Agrostis tenuis con tolerancia diferencial al Cu (Woolhouse y Walter, 1983). Esta observacin implica que diferencias en la tolerancia a elevadas concentraciones tisulares de metales pesados se deben, por regla general, a diferencias en la especiacin y/o

10

compartimentacin de estos metales. No obstante, hasta la fecha hay pocos datos para poder establecer, con carcter general, una clara relacin entre la especiacin apoplstica y/o simplstica de los metales, las actividades enzimticas y las diferencias genticas en la tolerancia (Poschenrieder y Barcel, 2003). 1.4 Absorcin y traslocacin de metales pesados en las plantas. Las plantas han desarrollado mecanismos altamente especficos para absorber, traslocar y acumular nutrientes (Lasat, 2000), sin embargo, algunos metales y metaloides no esenciales para los vegetales son absorbidos, traslocados y acumulados en la planta debido a que presentan un comportamiento electroqumico similar a los elementos nutritivos requeridos. La absorcin de metales pesados por las plantas es generalmente el primer paso de su entrada en la cadena alimentaria. La absorcin y posterior acumulacin dependen de: (1) el movimiento de los metales desde la solucin suelo a la raz de la planta, (2) el paso de los metales por las membranas de las clulas corticales de la raz, (3) el transporte de los metales desde las clulas corticales al xilema desde donde la solucin con metales se transporta de la raz a los tallos, y (4) la posible movilizacin de los metales desde las hojas hacia tejidos de almacenamiento usados como alimento (semillas, tubrculos y frutos) por el floema. Despus de la absorcin por los vegetales los metales estn disponibles para los herbvoros y humanos directamente o a travs de la cadena alimentaria. Otro mecanismo de ingreso de sustancias potencialmente txicas a las plantas, como los metales pesados, es mediante la absorcin foliar. La disponibilidad a travs de las hojas de algunos elementos traza provenientes de fuentes areas puede tener un impacto significativo en la contaminacin de las plantas y tambin es de particular importancia en la aplicacin de fertilizantes foliares (Kabata Pendias, 2000). La absorcin foliar es mediada por una fase de penetracin cuticular y un mecanismo de carcter metablico que considera la acumulacin del los elementos contra un gradiente de concentracin. Las especies vegetales, incluidos algunos cultivos, tienen la capacidad de acumular metales en sus tejidos. Las plantas capaces de absorber y acumular metales por sobre lo establecido como normal para otras especies en los mismos suelos se llaman hiperacumuladoras y se encuentran principalmente en suelos que son ricos en metales por condiciones geoqumicas naturales o contaminacin antropognica. Las plantas hiperacumuladoras generalmente tienen poca biomasa debido a que ellas utilizan ms energa en los mecanismos necesarios para adaptarse a las altas concentraciones de metal en sus tejidos (Kabata Pendias, 2000). La capacidad de las plantas para bioacumular metales y otros posibles contaminantes vara segn la especie vegetal y la naturaleza de los contaminantes. Los tallos de arveja (Pisum sativum) acumulan ms cadmio que plomo en suelos tratados con dosis crecientes de metales. Estas diferencias en la absorcin de metales puede ser atribuida a la capacidad de retencin del metal por el suelo y a la interaccin planta-raz-metal (Naidu et al. 2003). El comportamiento de la planta frente a los metales pesados depende de cada metal

11

1.5 El problema de la entrada de metales pesados en la planta 1.5.1 Contaminacin del suelo El concepto de contaminacin tambin merece reflexin. Se define como contaminacin, segn la Unin Europea, la introduccin directa o indirecta como consecuencia de la actividad humana de sustancias, vibraciones, calor o ruido en el aire, el agua o el suelo que pueden ser nocivos para la salud humana o la calidad del medio ambiente, causar daos a la propiedad material o perjudicar o entorpecer las actividades recreativas y otros usos legtimos de medio ambiente. Por tanto, nos podemos encontrar con suelos con niveles extraordinariamente elevados de metales pesados por causas naturales (por ejemplo suelos mineros), y no estar catalogados como suelos contaminados. Las concentraciones anmalas de metales pesados en los suelos pueden deberse bsicamente a dos tipos de factores: causas naturales y causas antropognicas. Las causas naturales pueden ser entre otras, actividad volcnica, procesos de formacin de suelos, meteoros, erosin de rocas, terremotos, tsunamis, etc. Las causas antropognicas pueden ser la minera, la combustin de carburantes fsiles, la industria a travs de los vertidos, emisiones, residuos (incineracin, depsito), como algunos pesticidas y fertilizantes, etc. 1.5.2 Dinmica de los metales pesados en el suelo Los metales pesados presentes en los suelos no se comportan como elementos estticamente inalterables, sino que siguen unas pautas de movilidad generales La dinmica de los metales pesados en el suelo puede clasificarse resumidamente en cuatro vas: Movilizacin a las aguas superficiales o subterrneas. Transferencia a la atmsfera por volatilizacin. Absorcin por las plantas e incorporacin a las cadenas trficas. Retencin de metales pesados en el suelo de distintas maneras: disueltos o fijados, retenidos por adsorcin, complejacin y precipitacin. 1.5.3 Transporte Los iones inorgnicos y el agua (sabia bruta) se transportan desde la raz hasta las hojas mediante una serie clulas tubulares que pertenecen a un tejido leoso denominado xilema. La fuerza que mueve esta solucin no radica en las clulas del tejido xilemtico, sino en la fuerza propia del proceso de smosis y en otra fuerza, menos habitual, conocida como fuerza de succin. La smosis se produce porque existe una gran diferencia de concentracin entre la parte superior de la planta (hojas, inflorescencias) donde es mayor y la parte inferior, es decir existe un potencial hdrico favorable al impulso ascendente. La fuerza de succin se produce cuando en las hojas se pierde agua por transpiracin, pues las molculas perdidas producen una succin de nuevas molculas cercanas para reemplazar a las anteriores, de tal manera que se produce una fuerza que atrae agua desde las races hacia las hojas. 1.5.4 Toxicidad de los metales pesados La toxicidad de los metales pesados depende, como ha quedado expuesto previamente, de la concentracin, la forma qumica y la persistencia. Un elemento indispensable para un ser vivo en concentraciones traza puede llegar a ser txico en concentraciones elevadas. Por otra parte, la mayora de metales pesados se combina con otras formas qumicas, antes de entrar en los organismos o cuando se encuentra en el interior de los mismos; por tanto, antes de determinar la

12

toxicidad de un elemento es necesario determinar la forma qumica en la que se encuentra. La persistencia se define como el tiempo que tarda un contaminante en transformarse en una forma no txica. Los metales pesados estn considerados como muy peligrosos para los seres vivos en general, pues poseen una gran toxicidad, en parte debido a su elevada tendencia a bioacumularse. La bioacumulacin es un aumento de la concentracin de un producto qumico en un organismo biolgico en un cierto plazo, de forma que llega a ser superior a la del producto qumico en el ambiente. La toxicidad est causada frecuentemente por la imposibilidad del organismo afectado para mantener los niveles necesarios de excrecin. El proceso se agrava durante el paso por las distintas cadenas trficas, debido a que los niveles de incorporacin sufren un fuerte incremento a lo largo de sus sucesivos eslabones, siendo en los superiores donde se hallan los mayores niveles de contaminantes. A este proceso se le denomina biomagnificacin; es decir, muchas toxinas que estn diluidas en un medio, pueden alcanzar concentraciones dainas dentro de las clulas, especialmente a travs de la cadena trfica. Otro aspecto importante a considerar es la presencia simultnea (mezcla) de los metales pesados, ya que sus efectos pueden ser tanto txicamente sinrgicos o antagnicos (la toxicidad se reduce al mezclarse), por tanto existe cierta dificultad para predecir los efectos reales de los contaminantes en el medio. Los efectos de un compuesto o de la mezcla de ellos pueden ser inocuos, letales o subletales (no matan al individuo pero producen daos a nivel gentico o fisiolgico). Con frecuencia, los daos subletales suelen ser ms perjudiciales para la poblacin en general, ya que afectan al desarrollo o a la reproduccin. La causa primaria del elevado nivel de toxicidad a nivel qumico es que los metales pesados poseen una gran capacidad para unirse con molculas orgnicas. En efecto, estos efectos txicos en sistemas biolgicos dependen de reacciones con ligandos que son esenciales para su asimilacin, y estos ligandos estn, a su vez, presentes en gran abundancia en la clula, ya sea formando parte de molculas de mayores dimensiones, ya sea como molculas aisladas. En este sentido, cabe destacar la gran afinidad que muestran los metales pesados, como principales ligandos, por grupos sulfidrilo, radicales amino, fosfato, carboxilo e hidroxilo. El resultado de estas uniones ligando-metal puede ser muy perjudicial para la clula, destacando en este aspecto sobre otros fenmenos, (1) la accin genrica sobre protenas por inhibicin de la actividad o por disrupcin en la estructura de las mismas, (2) el desplazamiento de elementos esenciales de su metabolismo estndar, produciendo efectos de deficiencia, y (3) la catlisis de reacciones de generacin de molculas ROS (Reactive Oxigen Species) o radicales libres que provocan fenmenos de estrs oxidativo. El estrs oxidativo es un fenmeno que merece ser estudiado aisladamente, dada su complejidad e importancia en el desarrollo de los mecanismos bsicos de la clula. Como resumen de dicho fenmeno baste decir que provoca dao a distintos niveles, destacando los siguientes aspectos: Inactivacin de protenas y enzimas, fundamentalmente por la oxidacin de los grupos sulfhidrilo, dando lugar a puentes disulfuro que causan la interrupcin del funcionamiento normal de la protena o enzima.

13

Peroxidacin lipdica de membranas, causando rupturas y subproductos de las cadenas hidrocarbonadas. Efectos de dao sobre el ADN. Estos pueden ser desperfectos genotxicos: mutaciones, aberraciones cromosmicas, alteraciones en la sntesis y reparacin de cidos nucleicos y transformaciones celulares.

El estudio de la toxicidad y, en general, del comportamiento oxidativo de los metales pesados en el interior de la clula de un organismo viene determinado en gran medida por dos tipos de reacciones qumicas, causantes a su vez de dos elementos ROS clave: H 2O2 y O2. Estas dos reacciones son las siguientes: Reaccin de Fenton La reaccin de Fenton, segn la terminologa de la IUPAC, consiste en la descomposicin del perxido de hidrgeno mediante la adicin de sales de hierro, para formar un radical OH.

Este radical es tremendamente reactivo, y puede producir procesos de oxidacin en cascada. En general lo que se produce en la clula son interacciones que causan una fuerte descompensacin electrnica, principalmente por la accin de los radicales formados por el radical OH, bien generando otros radicales, bien oxidando o reduciendo especies qumicas presentes en el medio. En la prctica, el apelativo reaccin de Fenton se utiliza para metales diferentes al Fe. Reaccin de Haber - Weiss La reaccin de Haber-Weiss, segn IUPAC, es en realidad un ciclo de dos reacciones. La primera reaccin aprovecha el radical OH producido por la reaccin de Fenton para reaccionar con ms perxido (como en la reaccin de Fenton) y originar un elemento crucial en las reacciones redox elaboradas en la clula, el radical superxido:

El radical superxido recin producido va a reaccionar entonces con ms perxido de hidrgeno (como en la reaccin de Fenton), para volver a dar los productos no metlicos de la reaccin de Fenton.

El resultado final es que el hierro se ha oxidado (en Fenton), y el aceptor final de electrones es el oxgeno (reaccin de Haber- Weiss), que se libera en forma de oxgeno molecular, cerrando el proceso de cesin de los electrones por oxidacin del metal. Acoplado a todo el sistema formado por las distintas reacciones, se producen radicales OH que, como se ha mencionado anteriormente, pueden seguir desarrollando un mecanismo en cascada de consecuencias importantes para el equilibrio interno de la clula. Adems, estos OH inducen daos sobre el ADN, lo que puede conducir a carcinognesis por alguna de estas rutas: alteraciones producidas en oncogenes y factores de crecimiento. alteraciones en los genes supresores de tumores. alteraciones en los genes reguladores del crecimiento.

14

Como ha quedado descrito, en este conjunto de reacciones participan dos elementos ROS (O 2 y H2O2) que han demostrado jugar un papel esencial en la interaccin de los metales pesados con las clulas de los seres vivos. Ambos son, adems, elementos sealizadores relevantes. No obstante, es interesante sealar que todas estas reacciones requieren la presencia previa de H2O2. Qu ocurre cuando el metal est presente y no hay suficiente cantidad de H2O2? o esto no ocurre nunca?. 1.6 Clasificacin de los cultivos con relacin al riesgo alimentario. Se han propuesto tres patrones que relacionan la biodisponibilidad de los nutrientes y su absorcin en los cultivos (Figura1) (Chen, 2000). En el patrn tipo 1, la absorcin incrementa con el crecimiento del cultivo para luego caer cuando el cultivo alcanza madurez. Este patrn es observado en la absorcin de la mayora de los macronutrientes como el nitrgeno, fsforo y potasio. El patrn tipo 2, es similar al 1 pero presenta un pico ms pronunciado y se ha observado que se asocia con la absorcin de micronutrientes como cobre y cinc. El patrn tipo 3, presenta una absorcin elevada en las primeras etapas del desarrollo y cae durante las siguientes etapas. Este patrn se ha observado para metales pesados como arsnico, cadmio, cromo, plomo, nquel y mercurio.

Figura 1. Patrones de crecimiento o rendimiento en funcin de la concentracin de nutrientes y elementos txicos en cultivos. Fuente, Modificado de Chen (2000).

El Tabla 3. muestra hortalizas segn grado de acumulacin de metales pesados. Tabla 3: Hortalizas acumuladoras de metales. Modificado de Alloway, 1995
Metal Cadmio Cobre Plomo Cinc Acumuladoras Lechugas, espinacas, apio, repollo Betarragas, cebada Berro, apio Betarragas, espinacas Baja Acumulacin Papas, maz, habas Puerros, repollo, cebolla Cebada, papas, maz Papas, puerros, tomates, cebolla

15

El contenido mximo permitido de Pb, Cd y Hg en algunos alimentos, de acuerdo a la Unin Europea, se indica en el Tabla 4. El contenido mximo de algunos metales pesados en alimentos en general, permitido en Argentina y en Chile se indican en los Tablas 5 y 6, respectivamente. Tabla 4. Contenido mximo de Pb, Cd y Hg en algunos alimentos, segn la Unin Europea
Pb ( mg.kg -1) 0,2 0,1 0,3 0,1 0,2 Cd ( mg.kg-1) 0,1 0,2 0,05 0,2 0,1 Hg ( mg.kg-1) 0,5

Cereales, legumbres y leguminosas Vegetales Vegetales de hoja, hongos Frutas Berries Cereales Soya Vegetales y frutas Vegetales de hoja, hongos y hierbas Vegetales de raz, papas Pescados en general

Tabla 5: Contenido mximo de metales pesados en alimentos en general en Argentina.

Metales Arsnico Boro Cobre Estao Plomo Cinc Contenido mximo (mg.kg ) 1 80 10 250 2 100
-1

Tabla 6: Contenido mximo de metales pesados en alimentos Chile.INN

Alimentos Contenido mximo -1 ( mg/kg ) Arsnico 0,1 1,0 Cadmio 0,5 0,001 Cobre 10 Mercurio 0,05 Plomo 0,5 Zinc 100

Cereales, leguminosas, legumbres Otros Sal Agua Otros Cereales Cereales Otros

16

Magnicol y Beckett (1985) encontraron valores crticos para producir fitotoxicidad en 20 elementos, algunos de estos valores, expresados en mg kg de peso seco, en el tejido de las plantas son: Cd 825, Cr 2-8, Co 10-20, Cu 10-20, Mn 100-400, Hg 1-6, Ni 10-20, V 2-6, Zn 150-300. Los cultivos se pueden clasificar segn el riesgo alimentario en relacin a cada metal como inocuo, susceptible y peligroso, dependiendo en primer lugar si se encuentran cultivados en suelos con alta biodisponibilidad del elemento y si son ingeridos directa o indirectamente por el ser humano. Existen tres situaciones: 1. Los cultivos no presentan toxicidad ni son bioacumuladores de elementos trazas potencialmente dainas al ser humano. 2. El cultivo presenta toxicidad por metales pesados, alterando su rendimiento, entonces se debiera restringir el consumo de aquellos alimentos afectados con elementos que no son esenciales al hombre como As, Cd, Hg y Pb. 3. El suelo tiene elevadas cantidades de metal disponible, pero permite el desarrollo y cosecha de un cultivo. En este caso se debe definir el riesgo alimentario del cultivo en relacin al destino que pueda tener en la industria alimentaria, considerando qu rgano de la planta ser procesado o consumido directamente. Los cultivos cuyos productos son utilizados en la industria, como la madera de las plantaciones forestales y las fibras naturales, no revisten un riesgo directo para la salud humana y pueden considerarse inocuos, independientemente del contenido de metal presente en sus tejidos. Debido a que el fin ltimo de cualquier normativa o recomendacin es la proteccin de la salud del hombre, se deben tener presente tres factores esenciales en la cadena suelo planta hombre, estos son: - Adsorcin del elemento en el suelo (grado de disponibilidad) - Riesgo en la cadena alimentaria (bioacumulacin) Basndose en estos factores, Chaney (1980) form cuatro grupos de metales y metaloides segn biodisponibilidad y riesgo potencial (Tabla 7). 1.7 Fitotoxicidad El trmino fitoxicidad se ha asociado normalmente con la acumulacin de una sustancia daina en el tejido de una planta en niveles que afectan su crecimiento y normal desarrollo. Sin embargo, esta definicin muchas veces no es adecuada porque las plantas presentan distintos grados de fitoxicidad mostrando una gran variedad de sntomas durante su ciclo de crecimiento, existiendo distintos niveles de dao. Adems, el crecimiento no slo se ve afectado por la acumulacin de sustancias txicas, sino que tambin por factores medioambientales como deficiencias nutricionales, estrs hdrico, dao en races u otros, los cuales producen disminucin del rendimiento (Naidu et al., 2003). Chang et al. (1992), indican que para confirmar que existe fitoxicidad por metales se requiere que: Las plantas sufran un dao. El metal potencialmente txico sea acumulado en el tejido de vegetal. Las anomalas observadas no correspondan a otros desrdenes del crecimiento de la planta, y Se observen los mecanismos bioqumicos que causan la toxicidad del metal en las plantas durante el ciclo de crecimiento.
-1

17

Tabla 7: Grupos de metales y metaloides segn biodisponibilidad y riesgo para la cadena alimentaria ( Chaney 1980)
Grupo 1 Metal Ag, Cr, Sn, Tl, Y y Zr Adsorcin en el suelo Baja solubilidad y fuerte retencin en el suelo Baja Fitotoxicdad Riesgo para la cadena alimentaria Bajo riesgo, porque ellos son toma dos en menor grado por las plantas Causa mnimos riesgos para la cadena alimentaria humana

As, Hg y Pb

Adsorbidos fuertemente por los coloides del suelo

B, Cu, Mn, Mo, Ni y Zn

Menos fuertemente adsorbido al suelo comparado con los grupos 1 y 2

Cd, Co y Se

Menor grado adsorcin al suelo en relacin a los otros metales

Las plantas pueden absorbrselos pero no trastocarlos a los tallos o generalmente no son fitotxicos excepto a concentraciones muy altas Fcilmente tomados por las plantas, son fitotxicos a concentraciones que causan bajo riesgo a la salud humana Causan riesgo en la salud humana o animal a concentraciones en el tejido de la planta que generalmente no son txicas

Conceptualmente la barrera suelo-planta protege a la cadena alimentaria de estos elementos Existe bioacumulacin a travs de la cadena alimentaria sueloplanta-animal

En general, las plantas son mucho ms resistentes a los incrementos en la concentracin que a una insuficiencia de un elemento esencial dado. Distinto es el caso de un elemento no esencial, donde el nivel de dao aumenta conforme lo hace el elemento (Figura 2) En general, se puede establecer que los metales ms txicos tanto para plantas superiores como para ciertos microorganismos son Hg, Cu, Ni, Pb, Co, Cd y posiblemente tambin Ag, Be y Sn (Kabata Pendias, 2000).

Figura 2. Respuesta de las plantas al estrs por deficiencia y toxicidad de elementos traza. a) elementos traza esenciales, b) elementos traza no esenciales (Kabata Pendias, 2000).

18

La Tabla 8 presenta los rangos de concentraciones para los elementos traza, presentes en los tejidos de hojas maduras de varias especies. Aun cuando lo rangos mostrados corresponden a aproximaciones generales, es importante notar que los rangos de suficiencia y toxicidad se encuentran muy cercanos haciendo difcil marcar una clara divisin entre ambos. 1.7.1 Metales en Plantas y Fitotoxicidad Es importante determinar el nivel de riesgo ambiental de los metales pesados sobre diversos representantes del ecosistema terrestre utilizando bioensayos ecotoxicolgicos (Iannacone y Gutirrez, 1999; Arkhipchuk et al., 2000); entre ellos, las plantas presentan diferentes especies representativas de los agroecosistemas hortcolas (Wang, 1991; Arambasic et al., 1995; Iannacone et al., 2000). Los ensayos de fitotoxicidad con semillas germinadas son simples, verstiles y tiles para evaluar la toxicidad de aguas, sedimentos y muestras de suelo (Walsh et al., 1991; Lewis, 1995; Rosa et al., 1999). Las pruebas de fitotoxicidad que emplean plantas terrestres, no son usadas frecuentemente en ecotoxicologa (Wang, 1991; Calow, 1993; APHA, 1995). Las tres caractersticas ms importantes de los ensayos con plantas terrestres, es que se les puede usar con muestras coloreadas o turbias, en ensayos estticos, semiestticos y de flujo continuo, y con un mnimo costo de mantenimiento en el laboratorio (Wang, 1991). Tabla 8. Concentraciones de elementos traza para varias especies en tejidos de hojas maduras ( Kabata Pendias,2000).
Elemento Cromo Manganeso Niquel Cobre Cinc Arsnico Selenio Molibdeno cadmio Mercurio Plomo
+ ++

Concentracin ( mgKg , peso seco) Suficiente o normal Excesiva o txica 0,1 0,5 30 - 300 0,1 - 5 5 - 30 27 - 150 1 1,7 + 0,01 2 0,2 - 5 0,05 0,2 --5 - 10 5 - 30 400 - 1000 10 - 100 20 - 100 100 - 400 5 - 20 5 - 30 10 -50 5 - 30 1 -3 30 - 300

-1

Tolerable en cultivos agrcolas 2 300 1 10 5 20 50 100 0,1 1,0 ++ 1,0 5 --0,05 0,5 0,05 0,5 0,5 10

Base hmeda 2 5 mg/ Kg forraje peso seco causa toxicidad en animales Los valores no incluyen a especies muy sensibles o tolerantes

Calow (1993) seala la potencialidad del uso de cebolla ( Allium cepa L., Liliaceae), betarraga (Beta vulgaris L., Chenopodiaceae), arroz (Oriza sativa L., Poaceae) y rabanito (Raphanus sativus L., Brassicaceae) para evaluar la toxicidad y el riesgo de sustancias qumicas peligrosas en el ambiente. Sin embargo, el efecto de metales pesados sobre plantas vasculares no se conoce bien (Lerda, 1992; Barone et al., 1997; Rosa et al., 1999; De Jong y De Haes, 2001).

19

La determinacin de algunos aspectos de la ecotoxicidad de metales pesados empleando bioensayos sencillos y prcticos para catalogar toxicolgicamente muestras ambientales contaminadas por Pb, Hg y Cr contribuye a tomar medidas para evaluar la perturbacin de los ecosistemas y promover alternativas de biorremediacin (Shanker et al., 1996; Iannacone y Alvario, 1999; 2005).El empleo de las semillas de plantas terrestres como herramientas ecotoxicolgicas es ventajoso, por requerir poco volumen de muestra (1 mL envase-1), comparado con otros organismos que requieren de 50 a 200 mL envase-1 (Arambasic et al., 1995). Las plantas vasculares han sido recomendadas por la Agencia de Proteccin Ambiental (EPA) y por la Administracin de Drogas y Alimentos (FDA), ambas de los Estados Unidos, debido a su buena sensibilidad, en comparacin con semillas de otras especies de plantas terrestres (Wang, 1991). El ensayo ecotoxicolgico con semillas de plantas vasculares presenta algunas ventajas sobre otras especies terrestres, lo que permite usar cuantitativamente el crecimiento de la raz. Wang (1991) indic que el crecimiento de raz como punto final de lectura, es ms sensible a la toxicidad que la germinacin de semillas, la cual presenta un alto coeficiente de variacin (Rosa et al., 1999). Calow (1993) present un resumen de los protocolos de bioensayos de germinacin de semilla y de elongacin de raz con diferentes especies de plantas, siendo comparables al protocolo usado en este estudio. La sensibilidad de las especies vegetales a los metales pesados vara considerablemente a travs de reinos y familias, siendo las plantas vasculares ligeramente ms tolerantes (Rosa et al., 1999). Las diferentes respuestas de las plantas vasculares a metales pesados pueden ser atribuidas a factores genticos y fisiolgicos (Calow, 1993). En este sentido, Lerda (1992) encontr que el Pb reduce el crecimiento radicular y la frecuencia de clulas mitticas y el incremento de la frecuencia de clulas aberrantes en A. cepa. La intensidad del efecto est en funcin de la concentracin del Pb. Pal y Nandi (1990) y Liu et al. (1995) evaluaron por ejemplo, el efecto citolgico del Hg en las races de bulbos de A. cepa. Todas las plantas absorben metales del suelo donde se encuentran pero en distinto grado, dependiendo de la especie vegetal, y de las caractersticas y contenido en metales del suelo. Las plantas pueden adoptar distintas estrategias frente a la presencia de metales en su entorno (Baker, 1981; Barcel et al., 2003). Unas basan su resistencia a los metales con la estrategia de una eficiente exclusin del metal, restringiendo su transporte a la parte area. Otras acumulan el metal en la parte area en una forma no txica para la planta. La exclusin es ms caracterstica de especies sensibles y tolerantes a los metales, y la acumulacin es ms comn de especies que aparecen siempre en suelos contaminados. Algunas plantas son capaces de acumular cantidades excesivas de metales pesados, y se les conoce con el trmino "hiperacumuladoras" que fue introducido primero por Brooks y colaboradores (1977), refirindose originalmente a las plantas que adquirieron una concentracin excesiva del nquel (1000 mg/g) sobre una base del peso seco. El concepto fue ampliado ms adelante a otros elementos tales como cadmio, cobalto, cobre, plomo, selenio y zinc. Las plantas hiperacumuladoras generalmente tienen poca biomasa debido a que ellas utilizan ms energa en los mecanismos necesarios para adaptarse a las altas concentraciones de metal en

20

sus tejidos (Kabata-Pendias, 2000). La capacidad de las plantas para bioacumular metales y otros posibles contaminantes vara segn la especie vegetal y la naturaleza de los contaminantes. Estas diferencias en la absorcin de metales, pueden ser atribuidas precisamente a la capacidad de retencin del metal en cuestin, por el suelo de cultivo y a la interaccin planta-raz-metal y al metabolismo vegetal propio (Vig et al., 2003). De acuerdo con la estrategia de acumulacin de Baker (1981), las plantas hiperacumuladoras pueden superar en 100 ms veces los valores normales de metales acumulados. Estas plantas son especies muy tolerantes a uno o ms metales pesados y a menudo su distribucin est restringida a suelos ricos en un amplio rango de concentraciones de metales, pues no son competitivas en zonas no contaminadas. La hiperacumulacin ha evolucionado en ms de 400 especies de plantas repartidas en 45 familias botnicas, siendo la familia Brassicaceae una de las que cuenta con ms gneros de este tipo; familia que se encuentra distribuida por todo el mundo, predominando en Nueva Caledonia, Cuba y la regin Mediterrnea, entre otros lugares (Baker et al., 2000). Existen varias hiptesis de cmo se pueden adaptar las especies a la hiperacumulacin, pero la ms actual es su funcin en la proteccin de la planta contra el estrs bitico causado por patgenos y herbvoros. Esta propuesta es muy atractiva para explicar la razn de ser de las plantas hiperacumuladoras y difiere de la defensa qumica natural existente en todas las plantas, basada en la sntesis de productos orgnicos procedentes del metabolismo secundario (Llugany et al., 2007). Este tipo de proteccin requiere ciertas condiciones: la primera es que el metal sea ms txico para el patgeno o herbvoro que para la planta; la segunda, que el metal impida la virulencia del patgeno o herbvoro y finalmente, la tercera, que el metal incremente la resistencia de la planta frente al factor causante del estrs bitico. La fitorremediacin aplicada a suelos contaminados con elementos o compuestos inorgnicos, incluye bsicamente, tres mecanismos los que se muestran en la figura 1: fitoextraccin o fitoacumulacin, la fitoestabilizacin y la fitovolatilizacin (Singh et al., 2003, Prasad y Freitas 2003).

21

II.

CADMIO: INGRESO, TRANSPORTE Y ACUMULACIN EN SUELOS Y PLANTAS. TOXICIDAD

2.1. Generalidades. Se ha constatado que la acumulacin progresiva de ETM (elementos traza metlicos) en los suelos, particularmente cadmio, tiene efectos negativos en la salud humana. Dichos metales una vez absorbidos por el organismo interfieren en procesos enzimticos causando diversas patologas. Particularmente el cadmio, produce trastornos renales, dao a los huesos, edema pulmonar, dao al hgado, anemia e hipertensin. La principal fuente de consumo de cadmio en el ser humano son los alimentos de origen vegetal (Norvell et al., 2000), sin embargo, tambin, ste puede llegar al ser humano mediante la ingesta de alimentos de origen animal y por la inhalacin del humo del tabaco (Staessen et al., 1999, Dey y Dwivedi, 2000). El cadmio ingresa a la malla trfica, desde el suelo, producindose fenmenos de bioacumulacin y biomagnificacin. En el caso del ser humano, el cadmio es de alta toxicidad a niveles traza acumulndose en el cuerpo (particularmente en el rin) y persistiendo cerca de 10 a 30 aos hasta su eliminacin (Staessen et al., 1999). En cuanto a los cultivos (especies y variedades), stos presentan diferentes niveles de fitotoxicidad frente a una misma concentracin de cadmio en sus tejidos y el cadmio se acumula a distintas concentraciones dependiendo del tipo de tejido (hoja, grano, raz). Asimismo, algunos cultivos son eficientes acumuladores de cadmio, por ejemplo la lechuga (Lactuca sativa), no presentando sntomas de fitotoxicidad a concentraciones reducidas de cadmio (Jinadasa et al., 1997). Una fuente de aporte de cadmio en los suelos es el uso de fertilizantes fosfatados derivados de la roca fosfrica. Durante el proceso de elaboracin de los fertilizantes fosfatados, a partir de dicho material, quedan metales como impurezas, a nivel de trazas (Gavi et al., 1997; Driver, 1998; Grzmil, 1998; Anonymous, 1999; Carbonell et al., 1999; Tyler y Barnes, 1999; Davis, 2000). Un aspecto importante de destacar es que los ETM estn presentes en la corteza terrestre, por lo que aportes antrpicos se sumarn al contenido basal cambiando el estado de equilibrio original en relacin a la magnitud de estos aportes. Respecto de la nutricin vegetal, si bien la aparicin de daos a largo plazo podra asociarse al contenido total de un elemento en el suelo, en el corto plazo la carga agregada tiende a mantenerse en la forma en que fue emitida (no soluble). Para que esta carga adquiera forma soluble capaz de inducir efectos txicos, debe ser modificada en el suelo. Por ello, ms que determinar los daos actuales de una contaminacin especfica, debe poder inferirse los daos de largo plazo, determinando el rea total de dispersin probable y el tipo y tiempo de emergencia de daos futuros (Gonzlez, 2001). La acumulacin de Cd en el suelo por el uso de fertilizantes fosfatados es una materia relevante desde el punto de vista ambiental y de la salud humana dado que la concentracin total de cadmio -1 en el suelo normalmente flucta entre valores menores de 1 a 3 [mg kg ] (Adriano, 1992; Carrasco, 1994) y aplicaciones sucesivas podran incrementar estos valores afectando la salud humana en el largo plazo.

22

Con el desarrollo de las Buenas Prcticas Agrcolas se busca la prevencin del deterioro ambiental y de los efectos negativos sobre la salud humana ocasionados por las prcticas tradicionales (uso indiscriminado de agroqumicos, degradacin de recursos naturales, etc.). 2.2 Aspectos del cadmio -3 El cadmio, por su densidad de 8,25 [g cm ], forma parte de los metales pesados, trmino -3 aplicado a los elementos con una densidad superior a 6 [g cm ] (Carrasco, 1994). Otra denominacin es elemento traza, es decir, elemento presente en la corteza terrestre en un valor inferior a 1% (Gonzlez, 1994). ltimamente, tambin se est usando la denominacin elemento traza metlico para referirse a los metales pesados (Kaemmerer, 2001; Lavado, 2001). 2.2.1. Caracterizacin El cadmio (nmero atmico 48; masa atmica relativa 112,40) es un elemento metlico que pertenece, junto con el zinc y el mercurio, al grupo IIb de la tabla peridica. La principal especie del 2+ cadmio en la solucin suelo es Cd , pero, este metal puede formar los siguientes complejos inicos: + +3 -2 -2 Puede formar los siguientes complejos inicos: CdCl , CdOH , CdHCO , CdCl 3, Cd Cl 4, Cd(OH) 3 y -2 Cd(OH) 4 adems de complejos orgnicos, En las soluciones suelo en condiciones aerbicas las especies de cadmio sern las siguientes (en orden decreciente): 0 + - Suelos cidos; Cd (II), CdSO4 y CdCl4 + 0 + - Suelos alcalinos: Cd (II), CdCl , CdSO4 y CdHCO3 Adems del Cd2+, son frecuentes las especies neutras CdSO4 y CdCl2, presentes en altas concentraciones en los suelos con pH superiores a 6,5. La especie acuosa dominante en aguas subterrneas a pH menores que 8,2, con moderada a 22+ baja concentracin de sulfato (menor a 10-2,5M de SO4 ) es la especie Cd . A medida que aumenta el pH, se espera que se formen otras formas complejas de este metal. Tal como aprecia en la Figura 3, se espera que en aguas subterrneascon pH menor de 6 todo el cadmio disuelto est bajo la 2+ forma de la especie Cd (EPA United States, 1999a).

Figura 3. Distribucin de las especies acuosas de cadmio segn pH (EPA- United States, 1999)

23

2.2.2. Aportes al ambiente El cadmio ingresa al ambiente mediante diversas fuentes tanto naturales como antropognicas. En la Tabla 9 se indican las fuentes de entrada de cadmio al ambiente. Tabla 9. Fuentes de cadmio
Antropognicas Lodos residuales y estircol Fertilizantes fosfatados y nitrogenados Industria de plateado y galvanizado Minera del cinc, cobre, plomo y otros metales Incineracin Industria de alimentos fosfatados para animales Naturales Actividad volcnica Rocas

En la corteza terrestre el cadmio se encuentra en cantidades muy bajas (< 1. [mg kg ]), en promedio -1 se encuentran valores de 0,1 a 0,2 [mg kg ] (Roberts, 1996). Sin embargo, en los suelos su contenido flucta entre valores menores de 1 a 3 [mg kg ] de Cd. -1 La concentracin de cadmio en un suelo no contaminado es inferior a 1 [mg kg ] (EPA United States, 1999). Las concentraciones del cadmio podran aumentar dependiendo de las actividades humanas, el material parental del suelo y de condiciones climticas. Las principales fuentes de emisiones de cadmio son los servicios elctricos, minera de yacimientos de oro y plata y manufactura de productos de arcillas estructurales. El carbn y otros combustibles fsiles contienen cadmio y su combustin lo libera al ambiente. El cadmio tambin se encuentra en los yacimientos de azufre que contienen sulfuro de zinc y en yacimientos de plomo y cobre que contienen zinc. El cadmio se ha detectado en esquistos carbonceos y rocas fosfricas. Las emisiones volcnicas contienen aerosoles enriquecidos con cadmio. Otra fuente de cadmio que afecta directamente al ser humano es el humo de tabaco que corresponde a una fuente de contaminacin interna de cadmio. 2.2.3. Efectos sobre la salud humana Investigaciones recientes sealan que la exposicin a reducidas concentraciones de cadmio produce alteraciones a los huesos con consecuentes riesgos de fracturas. Esto debido a que el cadmio puede interferir con el metabolismo del calcio, la vitamina D y el colgeno, produciendo, a largo plazo, alteraciones de los huesos tales como la osteomalacia y la osteoporosis (Staessen et al., 1999). El cadmio, una vez aportado por la va de la fertilizacin fosfatada, puede ser absorbido por los cultivos y llegar hasta quienes se alimentan de ellos. Los vegetales se presentan sanos y vigorosos an cuando contengan ms cadmio que lo normal. En Japn se ha tipificado la enfermedad Itai Itai, en seres humanos, causada porconsumo durante largo tiempo de arroz contaminado con cadmio (Carrasco, 1994; Staessen et al., 1999; CONAMA, 2001). Un aumento en la dieta de Ca , Zn + y Fe , disminuye la absorcin de cadmio, cobre, plomo o 2+ 2+ mercurio; en cambio, un exceso de Cd en la dieta induce sntomas por deficiencia de Ca en humanos. En el caso de la carboxipeptidasa pancretica (cinc dependiente), disminuye la actividad y
2+ 2 3+ -1

-1

24

especificidad ante cadmio, mercurio, plomo, cobre o nquel, por intercambio del cinc desde el sitio activo (Tapia, 1994). El cadmio puede sustituir el calcio de los huesos, con resultados nefastos, tal como fue demostrado en Japn en los aos 50, con agricultores que vivan en tierras contaminadas cercanas a una mina de cinc-cadmio (Gillett, 1999). Existen antecedentes de que el cadmio se relaciona con tumores en testculos y cncer a la prstata en trabajadores expuestos (Tapia, 1994). Se ha demostrado que el rin es el rgano crtico para el cadmio (WHO-IPCS, 1992). La exposicin crnica al cadmio produce nefrotoxicidad (Tang, 2000). Otra situacin de cuidado, particularmente en nios, es que se ha encontrado Cd y Pb en huevos de gallina alimentados con materiales inorgnicos (Dey y Dwivedi, 2000). El cuerpo absorbe aproximadamente 5% del Cd tomado del alimento y el agua y 10% del Cd inhalado del humo del cigarrillo. En promedio, un paquete de 20 cigarrillos contiene 20-25g de Cd. Un no fumador, en un rea no contaminada absorbera cerca de 0,5-1,3g por da desde el alimento y el agua (Roberts, 1996). WHO (World Health Organization), 1972, estableci que el mximo de ingesta diaria de Cd (IDA -1 o Ingesta Diaria Admisible) no debera sobrepasar 1 *g kg + del peso del cuerpo (es decir, 70 *g -1 da-1] para un hombre promedio). La ingesta diettica de Cd se estim en 15-30 *g da ] para los -1 habitantes estadounidenses y 20- 40 *g da ] para los europeos (OECD, 1994). Debido a que el alimento es la mayor fuente de ingesta de Cd, las estrategias de reduccin del riesgo tendrn importantes implicaciones para la produccin agrcola (Roberts, 1996). 2.2.4. Relacin con el medio ambiente La contaminacin ambiental por cadmio es un tema complejo que ha sido analizado por diversos investigadores desde diversos frentes: desde el punto de vista de la salud humana y otros seres vivos, la toxicologa ambiental, las implicancias en la industria y la economa en la elaboracin de diversos productos que contienen cadmio, con distintas aplicaciones, etc. Particularmente, en el sector agropecuario la preocupacin por el cadmio se centra principalmente en la fertilizacin fosfatada, el uso de bioslidos, la alimentacin animal con productos fosfatados, el agua de riego y la biodisponibilidad para los cultivos. Algunos pases se han preocupado seriamente del desarrollo de estrategias para la reduccin del cadmio ya sea en el origen de la fabricacin de fertilizantes fosfatados, usando rocas fosfricas de bajo contenido en cadmio, o en campo, usando fertilizantes fosfatados con menores concentraciones de este metal. Otra estrategia de campo ha sido la aplicacin de correctores de pH del suelo ya que se ha comprobado que a pH cido el cadmio se solubiliza, volvindose ms biodisponible para las plantas. En Dinamarca se ha desarrollado un modelo que explica el ciclo del cadmio y se ha llegado a cuantificar las entradas y salidas del sistema (Figura 4).

25

Figura 4. Ciclo del cadmio en la agricultura danesa (Hovman et al. 1983).

Este modelo muestra las implicancias ambientales del cadmio, lo cual puede contribuir a su manejo y prevencin de episodios adversos tanto para la salud humana como para el ambiente en general. Es destacable que la cuantificacin de las entradas y salidas de cadmio en el sistema permitira una evaluacin del impacto de este metal y tomar las medidas necesarias para prevenir el deterioro del suelo, y consecuentemente los efectos adversos en la salud humana. Otro pas que presenta avances en materia del cadmio y de la fertilizacin fosfatada es Australia, a travs de programas de informacin a agricultores donde se tratan diversas estrategias para la disminucin de las concentraciones de cadmio en el ambiente, particularmente en el recurso suelo (Mc Laughlin, 2001; Senn y Milham, 2001). En la Figura 5 se presenta una cartilla destinada a los productores de papas donde se resean ambos manejos, malo y bueno, para ilustrar los aspectos que se pueden manejar para la reduccin del cadmio en los cultivos.

Figura 5. Cartilla de manejo del cadmio en papas para un producto de calidad (CSIRO, 1996, citado por Senn y Milham, 2001).

26

El estudio del cadmio es un tema complejo debido a los fenmenos de bioconcentracin y biomagnificacin en el ambiente. Es un tema que ha sido abordado por diversos autores, especialmente por un grupo de expertos, reunidos en dos oportunidades en el marco de International Programme on Chemical Safety (IPCS, 1992) de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) en trabajo conjunto con la International Labour Organisation. 2.3. Fuentes de contaminacin de cadmio El cadmio es un elemento no esencial y poco abundante en la corteza terrestre y a bajas concentraciones puede ser txico para todos los organismos vivos. La contaminacin ambiental por cadmio ha aumentado como consecuencia del incremento de la actividad industrial que ha tenido lugar a finales del siglo XX y principios del siglo XXI, afectando de forma progresiva a los diferentes ecosistemas (Pinto et al., 2004). Entre los factores antropognicos de contaminacin de cadmio (Cd), caben destacar los siguientes (Fig. 6): a) Emisiones atmosfricas. Se originan a partir de las minas metalrgicas, ya que el cadmio se extrae como subproducto del Pb, Zn, Cu y otros metales, las incineradoras municipales, y emisiones industriales procedentes de la produccin de pigmentos para cristales, anticorrosivos, baterias de Ni/Cd, e insecticidas (McLaughlin y Singh, 1999).

b) Depsitos directos. El uso de fertilizantes fosfatados es la principal fuente de contaminacin de Cd en suelos agrcolas. Otra fuente de Cd la constituyen los fangos procedentes de aguas residuales que se utilizan en agricultura (Alloway y Steinnes, 1999). c) Contaminacin accidental. Ocurre eventualmente debido a la contaminacin de tierras por procesos industriales, residuos de la minera y corrosin de estructuras galvanizadas. Un ejemplo son los vertidos de Aznalcllar que tuvieron lugar en 1998, en la provincia de Sevilla, como consecuencia de la rotura de una balsa que contena concentraciones elevadas de metales pesados procedentes de una mina de esta localidad (Aguilar et al., 2003).

Figura 6: Contribucin relativa de las diferentes fuentes de cadmio. Tomado de la presentacin L. Regoli para la LR/UNECE-LRTP Heavy Metals 16-03-05 (Comisin Econmica de las Naciones Unidas para Europa-Contaminacin Transfronteriza del Aire de Larga Distancia por metales pesados). Disponible en: www.chem.unep.ch/pb_and_cd/SR/Files/Submission%20NGO/ICdA/L.%20Regoli-Cd% 20contribution%20to%20human%20health-Berlin%202005.pdf

27

2.4. Ingreso del cadmio en la cadena trfica La principal fuente de contaminacin de cadmio en el ser humano es la ingesta de vegetales contaminados con este metal (Norvell et al. 2000). Qumicamente, el cadmio se puede encontrar disuelto en el agua contenida en el suelo, adsorbido en superficies orgnicas e inorgnicas, formando parte de minerales, precipitado con otros compuestos del suelo o incorporado a estructuras biolgicas. Sin embargo la biodisponibilidad del cadmio para la planta depende de numerosos factores fsicos, qumicos y biolgicos que modifican su solubilidad y el estado del metal en el suelo. Uno de los principales factores es el pH del suelo, el potencial redox, la temperatura y el contenido en arcillas, materia orgnica, y agua (Christensen y Haung 1999). Por ltimo es importante destacar el tipo de cultivo del que se trate, ya que no todas las plantas acumulan cadmio en igual medida (Prince et al. 2002). En la Figura 7, se muestra la capacidad para acumular cadmio de distintas especies vegetales de inters agrcola.

Figura 7: Acumulacin de cadmio en cultivos vegetales de inters agrcola (*Variedades especficas de patata). Tomado de Managing Cadmium in Vegetables. VEGEnotes, Julio 2003. Disponible en: www.cadmium-management.org.au

2.5. Ingreso, transporte y acumulacin de cadmio Por ser un metal no esencial se asume que no existen mecanismos de entrada especficos para el cadmio. Entre las protenas responsables de la entrada de cadmio a la clula cabe destacar el transportador especfico de calcio LCT1 (Clemens et al. 1998), y la protena IRT1, perteneciente a la familia de transportadores de Zn y Fe (ZIP) (Guerinot 2000). Otra familia de transportadores implicados es la Nramp, localizada en la membrana de la vacuola, por lo que probablemente tenga una funcin en la movilizacin del metal y no en el ingreso del mismo a la raz (Thomine et al. 2003). Una vez dentro de la clula el cadmio puede coordinarse con ligandos de S como glutation (GSH) o fitoquelatinas (PCs) y cidos orgnicos como el citrato (Clemens 2006; Domnguez-Sols et al. 2004). Otras posibles molculas responsables de la quelacin del cadmio son pequeas protenas

28

ricas en cistena denominadas metalotionenas (MTs). De esta forma, los complejos Cd-ligando pueden ser transportados al interior de la vacuola o a otras clulas (Shah y Nongkynrh 2007). En la planta, el cadmio se acumula preferentemente en la raz secuestrado en la vacuola de las clulas, y solo una pequea parte es transportada a la parte area de la planta concentrndose en orden decreciente en tallos, hojas, frutos y semillas (Chan y Hale 2004). En clulas de levadura se ha demostrado que el cadmio ingresa en la vacuola unido a fitoquelatinas (PCs) a travs de un transportador de tipo ABC (Ortiz et al. 1995). Otro posible mecanismo de entrada del cadmio en la 2+ + vacuola es mediante un cotransportador de Cd /H ubicado en la membrana de la misma (Salt y Wagner 1993). Los transportadores de cationes CAX, implicados en el transporte de calcio a la vacuola, tambin transportan otros metales como el cadmio (Park et al. 2005). Una vez en la raz, el cadmio puede pasar al xilema a travs del apoplasto y/o a travs del simplasto formando complejos (Clemens et al 2002). En la Figura 8 se muestra un esquema del ingreso del cadmio a travs de las clulas de la raz, hasta llegar al xilema.

Figura 8: Representacin esquemtica de los mecanismos de ingreso, secuestro y translocacin del Cd en races (adaptado de Clemens, 2006). Aparecen representadas dos clulas, la de la derecha en contacto con la rizosfera, y la adyacente en contacto con el xilema. La capacidad de secuestro del metal en las clulas de la raz juega un papel clave en la translocacin del mismo a la parte area. Otro factor importante es la accesibilidad y movilizacin del metal secuestrado, la eficiencia del paso radial por el simplasto y a travs de la endodermis, y por ltimo el flujo al xilema. Abreviaturas: GSH; glutation, posible ligando del Cd, con el que formara el complejo bisglutationato-Cd (GS2-Cd2+). PC, fitoquelatina; CAX2, posible protena de Arabidopsis, responsable del transporte de H+/Cd2+; ABC, transportador de tipo ABC; HMA4, posible bomba de Cd de Arabiopsis; ZIP, transportadores ZIP; Nramp3, transportador de la familia Nramp; HMW y LMW, complejo Cd-PC de elevado y bajo peso molecular, respectivamente. (Rodriguez y colab, 2008. Ecosistemas 17 (3): 139-146.)

2.6. Toxicidad del cadmio Los efectos txicos del cadmio sobre las plantas, han sido ampliamente estudiados (Sanit di Toppi y Gabrielli 1999; Benavides et al. 2005), sin embargo los mecanismos de su toxicidad aun no se conocen completamente. En general el Cd interfiere en la entrada, transporte y utilizacin de elementos esenciales (Ca, Mg, P y K) y del agua, provocando desequilibrios nutricionales e hdricos en la planta (Poschenrieder et al. 1989; Sandalio et al. 2001; Singh y Tewari 2003). El Cd tambin reduce la absorcin de nitratos y el transporte de los mismos de la raz al tallo, adems de inhibir la actividad nitrato reductasa en tallos (Gouia et al. 2000). Las plantas expuestas a suelos contaminados con cadmio presentan modificaciones en la apertura estomtica, fotosntesis y transpiracin (Sandalio et al. 2001). Uno de los sntomas ms extendidos de la toxicidad por cadmio es la clorosis producida por una deficiencia en hierro (Benavides et al. 2005), fosfatos o por la reduccin del

29

transporte de Mn (Goldbol y Hutterman 1985). El tratamiento con cadmio produce reduccin de la actividad ATPasa de la membrana plasmtica, (Astolfi et al. 2005), alteraciones en la funcionalidad de la membrana plasmtica (Fodor et al. 1995; Sandalio et al. 2001) y desequilibrios en el metabolismo del cloroplasto, inhibiendo la sntesis de clorofila y reduciendo la actividad de enzimas implicadas en la fijacin de CO2 (Ali et al. 2000; Maksymiec et al. 2007). La toxicidad por metales pesados se debe en parte al estrs oxidativo producido por las especies de oxgeno reactivo (ROS) generadas a travs de diferentes mecanismos dependiendo del 2+ 2+ metal de que se trate (Stohs y Bagchi, 1995). Los cationes metlicos Cd y Pb no experimentan 2+ 2+ cambios redox y por lo tanto, a diferencia del Fe o Cu , no actan directamente en la generacin de ROS. Sin embargo, pueden actuar como prooxidantes a travs de la reduccin del contenido de GSH, necesarios para la sntesis de PCs, disminuyendo as su disponibilidad para la defensa antioxidante (Pinto et al. 2003). El estrs oxidativo producido por el cadmio se manifiesta por daos oxidativos a membranas tales como peroxidacin lipdica (Lozano-Rodrguez et al. 1997; Sandalio et al. 2001; Wua et al. 2003; Balestrasse et al. 2004), y tambin se han descrito daos oxidativos a protenas por formacin de grupos carbonilo (Romero-Puertas et al. 2002). Las actividades de las enzimas antioxidantes superxido dismutasa (SOD), glutation reductasa (GR), ascorbato peroxidasa (APX), peroxidasas (POD) y la catalasa (CAT), encargadas de la defensa celular frente a las ROS, experimentan reducciones o incremento de su actividad en funcin de la concentracin de cadmio incluida en el medio de crecimiento, la duracin del tratamiento, el tipo de tejido y la especie vegetal de que se trate (Sandalio et al. 2001; Benavides et al. 2005). En los ltimos aos se ha incrementado el inters por el estudio de los mecanismos ntimos implicados en la produccin de ROS en respuesta al Cd. Como consecuencia de ello, se ha demostrado la produccin de ROS en distintos compartimentos celulares (membrana plasmtica, mitocondrias y peroxisomas) siendo la NADPH oxidasa una de las principales fuentes de ROS (Olmos et al. 2003; Romero-Puertas et al. 2004; Garnier et al. 2006). En los ltimos aos se ha prestado una atencin especial al estudio de la regulacin de la produccin de ROS y la sntesis de antioxidantes, as como la implicacin de hormonas como el cido jasmnico y el etileno, y de molculas como el NO. En la Figura 9 se muestra un esquema que resume la respuesta al Cd de la planta, teniendo en cuenta los resultados obtenidos por distintos autores (Romero-Puertas et al. 2004, 2007; Olmos et al. 2003, entre otros). Segn este esquema, el Cd podra inducir la NADPH oxidasa de membrana y las ROS que se formaran (O2 .- y H2O2) podran intervenir en la lignificacin de la pared celular que acta como barrera de entrada del metal (Sanit di Topi y Gabbrielli 1999). Las ROS pueden ser eliminadas por los sistemas antioxidantes pero cuando la intensidad y duracin del tratamiento superan la barrera antioxidante, se produce un exceso de ROS que se traduce en daos oxidativos a membranas y protenas. Los daos a membranas van acompaados de un incremento en la sntesis de etileno y jasmnico (JA), que junto con el H2O2 van a regular la expresin de un gran nmero de protenas de defensa (HSPs, quitinasa o antioxidantes, entre otras). Recientemente se ha demostrado un importante papel regulador del NO en distintos procesos de desarrollo en vegetales (del Ro et al. 2004). El papel de esta molcula est siendo estudiado y parece ser que el Cd reduce considerablemente la acumulacin de NO en tratamientos largos, si bien no se conocen los mecanismos implicados en este proceso (Rodrguez-Serrano et al. 2006).

30

Figura 9. Esquema de la respuesta celular al cadmio: produccin de ROS, daos oxidativos y sealizacin. Modificado de Romero-Puertas (2002). HSP 71,2, protena de estrs trmico de 71,2 kDa; PrP4A, protena relacionada con la patognesis. C2H4, etileno. (Rodriguez y colab, 2008. Ecosistemas 17 (3):
139-146.)

2.7. Estrategias de tolerancia al cadmio Las plantas han desarrollado distintas estrategias para evitar la toxicidad de metales pesados. En general, la tolerancia a metales viene determinada por la reduccin del transporte del mismo al interior de la clula y/o una mayor capacidad para secuestrar estos metales. La raz constituye una de las principales barreras de defensa mediante la inmovilizacin del Cd por pectinas de la pared celular. Los carbohidratos extracelulares (muclago y calosa) de la raz tambin pueden intervenir en la inmovilizacin del metal (Benavides et al. 2005). La acumulacin del metal en los tricomas de la superficie foliar tambin es un mecanismo de inmovilizacin y defensa celular (Salt et al. 1995). Otro mecanismo consiste en la reduccin del transporte o aumento de la extrusin del Cd por transportadores de cationes de la membrana plasmtica (Thomine et al. 2000). Una vez dentro de la clula, el Cd u otros metales, pueden ser secuestrados por cidos orgnicos, aminocidos, fitoquelatinas y metalotionenas, y posteriormente compartimentalizados en la vacuola para prevenir su toxicidad. Las fitoquelatinas constituyen uno de los principales mecanismos de defensa frente a metales pesados. Su sntesis tiene lugar a partir del glutation y se induce en presencia de metales pesados (Clemens, 2006). Plantas que sobreexpresan la enzima fitoquelatina sintasa muestran una mayor tolerancia frente al Cd (Pomponi et al. 2006). Otras posibles molculas responsables de la acumulacin del cadmio son las metallotionenas (MTs), pequeas protenas ricas en cistena, si bien en las plantas no son las principales responsables de la detoxificacin del cadmio, como ocurre en clulas animales (Hamer 1986). 2.8. Hiperacumulacin y fitoextraccin de cadmio Las plantas hiperacumuladoras son, en muchos casos, endmicas de suelos ricos en metales pesados. El contenido en Cd de estas plantas es aproximadamente 100 veces superior al de plantas no hiperacumuladoras cultivadas en las mismas condiciones (Brooks 1998). La mayora de estas plantas pertenecen a los gneros Thlaspi, Silene o Arabidopsis.

31

Los mecanismos responsables de la hiperacumulacin pueden variar dependiendo de la especie y consisten, bsicamente, en una o varias estrategias de tolerancia mencionadas en el apartado anterior. En Thlaspi caerulescens la hiperacumulacin de Cd y Zn se debe a una estimulacin del transporte de los metales a la raz y alteracin del transporte intracelular con disminucin de la acumulacin del metal en la vacuola y aumento del transporte a la parte area (Shah y Nongkynrich 2007). Diferentes autores han propuesto aprovechar la caracterstica inusual de estas plantas para la limpieza de terrenos contaminados (Raskin et al. 1997; Shah y Nongkynrich 2007). Sin embargo, la limitacin principal de este tipo de fitoextraccin es la pequea biomasa de estas plantas, y el escaso tamao y poca profundidad de sus races. Es por ello, que se ha potenciado el uso de plantas de mayor biomasa y crecimiento rpido modificadas genticamente para sobreexpresar genes responsables de la hiperacumulacin (Yang et al. 2005; Shah y Nongkynrich 2007). As, se han obtenido plantas transgnicas tolerantes que sobreexpresan genes que codifican enzimas del metabolismo del glutation, fitoquelatinas, o transportadores de cationes (Shah y Nongkgnrih 2007). 2.9. Modelo de evaluacin y manejo del riesgo del cadmio en el suelo De Mees et al., 2002, publicaron las aplicaciones de un modelo para la evaluacin y manejo de los riesgos alcanzados por la exposicin al cadmio de los fertilizantes. Este modelo fue propuesto por la Unin Europea, en el marco de una serie de estudios realizados por la institucin Environmental Resources Management (ERM) por encargo del European Commission Directorate General III (ERM, 1999, ERM, 2000, ERM, 2001). Dichos estudios surgen de un mandato al interior de la Unin Europea por la necesidad de evaluar los efectos del cadmio en sus Estados Miembros. El modelo consta de tres etapas indicadas en la Figura 10, donde se sealan las entradas y salidas de informacin en cada una de ellas.

32

Figura 10. Entradas y salidas de informacin de las etapas del modelo de manejo del riesgo ( De Mee+us, 2002). En cada etapa del modelo se necesitan datos segn las condiciones locales y a la escala espacial en que se va a aplicar (por ejemplo a nivel pas) con los cuales se llega a los siguientes resultados: Etapa 1 o de acumulacin: se obtiene la acumulacin neta de cadmio en el suelo y en la solucin suelo. Etapa 2 o de exposicin: se obtiene la captacin de cadmio desde el suelo hacia las plantas y la consecuente captacin del cadmio por el ser humano, a travs de aquellos alimentos sensibles a la captacin de cadmio tales como granos, cereales, tubrculos, races y hojas). Etapa 3 o de caracterizacin del riesgo: se hace una estimacin de los efectos adversos del cadmio en base a sus concentraciones actuales o estimadas. 2.9.1. Descripcin general del modelo de acumulacin La concentracin ambiental estimada de cadmio en el suelo, y ms especficamente en la solucin suelo, son parmetros claves para determinar la captacin de cadmio por los cultivos destinados al consumo humano. La Figura 11 muestra las vas de transferencia del cadmio hacia y desde el suelo.

Figura 11. Suelo vas de transferencia del cadmio en la solucin suelo ( ERM, 1999, De Mees eta al 2002)

33

Despus del ingreso al suelo, el cadmio se distribuir entre las partculas de suelo y la solucin suelo, segn dos mecanismos principales de remocin (ERM, 1999; de Mees et al., 2002): Captacin del cadmio desde la solucin suelo por la vegetacin, la cual ser subsecuentemente cosechada para el consumo humano. Lixiviacin del cadmio desde el suelo, lejos de la capa arable, pero con el peligro de la contaminacin de aguas subterrneas. Ambos mecanismos son crticamente dependientes del pH y otras propiedades del suelo (EPA, 1999a; de Mees et al., 2002). La entrada de cadmio va aplicacin de fertilizantes constituir un subconjunto del total de entradas -1 -1 de cadmio al suelo. Otras fuentes incluyen la depositacin atmosfrica (0,4 a 1,1 [g ha ao ] en la -1 UE), la aplicacin de lodos (0,05 a 0,4 [g ha-1 ao ] en la UE) y el acondicionamiento de suelos (ERM, 1999). La aplicacin directa de qumicos as como los niveles basales no se consideran en el presente modelo. La acumulacin de cadmio en el suelo se puede expresar en forma dinmica usando la siguiente expresin matemtica (Harmsen, 1992; Vissenberg y Van Grinsven, 1995 y Moolenaar et al., 1997):

Donde: -1 Cd s(t): concetracin de cadmio en la capa arable ( mgkg ) al tiempo t en aos -1 Cds (o): concentracin de cadmio inicial (da presente) en el suelo (mgkg ) -1 Kp: tasa anual de extraccin de cadmio por las plantas (g ha ) -1 Ki: tasa anual de lixiviacin de cadmio ( g ha ) t: tiempo en aos -1 Ke: tasa anual de entrada de cadmio (g ha ) -3 Da: densidad aparente del suelo (Kg m ) p: profundidad de la capa arable ( m) -1 Cds(EE): concentracin de cadmio en estado estable en la capa arable ( mg kg ) Todas las concentraciones de cadmio en el suelo se expresan en trminos de peso seco (a 105C). Cada una de las tasas se describe en mayor detalle ms adelante. 2.9.2. Concentraciones de cadmio en suelos agrcolas -1 En la Ecuacin 1 se requiere conocer los niveles actuales de cadmio en el suelo Cds(0) [mg kg ] para hacer proyecciones futuras sobre el estado de la contaminacin de los suelos y asimismo, comparar estos valores con las tendencias futuras reales de cadmio. Todos los suelos tienen un contenido base de cadmio que vara de acuerdo a la roca parental de la cual se deriva. La concentracin de cadmio media, para los pases europeos, segn la mayora de los estudios, estn en

34

el rango de 0,06 a 1,1 mg kg (De Mees, 2002). En el perfil de suelo, el cadmio est normalmente a niveles ms altos en el horizonte superficial. Los suelos agrcolas pueden tener contenidos ms altos de cadmio respecto de los suelos no intervenidos como ocurre, por ejemplo, en los suelos forestales, debido a la aplicacin de cal, -1 fertilizantes y lodos (Rmkens and Salomons, 1998). Un valor de Cds(0) de 0,3 mg kg (peso seco) fue sugerido por Belgian Federal Department of the Environment (BFDE) en 1999 como promedio de la Unin Europea, no obstante, el modelo de acumulacin debera ser simulado con un rango de concentraciones de cadmio dependientes de la variacin del contenido de cadmio dentro de cada pas. 2.9.3. Tasa anual de entrada de Cd a los suelos agrcolas (Ke) La expresin matemtica para el clculo de Ke es la siguiente:

-1

Donde el trmino Ke representa la tasa de entrada de cadmio al suelo agrcola y comprende tres componentes -1 -1 que tienen unidades de [g ha ao ]: Kdep : tasa de entrada va depositacin atmosfrica. Kfer : tasa de entrada va aplicacin de fertilizantes. Kle : tasa de entrada va aplicacin de lodos/estircol. Para el presente estudio slo se considerar la entrada de fertilizantes fosfatados. Sin embargo, se debe tener presente que para los pases miembros de la Unin Europea se ha estimado una tasa -1 promedio base de depositacin atmosfrica anual de cadmio de 0,4 g ha , informado por BFDE (Belgian Federal Department of th eEnvironment), en 1999 (de Mees et al., 2002). 2.9.4. Extraccin de cadmio va cultivos La extraccin de cadmio de los cultivos es variable, sin embargo, se puede adoptar un valor -1 -1 anual de 0,5 g Cd ha con una concentracin inicial de cadmio al tiempo 0 de 0,3 mg kg De Mees et al. (2002), proponen la siguiente ecuacin para calcular el Kp requerido en la Ecuacin 1 y Ecuacin 2 del modelo.

Donde, -1 Kp: tasa de extraccin de cadmio del cultivo [ao ] -1 -1 Cdp: cadmio extrado por el cultivo [g ha ao ] p: profundidad de la capa arable [m] -3 Da: densidad aparente del suelo [kg m ] -1 Cds(0): concentracin inicial de cadmio en el suelo [mg kg ] 2.9.5. Lixiviacin de cadmio en suelos agrcolas

35

En el modelo se considera que la prdida de cadmio debida a la lixiviacin desde la capa arable depender inicialmente de la distribucin del cadmio entre las partculas de suelo y la solucin suelo, en funcin de propiedades tales como su pH, materia orgnica y textura. La remocin de cadmio ser subsecuentemente funcin de las propiedades qumicas y fsicas del suelo, de la tasa de infiltracin y del flujo neto de agua. La BFDE (1999) adopt un modelo simple de lixiviacin el cual ha sido ampliamente usado en estudios de acumulacin del cadmio y carga crtica en suelos; el modelo la expresa como:

Donde, -1 L: lixiviacin neta anual de cadmio [g ha ] -1 Cdss : concentracin de cadmio en la solucin suelo *g L ] F: exceso de precipitacin anual [m] El exceso de precipitacin se define como la parte del agua precipitada, en estado slido o lquido, que puede estar disponible potencialmente para escurrimiento superficial, infiltracin o almacenamiento (CECW-EH-Y, 1994). El Cdss se calcula mediante la siguiente ecuacin:

Donde: -1 Cdss: concentracin de cadmio de la solucin suelo *g L ] -1 Cds: cadmio de la fraccin particulada del suelo *g kg ] -1 KD: coeficiente de particin fraccin slida/lquida [L kg ] El clculo de KD es vlido slo para un elemento particular (en este caso cadmio) y para las caractersticas qumicas de la solucin suelo para la cual se realice la estimacin de este parmetro. En el valor de KD intrnsicamente se asume que el sistema cadmio solucin suelo/fraccin slida es reversible. Otros supuestos implcitos son: (1) los contaminantes estn a concentraciones traza en las fases slida y lquida del suelo, (2) la relacin del contaminante en la fase slida respecto de la fase lquida es lineal, (3) existen condiciones de equilibrio, (4) cinticas de adsorcin y desorcin igualmente rpidas, (5) describe particin del contaminante entre un sorbato (contaminante) y un sorbente (suelo), (6) todos los sitios de adsorcin estn accesibles y tienen la misma fuerza (EPAUNITED STATES, 1999a). Por otro lado, experimentalmente es muy difcil distinguir las distintas especies de una sustancia qumica, por ello normalmente se asume que no hay diferenciacin en especies qumicas.

36

En las ecuaciones 1 y 2 se requiere calcular la tasa de lixiviacin anual (Kl). La Ecuacin 5 puede -1 -1 ser convertida a un valor anual dividiendo L [g ha ao ] por la cantidad inicial de cadmio en el suelo -1 (Cds(0) [mg kg ]), contenida en 1 ha de suelo aprofundidad de aradura. Insertando Cdss despejado de la Ecuacin 6 en la Ecuacin 5, el algoritmo compuesto para Kl (valor anual) es:

Donde, -1 Kl: tasa anual de lixiviacin de cadmio [ao ] F : exceso de precipitacin anual [m] -1 KD : coeficiente de particin fraccin slida/lquida [L kg ] p : profundidad de la capa arable [m] -3 Da : densidad aparente del suelo [kg m ] El escurrimiento superficial3 anual est dado por:

Donde, -1 F : tasa de escurrimiento [m ao ] -1 P : tasa de precipitacin [m ao ] -1 finf : tasa de infiltracin [ m ao ]

Valores representativos para la Unin Europea son 0,25 [m ao ] para finf y

-1

0,2 [m ao ] para F.

-1

El coeficiente de distribucin, KD, es dependiente del tipo de suelo, del pH, contenido de materia orgnica, capacidad de intercambio catinico, etc. En la Unin Europea cada Estado Miembro ha desarrollado su propio algoritmo para determinar el KD del cadmio (De Mees et al., 2002), asimismo, en Estados Unidos se ha destacado que es esencial medir este valor para condiciones sitio-especficas antes de hacer cualquier estimacin sobre el impacto de un contaminante en un sistema ambiental (Environmental Protection Agency, 1999).

37

III. FITOTOXICIDAD DEL PLOMO

3.1 Generalidades El plomo vara en los horizontes superficiales del suelo en un rango de 3 a 189 mg kg , mientras que los valores medios para tipos de suelo varan entre 10 a 67 mg kg con un promedio de 32 mg kg . Se han informado valores altos de Pb (sobre 100 mg kg ) para suelos de Dinamarca, Japn, Gran Bretaa e Irlanda, los que probablemente reflejan el impacto de la contaminacin. Davies (1977) estableci que el lmite superior para el contenido de Pb de un suelo normal podra ser 70 mg kg . La solubilidad del Pb puede disminuir mediante el encalado. En condiciones alcalinas el Pb precipita como hidrxido, fosfato o carbonato, y tambin se promueve la formacin de complejos orgnicos estables de Pb. La acidez creciente del suelo puede aumentar la solubilidad de Pb, pero su movilizacin generalmente es ms lenta que su acumulacin enlas capas de suelo ricas en materia orgnica. La localizacin caracterstica del Pb cerca de la superficie del suelo, se relaciona principalmente con la acumulacin superficial de materia orgnica. En suelos contaminados con Pb, ste se encuentra comnmente asociado a Cd y Zn. La barrera suelo-planta limita la trasmisin de Pb a la cadena alimenticia, ya sea por procesos de inmovilizacin qumica en el suelo (Laperche et al., 1997), o limitando el crecimiento de las plantas antes que el Pb absorbido alcance niveles que pueden ser dainos para el ser humano. La absorcin y traslocacin de Pb por depositacin atmosfrica en las hojas puede llegar a ser un 73 a 95% del contenido de Pb total en plantas de hoja (como espinacas) y cereales (Kabata Pendias, 2000). La estabilizacin del Pb en suelos contaminados puede lograrse mediante la aplicacin de fsforo y xido de manganeso. Sin embargo, estos tratamientos afectan la biodisponibilidad de otros metales (Cd y Zn). Adems, la continua remocin de P y otros elementos qumicos inducidos por el crecimiento de las plantas puede afectar la biodisponibilidad de Pb en el suelo. En las plantas el Pb se almacena principalmente en las races, siendo mnima su presencia en las estructuras reproductivas. Tabla 10 muestra algunos rangos y contenido medio de Pb en vegetales de consumo
-1 -1 -1 -1 -1

3.2 Estrs por plomo El plomo es un miembro del Grupo IVB de la tabla peridica de los elementos. Tiene dos estados de oxidacin, Pb (II) y Pb (IV), que son estables, pero la qumica ambiental del elemento es dominada 2+ 3 por el ion plumboso (Pb ). El Pb elemental es un denso metal azul grisceo (11.3 g/cm ) con punto de fusin a 327 C y de ebullicin a 1744 C. El bajo punto de fusin permiti fundirlo y trabajarlo en las sociedades primitivas. El metal es muy blando y tiende a deslizarse. Es por eso que fcilmente se puede cortar y moldear y durante mucho tiempo ha sido usado sobre tejados o para la fabricacin de caeras. El plomo metlico es relativamente opaco a la radiacin ionizante, y hace de escudo de defensa al trabajar con rayos X y radioistopos.

38

El plomo se une a otros metales fcilmente: el Pb/Sb es principalmente usado para hacer placas de bateras pero tambin es usado para las balas de las armas y frecuentemente sta aleacin se usa para soldar. El plomo metal en combinacin con PbO2, es usado para fabricar el plomo cido en los electrodos de acumuladores y bateras. Otros componentes inorgnicos son ampliamente usados. Por ejemplo, el cromato amarillo para pintar las calzadas y muchas otras pinturas contienen xidos de plomo. Tambin se usan jabones de plomo para promover la polimerizacin en la industria petroqumica del plstico. Existe una extensa qumica orgnica de los compuestos del plomo (IV), especialmente tetra-alquilos y tetra-arilos (Greninger, 1974).

Tabla 10: Rangos y contenidos medios de Pb en vegetales de conusmo (Kabata-Pendias 2000)

39

El plomo no es un elemento esencial o beneficioso para las plantas y animales. Es un veneno bien conocido para los mamferos y en humanos se teme a los sndromes clnicos de la toxicidad por plomo. El plomo afecta el sistema nervioso humano, la produccin de clulas sanguneas, los riones, el sistema reproductivo y la conducta. La intoxicacin producida por el plomo se denomina saturnismo y sus sntomas se manifiestan como la aparicin de fatiga, dolores de cabeza, dolores musculares y de estmago, anorexia, estreimiento y, en su fase ms crtica, "clico del plomo", es decir, calambres abdominales intensos, acompaados de nuseas, vmitos y presin arterial elevada. Han sido observados casos concretos en nios que han estado en contacto con el suelo o con partculas en suspensin (Wixson, 1994) que presentaron plomo en sangre. La contaminacin por plomo originariamente es debida a la extraccin de minerales de plomo del suelo utilizando el calor en los afloramientos naturales. El agua transportada por percolacin, lixiviacin o escorrenta, es decir, por procesos propios del ciclo hidrolgico transporta plomo en pequeas partculas provenientes de las minas (Laxen y Harrison, 1977). Otras actividades antropognicas hacen que predomine en las zonas rurales, urbanas e industriales. Las principales fuentes de contaminacin por plomo son: Deposicin area en minas explotadas Gases contaminantes urbanos Partculas de combustible no quemado Deposicin de residuos slidos urbanos (Chaney y Ryan, 1994) Fundicin de minerales Efluentes de plantas de reciclaje de bateras industriales Chimeneas de fbricas Aditivos para pinturas y gasolina (Eick et al., 1999) Uso de municiones militares (Shmaefsky, 2003; Brian, 2003) Procesos de plateado y terminacin de metales Uso de fertilizantes (Stefanov et al., 1995; Shmaefsky, 2003) El plomo se une preferentemente a oxgeno, grupos amino o sulfhidrilo y ocasiona estrs inico 2+ debido a su elevado ndice de covalencia. En la mayora de los casos, el catin libre (Pb ) suele ser la forma ms fitotxica. Los factores que afectan la disponibilidad y absorcin de plomo son el tamao de las partculas del suelo y la capacidad de intercambio catinico, adems de los factores de la planta tales como la superficie de la raz, los exudados de la raz, la micorrizacin y la tasa de transpiracin (Davies, 1995). El plomo est clasificado como un cido dbil de Lewis dado que es una sustancia que sin contener hidrgeno se comporta como un cido siendo capaz de aceptar un par electrnico mediante la formacin de enlaces covalentes coordinados segn la Teora de Lewis Gilbert Newton (1875-1946). Por lo tanto, el plomo presente en el suelo esta estrechamente ligado a la materia orgnica de las plantas o materia coloidal del suelo o como precipitado. Todas estas formas reducen la absorcin de plomo por las races de las plantas.

40

La absorcin de plomo como plomo metal en el suelo sigue la relacin de Langmuir, incrementndose en funcin del incremento del pH desde 3.0 hasta 8.5 (Lee et al., 1998). En este sentido, Nikazar y Afshari (2005) en un estudio sobre la adsorcin de Pb ( ), Cd () y Cr (VI) sobre paja y salvado de trigo empleando tcnicas de columna observaron que la adsorcin de Pb ( ), Cd () y Cr (VI) aumenta al crecer el pH, y disminuye cuando se aumenta la temperatura y la velocidad de flujo de la solucin. Sin embargo, Blaylock et al. (1997) han mostrado que en el suelo con un pH entre 5.5 y 7.5 la solubilidad del plomo es controlada por fosfato o precipitados de carbonato y muy poco plomo est disponible para las plantas incluso aunque stas presenten la capacidad gentica para acumularlo. En la investigacin sobre la fitototoxicidad del plomo predomina el estudio de la capacidad de acumulacin del plomo y su posible transmisin hacia el hombre a travsde la cadena trfica. Por tal razn, las plantas son tiles para conocer los mecanismos de absorcin y transporte de plomo con el objeto de conseguir la seleccin y el desarrollo de variedades tolerantes, capaces de aumentar la acumulacin del elemento en sus tejidos. 3.3 Distribucin de plomo en la raz 2+ Hacia la superficie de la raz el Pb se une a los grupos carboxilo del cido urnico del muclago. El muclago establece una barrera importante protegiendo el sistema radicular del metal entrante. Algunas de las uniones de los metales son liberadas cuando el muclago es biodegradado (Morel et al., 1986). Los microorganismos del suelo pueden afectar la disponibilidad del metal pesado por procesos de biosorcin, bioacumulacin y solubilizacin. Adicionalmente, las ectomicorrizas pueden 2+ influenciar la entrada, transporte y toxicidad del Pb en abeto noruego (Marschner et al. 1996). 3.4. Plomo en el apoplasto 3.4.1 Pared celular 2+ La retencin de plomo en las races est basada en la unin de Pb hacia iones con sitios intercambiables sobre la pared celular formando depsitos en la misma. Esta precipitacin extracelular corresponde principalmente a la forma de carbonato de plomo. La adicin de quelantes sintticos, tal como H-EDTA o EDTA, en combinacin con un bajo pH, 2+ previene la retencin de Pb en la pared celular, permitiendo su absorcin y translocacin hacia la parte area (Jarvis y Leung, 2002), siendo la localizacin del metal mayor en races que en otras 2+ partes de la planta. El Pb se une fuertemente a los grupos carboxilo del cido galacturnico y al propio cido galacturnico en la pared celular, el cual restringe su transporte va apoplasto (Rudakova et al., 1988). 3.4.2 Membrana plasmtica En general, las plantas dicotiledneas acumulan significativamente altas cantidades de plomo en races en comparacin con las races de las plantas monocotiledneas (Huang y Cunningham, 1996). El plomo transportado desde el suelo hacia las clulas tiene que cruzar la membrana plasmtica de las clulas de la raz. Una posible va de transporte de plomo a travs de la membrana plasmtica parece que es a travs de los canales catinicos de la msma, tales como canales de Calcio. En este sentido, ha sido

41

caracterizado un canal de Ca operado por voltaje en la membrana plasmtica de raz en trigo y 2+ maz (Marshall et al., 1994; Huang et al., 1994). Huang y Cunningham (1996) encontraron que el Pb +2 inhibe significativamente el voltaje medido como consecuencia de la actividad de los canales de Ca +2 2+ en el plasmalema de races de trigo. La inhibicin de los canales de Ca por Pb puede originarse 2+ 2+ por bloqueo del canal por el Pb o debido a transporte competitivo de Pb a travs del canal de +2 Ca . Los bloqueadores de los canales del calcio son capaces de inhibir la proliferacin celular y la falta de calcio ocasiona la apoptosis o muerte celular. En este sentido, Tomsig y Suszkiw (1991), observaron permeacin de plomo a travs de los canales de calcio en clulas cromafnicas de mdula de glndulas suprarrenales de bovino. Estos investigadores encontraron que el voltaje emitido por +2 transporte de plomo fue bloqueado por nifedipina (bloqueador del canal de Ca ) e incrementado +2 por BAY K8644, un canal de calcio tipo-L que inhibe el flujo de Ca a travs de un receptor con un ligando de glutamato (Donald 1999). Su toxicidad depende parcialmente de su activacin por voltaje emitido (sensibilidad al txico .plomo.) por los canales de calcio. Sin embargo, se puede hacer reversible la toxicidad por despolarizacin, ya que puede beneficiar la supervivencia de las clulas a travs de otros mecanismos diferentes al flujo de calcio a travs del voltaje emitido por los canales de calcio. Por otra parte, el Ca bloquea el transporte de Pb dentro de la raz y, en consecuencia, disminuye 2+ +2 la toxicidad por Pb sobre el crecimiento de la misma. El efecto protector del Ca sobre la toxicidad 2+ del Pb puede ser relacionada con su inhibicin para ser acumulado el metal pesado en la punta de 2+ 2+ la raz, sitio potencialmente blanco de la toxicidad del Pb . El Mg , a pesar de que bloquea tanto 2+ 2+ como el calcio la absorcin de Pb , no mejora la toxicidad por Pb sobre el crecimiento de la raz +2 tanto como el calcio. Estos resultados sugieren que el efecto protector del Ca sobre la toxicidad del 2+ 2+ 2+ Pb involucra mltiples mecanismos, incluyendo la competicin para entrar, y que el Pb y el Cd pueden competir con cationes divalentes por el transporte dentro de las races de plantas de arroz (YoYoung., et al. 2002). 3.5. Transporte de plomo El plomo se mueve predominantemente dentro del apoplasto de la raz en una forma radial a travs del crtex y se acumula cerca de la endodermis. La endodermis acta como una barrera parcial al movimiento de plomo entre la raz y la parte area. Tal y como muestran la mayora de datos referidos a la elevada acumulacin de plomo en races comparada con la de la parte area (Jones et al., 1973; Verma y Dubey, 2003). En semillas de Oryza sativa L. germinadas durante 10 20 das en cultivos de arena con solucin nutritiva a la que se aadi 500 M o 1000 M Pb(NO3)2, el crecimiento de las races fue reducido entre un 22 % y un 42 %, mientras que el crecimiento de la parte area fue reducido en un 25 %, ya que la localizacin de plomo absorbido fue 1.7 a 3.3 veces ms alta en las races que en la parte area. El transporte limitado de plomo desde las races hacia otros rganos es debido a la barrera de la endodermis de la raz. Parece ser que la banda de Caspari de la endodermis es el mayor factor limitante que restringe el transporte de plomo dentro del tejido del cilindro central (Seregin e Ivanov, 1997). Sin embargo, parece haber controversia sobre el movimiento del plomo en la raz pues, si bien Lane y Martin (1977) afirman que el plomo se mueve en el simplasto, segn Broyer et al., (1972) el movimiento del plomo en la raz sigue primariamente la va del apoplasto debido a que una proporcin representativa de plomo es extrada del agua.
2+ 2+

+2

42

Tericamente, segn Snchez y Aguirreola (1993) se pueden resumir tres vas anatmicamente diferentes a travs de las cuales podra moverse el agua: En primer lugar, la ruta externa al citoplasma vivo, es decir, el continuo de paredes celulares externo a la membrana celular. Esta va se denomina apoplasto. El apoplasto de la raz representa, aproximadamente, un 10% del volumen de la misma y equivale al espacio libre. En segundo lugar, existe la posibilidad de que el agua atraviese la pared celular y el plasmalema, para entrar luego en el citoplasma. Posteriormente, se movera a lo largo del continuo citoplasmtico a travs de los plasmodesmos que conectan el citoplasma con las clulas adyacentes. Esta ruta, que representa la porcin viva de la clula, se denomina va del simplasto. Finalmente, existe la posibilidad de que el agua atraviese tanto el plasmalema como el tonoplasto, de tal manera, que la vacuola pasara a ser una parte integral de la va de transporte. La posibilidad de transporte simplstico del plomo ha sido demostrada en races de cebolla e hipoctilos de berro (Wierzbicka, 1987). Altas concentraciones de plomo causan lesiones e interrupcin en la funcin de la barrera del plasmalema tanto en la permeabilidad selectiva del plasmalema como en el tonoplasto. Se ha demostrado que el plomo se retiene ms en la superficie del plasmalema que en las paredes celulares. El plomo puede entrar en clulas daadas junto con otros componentes como determinados colorantes, los cuales no entran en clulas no daadas (Seregin et al., 2004). El patrn de distribucin de plomo en la raz difiere considerablemente dependiendo de concentraciones de plomo y variando segn la concentracin (Seregin et al., 2004). A bajas concentraciones de plomo predomina el flujo de iones plomo en el apoplasto, mientras que a altas concentraciones, la barrera funcional de plasmalema es daada y una gran cantidad de plomo penetra dentro de las clulas. En general, la aparente concentracin de plomo en partes areas de la planta decrece con la distancia desde las races. La principal causa es que la mayor concentracin de plomo se halla en las paredes celulares de la raz a diferencia de otras partes de la planta. Adicionalmente, se presentan uniones con el plomo en tejidos lignificados con mayor frecuencia que en tejidos no lignificados. En este sentido, Suchodoller (1967) observ mayor retencin de plomo en la epidermis de la raz de cebada y una mnima cantidad en los tejidos vasculares, lo que sugiere que hasta cierto punto la localizacin de plomo en diferentes tejidos de la planta es tambin dependiente de la especie. En semillas, la testa previene la entrada de plomo dentro de los tejidos internos hasta su ruptura por el desarrollo de la radcula. Una vez la testa se rompe, el plomo entra rpidamente, con notables excepciones, en las regiones meristemticas de la radcula e hipoctilos. En los cotiledones, el plomo se mueve a travs de los tejidos vasculares y tiende a acumularse en reas discretas en las partes dstales (Lane y Martin, 1977). El contenido de plomo en varios rganos de la planta tiende a decrecer en el siguiente orden: races > hojas > tallos > inflorescencia > semillas. Sin embargo, este orden puede presentar variaciones intraespecficas (Antosiewicz, 1992).

43

En plantas de cebolla (Allium cepa), el plomo absorbido es localizado en altas concentraciones en las puntas de la raz seguidas por partes proximales de la raz, mientras que bajas concentraciones han sido encontradas en la base de la raz (Michalak y Wierzbicka, 1998). Las hojas difieren su capacidad para acumular plomo dependiendo de la edad. El mximo contenido de plomo es encontrado en hojas senescentes y el mnimo en hojas jvenes (Godzik, 1993). Estudios ultraestructurales han revelado que cantidades variables de depsitos de plomo estn presentes principalmente en el espacio intercelular, pared celular y vacuolas, mientras que pequeos depsitos de este metal han sido vistos en el retculo endoplasmtico, dictiosomas y vesculas derivadas de los mismos. La pared celular y la vacuola juntas suman 96% del plomo absorbido (Wierzbicka y Antosiewicz, 1993). El factor por el cual el plomo es encontrado en el retculo endoplasmtico y dictiosomas est aparentemente relacionado con la secrecin del metal de la superficie celular dentro de la vacuola. Puesto que una pequea cantidad de plomo alcanza el ncleo, cloroplastos y mitocondrias, es lgico suponer que ejerce su efecto txico sobre estos orgnulos. Los gradientes del potencial electroqumico entre vacuolas y la solucin externa de clulas de la hoja de Potamogeton sp., vara entre [-150 y -240 mV], lo cual debe favorecer una entrada pasiva de plomo dentro de las vacuolas durante el tratamiento con este metal (Denny y Weeks, 1968). De particular inters es la invaginacin del plasmalema para formar vacuolas pinocitticas en muchas especies de plantas, tal como en Stigeoclonium. La formacin de tales vacuolas es importante para el secuestro del exceso de iones metlicos de forma que dichas vacuolas podran proteger los contenidos celulares de los efectos txicos del plomo (Silverberg, 1975). Frecuentemente, en regiones muy prximas a los plasmodesmos, se encuentran partculas grandes de plomo ocupando una elevada porcin del volumen de la pared celular. En otras regiones donde la pared celular es ms gruesa y substancial, partculas pequeas se sitan dentro de la pared celular hacia la periferia. La deposicin de aquellas partculas pequeas de plomo ocurre posiblemente a travs de la accin de vesculas pinocitsicas (Ksiazek et al., 1984). Por otro lado, el estudio de la localizacin del plomo en clulas de plantas acuticas an est en proceso de investigacin. Plantas de Lemma minor L. tratadas durante una hora con plomo mostraron contenidos elevados de plomo en vacuolas pequeas, a la vez que en tratamientos a ms largo plazo (6 y 12 h) se observ un incremento del contenido en Pb en la pared celular (Samardakiewicz y Wozny, 2000). La localizacin de plomo en la pared celular posiblemente es consecuencia de una redistribucin de plomo y refleja un incremento en el transporte apoplstico A su vez, la presencia de plomo en vesculas pequeas en Lemma minor sugiere que la endocitosis juega un papel importante en la entrada de plomo en estas plantas.

3.6. Efectos fisiolgicos La fitotoxicidad por plomo ocasiona desordenes en las actividades fisiolgicas normales de las plantas hasta matar eventualmente las clulas a altas concentraciones (Ernst, 1998; Seregin e Ivanov, 2001). Los principales procesos fisiolgicos afectados son la actividad enzimtica, la nutricin

44

mineral, el potencial hdrico, el estatus hormonal, la estructura de la membrana y el transporte de electrones. Los sntomas de toxicidad por Pb pueden dividirse en sntomas no especficos y especficos. Segn Burton et al. (1984), los sntomas visuales no especficos consisten en una inhibicin rpida del crecimiento radicular, reduccin del rea foliar, clorosis y aparicin de manchas pardo-rojizas fenlicas en tallos, pecolos y hojas, y necrosis foliar. Por otra parte, segn Mishra y Choudhari (1998), la toxicidad por plomo inhibe la germinacin de las semillas y retarda el crecimiento de las plantas. Los sntomas especficos consisten en una disminucin del porcentaje e ndice de germinacin, de la proporcin longitud radicular/parte area, del ndice de tolerancia a plomo y mercurio, y del peso seco de las races y de la parte area. La anterior sntesis permite introducir varias investigaciones publicadas sobre efectos adversos por plomo en plantas. Estos efectos se pueden separar en dos grupos: efectos adversos a altas concentraciones de plomo y efectos adversos a bajas concentraciones de plomo. 3.6.1. A altas concentraciones de Pb Los efectos ocasionados por el plomo a altas concentraciones son: Disminucin del 14 al 30 % en la germinacin de semillas de arroz y reduccin del crecimiento de semillas de 13 a 45 % con 1mM Pb (Verma y Dubey, 2003). Reduccin del nmero de semillas en germinacin y encogimiento del hipoctilo de Lupinus (Wozny, et al., 1982). Inhibicin de crecimiento de la raz a 10 - 10 M Pb in vitro o con un contenido superior a 10 mg / kg de contenido de plomo en el suelo (Breckle, 1991). A nivel celular el plomo inhibe las actividades de enzimas que contienen grupos sulfhidrilo (-SH) necesarios para su actividad (Van Assche y Clijsters, 1990). 3.6.2. A bajas concentraciones de Pb Los efectos ocasionados por el plomo a bajas concentraciones son: Mayor sensibilidad en el desarrollo y la extensin de la raz princip al a diferencia de las races laterales (Obroucheva et al., 1998). Incremento del contenido de plomo en las races en relacin directa con la concentracin en niveles de entre 0.1 y 2 M de Pb en Picea abies. Paralelamente, cuando se realiza una exposicin de las plantas a 0.5 M de Pb durante 4 semanas se reduce el crecimiento de las races primaria, secundaria y terciaria (Godbold y Kettner, 1991). En semillas de Zea mays, se ha observado una fuerte inhibicin del crecimiento de la raz primaria y una corta zona de ramificacin cuyas races laterales son ms compactas, ocupando una posicin mucho ms ntima en la punta de la raz con respecto a races crecidas en la ausencia de plomo (Obroucheva et al., 1998). 3.6.3. Efectos ultraestructurales Estudios sobre el crecimiento radicular, divisin celular, morfologa cromosmica y de los nucleolos de las clulas de las puntas de raz de Allium cepa L. a diferentes concentraciones de Pb(NO3)2, realizados por Yang et al. (2000), pusieron de manifiesto una inhibicin en el crecimiento
-2 -6

45

radicular. Este efecto fue posteriormente confirmado por la presencia de irregularidades mitticas y adhesin de los cromosomas. Durante la interfase, las clulas de las races tratadas con Pb presentaban micronucleosis, irregularidad en la forma del ncleo y descomposicin del material nuclear (Wierzbicka, 1994). Paralelamente, se detectaron perturbaciones en el alineamiento de los microtbulos a una concentracin dependiente de una concentracin inicial de 10 M, lo que contribuye a la inhibicin del crecimiento de la raz (Yang et al., 2000). El plomo destruye los microtbulos del huso mittico causando c.mitosis (colchicina-mitosis) caracterizada por bloqueo celular en prometafase. En otras palabras, el plomo inhibe la formacin del huso cromtico. Este bloqueo, sin embargo, no es permanente (Wierzbicka, 1994). En conclusin, los microtbulos de diferentes regiones del meristemo de la raz y de diferentes estadios del ciclo celular muestran susceptibilidad diferencial al plomo. Poschenrieder et al (2004) hallaron que el Al induce alteraciones de la organizacin y orientacin de los microtbulos antes de que se produzca la inhibicin de la elongacin radicular. A partir de las anteriores experiencias se ha propuesto como hiptesis que la inhibicin del crecimiento radicular bajo toxicidad con plomo puede ser un resultado de la inhibicin de la divisin celular de las puntas de la raz (Eun et al., 2000). 3.7. Efectos bioqumicos Los primeros estudios sobre la accin del plomo a nivel bioqumico se centraron en descripciones sobre la considerable reduccin de la sntesis de DNA, RNA y protenas en el embrin axial, y en los endospermos de plantas de arroz en germinacin sometidos a concentraciones crecientes de plomo (Maitra y Mukherji, 1977). Asimismo se ha aceptado que la toxicidad por plomo adems de disminuir los niveles del contenido de protenas en tejidos tambin causa alteraciones significativas en la composicin lipdica. En el caso de P. vulgaris y Z. mays se observaron cambios sustanciales a nivel de glucolpidos, especialmente monogalactosil y diacilgliceroles, los cuales fueron asociados con alteraciones en la permeabilidad de la membrana en los cloroplastos Especficamente, al incubar cloroplastos con concentraciones constantes de sales de plomo, los niveles de cidos grasos insaturados ascendieron notablemente con respecto a los cidos grasos saturados (18:3) (Stefanov et al., 1995). Los datos sobre la disminucin en el peso seco presentan variabilidad. As, (Kosobrukhov, 2004) observaron una disminucin en Plantago major bajo tratamiento con plomo pero en ciertos casos, tales como en plantas de maz, se ha observado un aparente incremento en el peso seco de los rganos de las plantas que fueron correspondidos con un incremento de la sntesis de polisacridos de la pared celular al ser expuestos a tratamientos con plomo (Wierzbicka, 1998). Por otra parte, Malkowski et al., (2002) trabajando con maz con concentraciones de plomo 10 - 10 M, observaron que el crecimiento del mesoctilo y del coleptilo fueron afectados de forma similar; sin embargo, la concentracin de plomo en el mesoctilo fue tres veces mayor que en el coleptilo, proponiendo que la disminucin del crecimiento de la parte area en maz no es una
-3 -4

46

consecuencia de la liberacin de potasio o de la acumulacin de plomo en la raz, sino que es debido a una .seal. no conocida inducida en las races, como respuesta a la exposicin por plomo la cual es transmitida a la parte area.

3.7.1. Efectos sobre las actividades enzimticas Las actividades de un amplio rango de enzimas de diferentes vas metablicas son afectadas por el plomo. La inhibicin del 50 % de la mayora de enzimas se produce a una concentracin de -5 -4 entre 10 y 2x10 M de plomo. A esta concentracin se hace referencia en trminos de la constante de inactivacin (Ki). La inhibicin sobre la actividad enzimtica es causada por la interaccin de Pb con los grupos sulfidrilo (.SH) que estn presentes en el centro activo de los enzimas, los cuales son esenciales para la estabilizacin de su estructura terciaria. Adems, la reaccin con los grupos (.SH) puede bloquear los grupos .COOH con iones plomo, lo que parecer tambin juega un papel importante en la inhibicin de la actividad enzimtica bajo el tratamiento con este metal (Levina, 1972). El plomo forma un mercptido con el grupo (.SH) de la cistena y tambin forma complejos con grupos fosfato. La inhibicin de metaloenzimas bajo tratamiento con plomo parece ser debida a un desplazamiento del metal esencial por plomo. La inhibicin de la actividad enzimtica debida al plomo no parece ser especfica para este metal: tales inhibiciones son tambin evidentes con otros cationes que tienencomparables afinidades por grupos proteicos funcionales. Sin embargo, las actividades de algunos enzimas se han visto incrementadas al ser expuestas a plomo. Tales resultados aparentemente conciernen a cambios en la sntesis enzimtica, inmovilizacin de los inhibidores de los enzimas, o como un resultado efector de molculas, las cuales son sintetizadas bajo fitotoxicidad con plomo. Las actividades enzimticas afectadas por la toxicidad por Pb han sido ampliamente reportadas por varios investigadores basndose en los principales procesos metablicos que suceden en las especies vegetales. Los efectos del plomo se presentan con un signo (+/-) indicando un incremento o un decrecimiento de la actividad enzimtica por accin del plomo (Tabla 11). 3.7.2. Efectos sobre la fotosntesis El proceso de la fotosntesis de las plantas es alterado en los cloroplastos por la toxicidad por plomo causando innumerables efectos adversos. Sin embargo, se pueden resumir a continuacin para facilitar su comprensin: Disminucin de la tasa fotosinttica Distorsin de la ultraestructura del cloroplasto Restriccin de sntesis de clorofila, plastoquinona y carotenoides Obstruccin de transporte de electrones Inhibicin de actividades enzimticas del ciclo de Calvin. Deficiencia de CO2 como un resultado de cierre estomtico. Los cloroplastos son los principales rganos indicadores de los daos ocasionadospor el plomo sobre el proceso metablico de la fotosntesis. Plantas de Ceratophyllum demersum crecidas en

47

medio acutico con Pb (NO3)2 mostraron distintos cambios en la ultraestructura de los cloroplastos (Rebechini y Hanzely, 1974). Las clulas de las hojas de tales plantas exhibieron reduccin de apilamientos de granas junto con una reduccin en la cantidad de estroma en relacin con la del sistema lamelar. Tambin exhibieron ausencia de granos de almidn. El tratamiento con plomo tambin cambi la composicin lipdica de las membranas tilacoidales en hojas de Zea mays L. (Stefanov et al., 199 Tabla 11. Inhibicin (-) o incremento (+) de la actividad enzimtica en plantas tratadas con Plomo

PROCESOS METALICOS Sntesis de Clorofila Fijacin de CO2

ENZIMAS

ESPECIES VEGETALES Pennisetum typhoideum Avena sativa

Alfa-amino levulinato dehidrogenasa Ribulosa-1,5 bis fosfato Fosfoenol piruvato Carboxilasa Gliceraldheido 3fosfato dehidrogenasa Ribulosa 5 fosfato kinasa Glucosa 6-fosfato dehidrogenasa Nitrato reductasa Glutamina sintetasa Deoxyribonucleasa Ribonucleasa

EFECTO DEL PLOMO (-) (-)

REFERENCIAS

Prassad & Prassad (1987) Moustakas et al (1994)

Zea mays Spinach oleracea

(-) (-)

Vojtechova & Leblova (1991) Vallee & Ulmer (1972)

Ciclo de Calvin

Spinach oleracea Spinach oleracea Cucumis sativus Glicine max Hydrilla verticillata Hydrilla verticillata Hydrilla verticillata Hydrilla verticillata Glycine max Oryza sativa (-) (-) (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (-) Vallee & Ulmer (1972) Vallee & Ulmer (1972) Burzynski (1984) Lee et al (1976) Jana & Choudhary (1982) Jana & Choudhary (1982) Jana & Choudhari (1982) Jana & Choudhari (1982) Lee et al (1976) Mukherji & Maitra (1977)

Va Pentosa fosfato Asimilacin de Nitrgeno Enzimas Nucleoliticas

Hidrlisis de Protenas Fosfohidrolasa

Proteasa Alcalina fosfatasa Acido fosfatasa a-amilasa

Metabolismo glucosa Generacin energa

de

de

ATP sintetasa ATPasa

Zea mays Zea mays Oriza sativa Glicine max Pkaseolus aureus Oryza sativa Oryza sativa Oryza sativa

(-) (-) (-) (+) (+) (+) (+)

Tu Shu & Brouillette (1987) Tu Shu & Brouillette (1987) Verna & Dubey (2003) Lee et al ( 1976) Rashid & Mukherjee (1991) Verna & Dubey (2003) Verna & Dubey (2003) Verna & Dubey (2003)

Metabolismo antioxidativo

Catalasa Guaiacol peroxidasa Ascorbato oxidasa Ascorbato peroxidasa Glutatin reductasa Superoxido dismutasa

48

Fuente: Sharma y Dubey ( 2005)

El plomo perjudica la absorcin de elementos esenciales tales como hierro y magnesio en plantas de pepino y, como consecuencia, inhibe la sntesis de clorofila (Burzynski, 1987). Estos daos de los aparatos fotosintticos son debido a la afinidad del plomo por ligandos de protenas N- y S(Ahmed y Tajmir-Riahi, 1993). Asimismo se ha observado degradacin de la clorofila debido al incremento de la actividad clorofilasa (Drazkiewicz, 1994). Tambin se ha hallado que la clorofila b es ms afectada que la clorofila a por tratamiento con plomo en abetos de Noruega (Vodnik et al., 1999). Acerca del efecto sobre la obstruccin del transporte de electrones (Rashid et al., 1994) se sabe que el plomo afecta el sitio donador y el sitio receptor del fotosistema II (PS II), el complejo citocromo b/f y el fotosistema I (PS I). Esto ha sido en su mayor parte aceptado ya que la inhibicin del transporte de electrones del PS I es ms sensible que la del PS II en cloroplastos de espinaca (Mohanty et al., 1989; Sersen et al., 1998). El plomo tambin causa una fuerte disociacin del polipptido extrnseco del complejo disociador de oxigeno del PS II originando desplazamiento de Ca, Cl- y Mn desde este sitio donador del PSII (Rashid et al., 1991). Esto hace proponer que los cambios conformacionales de las LHC II (Light Harvesting Complexes) subunidades fundamentales del PSII, conllevan al no ensamblaje de los componentes redox, de los cofactores y de las protenas extrnsecas, conduciendo a la degradacin de las subunidades PSII (Ahmed y Tajmir-Riahi, 1993). En suma, el plomo in vitro altera los complejos protena-pigmento responsables de la absorcin de la radiacin incidente. Retomando esta ltima anotacin Sarvari et al. (2002) probaron concentraciones de plomo en el desarrollo del tilacoide de pepino y lamo, y observaron incremento del contenido de clorofila en las LHC II a bajas concentraciones de plomo, mientras que a una concentracin de 50 m M de plomo el nivel de clorofila decreci en las plantas. Este hecho ha sido comprobado nuevamente en segmentos de hojas de Pisum sativum tratados a 50 mM Pb por Sengar y Pandey, 1996. Consecuentemente, el nivel de concentracin de plomo dentro de la hoja puede incidir directamente en la sntesis de clorofila. Para limitar la descripcin sobre los mltiples efectos del plomo en el proceso fotosinttico existen otras hiptesis importantes para cerrar el tema, como la de Bazzaz et al., (1975) quien considera que el decrecimiento de la fotosntesis en maz es el resultado del cierre estomtico. Hiptesis respaldada por Kosobrukhov et al., (2004) quienes consideran que la actividad fotosinttica es gobernada por factores como el tamao de la clula estomtica, el nmero de estomas, la conductancia estomtica y el rea foliar. 3.7.3. Efectos sobre la respiracin y contenido en ATP Con el objeto de determinar los efectos sobre la respiracin se han realizado experimentos in vitro con preparaciones de mitocondrias de clulas vegetales de Nicotiana tobacum L. var. Xanth

49

encontrndose que la tasa de respiracin disminuye cuando se incrementan las concentraciones de plomo aplicadas (Reese y Roberts, 1985). Adems de las mitocondrias se han aislado cloroplastos de diferentes especies de plantas para mostrar que el plomo afecta el flujo de electrones va el sistema de transporte de electrones (Miles et al., 1972; Bazzaz y Govindjee, 1974). De este modo, parece ser que el Pb a elevadas concentraciones ocasiona desacoplamiento de la fosforilacin oxidativa (Miller et al., 1973; Koepfe, 1977; Ernst, 1980), mayor oxidacin de sustratos (glicina, succinato, malato), incremento de la demanda de ATP como de ATP / ADP e incremento de la actividad de NAD+malatodeshidrogenasa a altas concentraciones (Romanowska et al., 2002), y por el contrario, se estimula la respiracin a bajas concentraciones (Lee et al., 1976), lo cual ha sido demostrado en hojas cortadas (Lamoreaux y Chaney, 1978), en protoplastos aislados (Parys et al., 1998) y en mitocondrias (Koeppe y Miller, 1970). En relacin con los enzimas fotorrespiratorios el mecanismo sobre la estimulacin de la respiracin por plomo an no est claro. Se plantean varias incongruencias; una de stas es que se inhibe la actividad cloroplstica de la ATP sintetasa /ATPasa (Tu Shu y Brouillette, 1987) y no se afectan otros enzimas como NADH-hidroxipiruvato reductasa, glicolato oxidasa y el enzima NAD-mlico (Romanowska et al., 2002) bajo exposicin a plomo. Aunque la sensibilidad de la fotofosforilacin a los iones de los metales pesados est bien documentada, no hay un acuerdo general sobre el sitio de accin ni sobre el mecanismo sealado. Solamente algunos experimentos pueden sugerir diferentes mecanismos existentes para la accin de los iones de los metales pesados sobre la actividad ATPasa cloroplstica cuando estos iones metlicos son aplicados bajo condiciones in vivo o in vitro. 3.7.4. Efectos sobre la absorcin de nutrientes Muchas de las acciones atribuidas al plomo parecen ser indirectas como un resultado del desequilibrio mineral dentro de los tejidos. As, se sabe que altas concentraciones de plomo en el suelo causan desequilibrio en las proporciones de nutrientes minerales dentro de los tejidos de las plantas en crecimiento. Cambios significativos se han observado tanto en los contenidos de nutrientes como en las proporciones internas de nutrientes en plantas bajo la toxicidad con plomo (Kabata-Pendias y + +2 +2, Pendias, 1992). En la mayora de los casos, el plomo bloquea la entrada de cationes (K , Ca , Mg +2 +2 +2 +3 3Mn , Zn , Cu , Fe ) y aniones (NO ) en el sistema radicular. Hasta el momento, los mecanismos sugeridos para regular la entrada de micro- y macronutrientes bajo toxicidad por plomo consisten en el mecanismo fsico y qumico. El primer mecanismo, se relaciona con el tamao de los radios inicos del metal, que pueden actuar bloqueando el acceso de muchos iones en los sitios de absorcin de las races (Godbold y Kettner, 1991). Aunque tanto el contenido de plomo en la punta como en la base de la raz pueden parecer similares, el plomo altera los niveles de elementos minerales en las mismas. En las puntas de +2 +3 +2 la raz los niveles de Ca , Fe y Zn decrecen despus de la exposicin a Pb. En el abeto noruego, despus de aplicar plomo se presenta la inhibicin del crecimiento de la raz que puede ser debido a +2 +2 una disminucin de los niveles de Ca , puesto que en las puntas de la raz un 40 % del Ca absorbido es usado para su crecimiento, de forma que pueden decrecer la divisin o la elongacin +2 celular (Haussling et al., 1988). Concomitantemente, en agujas de abeto noruego los niveles de Ca y

50

Mn decrecen con el tratamiento con plomo, lo cual no puede ser un resultado del decrecimiento en el nmero de las puntas de raz y de los sitios destinados para el flujo de solutos apoplstico a travs de la endodermis. Al valorar el nivel de manganeso bajo condiciones de tratamiento con plomo, se observ una disminucin del mismo en agujas de Picea abies (Sieghardt, 1988). En plantas de Cucumis sativa el +2 +2 +3 3 +2 plomo disminuye la absorcin de K+, Ca , Mg , Fe y NO y, en Zea mays la absorcin de Ca , +2 + Mg , K y P (Walker et al., 1977). El plomo influye en la distribucin total de los elementos nutritivos dentro de los diferentes rganos de la planta. Ya que, la distribucin total de Mn y S cambi a favor de la raz por encima de la parte area bajo condiciones de toxicidad con plomo, lo cualrepresenta retencin de estos iones en la raz. Con respecto al contenido de fsforo, en Pisum sativum siempre se han hallado correlaciones negativas con el contenido de plomo en el suelo, y tambin se ha detectado que la actividad fitasa es afectada por el contenido de plomo (Paivoke, 2002). En relacin con el nitrgeno sucede que el contenido de nitrgeno en la raz es significativamente reducido bajo toxicidad por plomo. La absorcin de nitrato declina en plantas de pepino expuestas a plomo con una concomitante bajada de la actividad nitrato reductasa NR y afecta el metabolismo del nitrgeno. El descenso de la absorcin de nitrato debido al plomo puede ser como resultado del estrs hdrico creado por el plomo (Burzynski y Gabrowski, 1984). En ciertas especies como Pisum sativum, incrementa el contenido de nitrgeno de races bajo tratamiento con plomo a una concentracin de 2 mmol kg -1 de suelo, lo cual probablemente ocurre debido a efectos inhibitorios de plomo sobre la actividad nitratoreductasa (Paivoke, 2002). El segundo mecanismo sugerido para explicar la disminucin de la absorcin de micro y macronutrientes bajo toxicidad con plomo se relaciona con el desorden que induce el plomo en el metabolismo celular causando cambios en las actividades enzimticas de la membrana y en la estructura de la membrana. Aparentemente, un ejemplo puede ser el eflujo de K+ desde las races, el cual es debido a la extrema sensibilidad de la ATPasa y de los grupos .SH de las protenas de la membrana celular hacia el plomo. 3.7.5 Efectos sobre las relaciones hdricas. Una disminucin en la tasa de transpiracin y en el contenido hdrico de los tejidos ocurre en plantas crecidas bajo exposicin con plomo. Varios mecanismos se han sugerido para comprender cmo el plomo induce estos efectos. Inicialmente, el plomo retarda el crecimiento dando como resultado una reducida rea foliar, y por consiguiente una desventaja para los rganos con mayor transpiracin en las plantas, las hojas . As, se ha observado que las clulas guarda generalmente presentan un tamao menor al ser tratadas con plomo. El plomo baja el nivel de componentes que estn asociados con el mantenimiento de la turgencia celular y de la plasticidad de la pared celular. De esta forma, baja elpotencial hdrico dentro de la clula. Los iones metlicos, incluyendo el plomo, incrementan el contenido en ABA e inducen el cierre estomtico. Desordenes en la respiracin y en la fosforilacin oxidativa observados bajo toxicidad con plomo tambin pueden causar desajustes en el rgimen hdrico. As, experimentos con fragmentos de epidermis flotando en solucin con plomo han mostrado que el

+2

51

plomo induce el cierre de estomas (Bazzaz et al., 1974). Experimentos con hojas separadas de maz y soja han indicado que los metales incrementan la resistencia estomtica no nicamente cuando se aplican directamente a clulas guarda o clulas epidrmicas sino tambin cuando stos alcanzan los conductos del xilema (Bazzaz et al., 1974). Una hiptesis unificada con respecto al cierre estomtico inducido por plomo indica que tal efecto es + debido a la inhibicin de un sistema de energa o debido a alteraciones de flujos de K a travs de las membranas (Bazzaz et al., 1974). 8. Tolerancia al plomo 8.1. Metabolismo oxidativo Uno de los efectos del plomo consiste en la induccin del estrs oxidativo en partes de plantas en crecimiento debido a un aumento de la produccin de Especies Reactivas del Oxgeno (ROS) provocando un desequilibrio del estado redox celular. Un nmero de diferentes ROS: el anin superxido (O ), oxgeno singlete (1O2), perxido de hidrgeno (H2O2) y el radical hidrfilo (.OH) son producidos durante el metabolismo normal oxidativo en organismos aerbicos, pero estas ROS pueden ser severas cuando se producen elevadas cantidades, puesto que aunque algunas ROS pueden funcionar como importantes seales moleculares alterando la expresin gnica y modulando la actividad de protenas especficas de defensa. Todas las ROS pueden ser extremadamente dainas para los organismos a altas concentraciones. El plomo induce la produccin de ROS dentro de las plantas y sta depende de la intensidad del estrs, perodos repetitivos de estrs, tipo de especie y edad de la planta (Asada, 1994; Chaitnya y Naithani, 1999; Verma y Dubey, 2003). La peroxidacin de lpidos, la cual es conocida como un indicador de dao oxidativo, involucra la degradacin oxidativa de residuos acil grasos poliinsaturados de membrana (Girroti, 1990). Los iones de plomo inducen la peroxidacin lipdica, por lotanto decrece el nivel de cidos grasos saturados e incrementa el nivel de cidos grasos insaturados de membrana en varias especies de plantas (Halliwell y Gutteridge, 1999). Aunque la generacin de ROS es suave bajo condiciones normales, el plomo acelera este proceso (Verma y Dubey, 2003). En el estudio de caso de Oryza sativa se han expuesto a 500 y 1000 M Pb (NO3)2 en un medio con arena. Durante un perodo de 5 a 20 das se ha incrementado el nivel de lpidoperoxidasas del 21 al 177 %, indicando que el plomo induce estrs oxidativo en estas plantas (Verma y Dubey, 2003). 3.8.2. Mecanismos de proteccin vegetal Existe un amplio rango de mecanismos de proteccin en las clulas vegetales que sirven para eliminar las especies reactivas de oxgeno (ROS) antes de que puedan daar partes sensibles de la maquinaria celular. Es conveniente dividir estos mecanismos en dos grupos, estos son, antioxidantes-no-enzimticos tales como tocoferoles, carotenoides, componentes del cido ascrbico (AsA) y glutatin (GSH), incluyendo sus formas oxidadas, -el cido dehidroascrbico (DHA) y GSSG y, antioxidantes enzimticos tales como catalasa, peroxidasas y superxido dismutasas (SOD)- adems de los enzimas del ciclo ascorbato.glutatin, tales como: ascorbato peroxidasa (APX),
2-

52

monodehidroascorbato reductasa (MDHAR), dehidroascorbato reductasa (DHAR) y glutatin reductasa (GR) dependiente de NADPH (Verma y Dubey, 2003) . Este mecanismo funciona con la base qumica del Ciclo Haber Weiss y el mecanismo Fenton, los 2cuales generan H2O2 y radicales hidrxilo (-OH) desde el anion superxido O . El plomo no es un metal oxido-reductor como el hierro. Por eso el estrs oxidativo parece ser un efecto indirecto de la toxicidad del plomo llevando a produccin de ROS, aumentando el estado pro-oxidante de la clula por reduccin de las molculas de glutatin reducido (GSH), activando sistemas calcio.dependientes y afectando los procesos mediados por el hierro (Pinto et al., 2003). Entre los enzimas antioxidantes, se encuentra la catalasa, que descompone H2O2 produciendo agua y oxgeno. Se ha observado disminucin en la actividad catalasa sobretodo en dos isoenzimas de la catalasa en la parte area de plantas tratadas con plomo (Verma y Dubey, 2003). Estas isoformas estn controladas por diferentes genes (Frugoli et al., 1996). Tal disminucin parece ser debida a una menor sntesis de enzimao a un cambio en el ensamblaje de subunidades enzimticas (Hertwig, 1992). La toxicidad por plomo induce la actividad peroxidasa en plantas de soja, arroz, etc. (Lee et al., 1976; Verma y Dubey, 2003). Este enzima ha sido ampliamente aceptado como un enzima de estrs en plantas (Gaspar, 1982; Subhashini y Reddy, 1990), y se cree que el incremento de su actividad se debe a la liberacin de peroxidasa localizada en la pared celular (Gaspar, 1982). La actividad superxido dismutasa (SOD) se ha detectado en plantas de Lupenus lutius y O. sativa (Przymusinski et al., 1995; Verma y Dubey, 2003). El incremento de la SOD en respuesta a la presencia de plomo es debido a la sntesis de novo de protena enzimtica (Lozano et al,. 1996). El estrs por plomo en plantas de arroz tambin se manifiesta como un incremento de la actividad de la APX y de la GR (Verma y Dubey, 2003). Aunque la APX es considerada el enzima clave del mecanismo de defensa antioxidativo (Sharma y Dubey, 2004) porque condiciona la concentracin 2celular de O y H2O2, parece ser que dos enzimas (SOD y GR) combaten los daos ocasionados por el estrs oxidativo inducido por el plomo en plantas de arroz (Verma y Dubey, 2003). Bajo la toxicidad con plomo tambin se incrementa la actividad GR cuya funcin de defensa es reciclar glutatin oxidado para reducirlo a glutatin (GSH/GSSG) y a glutatin total (Foyer et al., 1997). El incremento en la actividad GR bajo estrs ha sido atribuido a sntesis de novo del enzima (Baisak et al., 1994). 3.8.3. Mecanismos de tolerancia al plomo Baker (1981) ha sugerido dos estrategias bsicas relacionadas con la absorcin del metal y la tolerancia de las clulas vegetales. Las respuestas celulares al estrs txico son tolerancia por exclusin y tolerancia por acumulacin. La estrategia por exclusin consiste en el mantenimiento de niveles bajos y constantes del metal en el suelo, y se mantiene hasta que las concentraciones en el mismo alcanzan niveles crticos a partir de los cuales no pueden ser mantenidos y se produce toxicidad. Por otra parte, la tolerancia por acumulacin consiste en concentrar el metal activamente dentro de los tejidos vegetales,

53

implicando procesos fisiolgicos altamente especializados. En este sentido, Berry W.L. (1986) sugiri tres estrategias bsicas de respuesta: evitacin, detoxificacin y tolerancia bioqumica, cada una de lascuales afecta las concentraciones del metal en los tejidos en diferentes formas. La tolerancia por exclusin esta relacionada con la capacidad de las plantas para transportar oxgeno y perder radicales de oxgeno por las races resultando en una gran habilidad para modificar la rizosfera e inmovilizar metales en la msma. Estas observaciones se han deducido colectivamente en Typha latifolia por Ye et al., 1997, quienes sostienen que Typha latifolia es una planta que puede colonizar tanto reas contaminadas con plomo como no contaminadas con plomo, y que, por lo tanto, sirve como indicador biolgico de investigacin. As, se ha encontrado que sus hojas pueden mantener bajas las concentraciones de plomo bajo estrs con plomo. Un aspecto importante de la tolerancia por exclusin se ha encontrado en las races de arroz, donde se sintetiza oxalato por oxidacin de glicolato para obtener glioxilato y luego oxidacin de glioxilato para obtener oxalato. As, pues, las variedades tolerantes de arroz autorregulan la sntesis y secrecin de oxalato, un compuesto que precipita el plomo y reduce su absorcin por las races (Yang et al., 2000). Tambin se ha observado que los grupos .COO del cido urnico del muclago se unen al plomo restringiendo su entrada a la raz (Morel et al., 1986). Por otro lado, la fuerte unin del plomo a los grupos carboxilo de los carbohidratos de la pared celular disminuye el transporte por va apoplstica (Rudakova et al., 1988). Este mecanismo de tolerancia se presenta en Anthoxanthum odoratum, ya que la observacin de las puntas de raz mediante microscopa electrnica revel la presencia de plomo tanto en la pared celular como en el citoplasma. As, se sugiere que el mecanismo de tolerancia de esta planta est asociado con la capacidad de restringir la localizacin del plomo en la pared celular (Qureshi et al., 1986). Dentro de la clula, la mayor parte de plomo es secuestrado en la vacuola en forma de complejos. Esto puede representar otro mecanismo de detoxificacin de plomo en plantas. Por ejemplo, la pinocitocis es observada en clulas foliares de muchas plantas tratadas con sales de plomo en solucin debido a estas vesculas pinocticas, las partculas de plomo pueden ser descargadas dentro de la vacuola (Wierzbica y Antosiewicz, 1993). La acumulacin total de un exceso de aminocidos en respuesta al plomo puede ser conocida como una importante respuesta adaptativa de las plantas para evitar la toxicidad al plomo. Varios trabajos han enfatizado la importancia de la sntesis decompuestos quelantes del metal tales como aminocidos afines a la prolina para evitar la toxicidad de metales pesados (Alia y Saradhi, 1991). En estudios de toxicidad por Cu en Silene armeria se ha considerado que prolina y glicina pueden estar implicadas en la detoxificacin del Cu en races (Barcel et al. 2005). Plantas expuestas a plomo y otros metales pesados altamente contaminantes como Cd, Zn, Cu, Hg sintetizan cistena y polipptidos de bajo peso molecular llamados fitoquelatinas (Cobbet, 2000). Las fitoquelatinas (PCs) forman una familia de estructuras repetitivas del dipptido -Glu-Cis seguidos por una estructura terminal Gli; (-Glu-Cis) n-Gli, donde n alcanza un valor mximo de 11, pero generalmente se sita en el rango de 2 a 5 (Zenzk, 1996). En muchas especies se ha demostrado que los metales Cd y Pb, se unen a las fitoquelatinas despus de inducir su produccin (Grill et al., 1987). Adems, la capacidad de unin de las fitoquelatinas a los diferentes metales difiere, ya que

54

compuestos de Cd se unen con ms fuerza a las PCs que los del Pb, debido a que ste ltimo presenta un radio inico de conformacin octahedral y tiene un nmero de coordinacin alto (Pb, 6 . 8). La induccin de las PCs se ha demostrado en cultivos de Rauwolfia serpentina a las que se aadi 1 mM Pb a su medio. Tal sntesis fue acompaada por una disminucin del glutatin celular total (Grill et al., 1987). Estos resultados reforzaron la creencia con respecto a que la sntesis de fitoquelatinas parte del glutatin y que tal sntesis es debida a la transpeptidacin de dipptidos de -glutamil cisteinil desde glutatin por la accin de una enzima constitutiva presente, la PC sintetasa (Chen et al., 1997). Las uniones entre fitoquelatinas y los iones de plomo llevan al secuestro de iones plomo en plantas y de esta forma sirve como un importante componente que favorece el mecanismo de detoxificacin en vegetales. Adems de las estrategas vegetales de tolerancia por exclusin y por acumulacin, se ha de tener en cuenta otros sistemas de defensa no-especficos que se manifiestan cuando las plantas sufren estrs por plomo. Estos sistemas de defensa no-especficos incluyen sntesis de substancias osmticamente activas (prolina) y poliaminas (putrescina), antioxidantes, aminocidos, cambios en la composicin qumica de la pared celular (deposicin de callosa y suberina), y cambios en el balance hormonal, principalmente sobre el etileno y ABA (Seregin e Ivanov, 2001). Hay diferentes opiniones sobre los mecanismos de defensa no especficos medianteel cual las sustancias osmticamente activas como la prolina alivian los efectos de la toxicidad del metal dentro de la clula. Paleg et al., (1984) han demostrado que la prolina libre acta como osmoprotectora; Sharma y Dubey (2004), como protena estabilizadora (Farago y Mullen, 1979), como quelante del metal; (Mehta y Gaur, 1999), como inhibidor de la peroxidacin lipdica (Alia et al,. 2001) o como un radical libre reciclador o como un productor de oxgeno singlete. 3.9. Remediacin de suelos contaminados con plomo La remediacin de suelos contaminados con plomo representa un significativo desafi para muchas industrias e instituciones gubernamentales. Hasta la fecha las reas contaminados con plomo han sido remediadas con una amplia gama de tcnicas basadas en la ingeniera (Salt et al., 1995).Los suelos excesivamente contaminados inicialmente son excavados, estabilizados con cemento y luego localizados en terrenos seguros. Este proceso es costoso y requiere lugares de restauracin adicionales a los terrenos de partida. Desde hace unos aos el concepto de usar plantas para remediar la contaminacin de los suelos ocasionada por los metales pesados, denominado fitorremediacin, ha recibido gran atencin (Raskin et al., 1994; Vassil et al., 1998; Jarvis y Leung, 2002; Barcel, 2003; Barcel y Poschenrieder, 2003). La fitorremediacin puede involucrar dos procesos: fitoestabilizacin y fitoextraccin. La fitoestabilizacin reduce a niveles constantes la contaminacin del suelo o la biodisponibilidad del metal pesado, mientras que, la fitoextraccin usa plantas para extraer el contaminante del suelo. El concepto de usar plantas para acumular metal para su posterior procesado es tcnica y econmicamente atractivo.

55

Por razones prcticas, la concentracin de plomo en la parte area es el parmetro fisiolgico ms importante para evaluar el potencial de fitoextraccin de plomo de las plantas (Huang y Cunningham, 1996). Esto es debido a que la acumulacin de plomo en races es significativamente superior que en la parte area, posiblemente debido a la baja translocacin de plomo desde las races hacia la parte area (Cunningham et al., 1995; Verma y Dubey, 2003). Sin embargo en Thlaspi rotundifolium, se ha encontrado una alta acumulacin de plomo en la parte area en relacin con la raz, ya que acumula entre 130 y 8200 mg Pb.kg-1 de peso seco de la parte area (Reeves y Brooks, 1983). Por lo tanto algunas especies vegetales tienen la capacidad de translocar plomo con mayor eficiencia que otras. A razn de que su crecimiento es lento y su biomasa es pequea, no obstante, estas especies no son candidatos vegetales ideales para hacer fitoextraccin de plomo de suelos contaminados. En algunos cultivos de Brassica juncea se ha determinado una acumulacin tan alta como el 1.5 % de Pb en la parte area cuando crece en solucin nutritiva con 760 M Pb (Kumar et al,. 1995). Sin embargo, un ao despus se observ que la concentracin de plomo en la parte area de maz era ms alta que la acumulada por el mejor cultivo acumulador de plomo cuando las plantas fueron crecidas sobre un suelo contaminado con plomo (Huang y Cunningham, 1996). Los resultados de experimentos de quelacin indicaron que la concentracin de plomo en la parte area puede ser incrementada dramticamente cuando la concentracin de plomo en el suelo es incrementada por la adicin de un quelante sinttico al suelo contaminado. Es decir, el uso de quelantes en el suelo puede favorecer la toxicidad del plomo. El quelante sinttico EDTA forma un complejo soluble con muchos metales, incluyendo plomo (Kroschwitz, 1995) y puede solubilizar plomo desde partculas del suelo (Vassil et al., 1998). La aplicacin de EDTA a suelos contaminados ha mostrado que la absorcin por plantas causa que el plomo se acumule por encima del 1% (p/p) de la biomasa seca de la parte area (Huang y Cunningham, 1996; Huang et al., 1997). Las grandes partculas de Pb no pueden cruzar fcilmente la banda de Caspari debido a su tamao y a sus cargas caractersticas, pero una vez forman un complejo con tales quelantes, como EDTA, su solubilidad incrementa y el tamao de la partcula decrece haciendo creer que son parcialmente .invisibles. hacia aquellos procesos que normalmente deberan prevenir su movimiento sin restriccin tal como precipitacin con fosfatos y carbonatos o uniones a la pared celular mediante el mecanismo de intercambio catinico (Jarvis y Leung, 2002). El mecanismo por el cual los solutos se mueven simplsticamente se ha considerado como un tipo de transporte que utiliza una molcula de alta selectividad, que se opone a la difusin facilitada (Raven et al., 1999). Aunque es claro que este mecanismo no involucra el transporte de plomo, y que el movimiento de partculas cargadas de plomo a travs de esta va podran ser impedidas por su extensin, parecer ser que el complejo plomo-quelante facilita su transporte va simplasto pudiendo pasar por esta vasucesivamente. Como punto final es importante controlar el uso y manejo de quelantes aadidos a los suelos, ya que el plomo acomplejado se moviliza dentro de las partculas del agua y se facilita su migracin a otros medios en el ambiente. (Huang y Cunningham, 1996). Otra tecnologa limpia prometedora es la rizofiltracin para eliminar contaminantes tales como metales pesados de aguas contaminadas utilizando races de plantas (Dushenkov et al., 1995). Basndose en este planteamiento, Tung y Temple (1996) determinaron la deposicin de plomo en las puntas de las races de maz mediante estudios de microscopa electrnica e histoqumica

56

realizados en plantas incubadas en un medio con 0.66 mM Pb durante 19 das. Estos autores observaron una fuerte deposicin tanto en la superficie como en los tejidos internos dentro de los 2 primeros milmetros de la raz principal y de las races secundarias. Malkowski et al., (2002) tambin han encontrado mayor acumulacin de plomo en las puntas de las races de Zea mays L., en las puntas de las races se hall una concentracin de Pb de 138,430 mg Kg-1 en comparacin con la acumulacin en la parte basal de la raz de 26,833 mg Pb.Kg-1. A partir de las anteriores investigaciones, se deduce que de todo el sistema radicular, aproximadamente el 50 % del plomo es acumulado en los primeros 8 mm de la parte apical de la raz, y a su vez, que los sistemas radiculares con mayor ramificacin pueden absorber ms cantidad de plomo u otros metales pesados, a diferencia de plantas que tienen races largas y sistemas radiculares poco ramificados. Actualmente se est avanzando en el conocimiento y desarrollo de la investigacin en tecnologas como la fitoremediacin y rizofiltracin, ya que parecen ser tecnologas de futuro con un gran potencial para limpiar los suelos contaminados con plomo y otros metales pesados.

57

IV. Otros Metales

4.1 Cromo. El Cr puede presentarse en varios estados de valencia, los ms comunes e importantes son: Cr metlico (valencia 0), Cr trivalente (Cr III) y Cr hexavalente (Cr VI). El Cr trivalente comnmente est en la naturaleza y es un nutriente esencial para el ser humano ya que estimula la accin de la insulina en los tejidos. No se ha informado que el Cr como metal puro presente efectos txicos al ambiente o al ser humano. La toxicidad aguda y crnica por Cr es causada principalmente por los compuestos de Cr hexavalente (Cunat, 2002), siendo sta la forma ms disponible, pero inestable en el suelo, para la absorcin por las plantas. No existe evidencia que el Cr sea un elemento esencial para el metabolismo de las plantas.

La mayora de los suelos contienen cantidades significativas de Cr, pero su disponibilidad para las plantas es limitada. Los suelos ricos en serpentina y los desechos de curtiembre tienen una concentracin alta de Cr (III), sin embargo, el Cr (VI) es la forma ms biodisponible (pero inestable) para las plantas en el suelo. Los cambios de pH y los exudados radicales pueden influenciar el estado de oxidacin del Cr y con esto aumentar o disminuir la cantidad de Cr disponible para las plantas (James, 2002). El Cr (VI) aumenta su solubilidad en rangos de pH bajo 5,5 y sobre 8. James y Bartlett (1984), observaron que la reduccin del Cr(VI), seguida de la complejacin del recin formado Cr (III), en la zona radical, puede aumentar la absorcin y traslocacin de Cr en races y tallos de poroto (Phaseolus sp.) y maz (Zea mays L.). Los cidos carboxlicos tambin incrementan la absorcin de Cr en tomate y maz. La Tabla12 muestra contenidos de cromo en plantas de consumo directo y en forraje. En las plantas generalmente se observa un contenido de cromo mayor en las races que en las hojas y tallos, mientras que la concentracin ms baja est en los granos (James, 2002). 4.2 Manganeso El Mn es un elemento muy comn en la corteza terrestre, generalmente se presenta en el suelo como xido e hidrxido, formando concreciones junto a otros elementos metlicos. El Mn es esencial en la nutricin de las plantas, es requerido en el fotosistema II y en la activacin de algunas enzimas (Mahler, 2003). Aparentemente la absorcin de Mn es mediante transporte activo de manera similar a la absorcin de otros cationes divalentes como Mg y Ca . Sin embargo, cuando el metal se encuentra en alta concentracin en la solucin del suelo puede ocurrir absorcin pasiva (Kabata Pendias, 2000). Cuando la disponibilidad de Mn es elevada en el suelo (suelos mal drenados, de pH menor a 5,5 o mayor a 8) el Mn es rpidamente traslocado dentro de la planta a otros rganos, por lo que es probable que en los tejidos de la raz y el xilema no se encuentre ligado a molculas orgnicas insolubles sino ms bien en formas catinicas libres, siendo traslocado
2+ 2+

58

principalmente a los tejidos meristemticos. En la Tabla 13 muestra algunos contenidos de manganeso en vegetales de consumo.

Tabla 12. Rango y contenido medio de Cr en plantas de consumo directo y forraje (Modificado de Kabata - Pendias, 2000).

4.3 Nquel El Ni es un elemento esencial para el metabolismo de las plantas, aun cuando stas requieren menos de 0,001 mg kg de peso seco (Mahler, 2003). En la corteza terrestre existe una similitud entre la distribucin de Ni, Co y Fe. El Ni presenta afinidad con Fe y S, pero tambin con carbonatos, fosfatos, silicatos y xidos de Fe y Mn. En los horizontes superficiales del suelo, el Ni aparece ligado a formas orgnicas, parte de las cuales pueden encontrarse en quelatos fcilmente solubles. Sin
-1

59

embargo, la fraccin ms soluble a las plantas parece ser la asociada a los xidos de Fe y Mn. Generalmente, la solubilidad del Ni se encuentra inversamente relacionada con el pH del suelo. El Ni vara en el suelo en un amplio rango de 0,2 a 450 mg kg , pero los valores tpicos totales en los suelos del mundo varan entre 5 y 22 mg kg . El Ni es un elemento mvil en la planta, y se acumula preferentemente en hojas y semillas (Halstead et al., 1969). Aun cuando los sntomas de la exposicin a altas concentraciones de Ni varan entre especies, es comn que se produzca clorosis.
-1 -1

Tabla 13. Rango y contenido medio de Mn en vegetales de consumo (Modificado de Kabata Pendias, 2000).

60

La Tabla 14 muestra rangos y contenido medio de Ni en vegetales de consumo. Tabla 14. Rango y contenido medio de Ni en vegetales de consumo (Kabata Pendias, 2000)

61

4.4 Cobre En el suelo los iones de Cu presentan una alta afinidad para formar complejos con la materia orgnica. De esta forma, es frecuente que la materia orgnica del suelo sea el factor ms importante en determinar la biodisponibilidad del Cu (del Castilho et al., 1993). El rango de pH de mayor disponibilidad de Cu en el suelo vara entre 4,5 y 7. Los mecanismos de absorcin de Cu por las plantas aun no estn del todo claros, ya que se ha observado una probable absorcin pasiva de Cu, especialmente cuando la concentracin de la solucin en que crecen las plantas est en el rango txico del metal, aun cuando existen numerosas

62

evidencias respecto a su absorcin activa (Kabata Pendias, 2000). En los tejidos de la raz, el Cu se encuentra casi completamente en formas complejas, sin embargo, es muy probable que el metal ingrese a las clulas de las races en formas disociadas y a tasas diferentes segn la especie del metal. Se ha observado una alta capacidad de los tejidos de las races para almacenar Cu tanto en condiciones de deficiencia como de exceso de Cu en el medio. En la savia xilemtca de las plantas el Cu se encuentra casi un 100% ligado a aminocidos, aun bajo condiciones de suplemento excesivo de Cu (Liao et al., 2000a; Liao et al., 2000b). Esto sugiere que aun bajo condiciones de toxicidad de Cu, las plantas lo complejan, minimizando el dao potencial de altas concentraciones de iones libres de Cu (Welch, 1995). El Cu tiene una movilidad relativamente baja respecto a otros elementos en las plantas, permaneciendo en los tejidos de las races y hojas hasta su senescencia. De esta forma, los rganos jvenes generalmente son los primeros en desarrollar sntomas de deficiencia de Cu. La movilidad del Cu dentro de los tejidos de las plantas depende directamente del nivel de Cu en el substrato. La acumulacin de Cu en rganos reproductivos vara ampliamente con la especie. Las mayores concentraciones de Cu en rganos reproductores se han encontrado en el embrin y la cubierta seminal de granos de cereales. Prez et al. (2004) sealan que la relacin (metal en grano y en hoja)/ (metal cambiable en suelo) decrece en orden Zn>>Cu>>Pb>Cd, siendo los valores ms altos para hojas, que para granos. En trigo (Triticum aestivum) excesos de Cu reducen el transporte de Zn en el floema debido a que Cu y Zn compiten por los mismos sitios de transporte (Pearson et al., 1996). La Tabla 15 (Kabata Pendias, 2000) muestra rangos y contenido medio de Cu en vegetales de consumo. 4.5 Cinc El Zn es un elemento esencial a las plantas, participa en varios procesos metablicos y es un componente de varias enzimas. El contenido medio de Zn en la superficie de los suelos de diferentes pases vara de 17 a 125 mg kg . La adsorcin y desorcin de Zn en el suelo se encuentra vinculada a los coloides orgnicos e inorgnicos. Existen dos mecanismos en la adsorcin de Zn, uno en medio cido relacionado con los sitios deintercambio catinico, y otro, en medio alcalino asociado con la quimisorcin que es influenciada por ligandos orgnicos. La movilizacin y lixiviacin del Zn es mayor en suelos ligeramente cidos al aumentar la competencia con otros cationes por los sitios de intercambio. La solubilidad y disponibilidad de Zn se correlaciona negativamente con la saturacin de Ca y compuestos fosforados presentes en el suelo. El mecanismo mediante el cual el Zn es absorbido por las races no ha sido definido con precisin. Sin embargo, el ingreso predominante es como Zn hidratado y Zn , aun cuando pueden ser absorbido como complejos y quelatos orgnicos. En la planta es frecuente que las races contengan mucho ms Zn que la parte area. En condiciones de exceso, el Zn se puede acumular en la canopia. La Tabla 16 muestra rangos y contenido medio de Zn en vegetales de consumo.
+2 -1

Tabla 15. Rango y contenido medio de Cu en vegetales de consumo.

63

4.6 Arsnico El As es un elemento no esencial para las plantas. En altas concentraciones interviene en los procesos metablicos de las plantas, pudiendo inhibir el crecimiento y frecuentemente llegar a la muerte de la planta (Tu y Ma, 2002). Sin embargo, los niveles de As en vegetales, granos y otros cultivos alimenticios son bajos, aun cuando los cultivos se desarrollen en suelos contaminados (ONeill, 1995). El As en el suelo se encuentra en formas mviles en el rango de pH 7 a 9. Con altas concentraciones de As la produccin de biomasa y el rendimiento de varios cultivos se reduce significativamente (Carbonell-Barrachina et al., 1997), con la aplicacin de 50 mg As kg de suelo los rendimientos de cebada (Horedum vulgare L.) y ballica (Lolium perenne L.) disminuyeron significativamente (Jiang and Singh, 1994). Tabla 16. Rango y contenido medio de de Zn en vegetales de consumo. (Kabata Pendias , 2000).
-1

64

En arroz (Oryza sativa L.), el As absorbido como cido dimetil arsnico es fcilmente traslocado a los brotes, mientras que el As (III), As (V) y el cido monometil arsnico son acumulados principalmente en las races (Marin et al., 1992). En plantas de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) tanto el cido dimetil arsnico como el cido monometil arsnico mostraron una alta traslocacin hacia las partes areas superiores con valores cercanos al lmite mximo permisible, en comparacin con el arsenito y el arseniato, reduciendo significativamente el crecimiento y rendimiento de frutos (Burlo et al., 1999). Las plantas de tomate acumulan As principalmente en las races (85 % del total de As), el resto es acumulado en brotes (14 %) y frutos (1 %) (Burlo et al., 1999). La Tabla 17 muestra rangos y contenido medio de As en vegetales de consumo. 4.7 Selenio El papel fisiolgico del Se en el metabolismo de las plantas no est claramente dilucidado. El selenio puede existir en el suelo en cuatro estados de valencia, como seleniuro (Se ), Se elemental
2-

65

(Se ), selenito (Se ) y seleniato (Se ). El Se a pH alcalino predomina como seleniato con alta movilidad, a pH neutro lo hace como selenito con movilidad media, y a pH cido, lo hace como seleniuro con baja movilidad. Las plantas varan considerablemente en sus respuestas fisiolgicas al selenio. Algunas especies vegetales que crecen en suelos selenferos son Se tolerantes y acumulan grandes cantidades de Se. Ellas pueden acumular, desde cientos a varios miles de miligramos de Se por kilogramo, base peso seco, en sus tejidos. Sin embargo, la mayora de lasplantas, entre ellas muchas forrajeras y cultivos agrcolas no acumulan grandes cantidades y son Se-sensibles. Las plantas Se sensibles contienen menos de 25 mg de Se kg en peso seco, no acumulando ms de 100 mg Se kg en peso seco, cuando crecen en suelos selenferos (Terry et al., 2000). Las plantas cultivadas que crecen en suelos no selenferos presentan concentraciones de Se que varan entre 0,01 a 1,0 mgkg de peso seco. Especies de rpido crecimiento del gnero Brassica como mostaza india (Brassica juncea) y raps (Brassica napus) acumulan grandes cantidades de Se, del orden de varios cientos de mg kg de peso seco, en sus tallos cuando crecen en suelos contaminados con niveles moderados de Se (Bauelos et al., 1997). El selenio compite con el azufre en el paso a travs de membranas ( Figura12). Por ser de naturaleza qumica similar puede ser transportado por los mismos transportadores hacia el interior de las clulas. Los suelos afectados por salinidad con sulfatos reducen notablemente la absorcin de selenato en las plantas. La expresin de la alta afinidad del transportador de sulfato por selenato es regulada positivamente por o-acetilserina, y negativamente por el sulfato y la glutathiona (Terry et al., 2000).
-1 -1 -1 -1

4+

6+

Figura 12. Absorcin de selenato al interior de una clula vegetal. SO4= sulfato; SeO4= selenato; GSH = glutathiona reducida (Terry et al., 2000).

Tabla 17. Rango y contenido medio de As en vegetales de consumo (Kabata Pendias (2000).

66

La absorcin de Se en suelos salinos que tienen alta concentracin de sulfatos no afecta a las especies vegetales en la misma magnitud. En las plantas Se-acumuladoras, el selenato es absorbido con preferencia en relacin al sulfato. Clculos del coeficiente de discriminacin Se/S indican que Astralagus bisulcatus, arroz , y mostaza india (Brassica juncea), tienen la capacidad de absorber Se preferentemente en presencia de un alto suministro de sulfato (Bell et al., 1992). Otras especies, como alfalfa, trigo, ballica, cebada y brccoli tienen un coeficiente de discriminacin con valores menores a uno, y la absorcin de selenato se inhibe significativamente en presencia de un suministro de sulfato (Terry et al., 2000). La traslocacin de Se desde la raz a los brotes depende de la forma del Se suministrado. El selenato es transportado ms fcilmente que el selenito o el Se orgnico hacia las partes superiores de las plantas. La distribucin del Se en los distintos rganos de las plantas vara con la especie, la fenologa y su condicin fisiolgica. En plantas acumuladoras, el Se es almacenado en las hojas jvenes durante los estados tempranos de desarrollo, en la fase reproductiva se translocan altos niveles de Se a las semillas a medida desde las hojas. Los cereales no acumuladores cultivados tienen

67

similares contenidos de Se en grano y races, con pequeas cantidades en tallos y hojas (Terry et al., 2000). Las plantas tambin pueden absorber el Se en formas voltiles desde la atmsferan por las hojas, acumulndose en las races de algunas especies como chpica ( Agrostis tenuis), cebada (Horedum vulgare), tomate (Lycopersicon esculentum) y rbano (Raphanus sativus). Tabla 18 muestra rangos y contenido medio de Se en vegetales de consumo.

Tabla 18. Contenido medio de Se en vegetales de consumo. (Kabata Pendias, 2000). Planta Trigo Cebada Avena Centeno Maz Repollo Lechuga Zanahoria Cebolla Papa Tomate Manzano Naranjo Te Pastos ** Trboles ***
* Valor mximo en USA **Las medias no superan las 352 uhkg-1 ***Las medias no superan las 672 ugkg-1

rgano Granos Granos Granos Granos Granos Hojas Hojas Raz Bulbo Tubrculo Fruto Fruto Fruto Hojas Hojas Hojas

Rango ( ugKg-1, peso seco) 1 430 (690)* 2 110 (1800)* 3 -140( 1000)* 9 - 250 10 2030* 150 57 64 42 11 36 - 83 2,6 - 8 7,7 21 - 980 1 - 450 5 - 880

4.8. Molibdeno

68

El contenido de Mo en los suelos generalmente se encuentra asociado al material parental, variando entre 0,013 y 17,0 mg kg para la mayora de los suelos del mundo. El Mo se encuentra asociado a rocas flsicas como el granito. El Mo es ms soluble en suelos alcalinos, asocindose principalmente a compuestos orgnicos e hidrxidos de Fe. Por esto el Mo aumenta su solubilidad cuando se aplican enmiendas calceras en el suelo. Otro factor importante en la solubilidad del Mo es el drenaje del suelo que influye en el potencial redox. El Mo est disponible para las plantas bajo condiciones de oxidacin, sin embargo, presenta especies mviles (thiomolibdatos) en condiciones de reduccin. El Mo es un micronutriente esencial a las plantas, aun cuando su requerimiento fisiolgico es relativamente bajo. El Mo se encuentra presente en cidos nucleicos y forma parte de algunas enzimas como la nitrogenasa y la nitrato-reductasa, presentndose en forma ms abundante en los ndulos de las races de plantas leguminosas. Las concentraciones ptimas de Mo en trbol subterrneo se encuentran en el rango de 0,5 a 1,0 mg kg y no superior a 5,0 mg kg considerado como un valor excesivo (Opazo et al., 2000) ( Tabla 19). 4.9 Mercurio La acumulacin de Hg en el suelo se encuentra controlada principalmente por la formacin de complejos orgnicos y por la precipitacin. El Hg se encuentra asociado a Cl . En presencia de un exceso de Cl la adsorcin de Hg en las partculas minerales del suelo y la materia orgnica disminuye debido a la formacin de complejos de Hg-Cl altamente estables que son poco adsorbidos. La movilidad del Hg requiere procesos de disolucin y degradacin biolgica y qumica de los compuestos orgnicos de mercurio, especialmente hacia formas metiladas del Hg elemental. En condiciones de suelo aerbicas dominan especies catinicas de Hg, En condiciones de suelo anxicas es probable que ocurran complejos aninicos de Hg y S, mientras que los compuestos de Hg metilados predominan en suelos de condiciones redox intermedias. La concentracin media de Hg para los suelos del mundo, raramente excede las 400 g kg , asocindose principalmente a suelos orgnicos, suelos inundados para el cultivo de arroz y suelos urbanos. Suelos con valores de Hg superiores a 500 g kg pueden considerarse contaminados. La absorcin de Hg desde el suelo a las plantas es baja constituyndose en una barrera para la traslocacin desde las races a las partes areas de las plantas (Patra y Sharma, 2000). De esta forma, altas concentraciones de Hg en el suelo producen slo aumentos moderados en los niveles del metal en las hojas por absorcin desde el suelo. El Hg aerotransportado contribuye significativamente al contenido de este metal en los cultivos y por esta razn, al consumo humano y animal (Patra y Sharma, 2000). Una parte del Hg atmosfrico es absorbido directamente por las hojas de las plantas, el que pasa al humus del suelo por abscisin foliar.
-1 -1 + -1 -1 -1

69

Tabla 19. Contenido medio de Mo en vegetales de consumo (Kabata Pendias (2000).

Patra y Sharma (2000), informaron que la incorporacin de vapor de Hg por las hojas de plantas C3 (avena, cebada y trigo) fue cinco veces mayor que la absorcin por las hojas de especies C4 (maz, sorgo y digitaria). Los daos a las semillas de cereales por compuestos orgnicos de Hg, se han caracterizado por una germinacin anormal y una hipertrofia caracterstica de las races y el coleoptilo. La exposicin de las plantas al Hg puede deberse a:

70

- Administracin directa como agentes funguicidas en el tratamiento de las semillas o aspersin foliar. - Exposicin accidental en el suelo, agua y contaminacin del aire. La tabla 20 muestra rangos y contenido medio de Hg en vegetales de consumo. Tabla 20. Rangos y contenido medio de Hg en vegetales de consumo. ( Kabata Pendias , 2000). Planta Trigo Cebada Avena Centeno Maz Poroto Repollo Lechuga Zanahoria Cebolla Papa Tomate Manzano Naranjo Te Organo Granos Granos Granos Granos Granos Granos Hojas Hojas Raz Bulbo Tubrculo Fruto Fruto Fruto Hojas Rango (ug Kg-1, peso seco) 0,2 - 33 5 - 82 < 4 - 45 3 - 18 3 4,6 3 - 11 6,5 8,3 5,7 - 86 < 10 < 10 - 47 3,1 - 34 < 10 2,6 34 46

71

V. MECANISMOS CELULARES PARA TOLERANCIA Y DETOXIFICACIN DE METALES PESADOS EN PLANTAS

Para poder comprender la gentica molecular de la acumulacin de los metales pesados es necesario un conocimiento profundo de la interaccin de los mismos con el entorno tanto en el interior de la planta como en el exterior de la misma. Conseguir este conocimiento requiere el estudio de diferentes aspectos bien delimitados ( Fig. 13).

Figura 13. Interaccin de los metales pesados con plantas. Aspectos clave que determinan su acumulacin.

5.1 Aspectos de Interaccin planta- metal relacionado con tolerancia y de detoxificacin Estos son los siguientes: 5.1.1 Micorrizas Las micorrizas son ciertos hongos del suelo que se encuentran en asociacin simbitica con las races de (la mayora) de las plantas. La propia palabra define la simbiosis entre un hongo (mycos) y las races (rhizos) de una planta. La asociacin fsica se produce porque las races de las plantas se unen con las hifas de determinados hongos (Fig. 14). La planta obtiene del hongo la parte que viene del suelo mientras el hongo obtiene la parte que viene del aire, as la simbiosis proporciona por parte del hongo nutrientes minerales y agua (suelo), y por parte de la planta, sustratos energticos y carbohidratos (fotosntesis).

72

Figura 14. Detalle de la morfologia de raices colonizadas por ectomicorrizas. Las plantas micorrizadas presentan una mayor tolerancia a los metales pesados gracias, en parte, a la capacidad para inmovilizar los metales en la raz, impidiendo que stos pasen a la parte area de la planta. Una primera barrera a la entrada de metales pesados la constituir a la pared celular del hongo, que tiene una gran capacidad de adsorber cationes sobre su superficie, puesto que est se encuentra cargada negativamente. Adems, el hongo restringe el movimiento del metal a las races de la planta. Para ello se sirve de diversos mecanismos que varan segn la especie de hongo y planta, y del metal. Sin embargo, se ha observado tambin una intensa actividad de translocacin y absorcin de metales pesados en algunas especies por efecto de las micorrizas, evidenciando que funcionan en ambos sentidos, impidiendo la entrada de metales pesados y favoreciendo su acumulacin y, por tanto, procurando una alternativa de utilizacin en fitorremediacin. En cualquier caso, los procesos esquematizados, en que participan las micorrizas son: absorcin/adsorcin de metales pesados en el hongo. reduccin del acceso de los metales pesados al apoplasto por hidrofobia. quelacin de los metales pesados con exudados del hongo.

5.1.2 Pared celular y exudados de raiz La raz constituye el tejido de entrada principal de metales pesados en la planta. Hasta all los metales pesados pueden llegar, fundamentalmente, por un proceso de difusin en el medio, mediante un flujo masivo y por intercambio catinico. La raz posee cargas negativas en sus clulas, debido en gran medida a la presencia de grupos carboxilo del cido pctico. Las cargas negativas de estas clulas de la rizodermis interaccionan con las positivas de los metales pesados presentes en el suelo, creando un equilibrio dinmico que facilita la entrada hacia el interior celular. De esta forma, los cationes entran por la pared celular, que adems es hidroflica, lo que facilita el transporte inico. Una vez unidas las cargas positivas a las negativas de la pared celular, los metales pesados se transportan, en parte por la va apoplstica, y en parte por la simplstica. No obstante, se ha demostrado recientemente que parte del flujo de metales pesados, al menos en el caso del Pb puede quedar retenido en la pared celular por la estructura de lignina y celulosa (Marmiroli et al. 2005). Los exudados son compuestos orgnicos liberados por la races de la planta. Existen dos tipos: de bajo peso molecular y de alto peso molecular. Los primeros se liberan a favor de gradiente de concentracin, y los segundos se liberan por mecanismos de transporte activo o por lisis celular. Entre los de bajo peso molecular encontramos cidos orgnicos, azcares, fenoles, aminocidos, y gases como el etileno. Los exudados de alto peso molecular, por el contrario, son productos de

73

lisados (como la autolisis de clulas epidrmicas y corticales), secreciones (que implican un proceso metablico de liberacin) y muclagos. Los exudados facilitan la disponibilidad de los metales. Por ejemplo, se ha observado que los exudados favorecen la absorcin de Fe en suelos deficientes en el mismo. La exudacin de muclagos que forman una capa externa a la raz (mucigel), tambin favorece la complejacin de metales pesados como el Cd, Cu y Pb. 5.1.3 Membrana plasmtica La clula necesita tener los siguientes caminos metablicos en buen estado: la produccin de ATP m itocondrial, el metabolismo de calcio, la sntesis de protenas, la regulacin del ADN, la gliclisis y el ciclo del cido ctrico o ciclo de Krebs. Estos dos ltimos proporcionan los precursores para sntesis de aminocidos y los equivalentes reducidos, cuya oxidacin genera la mayora del ATP. Los daos a la membrana plasmtica, a la produccin de ATP mitocondrial y al control de los niveles de calcio intracelular son rutas comunes para la destruccin final de la clula y merecen especial atencin. La membrana plasmtica es un sistema complejo y de un funcionamiento altamente sofisticado, siendo como es la puerta de entrada de cualquier elemento (seal, nutriente, txico, etc) al lugar donde se realiza la qumica que mantiene la vida de la clula. La membrana plasmtica es utilizada por la clula para mantener los gradientes inicos, que a su vez regulan el volumen celular. Si se daa la membrana, entran iones Ca2+ y salen iones K+ (responsables de los fenmenos de polarizacin y despolarizacin de la membrana y, en definitiva, de la transmisin elctrica). La salida de K+ favorece la entrada de agua. El aumento de agua incrementa el volumen celular. Hay varios mecanismos que pueden inducir estos cambios, algunos ejemplos son fluidizacin de la membrana, peroxidacin de lpidos, dao al citoesqueleto, bloqueo de canales etc. Independiente de la agresin txica, la membrana plasmtica es uno de los componentes que primero responde al dao, siendo el resultado final del mismo la prdida de la integridad es de la membrana. Por tanto, conviene tener en cuenta que el dao al citoesqueleto causar daos tambin a la membrana plasmtica. La membrana plasmtica, por tanto, se ve rpidamente afectada por metales pesados. Sobre ella se producen efectos especficos segn el metal, promoviendo daos mediante varios mecanismos. De manera resumida: Oxidacin y entrecruzamiento de protenas (conteniendo grupos tiol). Inhibicin de protenas de membrana que son esenciales (como por ejemplo la H+-ATPasa). Cambios en composicin y fluidez de los lpidos de membrana, y cambios en la permeabilidad. Por ejemplo, se sabe que el Cu y el Cd alteran la composicin de los lpidos de membrana y provocan la fuga de solutos de la clula.

En cualquier caso todos estos mecanismos esencialmente acaban alterando las propiedades elctricas de la membrana plasmtica. Sin embargo la membrana plasmtica puede estar involucrada en la tolerancia a metales pesados reduciendo la captacin o estimulando las bombas de flujo de metales que promueven la entrada al citosol. Se sabe que las plantas tolerantes protegen la membrana. Cmo?. Bsicamente: Mediante mecanismos de reparacin que mantienen la integridad de la membrana plasmtica Utilizando mecanismos de proteccin como protenas de choque trmico, metalotioneinas, etc.

74

Mejorando los mecanismos de homeostasis de metal Promoviendo un influjo reducido a travs de la membrana plasmtica Promoviendo un eflujo selectivo (metablicamente, es decir energticamente, ms conveniente que los mecanismos especficos de influjo y restriccin).

Las plantas poseen varias clases de transportadores de metal que deben estar involucrados en la homeostasis y la tolerancia. Hay, sin embargo, pocas evidencias directas al respecto, sobretodo para el sistema de eflujo. Como ejemplo de influjo reducido, en Nicotiana tabaccum se ha descrito la tolerancia conferida por un transportador (NtCBP4) regulado por calmodulina para el caso del Ni. Tambin se han descrito transportadores que facilitan el eflujo a travs de la membrana plasmtica (CPx-ATPases, Nramps, familia CDF, familia ZIP, Tabla 21).

5.1.4 Quelacin Uno de los aspectos ms importantes de la acumulacin de metales pesados es el que se refiere al proceso de complejacin. Un complejo o compuesto de coordinacin es el resultado de la interaccin de un tomo central, esto es, un ion metlico con orbitales de valencia vacos que puede actuar como cido de Lewis (aceptor de electrones), y una o varias bases de Lewis (dador de electrones) con pares de electrones libres. Estas bases se conocen como agentes complejantes o ligandos. Esta interaccin lleva a la formacin de un enlace covalente coordinado o dativo. El tomo central debe disponer de orbitales vacos capaces de aceptar pares de electrones. En consecuencia, los cationes de los grupos I y II del sistema peridico tienen poca tendencia a formar complejos, al disponer de orbitales poco profundos y, por tanto, con poca disposicin a captar electrones. Por el contrario, los metales de transicin s que presentan una elevada tendencia al proceso de quelacin, puesto que poseen orbitales profundos (tipo d o f). El metal se rodea de los ligandos formando un complejo. Los ligandos simples, como el agua, slo forman un enlace con el tomo central, y se llaman monodentados o monocoordinados. Algunos ligandos son capaces de formar mltiples enlaces de coordinacin, y se describen como bidentados (bicoordinados), tridentados (tricoordinados), lo cual va incrementando la estabilidad de los complejos. Generalmente tienen mucha mayor tendencia a formar complejos que sus homlogos monocoordinantes. La planta utiliza este mecanismo de complejacin en el interior de la clula para detoxificar (amortiguar) los metales pesados, uniendo a ellos ligandos para formar complejos. De esta manera, el metal queda inmerso en una interaccin qumica que le mantiene en equilibrio electrnico (acomplejado), pero que no lo deja fuera del metabolismo, no se ha eliminado del citoplasma de la clula y, por ello, sigue siendo potencialmente txico. Como se ha mencionado anteriormente, los metales pesados muestran gran afinidad por determinados grupos funcionales como principales ligandos, como grupos sulfidrilo, radicales amino, fosfato, carboxilo e hidroxilo. Los ligandos que utiliza son bsicamente aminocidos y cidos orgnicos, y ms especficamente, dos clases de pptidos: fitoquelatinas y metalotioneinas. Entre los aminocidos y los cidos orgnicos se encuentran los cidos ctrico y mlico, la histidina, la cistena etc. (Tabla 22).

75

Tabla 21. Principales transportadores de membrana plasmtica dxe metales pesados

76

Tabla 22. Principal metabolito que acta de ligando para la formacin de complejos de citrato y metales pesados Protenas Citrato sintasa Donante Tabaco Receptor Tabaco, Papaya Aspectos relevantes Tolerancia al Al Referencia De la Fuente et al, 1997

- Metalotioneinas (MTs) Existieron las primeras protenas identificadas (en mamferos) como transportadoras de Cd. Son polipptidos de unos 70-75 aminocidos con un alto contenido en cistena, aminocido capaz de formar complejos con cationes mediante el grupo sulfidrilo que posee como radical. Son pues protenas de transporte de metales, ricas en cistena y de bajo peso molecular. Se cree que son las responsables esenciales de la quelacin de metales pesados en el citoplasma de las clulas de mamferos y bacterias, pero se piensa tambin que no son protenas tan decisivas en el proceso de quelacin de metales pesados en plantas (Tabla 23). Tabla 23. Principales metalotioneinas implicadas en la tolerancia y/o acumulacin de metales pesados Protenas MT2 MT1 MT CUP1 Donante Humano Ratn Guisante Levadura Receptor Tabaco Tabaco Arabidopsis Coliflor Aspectos relevantes Tolerancia Cd en germinacin Tolerancia Cd en germinacin Acumulacin de Cu 16 veces la tolerancia a Cd y acumulacin de Cd Referencias Misra y Gedamu 1989 Pan et al, 1994 Evans et al, 1992 Hasegawa et al, 1997

- Fitoquelatinas (PCs) Las fitoquelatinas son ligandos de alta afinidad que complejan metales pesados. Se identificaron despus que las MTs. Se piensa que las fitoquelatinas pueden desempear en plantas el papel equivalente al que las metalotionenas desempean en mamferos y bacterias. Las fitoquelatinas se inducen rpidamente en plantas por tratamiento con metales pesados. Su disminucin provoca una mayor sensibilidad a metales pesados, por tanto su papel en la tolerancia y acumulacin de metales pesados en plantas es crtico (Tabla 24). Las fitoquelatinas tienen como sustrato el glutatin. El glutatin est considerado el pptido ms abundante de la Tierra. Adems, o quizs esto explique su abundancia, es una molcula clave en el balance del estado oxidativo de la clula. Tambin participa en procesos de detoxificacin de diversas sustancias lesivas, y es capaz de quelar metales pesados por s misma. En realidad el

77

glutatin participa en una gran variedad de procesos de los cuales se han sealado slo los ms esenciales. La estructura del glutatin (GSH) est constituida por 3 aminocidos: Glutmico (Glu), Cistena (Cys) y Glicina (Gly), unidos por enlaces peptdicos. Sin embargo, de forma inusual, el primer aminocido, Glu, se une al segundo por el grupo carboxilo, no cercano al amino en a, como sera habitual, sino por el grupo carboxlico residual. Es en ese sentido, el glutatin un pptido inusual, cuya estructura primaria es: -GluCysGly. Numerosos estudios indican, como se ha mencionado previamente, que el GSH es el sustrato para la biosntesis de las PCs. Este proceso de sntesis se acomete a travs de los enzimas que se indican en el esquema (Fig. 15). Se ha demostrado que estructuralmente la sntesis de PCs se produce por unin de GSH, con residuos de Glu y Cys li gados a travs de repeticiones de ( -GluCys)n-Gly donde n= 2-5..11. En cuanto al consumo energtico, los dos primeros pasos (es decir la sntesis completa de glutatin) requiere consumo de ATP. No as la sntesis de PCs.

Tabla 24. Principales fitoquelatinas implicadas en la tolerancia y/o acumulacin de metales pesados.

78

Figura 15. Esquema del proceso de sntesis de PCs.

Es importante sealar que el Cd es un efector positivo de la sntesis de PCs, actuando sobre los pasos 1, 2 y 3, es decir, sobre todos los enzimas que intervienen en la sntesis. Sin embargo, an es quizs ms relevante sealar que el paso de inicio de sntesis de glutatin, y por tanto de PCs, est inhibido por el mismo glutatin obtenido en el paso 2. En consecuencia una sobreexpresin o incremento de los enzimas que intervienen en la sntesis de glutatin, sin un incremento de la produccin o actividad de la PCs, llevar a una produccin limitada de los mismos, o al menos ms limitada que si se incrementa la actividad PCS. Esto es importante a la hora de disear una estrategia biotecnolgica de mejora en la acumulacin de metales pesados. Modo de accin de las PCs Las PCs se sintetizan en el citosol, donde se unen a compuestos metlicos formando complejos. Sin embargo, tcnicas de HPLC y rayos X detectan mayores concentraciones de metal y PCs en el interior de la vacuola, por lo que se deduce que el transporte y acumulacin en su interior estn implicados en tolerancia y detoxificacin. En consecuencia, parece ser que el paso final en el proceso de detoxificacin, esto es, desde la movilizacin del metal del suelo a las races hasta llegar al interior de las clulas tanto de la raz como de las hojas, es la compartimentalizacin vacuolar. 5.1.5 Compartimentalizacin vacuolar El eflujo de iones y el transporte al interior de la vacuola constituyen dos maneras diferentes de conseguir el mismo objetivo: reducir la concentracin de metales txicos en el citoplasma. La diferencia importante entre ambos, es que mientras en el primer caso no es una garanta de que el problema de la toxicidad est resuelto, en el segundo caso s lo es. Adems del bien documentado proceso de acumulacin, de los complejos PCs-Cd en vacuola, hay evidencias de acumulacin de otros metales, involucrando diferentes sistemas de transporte desde el tonoplasto como Zn, Ni, etc. (Tabla 25). Dentro de la vacuola se forman complejos PCs-Cd de alto y bajo peso molecular (LMW: low molecular weight y HMW: high molecular weight) lo que parece indicar que el mecanismo de procesamiento en citoplasma y almacenamiento es un proceso sofisticado y complejo que requiere un mejor conocimiento (Fig. 16).

79

Tabla 25. Principales transportadores vacuolares de metales pesados.

80

5.1.6 Biotransformacin Al conjunto de caminos metablicos por medio de los cuales los tejidos incrementan la polaridad de un txico, o a la transformacin qumica de un compuesto en el organismo, se le denomina biotransformacin. Para reducir la respuesta txica de una sustancia en un organismo hay que disminuir la cantidad de sustancia en forma activa (txica) y el tiempo de permanencia de la misma en el sitio de accin. Cmo? Incrementando la polaridad ya que ello aumenta la difusibilidad del txico y por tanto puede incrementar la velocidad de excrecin. Adems, muchas sustancias txicas que ven incrementada su polaridad se convierten en sustratos accesibles para posteriores reacciones de detoxificacin, reacciones que, por otra parte, no seran posibles de no incrementar la polaridad. Con frecuencia pues, se trata de convertir un xenobitico (compuestos cuya estructura qumica en la naturaleza es poco frecuente o inexistente debido a que son compuestos sintetizados por el hombre en el laboratorio) no polar en un compuesto soluble en agua. Estas reacciones se agrupan en dos conjuntos denominados Biotransformacin Fase I y Biotransformacin Fase II: Fase I. Biotransforma los xenobiticos conviertindolos en substratos de los enzimas de la Fase II, al mismo tiempo que los hace ms hidrfilos. Fase II. Agrega un grupo polar de tamao relativamente grande a los productos de las reacciones de la Fase I, o a los xenobiticos originales que contienen los grupos funcionales apropiados para ser substratos de las reacciones de conjugacin (Fig.16).

Figura 16. Raciones de conjugacin 5.1.7 Mecanismo de reparacin celular Se denomina mecanismos de reparacin celular al conjunto de procesos que se activan como respuesta a los fenmenos de deterioro celular (como estrs oxidativo). Estos mecanismos se activan para restablecer las caractersticas iniciales de la clula. Los mecanismos mejor conocidos son los que participan en la sntesis de componentes de pared, y aquellos mecanismos que participan en la activacin de procesos de reparacin de errores rutinarios en la copia de ADN. Este es un tema complejo y bien estudiado, en el caso, sobretodo, de daos al DNA. Se sabe que en la reparacin de la membrana plasmtica despus del dao causado por la presencia de metales pesados estn involucradas las metalotioneinas y, sobre todo, las protenas de choque trmico. Estas ltimas

81

incrementan su expresin en gran variedad de organismos en respuesta a la subida de temperaturas por encima de la ptima. Tambin se expresan en respuesta a otros estreses como metales pesados, de forma que actan como proteccin y reparacin de protenas. Se ha comprobado que un corto estrs por calor antes de estrs por metales pesados induce un efecto de tolerancia, previniendo el dao en la membrana. 5.2 Mejora de la entrada y acumulacin de metales pesados en plantas El conocimiento de todos los procesos descritos hasta ahora nos podra permitir mejorar la entrada y acumulacin de metales pesados, sin grave perjuicio para la clula. Cmo se consigue que una planta acumule ms metales? Para abordar este problema se sugiere recapitular la secuencia de acontecimientos que se mencionan por orden temporal de precedencia: Se ha hablado de: Transporte: entrada y salida de metales pesados al interior de la planta primero y al interior de la clula despus. Quelacin: secuestro de los metales contaminantes mediante la unin a ligandos especficos (principalmente peptdicos) producidos por la propia planta. Compartimentalizacin: proceso por el que el complejo ligando-metal queda retenido en una vacuola. Biotransformacin: conjunto de reacciones de descomposicin, conjugacin o sntesis implicadas en el correcto procesamiento de los contaminantes. Mecanismos de reparacin celular: mecanismos que en respuesta al deterioro sufrido, reestablecen las caractersticas iniciales de la planta.

Se ha hablado de todos estos procesos. El modo de abordar el problema con xito, consiste en ponderar los pasos a realizar. En primer lugar hay que asegurar que el metal no produce un efecto txico importante. En efecto, para poder mejorar la acumulacin se debe, ante todo, evitar que el metal pesado provoque dao en su transporte. El dao no se producir, en buena medida, si el metal fluye de una manera rpida por la raz y los tejidos, de tal manera que llegue cuanto antes a un destino final donde sea convenientemente amortiguado y empaquetado en forma no txica. Para ello, habr que conseguir que el metal no sea lesivo en el citoplasma, procurando suficiente cantidad de ligando para que inmediatamente se amortige el efecto txico (quelacin). En segundo lugar, hay que disponer el complejo metal-ligando en vacuola, porque el metal sigue siendo potencialmente txico mientras no se deposite en este reservorio, donde queda convenientemente almacenado (compartimentalizacin). Y en tercer lugar, se puede incrementar el transporte, puesto que el metal ser adecuadamente dispuesto. En un segundo orden de importancia quedan los procesos de Biotransformacin y los Mecanismos de reparacin celular, que sern, en todo caso, procesos que perfeccionarn lo conseguido con la mejora de los procesos anteriores.

82

EPILOGO

El tema de contaminacin de metales pesados en suelos y plantas resulta muy interesante.es importante considerar la complejidad del tema para explicar los diferentes mecanismos que se dan en la interaccin entre los diferentes contaminantes presentes en el suelo y ppor consigueinte la absorcina travez de las races d ela splantas que crecen sobre stos. La informacin sobre este aspecto es amplia, divulgada en muchas revistas cientficas, publixaciones en congresos y libros.Los que se consideran a continuacin son algunos de los ttulos que son de inters para el lector: Revista Chapingo Serie Horticultura 15(2): 161-168, 2009. FITOEXTRACCIN DE PLOMO Y CADMIO EN SUELOS CONTAMINADOS USANDO QUELITE 3 (Amaranthus hybridus L.) Y MICORRIZAS. H. G. Ortiz-Cano; R. Trejo-Calzada ; R. D. Valdez-Cepeda ; J. G. Arreola-vila1; A. Flores-Hernndez; B. Lpez-Ariza Unidad Regional Universitaria de Zonas ridas. Universidad Autnoma Chapingo, MXICO. Las actividades mineras y metalrgicas practicadas en la Comarca Lagunera, Mxico han contaminado el suelo, el aire y el agua. El uso de plantas es una de las estrategias para la remediacin de suelos contaminados con metales pesados. Sin embargo, son pocos los estudios sobre remediacin con plantas de zonas ridas y su asociacin con micorrizas. El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad extractora de Plomo (Pb) y Cadmio (Cd) del quelite ( Amaranthus hybridus L.) al adicionar una mezcla de micorrizas arbusculares (Entrophospora columbiana, Glomus intraradices, G. etunicatum, G clarum) al sustrato contaminado con Pb o Cd. Dos experimentos, uno por cada metal, con diseo experimental de bloques al azar con cuatro repeticiones fueron desarrollados. En el primero se adicionaron tres cantidades de micorrizas (0, 2.5 y 5.0 gkg-1) en suelos con 300 mgkg-1 de Pb. En el segundo experimento, las mismas cantidades de micorrizas fueron probadas en suelos contaminados con 15 mgkg-1 de Cd. Las concentraciones de Pb y Cd en raz, hoja y tallo a los 65, 95 y 125 das de edad de la planta se determinaron con un espectrofotmetro de absorcin atmica. Los resultados indican que la adicin de micorrizas increment significativamente (P<0.05) la concentracin de Pb y Cd en raz, tallo y hoja de quelite. Las concentraciones de estos metales se incrementaron significativamente conforme la edad de la planta. TERRA Latinoamericana VOLUMEN 23 NMERO 1, 2005 RECUPERACIN DE SUELOS CONTAMINADOS CON METALES PESADOS UTILIZANDO PLANTAS Y MICROORGANISMOS RIZOSFRICOS Ma. del Carmen ngeles Gonzlez-Chvez Instituto de Recursos Naturales, Colegio de Postgraduados. 56230Montecillo, estado de Mxico En Mxico, al igual que en muchos pases, la prevencin de la contaminacin del ambiente (suelo, agua y aire) y su recuperacin es una prioridad. La Biotecnologa del Suelo nace como una rama trascendental dentro de la Ciencia del Suelo, y los resultados muestran el enorme potencial de los microorganismos del suelo, en el mejoramiento de la calidad del suelo, degradacin e inmovilizacin de contaminantes, su efecto en el crecimiento y en la proteccin de las plantas frente a diferentes factores. Como resultado, se incrementa el inters de los investigadores por la aplicacin de los microorganismos en diferentes reas. Dentro de los mtodos biolgicos de recuperacin de suelos contaminados por metales pesados, metaloides y otros contaminantes, el uso de plantas y microorganismos rizosfricos representa una alternativa de bajo costo y con enormes ventajas

83

ambientales. Las tecnologas que consideran el uso de estos organismos son llamadas: fitorecuperacin y biorecuperacin, respectivamente. Se resumieron las principales alternativas biolgicas que pueden usarse para la descontaminacin y recuperacin de suelos contaminados por metales pesados. Se hizo nfasis que el uso de plantas requiere considerar a sus microorganismos simbiticos mutualistas de la rizosfera. Papeles de Geografa 2010, 51-52; pp. 45-54 AFECCIN DE SUELOS AGRCOLAS POR METALES PESADOS EN REAS LIMTROFES A EXPLOTACIONES MINERAS DEL SURESTE DE ESPAA. F. Belmonte Serrato1, A. Romero Daz1, F. Alonso Sarra1, J. Moreno Brotns y S. Rojo Lpez-Universidad de Murcia Se analiza la contaminacin por metales en suelos agrcolas en el entorno de la Sierra minera de Cartagena-La Unin. El muestreo se realiz cogiendo 20 muestras de suelo en uso agrcola mediante una distribucin aleatoria en un rea de unos 100 km2 en torno a la Sierra Minera. Los resultados han detectado concentraciones importantes, que alcanzan y superan los niveles mximos permitidos por diversas normativas internacionales de hasta 11 de los elementos denominados metales pesados. Aluminio y Hierro destaca sobre los dems con concentraciones medias porcentuales de 13% y 10% respectivamente. Pero hay que destacar la contaminacin excesiva de plomo (Pb) y Zinc (Zn) que duplica e incluso triplica el mximo establecido por las leyes ms permisivas, superando con mucho los niveles mximos a partir de los cuales se requiere una intervencin obligatoria en todas las legislaciones consultadas

84

APNDICE A

Valores comparativos de inhibicin de crecimiento de radcula en trminos de concentracin de inhibicin media, CI50 (mg L ) para cuatro ensayos ecotoxicolgicos con semillas de plantas terrestres para la evaluacin de tres metales pesados.
-1

Para el Cr se da el siguiente orden decreciente de ecotoxicidad: O. sativa > B. vulgaris > A. cepa > R. sativus. Para el Hg la siguiente secuencia: B. vulgaris > R. sativus ~ O. sativa > A. cepa. Para el Pb
2+ 6+ 2+ 2+ 2+

6+

se da la siguiente secuencia: B. vulgaris > A. cepa > R. sativus > O. sativa. La secuencia de sensibilidad promedio en orden decreciente fue: Hg > Cr > Pb .

85

GLOSARIO

Contaminacin: La contaminacin es la introduccin de algn tipo de sustancia o energa que atentar contra el normal funcionamiento y equilibrio que ostentaba el medio inicialmente,

provocando adems un dao casi irreversible.

Fitotoxicidad: Acumulacin de una sustancia daina en el tejido de una planta en niveles que afectan su crecimiento y normal desarrollo. Efectos de toxicidad en especies vegetales sensibles, donde diversos factores edficos pueden determinar la biodisponibilidad de un compuesto qumico, y por lo tanto, la intensidad del efecto fitotxico, tales como el contenido de materia orgnica y el pH del suelo, adems del grado de solubilidad de la forma qumica.

Metal pesado: El trmino metal pesado suele referirse a metales cuyo peso especfico es superior a 5 g.cm-3 y que tiene un nmero atmico por encima de 20. No obstante, no todos los elementos que tienen esas caractersticas tienen anlogas funciones biolgicas. Debido a las pequeas cantidades que se manejan se denominan, a veces, elementos traza o metales traza y se incluye el aluminio que no se puede calificar de metal pesado.

Toxicidad: Es el grado de efectividad de una sustancia txica. Se trata de una medida que se utiliza para nombrar el grado txico de los elementos, tanto sobre un organismo completo como sobre una subestructura (clula).

86

LISTADO DE ABREVIATURAS

As = arsnico APX = ascorbato oxidasa Cd = cadmio Zn = cinc Cu = cobre Cr = cromo GR = glutatin reductasa Hg = mercurio Kg = kilogramos M = mol mM = milimoles mg = miligramos Mn = manganeso Mo = molibdeno Ni = nquel PS = peso seco Pb = plomo Se = selenio

87

BIBLIOGRAFA

ABOLLINO, O., ACETO, M., MALANDRINO, M., MENTASTE, E., SARZANINI, C. AND BARBERIS, R. 2002. Distribution and Mobility of Metals in Contaminated Sites. Chemometric Investigation of Pollutant Profiles. Environmental Pollution, 119: 177. Prieto-Mndez et al., 2009 AGUILAR, J., DORRONSORO, C., BELLVER, R., FERNNDEZ, E., FERNNDEZ, J., GARCA, I., IRIARTE, A., MARTN, F., ORTIZ, I., SIMN, M. 2003. Contaminacin de los suelos tras el vertido txico de Aznalcllar. Universidad de Granada-Consejera de Medio Ambiente. Junta de Andaluca. Espaa. ALI, G., SRIVASTAVA, P.S., IQBAL M. 2000. Influence of cadmium and zinc on growth and photosynthesis of Bacopa monniera cultivated in vitro. Biologia Plantarum 43:599-601. ALLOWAY, B.J. 1995. Cap. 3: The origin of the heavy metals in soils. In: Alloway, B.J. (ed.). Heavy metals in soils. Blackie Academic and Professional, London, 2da. edition. pp. 38-57. ALLOWAY, B.J., STEINNES, E. 1999. Anthropogenic additions of cadmium to soils. En Cadmium in Soils and Plants (eds. McLaughlin, M.J. y Singh, B.R.), pp. 97-123. Kluwer Academic Publishers. Dordrecht, The Netherlands. ANGELOVA V., IVANOVA, R., DELIBALTOVA, V. AND IVANOV, K. 2004. Bio-accumulation and distribution of heavy metals in fibre crops (flax, cotton and hemp). Industrial Crops and Products, 19: 197205. APHA. 1995. Standard methods for examination of water and wastewater. APHA (American Public Health Association), AWWA (American Water Works Association), WPCF (Water Pollution Control Federation), Washington D.C., USA. ARAMBASIC, M.B., BJELIC, S. AND SUBAKOV, G. 1995. Acute toxicity of heavy metals (copper, lead, zinc), phenol and sodium on Allium cepa L., Lepidium sativum L., and Daphnia magna St., comparative investigations and the practical applications. Water Research, 29:497-503. ARKHIPCHUK, V.V., MALINOVSKAYA, M.V. AND GARANKO, N.N. 2000. Cytogenetic study of organic and inorganic toxic substances on Allium cepa, Lactuca sativa, and Hydra attenuata cells. Environmental Toxicology, 15:338-344. ASTOLFI, S., ZUCHI, S., PASSERA, C. 2005. Effect of cadmium on H(+)ATPase activity of plasma membrane vesicles isolated from roots of different S-supplied maize (Zea mays L.) plants. Plant Science 169:361-368. BAKER, A.J.M. 1981. Accumulators and excludersstrategies in the response of plants to heavy metals. Journal Plant Nutrition, 3:643-654. BAKER, A.J.M., MCGRATH, S.P., REEVES, R.D. AND SMITH, J.A.C. 2000. Metal hyperacumulator plants: a review of he ecology and physiology of a biological resource for phytoremediation of metal-polluted soils. En: hytoremediation of Contaminated Soil and Water (eds. Terry, N. y Bauelos, G.), pp. 85-107, Lewis Publishers, Boca Raton, FL, USA. BALESTRASSE, K.B., GALLEGO, S.M., TOMARO, M.L. 2004. Cadmium-induced senescence in nodules of soybean (Glycine max L.) plants. Plant Soil 262:373-381. BAUELOS GS, AJWA HA, MACKEY M, WU L, COOK C, AKOHOUE S, ZAMBRUZUSKI S. 1997. Evaluation of different plant species used for phytoremediation of high soil selenium. J. Environ. Qual. 26:63946.

88

BARCEL, J.; LLUGANY, M.; LOMBINI, A.; POSCHENRIEDER, C. (2005). Glycine may contribuye to the protection of Silene armeria against excess copper. In: C.J. Li (Eds). Plant nutrition for food security, human health and environmental protection. 634-635. Tsinghua University Press. Beiging (China). BARCEL, J. AND POSCHENRIEDER, C. 2003. Phytoremediation: principles and perspectives. Contributions to Science 2(3): 333-344. Institut dEstudis Catalans, Barcelona. BARONE, L.M., SHIH, C. AND WASSERMAN, B.P. 1997. Mercury-induced conformational changes and identification of conserved surface loops in plasma membrane aquaporins from higher plants. Topology of PMIP31 from Beta vulgaris L. Journal Biological Chemistry, 272: 30672- 30677. BENAVIDES, M.P., GALLEGO, S.M., TOMARO, M. 2005. Cadmium toxicity in plants. Brazilian Journal of Plant Physiology 17:21-34. BLAUDEZ, D., KOHLER, A., MARTIN, F., SANDERS, D., CHALOT, M. 2003. Poplar metal tolerance protein 1 confers zinc tolerance and is an oligomeric vacuolar zinc transporter with an essential leucine zipper motif. Plant Cell 15: 29112928. BLAYLOCK, M.J.; SALT, DE.; DUSHENKOV, S.; ZAKAROVA, O.; GUSSMAN, C.; KAPULNIK, Y.; ENSLEY, B.D.; RASKIN, I. (1997). Enhanced accumulation of Pb in Indian mustard by soilapplied chelating agents. Environ. Sci. Technol. 31: 860-865. BROOKS, R.R., LEE, J., REEVES, R.D. AND JAFFR, T. 1977. Detection of nickeliferous rocks by analysis of herbarium specimens of indicator plants. Journal Geochemical Exploration, 7: 4957. BURLO, F., GUIJARRO, I., BARRACHINA, A.A.C., AND VALERO, D.. 1999. Arsenic species: Effects on and accumulation by tomato plants. J. Agric. Food Chem. 47:1247-1253. BURT, R., WILSON, M.A., KECK, T.J., DOUGHERTY, B.D., STROM, D.E. AND LINDAHL, J.A. 2003. Trace Element Speciation in Selected Smelter-Contaminated Soils in Anaconda and Deer Lodge Valley, Montana, USA. Advances in Environmental Research, 8: 51- 67. BROOKS, R.R. 1998. Plants that hyperaccumulate heavy metals. CAB International, Wallingford, UK. CALOW, P. 1993. Handbook of ecotoxicology. Vol. I. 478 p. Blackwell Science Ltd., London, England. CARBONELL-BARRACHINA, A.A., BURLO, F., BURGOS-HERNANDEZ, A., LOPEZ, E., AND MATAIX, J. 1997. The influence of arsenite concentration on arsenic accumulation in tomato and bean plants. Sci. Hortic. 71:167-176. CHAN, D.Y., HALE, B.A. 2004. Differential accumulation of Cd in durum wheat cultivars: uptake and retranslocation as sources of variation. Journal of Experimental Botany 55:25712579. CHANEY, RL.; RYAN, JA. (1994). Risk based standards for arsenic lead and cadmium in urban soils. Dechema, Frankfurt, Germany. CHEN, Z.S. 1992. Metal contamination of flooded soils, rice plants, and surface waters in Asia. Biogeochemistry of Trace Metals, D.C. Adriano (Ed.). Lewis Publishers Inc., Florida, USA,:pp. 85- 107. CHEN, Z.S., D.Y. LEE, C.F. LIN, S.L. LO, AND W. Y.P. 1996. Contamination of rural and urban soils in Taiwan, Boston, London. CHEN Z. S. 2000. Relationship between heavy metal concentrations in soils of Taiwan and uptake by crops. On line in: http://www.fftc.agnet.org/library/article/tb149.html Food and fertilizer technology center.

89

CHENG, N.H. , PITTMAN, J.K., BARKLA, B.J., SHIGAKI, T., HIRSCHI, K.D. 2003. The Arabidopsis cax1 mutant exhibits impaired ion homeostasis, development, and hormonal responses, and reveals interplay among vacuolar transporters. Plant Cell 15: 347364 CHRISTENSEN, T.H., HAUNG, P.M. 1999. Solid phase cadmium and the reactions of aqueous cadmium with soil surfaces. En: Cadmium in Soils and Plants (eds. McLaughlin, M.J. y Singh, B.R.), pp. 65-96. Kluwer Academic Publishers. Dordrecht, The Netherlands. CLEMENS, S., ANTOSIEWICZ, D.M., WARD, J.M., SCHACHTMAN, D.P., SCHROEDER, J.I. 1998. The plant cDNA LCT1 mediates the uptake of calcium and cadmium in yeast. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 95:12043-12048. CLEMENS, S., PALMGREN, M.G., KRMER, U. 2002. A long way ahead: understanding and engineering plant metal accumulation. Trends in Plant Science 7:309-315. CLEMENS, S. 2006. Toxic metal accumulation, responses to exposure and mechanisms of tolerance in plants. Biochimie 88:1707-1719. CODLING, E. E.; RITCHIE, J. C. 2005. Eastern gamagrass uptake of lead and arsenic from lead arsenate contaminated soil amended with lime and phosphorus. Soil Sci. 170 (6): 413- 423. CONG TU, LENA Q MA.2002. Effects of arsenic concentrations and forms on arsenic uptake by the hyperaccumulator ladder brake. J. Environ Qual.31: 641-647 CORINNE P. ROONEY, FANG-JIE ZHAO, STEVE P. MCGRATH. 2006. Phytotoxicity of nickel in a range of European soils: Influence of soil properties, Ni solubility and speciation, Environmental Pollution 145: 596-605. CUNAT P.J. 2002 Chromium in Stainless Steel Welding Fumes Isue N 9. On line in: http://www.chromium-asoc.com/publications/crfile9apr02.htm DAVIES, B.E. (1995). Lead and other heavy metals in urban areas and consequences for the health of their inhabitants. In: Majumdar, S.K., Miller, E.W., Brenner, F.J. (eds), Environmental Contaminants, Ecosystems and Human Health, pp. 287-307. The Pennsylvania Academy of Science, Easton PA, USA. DAVIES, B.E. 1977. Heavy metal pollution of British agricultural soils with special reference to the role of lead and copper mining. In: Proc. Int, Semin. On Soil Environment and Fertility Management in Intensive Agriculture. Tokyo, 394. DE JONG, F.M.W., AND DE HAES. H.A.U. 2001. Development of a field bioassay for the sideeffects of herbicides on vascular plants using Brassica napus and Poa annua. Environmental Toxicology, 16:397-407. DELHAIZE, E., KATAOKA, T., HEBB, D.M., WHITE, R.G., RYAN, P.R . 2003. Genes encoding proteins of the cation diffusion facilitator family that confer manganese tolerance. Plant Cell 15: 1131-1142. DEL CASTILHO, P., CHARDON, W.J. AND SALOMONS, W. 1993. Influence of cattle-manure slurry application on the solubility of cadmium, copper, and zinc in a manured acidic, loamysand soil. J. Environ. Qual.. 22: 689-697. DEL RO, L.A., CORPAS, F.J., BARROSO, J.B. 2004. Nitric oxide and nitric oxide synthase activity in plants. Phytochemistry 65:783-792. DENNY, P.; WEEKS, DC. (1968). Electropotential gradients of ions in an aquatic angiosperm Potamegeton schweinfurthii (Benn). New Phytol. 67: 875.882. ERNST, W. (1980). Biochemical aspects of cadmium in plants. In: Nriagu JO. (ed), Cadmium in the Environment, pp. 639.653. J. Wiley and Sons, New York, USA. EUN, SO.; YOUN, HS.; LEE, Y. (2000). Lead disturbs microtubule organization in the root meristem of Zea mays. Physiol. Plant. 110: 357.365.

90

EZAKI, B., GARDNER , R.C., EZAKI, Y., MATSUMOTO, H. 2000. Expression of AluminumInduced Genes in Transgenic Arabidopsis Plants Can Ameliorate Aluminum Stress and/or Oxidative Stress. Plant Physiol.122: 657-666. FAO/WHO. 1993. Joint FAO/WHO Food Standards Programme, Codex Alimentarius Commission, 20th Session, Geneva 28 June-7 July 1993. FODOR, A., SZAB-NAGY, A., ERDEI, L. 1995. The effects of cadmium on the fluidity and H+ATPase activity of plasma membranefrom sunflower and wheat roots. Journal of Plant Physiology 14: 787-792. FREITAS, H., PRASAD, M.N.V. AND PRATAS, J. 2004. Heavy Metals in the Plant Community of Sao Domingo an Abandoned Mine in SE Portugal: Possible Applications in Mine Remediation. Environmental International, 30: 65-72. GARCA, I. AND DORRONSORO, C. 2005. Contaminacin por Metales Pesados. En Tecnologa de Suelos. Universidad de Granada. Departamento de Edafologa y Qumica Agrcola. http://edafologia.ugr.es. GARCA, J. C., PLAZA, C., MUZ, F. AND POLO, A. 2000. Evaluation of heavy metals pollution on barley crop by agricultural use of municipal solid waste compost. Centro de rd Ciencias Medioambientales (CSIC). Madrid (Spain). 3 Internacional Symposium on Geotechnics related to the European Environment. Berlin. Germany. On line in: http:// grobioenmiendas.iespana.es. GARCA-GIL J.C., PLAZA, C.., MUOZ F., AND POLO. A.. 2000. Evaluation of heavy metals pollution on barley crop by agricultural use of municipal solid waste compost. Centro de Ciencias Medioambientales (CSIC). Madrid (Spain). 3rd International Symposium on Geotechnics related to the European Environment. Berln, Germany. En lnea en http://agrobioenmiendas.iespana.es/agrobioenmiendas/berlin.pdf GARNIER, L., SIMON-PLAS, F., THULEAU, P., AGNEL, JP., BLEIN, JP., RANJEVA, R., MONTILLET, JL. 2006. Cadmium affects tobacco cells by a series of three waves of reactive oxygen species that contribute to cytotoxicity. Plant Cell and Environment 29:1956- 1969. GISBERT, C., ROS, R., DE HARO, A., WALTER, D.J., BERNAL, M.P., SERRANO, R., NAVARROAVI, J. 2003. A plant genetically modified that accumulates Pb is especially promising for phytoremediation. BBRC 303: 440445. GOLDBOL, D.L., HUTTERMAN, A. 1985. Effect of zinc, cadmium and mercury on root elongation on Picea abies (Karst.) seedlings and the significance of these metals to forest die-back. Environmental Pollution 38:375-381. GODBOLD, DL.; KETTNER, C. (1991) Lead influences root growth and mineral nutrition of Picea abies seedlings. J.Plant Physiol. 139: 95.99. GOUIA, H., GHORBAL, M.H., MEYER, C. 2000. Effects of cadmium on activity of nitrate reductase and on other enzymes of nitrate assimilation pathway in bean. Plant Physiology and Biochemistry 38:629-638. GRENINGER, D.; KOLLONITSCH, V.; KLINE, C.H. (1974). Lead Chemicals. International Lead Zinc Research Organisation, New York. GUERINOT, ML. (2000). The ZIP family of metal transporters (review). Biochem. Biophys. Acta. 1465: 190.198. HALSTEAD, R.L., FINN, B.J., AND MACLEAN, A.J.. 1969. Extractability of nickel added to soils and its concentration in plants. Can. J. Soil Sci. 49:335. HAMER, D. 1986. Metallothionein. Annual Review of Biochemistry 55:913-951

91

HAN, F.X., BANIN, A., KINGERY, W.L., TRIPLETT, G.B., ZHOU, L.X., ZHENG, S. J. AND DING, W.X. 2003. New Approach to Studies of Heavy Metal Redistribution in Soil. Advances in Environmental Research, 8: 113-120. HARADA, E., CHOI, Y.E., TSUCHISAKA, A., OBATA, H., SANO, H. 2001. Transgenic tobacco plants expressing a rice cysteine synthase gene are tolerant to toxic levels of cadmium. Journal of Plant Physiol. 158: 655-661. HARVEY, P.J., CAMPANELLA, B.F., CASTRO, P.M.L., HARMS, H., LICHTFOUSE, E., SCHFFNER, A.R, SMRCEK, S. AND WERCK-REICHHART, D. 2002. Phytoremediation of Polyaromatic Hydrocarbons, Anilines and Phenols. Environmental Science and Pollution Research 9: 2947. HETTIARACHCHI, G.M. AND G.M. PIERZYNSKI. 2002. In situ stabilization of soil lead using phosphorus and manganese oxide: Influence of plant growth. J. Environ. Qual., 31:564-573 HUSSAIN, D., HAYDON, M.J., WANG, Y., WONG, E., SHERSON, S.M., CAMAKARIS, J., HARPER, J.F., COBBETT, C.S. 2004. P-type ATPase heavy metal transporters with roles in essential zinc metabolism in Arabidopsis. The Plant Cell 16: 13271339. HUANG, JW.; CUNNINGHAM, SD. (1996). Lead Phytoextraction: species variation in lead uptake and translocation. New Phytol. 134: 75.84. IANNACONE, J. AND GUTIRREZ, A. 1999. Ecotoxicidad de los agroqumicos lindano y clorpirifos sobre el nemtodo Panagrellus, la microalga Chlorella y el ensayo con Allium. Agricultura Tcnica (Chile), 59:85-95. IANNACONE, J., ALVARIO, L., CABALLERO, C. AND. SNCHEZ, J. 2000. Cuatro ensayos ecotoxicolgicos para evaluar lindano y clorpirifos. Gayana, 64:139-146. IANNACONE, O., ALVARIO F., L. 2005. Efecto ecotoxicolgico de tres metales pesados sobre el crecimiento radicular de cuatro plantas vasculares. Agricultura Tcnica (Chile) 65(2):198-203. INTAWONGSE, M. AND DEAN. J. 2006. Uptake of heavy metals by vegetable plants grown on contaminated soil and their bioavailability in the human gastrointestinal tract; Food Additives and Contaminants, 23: 3648 ISMAIL, B.S., FARIHAH, K. AND KHAIRIAH, J. 2005. Bioaccumulation of Heavy Metals in Vegetables from Selected Agricultural Areas. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology 74:320-327. JAMES B.R. AND BARTLETT R.J. 1984. Plant-soil interactions of chromium. J. Environ. Qual. 13:67-70. JAMES B.R. 2002. Chemical transformations of chromium in soils: Relevance to mobility, bio-availability and remediation. On line in: http://www.chromiumasoc.com/publications/crfile8feb02.htm JARVIS, MD.; LEUNG, DWM. (2002). Chelated lead transport in Pinus radiata: an ultrastructural study. Environ. Exp. Bot. 48: 21-32. JIANG, Q.Q., AND SINGH, B.R.. 1994. Effect of different forms and sources of arsenic on crop yield and arsenic concentration. Water Air Soil Pollut. 74:321-343. KABATA-PENDIAS, A.; PENDIAS, H. (1992). Trace elements in soils and plants. 2 nd edn. CRC Press, Boca Raton, London. KABATA-PENDIAS, A. 2000. Trace elements in soils and plants. Third Edition. CRC Press, Boca Raton, USA. 413 p. KIM, D.Y., BOVET, L., KUSHNIR, S., NOH, E.W., MARTINOIA, E., LEE Y. 2006. AtATM3 is involved in heavy metal resistance in Arabidopsis. Plant Physiol. 140: 922932.

92

KOEPPE, D.E. (1977). The uptake, distribution and effect of cadmium and lead in plants. Sci. Total Environ. 7: 197.205. KOEPPE, D.E.; MILLER R.J. (1970). Lead effects on corn mitochondrial respiration. Science. 167: 1376.1377. KOSOBRUKHOV, A.; KNYAZEVA, I.; MUDRIK, V. (2004). Plantago major plants responses to increase content of lead in soil: growth and photosynthesis. Plant Grow Regul. 42: 145-151. LAMOREAUX, RJ.; CHANEY, WR. (1978). The effect of cadmium on net photosynthesis, transpiration and dark respiration of excised silver maple leaves. Physiol. Plant. 43: 231.236. LANE, SD.; MARTIN, ES. (1977). A histochemical investigation of lead uptake in Raphanus sativus. New Phytol. 79: 281.286. LAPERCHE, V., LOGAN T.J., GADDAM P., AND TRAINA, S.J. 1997. Effect of apatite amendment on plant uptake of Pb from contaminated soil. Environ. Sci. Technol. 31:27452753. LASAT MM., 2000. The use of plants for the removal of toxic metals from contaminated soil. American Association for the Advancement of Science, Environmental Science and Engineering Fellow. 33 p. LAXEN, DPH.; HARRISON, RM. (1977). The highway as a source of water pollution: an appraisal of heavy metal lead. Water Res. 11: 1-11. LEE, S-Z.; CHANG, L.; YANG, H-H.; CHEN, C-M.; LIU, M-C. (1998). Absorption characteristics of lead onto soils. J. Haz. Mat. 63: 37-49. LEE, J., BAE, H., JEONG, J., LEE, J., YANG, Y., HWANG, I., MARTINOIA, E., LEE, Y. 2003. Functional expression of a bacterial heavy metal transporter in Arabidopsis enhances resistance to and decreases uptake of heavy metals. Plant Physiol. 133: 589596. LEE, S. AND MOON, H.S. 2003. Heavy Metals in the Bed and Suspended Sediments of Anyang River, Korea: Implications for Water Quality. Environmental Geochemistry and Health 25:433 - 452. LEE, S., MOON, J.S., KO, T.S., PETROS, D., GOLDSBROUGH, P.B., KORBAN, S.S. 2003. Overexpression of Arabidopsis Phytochelatin Synthase Paradoxically Leads to Hypersensitivity to Cadmium Stress. Plant Physiol. 131(2): 656663. LEE, M., LEE, K., LEE, J., NOH, E.W., LEE, Y. 2005. AtPDR12 Contributes to Lead Resistance in Arabidopsis. Plant Physiol. 138: 827-836. LERDA, D. 1992. The effect of lead on Allium cepa L. Mutation Research, 281:89-92. LEWIS, M.A. 1995. Use of freshwater plants for phytotoxicity testing: a review. Environmental Pollution, 87:319-336. LIAO, M.T., HEDLEY, M.J., WOOLLEY, D.J., BROOKS, R.R. AND NICHOLS, M.A. 2000a. Copper uptake and translocation in chicory (Cichorium intybus L. cv. Grasslands Puna) and tomato (Lycopersicon esculentum Mill. cv. Rondy) plants grown in NFT system. I. Copper uptake and distribution in plants. Plant and Soil. 221: 135-142. LIAO, M.T., HEDLEY, M.J., WOOLLEY, D.J., BROOKS, R.R. AND NICHOLS, M.A. 2000b. Copper uptake and translocation in chicory (Cichorium intybus L. cv Grasslands Puna) and tomato (Lycopersicon esculentum Mill. cv Rondy) plants grown in NFT system. II. The role of nicotianamine and histidine in xylem sap copper transport. Plant and Soil. 223: 243-252. LIN, H.T. 1991. A Study on the Establishment of Heavy Metal Tolerance in Soil through the Heavy M etal concentration of crop. Unpub. M.Sc. Thesis., National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan. LIN, Y.P. 2002. Multivariate geostatistical methods to identify and map spatial variations of soil heavy metals. Environmental Geology 42:1-10.

93

LIU, D., ZHAI, L., JIANG, W. AND WANG, W. 1995. Effects of Mg2+, Co2+, and Hg2+ on the nucleus and nucleolus in the root tip cells of Allium cepa. Bulletin Environmental Contamination Toxicology, 55:779-787. LONG, X.X., YANG, X.E., NI, W.Z., YE, Z.Q., HE, Z.L., CALVERT, D.V. AND STOFFELLA, J.P. 2003. Assessing Zinc Thresholds for Phytotoxicity and Potential Dietary Toxicity in Selected Vegetable Crops. Communications in Soil Science and Plant Analysis 34:1421-1434. LPEZ, P., GUZMN, F.A., SANTOS, E.M., PRIETO, F., ROMN, A.D. 2005. Evaluacin de la calidad fsica de diferentes variedades de cebada (hordeum sativum jess) cultivadas en los estados de Hidalgo y Tlaxcala, Mxico. Revista Chilena de Nutricin, 32: 247-253. LOZANO-RODRGUEZ, E, HERNNDEZ, L.E., BONAY, P., CRPENA-RUIZ, R.O. 1997 Distribution of Cd in shoot, and root tissues of maize and pea plants: physiological distribution. Journal of Experimental Botany 48:123-128. LUCHO, C.A., LVAREZ, M., BELTRN, R.I., PRIETO, F. AND POGGI, H. 2005a. A multivariate analysis of the accumulation and fractionation of major and trace elements in agricultural soils in Hidalgo State, Mexico irrigated with raw wastewater. Environmental International, On Line: 0160- 4120-D 2004 doi:10.1016/j.envint.2004.08.002. LUCHO, C.A., PRIETO, F., DEL RAZO, L.M., RODRGUEZ, R. AND POGGI, H. (2005B). Chemical fractionation of boron and heavy metals in soils irrigated with wastewater in central Mexico. Agriculture, Ecosystems and Environment, 108: 57 71. LLUGANY. M., TOLR. R, POSCHNRIEDER.C., BARCEL. J. 2007. Hiperacumulacin de metales: Una ventaja para la planta y para el hombre?. Ecosistemas 16 (2): 4-9. MACDIARMID, C.W., GAITHER, L.A., EIDE, D. 2000. Zinc transporters that regulate vacuolar zinc storage in Saccharomyces cerevisiae. EMBO J. 19(12): 2845-55. MCLAUGHLIN, M.J., SINGH, B.R. 1999. Cadmium in Soils and Plants. Kluwer Academic Publishers. Dordrecht, The Netherlands. MAHDY A. M., ELKHATIB, E.A. AND FATHI, N.O. 2007. Cadmium, Copper, Nickel, and Lead Availability in Biosolids-amended Alkaline Soils, Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 1: 354-363, 2007. MAHLER, R.L. 2003. General overview of nutrition for field and container crops. In: Riley, L. E.; Dumroese, R. K.; Landis, T. D., Tech Coords. National Proceedings: Forest and Conservation Nursery Associations. 2003 June 9 12; Coeur dAlene, ID; and 2003 July 14 17; Springfield, IL. Proc. RMRS-P-33. Fort Collins, CO: U.S. Department of Agriculture, Forest Service, Rocky Mountain Research Station. MAITRA, P.; MUKHERJI, S. (1977). Effect of lead on nuclei acid and protein contents of rice seedlings and its interaction with IAA and GA3 in different plant systems. Ind. J. Exp. Biol. 17: 29.31. MALLA. R., TANAKA, Y. AND MORI, K.L. 2007. Shortterm effect of Sewage Irrigation on Chemical Build Up in Soils and Vegetables. The Agricultural Engineering International: The CIGR Ejoural. Manuscript LW 07 006 Vol. IX, August, 2007. MALKOWSKI, E.; KITA, A.; GALAS, W.; KAREZ, A.; MICHAEL, K. (2002). Lead distribution in corn seedlings (Zea mays L.) and its effect on growth and the concentration of potassium and calcium. Plant Growth Regul. 37: 69.76. MAPANDA, F., MANGWAYANA, E.N., NYAMANGARA, J. AND GILLER, K.E. 2005. The effect of long-term irrigation using wastewater on heavy metal contents of soils under vegetables in Harare, Zimbabwe. Agriculture, Ecosystems Environment 107:151-165.

94

MARIN, A.R., MASSCHELEYN, P.H., AND PATRICK, W.H. JR. 1992. The influence of chemical form and concentration of arsenic on rice growth and tissue arsenic concentration. Plant and Soil 139:175-183. MARMIROLI, M., ANTONIOLI, G., MAESTRI, E., MARMIROLI, N. 2005. Evidence of the involvement of plant ligno-cellulosic structure in the sequestration of Pb: an X-ray spectroscopy-based analysis. Environ. Pollut. 134: 217227. MARTIN, C.W. 2000. Heavy Metals Trends in Floodplain Sediments and Valley Fill. Catena 39, 53-68. MARTNEZ, M., BERNAL, P., ALMELA, C., VLEZ, D., GARCA-AGUSTN, P., SERRANO, R., NAVARRO-AVI, J. 2006. An engineered plant that accumulates higher levels of heavy metals than Thlaspi caerulescens with yields of 100 times more biomass in mine soils. Chemosphere 64: 478485. MARSCHNER, P.; GODBOLD, DL.; JUTSCHHE, G. (1996). Dynamics of lead accumulation in mycorrhizal Norway spruce (Picea abies (L.) karst.). Plant Soil. 178: 239-245. MISHRA, A.; CHOUDHARI, MA. (1998). Amelioration of lead and mercury effects on germination and rice seedling growth by antioxidants. Biol. Plant. 41: 469.473. MOHANTY, N.; VASS, I.; DEMETER, S. (1989). Copper toxicity affects Photosystem II electron transport at the secondary quinone aceptor, QB. Plant Physiol. 90: 175. 179. MONTES-BOTELLA, C., TENORIO, M.D. 2003. Water Characterization and Seasonal Heavy Metal Distribution in the Odiel River (Huelva, Spain) by Means of Principal Component Analysis. Archives of Environmental Contamination Toxicology 45:436. MOOR, C., LYMBEROPOULOU, T. AND DIETRICH, V.J. 2001. Determination of Heavy Metals in Soils, Sediments and Geological Materials by ICP-AES and ICP-MS. Microchimica Acta 136:123-128. MORAL, R., PALACIOS, G., GMEZ, I., NAVARRO, J. AND MATAIX, J. 1994. Distribution and accumulation of heavy metals (Cd, Ni and Cr) in tomato plant. Fresenius Environmental Bulletin, 3:395-399. MORAL, R., GILKES, R.J. AND MORENO-CASELLES, J. 2002. A comparison of extractants for heavy metals in contaminated soils from spain. Communications in Soil Science and Plant Analysis, 33:2781-2791. MOREL, JL.; MENCH, M.; GUCKERT, A. (1986). A measurement of Pb, Cu, Cd binding with mucilage exudates from maize (Zea mays L.) roots. Biol. Fertil. Soils. 2: 29-34. NIKAZAR, M.; AFSHARI, N. (2005). Eliminacin de metales pesados Pb(), Cd(), Cr(VI)) de disoluciones acuosas por adsorcin con residuos slidos agrcolas (paja y salvado de trigo). En: Afinidad LXII, 518, julio.agosto. NORVELL, W.A., WU, J., HOPKINS, D.G., WELCH, R. 2000. Association of cadmium in durum wheat grain with soil chlorine and chelate-extractable soil cadmium. Soil Science Society of America Journal 64:2162-2168 OBROUCHEVA, NV.; BYSTROVA, EI.; IVANOV, VB.; ANUPOVA, OV.; SEREGIN, IV. (1998). Root growth responses to lead in young maize seedlings. Plant Soil. 200: 55-61. OLMOS, E., MARTINEZ-SOLANO, J.R., PIQUERAS, A., HELLIN, E. 2003. Early steps in the oxidative burst induced by cadmium in cultured tobacco cells (BY-2 line). Journal of Experimental Botany 54:291-301. ONEILL, P. 1995. Arsenic. In: Heavy Metals in Soils; Alloway, B. J., Ed.; Blackie Academic & Professional: London, U.K., 1995; pp 105-121. OPAZO, J., FERNNDEZ, L.Y CARRASCO, M.A. 2000. Ensayos biolgicos en macetas con trbol subterrneo en suelos del secano costero, VI Regin de Chile. II. Exploracin de

95

disponibilidad de fsforo, azufre, boro, molibdeno y su relacin con la nodulacin. Agric. Tc., oct. 2000, vol.60, no.4, p.399-414. ISSN 0365-2807. Ortiz D.F., Ruscitti, T., McCue, K.F., Ow, D.W. 1995. Transport of metal-binding peptides by HMT1, a fission yeast ABC-type vacuolar membrane protein. Journal of Biological Chemistry 270:4721-4728. PAGNANELLI, F., MOSCARDINI, E., GIULIANO, V. AND TORO, L. 2004. Sequential Extraction of Heavy Metals in River Sediments of an Abandoned Pyrite Mining Area: Pollution Detection and Affinity Series. Environmental Pollution, 132:189-201. PAIVOKE, AEA. (2002). Soil lead alters phytase activity and mineral nutrient balance of Pisum sativum. Environm. Exp. Bot. 48: 61.73. PAL, R. AND NANDI, S. 1990. Cytological abnormalities induced by mercury water pollutants on Allium cepa. Bulletin Environmental Contamination Toxicology, 45:767-774. PARK, S., CHENG, N.H., PITTMAN, J.K., YOO, K.S., PARK, J., SMITH, R.H., HIRSCHI, K.D. 2005. Increased Calcium levels and prolonged shelf life in tomatoes expressing Arabidopsis H+/Ca2+ transporters. Plant Physiology 39:1194-1206. PARYS, E.; ROMANOWASKA, E.; SIEDLECKA, M.; POSKUTA, J. (1998). The effect of lead on photosynthesis and respiration in detached leaves and in mesophyll protoplast of Pisum sativum. Acta Physiol. Plant. 20: 313.322. PATRA M. AND SHARMA A. 2000. Mercury Toxicity. In: Plants. Bot. Rev. 66:379-422 PEARSON, J.N., RENGEL, Z., JENNER, C.F. AND GRAHAM, R.D. 1996. Manipulation of xylem transport affects Zn and Mn transport into developing wheat grains of cultured ears. Physiologia Plantarum. 98: 229-234. PREZ, L., MORENO, A.M. Y GONZLEZ, J. 2004. ndices de acumulacin de metales pesados en granos y hojas de trigo. Schironia. N 3: 5-9. PINEDA, H.R. 2004. Presencia de Hongos Micorrzicos Arbusculares y Contribucin de Glomus Intraradices en la Absorcin y Translocacin de Cinc y Cobre en Girasol ( Helianthus Annuus L.) Crecido en un Suelo Contaminado con Residuos de Mina. Tesis para Obtener el Grado de Doctor en Ciencias Universidad de Colima. Tecoman, Colima. PINTO, E., SIGAUD-KUTNER, T.C.S., LEITO, M., OKAMOTO, O.K., MORSE, D., COLEPICOLO, P. 2003. Heavy metalinduced oxidative stress in algae. Journal of Phycology 39:1008-1018. PINTO, A.P., MOTA, A.M., DE VARENNES, A., PINTO, F.C. 2004. Influence of organic matter on the uptake of cadmium, zinc, copper and iron by sorghum plants. Science of the Total Environment 326:239-274. POMPONI, N., CENSI, V., DI GIROLAMO, U., DE PAOLIS, A., DI TOPPI, L.S., AROMOLO, R., CONSTANTINO, P., CARDARELLI, M. 2006. Overexpresion of Arabidopsis phytochelatin synthase in tobacco plants enhances Cd2+ tolerance and accumulation but not translocation to the shoot. Planta 223:180-190. POSCHENRIEDER C., GUNS, B., BARCEL, J. 1989. Influence of cadmium on water relations, stomatal resistance, and abscisic acid content in expanding bean leaves. Plant Physiology 90:1365-1371. POSCHENRIEDER, CH.; BARCEL, J. (2003). Estrs por metales pesados. En M.J.Reigosa, N.Pedro y A. Snchez-Moreiras, eds. La ecofisiologa vegetal: Una Ciencia de Sntesis, 413442. Paraninfo S.A. Madrid, Espaa. POSCHENRIEDER, CH.; DONCHEVA, S.; SONBOL, F.; AMENS, M.; RIGAU, J.; BARCEL, J. (2004). Microtubule organization but not Tub1 and Tub3 expressions are primary targets of aluminium toxicity in maize root tips. In: Nutrio mineral. Causas e consequncias da

96

depndencia da fertilizaao. M.A. (Martins Lono, C.Cruz edits). Facultad de ciencias. Universidad de Lisboa. pp. 5-9. PRASAD, M.N.V. AND FREITAS, H.M. 2003. Metal Hyperaccumulation In Plants Biodiversity Prospecting For Phytoremediation Technology. Electronic Journal of Biotechnology 6 (3): 285 321. PRIETO, F., BEZ, A.O. SCOOT, W., GAYTN, J. C. AND ZIGA, A. 2006. Acumulacin, toxicidad y teratognesis provocada por presencia de arsnico en aguas en el pez cebra (Danio rerio). Revista AquaTIC, Revista cientfica de la Sociedad Espaola de Acuicultura. 24: 72-85. PRIETO, F., LUCHO, C.A., POGGI, H., ACEVEDO, O. AND BARRADO, E. 2007A. Caracterizacin Fisicoqumica y Extraccin Secuencial De Metales y Elementos Trazas En Suelos De La Regin Actopan-Ixmiquilpan Del Distrito De Riego 03, Valle De Mezquital, Hidalgo, Mxico. Ciencia ErgoSun. 14:69-80. PRIETO G., F., MARTNEZ P., F.H., MNDEZ, M.A. AND PRIETO, M.J. 2007B. Presencia de metales pesados en cultivos de Actopan e Ixmiquilpan, Valle del Mezquital, Mxico, por riego con aguas negras. Revista Latino Americana Recursos Naturales. Mxico 3: 100-111 PRINCE, W.S.P.M., KUMAR, S.P., DOBERSCHUTZ, K.D., SUBBURAM, V. 2002. Cadmium toxicity in mulberry plants with special reference to the nutritional quality of leaves. Journal of Plant Nutrition 25:689-700. QI-TANG, W., Z, X., MENG, Q., GERARD, E. AND MOREL, J.L. 2004. Characterization of cadmium desorption in soils and its relationship to plant uptake and cadmium leaching. Plant and Soil, 258:217-226. RASKIN, I., SMITH, R.D., SALT, D. 1997. Phytoremediation of metals: using plants to remove pollutants from the environment. Current Opinion in Biotechnology 8:221-226. RASHID, P.; MUKHERJI, S. (1991). Changes in catalase and ascorbic oxidase activities in response to lead nitrate treatments in mungbean. Ind. J. Plant Physiol. 34: 143.146. REESE, RN.; ROBERTS, LW. (1985). Effects of cadmium on whole cell and mitochondrial respiration in tobacco cell suspension cultures (Nicotiana tobacum L. Var. Xanthi). J.Plant Physiol. 120: 123.130. ROBINSON, B.H., CHIARUCCI, A., BROOKS, R.R., PETIT, D., KIRKMAN, J.H. AND GREGG, P.E.H. 1997. The nickel hyperaccumulator plant Alyssum bertolonii as a potential agent for phytoremediation and phytomining of nickel. Journal Geochemical Exploration, 59, 75-86. RODRGUEZ O., J.C., RODRGUEZ, F.H., LIRA R.G., DE LA CERDA, JM., LARA M., J.L. 2006. Capacidad de seis especies vegetales para acumular plomo en suelos Contaminados. Revista Fitotecnia Mexicana, 29:239-245. RODRGUEZ-ORTIZ, J.C., VALDEZ-CEPEDA, R.D., LARA, J.L., RODRGUEZ, H., VZQUEZ, R.E., MAGALLANES-QUINTANAR, R., GARCA-HERNNDEZ, J.L. 2006. Soil Nitrogen fertilization effects on phytoextraction of Cd and Pb by tobacco ( Nicotiana tabacum L.). Bioremediation Journal 10: 105-114 RODRGUEZ-SERRANO, M., ROMERO-PUERTAS, M.C., ZABALZA, A., CORPAS, F.J., GMEZ, M., DEL RO, L.A., SANDALIO, L.M. 2006. Cadmium effect on the oxidative metabolism of pea roots. Imaging of ROS and NO production in vivo. Plant Cell and Environment 29:15321544. M. RODRQUEZ-SERRANO , N. MARTNEZ-DE LA CASA , M.C. ROMERO-PUERTAS , L.A. DEL RO , L.M. SANDALIO. Rev. Ecosistemas 17 (3): 139-146.

97

ROMANOWSKA, E.; IGAMBERDIEV, AU. ; PARYS, E. ; GARDESTRM, P. (2002). Stimulation of respiration by Pb in detached leaves and mitochondrial of C3 and C4 plants. Physiol. Plant. 116: 148.154. ROMERO-PUERTAS, M.C. 2002. Metabolismo de especies de oxgeno reactivo en plantas de guisante (Pisum sativum L.) y enperoxisomas de hojas en condiciones de estrs por cadmio . Tesis Doctoral, Universidad de Granada. Espaa. ROMERO-PUERTAS, M.C., CORPAS, F.J., RODRGUEZ-SERRANO, M., GMEZ, M., DEL RO, L.A., SANDALIO, L.M. 2007. Differential expression and regulation of antioxidative enzymes by cadmium in pea plants. Journal of Plant Physiology 164:1346-1357. ROMERO-PUERTAS, M.C., PALMA, J.M., GMEZ, M., DEL RO, L.A., SANDALIO, L.M. 2002. Cadmium causes the oxidative modification of proteins in pea plants. Plant Cell and Environment 25:677-686. ROMERO-PUERTAS, M.C., RODRGUEZ-SERRANO, M., CORPAS, F.J., GMEZ, M., DEL RO, L.A., SANDALIO, L.M. 2004. Cadmiuminduced subcellular accumulation of O2 - and H2O2 in pea leaves. Plant Cell and Environment 27:1122-1134. ROONEY, C.P., ZHAO, F.J. AND MCGRATH, S.P. 2006. Soil factors controlling the expression of copper toxicity to plants in a wide range of European soils. Environmental Toxicology and Chemistry, 25: 726- 732. ROSA, C.E.V., SIERRA, M. AND RADETSKI, C.M. 1999. Use of plant tests in the evaluation of textile effluent toxicity. Ecotoxicology Environmental Research, 2:56-61. RUDAKOVA, EV.; KARAKIS, KD.; SIDORSHINA, ET. (1988) The role of plant cell walls in the uptake and accumulation of metal ions. Fiziol. Biochim. KultRast. 20: 3. 12. SALT, D.E., WAGNER, G.J. 1993. Cadmium transport across tonoplast of vesicles from oat roots. Evidence for a Cd2+/H+ antiport activity. Journal of Biological Chemistry 268:1229712302. SALT, D.E., PRINCE, R.C., PICKERING, I.J., RASKIN, I. 1995. Mechanism of cadmium mobility and accumulation in indian mustard. Plant Physiology 109:1427-1433. SANCHEZ, M.; AGUIRREOLA, J. (1993). Relaciones hdricas. En: Fisiologa y Bioqumica Vegetal. Azcn-Bieto, J. M. Talon., (eds). Interamericana-McGrawHill. pp.49.90. SANDALIO, L.M., DALURZO, H.C., GOMEZ, M., ROMERO-PUERTAS, M.C., DEL RO, L.A. 2001. Cadmium-induced changes in the growth and oxidative metabolism of pea plants. Journal of Experimental Botany 52:2115-2126. SANIT DI TOPPI, L., GABBRIELLI, R. 1999. Response to cadmium in higher plants. Environmental and Experimental Botany 41:105-130. SANTOS, A., ALONSO, E., CALLEJN, M. AND JIMNEZ, J.C. 2002. Distribution of Zn, Cd, Pb and Cu Metals in Groundwater of the Guadiamar River Basin. Water, Air, Soil Pollution, 134:273-283. SAUERBECK, D.R. 1991. Plant, element and soil properties governing uptake and availability of heavy metals derived from sewage sludge. Water, Air Soil Pollution 57/58:227237. SAUQUILLO, A., RIGOL, A. AND RAURET, G. 2003. Overview of the use of Leaching Extraction Tests for Risk Assessment of Trace Metals in Contaminated Soils and Sediments. Trends in Analytical Chemistry, 22: 152-159. SAUVE, S., HENDERSON, W. AND ALLEN, H.E. 2000. Solid- Solution Partitioning of Metals in Contaminated Soils: Dependence on pH, Total Metal Burden, and Organic Matter. Environmental Science Technology, 34:11251131. SENGAR, RS.; PANDEY, M. (1996). Inhibition of chlorophyll biosynthesis by lead in greening Pisum sativum leaf segments. Biol. Plant. 38: 459.462.

98

SEREGIN, IV.; IVANIOV, VB. (2001). Physiological aspects of cadmium and lead toxic effects on higher plants. Russ. J. Plant Physiol. 48: 606.630. SEREGIN, IV.; SHPIGUN, LK.; IVANIOV, VB. (2004). Distribution and toxic effects of cadmium and lead on maize roots. Russ. J. Plant Physiol. 51: 525.533. SERSEN, F.; KRALOVA, K.; BUMBALOVA, A. (1998). Action of mercury on the photosynthetic apparatus of spinach chloroplasts. Photosynthetica. 35: 551.559. SHAH, K., NONGKYNRIH, J.M. 2007. Metal hyperaccumulator and bioremediation. Biologia Plantarum 51:618-634. SHANKER, K., MISHRA, S., SRIVASTAVA, S., SRIVASTAVA, R., DASS, S., PRAKASH, S. AND SRIVASTAVA, M.M. 1996. Study of mercury-selenium (Hg-Se) interactions and their impact on Hg uptake by the radish ( Raphanus sativus) plant. Food Chemistry Toxicology, 34:883886. SHARMA, P.; DUBEY, R.S. (2004). Ascorbate preroxidase from rice seedlings: properties of enzyme isoforms, effects of stresses and protective roles of osmolytes. Plant Sci. 167: 541.550. SHMAESFSKY, BRIAN R. Heavy Metal Tolerant Transgenic Plants. (2003). Nov. ISB News Reports. Department of Biology and Environmental Sciences. King Wood college, Kingwood. SILVERBERG, BA. (1975). Ultraestructural localization of lead in Stigeoclonium tenue (Chlorophyseae Ulotrichales) as demonstrated by cytochemical and X-ray microanalysis. Phycologia. 14: 265.274. SINGH, O.V., LABANA, S., PANDEY, G., BUDHIRAJA R. AND JAIN, R.K. 2003. Phytoremediation: An Overview of Metallic Ion Decontamination From Soil. Applied Microbiology and Biotechnology. 61: 405-412. SINGH, P.K., TEWARI, R.K. 2003. Cadmium toxicity induced changes in plant water relations and oxidative metabolism of Brassica juncea L. plants. Journal of Environmental Biology 24:107-112. SMOLDERS, A.J., LOCK, R.A., VAN DER VELDE, G., MEDINA, R.I. AND ROELOFS, J.G. 2003. Effects of Mining activities on Heavy Metal Concentrations in Water, Sediment, and Macroinvertebrates in Different Reaches of the Pilcomayo River, South America. Archives of Environmental Contamination and Toxicology 44:314. SONG, W.Y., SOHN, E.J., MARTINOIA, E., LEE, Y.J., YANG, Y.Y., JASINSKI, M., FORESTIER, C., HWANG, I. , LEE, Y. 2003. Engineering tolerance and accumulation of lead and cadmium in transgenic plants. Nature Biotech. 21: 914-919. SPAIN, A. 2003. Implications Of Microbial Heavy Metals Tolerance in the Environment. Reviews In Undergraduate Research, 2:1-6. STEFANOV, K.; SEIZOVA, K.; POPOVA, I.; PETKOV, VL.; KIMENOV, G.; POPOV, S. (1995). Effects of lead ions on the phospholipid composition in leaves of Zea mays and Phaseolus vulgaris. J. Plant Physiol. 147: 243-246. STEVENS, D.P., MCLAUGHLIN, M.J., HEINRICH, T., 2003. Determining toxicity of lead and zinc run off in soils: salinity effects on metal partitioning and on phytotoxicity. Environmental Toxicology and Chemistry 22: 3017-3024. STOHS, S.J., BAGCHI, D. 1995. Oxidative mechanisms in the toxicity of metal ions. Free Radical Biology and Medicine 18:321- 336. TABOADA-CASTRO, M.M., DIGUEZ-VILLAR, A. AND TABOADA-CASTRO, M.T. 2002. Effect of soil use and agricultural practices on heavy metal levels in surface waters. Communications in Soil Science and Plant Analysis 33:2833.

99

TAHRI, M., BENYACH, F. AND BOUNAKHLA, M. 2005. Multivariate analysis of heavy metal contents in soils, sediments and water in the region of Meknes (central Morocco). Environmental Monitoring and Assessment 102:405-417. TAKANO, J., MIWA, K., YUAN, L., VON WIRN, N., FUJIWARA, T. 2005. Endocytosis and degradation of BOR1, a boron transporter of Arabidopsis thaliana, regulated by boron availability. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 1227612281. TERRY N., ZAYED, A. M., DE SOUZA, M. P., AND TARUN, A. S. 2000. Selenium in higher plants. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 51:40132. THOMINE, S., WANG, R., WARD, J.M., CRAWFORD, N.M., SCHROEDER, J.I. 2000. Cadmium and iron transport by members of a plant metal transporter family in Arabidopsis with homology to Nramp genes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 4991-4996. TOMSIG, JL.; SUSZKIW, JB. (1991). Permeation of Pb through calcium channels: fura-2 measurements of voltage-and dihydropyridine-sensitive Pb entry in isolated bovine chromaffin cells. Biochim. Biophys. Acta 1069: 197.200. TU SHU, I.; BROUILLETTE, JN. (1987). Metal ion inhibition of corn root plasmamembrane ATPase. Phytochemistry. 26: 65.69. VAN ASSCHE, F.; CLIJSTERS, H. (1990). Effects of metals on enzyme activity in plants. Plant Cell Envir. 13: 195-206. VERMA, S.; DUBEY, RS. (2003). Lead toxicity induces lipid peroxidation and alters the activities of antioxidant enzymes in growing rice plants. Plant Sci. 164: 645-655. VIG, K., MEGHARAJ, M., SETHUNATHAN, N., NAIDU, R. 2003. Bioavailability and toxicity of cadmium to microorganisms and their activities in soil: a review. Advances in Environmental Research, 8: 121-135. VODNIK, D.; JENTSCHKE, G.; FRITZ, E.; GOGALA, N.; GODBOLD, DL. (1999). Root-applied cytokinin reduces lead uptake and effects its distribution in Norway spruce seedlings. Physiol. Plant. 106: 75.81. WALKER, WM.; MILLER, JE.; HASSETT, JJ. (1977). Effect of lead and cadmium upon the calcium, magnesium, potassium and phosphorus concentration in young corn plants. Soil Sci. 124: 145.151. WALSH, G.E., WEBER, D.E., SIMON, T.L. AND BRASHERS, L.K. 1991. Toxicity test of effluents with marsh plants in water and sediments. Environmental Toxicology Chemistry, 10:517. WANG, W. 1991. Literature review on higher plants for toxicity testing. Water Air Soil Pollution, 59:381-400. WANG, Y. P., AND CHAO, C.C. 1992. Effects of Vesicular- Arbuscular Mycorrhizae and Heavy Metals on the Growth of Soybean and Phosphate and Heavy Metal Uptake by Soybean in Major Soil Groups of Taiwan. Journal Agricultural Association China New Series 157: 6-20. WANG, Y.P., CHEN, Z.S., LIU, W.S., WU, T.H., CHAOU, C.C., LI, G.C. AND WANG, T.T. 1994. Criteria of soil quality- establishment of heavy metal contents in different categories. Final report of fouryear project. Project reports of EPA/ROC. Grant No. EPA-83-E3H1-09-02. 54 pp. WANG, Q.R., CUI, Y.S., LIU, X.M., DONG, Y.T. AND CHRISTIE, P. 2003. Soil Contamination and plant Uptake of Heavy Metals Polluted sites in China. Journal of Environmental Geochemistry and Health 38:823-838. WELCH, R.M. 1995. Micronutrient nutrition of plants. Critical Reviews in Plant Science. 14: 49-82.

100

WENG, L.P., LEXMOND, T.M., WOLTHOORN, A., TEMMINGHOFF, E.J.M. AND VAN RIEMSDIJK, W.H., 2003. Phytotoxicity and bioavailability of nickel: chemical speciation and bioaccumulation. Environmental Toxicology and Chemistry 22: 2180- 2187. WENG, L.P., WOLTHOORN, A., LEXMOND, T.M., TEMMINGHOFF, E.J.M. AND VAN RIEMSDIJK, W.H., 2004. Understanding the effects of soil characteristics on phytotoxicity and bioavailability of nickel using speciation models. Environmental Science and Technology 38, 156-162. WIERZBICKA, M.; ANTOSIEWICZ, D. (1993). How lead can easily enter the food chain.a study of plant roots. Sci. Total Environ. Suppl. 1: 423.429. WIERZBICKA, M. (1994). Resumption of mitotic activity in Allium cepa root tips during treatment with lead salts. Environ. Exp. Bot. 34: 173.180. WIERZBICKA, M. (1998). Lead in the apoplast of Allium cepa L. root tips-ultra structural studies. Plant Sci. 133: 105.119. WIXSON, N.G.; DAVIES, B.E., (1994). Environ. Sci. Technol., 28: 26A-31A WUA, F., ZHANG, G., DOMINY, P. 2003. Four barley genotypes respond differently to cadmium: lipid peroxidation and activities of antioxidant capacity. Environmenatl and Experimental Botany 50:63-78. YANG, X-E., JIN, X-F., FENG, Y., ISLAM, E., 2005. Molecular mechanisms and genetic basis of heavy metal tolerance/hyperaccumulation in plants. Journal of International Plant Biology 47:1025-1035. YANG, Y-Y.; JUNG, J-Y.; SONG, W-Y.; SUH, HS.; LEE, Y. (2000). Identification of rice varieties with high tolerance or sensitivity to lead and characterization of the mechanism of tolerance. Plant Physiol. 124: 1019.1026. YO-YOUNG, KIM.; YOUNG-YELL, YANG.;YOUNG-SOOK, LEE. (2002). Pb and Cu uptake in rice roots. Physiologia Plantarum. Nov. V.116. p. 368. XIANG, C., WERNER, B.L., CHRISTENSEN, E.M., OLIVER, D.J. 2001. The biological functions of glutathione revisited in Arabidopsis transgenic plants with altered glutathione levels. Plant Physiol. 126:5 64574. ZHAO, F.J., ROONEY, C.P., ZHANG, H., MCGRATHT, S.P., 2006. Comparison of soil solution speciation and diffusive gradients in thin-films measurement as an indicator of copper bioavailability to plants. Environmental Toxicology and Chemistry, 25: 733- 742. ZHOU, Z.Y., FAN, Y.P. AND WANG, M.J. 2000. Heavy metal contamination in vegetables and their control in china. Archives of Environmental Contamination and Toxicology 16 - 2:239.

101