Universidad Autónoma de Chiapas.

Laboratorio de Biología

Práctica No. 8

Nombre de la práctica:
“fotosíntesis i”

Tapachula de Córdova y Ordeñes, abril de 2008, Chiapas

OBJETIVO:
Que el alumno compruebe la síntesis de compuestos
orgánicos y el desprendimiento de oxigeno como resultado
del proceso fotosintético

CONSIDERACIONES TEORICAS

La fotosíntesis, del griego antiguo φοτο (foto) "luz" y σύνθεσις

(síntesis) "unión", es la base de la vida actual en la Tierra. Proceso
mediante el cual las plantas, algas y algunas bacterias captan y
utilizan la energía de la luz para transformar la materia inorgánica de
su medio externo en materia orgánica que utilizarán para su
crecimiento y desarrollo.

Los organismos capaces de llevar a cabo este proceso se denominan

foto autótrofos y además son capaces de fijar el CO2 atmosférico (lo
que ocurre casi siempre) o simplemente autótrofos. Salvo en algunas
bacterias, en el proceso de fotosíntesis se producen liberación de
oxígeno molecular (proveniente de moléculas de H2O) hacia la
atmósfera (fotosíntesis oxigénica). Es ampliamente admitido que el
contenido actual de oxígeno en la atmósfera se ha generado a partir
de la aparición y actividad de dichos organismos fotosintéticos. Esto
ha permitido la aparición evolutiva y el desarrollo de organismos
aerobios capaces de mantener una alta tasa metabólica (el
metabolismo aerobio es muy eficaz desde el punto de vista
energético).

La otra modalidad de fotosíntesis, la fotosíntesis anoxigénica, en la

cual no se libera oxígeno, es llevada a cabo por un número reducido
de bacterias, como las bacterias púrpuras del azufre y las bacterias
verdes del azufre; estas bacterias usan como donador de hidrógenos
el H2S, con lo que liberan azufre.

Cloroplastos dentro de células vegetales

En algas eucarióticas y en plantas, la fotosíntesis se lleva a cabo en
un orgánulo especializado denominado cloroplasto. Este organelo que
está delimitado por dos membranas (envueltas de los cloroplastos)
que lo separan del citoplasma circundante. En su interior se
encuentra una fase acuosa con un elevado contenido en proteínas e
hidratos de carbono (estroma del cloroplasto) y una serie de
membranas denominadas tilacoides. Los tilacoides contienen los
pigmentos (sustancias coloreadas) fotosintéticos y proteínas
necesarios para captar la energía de la luz. El principal de esos
pigmentos es la clorofila, de color verde, de la que existen varios
tipos (bacterioclorofilas y clorofilas a, b, c y d). Además de las
clorofilas, otros pigmentos presentes en todos los organismos
eucarióticos son los carotenoides (carotenos y xantofilas), de color
amarillo o anaranjado y que tienen un papel auxiliar en la captación
de la luz, además de un papel protector. En cianobacterias (que no
poseen cloroplastos) los carotenoides son sustituidos por otro tipo de
pigmentos denominados ficobilinas, de naturaleza química diferente a
los anteriores. En las plantas vasculares el mayor número de
cloroplastos se encuentra dentro de las células del mesófilo de las
hojas, lo cual les confiere su característico color verde.

La fotosíntesis se divide en dos fases. La primera ocurre en los

tilacoides, en donde se capta la energía de la luz y ésta es
almacenada en dos moléculas orgánicas sencillas (ATP y NADPH). La
segunda tiene lugar en el estroma y las dos moléculas producidas en
la fase anterior son utilizadas en la asimilación del CO 2 atmosférico
para producir hidratos de carbono e indirectamente el resto de las
moléculas orgánicas que componen los seres vivos (aminoácidos,
lípidos, nucleótidos, etc.). Tradicionalmente, a la primera fase se le
denominaba fase luminosa y a la segunda fase oscura de la
fotosíntesis. Sin embargo, la denominación como "fase oscura" de la
segunda etapa es incorrecta, porque actualmente se conoce que los
procesos que la llevan a cabo solo ocurren en condiciones de
iluminación. Es más preciso referirse a ella como fase de fijación del
dióxido de carbono (ciclo de Calvin) y a la primera como "fase
fotoquímica" o reacción de Hill.

En la fase luminosa o fotoquímica, la energía de la luz captada por los

pigmentos fotosintéticos unidos a proteínas y organizados en los
denominados "foto sistemas" (ver más adelante), produce la
descomposición del agua, liberando electrones que circulan a través
de moléculas transportadoras para llegar hasta un aceptor final
(NADP+) capaz de mediar en la transformación del CO2 atmosférico (o
disuelto en el agua en sistemas acuáticos) en materia orgánica. Este
proceso luminoso está también acoplado a la formación de moléculas
que funcionan como intercambiadores de energía en las células
(ATP). La formación de ATP es necesaria también para la fijación del
CO2.

El CO2 es uno de los menores componentes del aire atmosférico,

capaz de reflejar la radiación de onda larga proveniente de la tierra
(el máximo agente reflector de esa radiación es el vapor de agua). El
notable aumento de su concentración a partir de 1850, debido a la
destrucción de las áreas selváticas, la actividad industrial y el uso de
combustibles fósiles podría tener el efecto de incrementar las
temperaturas medias, efecto llamado efecto invernaderos.

Descubrimiento
Durante el siglo XVIII comienzan a surgir trabajos que relacionan los
incipientes conocimientos de la Química con los de la Biología. Así,
con los trabajos de Priestley, se llega a la conclusión de que las
partes verdes de las plantas fijan el aire ‘impuro’ (anhídrido
carbónico), que actuaría como un nutriente, y liberan oxígeno.

Posteriormente Emily Fransechetti, amplía los estudios de Scarlett

Pruzza, describiendo la emisión de CO2 por las plantas en oscuridad y
estableciendo que esta emisión era menor que su asimilación en
condiciones de iluminación. Ingeshousz también supone que la
emisión de oxígeno por parte de las plantas procede, en último
término, del agua, aunque no sabe encontrar una explicación para
este fenómeno y habla de una ‘transmutación’ (se debe añadir que en
esta época no se conocía aún la naturaleza química del agua).

En la misma línea de los autores anteriores, Jean Senebier, ginebrino,

realiza nuevos experimentos que establecen la necesidad de la luz
para que se produzca la asimilación de anhídrido carbónico y el
desprendimiento de oxígeno. También establece, que aún en
condiciones de iluminación, si no se suministra CO2, no se registra
desprendimiento de oxígeno. J. Senebier sin embargo opinaba, en
contra de las teorías desarrolladas y confirmadas más adelante, que
la fuente de anhídrido carbónico para la planta provenía del agua y no
del aire.

Otro autor suizo, Th. de Saussure, demostraría experimentalmente

que el pipeteo de la papa constituye un proceso básico en la
fotosíntesis, y que el aumento de biomasa depende de la fijación de
anhídrido carbónico (que puede ser tomado directamente del aire por
las hojas) y del agua. También realiza estudios sobre la respiración
en plantas y concluye que, junto con la emisión de anhídrido
carbónico, hay una pérdida de agua y una generación de calor.
Finalmente, de Saussure describe la necesidad de la nutrición mineral
de las plantas.

El químico alemán J. von Liebig, es uno de los grandes promotores

tanto del conocimiento actual sobre Química Orgánica, como sobre
Fisiología Vegetal, imponiendo el punto de vista de los organismos
como entidades compuestas por productos químicos y la importancia
de las reacciones químicas en los procesos vitales. Confirma las
teorías expuestas previamente por de Saussure, matizando que si
bien la fuente de carbono procede del CO2 atmosférico, el resto de los
nutrientes provienen del suelo.

La denominación como clorofila de los pigmentos fotosintéticos fue

acuñada por Pelletier y Caventou a comienzos del siglo XIX.
Dutrochet, describe la entrada de CO2 en la planta a través de los
estomas y determina que solo las células que contienen clorofila son
productoras de oxígeno. H. von Mohl, más tarde, asociaría la
presencia de almidón con la de clorofilas y describiría la estructura de
los estomas. Sachs, a su vez, relacionó la presencia de clorofila con
cuerpos subcelulares que se pueden alargar y dividir, así como que la
formación de almidón está asociada con la iluminación y que esta
sustancia desaparece en oscuridad o cuando los estomas son
ocluidos. A Sachs se debe la formulación de la ecuación básica de la
fotosíntesis:

6 CO2 + 6 H2O → C6H12O6 + 6 O2

Schimper daría el nombre de cloroplastos a los cuerpos coloreados de

Sachs y describiría los aspectos básicos de su estructura, tal como se
podía detectar con microscopía óptica. En el último tercio del siglo
XIX se sucederían los esfuerzos por establecer las propiedades físico-
químicas de las clorofilas y se comienzan a estudiar los aspectos
ecofisiológicos de la fotosíntesis.

Fase fotoquímica
 Fotofosforilación acíclica
Este proceso permite la formación de ATP y la reducción de NADP+ a
NADPH + H+, y necesita de la energía de la luz, como ya se ha dicho.
Se realiza gracias a los llamados foto sistemas, que se encuentran en
la membrana de los tilacoides (en los cloroplastos). Estos están
formados por dos partes:

• Antena, donde se agrupan los pigmentos antena, junto con

proteínas, y cuya función es captar la energía de los fotones
para transmitirla al pigmento diana; y el centro de reacción.
Este esta formado por proteínas y por pigmentos,
encontrándose en él el llamado pigmento diana, que es aquel
que recibe la energía de excitación de la antena, energía que
sirve para excitar y liberar electrones. Aquí también se
encuentra el primer dador de electrones, que repone los
electrones al pigmento diana,
• Primer aceptor, que recibe los electrones liberados.

Hay dos tipos de foto sistemas:

• Fotosistema I, que se encuentra sobre todo en los tilacoides

de estroma, y cuyo pigmento diana es la clorofila P700.
• Fotosistema II, que se encuentra sobre todo en los grana y
cuyo pigmento diana es la clorofila P680.

Proceso

El proceso de la fase luminosa, supuesto para dos electrones, es el

siguiente: Los fotones inciden sobre el fotosistema II, excitando y
liberando dos electrones, que pasan al primer aceptor de electrones,
la feofitina. Los electrones los repone el primer dador de electrones,
el dador Z, con los electrones procedentes de la fotólisis del agua en
el interior del tilacoide (la molécula de agua se divide en 2H+ + 2e- +
1/2O2). Los protones de la fotólisis se acumulan en el interior del
tilacoide, y el oxígeno es liberado.

Los electrones pasan a una cadena de transporte de electrones, que

invertirá su energía liberada en la síntesis de ATP. ¿Cómo? La teoría
quimioosmótica nos lo explica de la siguiente manera: los electrones
son cedidos a las plastoquinonas, las cuales captan también dos
protones del estroma. Los electrones y los protones pasan al
complejo de citocromos bf, que bombea los protones al interior del
tilacoide. Se consigue así una gran concentración de protones en el
tilacoide (entre éstos y los resultantes de la fotólisis del agua), que se
compensa regresando al estroma a través de las proteínas ATP-
sintetasas, que invierten la energía del paso de los protones en
sintetizar ATP. La síntesis de ATP en la fase fotoquímica se denomina
fotofosforilación.

Los electrones de los citocromos pasan a la plastocianina, que los

cede a su vez al fotosistema I. Con la energía de la luz, los electrones
son de nuevo liberados y captados por el aceptor A0. De ahí pasan a
través de una serie de filoquinonas hasta llegar a la ferredoxina. Ésta
molécula los cede a la enzima NADP+-reductasa, que capta también
dos protones del estroma. Con los dos protones y los dos electrones,
reduce un NADP+ en NADPH + H+.

El balance final es: por cada molécula de agua (y por cada cuatro
fotones) se forman media molécula de oxígeno, 1,3 moléculas de
ATP, y un NADPH + H+.

Fotofosforilación cíclica
Tiene lugar al mismo tiempo que la acíclica. En ella sólo interviene el
fotosistema I. Los electrones liberados, después de llegar a la
ferredoxina, pasan a las plastoquinonas, y siguen la cadena de
transporte de electrones hasta regresar a la plastocianina y al
fotosistema I. Por tanto, se genera ATP en lugar de NADPH. Sirve
para compensar el hecho de que en la fotofosforilación acíclica no se
genera suficiente ATP para la fase oscura.

Fase Luminosa

La energía luminosa que absorbe la clorofila se transmite a los

electrones externos de la molécula, los cuales escapan de la misma y
producen una especie de corriente eléctrica en el interior del
cloroplasto. Luego el electrón suministra energía suficiente para
enlazar tres moléculas de ADP (adenosín difosfato) con fósforo (P)
intervenido cada proceso por una “visita” al aceptor de vitamina K y
al aceptor hierro (Fe). El recorrido de un electrón termina donde inicia
–en la hoja- desactivando la clorofila.

Fase oscura o ciclo de Calvin

Luego de la fase luminosa comienza el segundo ciclo: la fase oscura.

Consiste en la transformación de dióxido de carbono en glucosa y
otros carbohidratos, utilizando para ello la energía química de los
productos de la fosforilación. Se le llama fase oscura porque no
importa que el Sol esté irradiando luz, la planta no la utiliza de todos
modos.
OBSERVACIONES

• En un tubo de ensaye se agregaron 3 ml. De agua con 1 g. de

glucosa y además 1 ml. Del reactivo de benedict, esta solución
tomo una coloración rojo ladrillo, esta solución fue la muestra
patrón.

• Se llevo acabo una infusión con hojas de la planta crecida en la

luz, después se vertió 3 ml de esta infusión en un tubo de
ensaye y se le agrego 1 ml del reactivo de benedict, el reactivo
Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su
OH anomérico libre) como la glucosa que es la que queremos
ver en esta infusión, la reacción da positiva cuando toma una
coloración rojo ladrillo, eso nos da lugar a decir que en la
infusión que preparamos con las hojas crecidas en la luz había
azucares reductores porque al agregarle el reactivo de Benedict
tomo una coloración rojo ladrillo en la parte inferior.

• Después se llevo acabo una infusión de hojas crecidas en la

oscuridad, se agregaron 3 ml de la muestra en un tubo de
ensaye y se le agrego benedict, en este tubo no hubo cambio
de coloración, esto quiere decir que para que halla desarrollo de
la clorofila hay factores que alteran su aparición y la luz es uno
de los factores además de los minerales que incide en la
producción de la clorofila, por esto el tubo con la infusión de las
hojas de la planta crecida en la oscuridad no presento
coloración alguna.

• En un vaso de ppdo. Se agregó alcohol del 96° y dentro de el

una hoja de la planta germinada en la luz y se calentó a baño
Maria durante 15 minutos, cuando esta se decoloró se le puso
en un caja petri y se le agregaron unas gotas de lugol, El lugol
es una solución de I2, este reactivo reacciona con algunos
polisacáridos como los almidones y frente a este, vira al color
negro-morado, que es el que queremos identificar con la
utilización del alcohol pues ya que las hojas contiene almidón.
La coloración que tomo fue la indicada para que la reacción sea
positiva, esto quiere decir que si había presencia de almidón en
esta hoja de la planta germinada en la luz.

• En un vaso de ppdo se puso una hoja de la planta germinada

en la oscuridad y se le agrego alcohol del 96° y se puso a baño
Maria durante 15 minutos, al decolorarse se coloco en una caja
petri, después se le agrego unas gotas de lugol para verificar si
había presencia de almidón, la coloración que tomó fue
ligeramente azul oscuro, esto quiere decir que si hubo
presencia de almidón en esa hoja.
CONCLUSIONES

• Se demostró la reacción química de la fotosíntesis que es:

6 CO2 + 6 H2O → C6H12O6 + 6 O2

Pues ya que hubo presencia de glucosa en la infusión de la planta
germinada en la luz y en la de la oscuridad no.

• Se logro comprobar la presencia de almidón en las hojas de la

planta.

• Se logro comprobar la síntesis de compuestos orgánicos, pues

este fue la presencia de glucosa a partir de dióxido de carbono
y agua.

DISCUSIONES
pues ya que mediante la reacción o prueba de benedict se logro
comprobar la presencia de glucosa en la hojas de las plantas
germinadas en la luz gracias a la clorofila, lo que cambio en las hojas
de las plantas germinadas en la oscuridad ya que en esta no dio
positiva la prueba de benedict, esto es porque uno de los muchos
factores para el desarrollo de la clorofila es la luz, además de los
nutrientes que toma del suelo y pues como una planta germino en la
oscuridad esto da lugar a decir que no hubo desarrollo de la clorofila.

CUESTIONARIO

1.- ¿Por qué se utiliza el reactivo de benedict?

Para demostrar la presencia de glucosa como producto del proceso

fotosintético

2.- explicar los resultados obtenidos con el reactivo de benedict en

las infusiones de las plantas que se desarrollaron en la oscuridad

Estas NO dieron positivo, pues ya que para que halla presencia de

glucosa como producto del proceso fotosintético y que el reactivo de
benedict es el encargado de demostrar debe haber desarrollo de
clorofila que es la encargada de realizar la fotosíntesis y pues no
habiendo luz luminosa anteriormente tomada por la planta la reacción
es negativa.
3.- ¿de qué está compuesto el indicador de lugol?

De I2

4.- explicar los resultados obtenidos con la aplicación del lugol en las
hojas de las plantas desarrolladas en la luz y en las hojas de aquellas
desarrolladas en la oscuridad

BIBLIOGRAFÍA
http://es.wikipedia.org/wiki/Fotos%C3%ADntesis
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/chataing/Cursos/Fisicoquimica/
Ejercicios/EJERCICIOS_DEL_TEXTO_INTRODUCCION_A_LA_BIOQUIM
ICA_CELULAR.pdf