Sin Front Eras 70

70
FEBRERO 2011 JUNIO 2012
Apicultura sin Fronteras

PERIODICO APICOLA DE DISTRIBUCION MUNDIAL
70
JUNIO 2012
Conviene proteger ncleos durante el invierno?

Manejo de las colmenas ante los bajos rindes Los panales NO son todos iguales POLEN, funcin en La Colmena Paquetes de Abejas Alemania no no Alemania cede a a los los cede transgnicos y y transgnicos la UE UE dice dice que que la si... quien quien si... ganara? ganara?
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APICULTURA SIN FRONTERAS - Repblica Argentina - Edicion Ao VI - N 70 - JUNIO 2012
APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO DE 2012 - Hoja 2
Conviene proteger ncleos durante el invierno?

Ante la llegada del invierno los apicultores deben plantearse las caractersticas de la alimentacin, la temperatura y la ubicacin que deben recibir los ncleos de fin de temporada
Los ncleos de fin de temporada se realizan despus de la cosecha y su objetivo es aprovechar el gran volumen de abejas de las colmenas, muchas de las cuales se perderan durante el invierno. Estos ncleos, llamados tambin tardos, deben ser ms fuertes y grandes que los ncleos de principios de temporada. Las pequeas colonias podrn pasar el invierno en cajones nucleros de buena construccin o en cmaras de cra; en este ltimo caso se colocarn guardapiqueras y "poncho" o partidor con el fin de aislar el espacio ocioso del cajn (igualmente nosotros muchas veces recomendamos el no uso del poncho ya que muchas veces genera demasiada humedad dentro de la colmena y asi pueden proliferar enfermedades como la nosemosis). Algunos reconocidos apicultores de la zona de Bahia Blanca invernan sus colmenas de uno a tres ncleos encima de una colonia fuerte. Adems, colocan el techo. Los ms experimentados destacan cmo "importantsimo" al hecho de hurgar lo menos posible durante el invierno. Este mtodo, llamado por algunos apicultores como "nucleos superpuestos". Metodo de colmenas superpuestas: Toman una colmena bien fuerte de dos cuerpos (2 alzas) y, al hacer la divisin,en el alza superior colocan la mitad de los cuadros de cra, tanto abierta como cerrada, ms cuadros de miel y polen y una buen nmero de abejas (a sabiendas que la pecoreadoras van a volver a su lugar de origen o sea al alza inferior en trmino de uno o dos das). Hay quienes incluso colocan en el alza superior tambin la reina, para que este ncleo prospere con ms rapidez. Acto seguido, dividen las dos alzas con una rejilla excluidora y sobre su marco le incrustan un tejido mosquitero. Una opcin aqu es hacer un marco con doble tejido, otra es usar una entretapa con un agujero en el centro y luego colocar un trozo de tejido de cada lado de la entretapa. Esto a fin de que cuando se encuentren las dos reinas no se peleen entre s. La piquera del ncleo superior, en este caso, es un
aconsejan evitar invernar ncleos cuya poblacin en el mes de mayo sea menor a 4 5 cuadros bien cubiertos con abejas. Alimentacin y ubicacin de los ncleos La reserva de miel de un ncleo al comienzo de la invernada ser de, al menos, dos panales completos. Como los ncleos "tardos" son colonias que carecen de un nmero de pecoreadoras suficiente como para recolectar en la prxima primavera una cantidad significativa de nctar, el secreto del crecimiento de los ncleos de fin de temporada en la prxima mielada est en la adecuada alimentacin por parte del apicultor durante la primavera. Interrogantes del cmo invernar ncleos Una de las preguntas que suele aparecer es cmo invernar los ncleos sobre las colmenas para aprovechar su calor. Algunos apicultores explican que sacan el techo de la colmena y all colocan una entretapa de tela mosquitera. Y a continuacin, un alza estndar con slo un agujero, realizado con una mecha de 9 mm (esto slo de piquera para el ncleo superior). En el alza estndar arman el ncleo y luego
Redaccion: Jose Madonni - Luisa Noy Brisa Gonzalez Apiculturasinfronteras@yahoo.com.ar Colaboracion: Ulises Gonzalez Publicidad: Vanina Gonzalez (ARG) Rodrigo Gonzalez (Todo los paises)
Apicultura sin Fronteras Edicion N- 70 JUNIO 2012
Administracion: Dra. Claudia Fernandez Diseo: RJG Comunicaciones Propiedad intelectual: Registrada Prohibida la reproduccin parcial o total de esta publicacin sin previa autorizacin escrita por el responsable de este medio enviada por correo con firma certificada. Ley de propiedad intelectual vigente.
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pequeo corte del marco de la entretapa (2cm de largo x 5 mm de profundidad) y va ubicado en contra de la piquera original o sea hacia atrs. Nucleros de telgopor Entre los mtodos ms originales, se encuentran los de aquellos apicultores que invernan sus ncleos de fin de temporada en cajas de telgopor. Utilizan las conservadoras, como en las que vi
enen los medicamentos de las drogueras, y le colocan los cuadros (4, 5 6 segn el tamao) adentro. Otros, le colocan la caja "de sombrero" a los ncleos. Usando la caja de sombrero, segn explicaron los apicultores, no se produce humedad y el viento o la helada del invierno no chocan directamente con las paredes del nuclero.
Manejo de las colmenas ante los bajos rindes

El manejo incorrecto de la cmara de cra y la poca atencin a los problemas sanitarios, son dos de las causas que repercuten en la merma de produccin. Este problema es muy comun cuando el apicultor tuvo campaas pobres o por falta de dinero ya sea para acercarse a las colmenas, alimentarlas o curarlas. El manejo incorrecto de la cmara de cra y la poca atencin a los problemas sanitarios, son dos de las causas que repercuten en la merma de produccin. Uno de los problemas es el mal manejo en la cmara de cra, nos cuesta mucho reconocer los problemas que tenemos. Despus baja la produccin y empezamos a buscar culpables, pero la culpa fue nuestra. El problema ms grande que tenemos tiene que ver con la sanidad: Es fundamental tener un manejo integrado de la cmara de cra y establecer programas sanitarios regionales. Como las colonias conviven con todos los patgenos debemos darle vigor para que puedan defenderse naturalmente. Colmenas sanas son las que tienen altas defensas naturales, los patgenos estn pero no producen enfermedad. Para tener las colonias vigorosas es fundamental contar con los recursos adecuados de alimentos, tener las reservas suficientes de miel y polen, para evitar que la colonia se debilite y permita el accionar de los patgenos. Adems, hay que aplicar correctamente los antibioticos si son necesarios, no aplicarlos de forma brusca porque se pueden dar intoxicaciones en la colmena Otro punto a tener en cuenta tiene que ver con evitar la saturacin del apiario por colocar demasiadas colmenas, lo ideal sera 50 60 colmenas por cada apiario, depende la region y pais. No es lo mismo la produccin en Argentina que la produccin en Colombia o Peru. Cuando hay saturacin pueden aparecer focos infecciosos muy graves y difciles de controlar y adems se da la competencia de las abejas por el alimento. Hay muchos factores que podran ser controlados por el apicultor y que muchas veces por desconocimiento no se tienen en cuenta. Por ejemplo, uno de los grandes problemas es traer reinas de otras provincias o pases, corriendo el riesgo de que estas lleguen con enfermedades. Importante no siempre las reinas de un pais son buenas productoras en otro pais. Tambien no siempre las reinas de una region sirven en otra region. Por ejemplo no siempre funcionan reinas que trabajan en regiones de praderas de un pais llevarlas a las montaas de otros paises. Otro inconveniente tiene que ver con los problemas a la hora de elegir una alimentacin natural o artificial. Si elegimos esta ltima debemos tener en cuenta que la dieta este correctamente balanceada, que contenga las propiedades que la abeja necesita y que estos alimentos estn autorizados legalmente. Los manejos de la colmena son los mismos en cualquier parte del ao, lo que varan son las estrategias a utilizar. Hay que olvidarse o erradicar los conceptos que en invierno no hay que ir al apiario. En este momento y con la gran cantidad de enfermedades y problemas que tienen las abejas hay que estar alerta todo el ao. Debemos tener en cuenta las estrategias a seguir segn la poca del ao, la regin y las condiciones climticas. El productor debe trabajar para lograr que en el pico mximo de produccin estn disponibles todas las pecoreadoras. Debemos conocer la curva de floracin de nuestro sector y trabajar de acuerdo a ello. Es fundamental, llevar un libro con el registro de todas las acciones que el productor va realizando, para poder controlar todo lo que fue sucediendo a lo largo del circuito productivo. No hace falta ningun sistema de trazabilidad o programa pago. En este momento, y si el apicultor es pequeo o mediano, con un simple cuaderno de anotaciones puede llevar bien las tareas de campo
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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70- JUNIO 2012 - Hoja 4
Alemania no cede a los transgnicos y la UE dice que si... quien ganara?

Alemania se opondr a cualquier medida de la Unin Europea (UE) que permita la presencia de rastros de organismos genticamente modificados (GM) no aprobados en los alimentos para consumo humano, dijo ayer un portavoz del Ministerio de Agricultura y Proteccin del Consumidor alemn. La ministra de Agricultura y Proteccin del Consumidor de Alemania, Ilse Aigner, se opondra a cualquier medida que ponga fin a la norma de tolerancia cero para los contenidos GM no aprobados en las importaciones de alimentos para consumo humano, seal un portavoz de la cartera. La Unin Europea permitir transgnicos en alimentos Funcionarios de la Unin Europea (UE) dijeron que se permitir la presencia de pequeas cantidades de Organismos Genticamente Modificados (OGM) en los alimentos importados por la regin, bajo nuevas normas que sern propuestas pronto por el brazo ejecutivo del bloque. Los exportadores y productores europeos sealan que las normas son necesarias para evitar interrupciones en las importaciones alimentarias, dado que las cadenas de suministro globales hacen cada vez ms difcil garantizar que las cargas con destino a Europa estn totalmente libres de OGM an no aprobados por el bloque. La comisin europea ha dicho que quiere resolver este problema antes de fin de ao, y presentaremos una propuesta en el futuro muy cercano, indic el portavoz de la Comisin de Salud y Consumidores, Frederic Vincent
Avispa asiatica: ya en Catalua y Portugal

La Avispa Asitica sigue su marcha por Espaa desde que entrara procedente de Francia, y contina causando estragos en las colmenas. El 19 de abril, una reina del avispn fue capturada en la zona norte de Girona, cerca de la frontera con Francia, habindose encontrado tambin a finales del ao 2011 en Portugal, en la regin de Minho, fronteriza con Galicia Uno de los aspectos ms importantes para combatirlo es identificarlo primero, claro, y no confundirlo especialmente con otros avispones o avispas europeas de gran tamao. En la foto que encabeza el post podis ver algunos ejemplares en la mano. Una de las claves para diferencialo son las bandas amarillas del abdomen. El de la parte superior no corresponde a la Avispa Asitica (Vespa velutina nigrithorax), ya que este slo cuenta en su abdomen con un anillo de color amarillo en la parate inferior, concretamente el 4 anillo abdominal, mientras que el ejemplar de ms arriba posee varios anillos, que adems cuentan con unos puntos amarillos Colaboradores de Apicultura sin Fronteras (www.agemchile.cl )
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Los panales NO son todos iguales

Por Orlando Valega de Apcola Don Guillermo Los panales conforman el esqueleto o estructura rgida del organismo Colmena. Un panal es una estructura rgida formada por celdillas (cavidades) hexagonales opuestas que comparten caras entre si y el fondo. Ubicacin de los panales en la colmena Los panales conforman el esqueleto o estructura rgida del organismo Colmena. Un panal es una estructura rgida formada por celdillas (cavidades) hexagonales opuestas que comparten caras entre si y el fondo. Estas celdillas que unidas entre si, forman los panales, son utilizadas para cuidar la cra, acopiar alimento, dar rigidez al panal y cuando estn llenos de miel; formar panales para reserva de energa y aislamiento trmico del organismo. Las colmenas tienen varios panales yuxtapuestos que dejan entre si como galeras por donde transitan las abejas calentando el nido, alimentando la cra o depositando el alimento. Estos pasillos tienen dimensiones estables segn la raza de abejas. Conviven en la colmena tres tipos de individuos: La Reina, hembra madre de todos los dems individuos; Las obreras, hembras estriles dedicadas a realizar toda la logstica de la colmena y los Znganos o machos responsables de la fecundacin de las futuras reinas
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la miel, principal reserva de alimento y de aislamiento trmico es depositada en un cuarto tipo de celdilla. Resumiendo, tenemos las caractersticas Celdillas Reales o Realeras destinadas a criar la Reina. Las celdillas donde se criaran las obreras, las destinadas a la cra de los znganos y por ltimo una cuarta categora de celdillas destinadas a contener la miel. Cada tipo de celdilla ocupa un lugar caracterstico en la estructura formada por los panales. Por lo general la miel es depositada en la parte superior de los panales y llenando la totalidad de las celdillas de los panales perifricos del nido a fin de aislarlo trmicamente. Estas celdillas tienen un tamao intermedio a las de cra de obrera y a las de cra de znganos. Las celdillas para cra de obrera son las mas pequeas y se ubican por debajo de la miel en los panales centrales del nido. Las celdillas para criar znganos son de mayores dimensiones y son labradas por las obreras en las esquinas inferiores de los panales que bordean el nido. Por lo general las obreras inducen a la reina a poner vulos para criar znganos despus de haber criado gran cantidad de obreras. La reina se cra en una celda muy especial, mucho mas grande que las dems, que tiene la forma de una
Celdillas: Cada tipo de individuo se cra en su etapa larval en distinto tipo de celdillas y
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bellota, o un man y sobresale del panal con la punta para abajo. Se la denomina Celda Real o Realera. Estas celdillas ocupan distinto lugar segn cual fuere el impulso que indujo a su formacin. Ante la falta abrupta de la reina las obreras cran varias Celdas Reales en cualquier parte del rea de cra de obrera, pero si deciden reemplazar la reina actual por otra mas eficiente, labran una o dos Celdas Reales (Realeras) muy grandes en el centro del panal de cra de obrera y por ltimo, en oportunidad de enjambrar, labran Realeras como rosarios en el borde inferior del panal Oprculos: Las celdillas son cubiertas con una tapa u oprculo que es distinto para cada tipo de celdilla: Las celdas de cra se operculan con un material poroso para que las cras puedan respirar, es de color ocre mate y su aspecto es inconfundible porque tiene marcado los bordes de las celdas. Si es de zngano parece un
estampado de balines, y si es de obrera, el trazado de las celdas le da un aspecto de un mosaico hexagonal. En cambio el sellado de la miel es hermtico y est hecho de cera pura, aunque hay excepciones- es liso y las celdas pueden estar marcadas por pequeas depresiones, pero sin el dibujo grabado de las de cra. Por ltimo tenemos la excepcin, un quinto tipo de celdilla; hay una celda que si bien tiene el tamao de la celda de larva de obrera, su oprculo tiene la forma de la celda de zngano. Son las celdas de la postura de la Obrera ponedora. Son larvas de pequeos zanganitos. Como norma: La cra de obrera ocupa la parte inferior y media de los panales centrales del nido, digamos los seis centrales; la cra de zngano se ubica en los panales perifricos del nido en las esquinas inferiores de los mismos, el segundo y noveno, puede contener tambin algo de polen. Por ltimo la miel en el nido de cra se acumula en la parte superior de todos los panales y en los panales de los bordes formando una capa aislante, este puede tambin contener polen Cuando deseamos agregar panales o intercambiar panales en una colmena debemos recordar este orden estricto que ocupan los panales. No se debe colocar panales con celdillas de zngano en los lugares centrales, estos siempre van a ambos lados en los bordes del nido. Tampoco conviene
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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO DE 2012- Hoja 7
Utilizar los panales de miel para la cra ya que son de dimetro superior que los de cra. Por razones inexplicables a veces las obreras labran en el centro del panal celdillas para zngano, estos panales pueden ser reutilizados siempre que la superficie de las celdillas para zngano no fuere excesiva y como norma, en el borde del nido o en los dos extremos de la cmara de cra para que lo llenen de miel. Nunca en el centro del nido ya que las abejas no utilizarn las celdillas ni para zngano, -ya que prefieren los bordes del nido- ni para obrera por ser muy grandes. Las llenaran con miel dispersando la cra de obrera, lo que hace que la tarea de incubacin resulte mas costosa e ineficiente. El nido deber extenderse a otros lugares como ser las alzas superiores y se perder energa para calentar el nido y el espacio destinado a la miel estar ocupado por cra. Se tiene la creencia que si se colocan tiras de cera estampada en vez de colocar toda la plancha; las obreras estirarn celdillas de zngano y esto no es tan as. Si el cuadro con una tirita de cera estampada se coloca dentro del rea de cra de obrera, labrarn celdas para obrera y si la colocamos cercas de los bordes del nido es probable que Terminen labrando celdas de znganos. De todas maneras, por mas que coloquemos lminas completas de cera estampada en las periferias del nido, las obreras labraran celdillas para znganos en los bordes inferiores de los mismos.
Reportan baja en venta de miel por autorizacin para siembra de soya

Los ingresos por la venta de miel se ha reducido en unos ocho millones de dlares en la presente cosecha por el simple hecho de que sali a la luz pblica la autorizacin para la siembra de 253 mil hectreas de soya transgnica en Mxico, afirm Miguel ngel Mungua, gerente de la cooperativa Educe y parte de una red de apicultores en la pennsula de Yucatn. Durante el foro informativo sobre la apicultura y los cultivos transgnicos, efectuado en esta ciudad, dijo que la siembra de soya transgnica podra ocasionar que los pases de Europa que importan miel de Mxico cierren el mercado, por lo que el producto tendra que ser vendido en los Estados Unidos, donde las restricciones por los organismos genticamente modificados no son tan fuertes porque all los producen. Seal que de concretarse esta posibilidad el impacto en el precio de la miel para el ao prximo sera de entre 225 y 250 millones de pesos menos que en 2011, slo por cambiar de mercado de Europa a Estados Unidos, ya que este pas compra ms barato el producto. Estados Unidos se est saboreando las manos por la posibilidad de que Europa nos cierre el mercado y ellos compren esa miel, coment en entrevista despus de la inauguracin del foro que se lleva a cabo en El Colegio de la Frontera Sur (Ecosur), con la asistencia funcionarios federales y apicultores, entre otros. Record que la Secretara de Medio Ambiente y Recursos Naturales (Semarnat) emiti el 11 de mayo pasado un dictamen favorable al cultivo de soya transgnica en Mxico, pese a que no existen condiciones para asegurar la coexistencia entre este cultivo y la produccin de miel.
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experimental, piloto y comercial en la cosecha de 2012 el precio de la tonelada de miel ha disminuido de entre 300 y 400 dlares, asever Mungua. Agreg que si los multiplicamos por el volumen de miel que exportamos a nivel nacional eso representa una disminucin de ingresos de alrededor de ocho millones de dlares, es decir, ms de cien millones de pesos.
Associao Paulista de Apicultores
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Generando la flora apcola

El conocimiento de las fuentes de materia prima es de fundamental importancia. El desconocimiento de cultivos alternativos que econmicamente sean rentables sembrar exclusivamente para las abejas, hacen de la apicultura una produccin que se debe adaptar a las condiciones de flora del medio. en funcin de esta cantidad y calidad de nctar y de polen, que se determinar la ubicacin y el tamao de la explotacin apcola. El desconocimiento de cultivos alternativos que econmicamente sean rentables sembrar exclusivamente para las abejas, hacen de la apicultura una produccin que se debe adaptar a las condiciones de flora del medio. En la mayora de las regiones, los ambientes naturales apropiados para el desarrollo de la apicultura estn constituidos fundamentalmente por especies del monte nativo, la flora de praderas naturales, ms los cultivos para semilla y floraciones espontneas (malezas). Los cultivos agrcolas industriales con especies como colza, Vicia villosa, trigo sarraceno (alforfn) y crtamo, no slo complementaran, sino que en muchos casos, por s solos, brindaran excelentes cosechas de miel adems de otros rubros productivos como semillas y diferentes usos como por ejemplo la produccin de biodiesel Caractersticas de los cultivos Colza (Brassica napus): A principios de primavera (septiembre y hasta fines de octubre), por un espacio de 20 a 25 das, las abejas se incentivan al mximo aumentando potencialmente el rea de cra; y el crecimiento de la poblacin, etapa aprovechable para la multiplicacin o el fortalecimiento de ncleos hechos
Para la explotacin apcola, el conocimiento de las fuentes de materia prima es de fundamental importancia. Todo apicultor que desee instalar un apiario, o ampliar los que ya posee, deber saber cual es el aporte nectarfero y polinfero de la zona. Tan importante como esto, ser el saber en que momentos se da esa floracin. Es
temprano. Apicultores experimentados indican que es buena productora de miel y con una calidad de polen excelente, con un porcentaje de protena que va desde el 20 al 27% y la isoleucina en el orden del 4,1 %. (El contenido proteico del polen de especies vegetales melferas debe ser superior al 20 % y el porcentaje de isoleusina mayor al 4 % para cubrir los requerimientos de las abejas). La bibliografa indica que las abejas pueden acumular de 6 a 10 kg/da, dependiendo de la fortaleza de la colonia, nmero de flores y condiciones del tiempo.
La receptividad del cultivo, con una altura de hasta 1,60 m y con una densidad de 60 a 100 plantas por metro cuadrado es de hasta 10 colmenas por
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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO 2012- Hoja 10
hectrea. La colza se presenta para el apicultor como una opcin vlida, puede ser adems una buena alternativa para polinizacin y multiplicacin de colmenas, adems del valor de la especie para la obtencin de aceite y biodiesel. La fecha de siembra es en abril, mayo o julio, segn ciclo y variedades, y los rindes de la colza pueden alcanzar los 2500 kg/ha de semilla Vicia (Vicia villosa) Los requerimientos de polinizacin por abejas dependen del cultivar. Vicia villosa es altamente beneficiada por los insectos. Tiene gran atractividad para las abejas (melferas y Bombus) por el alto contenido de nctar. Se recomiendan 2 a 3 colmenas por ha. Consideramos a la floracin muy buena para cubrir el bache que se produce luego de la colza y para mantener la provisin de nctar, sobre todo en secano. Datos aportados por apicultores de la zona de secano confirman la buena produccin de nctar ya que colmenas, luego de haber sido nucleadas en
poca ms temprana, produjeron alrededor de 10 kg de miel por colonia en meses como noviembre y diciembre. Se infiere que colmenas con mayor poblacin y un cultivo con adecuada reserva de humedad y temperatura ambiente acorde a la poca podran superar estos rendimientos, sobre todo en esos meses crticos. En Vicia villosa son comunes rendimientos de semilla de 1500 kg/ha. Fecha de siembra: mayo.
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Crtamo (Carthamus tinctorius) Se observa una gran actividad de abejas en el cultivo. El nctar y polen son altamente atractivos. La accin de las abejas es considerada indispensable para la polinizacin del cultivo (entre un 5 y 40% de polinizacin cruzada), dependiendo del cultivar. Los rendimientos de semilla logrados pueden alcanzar 2400 kg/ha. No hay antecedentes concretos sobre produccin de miel en nuestro pas, dada la reciente difusin como cultivo industrial, pero productores de EE.UU colocan 6 colmenas por hectrea muy cerca del cultivo en zonas del suroeste (Arizona y Nuevo Mxico) donde los
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rendimientos por colmenas alcanzan a 29 y 30 kg/ colmena. Es una oleaginosa de rusticidad extrema con posibilidades de uso para biodiesel y aceite comestible. Fecha de siembra: agosto
y de sabor fuerte caracterstica por la cual algunos mercados importadores no la prefieren. Sin embargo es de excelente calidad. Este cultivo necesita de las abejas para la transferencia del polen y fecundarse para aumentar la produccin de semilla. Con seis (6) colmenas por ha se han producido ms de 1400 kg/ha de semilla. Contiene protenas de alto valor biolgico y se utiliza para extraer harinas sin gluten para la alimentacin de personas celacas.
Fecha de siembra: noviembre. Tambin puede sembrarse de segunda (sobre trigo, avena, cebada, etc.) logrndose ampliar el perodo de floracin. Estas floraciones alternativas, permitirn a los productores apcolas, temprano en primavera, fortalecer sus colmenas, y posteriormente aprovechar la cadena de estas especies vegetales para la produccin de miel, y adems, un acopio interesante para afrontar la prxima estacin invernal.
Alforfn o trigo sarraceno (Fagopyrum esculentum) Especie melfera de calidad, con una floracin muy atractiva. Sembrado en el mes de noviembre comienza a florecer a los 45 das y prcticamente finaliza a fines de febrero. Se extraen hasta 150 kg de miel por hectrea, las flores secretan nctar en cantidad abundante en horas de la maana y las abejas pueden acumular 4 kg de miel por da. Constituye, entre otras especies, una fuente muy importante de miel en el oeste de EE.UU, donde el clima es seco (entre 50 y 300 mm segn zonas) y muy caluroso. La miel es ms oscura
BeeRecord: Lanzan aplicacin chilena para la industria apcola mundial

BeeRecord es la nica aplicacin telefnica a nivel mundial, que en pocos minutos permite registrar datos de apiarios y colmenas a travs de grabacin de voz y posteriormente los entrega en forma de reportes. A partir del 2 de mayo estar disponible desde Google Play, en ingls y espaol, para equipos smartphones con sistema operativo Android de la versin 2.2 en adelante. Cabe destacar que la aplicacin ha sido creada por el Consorcio de Desarrollo Tecnolgico Apcola y est siendo incubada por Gesta Mayor (Incubadora de Negocios de la Universidad Mayor). Para la gerente general del Consorcio, Paulina Cceres, BeeRecord ser un gran aporte para el desarrollo del rubro, para mejorar la competitividad de la industria es fundamental que los apicultores cuenten con registros de sus apiarios, es por esto que aprovechando la tecnologa disponible hoy en da y tomando en consideracin la explosiva adopcin de smartphones en el mundo, creamos BeeRecord, aplicacin que permitir generar un completo reporte del apiario o colmena en menos de 10 minutos. BeeRecord fue diseado para ser utilizado de manera transversal y a nivel mundial, es por ello que la aplicacin costar US $49 y adems contar con una versin demo gratuita, que igualmente estar disponible desde Google Play a partir del 2 mayo. Beerecord es un aporte a la profesionalizacin de la apicultura, ya que permite tener registros de las explotaciones destinando muy poco tiempo a esta tarea fundamental para cualquier negocio agrcola. Es una herramienta que ser til no slo para los apicultores, sino tambin para asesores e investigadores. Asimismo, en las pruebas del prototipo recibimos valiosos comentarios de los apicultores, los que han sido acogidos y ya estamos trabajando en las actualizaciones para introducir mejoras en la aplicacin. Por ejemplo, la posibilidad de hacer una configuracin personal de acuerdo a cada sistema productivo, la introduccin de mecanismos de pago alternativos y, por ltimo y muy importante, diseando un modelo de negocios que permita que BeeRecord sea accesible para todos los apicultores, seala Paulina Cceres
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POLEN, funcin en La Colmena

Los granos de polen son una multitud de cuerpos microscpicos, contenidos en los sacos polnicos de la antera de la flor. Ellos constituyen los gametos fecundantes masculinos en las plantas superiores que colectan las abejas por ser la nica... luego se desprende de la envoltura que lo protege para iniciar su fermentacin lctica. Este polen almacenado sufre cambios bioqumicos que hace que se incremente la acidez y es conocido entonces bajo estas condiciones por "pan de abejas" natural.
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Los granos de polen son una multitud de cuerpos microscpicos, contenidos en los sacos polnicos de la antera de la flor. Ellos constituyen los gametos fecundantes masculinos en las plantas superiores que colectan las abejas por ser la nica fuente de protenas, aminocidos, lpidos, vitaminas y minerales de la colmena. En las condiciones normales las abejas no utilizan la pelota de polen en estado fresco sino elaborado en pan de abejas. Las abejas obreras transportan el polen agregndole nctar y secreciones salivares (que son muy ricas en enzimas), una vez llegado a la colmena el polen es empacado dentro de las celdas del panal de cra, las celdas son operculadas con una capa delgada de miel, en un ambiente anaerbico, a 38 C. En tales circunstancias, en presencia de calor y humedad, el polen germina y
La conversin del polen en pan de abejas natural y los cambios bioqumicos asociados a este, generalmente han sido postulados como un resultado de la accin microbiana, en donde ocurre fundamentalmente una fermentacin cido lctica causada por bacterias y levaduras. Para las abejas adultas el pan de abejas le es necesario para poder fabricar las diferentes secreciones que ellas producen: jalea real, los fermentos salivares, y la cera, adems de ser imprescindible en el desarrollo de las glndulas hipofaringeas y para la formacin de los cuerpos adiposos que permite a la abeja pasar el invierno. Ello ocurre al inicio de su vida adulta, antes de que salgan de la colmena a pecorear. Las larvas en el cuarto da de su desarrollo comienzan a alimentarse con el pan de abejas, si se alimentan con pelotas de polen su desarrollo se retrasa (Astaruskene, 1990). La fraccin proteica del polen contiene tambin una espectacular cantidad de enzimas (estn presentes todas las clases de enzimas) y especialmente la amilasa, la invertasa, ciertas fosfatasas, transferasas, as como una multitud de cofactores enzimticos, como la biotina, el glutatin, el NAD o ciertos nucletidos
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Hay que aadir que la concentracin en protena depende de la especie de vegetal y la variabilidad de la especie. En el polen hay un 5% de grasas (en miel no hay grasas). Las abejas necesitan un 5% de grasas en la alimentacin para mantener el equilibrio. El metabolismo de las grasas est asociado al de los hidratos de carbono. Los azcares de la miel se transforman en grasas internas gracias a cofactores presentes en el polen. El papel del polen es vital. Aporta toda la fase nitrogenada, toda la grasa, vitaminas, protenas y cofactores. Se producen compuestos de defensa individual (pptidos) Flora intestinal: En el interior de este canal alimentario

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APICULTURA SIN FRONTERAS N 70 - JUNIO 2012 - Hoja 13
medio, en su pared, viven una serie de bacterias beneficiosas, lo que se llama la flora intestinal. Estas bacterias consumen los restos de nutrientes que quedan por all, y a cambio fabrican vitaminas y compuestos biolgicos que el epitelio intestinal absorbe y la abeja aprovecha.Este consumo de los restos de nutrientes evita que sean aprovechados por esporas de bacterias u hongos para desarrollarse.A propsito de flora intestinal, cuando la abeja nace no la tiene, la adquiere con el consumo del polen almacenado en la colmena. Este polen lleva una serie de microorganismos que, unidos a los existentes en la colmena, y gracias al apisonado y humectacin con nctar que le hacen las abejas, se trasforma en un polen ensilado, con una fermentacin beneficiosa, como la del yogurt o el forraje, que lo hace ms rico en nutrientes y vitaminas. Si no hay una buena recoleccin de polen hay problemas por falta de estos microorganismos en el intestino de las abejas (como nosotros cuando tomamos antibiticos y matamos la flora intestinal). Las grasas en la colmena estn representadas en la jalea real y en la cera. Si no hay polen no hay produccin de Jalea Real y cera. Las abejas encuentran hidratos de carbono en el nctar (80%) y en el polen (40%), y forman dos tipos de grasas a partir de estos azcares: la cera (que es una grasa slida a temperatura ambiente) y sus grasas internas, que acumulan en unas clulas vacas, llamadas trofocitos o adipocitos (del tejido adiposo), sobre todo en otoo. Para que se produzcan
esas transformaciones es imprescindible la presencia de ciertos componentes que estn en el polen y que son otras grasas, enzimas... que actan como iniciadores y catalizadores de esas reacciones qumicas. Algunas de estas grasas no pueden ser "fabricadas" por las abejas, las han de tomar ya "formadas" en la dieta (polen), a este tipo de sustancias, no "fabricables", se les lama vitaminas. Cuando hay abundante polen de calidad adems de criar larvas de obreras las reinas ponen vulos para criar znganos y las colonias renuevan sus reinas, se reproducen y multiplican, pero si se corta el ingreso de polen o este es de mala calidad lo primero que se corta es la cra de znganos. Esto indica que la multiplicacin de las colonias de abejas est ligada directamente a la adecuada provisin de polen de calidad a la colmena. RESUMIENDO: Las abejas fermentan al polen y lo transforman antes de consumirlo en pan de abejas, que es el alimento principal de las larvas y de las abejas adultas jvenes. El pan de abejas es imprescindible porque: -Aporta toda la fase nitrogenada, toda la grasa (5%) vitaminas, cofactores etc. -Las protenas contribuyen en la produccin de la cra y en la acumulacin de protena corporal -Los cofactores, enzimas y vitaminas son imprescindibles para poder producir diversas secreciones como: Jalea Real, fermentos salivares, la cera (contiene cofactores que catalizan la transformacin de los carbohidratos del nctar en cera) -Contiene bacterias propias de la flora intestinal de la abeja -Contribuye en la fabricacin de los pptidos propios de la defensa del organismo de la abeja. - Estimula la postura de vulos para la cra de znganos, sin polen no hay nacimientos de znganos se paraliza la reproduccin.
INTERROGANTES Los sustitutos de polen podrn ser ensilados como el polen? Aportan la fase nitrogenada, tal vez el 5% de grasa pero. Aportarn las vitaminas, cofactores, enzimas necesarios para producir las secreciones salivares, jalea real, cera, y otros? Contendrn la flora bacteriana necesaria para el intestino de la abeja? Se producirn las reacciones qumicas necesarias para producir los compuestos propios a la defensa del organismo de la abeja (Pptidos) ?
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Paquetes de Abejas
La multiplicacin de colonias por medio de paquetes de abejas es una tcnica que es muy difundida en pases como Canad y Estados Unidos. Quien adopte esta tcnica tendr que realizarlo un mes y medio o dos antes del flujo principal de nctar en su zona. El paquete de abejas es realmente un enjambre artificial, compuesto por una Reina que viaja en su correspondiente jaulita y 1.000 o 1.200 Gr. de abejas nodrizas en s mayora, dentro de un envase adecuado, el cual lleva incluido un alimentador con candy. permiten dejar libres los extremos de los cabezales, para que la abeja pueda desplazarse con facilidad y as poder salir de la zona de cra en busca del alimento, que se ubica en la parte exterior de la lmina, dentro de un alimentador tipo Doolittle y mantener una buena ventilacin y prevencin de la Los distintos elementos y equipos con humedad. El objetivo es que comprima la los que debemos contar para la poblacin de esta manera la temperatura produccin de paquetes de abejas, son se mantendr lo ms estable posible. los siguientes: d. Alimentador para la jaula porta paquete: a. Caja porta paquete: Este es un elemento que se ubica en la Es un elemento cuadrangular, donde se parte superior del paquete y se introduce introducirn las abejas nodrizas adems en el agujero. La dimensin de la de la Reina fecundada. Las paredes circunferencia de esta abertura, debe superiores, inferiores y los laterales permitir la introduccin justa, fcil y un menores son construidas con madera calce perfecto de un pote de plstico de o pulgada, recomendamos no cnico, de los que se usan para Kg. cepillar la jaula en su cara interna, para De miel. Este envase posee una tapa que las abejas puedan prenderse de la plstica con cierre telescpico superior madera rstica. Los laterales mayores que permite obtener un buen cierre. En el llevan alambre tejido metlico, tipo alimentador de plstico se deberan fiambrera, que permita una buena realizar de 3 a 4 orificios en su regin ventilacin, ya que si se usan mallas lateral, de aproximadamente 20 mm. de muy cerradas, existe el peligro de que dimetro, que permita el paso de las las abejas se asfixien durante el viaje. abejas, para tener acceso al candy. En la pared superior debe contar con un agujero para el alimentador, con un e. Alimentador doolittle: dimetro de 8 cm. y una ranura para el Dentro de la cmara de cra se deber clavo que va colocado en la jaula con la usar un alimentador del tipo Doolittle, reina y de donde queda suspendida. El nosotros usamos uno de 2 Litros de tamao del paquete es de 36 cm. de capacidad. Este alimentador est largo, 25 cm. de alto y 14 cm. de ancho, formado por un marco de 35 mm. de de esta manera pueden contener un kilo cualquier madera, con dos secciones de de abejas, que equivale a 10 mil chapadur clavados en los bordes e individuos. impermeabilizados con parafina y cera de abejas, dejando en la parte superior b. Embudo de carga: entrada para las abejas. El embudo, con una boca superior de 60 cm. Por 30 cm. Y una altura de 80 cm. f. Aspersor para agua melada: Conforma un paralelogramo. Tambin Es un implemento indispensable y muy puede tener una seccin rectangular en til para la introduccin de los paquete a la base que apoya en la caja porta la cmara de cra, con la aspersin de paquete. Es imprescindible uno especial agua melada sobre las abejas formamos para esta tarea, dado que el tubo inferior una bola con las mismas, evitando as el se introduce en la boca de la jaula porta vuelo. Se puede utilizar cualquier tipo de paquete y debe ser construido para que aspersor. el calce sea exacto en la boca de la caja porta paquete. Como hacemos los paquetes: Este, puede ser construido en fibra de vidrio, con las paredes internas HACIENDO PAQUETES perfectamente lisas, evitando as daos Se deben utilizar nicamente abejas en las nodrizas, al sacudir los cuadros. nodrizas, de esta forma logramos un rpido labrado de la cera, y la adecuada c. Poncho plstico: alimentacin de las larvas. Debemos La lmina de plstico de 200 micrones recordar que de la cantidad de nodrizas nos da buenos resultados. Esta, se depende la cantidad de huevos que ubicar en el interior de la cmara de pondr la reina. cra, y debe poseer 80 cm. de largo por El material tiene que ser nuevo o estar 40 cm. de ancho. Estas medidas perfectamente desinfectado ya que se una cmara de cra completa y con marcos recin labrados.(45 a 60 das). Reduce el riesgo de transmitir enfermedades de la cra. Fcil control de varroa y nosemosis. Su transporte es fcil y requiere de poco espacio.
Es importante hacer resaltar que el tipo de abejas que lo conforman, y de esto depende el xito de la multiplicacin por medio de paquetes, deber hallarse constituido ntegramente por nodrizas, de lo contrario si se usaran pecoreadoras, se llegara a un verdadero fracaso en el desarrollo del mismo. Se debe partir solamente de marcos con cera estampada, alimentacin artificial, y de ninguna manera se debern colocar marcos con panales labrados y menos con miel, ya que todo se centra en la alimentacin artificial a base de azcar y agua. Esta alimentacin se suministrar por medio de alimentadores especiales. VENTAJAS DEL USO DEL PAQUETE DE ABEJAS: Permite el desarrollo rpido y de fcil control. Puede rendir una cosecha en forma inmediata. Podr contar en poco tiempo , con
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pretende lograr un producto sin posibilidades de contagio de enfermedades. De ninguna manera se debe utilizar cera obrada o marcos con miel. Las colmenas proveedoras de nodrizas deben ser fuertes, sanas y estar en plena etapa de desarrollo. Tales condiciones aseguran una buena provisin de abejas nodrizas. Estas podrn prepararse con 24 hs. de anticipacin a la realizacin del paquete. Lo ideal es una colmena con cmara de cra y un alza estndar. De la cmara de cra se suben 3 cuadros con cra abierta y se colocan en el alza superior, se debe tratar de ubicarlos en la zona central y tenerlos identificados para distinguirlos rpidamente. Las abejas nodrizas subirn y cubrirn estos cuadros instintivamente para proteger, dar calor y alimentar a las larvas jvenes. Se coloca una rejilla excluidora entre ambos cuerpo, de manera que la reina permanecer en la cmara inferior. Damos jarabe a la colmena para que al da siguiente no sea necesario el asperjado de la abeja durante la formacin del paquete. Al da siguiente comenzamos con la operacin de formacin propiamente dicha. Para armar el paquete de abejas, tomamos los marcos de cra cubiertos con nodrizas y se colocan sobre el embudo, insertado previamente en el orificio de la caja porta paquete se sacuden enrgicamente. Mediante la utilizacin de este manejo la mortandad de abejas es mnima. Es necesario controlar el peso de las abejas que se incorporan. Se utilizar como referencia que tres cuadros bien cubiertos de nodrizas equivale a un Kg. de abejas aproximadamente. Podemos sacudir cuadros de distintas colmenas hasta completar el peso pretendido. Se roca el interior de la caja con jarabe de azcar diluido al 50%, evitando que las abejas vuelen, si hemos alimentado el da anterior o hay algo de entrada de nctar, con lo que chorrea del cuadro cuando sacudimos, no es necesario el asperjado. La jaula con la reina fecundada se colgara de la ranura superior, quedando suspendida en el interior, mediante un alambre fino el cual esta sujeto de un clavo. Podemos colocar algn medicamento para combatir la varroa e inmediatamente despus se coloca el alimentador, en su interior contiene candy de azcar impalpable y jarabe. Colocamos fumagilina al candy y as evitamos el
surgimiento de brotes de nosemosis Los paquetes ya confeccionados se ubicaran a la sombra, facilitando que la abeja ascienda y forme un racimo semejante a un enjambre. Las abejas rodearan a la reina y rpidamente se arma el enjambre. Luego de transcurridas como mnimo 24 hs desde su confeccin el paquete puede trasegarse a la cmara de cra. CUIDADO DEL PAQUETE Desde la confeccin y hasta la instalacin, permanecern en un sitio sombreado, protegidos de los rayos solares, con buena ventilacin y los frentes de alambre tejido se deben encontrar separados 15 centmetros entre s. El objetivo es que los paquetes se tranquilicen y bajen su temperatura. En caso de altas temperaturas, es conveniente rociarlos con agua. TRANSPORTE DEL PAQUETE Los paquetes se pueden unir con Listones de madera, conformando as unidades de tantos paquetes como el vehculo de transporte permita, con 10 cm. de separacin entre ellos y se forman filas. De esta manera se permiten realizar varias hileras las cuales estn superpuestas, as como tambin acomodar los paquetes fcilmente y brinda seguridad en el traslado. Cuando las distancias son largas, es mejor, si el transporte de los paquetes de abejas se realizara mediante horas nocturnas, se deber refrescar con agua, sobre todo cuando la temperatura aumente. INSTALACION DE PAQUETES Para su instalacin, las cmaras deben haber sido acondicionadas para impedir la fuga de abejas. Estas se ubicaran en un lugar con media sombra, esto es muy importante ya que el sobrecalentamiento es el responsable de la mayora de los fracasos en la instalacin de los paquetes, que permanecern cerrados durante 24 horas. El cierre tiene como objetivos, retener las abejas dentro de la cmara en condiciones satisfactorias, evitando el despoblado y sobrecalentamiento, adems de favorecer el labrado de la cera estampada, Finalmente la piquera se cerrar con un tejido mosquitero de metal un poco mayor a la medida de la piquera, de manera que se asegure la circulacin de aire. Ya dispuestos a la instalacin se colocan los 4 marcos con cera estampada y el poncho de polietileno quedar cubrindolos,
Quedando de esta Manera el alimentador por fuera. Llenamos el alimentador con jarabe al 50%. Ahora asperjamos las abejas con un jarabe liviano, para evitar que vuelen, se quita el alimentador de la caja porta paquete y retiramos la jaula con la reina, no se saca el tapn del candy y se coloca suspendida entre los cuadros de cera estampada. La jaula porta paquete, con las abejas, se colocar entre el alimentador y la pared interna del alza, con la boca destapada y hacia arriba. Como ltimo paso se colocar el techo. Una vez transcurridas 24 horas se podrn abrir las piqueras si es a la noche mejor y al da siguiente retiramos el tapn del candy de la jaulita de la reina y agregamos nuevamente jarabe. Luego de transcurridos 4 -5 das de instalados, se revisan las cmaras, se retira la jaula de la reina, la caja donde se transport el paquete y se controla que el comportamiento de la reina sea normal, el labrado de los panales y el acopio de polen y nctar. Se proceder a colocar 1 Litro de jarabe, hecho que se repetir dos veces por semana hasta que la colonia haya completado la cmara de cra. CONSIDERACIONES Disponer de reinas fecundadas y de un buen origen gentico. La utilizacin de abejas con buena mansedumbre. Usar abejas nodrizas ya que labran rpidamente la cera, mantienen la relacin cra-nodrizas y aseguran un desarrollo constante. La alimentacin durante el traslado debe realice con candy con el agregado de fumagilina. Para el desarrollo utilizar jarabe de azcar al 50 % dos veces por semana. Refrescar el enjambre durante el transporte. Evitar el encierro prolongado ya que puede ser causa de nosemosis. La piquera debe permanecer cerrada durante las primeras 24 horas posteriores al trasiego. El trasiego se debe realizar al ltima hora, luego que las abejas se hayan tranquilizado. Destapar las piqueras en la noche siguiente.
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Abstract The microsporidian Nosema apis and Nosema ceranae have been associated with colony disorders of Apis mellifera and Apis cerana, respectively. N. apis is endemic in South America. Recently, N. ceranae has been detected in Brazil, Uruguay and Argentina. No report of its presence, distribution and prevalence in Chile is available. Here, we present a realtime PCR-based method that was able to discriminate between N. apis and N. ceranae. The dynamic range of this assay was 100 to 100,000 spores per honeybee. False-negative results were avoided due to the use of ACTIN gene as internal standard. False-positive results were obtained neither in experimentally nor in naturally contaminated samples. Using this method, we screened 240 beehives from the Chilean region where 42% of the total country honey production take places (Regin del Biobo). Nosema spp. were detected in the four provinces and in 20 of the 26 communes of the region. Among the samples analysed, 49% were positive for N. ceranae. Their infection level ranged from 200 to more than 100,000 spores per honeybee. N. apis was not detected in this region. Hence, our data show that in Chile N. ceranae is an emergent pathogen that is been replacing N. apis. Also, they support that N. ceranae maybe the actual responsible for nosemosis in A. mellifera in South America. Introduction Microsporidia genus Nosema (Nosematidae) causes honeybee nosemosis (Giersch et al. 2009; Klee et al. 2007). Nosema spp. are parasitic fungi which colonise the epithelial of the ventriculus and the midgut of adult workers (de Graaf et al. 1994; Fries 1988). This results in digestive diseases leading to undernourishment and shortening of the honeybee life span (Caldern et al. 2008; Ritter 2001). Affected colonies diminish their honey production and experience a significant decrease in their population (Chauzat et al. 2007; Higes et al. 2008; Oldroyd 2007). Thus, nosemosis causes considerable economical losses to apicultures (Anderson Anderson and Giacon 1992; Fries et al. 1996; Fries 2010; Hornitzky 2008). Nosema apis infects Apis mellifera, the Western honeybees (Zander 1909). Nosema ceranae infects Apis cerana, the Asian honeybees (Fries et al. 1996). Recently, it has been shown that this exclusivity is no longer true. For instance, A. mellifera can be infected by N. apis and N. ceranae separately or as mixed infection (Higes et al. 2006; Huang et al. 2008). Currently, there are conclusive evidences showing neither higher virulence (Forsgren and Fries 2010; Higes et al. 2007; Paxton et al. 2007) nor the factors that determine it (Martn-Hernndez et al. 2011a) in any of these species. However, it has been proposed that worldwide N. ceranae is displacing N. apis (Klee et al. 2007; Martn-Hernndez et al. 2011b; Paxton et al. 2007; Stevanovic et al. 2010; Tapaszti et al. 2009). Thus, N. ceranae was been detected in Europe (Chauzat et al. 2007; Higes et al. 2006; Klee et al. 2007; Stevanovic et al. 2010; Whitaker et al. 2010), North Africa (Higes et al. 2009), Asia (Chaimanee et al. 2011; Yoshiyama and Kimura 2011), Oceania (Giersch et al. 2009), North America (Chen et al. 2008; Traver and Fell 2011; Williams et al. 2008a) and Central America (Caldern et al. 2008; Guzman-Novoa et al. 2011). In Chile, nosemosis has been declared an endemic disease. Up to now, N. apis is recognised as its unique causal agent (Hinojosa and Gonzlez 2004; Huaiquil et al. 2009). Since N. ceranae have been progressively identified in South American countries, e.g. Brazil, Uruguay and Argentina (Invernizzi et al. 2009; Klee et al. 2007; Medici et al. 2011), our aim was to determine the presence, distribution and prevalence of Nosema spp. in Chile. First, we look
JUNE 2012
Nosema ceranae an emergent pathogen of Apis mellifera in Chile

Jessica Martnez & Germn Leal & Paulette Conget J. Martnez : G. Leal : P. Conget Instituto de Ciencias, Facultad de Medicina Clnica Alemana Universidad del Desarrollo, Santiago, Chile
for N. apis and N. ceranae in honeybees clinically diagnosed with nosemosis. As we found A. mellifera infected with N. ceranae, we decided to perform a screening of Nosema spp. in Regin del Biobo, which concentrates 42% of the national production of honey. For this, we settled a real-time PCR-based method that was able to discriminate between N. apis and N. ceranae. Using this method, we analysed 240 beehives sampled, in the spring of 2010 and the summer of 2011, in 26 communes of the four provinces of Region del Biobo, Chile. Materials and methods Extraction and quantification of Nosema spp. Spores A. mellifera individuals were collected and stored in 70% ethanol at 4C. At least 1 week later, the abdomens of 10 worker honeybees were chirurgical removed and crushed in 3 ml of sterile water. Homogenate was filtered through two layers of gauze and centrifuged at 800g, for 6 min. Two millilitres of the supernatant was removed and the pellet was resuspended with the remaining supernatant. Spores present in the sample were analysed under light microscope and counted using an hemocytometer (Cantwell 1970). To generate spore stocks, honeybees clinically diagnosed with nosemosis were used as start material. Extracted spores were diluted up to 1107 spores/ml and stored at 4C. Isolation of DNA from Nosema spp. Spores The
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isolation of the DNA of Nosema spp. spores was performed with the UltraClean Soil DNA isolation kit (Mo Bio Laboratories Inc, California, USA). Genomic DNA was eluted with 40 l of elution buffer, quantified spectrophotometrically and stored at 20C. Characterization of 16S rRNA gene of field samples Fifty nanograms of DNA isolated from spores extracted from A. mellifera clinically diagnosed with nosemosis was amplified in a final volume of 50 l containing 0.2 M of primers targeted to Nosema spp. 16S rRNA gene (INTER-F/ INTER-R, Higes et al. 2007), 3 mM MgCl2, 0.2 mM dNTP, 0.2 mg/ml BSA, PCR buffer (200 mM TrisHCl, pH 8, 500 mM KCl) and 1 U Taq polymerase. Amplification protocol was: one cycle at 94C for 5 min; 25 cycles at 94C for 45 s, at 56C for 45 s and at 72C for 2 min; one cycle at 72C for 7 min. After been electrophoresed, amplicons (649 bp for N. apis and 659 bp for N. ceranae) were purified using the extraction kit Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System (Promega, Madison, WI, USA). Restriction analysis of amplicons was performed with endonucleases TaqI or AluI. Sequencing of the amplicons was done in the automated DNA sequencer ABIPRISM 3100 (Applied Biosystems, California, USA). Similarity search was performed using the Basic Local Alignment Search Tool (Altschul et al. 1990).
Generation of DNA positive controls Reference DNAs from N. apis and N. ceranae were amplify using primers APIS-F/APIS-R and MITOC-F/MITOCR, respectively (Martn-Hernndez et al. 2007). Amplicons (321 and 218 bp, respectively) were cloned using the pGEM-T cloning kit (Promega, Madison, WI, USA). Recombinant plasmids thus generated, named pJNA-2 and pNCH-1, respectively, were propagated in Escherichia coli cultured in LuriaBertani Broth medium supplemented with 100 g/ml ampicillin, under aerobic atmosphere at 37C (Sambrook and Russel 2001), purified using the Wizard Plus Minipreps DNA Purification System (Promega, Madison, WI, USA), and quantified spectrophotometrically. Restriction analysis of recombinant plasmids was performed with endonucleases EcoRI and SalI. Plasmid stocks were stored at -20C. Detection of N. apis and N. ceranae by real-time PCR Real-time PCR was performed in a final volume of 10 l containing 1 l of Negative control corresponds to reaction settled without template DNA. Positive control corresponds to reaction settled with pJNA-2 for N. apis and pNCH-1 for N. Ceranae
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Fig. 1 Identification of N. apis and N. ceranae in Chilean A. mellifera. Amplicons obtained from DNA of spores extracted from honeybees clinically diagnosed with nosemosis using primers INTER-F/INTERR were sequence and compared with the available sequence of N. apis gb. DQ235446.1 (a) and N. ceranae gb. DQ673615.1 (b). In both cases, identities were 99% (430/432 and 328/330, respectively)
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Screening of N. apis and N. ceranae in field samples A. mellifera individuals were collected from 240 beehives located in 26 communes of the four provinces of Regin del Biobo, Chile, during the spring (October to November) of 2010 and the summer (January to April) of 2011. Each beekeeper that agreed to participate in the study randomly collected 30 honeybees from the three central frames of the brood chamber, irrespective of its clinical state. All samples were analysed using the realtime PCR-based method reported in this article. Results r
Identification of N. ceranae in Chilean honeybees The amplicons of 16S rRNA gene generated from spores extracted from A. mellifera clinically diagnosed with nosemosis showed two different estriction patterns. Samples cut with TaqI resulted in fragments of 238, 209 and 201 bp, as expected for N. apis. Samples cut with AluI resulted in fragments of 379, 216, 38 and 25 bp, as expected for N. Ceranae.
Consistently, when amplicons were sequenced and compared with available sequence for N. apis (gb. DQ235446.1) and N. ceranae (gb. DQ673615.1), identities were 99% in both cases (Fig. 1). The detection of N. apis was expected. However, for the first time, we observed that N. ceranae is present in Chilean samples of A. mellifera with nosemosis.
Fig. 2 Detection of N. Apis and N. ceranae by real-time PCR. Amplicons obtained with N. apis DNA using primers APIS-F/APIS-R, N. ceranae DNA using primers MITOCF/MITOC-R and A. mellifera DNA using primers ACT-F/ACT-R were characterised according to their Tm (melting curves) (a) and size (agarose gel electrophoresis) (b). Theoretical Tm and size were 83.5C/321 bp for 16S rRNA gene of N. apis; 80.4C/218 bp for 16S rRNA gene of N. ceranae and 84.8C/ 156 bp for ACTIN gene of A. mellifera
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Fig. 3 Detection limit and dynamic range of real-time PCR settled for N. ceranae. Serial dilutions of extracted spores (insert) and experimentally contaminated honeybee were amplified using primers MITOC-F/ MITOC-R (a). The relationship between spore number and cycle of amplification start was linear in the range 100 to 100,000 spores/ honeybee (b)
Reliable and sensible detection of N. apis and N. ceranae by real-time PCR Under optimum reaction and cycling conditions, the amplification of N. apis DNA (pJNA-2) using primers APISF/APIS-R resulted in a product with a Tm082.5 0.3C and over 300 bp (Fig. 2a, b). By another hand, the amplification of N. ceranae DNA (pNCH1) using primers MITOC-F/MITOC-R resulted in a product with a Tm080.60.6C and over 200 bp. Finally, the amplification of honeybee DNA using primers ACT-F/ACT-R resulted in a product with a Tm083.50.3C and over 100 bp. Expected Tm and size were 83.5C/321 bp for 16S rRNA gene of N. apis, 80.4C/218 bp for 16S rRNA gene of N. ceranae and 84.8C/156 bp for ACTIN gene of A. mellifera. The similarity between empirical and theoretical data for the three genes analysed was also observed in extracted spores, experimentally contaminated honeybees and field honeybees (Fig. 3a). Regarding to the selectivity of our method, we observed no amplification when N. apis DNA were subjected to PCR using primers MITOC-F/MITOC-R or when N. ceranae DNA were subjected to PCR using primers APISF/APISR (data not shown). About falsepositive and false-negative results, we detected no amplification when uncontaminated honeybees were assessed and amplification of ACTIN gene was mandatory for the analysis of field samples. Compared to light microscopy analysis, our real-time PCRbased method has 100% sensitivity and 100% specificity (Table 1). The detection limit of our method, when we used the following as template: (1) plasmid DNA
was one copy of 16S rRNA gene per reaction (data not shown), (2) spore DNA was 2.5 spores per reaction, equivalent to 100 spores per ml of spore extract (Fig. 3a), (3) DNA from honeybee artificially contaminated with spores was 25 spores per reaction, equivalent to 100 spores per honeybee (Fig. 3a). The dynamic range of our real-time PCRbased method was 100 to 100,000 spores per honeybee (Fig. 3b). High prevalence of N. ceranae in honeybees from apiaries located in the South of Chile Nosema spp. 16S rRNA gene was detected in the four provinces and in 20 of the 26 communes of the Region del Biobo (Fig. 4a). N. apis was not detected (0/240) and N. ceranae was detected in 49% (117/240) of samples analysed (Fig. 4b). The infection level (spore load) of these samples ranged from 200 to more than 100,000 spores per honeybee
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Fig. 4 Screening of Nosema spp. in honeybees from apiaries located in Regin del Biobo, Chile, South America. 2,400 honeybees collected from 240 beehives located in the four provinces (different grey tones) of Regin del Biobo were screened. Samples from communes labelled with a white dot were negative for both N. apis and N. ceranae. Samples from communes labelled with a black dot were negative for N. apis and positive for N. ceranae (a). Data also was analysed from each provinces (b). All samples scored amplified for ACTIN gene
Discussion We show for the first time that N. ceranae is present in Chilean apiaries. Furthermore, its genomic DNA is highly conserved compared with N. ceranae found in the rest of the world (Chen et al. 2009; Williams et al. 2008a). In order to perform epizoological studies, we simplify the extraction of spore DNA using a commercial kit and adapted the conventional PCR described by MartnHernndez et al. (2007) to real-time PCR. This improved method discriminates between N. apis and N. cerenae, has a detection limit of 100 spores per honeybee and lets us know the infection level (spore load) of samples. Similarly to other available molecular techniques, our real-time PCR-based method is as good as light microscopy analysis (Bourgeois et al. 2010; Chaimanee et al. 2011; Chen et al. 2008; Hamiduzzaman et al. 2010; Klee et al. 2007; Martn-Hernndez et al. 2007; Ravikumar et al. 2011; Stevanovic et al. 2010; Traver and Fell 2011; Yoshiyama and Kimura 2011). Nevertheless, it does not rely on the
expertise of the observer (Weiss et al. 1999) and allows the complete (16S rRNA of N. apis, 16S rRNA of N. ceranae and ACTIN of A. mellifera) analysis of 10 samples in 3 h. Using the method here reported, we analysed 2,400 honeybees collected from 240 beehives from the region where half of the Chilean apiary are located and in two different season of the year (Botas et al. 2011). Six of the 26 communes assessed were free of Nosema spp. Among the others communes, all samples infected with Nosema spp. Were negative for N. apis and positive for N. ceranae. Results from samples collected between 2004 and 2006, analysed by light microscopy and published in 2007, show that Nosema spp. were present in Regin del Biobo (www. agrarias.uach.cl/apicola/pdf/enfermedad es_jul06_web.pdf). Their prevalence was 1116% of adult honeybees and in all cases the microsporidia found was N. apis. In the absence of other reports, we cannot estimate when and how N. ceranae arrived to Chile. By another
hand, as N. apis was detectable in 20042006 but not now (2010 and 2011), we hypothesise that N. ceranae displaced N. apis in Regin del Biobo, as been proposed for other places in the world (Klee et al. 2007; MartnHernndez et al. 2011a, b; Paxton et al. 2007; Tapaszti et al. 2009). Due to the fact that, compared with light microscopy, real-time PCR-based method has 100% sensitivity and 100% sensibility, we might conclude that the prevalence of Nosema spp. increases in Chile in the last 5 years (1116% in 20042006 versus 49% in 2010 2011). This is not unexpected since Nosema spp. spores are massively expelled by diseased individuals and remain viable in field for more than a year (Fries 1993); there is no safety treatment available (Williams et al. 2008b) and alternative control strategy are under development (Porrini et al. 2010). We envision that the method and the data presented in this article maybe useful for the screening and the followup of Nosema spp. infection. Also, will
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Contribute to the understanding of the ecological behaviour of Nosematidae, in order to improve the control of nosemosis and related colony disorders worldwide Acknowledgments We thank Dr. Raquel Martn-Hernndez (Centro Apcola Regional, Junta de Castilla-La Mancha, Spain) for facilitating reference DNA from N. apis and N. ceranae, and the Asociacin Gremial de Apicultores Regin del Biobo and Apiquality Ltda. For performing sampling, Ms. Noem Crosby for designing the map of Regin del Biobo and Dr. Martha Ligia Arango (Facultad de Medicina Clnica AlemanaUniversidad del Desarrollo) for English editing of the manuscript. This study was supported by grant no. 2340028, Direccin de Investigacin, Universidad del Desarrollo. Ethical standards Experiments comply with current law of Chile. Conflicts of interest Authors declare no conflict of interest.
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and wide-spread microsporidian infection of the European honey bee (Apis mellifera) in the United States. J Invertebr Pathol 97:186188 Chen YP, Evans JD, Murphy C, Guttel R, Zuker M, Gundensel-Rindal D, Pettis JS (2009) Morphological, molecular, and phylogenetic charaterization of Nosema ceranae a microsporidian parasite isolated from the European honeybee, Apis mellifera. J Eukar Microbiol 56:142147 de Graaf DC, Raes H, Sabbe G, De Rycke PH, Jacobs FJ (1994) Early development of Nosema apis (Microspora: Nosematidae) in the midgut epithelium of the honeybee (Apis mellifera). J Invertebr Pathol 63:7481 Forsgren E, Fries I (2010) Comparative virulence of Nosema ceranae and Nosema apis in individual European honey bees. Vet Parasitol 170:212217 Fries I (1988) Infectivity and multiplication of Nosema apis Z in the ventriculus of the honey bee. Apidologie 19:319328 Fries I (1993) Nosema apisa parasite in the honey bee colony. Bee World 74:519 Fries I (2010) Nosema ceranae in European honey bees (Apis mellifera). J Invertebr Pathol 103(Suppl 1):S73S79 Fries I, Feng F, da Silva A, Slemenda SB, Pieniazek NJ (1996) Nosema ceranae n.sp. (Microspora, Nosematidae), morphological and molecular characterization of a microsporidian parasite of the Asian honey bee (Apis cerana) (Himenoptera, Apidae). Eur J Protistol 32:356365 Giersch T, Berg T, Galea F, Hornitzky M (2009) Nosema ceranae infects honey bees (Apis melifera) and contaminates honey in Australia. Apidologie 40:117123 Guzman-Novoa E, Hamiduzzaman MM, Arechavaleta-Velasco ME, Koleoglu G, Valizadeh P, Correa-Benitez A (2011) Nosema ceranae has parazited Africanized honey bees in Mexico since at least 2004. J Apic Res 50:167169 Hamiduzzaman MM, Guzman-Novoa E, Goodwin PH (2010) A multiplex PCR assay to diagnose and quantify Nosema infections in honey bees (Apis mellifera). J Invertebr Pathol 105:151155 Higes M, Martn-
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Message D, Hatjina F, Korpela S, Fries I, Paxton RJ (2007) Widespread dispersal of the microsporidian Nosema ceranae, an emergent pathogen of the western honey bee, Apis mellifera. J Invertebr Pathol 96:110 Martn-Hernndez R, Meana A, Prieto L, Salvador AM, Garrido-Bailon E, Higes M (2007) Outcome of colonization of Apis mellifera by Nosema ceranae. Appl Environ Microbiol 73:63316338 Martn-Hernndez R, Botias C, Barrios L, Martinez-Salvador A, Meana A, Mayack C, Higes M (2011a) Comparison of the energetic stress associated with experimental Nosema ceranae and Nosema apis infection of honeybees (Apis mellifera). Parasitol Res 109:605612 Martn-Hernndez R, Botias C, Bailon EG, Martinez-Salvador A, Prieto L, Meana A, Higes M (2011b) Microsporidia infecting Apis mellifera: coexistence or competition. Is Nosema ceranae replacing Nosema apis? Environ Microbiol. doi:10.1111/j.1462- 2920.2011.02645.x Medici SK, Sarlo EG, Porrini MP, Braunstein M, Eguaras MJ (2011) Genetic variation and widespread dispersal of Nosema ceranae in Apis mellifera apiaries from Argentina. Parasitol Res. doi:10.1007/ s00436-0112566-2 Parasitol Res Oldroyd BP (2007) What's killing American honey bees? PLoS Biol 5:11951199 Paxton RJ, Klee J, Korpela S, Fries I (2007) Nosema ceranae has infected Apis mellifera in Europe since at least 1998 and may be more virulent than Nosema apis. Apidologie 38:558565 Porrini MP, Audisio MC, Sabat DC, Ibarguren C, Medici SK, Sarlo EG, Garrido PM, Eguaras MJ (2010) Effect of bacterial metabolites on microsporidian Nosema ceranae and on its host Apis mellifera. Parasitol Res 107:381388 Ravikumar G, Raje Urs S, Vijaya Prakash NB, Rao CGP, Vardhana KV (2011) Development of a multiplex polymerase chain reaction for the simultaneous detection of microsporidians, nucleopolyhedrovirus, and densovirus infecting silkworms. J Invertebr Pathol 107:193197 Ritter W (2001) Enfermedades de las abejas. In: Acribia SA (ed) Zaragoza, Spain, p 146 Sambrook J, Russel DW (2001) Molecular cloning. A laboratory manual. Cold Springharbor Laboratory, Cold Spring Harbor Soares MP, Elias-Neto M, Simoes ZL, Bitondi MM (2007) A cuticle protein gene in the honeybee: expression during development and in relation to the ecdysteroid titer. Insect Biochem Mol Biol 37:12721282 Stevanovic J, Stanimirovic Z, Genersch E, Kovacevic S, Ljubenkovic J, Radakovic M, Aleksic N (2010) Dominance of Nosema ceranae in honey bees in Balkan countries in the absence of symptoms of colony collapse disorder. Apidologie 42:4958 Tapaszti Z, Forgach P, Kovago C, Bekesi L, Bakonyi T, Rusvai M (2009) First detection and dominance of Nosema ceranae in Hungarian honeybee colonies. Acta Vet Hung 57:383 388 Traver BE, Fell RD (2011) Prevalence and infection intensity of Nosema in honey bee (Apis mellifera L.) colonies in Virginia. J Invertebr Pathol 107:4349 Weiss LM, Edlind TD, Vossbrinck CR, Hashimoto T (1999) Microsporidian molecular phylogeny: the fungal connection. J Eukariot Microbiol 46:17S18S Whitaker J, Szalanski A, Kence M (2010) Molecular detection of Nosema ceranae and N. apis from Turkish honey bees. Apidologie 42:174180 Williams GR, Shafer AB, Rogers RE, Shutler D, Stewart DT (2008a) First detection of Nosema ceranae, a microsporidian parasite of European honey bees (Apis mellifera), in Canada and central USA. J Invertebr Pathol 97:189192 Williams GR, Sampson MA, Shutler D, Rogers RE (2008b) Does fumagillin control the recently detected invasive parasite Nosema ceranae in Western honeybees (Apis mellifera)? J Invertbr Pathol 99:342344 Yoshiyama M, Kimura K (2011) Distribution of Nosema ceranae in the European honeybee, Apis mellifera in Japan. J Invertebr Pathol 106:263267 Zander E (1909) Tierische Parasiten als Krankenheitserreger bei der Biene. Munchener Bienenztg 31:196204
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