AULA 1: Fermentao: como fungos fazem bebida alcolica Talvez voc j tenha se perguntado por que a massa do po ou da pizza

cresce ou por que uma fruta fermentada cheira a vinagre ou, ainda, como produzida a cerveja. Descobrir a maneira como ocorrem alguns fenmenos naturais, como, por exemplo, a fermentao de uma fruta, nos possibilita desenvolver tecnologias para produzir e "reproduzir" esses fenmenos. Veja neste experimento como reproduzir a fermentao de leveduras, comumente utilizada na produo de bebidas alcolicas. Materiais necessrios:

Acar (Sacarose); gua destilada ou filtrada e fervida; Fermento biolgico (Saccharomyces cerevisae); Caneta para retroprojetor ou pincel atmico; Bquer ou similar; Filtro de pano ou algodo hidroflico; Funil; 4 garrafas de PET de aproximadamente 300 ml com tampa; Ferro de solda; Duas mangueiras finas transparentes; Massinha de modelar escolar ou durepox; Cal virgem (xido de clcio) ou Indicador de cido-base.

Aquea, previamente, em um bquer ou outra vidraria apropriada, cerca de 50 ml de gua destilada (Voc pode utilizar o forno de microondas) ou filtrada e fervida. Adicione 15 g de fermento biolgico desidratado e acrescente gua at completar 100 ml. Deixe o preparado em repouso por alguns minutos, enquanto voc realiza os prximos passos. Preparo das garrafas Lave quatro garrafas de PET pequenas (cerca de 300 ml). Passe lcool para desinfet-las. Duas das garrafas, onde ser colocada a soluo saturada de hidrxido de clcio (Ca(OH)2), devero ser transparentes. Fure a tampa das garrafas, onde sero colocadas as leveduras, com o auxlio de um ferro de solda. Se voc no tiver um ferro de solda, pode utilizar um prego ou chave de fenda aquecida em uma chama. Voc deve fazer um furo de dimetro um pouco menor que o dimetro da mangueira que utilizar no experimento. Aps furar as duas tampas, introduza a mangueira no orifcio de forma que o encaixe fique bem firme e no haja espao para passagem de ar, no espao entre a tampa e a mangueira. Se achar necessrio, utilize massinha de modelar escolar ou durepox para vedar melhor a passagem de ar.

Preparo da soluo de hidrxido de clcio Escolha um recipiente resistente a temperaturas altas para preparar sua soluo de hidrxido de clcio. Coloque uma colher de ch de cal virgem, tambm conhecido como xido de clcio (CaO), em 400 ml de gua. O CaO reagir com a gua (H2O) e formar hidrxido de clcio (Ca(OH)2), liberando calor. Assim, voc provavelmente sentir que o recipiente esquentou. Misture bem e observe a formao de precipitado. Precipitado o produto slido de uma reao qumica e pode ser facilmente identificado porque, geralmente, se acumula no fundo do recipiente onde a reao ocorreu. Logo aps, filtre a soluo para retirar todo o precipitado. Deve ser utilizado um bom filtro de malha fina para isso. Um prtico e eficiente filtro pode ser feito colocando-se um chumao de algodo bem apertado dentro de um funil. Recolha a soluo de hidrxido de clcio em outro recipiente. Se quiser, utilize um suporte para o funil (veja a foto da montagem do filtro abaixo). A soluo de hidrxido de clcio deve estar transparente. Se a soluo estiver turva, filtre-a mais algumas vezes, at que se torne transparente. Coloque 200 ml da soluo pronta em cada garrafinha PET transparente. Acrscimo do inculo Encha duas garrafinhas de PET com 200 ml de gua destilada ou filtrada e fervida. Em apenas uma das garrafas, adicione acar a 15% p/v, ou seja, acrescente 36 g de acar para um volume total de 200 ml, com auxlio do funil. Acrescente gua destilada ou filtrada e fervida garrafa sem acar at que o volume de lquidos nas duas garrafas sejam iguais. No encha as garrafas at a borda. Identifique as garrafas escrevendo com caneta para retroprojetor ou com pincel atmico a palavra controle, na garrafa onde no foi acresce ntado acar e com acar, na outra garrafa. Acrescente 50 ml do inculo preparado anteriormente a cada garrafinha de PET com gua. Tampe para no vazar e agite cada garrafinha para misturar bem. Feche a garrafa com a tampa preparada no passo dois. Mesmo aps o acrscimo das leveduras, deve sobrar um espao entre a boca da garrafa e a tampa. A extremidade da mangueirinha que passa por dentro da tampa NO deve ficar imersa na soluo com leveduras, pois caso isso acontea, essa soluo pode subir pela mangueira, estragando os resultados do experimento. Coloque a outra extremidade da mangueira dentro da soluo de hidrxido de clcio, preparada no passo 3, que j est dentro da garrafa transparente.

Aguarde cerca de 30 minutos e voc j poder observar os resultados. O resultado ocorrer em menos tempo, se voc acondicionar o experimento montado em um local quente, como por exemplo, em uma estufa a 37 C. Alternativa para o experimento Voc tambm pode montar este mesmo experimento utilizando indicadores de cido base, como o Azul de Bromotimol. Para isso, voc precisa colocar algumas gotas de indicador em 400 ml de gua, que pode ser da torneira. Verifique, pela cor do indicador, se a gua est bsica. Se no estiver bsica, acrescente bicarbonato de sdio em pequenas quantidades, at que o indicador mostre que a soluo ficou bsica. Distribua 200 ml da soluo com o indicador nas duas garrafinhas de PET, em substituio soluo de hidrxido de clcio (Veja as fotos abaixo). Todos os outros procedimentos so idnticos aos j descritos nos outros passos.

AULA 2: Teste de Gram A colorao de gram um importante teste, freqentemente realizado em laboratrios de microbiologia, para identificao de bactrias. Esse teste foi desenvolvido por Christian Gram, em 1884. Por meio dele, bactrias so coradas diferencialmente, de acordo com a constituio fsico-qumica de suas paredes celulares. Aprenda a fazer um teste de gram, utilizando materiais alternativos, facilmente encontrados em farmcias e mercados. Materiais necessrios:

Placa de Petri com colnias bacterianas Soluo salina ou soro fisiolgico Lminas de vidro Soluo de violeta de genciana Tintura de iodo Acetona Fucsina bsica 1% (encontrado em farmcia de manipulao) Ala bacteriolgica (pode ser substituda por um palito de madeira com um clipe na ponta). Prendedor de roupas Luvas descartveis

Esfregao Vista as luvas e coloque uma gota de soluo fisiolgica em uma lmina de microscpio. Esterilize a ala bacteriolgica em uma chama, esfrie-a e retire uma pequena colnia de bactrias da Placa de Petri. Espalhe a amostra na lmina, homogeneizando com a gota de soluo salina. Deixe secar temperatura ambiente e depois passe a lmina 4 ou 5 vezes pela chama de fogo. Esse procedimento ir fixar as bactrias na lmina, impedindo que elas sejam removidas durante a colorao. Colorao Coloque algumas gotas de violeta de genciana sobre a lmina e deixe em repouso por 1 minuto e meio. Lave a lmina com gua e acrescente tintura de iodo, deixando por mais 1 minuto e meio em repouso. Lave a lmina, adicione acetona e deixe agir por 20 segundos Lave novamente e adicione fucsina bsica. Deixe agir por 20 segundos antes da ltima lavagem.

Observe as lminas pelo microscpio ptico. As bactrias possuem tamanho bastante reduzido e, por isso, ao observ-las, necessrio utilizar a objetiva de imerso (100X). A ampliao total obtida com o microscpio ptico consiste no produto da ampliao da objetiva pela ampliao da ocular e chega a 1200X. Para utlizar a objetiva de imerso: *Coloque uma gota de leo para imerso sobre a lmina, Posicione o condensador o mais prximo possvel da platina Gire o revolver para colocar a objetiva de imerso em foco Olhando pelo lado, desa o canho com um parafuso macromtrico, at que a lente frontal da objetiva fique encostada no leo. Olhando pela ocular, mova o parafuso macromtrico delicadamente, at conseguir focalizar a preparao. Mova o parafuso micromtrico at conseguir uma boa focalizao.

cocos gram positivos

bastonetes gram negativos O que acontece? Algumas bactrias possuem paredes celulares mais impermeveis e, por isso, a adio de acetona, aps a colorao com violeta genciana, no remove a colorao. Ao final do teste, elas apresentaro a cor roxa e podero ser classificadas como gram positivas. Outras bactrias possuem paredes celulares mais permeveis, o que possibilita que a acetona remova o primeiro corante. Aps a adio do segundo corante, que a fucsina bsica, elas apresentaro a colorao rosa. Estas ltimas so as gram negativas. Em geral, bactrias gram negativas so mais patognicas, ou seja, mais capazes de causar doenas que as gram positivas.

AULA 3; Ubiquidade de microorganismos Os microorganismos (fungos, bactrias e vrus) so chamados assim por terem um tamanho bastante reduzido. Eles so to pequenos que no conseguimos enxerg-los a olho nu, mas apenas utlizando microscpio ptico ou eletrnico. No entanto, colnias ou aglomerados de microorganismos podem ser visualizados sem o auxlio de microscpios ou lupas. A seguir apresentamos passo a passo um experimento que pode ser utilizado para pesquisar a presena de microorganismos nos diversos ambientes. Materiais necessrios:

placas de Petri esterilizadas liquidificador Fita indicadora de pH ou soluo de azul de bromotimol peneira colher, esptulas 1 frasco de vidro grande (volume de cerca de 250 ml) Um frasco de vidro mdio (volume de cerca de 50 ml) 4 Frascos de vidro mdio (volume de cerca de 50ml) 3 Conta gotas (descartveis podem ser comprados em farmcias) Algodo hidrofbico Papel craft Fita crepe 30 ml de gua filtrada 2% (4 gramas) de agar comercial Duas cenouras mdias Nota de dinheiro Panela de presso ou autoclave para esterilizar os materiais Ala de vidro, ou algum material para espalhar lquido no meio que possa ser passado no fogo.

Preparo do meio de cultura gar-cenoura Cozinhe duas cenouras e bata no liquidificador com 100 ml de gua. Passe a mistura na peneira para separar a parte lquida. Filtre a mistura com um papel de filtro ou uma gaze dobrada. Adicione 4 gramas de Agar comercial e misture. Complete o volume para 200 ml e mea o pH (voc pode usar uma fita indicadora ou uma soluo de azul de bromotimol). Ele deve estar em torno de 7,0. Caso no esteja, ajuste o pH utilizando gotas de limo (soluo cida) ou soluo de bicarbonato de sdio (soluo bsica). Tampe o frasco com uma rolha de algodo hidrofbico e coloque um pedao de papel craft por cima.

Preparo do material A partir desse passo os materiais (placas de Petri e meio de cultura, frascos de vidro, esptulas, conta gotas) devem estar livres de microorganismos, ou seja, estreis. Embrulhe as placas de Petri, as esptulas, palitos de picol, conta gotas, frascos de vidro com papel craft. Autoclave tambm um dos frascos com aproximadamente 30 ml de gua e tampe-o com papel craft. Autoclave todo o material e o meio de cultura durante 15 minutos (para aprender a autoclavar consulte o experimento Esterilizando com uma panela de presso). IMPORTANTE: Ao utilizar uma autoclave pela primeira vez, pea a algum que j tenha experincia com este aparelho para te acompanhar. Coleta dos materiais a serem testados Nesse experimento pesquisamos a presena de microorganimos em amostras de terra, de gua de lago, de gua de torneiram, em dinheiro e no ar. Dissolvemos a terra (aproximadamente uma colher de ch) na gua autoclavada. Coletamos as duas amostras de gua diretamente nos frascos autoclavados Escolha os ambientes e materiais a serem testados, colete as amostras e mos a obra! Limpe e prepare o local onde ser feito o procedimento. Identifique as placas com as respectivas amostras e adicione ainda uma. placa fechada, como controle. Mantenha uma chama acesa (pode ser uma lamparina, ou bico de bunsen) para evitar contaminao do meio de cultura com fungos e bactrias do ar. Distribua o meio de cultura nas placas de Petri. Se o meio de cultura estiver slido utilize banho maria ou micro ondas para fluidific-lo. Coloque aproximadamente 20 ml de meio de cultura dentro de cada placa de Petri. Deixe as placas prximas do fogo at que o meio se solidifique. Com o conta gotas coloque em cada placa duas ou trs gotas das amostras lquidas a serem testadas. Flambe a ala de vidro no fogo e a esfrie, encostando-a no canto da placa. Utilize a ala para espalhar o lquido sobre o meio, e feche imediatamente a placa. Se voc for pesquisar a presena de microorganismos em algum objeto, passeo com cuidado sobre o meio de cultura, como fizemos neste experimento com o dinheiro. Cuidado para que seus dedos no encostem no meio de cultura. Para pesquisar a presena de microorganismos no ar ambiente, basta deixar a placa aberta durante aproximadamente 5 minutos. A placa identificada como controle no receber qualquer amostra e nem mesmo dever ser aberta.

Todas as placas devidamente identificadas devem ser deixadas viradas para baixo a temperatura ambiente. Resultado Observao com 24 horas. Observao com 48 horas. Observe a diferena entre colnias cremosas e filamentosas As colnias de aspecto cremoso e brilhante so colnias de bactrias. J as colnias filamentosas apresentam aspecto aveludado e so colnias de fungos. Elas so constitudas fundamentalmente por elementos multicelulares denominados hifas. Observaes com 5 dias.