Professional Documents
Culture Documents
ﻫﺪف از آزﻣﺎﻳﺶ :ﺑﺮرﺳﻲ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﻫﺎ از ﻧﻈﺮ ﻛﻴﻔﻲ و ﻛﻤﻲ و ﺑﺪﺳﺖ آوردن ﻧﺘﻴﺠﻪ در ﻣﻮرد ﻣﺠﻬﻮل
1
ﻫﺮ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ،از ﻳﻚ ﻛﺮﺑﻦ ﻧﺎﻣﺘﻘﺎرن ﺑﻪ ﻧﺎم ﻛﺮﺑﻦ αﺗﺸﻜﻴﻞ ﻳﺎﻓﺘﻪ اﺳﺖ ﻛﻪ ﺑﺎ ﭼﻬﺎر ﮔﺮوه ﻣﺨﺘﻠﻒ ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻴﻞ ) (COOHاﺗﻢ ﻫﻴﺪروژن ،ﮔﺮوه
آﻣﻴﻨﻪ ﺑﺎزي ) (-NH2و ﻳﻚ زﻧﺠﻴﺮه ﻏﻴﺮ ﺟﺎﻧﺒﻲ ) (-Rﭘﻴﻮﻧﺪ ﺑﺮﻗﺮار ﻣﻲﻛﻨﺪ .رﻳﺸﻪ Rﻣﻤﻜﻦ اﺳﺖ ﻳﻚ زﻧﺠﻴﺮه ﻛﺮﺑﻨﻲ و ﻳﺎ ﻳﻚ ﺣﻠﻘﻪ ﻛﺮﺑﻨﻲ ﺑﺎﺷﺪ.
ﻋﻮاﻣﻞ دﻳﮕﺮي ﻣﺎﻧﻨﺪ اﻟﻜﻞ ،آﻣﻴﻦ ،ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻴﻞ و ﻧﻴﺰ ﮔﻮﮔﺮد ﻣﻲﺗﻮاﻧﻨﺪ در ﺳﺎﺧﺘﻤﺎن رﻳﺸﻪ Rﺷﺮﻛﺖ ﻛﻨﻨﺪ .زﻧﺠﻴﺮه ﺟﺎﻧﺒﻲ ﺧﻮد ﭼﻨﺪﻳﻦ اﺗﻢ ﻛﺮﺑﻦ
دارد و آﻧﻬﺎ را ﺑﻪ ﺗﺮﺗﻴﺒﻲ ﻛﻪ از ﻛﺮﺑﻦ آﻟﻔﺎ ،ﻓﺎﺻﻠﻪ ﻣﻲﮔﻴﺮﻧﺪ ،ﺑﺎ ﺣﺮوف ﺑﺘﺎ ) ، (βﮔﺎﻣﺎ ) (γو دﻟﺘﺎ ) (δﻧﺸﺎن ﻣﻲدﻫﻨﺪ .اﮔﺮ در ﺣﺎﻟﻲ ﻛﻪ ﻋﺎﻣﻞ
COOHروي ﻛﺮﺑﻦ آﻟﻔﺎ ﻗﺮار داد ﻋﺎﻣﻞ NH2روي ﻛﺮﺑﻨﻬﺎﻳﻲ ﻏﻴﺮ آﻟﻔﺎ ﻗﺮار ﮔﻴﺮد .ﻧﻮع اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﺑﻪ γ ،βﻳﺎ δﺗﻐﻴﻴﺮ ﺧﻮاﻫﺪ ﻛﺮد.
اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﻫﺎي آزاد ﺑﻪ ﻣﻘﺪار ﺑﺴﻴﺎر ﻧﺎﭼﻴﺰ در ﺳﻠﻮﻟﻬﺎ وﺟﻮد دارﻧﺪ .ﺑﻴﺸﺘﺮ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﻫﺎي آﻟﻔﺎ در ﺳﻨﺘﺰ ﭘﺮوﺗﺌﻴﻦ ﺷﺮﻛﺖ ﻣﻲﻛﻨﻨﺪ ،در ﺻﻮرﺗﻲ ﻛﻪ
از ﻧﻈﺮ ﺗﻐﺬﻳﻪ ،اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪﻫﺎ را ﺑﻪ دو دﺳﺘﻪ ﺿﺮوري و ﻏﻴﺮ ﺿﺮوري ﺗﻘﺴﻴﻢ ﻣﻲﻛﻨﻨﺪ .اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ ﺿﺮوري ،اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪاي ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻛﻪ
ﺳﻠﻮﻟﻬﺎ ﻗﺎدر ﺑﻪ ﺳﻨﺘﺰ ﻧﻴﺴﺘﻨﺪ ،در ﺻﻮرﺗﻲ ﻛﻪ اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ ﻏﻴﺮ ﺿﺮوري ﺗﻮﺳﻂ ﺳﻠﻮﻟﻬﺎ از ﺳﺎﻳﺮ ﻣﻮاد ﺳﺎﺧﺘﻪ ﻣﻲﺷﻮﻧﺪ .ﻧﻮع اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ
ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎ درﺷﺖ ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻬﺎﻳﻲ ﻫﺴﺘﻨﺪ ﺑﺎ وزن ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ 5000داﻟﺘﻮن ﻛﻪ از ﭘﻴﻮﻧﺪ ﻛﻮواﻻﻧﺴﻲ ﻳﻚ ﺳﺮي واﺣﺪﻫﺎي ﺳﺎﺧﺘﺎري ﺑﻪ ﻧﺎم اﺳﻴﺪﻫﺎي
آﻣﻴﻨﻪ ﺳﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪهاﻧﺪ .ﺗﻌﺪاد ،ﻣﺎﻫﻴﺖ و ﻃﺮز ﻗﺮار ﮔﺮﻓﺘﻦ اﻳﻦ واﺣﺪﻫﺎ در زﻧﺠﻴﺮه ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻲ ﺳﺎﺧﺘﺎر ﺧﺎص و رﻓﺘﺎر وﻳﮋه آﻧﻬﺎ را ﺗﻌﻴﻴﻦ ﻣﻲﻛﻨﺪ .در
ﺳﺎﺧﺘﺎر اﻳﻦ ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻬﺎ ،ﻫﻢ ﻋﺎﻣﻞ آﻣﻴﻦ و ﻫﻢ ﻋﺎﻣﻞ ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻴﻞ وﺟﻮد دارد ﻛﻪ ﻫﺮ دو ﺑﻪ ﻛﺮﺑﻦ ﻣﺮﻛﺰي ﺑﻪ ﻧﺎم ﻛﺮﺑﻦ آﻟﻔﺎ ﻣﺘﺼﻞاﻧﺪ .ﻫﻤﭽﻨﻴﻦ ﺑﻪ
ﻛﺮﺑﻦ آﻟﻔﺎ ﺗﺮﻛﻴﺒﻲ ﺑﻪ ﻧﺎم زﻧﺠﻴﺮه ﻛﻨﺎري ﻛﻪ ﺑﺎ ﺣﺮف Rﻧﺸﺎن داده ﻣﻲﺷﻮد و ﻳﻚ ﻣﻮﻟﻜﻮل ﻫﻴﺪروژن ﻣﺘﺼﻞ ﺷﺪه اﺳﺖ .
اﺷﻜﺎل ﻣﻮﻧﻮﻣﺮي ،ﻛﻪ واﺣﺪﻫﺎي ﺳﺎﺧﺘﺎري ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎ را ﻣﻲﺳﺎزﻧﺪ ،ﺷﺎﻣﻞ 20ﻧﻮع اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﻣﺘﻔﺎوت اﺳﺖ ﻛﻪ از ﻧﻈﺮ وﻳﮋﮔﻴﻬﺎي ﮔﺮوه Rﻣﺎﻧﻨﺪ
اﻧﺪازه ،ﺑﺎر اﻟﻜﺘﺮﻳﻜﻲ و ﺣﻼﻟﻴﺖ و ﻏﻴﺮه ﺗﻔﺎوت دارﻧﺪ .ﻫﻨﮕﺎﻣﻲ ﻛﻪ ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎ در اﺳﻴﺪ ﻳﺎ ﺑﺎز ﻗﻮي ﺟﻮﺷﺎﻧﺪه ﻣﻲﺷﻮﻧﺪ ،اﺗﺼﺎل ﺑﻴﻦ واﺣﺪﻫﺎي
ﺗﻌﺪاد 20اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﻣﻮﺟﻮد در ﻳﺎﺧﺘﻪ ﺑﻪ ﻧﺎم اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﻣﻮﺳﻮماﻧﺪ .ﺑﺮاي اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﻃﺒﻘﻪ ﺑﻨﺪﻳﻬﺎي ﻣﺨﺘﻠﻔﻲ
داده ﺷﺪهاﻧﺪ و از ﺑﻴﻦ آﻧﻬﺎ ﻧﻮﻋﻲ ﻛﻪ اﻣﺮوزه ﻣﻮرد اﺳﺘﻔﺎده اﺳﺖ ﻃﺒﻘﻪ ﺑﻨﺪي ﺑﺮ ﺣﺴﺐ وﺿﻌﻴﺖ ﺑﺎرداري ﮔﺮوه Rاﺳﺖ .ﺑﺪﻳﻦ ﺗﺮﺗﻴﺐ ﭼﻬﺎر ﮔﺮوه
2
ﻋﻼوه ﺑﺮ 20اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ،در ﺑﺮﺧﻲ از ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎ اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ ﺗﻐﻴﻴﺮ ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ ﻳﺎﺧﺘﻪاي وﺟﻮد دارد ﻛﻪ از ﻧﻈﺮ ﺳﺎﺧﺘﺎر و ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎ
ﺑﺴﻴﺎر ﻣﻬﻢاﻧﺪ .از ﻣﻬﻤﺘﺮﻳﻦ اﻳﻦ ﺗﻐﻴﻴﺮات ﻣﻲﺗﻮان اﺿﺎﻓﻪ ﺷﺪن ﮔﺮوه ﻫﻴﺪروﻛﺴﻲ ﺑﻪ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﭘﺮوﻟﻴﻦ )ﻫﻴﺪروﻛﺴﻲ ﭘﺮوﻟﻴﻦ( و ﻳﺎ ﻟﻴﺰﻳﻦ
)ﻫﻴﺪروﻛﺴﻲ ﻟﻴﺰﻳﻦ( ،اﻧﻮاع اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ اﺳﺘﻴﻞدار و ﻓﺴﻔﺮﻳﻞدار را ﻧﺎم ﺑﺮد .ﻫﻴﺪروﻛﺴﻲ ﭘﺮوﻟﻴﻦ ﺣﺪود %12ﺳﺎﺧﺘﺎر ﻛﻼژن را ﻛﻪ ﻳﻜﻲ از
ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎي ﻣﻬﻢ ﺟﺎﻧﻮري اﺳﺖ ﺗﺸﻜﻴﻞ ﻣﻲدﻫﺪ ﻫﻤﭽﻨﻴﻦ اﻳﻦ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ در ﺳﺎﺧﺘﺎر ﺑﺮﺧﻲ از ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎي دﻳﻮاره ﻳﺎﺧﺘﻪاي ﮔﻴﺎﻫﺎن وﺟﻮد دارد ﻛﻪ
اﻛﺴﺘﺎﻧﺴﻴﻦ ﻧﺎﻣﻴﺪه ﻣﻲﺷﻮد .ﻫﻴﺪروﻛﺴﻲ ﻟﻴﺰﻳﻦ ﻧﻴﺰ در ﺳﺎﺧﺘﺎر ﻛﻼژن وﺟﻮد دارد ﺑﻪ ﻫﻤﻴﻦ دﻟﻴﻞ ﻛﻼژن ﻳﻜﻲ از ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎي اﺳﺘﺜﻨﺎﻳﻲ در ﺟﺎﻧﻮران
ﺑﺸﻤﺎر ﻣﻲآﻳﺪ.
اﻓﺰون ﺑﺮ ﺑﻴﺴﺖ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ اﺻﻠﻲ و اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ ﻛﻤﻴﺎب ،ﻛﻪ اﺳﺎﺳﺎ در ﺳﺎﺧﺘﺎر ﭘﭙﺘﻴﺪﻫﺎ و ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎ وارد ﻣﻲﺷﻮﻧﺪ ،در ﻳﺎﺧﺘﻪﻫﺎي ﺑﺎﻓﺘﻬﺎي
ﻣﺨﺘﻠﻒ اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪاي وﺟﻮد دارﻧﺪ ﻛﻪ در ﺳﺎﺧﺘﺎر ﭘﺮوﺗﺌﻴﻨﻬﺎ ﻳﺎﻓﺖ ﻧﻤﻲﺷﻮﻧﺪ ﺑﻠﻜﻪ ﺑﻪ ﺻﻮرت آزاد در ﻓﺮآﻳﻨﺪﻫﺎي ﻣﺘﺎﺑﻮﻟﻴﺴﻤﻲ وارد ﻣﻲﺷﻮﻧﺪ.
از ﻣﻬﻤﺘﺮﻳﻦ اﻳﻦ اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ ﻣﻲﺗﻮان از ﺑﺘﺎ -آﻻﻧﻴﻦ ﻛﻪ ﭘﻴﺶ ﺳﺎز وﻳﺘﺎﻣﻴﻦ اﺳﻴﺪ ﭘﺎﻧﺘﻮﺗﻨﻴﻚ اﺳﺖ ،ﺳﻴﺘﺮوﻟﻴﻦ و اورﻧﺘﻴﻦ ،ﻛﻪ ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت ﺣﺪ
واﺳﻂ در ﺳﻨﺘﺰ آرژﻧﻴﻦ در ﭼﺮﺧﻪ اوره ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻧﺎم ﺑﺮد .در ﻳﺎﺧﺘﻪ ﻗﺎرﭼﻬﺎ و ﮔﻴﺎﻫﺎن ﻋﺎﻟﻲ ﻧﻴﺰ اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ ﻏﻴﺮ ﻋﺎدي ،ﻣﺎﻧﻨﺪ ﺑﺘﺎ -ﺳﻴﺎﻧﻮآﻻﻧﻴﻦ
وﺟﻮد دارد.
ﺑﻪ ﻃﻮر ﻛﻠﻲ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﻫﺎ را از ﻧﻈﺮ ﻛﻴﻔﻲ و ﻛﻤﻲ ﺑﺮرﺳﻲ ﻣﻲ ﻛﻨﻨﺪ .ﻫﻤﻪ ي آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ ﻫﺎ داراي دو ﮔﺮوه ﻛﺮﺑﻮﻧﻴﻞ ) (COOHو ﮔﺮوه آﻣﻴﻦ
) (NH2ﻫﺴﺘﻨﺪ.
در ﺻﻮرﺗﻲ ﻛﻪ اﻳﻦ دو ﮔﺮوه ﻋﺎﻣﻠﻲ ﻫﺮ دو ﺑﺮ روي ﻛﺮﺑﻦ آﻟﻔﺎ ﻗﺮار ﮔﻴﺮﻧﺪ ،آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ را آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ آﻟﻔﺎ ﻣﻲ ﻧﺎﻣﻨﺪ .ﺑﻲ ﻧﻬﺎﻳﺖ آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ آﻟﻔﺎ
ﻣﻮﺟﻮد اﺳﺖ ﻛﻪ از ﻣﻴﺎن آن ﻫﺎ ﺑﻴﺴﺖ ﻧﻮﻋﺸﺎن در ﺳﺎﺧﺘﺎر ﭘﺮوﺗﺌﻴﻦ ﻫﺎ ﺷﺮﻛﺖ دارﻧﺪ .ﻛﺮﺑﻦ ﻛﺎﻳﺮال ﻣﻲ ﺗﻮاﻧﺪ داراي ﻳﻜﻲ از آراﻳﺶ ﻫﺎي Dﻳﺎ L
ﺑﺎﺷﺪ .ﮔﻔﺘﻪ ﻣﻲ ﺷﻮد در ﺻﻮرﺗﻲ ﻛﻪ آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ ﺑﺨﻮاﻫﺪ وارد ﺑﺪن اﻧﺴﺎن ﺷﻮد ،ﺑﺎﻳﺪ ﻓﺮم Lرا دارا ﺑﺎﺷﺪ ،ﺑﻨﺎﺑﺮاﻳﻦ ﻃﻲ ﺗﻜﺎﻣﻞ ﻓﺮم Dرا ﺣﺬف
3
ﺑﻪ ﻃﻮر ﻣﺜﺎل ﮔﺎﻣﺎ آﻣﻴﻨﻮ ﺑﻮﺗﻴﻠﻴﻚ اﺳﻴﺪ ) (GABAﻳﻚ ﻧﻮرون ﺗﺮﻧﺴﺘﺪ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ ﻛﻪ در ﺳﻠﻮل ﻫﺎ ي ﻋﺼﺒﻲ ﻧﻘﺶ اﻧﺘﻘﺎل دﻫﻨﺪه ي ﻋﺼﺒﻲ را اﻳﻔﺎ
ﻣﻲ ﻛﻨﺪ.
R -4آﻣﻴﻦ دار ) ( NH2ﻳﺎ آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ ﻫﺎي ﺑﺎزي :آرژﻧﻴﻦ ) ، (ARGﻻﻳﺰﻳﻦ )( LYS
R -5ﻛﺮﺑﻮﻧﻴﻞ دار ) (COOHﻳﺎ آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪﻫﺎي اﺳﻴﺪي :آﺳﭙﺎرﺗﻴﻚ اﺳﻴﺪ ) ، (ASPﮔﻠﻮﺗﺎﻣﻴﻚ اﺳﻴﺪ )(GLU
4
-1ﺗﺴﺖ ﻧﻴﻦ ﻫﻴﺪرﻳﻦ )ﻫﻤﻪ ي آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪﻫﺎ( :ﺑﺮ اﺳﺎس ﮔﺮوه آﻟﻔﺎ آﻣﻴﻦ اﺳﺖ .ﻫﺮ ﭼﻪ ﻏﻠﻈﺖ آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺑﺎﺷﺪ ،آﺑﻲ ﭘﺮ رﻧﮓ ﺗﺮي
ﺑﺪﺳﺖ ﻣﻲ آﻳﺪ.
15 Minﺣﻤﺎم آب ﺟﻮش
ﻫﻤﻪ ي آﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ ﻫﺎ ﺑﻪ رﻧﮓ آﺑﻲ در ﻣﻲ آﻳﻨﺪ ﺑﻪ ﺟﺰء ﭘﺮوﻟﻴﻦ ﻛﻪ ﺑﻪ 1CCآﻣﻴﻨﻮ اﺳﻴﺪ 3 +ﻗﻄﺮه ﻧﻴﻦ ﻫﻴﺪرﻳﻦ
-3ﺗﺴﺖ ﻣﻴﻠﻮن )ﻓﻨﻮل ﻫﺎ ،ﭘﺲ ﺑﻪ ﺗﻴﺮوزﻳﻦ ﻓﻘﻂ ﺟﻮاب ﻣﻲ دﻫﺪ: (.
-4ﻫﺎﭘﻜﻴﻨﺰﻛﻮل )اﻧﺪول( :ﺑﻪ ﺟﺎي ﻫﺎﭘﻜﻴﻨﺰﻛﻮل در آزﻣﺎﻳﺶ از ﮔﻠﻲ اﮔﺴﺎﻻت اﺳﺘﻔﺎده ﻛﺮدﻳﻢ).اﺳﻴﺪ ﻻﻛﺘﻴﻜﻲ ﻛﻪ ﺗﻮي ﻧﻮر ﮔﺬاﺷﺘﻪ ﺷﺪه و ﻫﺮ دو
5
ﺑﻪ ﺗﺴﺖ ﻫﺎي ﺷﻤﺎره ي ﻳﻚ و ﭼﻬﺎر و ﺷﺶ ﺟﻮاب داد .ﺑﺪﻳﻦ ﺻﻮرت ﻧﺘﻴﺠﻪ ﻣﻲ ﻛﻴﺮﻳﻢ ﻛﻪ ﻣﺠﻬﻮل :
6
ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن :ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن )ﻋﻴﺎرﺳﻨﺠﻲ( اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻣﻴﻨﻪ ﻧﻴﺰ از ﻫﻤﺎن ﻗﻮاﻧﻴﻦ ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن اﺳﻴﺪﻫﺎ و ﺑﺎزﻫﺎ ﭘﻴﺮوي ﻣﻲ ﻛﻨﻨﺪ.
ﺗﻴﺘﺮ ﻛﺮدن از روشﻫﺎي ﺗﺠﺰﻳﻪ ﺣﺠﻤﻲ اﺳﺖ .در ﺗﺠﺰﻳﻪ ﺣﺠﻤﻲ اﺑﺘﺪا ﺟﺴﻢ را ﺣﻞ ﻛﺮده و ﺣﺠﻢ ﻣﻌﻴﻨﻲ از ﻣﺤﻠﻮل آن را ﺑﺎ ﻣﺤﻠﻮل دﻳﮕﺮي ﻛﻪ ﻏﻠﻈﺖ
آن ﻣﺸﺨﺺ اﺳﺖ ﻛﻪ ﻫﻤﺎن ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﻧﺎﻣﻴﺪه ﻣﻲﺷﻮد ،ﻣﻲﺳﻨﺠﻨﺪ .در ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﺑﻪﻃﻮر آﻫﺴﺘﻪ از ﻳﻚ ﺑﻮرت ﺑﻪ
ﻣﺤﻠﻮل ﺣﺎوي ﺣﺠﻢ ﻣﺸﺨﺺ ﻳﺎ وزن ﻣﺸﺨﺺ از ﻣﺎده ﺣﻞ ﺷﺪه اﺿﺎﻓﻪ ﻣﻲﺷﻮد.
اﻓﺰاﻳﺶ ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﺎﻧﺪارد ،آﻧﻘﺪر اداﻣﻪ ﻣﻲﻳﺎﺑﺪ ﺗﺎ ﻣﻘﺪار آن از ﻧﻈﺮ اﻛﻲواﻻن ﺑﺮاﺑﺮ ﻣﻘﺪار ﺟﺴﻢ ﺣﻞ ﺷﺪه ﺷﻮد .ﻧﻘﻄﻪ اﻛﻲواﻻن ﻧﻘﻄﻪ اي اﺳﺖ
ﻛﻪ در آن ،ﻣﻘﺪار ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﺎﻧﺪارد اﻓﺰوده ﺷﺪه از ﻧﻈﺮ ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ ﺑﺮاﺑﺮ ﺑﺎ ﻣﻘﺪار ﺣﺠﻢ ﻣﻮرد ﻧﻈﺮ در ﻣﺤﻠﻮل ﻣﺠﻬﻮل اﺳﺖ .اﻳﻦ ﻧﻘﻄﻪ را ﻧﻘﻄﻪ
در ﻋﻤﻞ ﺗﻴﺘﺮ ﻛﺮدن ،ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﺎﻧﺪارد را از ﻳﻚ ﺑﻮرت ﺑﻪ ﻣﺤﻠﻮﻟﻲ ﻛﻪ ﺑﺎﻳﺪ ﻏﻠﻈﺖ آن اﻧﺪازه ﮔﺮﻓﺘﻪ ﻣﻲﺷﻮد ،ﻣﻲاﻓﺰاﻳﻨﺪ و اﻳﻦ ﻋﻤﻞ ﺗﺎ وﻗﺘﻲ
اداﻣﻪ دارد ﺗﺎ واﻛﻨﺶ ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ ﺑﻴﻦ ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﺎﻧﺪارد و ﺗﻴﺘﺮ ﺷﻮﻧﺪه ﻛﺎﻣﻞ ﺷﻮد .ﺳﭙﺲ ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺣﺠﻢ و ﻏﻠﻈﺖ ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﺎﻧﺪارد و ﺣﺠﻢ
ﺑﺮ ﺣﺴﺐ واﻛﻨﺶﻫﺎﻳﻲ ﻛﻪ ﺑﻴﻦ ﻣﺤﻠﻮل ﺗﻴﺘﺮ ﺷﻮﻧﺪه و اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﺻﻮرت ﻣﻲﮔﻴﺮد ،ﺗﺠﺰﻳﻪﻫﺎي ﺣﺠﻤﻲ )ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن( ﺑﻪ دو دﺳﺘﻪ ﺗﻘﺴﻴﻢ ﻣﻲﺷﻮﻧﺪ:
روشﻫﺎﻳﻲ ﻛﻪ ﺑﺮ اﺳﺎس ﺗﺮﻛﻴﺐ ﻳﻮنﻫﺎ ﻫﺴﺘﻨﺪ .ﻳﻌﻨﻲ ﺗﻐﻴﻴﺮ ﻇﺮﻓﻴﺖ در ﻓﻌﻞ و اﻧﻔﻌﺎﻻت ﻣﺮﺑﻮط ﺑﻪ آن ﺻﻮرت ﻧﻤﻲﮔﻴﺮد .اﻳﻦ روشﻫﺎ
.2واﻛﻨﺶﻫﺎي رﺳﻮﺑﻲ
7
ﺗﻴﺘﺮ ﻛﺮدن ،ﻋﺒﺎرت اﺳﺖ از ﺗﻌﻴﻴﻦ ﻣﻘﺪار اﺳﻴﺪ ﻳﺎ ﺑﺎز ﻣﻮﺟﻮد در ﻳﻚ ﻣﺤﻠﻮل ﻛﻪ ﺑﺎ اﻓﺰاﻳﺶ ﺗﺪرﻳﺠﻲ ﻳﻚ ﺑﺎز ﺑﻪ ﻏﻠﻈﺖ ﻣﺸﺨﺺ ﻳﺎ ﺑﺮ ﻋﻜﺲ اﻧﺠﺎم
-
ﻣﻲﮔﻴﺮد .ﻣﻮﻗﻌﻲ ﻛﻪ ﻣﺤﻠﻮل ﻳﻚ ﺑﺎز داراي ﻳﻮﻧﻬﺎي OHاﺳﺖ ﺑﻪ ﻣﺤﻠﻮل اﺳﻴﺪ اﺿﺎﻓﻪ ﻛﻨﻴﻢ ،واﻛﻨﺶ ﺧﻨﺜﻲ ﺷﺪن اﻧﺠﺎم ﻣﻲﺷﻮد:
- +
OH + H3O 2H2O
ﻣﺤﺎﺳﺒﺎت :
ﻣﻌﻤﻮﻻ ﺣﺠﻢ ﻣﺸﺨﺺ ) (Vاز ﻣﺤﻠﻮل اﺳﻴﺪ ﺑﺎ ﻧﺮﻣﺎﻟﻴﺘﻪ ﻣﺠﻬﻮل ) (Nاﻧﺘﺨﺎب ﻛﺮده ،ﺑﻪ ﻛﻤﻚ ﻳﻚ ﺑﻮرت ﻣﺪرج ﺑﻪﺗﺪرﻳﺞ ﻣﺤﻠﻮل ﻳﻚ ﺑﺎز ﺑﺎ
ﻧﺮﻣﺎﻟﻴﺘﻪ ﻣﺸﺨﺺ ) (Nﺑﻪ آن اﺿﺎﻓﻪ ﻣﻲﻛﻨﻨﺪ .ﻋﻤﻞ ﺧﻨﺜﻲ ﺷﺪن وﻗﺘﻲ ﻛﺎﻣﻞ اﺳﺖ ﻛﻪ ﻣﻘﺪار اﻛﻲواﻻن ﮔﺮم ﻫﺎي ﺑﺎز ﻣﺼﺮﻓﻲ ﺑﺮاﺑﺮ ﻣﻘﺪار
ﺑﺮاي اﻳﻦ ﻛﻪ ﻋﻤﻞ ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن ﺑﺪﻗﺖ اﻧﺠﺎم ﺷﻮد ،ﺑﺎﻳﺪ ﻋﻤﻞ اﻓﺰاﻳﺶ ﻣﺤﻠﻮل ﺑﺎز درﺳﺖ ﻣﻮﻗﻌﻲ ﻣﺘﻮﻗﻒ ﮔﺮدد ﻛﻪ ﺗﺴﺎوي ﻓﻮق ﺑﺮﻗﺮار ﺷﻮد .روش
ﻣﻌﻤﻮل و ﻫﻤﮕﺎﻧﻲ ﺑﺮاي ﺗﻌﻴﻴﻦ ﭘﺎﻳﺎن ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن اﺳﺘﻔﺎده از ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮﻫﺎﺳﺖ .دﺳﺘﮕﺎه PHﻣﺘﺮ ﻧﻴﺰ ﺑﺮاي ﻣﺤﺎﺳﺒﺎت دﻗﻴﻖ در ﺗﻌﻴﻴﻦ ﻧﻘﻄﻪ اﻛﻲ
ﺑﺴﻴﺎري از اﺟﺴﺎم ﻃﺒﻴﻌﻲ و ﺳﻨﺘﺰي ،رﻧﮕﻬﺎﻳﻲ از ﺧﻮد ﻧﺸﺎن ﻣﻲدﻫﻨﺪ ﻛﻪ ﺑﻪ PHﻣﺤﻠﻮﻟﻲ ﻛﻪ اﻳﻦ اﺟﺴﺎم در آن ﺣﻞ ﺷﺪهاﻧﺪ ،ﺑﺴﺘﮕﻲ دارﻧﺪ .ﺑﺮﺧﻲ
از اﻳﻦ اﺟﺴﺎم ﻛﻪ ﻃﻲ ﻗﺮﻧﻬﺎ ﺑﺮاي ﻧﺸﺎن دادن ﺧﺎﺻﻴﺖ ﻗﻠﻴﺎﻳﻲ ﻳﺎ اﺳﻴﺪي آب ﺑﻜﺎر ﺑﺮده ﺷﺪهاﻧﺪ ،در ﺳﺎﻟﻬﺎي اﺧﻴﺮ ﺑﻌﻨﻮان ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ اﺳﻴﺪ و ﺑﺎز ﺑﻜﺎر
ﮔﺮﻓﺘﻪ ﻣﻲﺷﻮﻧﺪ .ﺑﻄﻮر ﻛﻠﻲ ،ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮﻫﺎي اﺳﻴﺪ و ﺑﺎز ،اﺳﻴﺪﻫﺎ و ﺑﺎزﻫﺎي ﺿﻌﻴﻒ آﻟﻲ ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻛﻪ ﺑﺴﺘﻪ ﺑﻪ ﺗﻔﻜﻴﻚ ﻳﺎ ﺗﺠﻤﻊ ،ﻣﺘﺤﻤﻞ ﺗﻐﻴﻴﺮات
ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮﻧﻬﺎي ﺧﻨﺜﻲﺷﺪن در اﻧﺪازه ﮔﻴﺮي آن دﺳﺘﻪ از ﮔﻮﻧﻪﻫﺎي ﺑﻲﺷﻤﺎر ﻣﻌﺪﻧﻲ ،آﻟﻲ و زﻳﺴﺘﻲ ﻛﻪ ﺧﻮاص اﺳﻴﺪي ﻳﺎ ﺑﺎزي ذاﺗﻲ دارﻧﺪ ﺑﻜﺎر ﺑﺮده
ﻣﻲﺷﻮﻧﺪ .وﻟﻲ ﻛﺎرﺑﺮدﻫﺎي ﺑﺴﻴﺎري ﺑﻪ ﻫﻤﺎن اﻧﺪازه اﻫﻤﻴﺖ وﺟﻮد دارﻧﺪ ﻛﻪ در آﻧﻬﺎ ﺗﺮﻛﻴﺐ ﻣﻮرد ﺗﺠﺰﻳﻪ ﺑﺎ ﻳﻚ واﻛﻨﺸﮕﺮ ﻣﻨﺎﺳﺐ ﺑﻪ ﻳﻚ اﺳﻴﺪ ﻳﺎ ﺑﺎز
ﻣﻌﺮﻓﻬﺎي PHﻳﺎ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮﻫﺎي ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ اﺳﻴﺪ و ﺑﺎز ،ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت رﻧﮕﻲ ﻳﺎ ﻏﻴﺮ رﻧﮕﻲ آﻟﻲ ﺑﺎ وزن ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ ﺑﺎﻻ ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻛﻪ در آب ﻳﺎ ﺣﻼلﻫﺎي دﻳﮕﺮ
ﺑﻬﺘﺮﻳﻦ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮﻫﺎي اﺳﻴﺪ -ﺑﺎز ،اﺳﻴﺪﻫﺎي آﻟﻲ ﺿﻌﻴﻒ ﻣﻲﺑﺎﺷﻨﺪ .ﺷﻜﻞ اﺳﻴﺪي ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ رﻧﮓ ﻣﺸﺨﺼﻲ دارد و در ﺻﻮرت از دﺳﺖ دادن
ﭘﺮوﺗﻮن ،ﺑﻪ ﺗﺮﻛﻴﺐ ﺑﺎزي ﻛﻪ داراي رﻧﮓ دﻳﮕﺮي ﻣﻲﺑﺎﺷﺪ ،ﺗﺒﺪﻳﻞ ﻣﻲﺷﻮد .ﻳﻌﻨﻲ ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ اﻏﻠﺐ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮﻫﺎ از ﻣﺤﻠﻮل ﺑﺴﺘﮕﻲ ﺑﻪ ﺗﻐﻴﻴﺮ ﺷﻜﻞ
8
ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮﻫﺎ ،اﺳﻴﺪﻫﺎ ﻳﺎ ﺑﺎزﻫﺎي ﺿﻌﻴﻔﻲ ﻫﺴﺘﻨﺪ و ﭼﻮن اﻛﺜﺮ آﻧﻬﺎ ﺷﺪﻳﺪا رﻧﮕﻲ ﻫﺴﺘﻨﺪ ،در ﻫﺮ اﻧﺪازه ﮔﻴﺮي PHﭼﻨﺪ ﻗﻄﺮه از ﻣﺤﻠﻮل رﻗﻴﻖ
ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﻛﺎﻓﻲ ﻣﻲﺑﺎﺷﺪ .ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮﻫﺎي اﺳﻴﺪ -ﺑﺎز را ﻣﻌﻤﻮﻻ ﺑﻪ ﺻﻮرت HInﻧﺸﺎن ﻣﻲدﻫﻨﺪ.
رﻧﮓ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﺣﺪ واﺳﻂ ﺑﻴﻦ دو رﻧﮓ ﺑﺎﺷﺪ .در آن ﻧﻘﻄﻪ وﻳﮋه :
+
Hو PKa = PHاﺳﺖ .در ﻧﺘﻴﺠﻪ PHاي ﻛﻪ در آن ﻳﻚ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﻛﻪ PKaآن ﻧﺰدﻳﻚ PHﻧﻘﻄﻪ ﻫﻢارزي Kaﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﺑﺮاﺑﺮ ﻏﻠﻈﺖ
ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن اﺳﺖ ،ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ در ﻧﺰدﻳﻚ ﻧﻘﻄﻪ ﺗﻌﺎدل ،اﻣﻜﺎنﭘﺬﻳﺮ ﻣﻲﺑﺎﺷﺪ.
ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از اﻧﻮاع ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ،ﻣﻲﺗﻮان PHﻳﻚ ﻣﺤﻠﻮل را ﺗﻌﻴﻴﻦ ﻛﺮد .ﺑﺮاي اﻳﻦ ﻛﺎر ﻻزم اﺳﺖ ﻣﺤﺪوده PHﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ را ﺑﺪاﻧﻴﻢ .در
ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮﻧﻬﺎي اﺳﻴﺪ و ﺑﺎز ﻫﻢ ﻻزم اﺳﺖ ﻛﻪ PKaﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﻣﻮرد اﺳﺘﻔﺎده ﺑﻪ PHﻣﺤﻠﻮل ﻣﻮرد ﻧﻈﺮ ﻧﺰدﻳﻚ ﺑﺎﺷﺪ ،در ﻏﻴﺮ اﻳﻨﺼﻮرت آزﻣﺎﻳﺶ
ﻫﻤﺮاه ﺑﺎ ﺧﻄﺎ ﺧﻮاﻫﺪ ﺑﻮد .اﮔﺮ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﻗﺒﻞ از ﻧﻘﻄﻪ ﻫﻢارزي ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ دﻫﺪ ،ﺣﺠﻢ ﻧﻘﻄﻪ ﭘﺎﻳﺎن ﻛﻤﺘﺮ از ﻧﻘﻄﻪ ﻫﻢارزي )ﺧﻨﺜﻲ ﺷﺪن اﺳﻴﺪ ﻳﺎ ﺑﺎز(
اﺳﺖ و اﮔﺮ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﺑﻌﺪ از ﻧﻘﻄﻪ ﻫﻢ ارزي ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ دﻫﺪ ،ﺣﺠﻢ ﻧﻘﻄﻪ ﭘﺎﻳﺎن ﺑﻴﺸﺘﺮ از ﻧﻘﻄﻪ ﻫﻢ ارزي اﺳﺖ.
در ﺑﺮﺧﻲ از ﻣﻮارد ﻣﺨﻠﻮﻃﻲ از دو ﻳﺎ ﭼﻨﺪ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ در ﻳﻚ ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن ﻣﺼﺮف ﻣﻲﺷﻮد ﺗﺎ ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ ﻣﺸﺨﺼﻲ در ﻧﻘﻄﻪ ﭘﺎﻳﺎن رخ دﻫﺪ .ﺑﻌﻨﻮان ﻣﺜﺎل
ﻣﻲﺗﻮان ﻣﺘﻴﻠﻦ آﺑﻲ را ﺑﺎ ﻣﺘﻴﻠﻦ ﻗﺮﻣﺰ ﻣﺨﻠﻮط ﻛﺮده و ﻳﻚ ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﻣﺨﻠﻮط ﺑﻮﺟﻮد آورد ﻛﻪ در PHﺣﺪود 5.4از ﺑﻨﻔﺶ ﺑﻪ ﺳﺒﺰ ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ
ﻣﻲدﻫﺪ .در اﻳﻦ ﻣﻮرد ،ﻣﺘﻴﻠﻦ آﺑﻲ ﺣﻴﻦ ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن ﺑﺪون ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ ﻣﻲﻣﺎﻧﺪ .اﻣﺎ ﻣﺘﻴﻠﻦ ﻗﺮﻣﺰ در PHﻫﺎي ﻛﻤﺘﺮ از ﺣﺪود 5.4ﻗﺮﻣﺰ و در
در PHﻫﺎي ﻛﻤﺘﺮ ،ﻗﺮﻣﺰ و آﺑﻲ ﺗﺮﻛﻴﺐ ﺷﺪه و رﻧﮓ ﺑﻨﻔﺶ اﻳﺠﺎد ﻣﻲﻛﻨﻨﺪ و در PHﻫﺎي ﺑﻴﺸﺘﺮ ،زرد و آﺑﻲ ﺗﺮﻛﻴﺐ ﺷﺪه و رﻧﮓ ﺳﺒﺰ اﻳﺠﺎد
ﻣﻲﻛﻨﻨﺪ .دﻳﺪن ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ ﺑﻨﻔﺶ ﺑﻪ ﺳﺒﺰ ،آﺳﺎﻧﺘﺮ از ﺗﺸﺨﻴﺺ ﺗﻐﻴﻴﺮ رﻧﮓ ﻗﺮﻣﺰ ﺑﻪ زرد در ﺷﻨﺎﺳﺎﮔﺮ ﻣﺘﻴﻠﻦ ﺳﺮخ ﺗﻨﻬﺎ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ.
در ﺗﻴﺘﺮاﺳﻴﻮن ﻳﻚ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ،ﮔﺮوه ﺑﺎزي را از ﺑﻴﻦ ﻣﻲ ﺑﺮﻳﻢ .ﺑﺪﻳﻦ ﺻﻮرت ﻛﻪ :
9
0.1 N × v cc = 10 CC × X N
ﻳﺎ :
در اﻧﺘﻬﺎ ﻣﻲ ﺗﻮاﻧﻴﻢ ﻣﺘﺬﻛﺮ ﺷﻮﻳﻢ ﻛﻪ اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ ﻳﻚ آﻣﻔﻮﺗﺮ اﺳﺖ و ﭘﻲ اچ آن ﺣﺪود 7ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ) .ﺑﻪ دﻟﻴﻞ دارا ﺑﻮدن دو ﮔﺮوه ﻋﺎﻣﻠﻲ اﺳﻴﺪ و
ﺑﺎز (
NaOH
0.1 N
?= V
10