Gambar 8.18 Mutasi pada mata ada tujuh.

. Peristiwa yang menyebabkan perkembangan sel R7 pada mata dari drosofila telah memberikan kunci untuk memahami perjalanan jalur reseptor PTKs. Gen bertindak sebagai aliran dari tujuh reseptor yang diungkapkan oleh skrining untuk mutasi yang mempengaruhi perkembangan sel R7. Mata dibangun dari ommatidia, delapan kelompok sel fotoresptor masing-masing ditutupi oleh lensa tunggal. Gambar tersebut menjelaskan anatomi dasar dari unit ommatidial tunggal dalam bagain membujur. Bagian a, b, dan c ditunjukkan pada bagian melintang di sebelah kanan. Karena dua dari sel, R7 dan R8 tidak memperpanjang unit ommatidial, bagain melintang b dan c hanya mengungkapkan tujuh sel, tidak semua delapan sel. (Adapted from Dickson and Hafen, Curr. Opin. Genet. Dev., 4, 6470, 1994.) (R1 R8) dan 12 sel lainnya. Atas dasar morfologi, pola akson, dan sensitivitas spektral, sel-sel reseptor dapat dibagi menjadi tiga fungsiona : R8 yang pertama kali muncul diikuti oleh R1 hingga R6 dan kemudian R7. Pigmen fotosensitif berada dalam microvillus tumpukan membran rhabdomer. Rhabdomer lebih besar dari R1 ke R6 disusun trapesium sekitar rhabdomer R7 dan R8, rhabdomer R8 terletak dibawah rhabdomer R7 (gambar 8.18). Perkembangan R7 memberikan produk dari dua gen. Kerugian mutasi dari fenotip yang dihasilkan adalah salah satu dari gen ini mengalami identik, R7 gagal memulai pembangunan saraf (fly menjadi sevenless). Mutasi ini mudah dideteksi dalam tes perilaku. Mengingat pilihan antara hijau dan ultraviolet (UV), normal (WT) fly akan

bergerak cepat menuju sumber UV. Kegagalan untuk membangun sel R7, sel fotoreseptor terakhir yang akan ditambahkan ke cluster ommatidial, berkolerasi dengan kurangnya respon cepat photothactic, dan tidak bergerak ke arah lampu hijau. Sementara produk sev hanya diperlukan dalam prekursor R7, fungsi bos harus dinyatakan dalam pengembangan R8. Kloning mengubah produk bos menjadi glikoprotein 100-kDa dan memiliki tujuh bentang transmembran dan domain N-terminal ekstraseluler diperpanjang. Meskipun akhirnya diekspresikan pada semua sel fotoresptor, pada saat R7 sedang ditentukan hanya hadir pada R8 tertua. Produk dari gen sev adalah reseptor tirosin kinase protein. Bukti untuk interaksi langsung antara produk-produk dari kedua gen berasal dari demonstrasi bahwa sel-sel kultur mengekspresikan produk bos cenderung membentuk agregat dengan sel mengekspresikan sev. Diketahui bahwa pengikatan Boss (ligan) ke Sev (kinase reseptor) mengarah pada aktivasi protein kinase dan pada akhirnya menentukan nasib R7 sebagai saraf sel. Karena pengurangan dosis gen dari lalat Ras1 mengganggu sinyal oleh Sev, dan aktivasi Ras1 menyingkirkan kebutuhan untuk bos dan produk gen sev, maka aktivasi Ras merupakan konsekuensi awal kegiatan Sev. Layar genetik lalat mengungkapkan konstitutif Sev diaktifkan menyebabkan identifikasi dari dua komponen menengah jalur ini: Drk (hilir kinase reseptor) dan Sos (anak sevenless) (untuk urutan peristiwa, lihat Tabel 8.3). Protein Sos menunjukkan homologi substansial dengan ragi CDC25 produk gen, katalis pertukaran nukleotida guanin untuk RAS. Sementara penurunan dosis gen Drk dan Sos mengganggu sinyal dari pengaktifan Sev konstitutif, tidak ada efek pada sinyal dari Ras konstitutif diaktifkan. Di jalur aktivasi, menempatkan fungsi produk Drk dan Sos ke posisi penengah antara Sev dan Ras. Kode gen Drk untuk protein kecil yang terdiri dari Src homologi domain, dua SH3 domain mengapit SH2 domain tunggal. Setelah tidak ada aktivitas katalitik sendiri, Drk bertindak sebagai daptor. Berikatan dengan reseptor tirosin terfosforilasi dan link ke domain kaya prolin dari Sos.

Gambar 8. 19. Pengembangan vulva di Caenorhabditis elegans. Karena merupakan struktur yang relatif sederhana, terbentuk dari hanya beberapa sel, vulva yang cocok untuk analisis genetik dari diferensiasi sel selama perkembangan embrio ini adalah produk dari hanya tiga garis keturunan sel, keturunan sel p5.p, p6.p, dan p7.p. Pembangunan diprakarsai oleh sinyal dari jangkar sel yang terletak bersebelahan dengan p6.p. Ligan, lin-3 (homolog yang EGF), yang diproduksi oleh sel jangkar, mengikat reseptor Mari-23 (homolog dengan EGF-R) pada permukaan sel p6. P6.p sel, pada gilirannya, melepaskan sinyal ke tetangganya, p5.p dan p7.p. hal ini memulai serangkaian kejadian yang melibatkan jalur MAP kinase yang menentukan nasib sel-sel sebagai komponen dari jaringan vulva.

8.4.1.2 Pengembangan Sel Vulva di Caenorhabditis elegans Dalam nematoda C.elegans, jalur aktivasi melibatkan autofosforilasi kinase reseptor tirosin menyebabkan aktivasi GTPase Mari-60, homolog yang Ras. Hal ini menentukan perkembangan sel-sel vulva. Protein tersebut pertama kali diidentifikasi dari analisis genetik mutasi mematikan (membiarkan, atau mematikan mutan), perubahan morfologi dalam pengembangan vulva (sem, atau seks otot mutan), atau perubahan dalam sel keturunan (lin, atau keturunan mutan). Hal tersebut merupakan komponen jalur sinyal transduksi-berdasarkan produk disekresikan dari sel jangkar (Lin-3, kemungkinan besar setara dengan EGF), kinase reseptor tirosin dari sel p5.p (Let-23), adaptor memiliki SH2 dan SH3 domain (Sem-5) yang mengaitkan dengan (Sos-seperti) guanin protein pertukaran

nukleotida. Hal tersebut membawa pertukaran sekitar nukleotida Let-3 (Gambar 8.19). Dalam cacing dan lalat, protein Ras bertindak sebagai saklar yang menentukan nasib sel. Dalam C. elegans, aktivasi Ras menentukan pembentukan vulva sebagai lawan hypodermal (kulit) sel (untuk urutan kejadian, lihat Tabel 8.4). Pada Drosophila fotoreseptor, aktivasi Ras menentukan perkembangan R7 sebagai saraf sebagai lawan sel kerucut. Dalam kedua kasus, protein Ras mengoperasikan hilir reseptor tirosin kinase yang diaktifkan oleh interaksi sel-sel.

8.4.1.3 Drosophila, Caenorhabditis elegans, dan Penemuan Pathway Ras di Vertebrata Penjelasan dari jalur Ras dalam vertebrata didasarkan pada identifikasi protein yang memiliki homologi urutan dengan mereka yang hadir di Drosophila dan C. elegans. Ekspresi atau injeksi protein ini (dan reagen yang sesuai seperti peptida, antibodi, dll) digunakan untuk mengembalikan atau memodulasi aktivitas jalur ini dalam sel yang berasal dari mamalia, lalat, atau cacing dan kerugian fungsi dari bantalan mutasi. Sebuah Grb2 protein vertebrata (faktor pertumbuhan mengikat reseptor protein 2), kurang aktivitas katalitik tetapi memiliki SH2 dan SH3 domain, ditemukan mampu memulihkan fungsi dalam kekurangan mutan Sem-5. Selain itu, Grb2 ditemukan berasosiasi dengan protein yang diakui oleh antibodi yang diajukan terhadap protein Drosophila, Sos. Dengan cara ini, urutan kejadian menjadi jelas. Grb2 merupakan protein adapter, menghubungkan tirosin kinase terfosforilasi reseptor ke penukar nukleotida guanin dalam vertebrata. Mamalia Sos homolog, hSos, adalah juga merupakan faktor pertukaran nukleotida guanin yang berinteraksi dengan Ras. Grb2 terdiri eksklusif dari Src homologi domain, satu SH2 diapit oleh dua SH3 domain. Karena sifat dari interaksi SH3 dengan urutan prolin kaya, ada kemungkinan bahwa Grb2 dan Sos tetap berhubungan bahkan di bawah kondisi nonstimulating. Efek utama aktivasi reseptor adalah untuk memastikan rekrutmen Grb2/Sos kompleks ke membran plasma (untuk urutan peristiwa, lihat tabel 8.4).

TABEL 8.4 Perbandingan Sinyal-Transduksi Persiapan Hilir dari Protein Tyrosine Kinase Reseptor Spesies dari Tiga Phyla terpisah Spesies Jalur Drosophila melanogaster Pembentukan mata Ligan RTK Adaptor SH2 Pengaturan Ras Ras Raf-1 MEK MAP Kinase Faktor transkripsi Boss Sev Drk Sos Gap 1 Dras Draf D-MEK ERK-A Sina Caenorhabditis elegans Induksi vulva Anchorless Let-23 Sem-5 Gap-1 Let-60 Lin-45 MEK-2 MPK-1 Lin-31, Lin-1/ Ets Mamalia Perkembangbiakan Cytokines Receptor Grb2/ Shc hSos GAP Ras Raf-1 MEK-1 ERK P62TCF, c-jun

8.4.1.4 Kinase MAP di Organisme Lainnya Persiapan diatur oleh MAP kinase didistribusikan secara luas dan dapat ditemukan di semua organisme eukariotik. Dalam Saccharomyces cerevisiae, proses fisiologis diatur oleh MAP kinase termasuk perkawinan, sporulasi, pemeliharaan integritas dinding sel, pertumbuhan invasif, pertumbuhan

pseudohyphal, dan osmoregulasi. MAP kinase adalah pengatur respon imun dan perkembangan embrio pada Drosophila. Hal ini juga telah terlibat sebagai regulator dalam jamur lendir, tumbuhan, dan jamur.

8.4.2 Onkogen, Keganasan, dan Protein Tirosin Kinase

8.4.2.1. Onkogen Viral Infeksi oleh virus yang membawa onkogen dapat menyebabkan pertumbuhan sel ganas. Meskipun pertama kali diakui sebagai agen penyebab pada kanker burung 90 tahun yang lalu, untuk sebagian besar abad kedua puluh

ada keraguan bahwa setiap kanker pada manusia telah dimulai dengan cara ini. Bahkan sekarang, hampir semua informasi di daerah ini mengacu pada hewan bukan manusia, yang menyajikan sejumlah masalah. Pertama, sebagaimana sudah jelas dalam dekade pertama abad terakhir, demonstrasi modus penularan virus tergantung pada induksi penyakit dengan transfer filtrat jaringan dari hewan ke hewan. Beberapa virus hanya menjadi onkogenik sebagai konsekuensi dari beberapa bagian dan melalui spesies binatang yang berbeda. Kedua, sementara banyak kanker pada manusia pasti berhubungan dengan infeksi virus, jauh dari tertentu dalam kebanyakan kasus apakah virus telah memulai kondisi atau apakah itu hanya kondusif untuk induksi oleh agen lain, seperti karsinogen kimia. Secara umum, produk transformasi dari onkogen virus berperilaku seperti mutan terusmenerus diaktifkan protein seluler endogen memiliki peran kunci dalam regulasi mitogenesis.

TABEL 8.5 Komponen Tyrosine Kinase Signal Transduksi Cascades Apakah Ditemukan seperti Selular (atau Viral) Onkogen
Reseptor Protein Kinase Tirosin Non Reseptor Protein Tirosin Kinase Pertukaran Nukleotida Serin / Theroin Protein Kinase Adaptor SH2/SH3 Faktor GTP ase

BeK Eck Elk Eph ErbB Flg Fms Kit Met

Abl Blk Fgr Fsp Fyn Hck Lck/Lyn Src Yes

Akt/PKB Cot Mos Pim Raf -

Crk Nck -

Bcr Dbl Ost Tiam Vav -

H-Ras K-Ras N-Ras -

Neu Ret TrkA TrkB TrkC

8.4.2.2 Onkogen Nonvirus Tumor tidak disebabkan oleh infeksi virus (misalnya dengan bahan kimia karsinogen) juga mengekspresikan terus-menerus diaktifkan produk, seperti onkogenik Ras. Sebagai contoh peran onkogen dalam transformasi sel, bentuk mutasi dari Ras ditemukan di 40% dari semua kanker pada manusia dan lebih dari pada 90% karsinoma pankreas. Secara umum, onkogen ini merupakan mutasi gain dari fungsi gen seluler normal yang terlibat dalam transduksi sinyal dan transkripsi gen. Sejumlah protein bermutasi beroperasi di tahap awal kinase jalur sinyal transduksi-tirosin. Sel dapat berubah sebagai konsekuensi dari hipersekresi faktor pertumbuhan, ekspresi bentuk varian dari reseptor tirosin kinase atau non reseptor tirosin kinase, berlebih dari SH2/SH3-containing protein adaptor, berlebih dari serin / treonin protein kinase, atau ekspresi varian GTPases kecil atau protein aksesori mereka. Pada ujung hilir dari jalur transduksi sinyal, varian faktor transkripsi juga bertindak sebagai transformator sel ampuh. Meskipun fosforilasi tirosin kinase menyumbang hanya sekitar 5% dari total aktivitas fosforilasi selular, memiliki posisi kunci dalam banyak jalur sinyal-transduksi, dan mungkin untuk alasan ini bahwa kejadian gen tersebut dalam keganasan begitu tinggi. Beberapa contoh diberikan di Tabel 8.5.

8.5 Singkatan
4E-BP AKT AP-1 ATF eukaryotic initiation factor 4E-binding protein acutely transforming retrovirus (AKT8) activator protein 1 adenovirus transcription factor (= CREB)

BCR CD4 Cdc CDK Boss CaMK Cbl CREB Crk DAF-16 DAG Dbl Drk EF-2 EGF EIF-4E ERK EST FAK FKHRL

breakpoint cluster region, a GTPase cluster of differentiation 4 (antigen typing on leukocytes) cycle-deficient cell cyclin-dependent kinase bride-of-sevenless calmodulin-dependent kinase Cas NS-1 B-cell lymphoma cAMP-responsive, element-binding protein CT10 regulator of kinase dauer phenotype diacylglycerol diffuse B-cell lymphoma downstream of receptor tyrosine kinase elongation factor 2 epidermal growth factor eukaryotic initiation factor 4E extracellular signal regulated kinase expressed sequence tag focal adhesion complex kinase forkhead related-L (forkhead gene promotes terminal as opposed to segmental development in the Drosophila)

Fos FRAP Gab-1 GAP GRB GSK-3 HOG IL-2 IRS-1 ITAM

feline osteosarcoma FKBP-rapamycin-associated protein Grb2-associated binder 1 GTPase-activating protein growth-factor-receptor bound glycogen synthase kinase 3 high-osmolarity glycerol interleukin-2 insulin receptor substrate 1 immunoreceptor tyrosine-based activation motif

JAK JNK Jun LAT Lck Let Lin MAP kinase MAPKAP MEK MEKK MHCII MKP MLCK Myc NGF NK nrPTK PAK PDGF PDK1 PI-3 kinase PIP2 PH PLC PKB PKC PTB PTEN PTK PYK2

janus kinase Jun N-terminal kinase avian sarcoma virus 17 (junana, 17 in Japanese) linker of activated T cells lymphocyte kinase from murine lymphoma LSTRA cells lethal mutant lineage mutant mitogen-activated protein kinase MAPK-activated protein kinase MAP kinaseERK kinase MEK kinase major histocompatibility complex II MAP kinase phosphatase Myosin light-chain kinase myelocytomatosis virus MC29 nerve growth factor natural killer cell nonreceptor protein tyrosine kinase P21-activated protein kinase Platelet-derived growth factor phosphatidyl inositol-dependent kinase 1 phosphatidylinositol-3 kinase phosphatidylinositol-4,5-phosphate pleckstrin homology domain phospholipase C protein kinase B protein kinase C phosphotyrosine-binding domain tensin homolog deleted from chromosome 10 protein tyrosine kinase proline-rich protein tyrosine kinase 2

Rac

Ras-like C3 substrate (however, it turns out Rac is not a C3 substrate; some Rho contamination was present in the Rac protein preparations being studied)

Raf Ras RBD RGD Rho SAPK Sem Sev Shc SH2 SHIP SIF Sina v-Sis SLP76

rat fibrosarcoma rat sarcoma Ras-binding domain arginineglycineaspartic acid Ras homologs Stress-activated protein kinase sex muscle mutant sevenless Src homology collagen-like Src homology 2 SH2-domain-containing inositol phosphatase v-Sis-inducible factor seven in absentia simian sarcoma virus gene SH2-domain containing leukocyte protein with a molecular weight of 76 kDa

Sos Src SRE SRF STAT TAK1 TAM TCF TCR TRE TrkA TPA

son of sevenless sarcoma serum-response element serum-response factor Signal transducer and activator of transcription TGF-1-activated kinase 1 tyrosine-based activation motif ternary complex factor T-cell receptor TPA-responsive element tyrosine receptor kinase A 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate

Vav ZAP70

sixth letter in the Hebrew alphabet zeta-associated protein 70

8.6 Bacaan
Bos, J. L., ras oncogenes in human cancer: a review, Cancer Res., 49, 46824689, 1989. Cantrell, D. A., T cell receptor signal transduction pathways, Annu. Rev. Immunol., 14, 259274, 1996. Collins, T. L., Deckert, M., and Altman, A., Views on Vav, Immunol. Today, 18, 221225, 1997. Cooper, J. A. and Howell, B., The when and how of Src regulation, Cell, 73, 10511054, 1993. Corvera, S. and Czech, M. P., Direct targets of phosphoinositide 3-kinase products in membrane traffic and signal transduction [review], Trends Cell. Biol., 8, 4426, 1998. Downward, J., How BAD phosphorylation is good for survival, Nat. Cell. Biol., 1, E33E35, 1999. Deller, M. C. and Jones, E. Y., Cell surface receptors, Curr. Opin. Struc. Biol., 10, 213219, 2000. Giancotti, F. G., Integrin signaling: specificity and control of cell survival and cell cycle progression, Curr Opin. Cell. Biol., 9, 691700, 1997. Gomperts, B., Kramer, I., and Tathan, P., Signal Transduction, Academic Press/Elsevier, 2002. Hunter, T., Tyrosine phosphorylation: past, present and future, Biochem. Soc. Trans., 24(2), 307327, 1996. Kane, L. P., Lin, J., and Weiss, A., Signal transduction by the TCR for antigen, Curr. Opin. Immunol., 12, 242249, 2000. Kaplan, D. R. and Miller, F. D., Signal transduction by the neurotrophin receptors, Curr. Opin. Cell. Biol., 9, 213212, 1997. Karin, M., Liu, Z. G., and Zandi, E., AP-1 function and regulation, Curr. Opin. Cell. Biol., 9, 240246, 1997.

Kornfeld, K., Vulval development in Caenorhabditis elegans, Trends Genet., 13, 5561, 1997. Metzger, H., The receptor with high affinity for IgE, Immunol. Rev., 125, 3748, 1992. Nishizuka, Y., Protein kinase C and lipid signaling for sustained cellular responses. FASEB J., 7, 484496, 1995. Raff, M., Cell suicide for beginners, Nature, 96, 119122, 1998. Roovers, K. and Assoian, R. K., Integrating the MAP kinase signal into the G1 phase cell cycle machinery, Bioessays, 22, 818826, 2000. Treisman, R., Regulation of transcription by MAP kinase cascades, Curr. Opin. Cell. Biol., 8, 205215, 1996. Wymann, M. P. and Pirola, L., Structure and function of phosphoinositide 3kinases, Biochim. Biophys. Acta, 1436, 127150, 1998.

Bagian V Reseptor Sebagai Target Farmasi