Guia P. Biologia Celular y Molecular

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ASOCIACIN
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

GUIA DE PRCTICA
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

PRIMER CICLO

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ASOCIACIN
CURSO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA N 1

LABORATORIO: INSTRUMENTAL Y SEGURIDAD

I. OBJETIVOS:

Dar a conocer los lineamientos bsicos de organizacin, instrumental y seguridad en el laboratorio sea de anlisis
clnico o de investigacin.

II. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO:

Tubos de ensayo
Placas de Petri
Pipetas
Bagetas
Matraces(Erlenmeyer, Fiolas)
Probetas
Beaker (vasos de precipitacin)
Pipetas (graduadas y volumtricas
Mecheros de Bunsen y de alcohol
Asas de Kolle
Balanza analtica
Estufa o incubadora
Hornos
Autoclave
Espectrofotmetros o colormetros
PH metros

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III. PROCEDIMIENTO:

1. ORGANIZACIN:

Generalmente los laboratorios funcionan de acuerdo a las actividades que ha de realizar se debe considerar
reas, estructura y diseo interior, considerando lo siguiente:
Mesas de trabajo y repisa sobre la mesa
Mesa para instrumentales (balanza, microscopio, pH metro, etc.)
Armarios para reactivos y material de vidrio
Extractor de gases.

2. SECCIONES:

Cada laboratorio puede presentar una o varias secciones dependiendo de la naturaleza de la actividad. En
forma general el laboratorio debe contar reas fsicas o secciones:
Toma de muestra
Separacin y clasificacin de muestras
Lavado y esterilizacin
Almacn
Sala de trabajo

3. CUIDADO DE LOS MATERIALES Y EQUIPOS:

3.1. Cuidado del material de vidrio:

Todo material de vidrio debe estar ubicado en una zona especfica y codificados. El material a guardar debe
estar completamente limpio, para lo cual debe ser sometido a un riguroso lavado, dependiendo del caso se
usar mezcla sulfocrmica o agua regia debiendo ser sometidos posteriormente a numerosos enjuagues con
agua corriente y finalmente con agua destilada o bidestilada, y otros podrn ser autoclavados. Los materiales
sern sometidos a temperaturas de 37- 45 C para el secado respectivo.

3.2. Cuidado de equipos:

Todo equipo o instrumental debe estar ubicado en una zona de poco transito, alta iluminacin y en una mesa
slida. Para el manejo de los mismos se debe tener conocimiento de la manipulacin debindose contar con
el manual respectivo. Antes de comenzar a operar un equipo verificar el voltaje, resistencia y amperaje del
equipo.
Terminado el trabajo el instrumental debe quedar limpio y apagado. Anotar en el cuaderno de control la
fecha, hora de inicio y trmino de uso del equipo.

4. SEGURIDAD:

La seguridad en el laboratorio es de alta responsabilidad. Cualquier actividad en un laboratorio tiene
riesgos potenciales. Las reglas generales son:
1. El laboratorio NO es un lugar para correr, empujar y bromear.
2. Aprende donde esta y como se usa el equipo de seguridad.
3. Lee todas las instrucciones para la actividad ANTES de empezar a trabajar. Pon atencin a las notas
que indican PRECAUCION.
4. Cualquier accidente, informar inmediatamente al responsable del laboratorio.
5. No comer ni beber en el laboratorio. No probar ninguna sustancia que se use en el laboratorio.
Lavarse las manos antes y despus de cualquier actividad.
6. Llevar a cabo solamente aquellas actividades que se nos asigna. Nunca trabajes solo en el laboratorio
7. Mantener el rea de trabajo limpia: sin libros, ni papeles, ni equipo alguno innecesario.
8. Asegurarse de apagar las salida de gas, mecheros, hornillas y de cerrar todas las llaves de agua al
terminar la clase.
9. Sigue las instrucciones del profesor acerca de la forma adecuada de limpiar y recoger los materiales.
10. Usar MANDIL para cubrir la ropa cuando se esta trabajando en el laboratorio.
11. Al calentar materiales, inclinar el tubo de ensayo en direccin fuera de uno y de los dems.
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5. SMBOLOS DE SEGURIDAD:

IV. CUESTIONARIO:

Describe EL protocolo para preparar agua regia y mezcla sulfocrmica.
Dibuje cuatro smbolos de seguridad
Que usos tiene la centrfuga y el pH metro en un laboratorio?

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ASOCIACIN

PRACTICA N 2

MICROSCOPIA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

I. OBJETIVO

1. Conocer e identificar correctamente las partes pticas y mecnicas del microscopio compuesto.
2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservacin del microscopio.

II. MATERIALES

4 Microscopios
4 Lminas portaobjetos
4 Laminillas cubreobjetos
Lminas coloreadas
Suero fisiolgico
Pipeta Pasteur
1 Plumn indeleble
Papel lente
Tela de felpa(25 cms)
Fibra de pelo y lana

III. PARTES DEL MICROSCOPIO

Reconocer cada una de las siguientes partes del microscopio:

PARTE MECANICA

Tubo portalentes y cremallera
Tornillos macro y micromtrico
Revolver
Platina
Condensador
Brazo y Pie
Charnela

PARTE OPTICA

Ocular
Objetivos
Espejo
Lentes de condensador
Diafragma.

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IV. SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO

1. Sistema de soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revolver y la platina.
2. Sistema de Iluminacin: comprende el foco, condensador y diafragma.
3. Sistema de Ajuste: comprende el macromtrico, micromtrico y cremallera
4. Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10 x , 15 x y los objetivos de 5x, 10, 40, y
100x.

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V. PROTOCOLO DE LAS OBSERVACIONES REALIZADAS

OBJETIVO

AUMENTO

MUESTRA N 1

MUESTRA N 2

MUESTRA N 3

MUESTRA N 4

VI. CUESTIONARIO

1. Definir que es una imagen real y que una imagen virtual

2. Que es el poder de resolucin y a qu se denomina ndice de Refraccin

3. Que clase de microscopios se conocen actualmente.

4. Que importancia tienen las imgenes obtenidas a travs del microscopio electrnico?

5. Realice un esquema del microscopio compuesto y seale sus partes.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 3

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LOS CARBOHIDRATOS

I. OBJETIVO

Reconocer las unidades monomricas y macromoleculares como componentes fundamentales de todos los seres
vivos.

II. MATERIALES POR MESA

Solucin de Glucosa al 1% (Monosacrido)
Solucin de fructuosa al 1%(Monosacrido)
Solucin de Sacarosa al 1% (Disacrido)
Solucin de Maltosa al 1% (Disacrido)
Solucin de Almidn al 1% (Polisacrido)
Solucin de Lugol
cido sulfrico concentrado
Reactivo de Molish
Reactivo de Benedict
Tubos de 13x100
Tubos de 16x150
Pipeta de vidrio de 5 ml. graduada
Bombilla de jebe para pipeta
Pinzas de madera
Mecheros, trpode, rejilla de asbesto

III. PROCEDIMIENTO

3.1. Determinacin General de Glcidos:

Los Glcidos o Hidratos de carbono por accin deshidratante del cido sulfrico originan compuestos derivados
del furfural, los que en presencia del alfa-naftol presente en el Reactivo de Molish, formarn un compuesto
coloreado.

Preparacin:

1. Colocar 1 ml. De cada solucin del glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa y Almidn) en un tubo de
13x100 y roturarlo.
2. Adicionar a cada tubo con glcido una (1) gota del Reactivo de Molish.
3. Agregar lentamente por la pared del tubo sin agitar 1 ml. de cido sulfrico concentrado.
4. Observar si hay cambio de color.

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3.2. Determinacin de Azcares Reductores:

Un Azcar reductor al ser sometido a la accin del calor en el medio alcalino del Reactivo de Benedict, sufre
fenmenos de enolizacin y se fragmenta formando cuerpo fuertemente reductores para el cobre del Reactivo de
Benedict que se transforma en Ion cuproso (Cu
+
) el que reaccionar con los iones OH
-
del medio para formar
Oxido cuproso (Cu
2
O) que es de color rojo ladrillo.

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de cada solucin de glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa, Maltosa y Almidn) en
un tubo de 16x150 mm y roturarlo.
2. Adicionar 1 ml. de Reactivo de Benedict a cada tubo.
3. Someter los tubos a ebullicin en agua hirviendo con ayuda de una pinza por cinco (5) minutos.
4. Observar la formacin de color (rojo ladrillo si es positivo)

3.3. Determinacin de Almidn:

El yodo del Lugol es absorbido por el almidn y forma con l compuestos complejos de color azul negruzco
(yoduro de almidn).

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de solucin de Almidn al 1% en un tubo de 16x150 mm.
2. Adicionar 3 gotas de Lugol y agitar.
3. Observar la formacin de color (azul negro si es positivo)

IV. PROTOCOLO

A. Determinacin de Glcidos.

B. Determinacin de azcares reductores.

C. Determinacin de Almidn.

V. CUESTIONARIO

1. Defina:
Monosacrido
Disacridos
Polisacrido
2. Explique el fundamento de las reacciones realizadas.
3. Establezca diferencias biolgicas y qumicas entre la glucosa, maltosa y glucgeno
4. Dibuje la estructura de la sacarosa y maltosa e indique el motivo por el que una de ellas NO es reductora.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 4

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLOGICO DE LIPIDOS Y PROTEINAS

I. OBJETIVO
Reconocer que compuestos orgnicos como los lpidos y protenas son constituyentes importantes en todos los
seres vivos.


Aceite comestible
Albmina al 1%
Clara de huevo
Alcohol
Cloroformo
ter etlico
Sudam III
Hidrxido de sodio al 40%
Sulfato de cobre al 1%
cido ntrico concentrado
Tubos de 16 x 150 mm.
Pipetas graduadas de 5 ml.

III. PROCEDIMIENTO

DETERMINACION DE LIPIDOS

A. Solubilidad de los Lpidos
Los lpidos son insolubles en agua y solubles en solventes orgnicos como el ter y cloroformo.

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de Aceite en cada tubo y agitar
2. Agregar:
En el tubo N 1: 2 ml de agua destilada
En el tubo N 2: 2 ml. de Alcohol
En el tubo N 3: 2 ml. de cloroformo
En el tubo N 4: 2 ml. de ter etlico
3. Observar, en cada tubo si hay solubilidad o no.
4. La solubilidad del aceite es positiva en el alcohol, cloroformo y ter etlico.

B. Solubilidad del Sudam III
El Sudam III es un compuesto coloreado que es mas soluble en los lpidos que en el alcohol, al
solubilizarse en los lpidos produce una coloracin rosada.

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Preparacin:

1. Colocar 1 ml. de aceite comestible en un tubo de 16x150 mm.
2. Adicionar 1 ml. de Sudam III
3. Observar la coloracin producida.
4. La formacin de una coloracin rosada indica que la prueba es positiva.

DETERMINACION DE PROTEINAS

A. REACCION DE BIURET
Los compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo con las sales de cobre
en un medio fuertemente alcalino, dando un color prpura o violeta.

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de la solucin de Albmina al 1% o solucin Clara de huevo al 10% en un tubo de
16x150 mm.
2. Agregar 2 ml. de la solucin de Hidrxido de sodio al 40% y mezclar.
3. Aadir 2 gotas de Sulfato de cobre al 1%.
4. Incubar a 25 C por 30 minutos.

Resultado
La formacin de una coloracin violeta o prpura indica que la prueba es positiva.

B. REACCIN XANTOPROTECA
Las protenas que presentan aminocidos con anillos bencnicos, cuando se someten a la accin del cido
ntrico, dan derivados nitrogenados que se colorean de amarillo.

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de la solucin de Albmina al 1% o Clara de huevo al 10% en un tubo de 16x150
2. Adicionar 2 ml. de cido ntrico concentrado.
3. Observar la formacin de un precipitado blanco y hervir por 3 minutos.

Resultado
La formacin de una coloracin amarillo - claro evidencia la presencia de protenas.

IV. CUESTIONARIO:

1. Por qu los lpidos no se disuelven en el agua.
2. De que manera participan los lpidos en la estructura celular.
3. Que entiende por desnaturalizacin de las protenas.
4. Forme una protena constituida por 6 aminocidos.
5. Aminocidos aromticos: estructura y funcin.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 5

OBSERVACIONES CELULARES: PROCARIOTES (BACTERIAS) Y EUCARIOTES (HONGOS Y
PARASITOS).

I. OBJETIVO

Conocer diversos organismos microbianos denominados Bacterias, Protozoarios, hongos y parsitos que
estn formados por una sola o varias clulas y que habitan diversos medios naturales.
Visualizar ciertas caractersticas estructurales en ellas.

MATERIALES POR MESA

Laminas con muestras preparadas de bacterias, hongos y parsitos
Palitos mondadientes
Solucin fisiolgica al 0.85%
Solucin Mercuro cromo
Solucin de Violeta de genciana
Alcohol yodado
Lamina portaobjetos
Lamina cubreobjeto
Aceite de inmersin
Depsito para eliminar lminas y laminillas.

PROCEDIMIENTO

Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre una lmina. Con el mondadientes obtener una muestra de
sarro dental y esparcir en espiral en la gota de solucin fisiolgica.
Secar a temperatura ambiente y una vez seco cubrir con colorante Mercuro de cromo por 5 minutos.
Enjuagar y aplicar inmediatamente el colorante Violeta de genciana.
Dejar por 3 minutos, lavar con agua de cao. Secar la muestra preparada por accin del calor o al medio
ambiente.
Las lminas con muestras preparadas de bacterias y la del sarro dental observar con lente de 100X y aceite
de inmersin.
Las lminas de hongos y parsitos observar con objetivos secos de 20 y 40 aumentos.

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PROTOCOLO

Aumento

Muestra con Sarro dental (coloreada)

Lamina con muestra bacteriana

Lamina con muestra Fungal (Hongo)

Lamina con muestra de parsitos

4 X

10 X

40 X

100 X

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ASPERGILLUS (HONGO)

PENICILLUM (HONGO )

CUESTIONARIO

1. Que son organismos Procariotes y Eucariotes.

2. Que formas microbianas observ.

3. Que tipo de coloraciones se utilizaron en las preparaciones realizadas en la prctica.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 6

OBSERVACION DE MEMBRANA Y PARED CELULAR: CELULA ANIMAL Y VEGETAL

I. OBJETIVO

Poder diferenciar al microscopio las caractersticas que presentan la membrana celular de la clula animal y la
pared celular de la clula vegetal.


Muestra de clula epitelial de la mucosa bucal
Muestra de catfila de cebolla (Allium cepa)
Microscopios
Lminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Bistur
Pinza de punta recta
Mechero de alcohol
Colorante Azul de metileno
Colorante Lugol
Alcohol yodado
Solucin fisiolgica
Papel secante
Papel lente

III. PROCEDIMIENTO

A) OBSERVACION DE CELULA ANIMAL (RASPADO DE MUCOSA BUCAL)

1. Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre la lmina portaobjetos.
2. Con una lmina limpia hacer un raspado de la mucosa bucal.
3. Colocar la muestra obtenida sobre la gota de solucin fisiolgica.
4. Aplicar una gota del colorante azul de metileno sobre la muestra.
5. Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto.
6. Observar con objetivo de 10X y 40X aumentos.

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1- Membrana plasmtica, 2- Mitocondria,
3- Retculo endoplsmico rugoso, 4- Ribosomas,
5- Nucleolo, 6- Cromatina,
7- Citosol (=hialoplasma), 8- Diplosoma (=centriolos),
9- Retculo endoplsmico liso, 10- Aparato de Golgi

B) OBSERVACION DE CELULA VEGETAL (CATAFILA DE CEBOLLA)

1. Con ayuda de la pinza separe una de las catfila de la cebolla y extindalo sobre la lmina portaobjeto.
2. Con el bistur corte cuadritos de medio centmetro de catfila.
3. Coloque un cuadrito de la catfila sobre una lmina portaobjeto y agregar una gota de Lugol.
4. Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto.
5. Observar con objetivos de 10x y 40x

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C) OBSERVACION DE UNA CELULA FUNGICA

1. En una lmina preparada observar un cultivo de hongo coloreada con Azul de Lactofenol.
2. Observar con objetivos de menor y mayor aumento.

IV. PROTOCOLO "A" : Observacin de clula animal

AUMENTO

RASPADO DE LA MUCOSA BUCAL

Con Suero Fisiolgico
con Azul de Metileno

PROTOCOLO "B": Observacin de clula vegetal.

AUMENTO

CATAFILA DE CEBOLLA

con Suero fisiolgico

con Lugol

PROTOCOLO C: Observacin de una clula fngica.

AUMENTO

CELULA FUNGICA (HONGO)

COLORACIN AZUL DE LACTOFENOL

10 X

40 X

V. CUESTIONARIO

Qu caractersticas presenta la membrana celular de la mucosa epitelial y la pared celular de la clulas vegetales.
Cual es la importancia de los colorantes en las pruebas biolgicas
Que tipo decolorante es el azul de metileno y cual es su estructura.
Con que finalidad se uso el Lugol en la preparacin de lminas.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 7

FENOMENOS FISICOS DE LA CELULA: DIFUSION, OSMOSIS

OBJETIVO

Observar los fenmenos de difusin y smosis y su importancia para la clula.

II. MATERIALES

Lminas portaobjeto
Tubos de prueba
Lancetas hematolgicas
Solucin de NaCl al 0.4%
Agua destilada
Alcohol corriente
Algodn estril
Pipetas de 1 ml.
Varillas de vidrio macizo
Gradillas
Microscopios

III. PROCEDIMIENTO

A) Experimento con eritrocitos:
1. En los tubos de prueba perfectamente numerados, colocar:
En el 1er. tubo: 2 ml. de Sol. NaCl al 0.4 %
En el 2do. tubo: 2 ml. de Sol. NaCl al 0.9 %
En el 3er. tubo: 2 ml. de Sol. NaCl al 2.0 %
2. Desinfectar el dedo cordial (tercero) con algodn humedecido en alcohol
3. Realizar una puncin con ayuda de la lanceta descartable, en el dedo
4. Dejar caer 3 gotas de sangre en cada uno de los tubos
5. Agitar los tubos y dejar en reposo durante 2 minutos
6. Con la varilla de vidrio colocar sobre el portaobjeto una gota de la muestra de los tubos
7. Colocar el cubreobjeto y observar:
Las lminas preparadas al microscopio, y
El aspecto de los tubos hasta los 15 minutos.

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B) Experimento con vegetales:
1. En tubos de prueba perfectamente numerados, repetir el punto nmero 1
2. Agregar a cada tubo trocitos de vegetal
3. Dejar en reposo dos minutos, luego llevar el vegetal entre lmina y laminilla.
4. Observar al microscopio

IV. RESULTADO:

Observar el eritrocito en solucin hipotnica que se hincha y estalla (Hemlisis).
Observar el eritrocito en solucin hipertnica que pierde agua y se contrae (Crenacin).
Observar el vegetal en solucin hipotnica como la vacuola se hincha (Turgencia).
Observar como el vegetal en solucin hipertnica sale agua y el citoplasma se contrae
(Plasmlisis).

PROTOCOLO

Clula animal (eritrocitos)

INCLUDEPICTURE "http://www.efn.uncor.edu/dep/biologia/intrbiol/6_8.jpg" \*
MERGEFORMATINET

Celula vegetal ( catfila de cebolla)

INCLUDEPICTURE "http://www.elergonomista.com/biologia/004.GIF" \*
MERGEFORMATINET

INCLUDEPICTURE "http://www.naturalezadearagon.com/historianatural/celula7.jpg" \*
MERGEFORMATINET

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Esquema de la plasmolisis en clulas vegetales (Cephalaria leucantha). Pl, protoplasma. v,
vacuola. 1, en agua. 2 en solucin nitro al 4%. 3. en idem. al 6%. 4. en idem al 10%.

TUBOS

MUESTRA

REACCION

OBSERVACION

1. Sol.NaCl 0.4 % + sangre

Hipotnica

2

Sol.NaCl 0.9 % + sangre

Isotnica

3

Sol. NaCl 2 % + sangre

Hipertnica

4

Sol,NaCl 0.4 + vegetal

Hipotnica

5

Sol.NaCl 0.9 + vegetal

Isotnica

6

Sol.NaCl 2 + vegetal

Hipertnica

VI. CUESTIONARIO

1. Qu es difusin y cuantas clases existen
2. Defina que es: Osmosis, Dilisis, Turgencia y Plasmlisis.
3. Diferencia entre hemlisis y plasmlisis
4. Fundamente lo que sucede en las tres reacciones realizada.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 8

ORGANISMOS MOVILES: PSEUDOPODOS, CILIOS Y FLAGELOS.

I. OBJETIVOS

1. Verificar y comprender el movimiento de la clula de vida libre.
2. Observar y comprobar la existencia de estructuras para el movimiento celular.
3. Llegar a diferenciar las diferentes estructuras que intervienen en el movimiento celular, hacer una
comparacin entre ellas.

II. MATERIALES

A. MATERIAL DE LABORATORIO
Microscopios
Placas Petri
Lminas portaobjetos
Gotero o Pipeta de 1 ml.
Colorantes: -Lugol al 4%
-Verde de metilo

B. MATERIAL BIOLOGICO
Cultivo de Protozoarios.

III. PROCEDIMIENTO

Cultivo de Protozoarios:

En un frasco mediano de boca ancha, con agua estancada, preparar: arroz, zanahoria, lechuga
picada y levadura
Mantener abierto al aire libre durante 6 das, en un lugar donde no haya luz directa.

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IV. OBSERVACION

A) Movimiento ameboideo por seudpodos: Amoeba proteus (Clase Sarcodina)

1. Sobre una lmina portaobjetos, con un gotero coloque una gota del cultivo de protozoarios que contenga
Amoeba, cubrirlo luego con una laminilla cubreobjetos.
2. Aadir despus de haber observado una gota de Verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas a 10x, 20x y 40x.

B) Movimiento flagelar por flagelos: Euglena viridis (Clase Mastigophora)

1. Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Euglena y cubrir con una
laminilla cubreobjetos.
2. Aadir despus de haber observado una gota de verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas.

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C). Movimiento ciliar por cilios: Paramecium caudatum (Clase Ciliophora)

1. Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Paramecium, y cubrirlo con
una laminilla cubreobjeto.
2. Aadir despus de haber observado la muestra anterior, una gota de verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas.

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V. PROTOCOLO: REALIZAR ESQUEMAS DE LO OBSERVADO

AUMENTO

Amoeba proteus
(Sarcodina)

Euglena viridis
(Mastigophora)

Paramecium caudatum
(Ciliophora)

10 X

20 X

40 X

VI. CUESTIONARIO

1. A que atribuye la gran movilidad de los Protozoarios.

2. Explique las diferencias entre los diferentes tipos de movimientos: por seudpodos, flagelos, cilios.

3. Que es el Sndrome de Kartagener y su importancia mdica.

4. Explique tres enfermedades producidos por protozoarios, flagelados y no flagelados.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 9

ESTUDIO DE ORGANELOS CELULARES: MITOCONDRIAS, CLOROPLASTOS Y PLASTIDOS.

I. OBJETIVO:

Mediante el empleo de la tcnica de coloracin vital se observarn las mitocondrias presentes slo en el
citoplasma de las clulas Eucariotas, que vienen a constituir las centrales de energa porque producen
y almacenan energa bajo la forma de ATP.
Con el uso de suero fisiolgico observar plastidos en las clulas vegetales eucariticas, los que
contienen pigmentos y pueden sintetizar y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son
plastidos incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidn, los Proteinoplastos que acumulan
protenas, los Elaioplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plastidos
coloreados como el Caroteno que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la
Xantofila de color amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento de color verde y cuya
funcin principal es realizar la fotosntesis.

II. MATERIALES POR MESA:

Muestra de:
Clulas de epitelio bucal
Hoja de Elodea (Cloroplastos)
Aj amarillo (Xantofila)
Zanahoria (caroteno)
Papa (Amiloplastos)
Betarraga (Licopeno)
Harina de arroz (Leucoplastos o Amiloplastos)
Microscopios
Hoja de afeitar
Pinzas en punta
Laminas portaobjeto
Laminillas cubreobjeto
Solucin Verde Janus 1/10,000
Frascos con Lugol
Frasco con Suero Fisiolgico
Goteros con chupn de jebe

III. PROCEDIMIENTO:

A) OBSERVACION DE MITOCONDRIA EN EPITELIO BUCAL:

1. Con una lmina limpia y mediante un raspado suave obtener una muestra de la mucosa bucal,
2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre otra lmina,
3. Dejar secar la lmina con la muestra al medio ambiente,
4. Cubrir la muestra con Verde Janus durante 5 minutos,
5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente,
6. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.

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B) OBSERVACION DE PLASTIDOS EN VEGETALES:

CLOROPLASTOS: Se localizan en las hojas debajo de la epidermis superior.

1. Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua en una lamina portaobjeto.
2. Cubrir la muestra con una laminilla.
3. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.

CROMOPLASTOS: Son organelas coloreados y presentan formas variadas (redondas, elpticas, o
aciculares).

1. Realizar cortes finos de zanahoria, aj amarillo, betarraga sobre una lmina portaobjetos
2. Colocar una gota de agua sobre el corte.
3. Cubrir con una laminilla.
4. Observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento.

AMILOPLASTO: Son organelas que contienen almidn como sustancia de reserva.

1. Sobre una lmina portaobjetos colocar una gota de Lugol.
2. Agregar una pequea porcin de harina de maz y/o trozo delgado de papa .
3. Cubrir con una laminilla.
4. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.

IV. PROTOCOLO:

MUESTRAS

OBSERVACIN DE MITOCONDRIA, CLOROPLASTOS Y PLASTIDIOS

20 X

40 X

TIPO DE PLASTIDIO

EPITELIO BUCAL

HOJA DE ELODEA

AJI AMARILLO

ZANAHORIA

BETARRAGA

PAPA

HARINA DE ARROZ

V. CUESTIONARIO

1. Cul es la importancia de las mitocondrias.
2. Que transformaciones se llevan a cabo en las mitocondrias.
3. Porque las mitocondrias fijan el verde de Janus.
4. Que funcin cumplen los plastidios en las clulas.

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ASOCIACIN

PRACTICA N 10

ACCION ENZIMATICA

I. OBJETIVO:
Conocer el mecanismo de accin de las enzimas durante una reaccin qumica
Conocer como acta un catalizador

II. MATERIALES:
Gradilla Papa rayada
Mortero con piln Hgado de pollo
Tubos de prueba de 16 x150 Palito de Ignicin
Agua oxigenada Fsforos
Dixido de Manganeso Placas Petri

III. FUNDAMENTACION:
Las Enzimas tienen como funcin acelerar la velocidad de una reaccin qumica. El mecanismo de accin se
realiza de la siguiente manera:
Unin de un Sustrato a la Enzima para formar un Complejo Enzima- Sustrato y desdoblamiento del complejo
formado para liberar los Productos.

E + S E - S E + P

IV. PROCEDIMIENTO:
1) Numerar los tubos del 1 al 3
2) Colocar en cada tubo 2 ml. de Perxido de hidrgeno (Agua oxigenada)
3) Agregar al:
Tubo 1: cucharita de Papa
Tubo 2: cucharita de Hgado de pollo
Tubo 3: 2 g. Dixido de Manganeso
4) Colocar a cada tubo el palito de Ignicin encendido en la boca del tubo
5) Si el palito de Ignicin aumenta la intensidad del fuego, la reaccin es positiva.

V. RESULTADOS:
MnO
2
+ 2 H
2
O
2
------ 2 H
2
O + O
2
+ MnO
2

Catalasa + 2 H
2
O
2
------ 2 H
2
O + O
2
+ Catalasa

VI. PROTOCOLO

Anotar los resultados observados

VII. CUESTIONARIO:

1) Defina que es un catalizador
2) Cual es la funcin que cumple el Dixido de Manganeso, peroxido de hidrgeno y el hgado de pollo.
3) De que manera se clasifican las enzimas
4) Que se entiende por sitio activo.

28

ASOCIACIN

PRACTICA N 11

OBSERVACION DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

I. OBJETIVOS

Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre perifrica humana,
mediante el uso de una coloracin diferencial.
Observar la presencia de ncleos en su interior.

II. MATERIALES

Microscopios
Colorante Wright o Giemsa
Alcohol yodado
Agua destilada
Lminas portaobjetos limpias y desengrasadas
Algodn estril
Varillas de coloracin

III. PROCEDIMIENTO

A. Obtencin de sangre capilar

1. Desinfectar el dedo anular con alcohol yodado y algodn y con una lanceta estril punzar el dedo y
dejar caer una gota de sangre sobre un extremo de la lmina portaobjetos.
2. Con ayuda de otra lmina portaobjeto formar un ngulo de 45 y realizar un frotis, tratando de
esparcir homogneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lmina.
3. Dejar secar la preparacin y proceder luego a la coloracin con Wright o Giemsa.

B. Coloracin

1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Leishman por 1 minuto.
2. Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 minutos.
3. Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de cao.
4. Dejar secar la lmina coloreada.
5. Una vez que la lmina coloreada a secado, observar al microscopio con el objetivo de 100 X y aceite
de inmersin.

29

IV. PROTOCOLO

(Esquematice los siguientes elementos que abajo se indican y que sern observados con ayuda del
microscopio).

1. LEUCOCITOS GRANULARES:

a) Neutrfilos segmentados: presenta un ncleo con varios lbulos (2-5) unidas por bandas de
cromatinas.

b) Neutrfilos en banda o abastonado: presenta un ncleo no dividido en forma de S o en cayado O.

c) Eosinfilos: redondos, voluminosos, con granulaciones acidfilas de color anaranjado, ncleo con dos
lbulos.

d) Basfilos: son escasos de 0-1, presenta un ncleo difcil de observar, pues se halla cubierto por una
granulacin de color violeta o morado oscuro .

2. LEUCOCITOS AGRANULARES:

a) Linfocitos: De forma redonda o irregular, su ncleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte
de la clula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su nmero aumenta con las infecciones.

b) Monocitos: De forma redonda u ovalada, ncleo variable generalmente en forma de rin, citoplasma
sin grnulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.

3. PLAQUETAS:
Las ms pequeas de las clulas de la sangre, de forma redonda y no contienen hemoglobina. Son
esenciales en la coagulacin de la sangre.

4. HEMATIES O ERITROCITOS:
De forma generalmente redonda, sin ncleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina. La protena que
se encarga del transporte de oxgeno y anhdrido carbnico.

30

Neutrofilos

Eosinfilos

Basfilo

Monocitos

31

Linfocitos

V. CUESTIONARIO

1. Cul es la diferencia entre plasma y suero.
2. Escriba cules son los valores leucocitarios en el adulto sano.
3. Diga cul son las funciones de los diferentes leucocitos.
4. Describa en forma breve el proceso de coagulacin sangunea.

32

ASOCIACIN

PRACTICA N 12

GRUPO SANGUINEO Y FACTOR Rh

I. OBJETIVO:

Al finalizar la prctica el alumno debe saber qu es el grupo sanguneo, sus aplicaciones en el campo de la
medicina y el grupo sanguneo al que pertenece.

II. GENERALIDADES:

El serlogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de grupos sanguneos y en
1938 el Comit de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de Microbiologa de 1930 en Londres y la
Internacional de Transfusin Sangunea de Pars, se adopt definitivamente la clasificacin de los grupos
sanguneos humanos heredables, designados como A, B, AB, O.

GRUPOS SANGUINEOS RESULTANTES

GRUPO SANGUINEO

ANTIGENO EN GLOBULOS
ROJOS
(AGLUTINOGENOS)

ANTICUERPOS EN PLASMA O
SUERO SANGUINEO
(AGLUTININAS)

A

A

Anti-B

B

B

Anti-A

AB

AB

Ninguno
(Receptor universal)

O

Ninguno

Anti-A + Anti-B
(Dador universal)

III. MATERIAL Y METODOS:

Lminas portaobjetos

Sueros Anti-A, Anti-B, Anti-D o Rh.
Algodn
Alcohol yodado

33

RECONOCIMIENTO DE GRUPOS SANGUINEOS:

La tcnica de reconocimiento de grupos sanguneos se basa en la aglutinacin o no de los hemates cuando se
mezclan con la aglutinina Anti-A o Anti-B.

PROCEDIMIENTO :

1. Limpie con algodn embebido en alcohol la yema del dedo anular.
2. Realizar la puncin utilizando una lanceta hematologa estril.
3. Coloque dos gotas de sangre por separado sobre la lmina portaobjetos, de la persona a la cual se va a realizar
la prueba y en otra lmina otra gota de sangre.
4. Agregar a cada gota de sangre una gota de suero Anti-A y Anti-B y Anti-D o Anti-Rh por separado.
5. Observar la reaccin e identificar a que grupo pertenece y que factor Eh, si es positivo o negativo

METODO DE RECONOCIMIENTO PRCTICO:

GRUPO A GRUPO B

Anti-A Anti-B Anti-A Anti-B

GRUPO AB GRUPO O

Rh: Anti D o Rh (+) Anti- D o Rh (-)

IV: CUESTIONARIO:

1. A quienes se les llama receptores y donadores universales, por qu?
2. Explique la Eritroblastosis fetal.
3. En que se basa el reconocimiento de los grupos sanguneos?
4. Explique cmo se puede hacer el descarte de paternidad

34

ASOCIACIN

PRACTICA N 13

CICLO CELULAR: MITOSIS

I. OBJETIVO:

Se estudiar la mitosis y el ciclo de divisin celular en las clulas meristemticas de la raz de Allium cepa
(cebolla).
En este sistema la poblacin celular esta en equilibrio dinmico y los cromosomas son relativamente grandes, con
un nmero diploide ( 2n =16 ).

II. MATERIALES:

Bulbos de cebolla
Placas Petri
Estiletes y pinzas
Papel de Filtro
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceite de inmersin
Mechero de Alcohol
Orcena actica- clorhdrica
Aceite de inmersin
Papel lente
Microscopios

III. PROCEDIMIENTO:

1. Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeos conteniendo agua corriente, la que deber cambiarse cada 24
horas, mantener los bulbos en oscuridad a 25C y sometidos a aireacin constante.
2. Despus de 48 a 72 horas, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 races del bulbo, cortar 2 cm. de la parte
apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga Orcena.
3. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente 60C y se observe la emisin
de vapores blancos, evitar la ebullicin del colorante.
4. Dejar enfriar y repetir esta operacin cuatro veces.
5. Enfriar y dejar reposar durante 15 minutos.
6. Colocar la raicilla en la lmina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, aadir una agota de Orcena fra, cubrir la
preparacin con laminilla.
7. Con la punta de un lpiz golpear suavemente la preparacin describiendo crculos concntricos para permitir la
extensin del tejido meristemtico.
8. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.
9. Observar la preparacin a mayor aumento y lente de inmersin.

35

IV. PROTOCOLO:

Esquematizar las diferentes fases que se observan:

Interfase: Los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados delgados y no puede
absorber suficiente colorante para ser visible.

Profase: Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromtidas.

Metafase: Se observa el huso acromtico, los cromosomas estn mas condensados y cortos.

Anafase: Los cromosomas se dirigen a los polos

Telofase: Los cromosomas estn en los polos, empieza la formacin de la membrana nuclear

V. CUESTIONARIO:

1. Que es mitosis.

2. Que hay de comn entre mitosis y meiosis.

3. Que es Indice mittico

4. Que es Indice interfsico

5. Que es cariocinesis y citocinesis

REALIZAR ESQUEMAS:

FASE DE LA MITOSIS

ESQUEMAS

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