Manual Valteck

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Las Dalias 1900 - uoa
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LISTADO DE PRODUCTOS
METABOLITOS
ACIDO URICO TRINDER
ACIDO URICO LS
ALBUMINA BCG
BILIRRUBINA DIRECTA
BILIRRUBINA TOTAL
BILIRRUBINA TOTAL & DIRECTA
CALCIO
CLORO COLOR
COLESTEROL CHOD-PAP
COLESTEROL - LS
COLESTEROL HDL
COLESTEROL LDL
CREATININA CINETICA
CREATININA PUNTO FINAL
FERREMIA T.I.B.C
FOSFORO INORGANICO
GLUCOSA GOD-PAP
GLUCOSA - LS
GLUCOSA HEXOQUINASA
HEMOGLOBINA
LIPIDOS TOTALES
PROTEINA TOTAL
TRIGLICERIDOS GPO-PAP
TRIGLICERIDOS LS
UREA ENZIMATICA BERTHELOT
UREA ENZIMATICA SALICILATO
UREA - UV
ENZIMAS
AMILASA
CK-NAC
CK-MB
FOSFATASA ALCALINA TRIS
FOSFATASA ALCALINA LS
FOSFATASA ALCALINA PUNTO FINAL
-GLUTAMIL TRANSPEPTIDASA
LACTATO DESHIDROGENASA
TRANSAMINASAS COLOR AST-ALT
AST/ASAT/GOT
AST/ASAT/GOT - LS
ALT/ALAT/GPT
ALT/ALAT/GPT LS
SUEROS CONTROLES
VALTROL N
VALTROL P
VALTROL NP
SEROLOGIA LATEX
ARTRI CHECK (FACTOR REUMATOIDEO)
ASO CHECK (ANTIESTREPTOLISINA O )
PCR CHECK (PROTEINA C REACTIVA)
TEST DE EMBARAZO
HCG-ELISA
HCG MONOCLONAL DIRECTO
HCG STRIPTEST COMBO (SUERO Y ORINA)
SUEROS TIPIFICADORES
ANTI - A
ANTI - B
ANTI - AB
ANTI D
SUERO DE COOMBS
ANTIBIOGRAMA
SENSIDISCOS DE ANTIBIOTICOS
MULTIDISCOS
MISCELANEOS
HEMORRAGIAS FECALES OCULTAS
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METABOLITOS
ACIDO URICO TRINDER
ACIDO URICO LS
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BILIRRUBINA TOTAL
BILIRRUBINA TOTAL & DIRECTA
CALCIO
CLORO COLOR
COLESTEROL CHOD-PAP
COLESTEROL - LS
COLESTEROL HDL
COLESTEROL LDL
CREATININA CINETICA
CREATININA PUNTO FINAL
FERREMIA T.I.B.C
FOSFORO INORGANICO
GLUCOSA GOD-PAP
GLUCOSA - LS
GLUCOSA HEXOQUINASA
HEMOGLOBINA
LIPIDOS TOTALES
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TRIGLICERIDOS LS
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UREA - UV
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ACIDO URICO - TRINDER
Reactivo nico para la determinacin enzimatica de Acido Urico en suero,
plasma y otros fludos biolgicos.
Para uso en el diagnstico in vitro.
SIGNIFICANCIA CLINICA
El cido Urico es producto del metabolismo de las purinas,
cidos nucleicos y nucleoprotenas, valores elevados indican
patologas que afectan dichos metabolismos, algunas de
origen gentico.
Valores elevados se observan en pacientes con gota, falla
renal, arterioesclerosis, diabetes, hipotiroidismo, etc. Su
disminucin se encuentra asociada a la enfermedad de
Wilson.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El cido rico es oxidado por la enzima especfica uricasa
generndose alantona y H2O2, el cual en una reaccin
mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac.3-
Dimetilaminobenzoico y 4-AAP produciendose un
compuesto coloreado con un mximo de absorcin a 555
nm., en cantidad proporcional a la cantidad de cido rico
presente en la muestra.
Acido Urico
UOD
. Alantona + H2O2
H2O2 + DMAB + 4-AAP
POD
H2O + Complejo Coloreado
REACTIVOS
Conservado entre 2 y 8C., estable hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta. Estabilidad de la solucin
reconstituda: 3 meses entre 2 y 8C. Descartar el reactivo
si su absorbancia contra blanco de agua es superior a 0.4
D.O. a 555 nm.
Preparacin: Reconstituir el contenido de un frasco con el
volumen de agua destilada indicado en la etiqueta, mezclar
por inversin hasta la disolucin total, evitando la formacin
de espuma. El agua a utilizar para la reconstitucin, debe
estar a temperatura ambiente. El uso de agua a baja
temperatura puede dificultar el proceso de disolucin.
Componentes del reactivo enzimtico
( concentraciones al reconstituir ) :
Buffer fosfato pH 7.4 100 mM
Uricasa !10U/ml
Peroxidasa !2 U/ml
Ascorbato oxidasa !0.2 U/ml
4-Aminoantipirina 0.5 mM
DMAB 0.1 mM
Ferrocianuro de potasio 10 mg/L
Azida sdica 0.1 g/dl
Agentes tensioactivos c.s.
Solucin Standard
Ac.Urico en solucin estabilizada 10 mg%
MUESTRAS
La muestra a utilizar puede ser tanto suero como plasma
Heparinizado y orina. En el caso de las orinas, precalentar la
muestra a 60 para disolver los posibles uratos precipitados
y diluir 1:10 con agua destilada. El resultado se multiplica por
10.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de medir
absorbancias a 555 nm. (rango 540 - 560 nm.), timer y
pipetas.
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura que se realizar el
ensayo.
Blanco Standard Desconocido
Muestra (ml) -- -- 0.025
Standard (ml) -- 0.025 --
Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 10 minutos a 37C, o 20 minutos a
temperatura ambiente (20 a 25C.). Leer las absorbancias
llevando a cero el espectrofotmetro con el blanco de
reactivo.
CALCULOS
FACTOR = 10
Absorbancia Standard
Ac.Urico(mg%) = Factor x Absorbancia desconocido
La reaccin es lineal hasta 20 mg%. Para valores superiores,
dilur la muestra con suero fisiolgico y el resultado obtenido
se multiplica por el factor de dilucin. En el caso de sueros
muy hiperlipmicos, deber hacerse un blanco muestra con
suero fisiolgico para eliminar la posible interferencia por la
turbidez del suero.
RANGOS DE REFERENCIA:
SUERO: Hombres: 3.4 a 7.0 mg%
Mujeres : 2.4 a 5.7 mg%
ORINA : (Dieta )
normal 250-750 mg/24 h
Libre de purinas <420 mg/24 h
Pobre en purinas <480 mg/24 h
Rica en purinas <1500 mg/24 h
BIBLIOGRAFIA
1. Trinder,P., Ann Clin Biochem. 6(24),1969.
2. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Technics.
Harper and Row Publishers. New York, 1964.
3. Barham, D., Trinder, P., Analist 97(142), 1972.
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ACIDO URICO - LS
Reactivo lquido para la determinacin enzimatica de Acido Urico en suero,
El Acido Urico es producto del metabolismo de las purinas,
cidos nucleicos y nucleoprotenas, valores elevados indican
patologas que afectan dichos metabolismos, algunas de
origen gentico.
Valores elevados se observan en pacientes con gota, falla
renal, arterioesclerosis, diabetes, hipotiroidismo, etc. Su
disminucin se encuentra asociada a la enfermedad de
Wilson.
El cido rico es oxidado por la enzima especfica uricasa
generndose alantona y H2O2, el cual en una reaccin
mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac.3-5-
Dicloro-2-Hidroxi-Bencensulfnico y 4-AAP producindose
un compuesto coloreado con un mximo de absorcin a 520
nm., en cantidad proporcional a la cantidad de cido rico
Acido Urico
UOD
. Alantona + H2O2
H2O2 + DMAB + 4-AAP
POD
. H2O + Comp. Coloreado
REACTIVOS
caducidad indicada en la etiqueta. El reactivo con el tiempo
puede tomar un leve color rosado que no afecta los
resultados. Descartar el reactivo si su absorbancia contra
blanco de agua es superior a 0.4 D.O. a 520 nm.
Preparacin: El reactivo se provee listo para su uso
Componentes del reactivo enzimtico:
Buffer Pipes pH 7.5 50 mM
Uricasa !100 U/l
Peroxidasa !1000 U/l
Ascorbato oxidasa !200 U/l
3,5-DHBS 1 mM
Ferrocianuro de potasio 10 mg/L
Agentes tensioactivos c.s.
Solucin Standard
Ac.Urico en solucin estabilizada 10 mg/dl
MUESTRAS
La muestra a utilizar puede ser tanto suero como plasma
heparinizado u orina. En el caso de las orinas, precalentar la
muestra a 60 para disolver los posibles uratos precipitados
y diluir 1:10 con agua destilada. El resultado en este caso, se
multiplica por 10.
EQUIPO REQUERIDO
pipetas.
TECNICA
ensayo. Las pipetas a utilizar deben estar lmpias y libres de
residuos para no contaminar el reactivo.
Blanco Standard Muestra
Muestra (ml) -- -- 0.025
Reac. de trabajo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C. o temperatura ambiente
(!20C.). Leer las absorbancias llevando a cero el
espectrofotmetro con el blanco de reactivo. El color
resultante es estable por a lo menos treinta minutos.
CALCULOS
FACTOR= 10
Acido Urico (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra
La reaccin es lineal hasta 20 mg/dl. Para valores
superiores, diluir la muestra con suero fisiolgico y el
resultado obtenido se multiplica por el factor de dilucin. En
el caso de sueros muy hiperlipmicos, deber hacerse un
blanco muestra con suero fisiolgico para eliminar la posible
interferencia por la turbidez del suero.
SUERO:
Hombres: 3.4 a 7.0 mg/dl
Mujeres : 2.4 a 5.7 mg/dl
ORINA :(Dieta )
Normal 250-750 mg/24 h
Libre de purinas <420 mg/24 h
Pobre en purinas <480 mg/24 h
Rica en purinas <1500 mg/24 h
BIBLIOGRAFIA
3. Barham, D., Trinder, P., Analist 97(142), 1972.
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ALBUMINA-BCG
Reactivo nico para la determinacin de Albmina en suero y plasma.
La albmina es el mayor componente proteico del suero.
Siendo sintetizada en el hgado y con una gran capacidad de
cambios en su configuracin. Entre sus funciones se
distinguen la regulacin de la distribucin del lquido
extracelular, como pool de aminocidos, como protena de
transporte de una variedad de sustancias tales como
hormonas, lpidos, vitaminas, calcio, y otros metales.
Su disminucin est asociada a procesos de
sobrehidratacin, prdida de protenas, disminucin en la
sntesis, o aumento en el catabolismo o degradacin. Su
aumento est relacionado con procesos de
hemoconcentracin, entre otros.
Los mtodos ms especficos para la determinacin de
albmina son inmunolgicos, tales como R.I.A., nefelometra,
etc. Tambin es utilizado como mtodo la electroforesis de
protenas, pero este procedimiento tiene el inconveniente
que la afinidad de los colorantes por la albmina difiere de
las globulinas.
Los mtodos comnmente utilizados se basan en la unin
de albmina a colorantes o indicadores, siendo el ms
comn el que utiliza verde de bromo cresol. El mtodo de
VALTEK se basa en este ltimo, segn las
recomendaciones de Doumas.
REACTIVOS
Conservado a temperatura ambiente y protegido de la luz,
estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
La absorbancia del reactivo contra blanco de agua a 620
nm., debe ser del orden de 0.150 D.O.
Componentes del reactivo:
Verde de bromocresosl 0.20 mM
Buffer succinato pH 3.8 100 mM
Preservantes y surfactantes c.s.
Solucin Standard
Albmina bovina, ver concentracin en la etiqueta del frasco.
(Conservar entre 2 y 8C.)
MUESTRAS
La muestra a utilizar puede ser tanto suero como plasma. La
albmina es estable en suero o plasma una semana a
temperatura ambiente y 1 mes a 4C.
EQUIPO REQUERIDO
pipetas.
TECNICA
Llevar el reactivo a temperatura de reaccin (18 - 25 C)
antes de realizar el ensayo.
Muestra (ml) -- -- 0.01
Reactivo (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente, y leer
las absorbancias a 620 nm., llevando a cero el
CALCULOS
Verificar la concentracin del standard en la etiqueta del
frasco includo con cada kit.
FACTOR = Concentracin standard
Albmina(g/dl) =Factor x Absorbancia desconocido
OBSERVACIONES:
La reaccin es lineal hasta 8.0 g/dl.
Para valores superiores, dilur la muestra con suero
fisiolgico y el resultado obtenido se multiplica por el
factor de dilucin.
En el caso de sueros hiperlipmicos, deber hacerse un
blanco muestra con suero fisiolgico para eliminar la
posible interferencia por la turbidez del suero.
RANGO DE REFERENCIA: 3.5 a 5.0 g/dl
(*) Se observan valores ms bajos durante el embarazo, en
los recien nacidos, y en los ancianos.
BIBLIOGRAFIA
1.Doumas, B.T., Biggs, H.G., Standard Methods of Clinical
Chemistry,Academic press,N.Y. 7(175), 1976.
2. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and
Technics.Harper and Row Publishers. New York,1964.
3. Young D.S., et al., Clin Chem. 21(10), 1975.
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BILIRRUBINA DIRECTA - DIAZO ACIDO
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de bilirrubina directa en suero o plasma.
La bilirrubina es producto de la degradacin de la
hemoglobina en el sistema retculo endotelial, la cual es
transportada al hgado unida a albumina. Esta bilirrubina,
conocida como bilirrubina indirecta o libre, es insoluble en
agua y es conjugada en el hgado con cido glucurnico,
siendo excretada hacia el intestino por va biliar, donde es
metabolizada por la flora bacteriana. La bilirrubina total
corresponde a la suma de la bilirrubina indirecta o libre, y la
bilirrubina conjugada o directa. Un aumento en la bilirrubina
total es producto de una obstruccin en la va biliar; hepatitis;
cirrosis; enfermedad hemoltica y algunas deficiencias
enzimticas hereditarias. La bilirrubina indirecta o libre, se
encuentra elevada por causas pre-hepticas, tales como
enfermedades hemolticas, o bien problemas metablicos
intra-hepticos que involucran el proceso de conjugacin. En
neonatos es importante el control de la bilirrubinemia, ya que
la bilirrubina indirecta o libre es neurotxica.
La mayora de los mtodos utilizados para la determinacin
de bilirrubina utilizan cido sulfanlico diazotizado,
formndose azobilirrubina coloreada.
En medio acuoso slo reacciona la bilirrubina conjugada o
directa. En presencia de cido sulfanlico diazotizado, los
glucurnidos de bilirrubina y la bilirrubina-delta reaccionan,
formndose azobilirrubina que en pH cido presenta un peak
de absorcin a 560 nm.
La azobilirrubina formada es medida fotomtricamente entre
540 y 600 nm, siendo la intensidad del color formado
directamente proporcional a la cantidad de bilirrubina directa
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8C., estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta.
Preparacin reactivo de trabajo: Agregar al momento de
utilizar, por cada 10 ml. de reactivo Sulfanlico, 1 gota de
reactivo nitrito de sodio ( o 0.05 ml.), mezclar. Estable por 24
horas protegido de la luz.
Composicin reactivo de trabajo:
Acido sulfanlico 30 mM
HCl 165 mM
Nitrito de sodio 0.50 mM
MUESTRAS
Utilizar suero o plasma libre de hemlisis. Realizar el ensayo
dentro de un plazo no mayor a las 2 horas, en caso contrario
refrigerar la muestra entre 2 y 8C., o bien congelar a -20C.
para perodos ms largos. Mantener protegidas de la luz.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 560 nm (rango 540-600 nm); timer, pipetas y
bao termorregulado a 37 C.
TECNICA
Desconocido Blanco reactivo
Muestra (ml) 0.10 ----
Reactivo trabajo (ml) 1.00 1.00
Agua destilada (ml) ---- 0.10
Mezclar e incubar EXACTAMENTE 3 minutos a temperatura
ambiente o 1 minuto a 37C., llevando a cero el instrumento
con el blanco reactivo.
CALCULOS
Para obtener las concentraciones de bilirrubina total o
directa, debe realizarse una curva de calibracin o bien
utilizar un factor a partir de un standard de concentracin
conocida, con el cual se procede en la forma descrita para
las muestras en la tcnica de bilirrubina total. El factor o la
curva obtenidos con el reactivo para determinacin de
bilirrubina total son vlidos para la determinacin de
bilirrubina directa, y se recomienda verificar su validez con
cada nuevo kit de bilirrubina total.
FACTOR = Concentracin Standard
Abs.Standard
Concentracin muestra (mg%) = FACTOR x Abs. Muestra
OBSERVACIONES
El factor o la curva de calibracin deben obtenerse
solamente con el reactivo para bilirrubina total.
La reaccin es lineal hasta 20 mg%
Para muestras peditricas, el volumen de muestra
puede ser disminudo a la quinta parte. El resultado
obtenido se multiplica por 5.
Es recomendable el realizar un blanco para cada
muestra, en tal caso se utliza solamente reactivo
Sulfanlico.
RANGOS DE REFERENCIA
Bilirrubina Directa: 0 a 0.3 mg%
BIBLIOGRAFIA
1. Malloy H.T. & Evelyn K.A., J.Biol.Chem.119(481),1937.
2. Jendrassic L. & Grof P., Biochem Z. 291(81),1938.
3. Walters M. I. & Gerarde H. W., Micro J.15(231)1970.
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BILIRRUBINA TOTAL - DMSO
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de bilirrubina total en suero o plasma
segn Walters y Gerarde.
La bilirrubina es producto de la degradacin de la
hemoglobina en el sistema retculo endotelial, la cual es
transportada al hgado unida a albmina. Esta bilirrubina,
conocida como bilirrubina indirecta o libre, es insoluble en
agua y es conjugada en el hgado con cido glucurnico,
siendo excretada hacia el intestino por va biliar, donde es
metabolizada por la flora bacteriana. La bilirrubina total
corresponde a la suma de la bilirrubina indirecta o libre, y la
bilirrubina conjugada o directa. Un aumento en la bilirrubina
total es producto de una obstruccin en la va biliar; hepatitis;
cirrosis; enfermedad hemoltica y algunas deficiencias
enzimaticas hereditarias. La bilirrubina indirecta o libre, se
encuentra elevada por causas pre-hepticas, tales como
enfermedades hemliticas, o bien problemas metablicos
intra-hepticos que involucran el proceso de conjugacin. En
neonatos es importante el control de la bilirrubinemia, ya que
la bilirrubina indirecta o libre es neurotxica.
La mayora de los mtodos utilizados para la determinacin
de bilirrubina utilizan cido sulfanlico diazotizado,
formndose azobilirrubina coloreada. En medio acuoso slo
reacciona la bilirrubina conjugada o directa; para medir la
bilirrubina total es necesario la incorporacin de un
acelerador, inicialmente se utiliz metanol (Malloy-Evelyn), y
posteriormente benzoato de sodio (Jendrassic-Grof). El
metodo VALTEK se basa en la modificacin propuesta por
Walters y Gerarde, en la cual se utiliza como acelerador
DMSO. La azobilirrubina formada es medida
fotomtricamente entre 540 y 600 nm, siendo la intensidad
del color formado directamente proporcional a la cantidad de
bilirrubina directa o total presente en la muestra.
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8 C., estables hasta la fecha de
Preparacin reactivo de trabajo : Agregar al momento de
utilizar, por cada 10 ml. de reactivo DMSO, 1 gota de
reactivo nitrito de sodio ( o 0.05 ml.), mezclar. Estable por 24
horas protegido de la luz.
Composicin reactivo de trabajo:
Acido sulfanlico 30 mM
HCl 165 mM
DMSO 5000 mM
Nitrito de sodio 0.50 mM
MUESTRAS
refrigerar la muestra entre 2 y 8 C., o bien congelar a -20
C. para perodos mas largos. Conservar protegidas de la luz.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 560 nm (rango 540-600 nm); timer, pipetas y
bao termorregulado a 37 C.
TECNICA
Desconocido Blanco reactivo
Muestra (ml) 0.10 ----
Agua destilada (ml) ---- 0.10
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente o 6
minutos a 37 C., llevando a cero el instrumento con el
blanco reactivo. El color resultante es estable por 30
minutos.
CALCULOS
Para obtener las concentraciones de bilirrubina total, debe
realizarse una curva de calibracin o bien utilizar un standard
de concentracin conocida (con el cual se procede en la
forma descrita para las muestras en la tcnica de bilirrubina
total). El factor o la curva obtenidos con el reactivo para
determinacin de bilirrubina total son vlidos para la
determinacin de bilirrubina directa, y se recomienda verificar
su validez con cada nuevo kit de bilirrubina total.
FACTOR = Concentracion Standard
Abs.Standard
Concentracion muestra (mg%) = FACTOR x Abs. Muestra
OBSERVACIONES
Para muestras peditricas, el volumen de muestra
puede ser disminudo a la quinta parte. El resultado
obtenido se multiplica por 5.
Es recomendable el realizar un blanco para cada
muestra, en tal caso se utiliza solamente reactivo
DMSO.
Bilirrubina Total : 0.1 a 1.2 mg%
BIBLIOGRAFIA
3. Walters M. I. & Gerarde H. W., Microchem J.15(231)1970.
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BILIRRUBINA
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de Bilirrubina Total y Directa en suero y
otros fludos biolgicos.
La bilirrubina es producto de la degradacin de la hemoglobina
en el sistema retculo-endotelial, la cual es transportada al
hgado unida a albmina. Esta bilirrubina, conocida como
bilirrubina indirecta o libre, es insoluble en agua y es conjugada
en el hgado con cido glucurnico, siendo excretada hacia el
intestino por va biliar, donde es metabolizada por la flora
bacteriana. La bilirrubina total corresponde a la suma de la
bilirrubina indirecta o libre, y la bilirrubina conjugada o directa.
Un aumento en la bilirrubina total es producto de una obstruccin
en la va biliar; hepatitis; cirrosis; enfermedad hemoltica y
algunas deficiencias enzimaticas hereditarias. La bilirrubina
indirecta o libre, se encuentra elevada por causas pre-hepticas,
tales como enfermedades hemliticas, o bien problemas
metablicos intra-hepticos que involucran el proceso de
conjugacin. En neonatos es importante el control de la
bilirrubinemia, ya que la bilirrubina indirecta o libre es
neurotxica.
En medio acuoso slo reacciona la bilirrubina conjugada o
directa; los glucurnidos de bilirrubina y la bilirrubina-delta
reaccionan, formndose azobilirrubina que en pH cido presenta
un peak de absorcin a 530nm. Para medir la bilirrubina total es
necesario la incorporacin de un acelerador; inicialmente se
utiliz metanol (Malloy-Evelyn), y posteriormente benzoato de
sodio (Jendrassic-Grof). El metodo VALTEK utiliza como
acelerador una solucin acuosa de benzoato de cafena. La
azobilirrubina formada es medida fotomtricamente entre 520 y
550 nm, siendo la intensidad del color formado directamente
proporcional a la cantidad de bilirrubina directa o total presente
en la muestra.
REACTIVOS
Acelerador: Solucin de Benzoato de cafena, tamponada y
estabilizada. Estable a temperatura ambiente.
Reactivo Sulfanlico: Solucin estabilizada de cido sulfanlico en
HCl 0.165 M. Estable a temperatura ambiente.
Reactivo Nitrito de Sodio: Solucin estabilizada de nitrito de
sodio. Conservar de preferencia refrigerado.
MUESTRAS
refrigerar la muestra entre 2 y 8 C., o bien congelar a -20 C.
para perodos ms largos. Mantener protegidas de la luz.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 530 nm (rango 520-550 nm); timer y pipetas .
TECNICA
Preparacin diazorreactivo: Agregar al momento de utilizar, por
cada 1 ml. de reactivo sulfanlico, 0.05 ml. o 1 gota de reactivo
nitrito de sodio. Estable por 24 horas.
Blanco Directa Total
Suero (ml) 0.2 0.2 0.2
Agua (ml) 2.4 2.4 ---
Acelerador (ml) --- --- 2.4
Reac.Sulfanlico (ml) 0.2 --- ---
Diazorreactivo (ml) --- 0.2 0.2
Mezclar e incubar por 5 minutos a temperatura ambiente. Leer
las absorbancias a 530 nm. llevando a cero el instrumento con
un blanco de agua destilada. La bilirrubina directa debe leerse
exactamente a los 2 minutos.
Tecnica para lquido amnitico:
Blanco Total
Lq. Amnitico (ml) 2.5 2.5
Agua (ml) 4.0 ---
Acelerador (ml) --- 4.0
Reac. Sulfanlico (ml) 0.5 ---
Diazorreactivo (ml) --- 0.5
Continuar la tcnica segn lo descrito anteriormente. Utilizar el
mismo factor o curva obtenidos segn lo descrito. Multiplicar el
resultado final por 0,2.
CALCULOS
Para obtener las concentraciones de bilirrubina total o directa ,
debe realizarse una curva de calibracin o bien utilizar un
standard de concentracin conocida , con el cual se procede en
la forma descrita para las muestras en la tcnica de bilirrubina
total. El factor o la curva obtenidos con el reactivo para
determinacin de bilirrubina total son vlidos para la
determinacin de bilirrubina directa, y se recomienda verificar
su validez con cada nuevo kit.
FACTOR = Concentracion Standard .
Abs.Standard - Abs. Blanco Standard
Bilirrubina Directa (mg%) = FACTOR x (Directa - Blanco)
Bilirrubina Total (mg%) = FACTOR x (Total - Blanco)
Observaciones:
Los volmenes de reaccin pueden ser modificados
proporcionalmente sin alteracin en los resultados
obtenidos.
Para muestras peditricas, el volumen de muestra puede
ser disminudo a la mitad. El resultado obtenido se
multiplica por 2.
Bilirrubina Total : 0.1 a 1.2 mg%
Bilirrubina Directa: 0 a 0.3 mg%
BIBLIOGRAFIA
3. Walters M.I. & Gerarde H.,Microchem J.15(231)1970.
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Santiago CHILE
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CALCIO
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de Calcio en suero, plasma u orina.
Para uso en el diagnstico in vitro
El Calcio (Ca2+) posee variadas funciones en el cuerpo, no solo
como factor estructural de huesos y dientes, sino que tambin
en la funcin neuromuscular y los procesos de coagulacin.
Aproximadamente el 45% del Calcio corporal esta unido a
protenas sricas, un 5% se encuentra en forma no ionizada, y el
restante 50% se encuentra ionizado, esta ltima fraccin es la
activa, en trminos de funcin biolgica.
El aumento del calcio srico (hipercalcemia), puede estar
asociado a diversas patologas tales como, hiperparatiroidismo,
hipervitaminosis, mielomas, y algunos cancer seos. As mismo,
su disminucin (hipocalcemia), puede estar asociada a
hipoparatiroidismo, nefrosis, nefritis, esteatorrea y pancreatitis.
Por otra parte, una variacin en el contenido proteico del plasma,
tambien puede derivar en cambios en la concentracin de
Calcio, aumentando en algunos casos de mieloma. Tambin
parece existir una interrelacin recproca entre los niveles de
Calcio y Fsforo.
Se han utilizado una variedad de mtodos colorimtricos para la
determinacin de Calcio. El mtodo VALTEK utiliza
cresolftalena complexona segn Moorehead y Briggs. La CFC
reacciona con el Calcio y Magnesio en medio alcalino fuerte,
formndose un complejo coloreado. La interferencia del
Magnesio es eliminada con la adicin de 8-Hidroxiquinolina.
La intensidad del color prpura formado, es directamente
proporcional a la concentracin de Calcio presente en la
muestra, y se mide a 570 nm. (rango 540 a 600 nm.).
REACTIVOS
Conservados a temperatura ambiente y protegidos de la luz,
estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
-Buffer Alcalino:
2-Amino-2-Metil-1-Propanol 350 mM
Cianuro de Potasio 2 mM
Estabilizantes e ingredientes no reactivos c.s.
-Reactivo CFC:
o-Cresolftalena complexona 0.05 mM
8-Hidroxiquinolina 5 mM
-Solucin Standard:
Carbonato de Calcio en HCl diludo 10 mg/dl
Preparacin del Reactivo de Trabajo:
Mezclar 1 ml. de Buffer Alcalino con 1 gota (50 ul) de Reactivo
CFC. Estabilidad del reactivo de trabajo: 7 das a temperatura
ambiente. Para mayores volmenes, preparar manteniendo la
proporcin de los componentes.
MUESTRA
Utilizar suero o plasma heparinizado. El uso de otros
anticoagulantes puede interferir con el ensayo. Obtener la
muestra evitando estasis venosa. El uso de torniquetes puede
arrojar resultados ms elevados. De preferencia el paciente
debe encontrarse en ayunas.
En el caso de utilizar orinas, utilizar muestra de 24 horas
colectada en un contenedor acidificado con 15 ml. de cido
clorhdrico concentrado, con el objeto de evitar la precipitacin
de sales de Calcio. Dilur previamente 1:2 con agua desionizada.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de leer
absorbancias a 570 nm. (rango 540 a 600 nm.), timer y pipetas.
TECNICA
TECNICA CON BLANCO TUBO
Standard Muestra
Reactivo de Trabajo (ml) 1.00 1.00
Mezclar y leer para cada tubo las absorbancias A1 contra
blanco de agua.
Standard (ml) 0.01 ---
Muestra (ml) --- 0.01
Mezclar e incubar a lo menos 60 segundos y leer para cada
tubo las absorbancias A2 contra blanco de agua.
CALCULOS
FACTOR= 10
(A2 Standard - A1 Standard)
Calcio (mg/dl)= FACTOR x (A2 Muestra - A1 Muestra)
TECNICA SIN BLANCO TUBO
Standard (ml) --- 0.01 ---
Muestra (ml) --- --- 0.01
Reactivo de Trabajo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar a lo menos 60 segundos y leer las
absorbancias contra blanco de reactivos.
CALCULOS
FACTOR= 10
Calcio (mg/dl)= FACTOR x Absorbancia Muestra
En el caso de las muestras de orina, multiplicar el resultado por
el factor de dilucin. Si la muestra es de 24 horas multiplicar
adems por el volumen total expresado en litros y luego por 10.
OBSERVACIONES
El color resultante es estable por a lo menos 1 hora.
La reaccin es lineal hasta 20 mg/dl.
En caso que la concentracin sea superior a los 20 mg/dl,
repetir el ensayo diluyendo la muestra 1:2 con suero fisiolgico
(NaCl 0.9 g/dl). El resultado se multiplica por 2.
En caso de muestras muy lipmicas, efectuar un blanco
muestra con 3 ml. de suero fisiolgico y 0.05 ml. de la muestra.
Leer contra blanco de agua, y restar la absorbancia obtenida
para este blanco a la obtenida en la reaccin. Calcular de
acuerdo a lo indicado.
El material de vidrio utilizado (pipetas-tubos) debe estar LIBRE
de calcio para garantizar un resultado fidedigno. Es
recomendable lavar el material a utilizar en esta tcnica, con la
solucin IONSTOP-C de VALTEK, para eliminar las trazas de
este catin, y posteriormente enjuagar exaustivamente con
agua desionizada libre de calcio.
Este reactivo CONTIENE CIANURO, por lo tanto se
recomienda manipular con precaucin.
NO MEZCLAR CON ACIDOS.
Eliminar junto a grandes volmenes de agua.
Los volmenes indicados pueden ser modificados
proporcionalmente, sin alterar los resultados.
En caso de no poder garantizar el grado de limpieza de su
material de trabajo, le recomendamos el realizar la tcnica
CON BLANCO TUBO, la cual permite descartar la eventual
contaminacin con calcio presente en su material.
Suero o plasma:
Adulto : 8.8 a 10.7 mg/dl
Nio (*) : 10.0 a 12.0 mg/dl
(*) El rango de referencia para los nios es levemente ms
elevado que el de los adultos, y decrece lentamente con el
crecimiento.
Orina : 50 a 400 mg/24 h.
BIBLIOGRAFIA
1.Connerty H.V.& Briggs A.R., Clin Chem 11(716),1965.
2.Connerty H.V.& Briggs A.R., Am J Clin Path 45(290),1966.
3.Moorehead W.R. & Briggs A.R., Clin Chem 20(1458), 1974.
4.Young D.S. et al., Clin Chem 21(272), 1975.
5.Friedman R.B. et al., Clin Chem 26(61), 1980.
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CLORO - COLOR
Reactivo para la determinacin colorimtrica de Cloruro en suero, plasma,
y otros fludos biolgicos.
El anin cloruro (Cl-).es el ms importante en la mantencin
del balance ionico entre los lquidos intra y extra celulares,
siendo por lo tanto un electrolito fundamental para el control
de una hidratacin adecuada. Se encuentran valores bajos
en casos de vmitos abundantes, obstruccin intestinal,
nefritis, acidosis metablica, etc; y valores elevados en casos
de deshidratacin, hiperventilacin, y algunos casos de
obstruccin del tracto urinario, entre otros.
El cloruro en presencia de tiocianato mercrico no disociado,
se combina con el mercurio, generndose cloruro mercrico.
Hg(SCN)2 + 2Cl- > HgCl2 + 2SCN-
El tiocianato liberado se combina con los iones frricos
presentes en el reactivo, formndose un compuesto
altamente coloreado que absorbe a 480 nm.
3SCN- + Fe
3+
> Fe(SCN)3
La intensidad del color obtenido, es directamente
proporcional a la concentracin de cloruro en la muestra.
REACTIVOS
Reactivo color:
Tiocianato de Mercurio 1.50 mM
Nitrato Mercrico 0.58 mM
Cloruro Mercrico 7.4 mM
Nitrato Frrico 30 mM
Ingredientes no reactivos y estabilizantes
en cido diludo y metanol c.s.
Solucin Standard:
Cloruro de sodio 100 mEq/L
MUESTRAS
La muestra a utilizar puede ser tanto suero , plasma, orina y
otros fludos biolgicos. El cloruro es estable por una
semana refrigerado, y seis meses en congelador.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 480 nm. (rango 460 a 550 nm.), timer y
pipetas.
TECNICA
Muestra (ml) --- --- 0.01
Standard (ml) --- 0.01 ---
Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 5 minutos a temperatura ambiente (sobre
20 C). Leer las absorbancias a 480 nm. (rango 460 a 550
nm.).
CALCULOS
FACTOR= 100
Cloruros (mEq/L)= FACTOR x Absorbancia Desconocido
OBSERVACIONES
El color resultante es estable por a lo menos 1 hora.
La reaccin es lineal entre 80 y 120 mEq/L.
En caso que la concentracin sea superior a los 120
mEq/L, repetir el ensayo diluyendo la muestra 1:2 con
agua desionizada. El resultado se multiplica por 2.
Este reactivo CONTIENE MERCURIO, por lo tanto se
recomienda manipular con precaucin.
El material de vidrio utilizado (pipetas-tubos) debe estar
LIBRE de cloruros para garantizar un resultado
fidedigno. Es recomendable lavar el material a utilizar
en esta tcnica, con la solucin IONSTOP-C de
VALTEK, para eliminar las trazas de este anin, y
posteriormente enjuagar exaustivamente con agua
desionizada.
Suero o plasma 96 - 112 mEq/L
Orina 110 - 250 mEq/24 h.
L.C.R. 114 - 131 mEq/L
BIBLIOGRAFIA
1. Schales, O. & Schales, S.S., J. Biol. Chem., 140 (879),
1941.
2. Zall D.M., Fisher D., & Garner D.O., Anal Chem.,
28(1665), 1956.
3. Schales, O., Stand. Meth. Clin. Chem., 1 (37), 1957.
Technics.Harper and Row Publishers. New York, 1964.
5. Young D.S., et al, Clin Chem., 21(227), 1975
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COLESTEROL CHOD-PAP
Reactivo enzimtico para la determinacin de Colesterol Total en suero o plasma.
El colesterol se encuentra presente en la sangre, bilis y tejido
cerebral. Es precursor de los cidos biliares, esteroides, y
vitamina D. Su determinacin contribuye al diagnstico y
clasificacin de las dislipidemias.
El colesterol se determina por accin de las enzimas
Colesterol ester hidrolasa y Colesterol oxidasa. La primera
libera el colesterol de los steres de colesterol, y la segunda
oxida el colesterol libre producindose perxido de
hidrgeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa
reacciona con el sistema cromognico dando origen a un
compuesto coloreado que absorbe a 505 nm.
Colesterol ester CEH > Colesterol + cidos grasos
Colesterol + O2 CHOD > Colest-4-en-3-ona + H2O2
2H2O2 + 4-AAP +p-HBA PAP > Comp. Coloreado + 4H2O
REACTIVOS
Conservado entre 2 y 8 C. y protegido de la luz , estable
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Estabilidad de la solucin reconstituda: 10 das a
temperatura ambiente y protegido de la luz; 60 das entre 2
y 8C.
El reactivo reconstitudo con el tiempo puede tomar un leve
color rosado que no afecta los resultados. Descartar el
reactivo si la absorbancia contra blanco de agua es superior
a 0.4 D.O. a 505 nm.
Composin del reactivo:
(Concentraciones al reconstituir)
Buffer fosfato 90 mM
Colesterol ester hidrolasa !150 U/L
Colesterol oxidasa !100 U/L
Peroxidasa !1000 U/L
Acido p-hidroxibenzoico 10 mM
Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.
Solucin standard:
Colesterol en solucin acuosa estabilizada 200 mg/dl
MUESTRAS
Utilizar de preferencia suero o plasma (Heparina o EDTA)
libre de hemlisis. La muestra debe tomarse con el paciente
en ayunas. Los tubos y material de vidrio deben estar lmpios
y libres de residuos de detergentes. El colesterol es estable 7
das a temperatura ambiente, y 6 meses en congelador.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 505 nm. (rango 500 - 550 nm.), bao
termoregulado, timer y pipetas
TECNICA
ensayo.
Muestra (ml) -- -- 0.01
Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 10 minutos a 37C. o 20 minutos a
reactivo. El color resultante es estable por a lo menos treinta
minutos.
CALCULOS
FACTOR= 200 .
Colesterol (mg%) = Factor x Absorbancia desconocido
La reaccin es lineal hasta 600 mg%. Para valores
superiores, dilur la muestra con suero fisiolgico y el
RANGO DE REFERENCIA: 140 a 250 mg%
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz N. (ed), Fundamentals of Clinical Chemistry,
W.B. Sauders Co. Philadelphia, 1976.
2. Watson, D., Clin. Chem. Acta 5 (637), 1960.
3. Trinder, P., Ann Clin. Biochem. 6 (24), 1969.
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COLESTEROL TOTAL - LS
Reactivo lquido para la determinacin enzimtica de Colesterol Total en suero o plasma.
vitamina D. Su determinacin contribuye al diagnstico y
clasificacin de las dislipidemias.
El colesterol se determina por accin de las enzimas
Colesterol ester hidrolasa y Colesterol oxidasa. La primera
REACTIVOS
El reactivo con el tiempo puede tomar un leve color rosado
que no afecta los resultados.
Descartar el reactivo si la absorbancia contra blanco de
agua es superior a 0.4 D.O. a 505 nm.
Preparacin: El reactivo se provee listo para su uso.
Composin del reactivo enzimtico:
Colesterol ester hidrolasa !150 U/L
Colesterol oxidasa (recombinante) !100 U/L
Acido p-hidroxibenzoico 10 mM
Solucin standard:
Colesterol en solucin acuosa estabilizada 200 mg/dl
MUESTRAS
en ayunas.
Los tubos y material de vidrio deben estar lmpios y libres de
residuos de detergentes. El colesterol es estable 7 das a
temperatura ambiente, y 6 meses en congelador.
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
Muestra (ml) -- -- 0.01
Reac. enzimtico (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C. 10 minutos a
temperatura ambiente (!20C.). Leer las absorbancias
minutos.
CALCULOS
FACTOR= 200
Colesterol (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra
resultado obtenido se multiplica por el factor de dilucin.
En el caso de sueros muy hiperlipmicos, deber hacerse un
RANGO DE REFERENCIA
140 a 250 mg/dl
BIBLIOGRAFIA
2.Watson, D., Clin. Chem. Acta 5 (637), 1960.
3.Trinder, P., Ann Clin. Biochem. 6 (24), 1969.
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COLESTEROL - HDL
Reactivo complementario al Colesterol VALTEK para la determinacin de
Colesterol HDL en suero.
vitamina D. El colesterol es transportado por tres
lipoprotenas, la lipoprotena de alta densidad (HDL), la de
baja densidad (LDL), y la de muy baja densidad (VLDL).
Castelli y colaboradores han reportado que hay una estrecha
relacin entre los niveles de HDL-Colesterol y el riesgo de
enfermedad coronaria. La evaluacin de los niveles de HDL-
Colesterol y Triglicridos provee una valiosa herramienta
para la prediccin de enfermedad coronaria, y la clasificacin
de las dislipidemias.
El HDL-Colesterol es obtenido precipitando selectivamente
las lipoprotenas LDL y VLDL, quedando el prrimero en
solucin.
El HDL-Colesterol en solucin se determina por accin de
las enzimas Colesterol ester hidrolasa y Colesterol oxidasa.
La primera libera el colesterol de los steres de colesterol, y
la segunda oxida el colesterol libre producindose perxido
de hidrgeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa
REACTIVOS
Estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
de cada frasco.
Acido fosfotngstico 0,55 mM
Cloruro de Magnesio 25 mM
NOTA: Debe complementarse el uso del reactivo precipitante
con el reactivo para la determinacin enzimtica de
colesterol VALTEK.
MUESTRAS
Utilizar suero libre de hemlisis. La muestra debe tomarse
con el paciente en ayunas. Los tubos y material de vidrio
deben estar lmpios y libres de residuos de detergentes. El
colesterol es estable 7 das a temperatura ambiente, y 6
meses en congelador.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 505 nm. (rango 500 - 550 nm.), centrfuga,
bao termoregulado, timer y pipetas
TECNICA
Precipitacin: Agregar en un tubo de centrfuga 0.5 ml de
reactivo precipitante y 0.2 ml. de muestra, mezclar y esperar
15 minutos a temperatura ambiente. Centrifugar 15 minutos
a 3000 r.p.m. o 3 minutos a 10.000 r.p.m.
Colorimetra: Llevar el reactivo Colesterol CHOD-PAP a la
temperatura que se realizar el ensayo.
Sobrenadante (ml) -- -- 0.10
Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00
minutos.
CALCULOS
FACTOR = 76,5 .
HDL-Colesterol(mg%)=Factor x Absorbancia desconocido
CALCULO DEL COLESTEROL LDL
LDL-C (mg/dl)= C.Tot.(mg/dl) - HDL (mg/dl) - Trig. (mg/dl)
5
OBSERVACIONES
Despues de centrifugar, el sobrenadante debe ser claro.
Sueros con concentraciones de triglicridos superior a
1000 mg/dl deben diluirse con suero fisiolgico antes de
precipitar. El resultado obtenido se multiplica por el
factor de dilucin.
La formula para el calculo del LDL-Colesterol es vlida
slo en muestras con concentraciones de triglicridos
inferior a 1000 mg/dl.
Bajo riesgo Riesgo standard Alto riesgo
HOMBRES >55 mg/dl 35 - 65 mg/dl <35 mg/dl
MUJERES >65 mg/dl 45 - 65 mg/dl <45 mg/dl
BIBLIOGRAFIA
4. Castelli, W.P., et al., Circ. 55 (767) 1977.
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COLESTEROL - LDL
Reactivo complementario al Colesterol CHOD-PAP VALTEK para la determinacin
de Colesterol LDL en suero.
vitamina D. El colesterol es transportado por tres
lipoprotenas, la lipoprotena de alta densidad (HDL), la de
baja densidad (LDL), y la de muy baja densidad (VLDL).
Castelli y colaboradores han reportado que hay una estrecha
relacin entre los niveles de LDL-Colesterol y el riesgo de
enfermedad coronaria. La evaluacin de los niveles de LDL-
Colesterol provee una valiosa herramienta para la prediccin
de enfermedad coronaria, y la clasificacin de las
dislipidemias.
El LDL-Colesterol es obtenido precipitandolo selectivamente
mediante el uso de heparina, en una solucin con el punto
isoelctrico adecuado, quedando en solucin los colesteroles
HDL y VLDL. El LDL-Colesterol precipitado se determina
obteniendo el diferencial entre el Colesterol Total y los
colesteroles HDL y VLDL que permanecen en solucin por
accin de las enzimas Colesterol ester hidrolasa y Colesterol
oxidasa que actan sobre estos ultimos. La primera enzima
Colesterol ester CEH Colesterol + cidos grasos
Colesterol + O2 CHOD Colest-4-en-3-ona + H2O2
2H2O2 + 4-AAP +p-HBA PAP Comp. Coloreado + 4H2O
REACTIVOS
Estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
de cada frasco. Conservar entre 2 y 8 C.
Citrato de sodio 60 mM
Heparina 100.000 U/L
NOTA: Debe complementarse el uso del reactivo precipitante
con el reactivo para la determinacin enzimtica de
colesterol VALTEK.
MUESTRAS
Utilizar suero libre de hemlisis. La muestra debe tomarse
con el paciente en ayunas. Los tubos y material de vidrio
deben estar lmpios y libres de residuos de detergentes. El
colesterol es estable 7 das a temperatura ambiente, y 6
meses en congelador.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 505 nm. (rango 500 - 550 nm.), centrfuga,
bao termoregulado, timer y pipetas
TECNICA
Precipitacin: Agregar en un tubo de centrfuga 1 ml de
reactivo precipitante y 0,1 ml. de muestra, mezclar y esperar
10 minutos a temperatura ambiente (15 a 25C.).
Centrifugar 15 minutos a 3500 r.p.m. Extraer el sobrenadante
dentro de los 10 minutos posteriores a la precipitacin.
Colorimetra: Llevar el reactivo Colesterol CHOD-PAP a la
temperatura que se realizar el ensayo.
Sobrenadante (ml) -- -- 0.10
Reactivo CHOD-PAP (ml) 1.00 1.00 1.00
minutos.
CALCULOS
FACTOR = 240 .
Colesterol sobrenadante(mg%)=Factor x Abs. desconocido
Colesterol LDL (mg%)=Colest. Total-Colest. sobrenadante
OBSERVACIONES: La tcnica descrita es lineal hasta 500
mg%
Bajo riesgo < 150 mg%
Sospechoso 150-195 mg%
Alto Riesgo > 195 mg%
BIBLIOGRAFIA
4. Castelli, W.P., et al., Circ. 55 (767) 1977.
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CREATININA CINETICA
Reactivo para la determinacin de Creatinina en suero, plasma y orina.
La Creatinina es un producto de desecho que se forma en el
msculo por la degradacin de la fosfo-creatina, en cantidad
proporcional a la masa y funcin muscular. La Creatinina es
eliminada del organismo por va renal, siendo retirada del
plasma por filtracin glomerular. Su medicin es til en el
diagnstico de diversas nefropatas, y su control permanente
es de gran utilidad en aquellos pacientes que requieren de
dialisis.
La Creatinina, en presencia de picrato alcalino produce un
color anaranjado (reaccin de Jaff), que se mide a 510 nm.
La velocidad con que el cromgeno se forma es
directamente proporcional a la cantidad de creatinina
presente en la muestra. La velocidad se determina leyendo
las absorbancias para cada tubo, en dos tiempos distintos, y
calculando la diferencia "Abs/min.
REACTIVOS
Los reactivos se proveen listos para su uso. Conservados a
temperatura ambiente y protegidos de la luz y calor excesivo,
son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las
etiquetas.
-Buffer Alcalino:
Buffer NaOH/Bicarbonato 800 mM
-Reactivo Pcrico:
Ac. Pcrico 20 mM.
-Solucin Standard:
Creatinina 1,50 mg%
Estabilizantes no reactivos c.s.
Preparacin: Mezclar partes iguales de Buffer Alcalino y
Acido Pcrico, preparar la cantidad requerida para el nmero
de determinaciones a realizar. Estabilidad de la solucin de
trabajo: 1 semana entre 2 y 8C.
MUESTRAS
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis o plasma
heparinizado. La Creatinina es estable 2 das a temperatura
ambiente y una semana entre 2 y 8C.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de leer a
510 nm. (rango 500-520 nm.), con temperatura regulable,
pipetas y timer.
TECNICA CINETICA
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (30 o 37 C.)
antes de realizar el ensayo.
Reactivo (ml) 1.00
Muestra o Standard (ml) 0.10
Mezclar y poner en la celda de lectura. A los 20 segundos
exactos leer absorbancia inicial (A1). Esperar 60 segundos
exactos y leer absorbancia final (A2).
CALCULOS
Determinar el "A /min restando a la absorbancia final (A2)
la absorbancia inicial (A1).
Creatinina (mg%) = "A/min muestra x 1.50
"A/min standard
CALCULO DEL CLEARENCE DE CREATININA
Clearence= Crea. en orina (mg%) x Vol. orina 24 H. (ml)
Creatinina en suero (mg%) x 1440
OBSERVACIONES
Para orinas se recomienda diluir la muestra 1:10 con
agua destilada. El resultado se multiplica por 10.
La tcnica de punto final es lineal hasta 5 mg%, y la
cintica hasta 20 mg%. En ambos casos, si el valor
resultara ser mayor, repetir el ensayo diluyendo la
muestra con agua destilada .
Es fundamental mantener constante la temperatura
durante el ensayo cintico, ya que la reaccin es muy
sensible a los cambios de temperatura.
Hombres : 0.7 - 1.4 mg%
Mujeres : 0.6 - 1.2 mg%
BIBLIOGRAFIA
1. Jaff, M. Zischr Physiol Chem . 10(391), 1886.
2. Henry, R.J. Ed., Clinical Chemistry: Principles and
Technics (2Ed). Harper and Row, 1974.
3. Young D.S., et al. Clin Chem.21(286), 1975.
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CREATININA - PUNTO FINAL
Reactivo para la determinacin de Creatinina en suero, plasma y orina.
La Creatinina es un producto de desecho que se forma en el
msculo por la degradacin de la fosfo-creatina, en cantidad
proporcional a la masa y funcin muscular. La Creatinina es
eliminada del organismo por va renal, siendo retirada del
plasma por filtracin glomerular. Su medicin es til en el
diagnstico de diversas nefropatas, y su control permanente
es de gran utilidad en aquellos pacientes que requieren de
dialisis.
La Creatinina, en presencia de picrato alcalino produce un
color anaranjado (reaccin de Jaff), que se mide a 510 nm.,
en cantidad proporcional a su concentracin en la muestra.
REACTIVOS
Buffer Alcalino: 50 ml. de Buffer alcalino, estable a
temperatura ambiente.
Acido Pcrico: 250 ml. de Ac. Pcrico saturado , estable a
temperatura ambiente.
Solucin Standard: Solucin de creatinina estandarizada y
estabilizada, estable a temperatura ambiente.
MUESTRAS
heparinizado. La Creatinina es estable 2 das a temperatura
ambiente y una semana entre 2 y 8C.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de leer a
510 nm. (rango 500-520 nm.), con temperatura regulable,
pipetas y timer.
TECNICA PARA SUERO
Desproteiniacin: A 0.30 ml. de suero agregar 1.50 ml. de
reactivo pcrico. Mezclar vigorosamente, dejar reposar 10
minutos y centrifugar a 3000 r.p.m. por a lo menos 5 minutos.
Desproteinizado (ml) --- --- 1.20
Standard (ml) --- 0.20 ---
Agua (ml) 0.40 0.20 ---
R.Pcrico (ml) 0.80 0.80 ---
Buffer Alcalino (ml) 0.20 0.20 0.20
Mezclar e incubar 20 minutos a temperatura ambiente (20 a
25C.). Leer las absorbancias a 510 nm. (rango 500 - 540
nm.), llevando a cero el instrumento con el blanco reactivo.
TECNICA PARA ORINAS
Dilur las orinas 1:10 con agua destilada.
Orina diluda (ml) --- --- 0.02
Standard (ml) --- 0.20 ---
Agua (ml) 0.40 0.20 0.40
R.Pcrico (ml) 0.80 0.80 0.80
Buffer Alcalino (ml) 0.20 0.20 0.20
25C.). Leer las absorbancias a 510 nm. (rango 500 - 540
CALCULOS
Creatinina en suero (mg%) = Abs. muestra x 1.50
Abs. standard
Creatinina en orina (mg%) = Abs. muestra x 150
Abs. standard
Cr. orina(mg/24 h) = Cr.orina(mg%) X Vol. 24 h (L) X 10
CALCULO DEL CLEARENCE DE CREATININA
Clearence (ml/min) = Cr. orina (mg%) x V orina 24 H (ml)
Creatinina en suero (mg%) x 1440
OBSERVACIONES
La tcnica de punto final es lineal hasta 5 mg%, si el
valor resultara ser mayor, repetir el ensayo diluyendo la
muestra con agua destilada .
SUERO ORINA
Hombres : 0.7 - 1.4 mg% 1.3 - 2.6 g/24 h.
Mujeres : 0. 6 - 1.2 mg% 0.9 - 1.8 g/24 h.
Clearence: 80 - 160 ml/min
BIBLIOGRAFIA
1. Jaff, M. Zischr Physiol Chem . 10(391), 1886.
2. Henry, R.J. Ed., Clinical Chemistry: Principles and
Technics (2Ed). Harper and Row, 1974.
3. Young D.S., et al. Clin Chem.21(286), 1975.
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FERREMIA - TIBC
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de Hierro y
Capacidad de Fijacin de Hierro en suero (TIBC).
El contenido de hierro en el cuerpo humano se encuentra
distribudo en tres formas: el almacenado, que se encuentra
dentro de las clulas; el hierro en uso, que se encuentra en
la hemoglobina, enzimas y varios tipos de protenas; y el
circulante. Practicamente todo el Hierro corporal se
encuentra unido a protena, dado que no slo es
relativamente insoluble, sino que adems es txico.
La evaluacin de la concentracin de hierro srico es de
gran utilidad, dado que un aumento en sus niveles se
encuentra asociado a diversas patologas tales como
destruccin aumentada de los glbulos rojos, defectos en el
mecanismo de almacenaje, etc. De la misma manera, su
disminucin se asocia entre otras patologas a problemas de
absorcin y almacenaje, etc. La capacidad de fijacin de
hierro (TIBC) aumenta en casos de anemias ferroprivas, y
disminuye en la hemocromatosis, tumores, fiebre reumtica,
etc.
El hierro srico se determina disociando el Fe(III) unido a
protenas mediante un buffer cido que contiene como
reductor clorhidrato de hidroxilamina. El Fe(II) producto de
esta etapa reacciona con el agente cromognico generando
un complejo coloreado que se mide fotometricamente a 560
nm.
La capacidad de fijacin de hierro (TIBC) se obtiene
matemticamente como producto de la suma entre el valor
del hierro srico y la cantidad de hierro absorvido (UIBC) en
un medio alcalino al saturar la reaccin con una cantidad de
Fe(II) conocida.
REACTIVOS
caducidad indicada en las etiquetas. Composicin de los
reactivos:
BUFFER ACIDO
Buffer acetato pH 4.0 200 mM
Hidroxilamina clorhidrato 100 mM
Surfactantes y estabilizantes c.s.
BUFER ALCALINO
Buffer Tris pH 8.0 200 mM
REACTIVO COLOR
Ferrozina 5 mM
Hidroxilamina clorhidrato 100 mM
SOLUCION STANDARD
Fe(II) en hidroxilamina clorhidrato 500 g%
MUESTRA
De preferencia utilizar suero fresco, libre de hemlisis o
plasma heparinizado. No se recomienda el uso de otros
anticoagulantes, dado que pueden incrementar falsamente
los valores de la ferremia. El hierro srico es estable por
cuatro das a temperatura ambiente y ocho das entre 2 y
8*C.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro manual o automtico, fotocolorimetro de
filtros, capz de leer absorbancias a 560 nm. ( rango 540 -
570 nm.), bao termorregulado, timer y pipetas.
TECNICA PARA FERREMIAS:
SIN BLANCO MUESTRA
TUBO Blanco Standard Muestra
Buffer Acido (ml) 2,50 2,50 2,50
Agua destilada (ml) 0,50 ---- ----
Standard (ml) ---- 0,50 ----
Muestra (ml) ---- ---- 0,50
Mezclar y leer las absorbancias (A1) contra el blanco
reactivo a 560 nm.
Reactivo Color (ml) 0,05 0,05 0,05
Mezclar e incubar a 37C. por 10 minutos. Leer las
absorbancias (A2) contra el blanco reactivo a 560 nm.
CALCULOS
Ferremia (g%)= A2 muestra - A1 muestra x 500
A2 standard - A1 standard
CON BLANCO MUESTRA
TUBO Bl.React Stand. Bl.Mues Muestra
Buffer Acido (ml) 2,50 2,50 2,50 2,50
Agua destilada (ml) 0,50 ---- ---- ----
Standard (ml) ---- 0,50 ---- ----
Muestra (ml) ---- ---- 0,50 0,50
Reactivo Color (ml) 0,05 0,05 ---- 0,05
absorbancias contra el blanco reactivo a 560 nm.
CALCULOS
Ferremia (g%)= Abs. Muestra - Abs. Bl.Muestra x 500
Abs. Standard - Abs . Bl.Reactivo
TECNICA PARA TIBC:
SIN BLANCO MUESTRA
Buffer Alcalino (ml) 2,00 2,00 2,00
Agua destilada (ml) 1,00 0,50 ----
Muestra (ml) ---- ---- 0,50
Standard (ml) ---- 0,50 0,50
Mezclar y leer las absorbancias (A1) contra el blanco
reactivo a 560 nm.
Reactivo Color (ml) 0,05 0,05 0,05
absorbancias (A2) contra el blanco reactivo a 560 nm.
CALCULOS
UIBC (g%)= 500 - A2 muestra - A1 muestra x 500
A2 standard - A1 standard
TIBC (g%)= Ferremia (g%) + UIBC (g%)
% Saturacin = Ferremia (g%)
TIBC (g%)
CON BLANCO MUESTRA
TUBO Bl.React Stand. Bl.Mues Muestra
Buffer Alcalino (ml) 2,00 2,00 2,00 2,00
Agua destilada (ml) 1,00 0,50 ---- ----
Muestra (ml) ---- ---- 0,50 0,50
Standard (ml) ---- 0,50 0,50 0,50
Reactivo Color (ml) 0,05 0,05 ---- 0,05
absorbancias contra el blanco reactivo a 560 nm.
CALCULOS
UIBC(g%) = 500 - Abs.muestra - Abs.Bl.muestra x 500
Abs. standard - Abs. Bl. reactivo
TIBC (g%)= Ferremia (g%) + UIBC (g%)
% Saturacin = Ferremia (g%)
TIBC (g%)
OBSERVACIONES
Los volmenes de muestra y reactivos puden ser
variados proporcionalmente sin que se alteren los
resultados.
Esta tcnica es lineal hasta 500 g%. Para
concentraciones superiores, diluir la muestra 1:2 con
suero fisiolgico. El resultado obtenido se multiplica por
dos.
En la determinacin de TIBC de aquellas muestra con
elevada insaturacin, la diferencia de absorbancias
puede ser muy pequea, en tal caso repetir el ensayo
con la muestra diluda 1:2 con suero fisiolgico y
multiplicar el resultado obtenido por dos.
IMPORTANTE: Todo el material a utilizar debe estar
libre de hierro, se sugiere lavarlo con una solucin de
cido clorhdrico diludo 1:3 y enjuagar exaustivamente
con agua destilada o desionizada antes de utilizarlo.
Ferremia:
Recien nacido 100-250 g%
Nios 50-120 g%
Adultos
Hombres 50 - 160 g%
Mujeres 40 - 150 g%
TIBC:
Hasta 6 aos 100-400 g%
Sobre 6 aos 250 - 400 g%
% Saturacin: 20 - 55 %
NOTA: Los valores de la ferremia y TIBC varan en los recien
nacidos y nios, stos deben ser establecidos en cada
laboratorio.
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N.W. (ed), Fundamentals of Clinical chemistry
W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1976.
2. Young, D.S., et al., Clin Chem 21(10), 1975.
3. Persijn, J.P., et al, Clin Chem Acta 35(91), 1971.
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FOSFORO - UV
Mtodo UV directo para la determinacin de Fsforo Inorgnico en suero, plasma u orina.
Ms del 80% de fsforo corporal se encuentra en los huesos
como fosfato de calcio. La porcin restante se encuentra en el
intracelular como fosfatos orgnico en el extracelular como
fsforo inorgnico.
Hay una relacin recproca entre los niveles plasmticos de
Calcio y Fsforo. Una elevacin en dichos niveles se observa en
casos de enfermedad renal, hipoparatiroidismo, entre otros. La
disminucin se observa por ejemplo, en casos de
hiperparatiroidismo y coma diabtico.
La mayora de los mtodos para la determinacin de fsforo
inorgnico se basan en la formacin de fosfomolibdato de
amonio, y en su posterior reduccin a azul de molibdeno.
El mtodo Valtek, se basa en la proposicin de Daly y
Ertingshausen y la modificacin de Wang. La formacin del
complejo fosfomolbdico no reducido se mide a 340 nm., y la
absorbancia obtenida es directamente proporcional a la
concentracin de fsforo inorgnico presente en la muestra.
Para la lectura bicromtica, se recomienda utilizar como
segunda longitud de onda 376 nm.
REACTIVOS
Descartar el reactivo en caso de observar una coloracin
verdosa, o si la absorbancia a 340 nm. es superior a 0.600.
Composicin del reactivo:
Molibdato de amonio 2.0 mM
Acido sulfrico 350 mM
Cloruro de Sodio 150 mM
Estabilizantes y agentes tensioactivos c.s.
Solucin Standard:
Fosfato de Calcio en HCl diludo 5 mg/dl
MUESTRA
Utilizar suero o plasma libre de hemlisis. No utilizar
anticoagulantes con fluoruro puesto que se obtienen valores
falsamente bajos. El fsforo inorgnico es estable por una
semana a temperatura ambiente, y a lo menos 6 meses
congelado.
Para el anlisis de la fosfaturia, se recomienda trabajar con
muestras de orina de 24 horas, colectadas en un receptculo
provisto con 15 ml. de HCl concentrado. En caso de muestras no
acidificadas, es conveniente su acidificacin y/o calentamiento a
56 C. por 15 minutos para la redisolucin de los fosfatos
precipitados. (La muestra acidificada no es utilizable para la
determinacin de uratos y creatinina). La muestra de orina se
debe dilur 1:20 con agua destilada
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 340 nm. , timer y pipetas.
TECNICA SIN BLANCO MUESTRA
Muestra (ml) --- --- 0.02
Standard (ml) --- 0.02 ---
Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (sobre 20
C). Leer las absorbancias a 340 nm.
CALCULOS
FACTOR= 5
Fsforo (mg/dl)= FACTOR x Absorbancia Desconocido
TECNICA CON BLANCO MUESTRA
En el caso de no contar un equipo capaz de realizar lecturas
bicromticas, es altamente recomendable el realizar un blanco
para cada muestra, con el objeto de eliminar la interferencia del
color de ella. Para tal efecto, utilizar como reactivo
complementario una solucin de NaCl al 0.9 %.
Blanco Standard Blanco Desc. Desconocido
Muestra (ml) --- --- 0.02 0.02
Standard (ml) --- 0.02 --- ---
Reactivo (ml) 1.00 1.00 --- 1.00
NaCl 9% (ml) --- --- 1.00 ---
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (sobre 20
C). Leer las absorbancias a 340 nm.
CALCULOS
FACTOR= 5
Fsforo (mg/dl)= FACTOR x (Abs.Desc.- Abs.Blanco Desc.)
OBSERVACIONES
La reaccin es lineal hasta 12 mg/dl
Sueros lipmicos, hemolticos o ictricos entregan valores
falsamente elevados, salvo que se utilice la tcnica con
blanco muestra.
Adulto: 2.5 a 4.5 mg/dl Nio: 3.0 a 6.0 mg/dl
BIBLIOGRAFIA
1.Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2 Ed., W.B.
Saunders & Co., Philadelphia (1976)
2.Wang J. & Osaki S., Clin Chem 29(1255), 1983.
3.Young, R.B., et al., Clin Chem 21(342), 1975.
4.Daly J.A. & Ertingshausen G., Clin Chem 18(263), 1972
5.Friedman R.B., et al., Clin Chem 26(195), 1980.
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GLUCOSA GOD-PAP
Reactivo nico para la determinacin enzimtica de Glucosa
en suero, plasma y otros fludos biolgicos.
La medicin de la Glucosa sanguinea es importante en el
diagnstico y tratamiento de la diabetes y otras patologas,
tales como hipoglicemia, problemas renales, etc.
La glucosa reacciona con el reactivo enzimtico que contiene
una mezcla de las enzimas Glucosa Oxidasa (GOD) y
Peroxidasa (POD). En la primera etapa la Glucosa es
oxidada a Ac. Glucnico por la accin de la enzima GOD,
liberndose como producto H2O2, el cual en una reaccin
mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac. p-
Hidroxibenzoico y 4-Aminoantipirina produciendose un
nm., en cantidad proporcional a la cantidad de Glucosa
D-Glucosa GOD > Acido D-Glucnico + H2O2
H2O2 + p-HBA + 4-AAP POD >H2O + Complejo Coloreado
REACTIVOS
reconstituda: 3 meses entre 2 y 8C. Descartar el reactivo
si su absorbancia contra blanco de agua a 505 nm. es
superior a 0.4 D.O.
Glucosa Oxidasa (Aspergilus Niger) !15 U/ml
Peroxidasa ! 2 U/ml
Acido p-Hidroxibenzoico 10 mM
Solucin Standard
D-Glucosa en Ac. Benzoico saturado 150 mg/dl
MUESTRAS
La muestra a utilizar puede ser tanto suero como plasma,
lquido cerebro espinal, orina y otros fludos biolgicos.
Separar el suero o plasma a la brevedad posible de las
clulas para evitar una disminucin de la glucosa debido a la
glicolisis. En caso de utilizar plasma, utilizar como
anticoagulante fluoruro de sodio que acta como inhibidor de
la glicolisis. La glucosa es estable en suero o plasma 5 horas
a 30C y 24 horas a 4C. Para perodos mas prolongados,
congelar a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
termoregulado, timer y pipetas.
TECNICA
ensayo.
Muestra (ml) -- -- 0.01
minutos.
CALCULOS
FACTOR = 150 .
Glucosa (mg%) = Factor x Absorbancia desconocido
OBSERVACIONES
La reaccin es lineal hasta 600 mg%.
factor de dilucin.
En el caso de sueros muy hiperlipmicos, deber
hacerse un blanco muestra con suero fisiolgico para
eliminar la posible interferencia por la turbidez del suero.
RANGO DE REFERENCIA
60 a 110 mg%
BIBLIOGRAFIA
3. Young D.S., et al., Clin Chem. 18(10) 1972.
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GLUCOSA - LS
Reactivo lquido para la determinacin enzimtica de Glucosa en suero,
diagnstico y tratamiento de la diabetes y otras patologas,
una mezcla de las enzimas Glucosa Oxidasa (GOD) y
Peroxidasa (POD). En la primera etapa la Glucosa es
oxidada a Ac. Glucnico por la accin de la enzima GOD,
liberndose como producto H2O2, el cual en una reaccin
mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac. p-
Hidroxibenzoico y 4-Aminoantipirina produciendose un
nm., en cantidad proporcional a la cantidad de Glucosa
D-Glucosa GOD > Acido D-Glucnico + H2O2
H2O2 + p-HBA + 4-AAP POD > H2O + Complejo Coloreado
REACTIVOS
caducidad indicada en la etiqueta. El reactivo con el tiempo
puede tomar un leve color rosado que no afecta los
resultados. Descartar el reactivo si su absorbancia contra
blanco de agua a 505 nm. es superior a 0.4 D.O.
Preparacin: El reactivo se provee listo para su uso.
Glucosa Oxidasa (Aspergilus Niger) !15000 U/l
Peroxidasa ! 2000 U/l
Acido p-Hidroxibenzoico 10 mM
Solucin Standard
D-Glucosa en Ac. Benzoico saturado 150 mg/dl
MUESTRAS
glicolisis.
En caso de utilizar plasma, utilizar como anticoagulante
fluoruro de sodio que acta como inhibidor de la glicolisis.
La glucosa es estable en suero o plasma 5 horas a 30C y
24 horas a 4C. Para perodos mas prolongados, congelar a
-20C.
EQUIPO REQUERIDO
termoregulado, timer y pipetas.
TECNICA
Muestra (ml) -- -- 0.01
Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 10 minutos a 37C. o temperatura
ambiente (!20C.). Leer las absorbancias llevando a cero el
CALCULOS
FACTOR= 150
Glucosa (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra
OBSERVACIONES
La reaccin es lineal hasta 600 mg/dl.
Para valores superiores, diluir la muestra con suero
factor de dilucin.
RANGO DE REFERENCIA
60 a 110 mg/dl
BIBLIOGRAFIA
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GLUCOSA HEXOQUINASA
Reactivo nico para la determinacin enzimtica de Glucosa en suero,
diagnostico y tratamiento de la diabetes y otras patologas,
una mezcla de las enzimas Hexoquinasa (HK) y Glucosa-6-
Fosfato-deshidrogenasa.En la primera etapa la Glucosa
reacciona con el ATP para formar Glucosa-6-fosfato y
ADP,.En presencia de NAD, la enzima glucosa-6-fosfato-
deshidrogenasa oxida la glucosa-6-fosfato a 6-
fosfogluconato., aumentando la concentracin de NADH en
cantidad proporcional a la cantidad de Glucosa presente en
la muestra.
D-Glucosa + ATP HK > G-6-P + ADP
G-6-P + NAD G6PDH > 6-fosfogluconato + NADH
REACTIVOS
reconstituda: 30 dasentre 2 y 8C. Descartar el reactivo si
su absorbancia a 340 nm. contra blanco de agua es mayor
que 0.300 D.O.
Glucosa Hexoquinasa !1U/ml
Glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa !1U/ml
ATP 1 nM
NAD 1 mM
Estabilizante y preservantes c.s.
Solucin Standard
D-Glucosa 150 mg/dl
MUESTRAS
glicolisis. En caso de utilizar plasma, utilizar como
anticoagulante fluoruro de sodio que acta como inhibidor de
la glicolisis. La glucosa es estable en suero o plasma 5 horas
a 30C y 24 horas a 4C. Para perodos mas prolongados,
congelar a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 340 nm, bao termoregulado, timer y pipetas.
TECNICA
ensayo.
Muestra (ml) -- -- 0.005
25C.), o 3 minutos a 37C. Leer las absorbancias llevando
a cero el espectrofotmetro con el blanco de reactivo.
CALCULOS
FACTOR = 150 .
Glucosa (mg%) = Factor x Absorbancia desconocido
OBSERVACIONES
La reaccin es lineal hasta 600 mg%.
factor de dilucin.
En caso de utilizar orina, esta se procesa igual que el
suero.
RANGO DE REFERENCIA
60 a 110 mg%
BIBLIOGRAFIA
1. Cooper, G.R., CRC Crit. Rev. Clin. Lab. Sci, 4(101),
1973.
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HEMOGLOBINA
Reactivo para la determinacin cuantitativa de Hemoglobina en la sangre.
La Hemoglobina es una protena conjugada normalmente
presente slo en los eritrocitos. Esta constituda por cuatro
grupos heme (porfirinas), unidos a una cadena polipeptdica.
Los grupos heme son capaces de ligar reversiblemente
oxgeno dixido de carbono. La Hemoglobina transporta el
oxgeno desde los pulmones a los diferentes tejidos
corporales, donde es utilizado en el metabolismo energtico,
y retira de ellos el dixido de carbono producido por dicho
metabolismo.
La cuantificacin de la Hemoglobina ya sea en sangre
venosa, arterial o capilar, es de utilidad para el diagnstico
de variadas patologas que alteran su concentracin, puesto
que su concentracin en la sangre es escencial para que el
transporte de los gases sea adecuado.
FUNDAMENTOS DEL METODO.
El reactivo de Hemoglobina VALTEK se basa en el mtodo
de la cianmetahemoglobina. Los eritrocitos son lisados por
accin de un agente tensioactivo presente en el reactivo,
liberando su contenido de Hemoglobina en la solucin.
La Hemoglobina liberada es oxidada a metahemoglobina por
el ferricianuro, siendo esta ltima convertida en
cianmetahemoglobina por la presencia de cianuro. La
absorbancia de la cianmetahemoglobina es medida a 540
nm., siendo la intensidad del color obtenida, directamente
proporcional a la concentracin de Hemoglobina en la
muestra.
REACTIVOS
Conservado en un lugar fresco y protegido de la luz, estable
Reactivo de Hemoglobina:
Ferricianuro de Potasio 0,6 mM
Cianuro de Potasio 0,7 mM
Sterox-SE 1 ml/L
Buffer y estabilizantes no reactivos c.s.
Standard Hemoglobina:
Metahemoglobina disuelta en reactivo de hemoglobina
equivalente a 18 g/dl de hemoglobina.
Descartar el reactivo si su coloracin es diferente al amarillo,
o en caso de aparicin de algn precipitado.
MUESTRA
Sangre total obtenida utilizando EDTA como anticoagulante.
Tambin se puede utilizar como anticoagulantes citrato,
oxalato o heparina. La muestra colectada con
anticoagulante, es estable por una semana a temperatura
ambiente.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 540 nm. (rango 520 a 560 nm.), timer y
pipetas.
TECNICA
Preparacin del reactivo de trabajo : Dilur el reactivo 1:10
con agua destilada antes de usar. La solucin standard se
provee lista para su uso, medir su absorbancia directamente
contra el blanco reactivo.
Blanco Desconocido
Muestra (ml) --- 0.01
20 C), o 10 minutos si la temperatura ambiental es muy
baja. Leer las absorbancias llevando a cero el equipo con el
blanco reactivo. El color obtenido es estable por a lo menos
1 hora.
CALCULOS
FACTOR= 18
Hemoglobina (g/dl)= FACTOR x Absorbancia Desconocido
OBSERVACIONES
El factor obtenido con la solucin standard provista con
el kit es vlida durante la vigencia de los reactivos. Se
recomienda incluir un control de calidad de valor
conocido.
Este reactivo CONTIENE CIANURO, manipular con
precaucin y en lo posible evitar utilizar la boca.
NO MEZCLAR CON ACIDOS.
Eliminar junto a grandes volmenes de agua.
La reaccin es lineal hasta 20 g/dl
Hombre: 14.0 a 18.0 g/dl
Mujer: 12.0 a 16.0 g/dl
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2 Ed.,
W.B. Saunders & Co., Philadelphia (1976)
2. Walters, M.I., Clin Chem 14(682), 1968.
3. Young, R.B., et al., Clin Chem 21(314), 1975).
4. Recommendation for Haemoglobinometry in Human
Blood, Dr. J. Haematol, Suppl 71(13), 1967.
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LIPIDOS TOTALES
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de Lpidos Totales en suero o plasma.
Los lpidos actan como fuente de energa para el
organismo, sin embargo tienen un rol estructural fundamental
en el organismo dado que son el componente mayoritario de
las membranas biolgicas. Ademas forman capas de tejido
adiposo protector de otros tejidos, y proveen al organismo de
algunos compuestos importantes en la sntesis de
hormonas.
El estudio de los niveles de Lpidos circulante en la sangre
son una ayuda para la clasificacin de las dislipidemias, y
para el diagnstico de otras patologas.
Los lpidos sricos, incluyendo los cidos grasos no
saturados (libres y esterificados) y el colesterol con sus
respectivos steres, reaccionan con el cido fosfovainillnico,
previa accin del cido sulfrico en caliente, obtenindose un
cromgeno rosado que absorbe a 530 nm., cuya intensidad
de color es directamente proporcional a la concentracin de
lpidos en la muestra.
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8 C., estables hasta le fecha de
caducidad indicada en cada etiqueta. Descartar el reactivo si
su absorbancia contra blanco de agua es superior a 0.3 D.O.
a 530 nm.
-Acido fosfovainillnico
Vainillina 10 mM en cido fosfrico
-Solucin standard
Solucin acuosa de lpidos estabilizada 1000 mg/dl
MUESTRAS
Suero o plasma. Los lpidos son estables en el suero por a
lo menos 24 horas a temperatura ambiente y 3 das entre 2
y 8 C.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 530 nm. (rango 500 a 550 nm.), timer,
pipetas y bao hirviente .
TECNICA
DIGESTION
Manipular el cido sulfrico con precaucin dado a que es
corrosivo.
Standard Desconocido
Muestra (ml) ---- 0.02
Standard (ml) 0.02 ----
Acido sulfrico conc. (ml) 1.00 1.00
Incubar 10 minutos en bao mara hirviente y enfriar .
COLORIMETRIA
Digerido muestra (ml) ---- ---- 0.10
Digerido Standard (ml) ---- 0.10 ----
A. Fosfovainillnico (ml) 2.50 2.50 2.50
Mezclar con una varilla plstica e incubar 10 minutos a
37C. leer las absorbancias en espectrofotmetro a 530 nm.,
o fotocolormetro de filtros (rango 500-550)
CALCULOS
FACTOR = 1000 .
Lpidos totales (mg/dl) = Factor x Abs. desconocido
OBSERVACIONES
La reaccin es lineal hasta 2500 mg/dl. Para
concentraciones mayores, diluir el tubo de reaccin ya
coloreado 1:2 o 1:5, segn sea necesario, con reactivo
fosfovainillnico. El resultado obtenido se multiplica por
el factor de dilucin.
Los volumenes de reaccin pueden ser modificados
proporcionalmente sin alteracin en los resultados.
450 a 850 mg/dl
BIBLIOGRAFIA
1.Cottet, J., Etienne, J. Acad. Nath. Med. 149 (331), 1965.
2.Postma, T., Stroes, J.A., Clin. Chem. Acta 22 (569), 1965.
VALTEK DIAGNOSTICS
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FAX: + (562) 379 1634
Santiago CHILE
PROTEINA TOTAL
Reactivo nico para la determinacin de Proteina Total en suero y plasma.
La concentracin de proteina total es muy til en el
monitoreo de cambios que se producen en ella como
consecuencia de varias patologas.
Niveles elevados se encuentran en procesos de
deshidratacin, mieloma mltiple, nefropatas cronicas, y
niveles bajos en algunas patologas renales.
Para la determinacin de niveles de protena total se utilizan
variados mtodos, entre ellos la densidad, el indice de
refraccin, absorbancia de la muestra en el rango ultra-
violeta, y por la tcnica de Folin-Ciocalteau. Originalmente se
media por el mtodo de Kjeldal, que actualmente se utiliza
como mtodo de referencia.
El mtodo utilizado por VALTEK se basa en la reaccin de
biuret, en la cual los enlaces peptdicos reaccionan en medio
alcalino con sulfato de cobre para formar un complejo
coloreado azul-violeta. El color formado se mide
colorimtricamente, siendo proporcional a la cantidad de
proteina presente en la muestra.
REACTIVOS
La absorbancia del reactivo contra blanco de agua a 540
nm., debe ser inferior a 0.200 D.O.
Componentes del reactivo :
Sulfato de cobre II 15 mM
Tartrato de sodio y potasio 70 mM
Ioduro de potasio 10 mM
Hidrxido de sodio 200 mM
Solucin Standard
Albmina bovina, ver concentracin en la etiqueta del frasco.
MUESTRAS
Utilizar de preferencia suero libre de hemlisis. Si se utiliza
plasma, se obtienen valores elevados por la presencia del
fibringeno.
La muestra es estable por 1 semana a temperatura
ambiente, y 1 mes a 4C, evitando la contaminacin
bacteriana y la evaporacin.
EQUIPO REQUERIDO
pipetas.
TECNICA
Muestra (ml) -- -- 0.01
Mezclar e incubar 10 minutos a 37C, o 20 minutos a
temperatura ambiente. Leer las absorbancias a 540 nm.,
minutos.
CALCULOS
FACTOR = Concentracin standard
Protena Total (g/dl) =Factor x Absorbancia desconocido
OBSERVACIONES
La reaccin es lineal hasta 15.0 g/dl.
factor de dilucin.
En el caso de sueros hiperlipmicos, deber hacerse un
blanco muestra con suero fisiolgico para eliminar la
posible interferencia por la turbidez del suero.
RANGO DE REFERENCIA
6.0 a 8.0 g/dl
BIBLIOGRAFIA
1. Friedman, R.B., et al., Clin Chem, 26(209),1980.
Technics.Harper and Row Publishers. New York, 1964.
3. Young D.S., et al., Clin Chem. 21(10), 1975.
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Reactivo enzimtico para la determinacin de triglicridos en suero o plasma.
Los triglicridos son lpidos que en parte se absorben de la
dieta y que tambin son producidos por el organismo a partir
de carbohidratos. Su evaluacin es importante para el
diagnstico y seguimiento de las hiperlipidemias ya sean de
origen gentico o secundarias a otras enfermedades.
Valores elevados aumentan el riesgo de arterioesclerosis y
de enfermedad coronaria.
Los triglicridos son hidrolizados por una lipasa especfica
liberando cidos grasos y glicerol. El glicerol es fosforilado
por la enzima gliceroquinasa y posteriormente, el glicerol-1-
fosfato es oxidado a dihidroxiacetona fosfato por la enzima
glicerol-fosfato oxidasa, generndose perxido de hidrgeno.
Posteriormente, en una reaccin del tipo Trinder, el perxido
de hidrgeno reacciona con 4-Aminoantipirina y el cido 3,5-
Diclorobencensulfnico para producir por medio de la enzima
peroxidasa un compuesto coloreado en cantidad
proporcional a la concentracin de triglicridos presente en
la muestra, midindose la absorbancia a 520 nm.
Triglicridos Lipasa > Glicerol + cidos grasos
Glicerol + ATP GK > Glicerol-3-fosfato + ADP
Glicerol-3-fosfato+O2 GPO > Dihidroxiacetonafosfato+H2O2
2H2O2+4-AAP+DCBS PAP > Comp. Coloreado +
4H2O
REACTIVOS
Estabilidad de la solucin reconstituida: 15 das a
temperatura ambiente y protegido de la luz; 60 das entre 2
y 8C. El reactivo reconstituido con el tiempo puede tomar un
leve color rosado que no afecta los resultados. Descartar el
reactivo si la absorbancia contra blanco de agua es superior
a 0.4 D.O. a 520 nm.
volumen de agua destilada, a temperatura ambiente,indicado
en la etiqueta. Mezclar por inversin hasta la disolucin total,
evitando la formacin de espuma. El uso de agua a baja
Composin del reactivo:
Buffer TRIS pH 7,5 50 mM
Lipasa (microbial) >500 U/L
Glicerokinasa >500 U/L
Glicerol-3-fosfato oxidasa >1000 U/L
Peroxidasa >1000 U/L
Acido 3,5-Dicloro-2-Hidroxibencensulfnico 1.5 mM
Adenosn trifosfato (ATP) 0.50 mM
Mg2+ 5 mM
Solucin standard: Glicerol en solucin estabilizada
equivalente a 200 mg/dl de triglicridos.
MUESTRAS
en ayunas. Los tubos y material de vidrio deben estar limpios
y libres de residuos de detergentes. Los triglicridos son
estables algunos das entre 2 y 8C.
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
ensayo.
Muestra (ml) -- -- 0.01
Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00
minutos.
CALCULOS
FACTOR= 200
Trigliceridos (mg/dl)= Factor x Absorbancia desconocido
RANGO DE REFERENCIA: 25 a 160 mg/dl
BIBLIOGRAFIA
2. Fossati P., et al., Clin. Chem. 28 (2078), 1982.
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TRIGLICERIDOS - LS
Reactivo lquido para la determinacin enzimtica de triglicridos en suero o
plasma.
Los triglicridos son lpidos que en parte se absorben de la dieta
y que tambin son producidos por el organismo a partir de
carbohidratos. Su evaluacin es importante para el diagnstico y
seguimiento de las hiperlipidemias ya sean de origen gentico o
secundarias a otras enfermedades. Valores elevados aumentan
el riesgo de arterioesclerosis y de enfermedad coronaria.
Los triglicridos son hidrolizados por una lipasa especfica
liberando cidos grasos y glicerol. El glicerol es fosforilado por la
enzima gliceroquinasa y posteriormente, el glicerol-1-fosfato es
oxidado a dihidroxiacetona fosfato por la enzima glicerol-fosfato
oxidasa, generndose perxido de hidrgeno. Posteriormente,
en una reaccin del tipo Trinder, el perxido de hidrgeno
reacciona con 4-Aminoantipirina y el cido 3,5-Dicloro-2-Hidroxi-
bencensulfnico para producir por medio de la enzima
peroxidasa un compuesto coloreado en cantidad proporcional a
la concentracin de triglicridos presente en la muestra,
midiendose la absorbancia a 520 nm.
Triglicridos Lipasa Glicerol + cidos grasos
Glicerol + ATP
GK
Glicerol-3-fosfato + ADP
Glicerol-3-fosfato+O2 GPO Dihidroxiacetonafosfato+H2O2
2H2O2+4-AAP+DCBS
PAP
Comp. Coloreado + 4H2O
REACTIVOS
Conservado entre 2 y 8 C. y protegido de la luz , estable hasta
la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Descartar el reactivo si la absorbancia contra blanco de agua es
superior a 0.4 D.O. a 520 nm.
Preparacin Reactivo de Trabajo: El reactivo se provee listo para
su uso.
Composin del Reactivo:
Buffer Pipes pH 7,2 50 mM
Lipasa (microbial) !1000 U/L
Glicerokinasa !500 U/L
Glicerol-3-fosfato oxidasa !2000 U/L
4-Amino antipirina 1 mM
Acido 3,5-Dicloro-2-Hidroxibencensulfnico 1.5 mM
Adenosn trifosfato (ATP) 0.50 mM
Mg2+ 5 mM
Solucin standard:
Glicerol en solucin estabilizada equivalente a 200 mg/dl de
triglicridos.
MUESTRAS
Utilizar de preferencia suero o plasma (Heparina o EDTA) libre
de hemlisis. La muestra debe tomarse con el paciente en
ayunas. Los tubos y material de vidrio deben estar lmpios y
libres de residuos de detergentes. Los triglicridos son estables
algunos das entre 2 y 8C.
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
Llevar el reactivo de trabajo a la temperatura que se realizar el
ensayo.
Muestra (ml) -- -- 0.01
Reac. de trabajo (ml) 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C. o temperatura ambiente
(!20C.). Leer las absorbancias llevando a cero el
espectrofotmetro con el blanco de reactivo. El color resultante
es estable por a lo menos treinta minutos.
CALCULOS
FACTOR= 200
Trigliceridos (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra
La reaccin es lineal hasta 800 mg/dl. Para valores superiores,
diluir la muestra con suero fisiolgico y el resultado obtenido se
multiplica por el factor de dilucin. En el caso de sueros muy
hiperlipmicos, deber hacerse un blanco muestra con suero
fisiolgico para eliminar la posible interferencia por la turbidez
del suero.
RANGO DE REFERENCIA: 25 a 160 mg/dl
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz N. (ed), Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B.
Sauders Co. Philadelphia, 1976.
2. Fossati P., et al., Clin. Chem. 28 (2078), 1982.
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UREA ENZIMATICA
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de urea en
suero o plasma segn Berthelot.
La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del
nitrgeno proteico en los seres humanos. Constituye la
fraccin ms abundante del nitrgeno no proteico. La urea se
produce en el hgado y es excretada por la orina. Su
elevacin es producto de trastornos en la funcin renal o
heptica, problemas dietticos, diabetes y otros.
La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por
accin de la enzima ureasa, segn la proposicin de Faucet
y Scott.
(NH2)2CO + 2 H2O UREASA 2 NH3 + CO2 + H2O
El amonio producido es determinado por la reaccin de
Berthelot de acuerdo a las modificaciones de Chaney y
Marbach. La intensidad del color producido es directamente
proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra.
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8 C., estables hasta le fecha de
caducidad indicada en cada etiqueta.
- Suspensin de Ureasa
Ureasa !50 U/ml
Estab. y preserv. no reactivos c.s.
- Reactivo Fenlico
Fenol 100 mM
Nitroprusiato 0.5 mM
- Reactivo Hipoclorito
Hipoclorito 10 mM
NaOH 200 Mm
- Solucin Standard
Urea 66 mg%
Equivalente Nitrgeno Ureico 30 mg%
MUESTRAS
Suero, plasma u orina diluda 1:100. El plasma debe
obtenerse utilizando anticoagulantes libres de amonio.No
utilizar fluoruro pues inhibe la accin de la enzima ureasa. La
urea es estable en el suero por a lo menos 24 horas a
temperatura ambiente, varios das entre 2 y 8 C., ms de
seis meses a ---20 C.
EQUIPO REQUERIDO
pipetas y opcionalmente bao termorregulado a 37 C.
TECNICA
Muestra (ml) ---- ---- 0.01
Standard (ml) ---- 0.01 ----
Ureasa (gotas/ml) 1/0.05 1/0.05 1/0.05
Incubar 10 minutos atemperatura ambiente (sobre 20 C.) ,o
5 minutos a 37 C. Agregar a cada tubo:
Reactivo fenlico (ml) 1.25 1.25 1.25
Reactivo hipoclorito(ml) 1.25 1.25 1.25
20 C.), o 5 minutos a 37 C. Leer las absorbancias dentro del
plazo de una hora.
CALCULOS
FACTOR= 66 .
Urea (mg%) = Factor x Absorbancia desconocido
OBSERVACIONES
En caso de que el color resultante sea muy intenso,
agregar 5 ml. de agua destilada a cada tubo antes de
leer.
Para expresar los valores obtenidos como nitrgeno
ureico (mg%), multiplicar el valor obtenido por 0.455.
La reaccin es lineal hasta 150 mg% de urea. Para
concentraciones mayores, diluir la muestra
adecuadamente con agua destilada y multiplicar el
resultado obtenido por el factor de dilucin
correspondiente.
Suero o plasma:
Urea : 10 a 50 mg%
Nitrgeno Ureico : 4.5 a 22.7 mg%
Orina:
Urea : 15 a 30 g/24 hrs.
Nitrgeno Ureico : 7 a 14 g/24 hrs.
BIBLIOGRAFIA
1. Berthelot, N.P.E., Repertoire de Chemie Applique
1(284),1959.
2. Fawcet, J.K.& Scott, J.E., J.Clin.Path. 13(156),1960.
3. Chaney, A.L. & Marbach, C.P., Clin.Chem. 8(130),1962.
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UREA-S
Reactivo para determinacin enzimtica de urea en suero, plasma y otros fludos biolgicos.
y Scott.
(NH2)2CO + 2 H2O UREASA > 2 NH3 + CO2 + H2O
El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en
ambiente alcalino, formndose un complejo de color verde.
La intensidad del color producido es directamente
proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra, y
su absorbancia se lee a 600 nm. (580-620).
REACTIVOS
La Urea-S de VALTEK NO CONTIENE FENOL.
Conservados entre 2 y 8 C.y protegidos de la luz, estables
hasta le fecha de caducidad indicada en cada etiqueta.
- Suspensin de Ureasa
Ureasa !50 U/ml
Estab. y preserv. no reactivos c.s.
- Reactivo Salicilato
Acido Saliclico 5 mM
Nitroprusiato 5 mM
- Reactivo Hipoclorito
Hipoclorito 10 mM
NaOH 200 Mm
- Solucin Standard
Urea 66 mg%
Equivalente Nitrgeno Ureico 30 mg%
MUESTRAS
Suero, plasma u orina diluda 1:100. El plasma debe
obtenerse utilizando anticoagulantes libres de amonio.No
utilizar fluoruro pues inhibe la accin de la enzima ureasa. La
urea es estable en el suero por a lo menos 24 horas a
temperatura ambiente, varios das entre 2 y 8 C., ms de
seis meses a -20 C.
EQUIPO REQUERIDO
pipetas y opcionalmente bao termorregulado a 37 C.
TECNICA
PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO
Mezclar 1 ml. de Reactivo Salicilato con 50 ul de Suspensin
de Ureasa, o preparar el volumen requerido manteniendo la
proporcin. (i.e. 30 ml. Reactivo Salicilato + 1,5 ml.
Suspensin Ureasa). Almacenar el reactivo de trabajo entre
2 y 8C y protegido de la luz. El reactivo de trabajo es
estable por 30 das almacenado entre 2 y 8C. y protegido
de la luz.
Muestra (ml) ---- ---- 0.01
Standard (ml) ---- 0.01 ----
Reactivo de Trabajo (ml) 1.00 1.00 1.00
Incubar 5 minutos a temperatura ambiente (sobre 20 C.) ,o
3 minutos a 37 C. Agregar a cada tubo:
Reactivo hipoclorito (ml) 1.00 1.00 1.00
20 C.), o 5 minutos a 37 C. Leer las absorbancias dentro
del plazo de una hora.
CALCULOS
FACTOR= 66
Urea (mg%) = Factor x Absorbancia desconocido
OBSERVACIONES
ureico (mg%), multiplicar el valor obtenido por 0.455.
La reaccin es lineal hasta 300 mg% de urea. Para
concentraciones mayores, diluir la muestra
adecuadamente con agua destilada y multiplicar el
resultado obtenido por el factor de dilucin
correspondiente.
Suero o plasma:
Urea : 10 a 50 mg%
Nitrgeno Ureico : 4.5 a 22.7 mg%
Orina:
Urea : 15 a 30 g/24 hrs.
BIBLIOGRAFIA
1. Berthelot, N.P.E., Repertoire de Chemie Applique
1(284),1959.
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UREA ENZIMATICA-UV
Reactivo para la determinacin enzimtica de urea en suero .
y Scott.
(NH2)2CO + 2 H2O UREASA > 2 NH3 + CO2 + H2O
El amonio producido reacciona con 2-oxoglutarato en
presencia de la enzima glutamato-deshidrogenasa y del
coenzimo NADH, producindose l-glutamato. La disminucin
de la concentracin de NADH en la reaccin es proporcional
a la cantidad de urea presente en la muestra.
REACTIVOS
Conservado entre 2 y 8 C., estable hasta le fecha de
caducidad indicada en cada etiqueta.Estabilidad del reactivo
reconstitudo: 14 das entre 2 y 8C. Descartar el reactivo si
su absorbancia a 340 nm. contra blanco de agua, es inferior
a 1.000 D.O.
Buffer pH 7.8 100mM
NADH 0,28 mM
Glutamato deshidrogenasa 15 U/ml
Ureasa !3 U/ml
2-oxoglutarato 4,0 mM
Solucin Standard
Urea 44 mg/dl
Equivalente Nitrgeno Ureico 20 mg/dl
MUESTRAS
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis. En caso de
utilizar plasma, debe obtenerse utilizando anticoagulantes
libres de amonio. No utilizar fluoruro pues inhibe la accin de
la enzima ureasa. La urea es estable en el suero por a lo
menos 24 horas a temperatura ambiente, varios das entre
2 y 8 C., ms de seis meses a -20 C.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 340 nm., timer, pipetas y opcionalmente
bao termorregulado.
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura a la que se realizar el
ensayo (25 , 30 o 37C.), y llevar a cero el instrumento
contra blanco de agua a 340 nm.
Standard o Muestra (ml) 0.01
Reactivo enzimtico (ml) 1.0
Mezclar e incubar 30 segundos. Leer las absorbancias (A1).
Incubar 60 segundos adicionales y leer nueva-mente (A2).
Determinar la diferencia de absorbancias (A1-A2)
CALCULOS
FACTOR = 44 .
"Abs Standard
Urea (mg/dl) = Factor x "Abs.desconocido
OBSERVACIONES
ureico (mg/dl), multiplicar el valor obtenido por 0.455.
La reaccin es lineal hasta 180 mg/dl de urea (80 mg/dl
de nitrgeno ureico). Para concentraciones mayores,
diluir la muestra adecuadamente con agua destilada y
multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilucin
correspondiente.
Suero o plasma:
Urea : 10 a 50 mg/dl
Nitrgeno Ureico : 4.5 a 22.7 mg/dl
Orina:
Urea : 15 a 30 g/24 hrs.
BIBLIOGRAFIA
1. Tiffany, T.O., Jensen, J.M., Burtis, C.A., Overton, J.B.,
and Scott, C.D., Ciln. Chem. 18(829), 1972.
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ENZIMAS
AMILASA
CK-NAC
CK-MB
FOSFATASA ALCALINA TRIS
FOSFATASA ALCALINA LS
TRANSAMINASAS COLOR AST-ALT
AST/ASAT/GOT
AST/ASAT/GOT - LS
ALT/ALAT/GPT
ALT/ALAT/GPT LS
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AMILASA
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de la actividad de Amilasa
en suero y orina.
La enzima amilasa es producida por el pncreas exocrino y
las glndulas salivales. Esta enzima pertenece a las del
grupo denominado hidrolasas, teniendo por funcin la
hidrlisis de algunos polisacridos como el almidn y el
glucgeno.
Su aumento est relacionado en la mayora de los casos con
pancreatitis aguda, elevndose bruscamente la
concentracin de la enzima en la sangre y orina,
permaneciendo elevada por ms tiempo en la orina que en el
plasma, siendo por ello de gran valor el estudio de la
actividad en suero y orina para saber sobre el curso de la
enfermedad.
Inicialmente, la amilasa se determinaba cuantitativamente
segn el mtodo iodomtrico de Wohlgemuth.
Posteriormente, Somogyi estandariz las cantidades de
almidn y iodo, siendo estas modificaciones las bases de los
mtodos amiloclsticos y iodomtricos introducidos
posteriormente por Caraway.
El mtodo utilizado por VALTEK se basa en la capacidad
de la amilasa para desdoblar el almidn. El producto de esta
hidrlisis est compuesto basicamente por dextrina y
maltosa. El almidn remanente reacciona con el reactivo de
iodo para dar un color azul que se lee fotomtricamente.
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8C, y protegidos de la luz, estables
hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas.
-BUFFER SUSTRATO
Almidn soluble 550 mg/l
Buffer fosfato pH 7.0 100 mmol/l
Preservantes y estabilizantes c.s.
-REACTIVO COLOR
Iodo 10 mEq/l
HCL 20 mmol/l
MUESTRAS
Suero o plasma heparinizado libre de hemlisis, y orina. La
amilasa es estable por 7 das a temperatura ambiente y
varios meses a 4C.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 600 nm (rango 580-620 nm), timer pipetas, y
bao termorregulado.
TECNICA
Referencia Desconocido
Buffer sustrato (ml) 0.50 0.50
Preincubar 3 a 5 minutos a 37C.
Muestra (ml) ----- 0.010
Incubar EXACTAMENTE 7 1/2 minutos a 37 C.
Agua desionizada (ml) 4.00 4.00
Reactivo de Color (ml) 0.50 0.50
Mezclar suavemente por inversin y leer a 600 nm (rango
580-620 nm.) contra blanco de agua dentro del plazo de una
hora.
CALCULOS
Amilasa (U/dl)= Abs.Referencia - Abs. Desconocido X 1000
Abs. Referencia
Para orinas, se recomienda trabajar con muestra de 24
horas.
Amilasuria (U/24 h) = Amilasa (U/dl) X Vol. 24 h. (ml)
100
OBSERVACIONES
Utilizar slo plasma heparinizado puesto que los otros
anticoagulantes interfieren con la reaccin.
La reaccin es lineal hasta 600 U/dl. Para
concentraciones mayores, dilur la muestra con suero
fisiolgico.
Evitar la contaminacin del sustrato con saliva dada la
alta concentracin de amilasa que ella contiene.
Utilizar material muy lmpio para evitar la contaminacin
de los reactivos.
1 U/dl corresponde a la cantidad de enzima que es
capaz de hidrolizar 10 mg de almidn en treinta minutos
en las condiciones del ensayo.
Suero (U/dl) Orina (U/24 h)
Normal 16 - 118 <6.000
Pancreatitis aguda 250-10.000 >20.000
Pancreatitis crnica < 250 >7000
BIBLIOGRAFIA
1.Wohlgemuth, J., Bio Chem 29 (1), 1908.
2.Somogyi, M., Biol Chem 125 (399), 1938.
3.Street, H.V., Close, J.R., Clin Chem Acta 1 (256), 1956.
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CK-NAC
Reactivo para la determinacin cuantitativa de Creatin Quinasa
(activada por N-acetil Cistena) en suero.
La enzima Creatin Quinasa (CK) cataliza la reaccin
reversible entre creatina y ATP para formar creatina fosfato y
ADP. Se localiza en el tejido cardaco, cerebral y esqueltico.
Consecuentemente, la enfermedad o dao de alguno de
estos tejidos (infarto al miocardio, enfermedad cerebro-
vascular aguda, distrofia muscular, etc.), produce un
aumento en los niveles sricos de la enzima. Tras un infarto
al miocardio, la concentracin de la CK se eleva dentro de
las siguientes 4 a 6 horas, alcanzando un mximo a las 18 a
30 horas, volviendo a su nivel normal dentro del tercer da.
El mtodo VALTEK se basa en la proposicin de Szasz.
Creatina fosfato + ADP CK > Creatina + ATP
ATP + D-Glucosa HK > Glucosa-6-fosfato + ADP
Glucosa-6-fosfato + NADP+ G-6-PDH > 6-Fosfogluconato
+ NADPH + H+
La CK cataliza la conversin de creatina fosfato y ADP a
creatina y ATP. El ATP y glucosa presentes son convertidos
en glucosa-6-fosfato y ADP, por accin de la enzima
hexoquinasa (HK). La glucosa-6-fosfato formada es oxidada
por la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa en
presencia del cofactor nicotinamida adenina dinucleotido
fosfato (NADP+). La velocidad a la cual se forma el NADPH,
es proporcional a la actividad de la enzima presente en la
muestra, y se cuantifica midiendo el aumento de absorbancia
a 340 nm.
REACTIVOS
Conservado entre 2 y 8C, estable hasta la fecha de
caducidad consignada en la etiqueta. Estabilidad del reactivo
reconstitudo: 24 horas a temperatura ambiente, 21 das
entre 2 y 8C. Descartar el reactivo si su absorbancia contra
blanco de agua a 340 nm. es mayor que 0,700.
Buffer-sustrato: (Concentraciones al reconstituir)
D-Glucosa 20 mM
Magnesio++ 10 mM
Adenosina-5'-monofosfato (AMP) 50 mM
N-Acetil-cistena (NAC) 20 mM
Creatina fosfato 30 mM
Adenosina-5'-difosfato (ADP) 2 mM
NADP+ 2 mM
G-6-PDH >3.000 U/L
HK >3.000 U/L
EDTA 2 mM
Buffer BIS TRIS pH 6.70.1 100 mM
Estabilizantes y preservantes c.s.
MUESTRAS
Utilizar suero fresco libre de hemlisis o plasma
heparinizado. La CK es estable por 24 horas a temperatura
ambiente y 14 das entre 2 y 8C.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 340 nm., bao termorregulado, timer y
pipetas.
TECNICA
Reconstituir el frasco de reactivo con el volumen de agua
desionizada indicado en la etiqueta. Llevar el reactivo a la
temperatura de reaccin (30 37C).
Reactivo reconstitudo (ml) 1.00
Muestra (ml) 0.02
Mezclar y transferir a la cubeta del equipo. Incubar 2 minutos
a la temperatura de medicin (30 37C). Leer la
absorbancia inicial, y repetir la lectura a intervalos de 60
segundos por los prximos 3 minutos.
CALCULOS
Determine el cambio de absorbancia por minuto ("Abs/min)
Actividad CK (UI/l)= "Abs/min x 8095
FACTOR= Vt x 1000 = 8095
#p-NADPH 340 x P x Vm
Vt= Volumen total de reaccin
#NADPH 340= Coef. de extincin molar del NADPH a 340 nm
P= Espesor del paso de luz en la cubeta
Vm= Volumen de muestra
OBSERVACIONES
Si el "Abs/min es mayor que 0.230, repetir el ensayo
diluyendo la muestra 1:1 con suero fisiolgico.
Multiplicar el resultado obtenido por 2.
Esta tcnica es lineal hasta 1800 UI/ml de CK.
Temperatura medicin 25C 30C 37C
Hombres (UI/l) 10 a 80 15 a 130 24 a 195
Mujeres (UI/l) 10 a 70 15 a 110 24 a 170
BIBLIOGRAFIA
1.Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd Ed.,
W.B.Saunders, Philadelphia, PA., 1976.
2.Szasz, G., Clin. Chem. 22 (650), 1976.
3.Moren, L.G., et al., Clin. Chem. 23(1569), 1977.
4.Young, D.S., et al., Clin. Chem. 21(10), 1975.
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CK-MB (NAC)
Mtodo de inmunoinhibicin (activado por N-acetilcistena), para la determinacin cuantitativa
de la actividad de la isoenzima MB de la Creatn Quinasa.
La enzima Creatin Quinasa (CK) es un dmero conformado
por la combinacin de las subunidades inmunolgicamente
diferentes, M y B. Existe como las isoenzmas MM, MB y BB.
Las CK-MM y CK-MB se distribuyen bsicamente en en el
msculo esqueltico y cardaco, en tanto la isoforma CK-BB
est presente principalmente en el tejido cerebral y en tejidos
compuestos por msculo liso. Ante un infarto al miocardio, la
CK-MB aumenta considerablemente, y constituye un
marcador altamente especfico para el diagnstico del
infarto.
El mtodo VALTEK se basa en la medicin de la actividad
de la CK en presencia de un anticuerpo dirigido contra el
monmero M. Este anticuerpo inhibe totalmente la isoenzima
CK-MM, y la mitad de la actividad de la forma CK-MB, sin
afectar la actividad del monmero B de las isoenzimas MB y
BB. Dado que la isoenzima CK-BB no se encuentra
normalmente en la sangre, la determinacin de la actividad
del monmero B es prcticamente especfica para la forma
MB.
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8C, estable hasta la fecha de
caducidad consignada en la etiqueta.
Reactivo CK-MB (Concentraciones al reconstituir):
D-Glucosa 20 mM
Magnesio++ 10 mM
Adenosina-5'-monofosfato (AMP) 50 mM
Creatina fosfato 30 mM
Adenosina-5'-difosfato (ADP) 2 mM
NADP+ 2 mM
G-6-PDH >3.000 U/L
HK >3.000 U/L
EDTA 2 mM
Diluyente CK-MB:
Buffer BIS TRIS pH 6.70.1 100 mM
Anticuerpo anti CK-M humana en cantidad suficiente para
inhibir hasta 1500 UI/l de CK-MM.
Reconstitur el frasco de Reactivo CK-MB con el volumen de
diluyente CK-MB indicado en la etiqueta. Estabilidad del
reactivo de trabajo: 24 horas a temperatura ambiente, 7 das
entre 2 y 8C. Descartar el reactivo si su absorbancia contra
blanco de agua a 340 nm. es mayor que 0,700.
MUESTRAS
Utilizar suero fresco libre de hemlisis o plasma
heparinizado. La CK es estable por 24 horas a temperatura
ambiente y 14 das entre 2 y 8C.
EQUIPO REQUERIDO
pipetas.
TECNICA
Si la actividad de CK-Total determinada con el kit VALTEK
CK-NAC fuese superior a 1500 UI/l, dilur la muestra 1:1 con
suero fisiolgico antes de efectuar el ensayo de CK-MB. El
resultado obtenido en este caso, se multiplica por 2.
Reactivo de trabajo (ml) 1.00
Muestra (ml) 0.05
Mezclar y transferir a la cubeta del equipo. Incubar 5 minutos
a la temperatura de medicin (30 37C). Leer la
absorbancia inicial (A1), y repetir la lectura a los 5 minutos
(A2).
CALCULOS
Determine el cambio de absorbancia A2-A1 (Abs).
Actividad CK-MB(UI/l)= Abs x 1350
FACTOR= Vt x 1000 x 2 = 1350
p-NADPH 340 x P x Vm x 5
NADPH 340= Coef. de extincin molar del NADPH a 340 nm
OBSERVACIONES
A pesar de la ausencia de la isoenzima CK-BB en
condiciones normales o en pacientes con infarto, se ha
descrito en algunos casos una forma macro de la CK-BB que
podra sobreestimar la medicin del monmero B.
Se sospecha la presencia de esta forma macro si el valor
obtenido para la CK-MB es superior al 20% de la actividad
CK total.
Evitar el uso de sueros hemolizados ya que se pueden
obtener resultados falsamente elevados.
Temperatura medicin 30C 37C
CK-MB (UI/l) 0 a 10 0 a 25
Sospecha de infarto al miocardio:
CK-MB > 6% de la actividad CK-Total cuando:
a 30C CK-MB > 10 UI/l y CK-Total > 160 UI/l
a 37C CK-MB > 25 UI/l y CK-Total > 420 UI/l
BIBLIOGRAFIA
1.Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd Ed.,
W.B.Saunders, Philadelphia, PA., 1976.
2.Szasz, G., Clin. Chem. 22 (650), 1976.
3.Moren, L.G., et al., Clin. Chem. 23(1569), 1977.
4.Young, D.S., et al., Clin. Chem. 21(10), 1975.
5.Wu, A.H.B., Bowers, C.N., Clin. Chem. 28(2017), 1982.
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FOSFATASA ALCALINA-TRIS
Reactivo optimizado para la determinacin de la enzima Fosfatasa Alcalina
en suero o plasma.
La enzima fosfatasa alcalina se encuentra concentrada en
el hgado, hueso, placenta, intestino, y algunos tumores. En
los nios y durante el enbarazo se encuentra en
concentraciones ms altas debido a los procesos de
crecimiento oseo y por accin placentaria, respectivamente.
Esta enzima se encuentra elevada en enfermedades tales
como la hepatitis, enfermedades oseas, etc.
La fosfatasa alcalina cataliza la hidrlisis del p-
Nitrofenilfosfato a p-Nitrofenol y fosfato, producindose un
aumento de absorbancia a 405 nm. proporcional a la
concentracin de enzima en la muestra.
p-Nitrofenilfosfato PAL > p-Nitrofenol + fosfato
REACTIVOS
caducidad indicada en la etiqueta. Estabilidad del reactivo
reconstitudo: a lo menos 30 das entre 2 y 8C. y protegido
de la luz.
Descartar el reactivo si su absorbancia es mayor de 0.8 a
405 nm. contra blanco de agua.
Preparacin: Reconstituir el reactivo con la cantidad de agua
destilada indicada en la etiqueta. Mezclar por inversin hasta
disolucin total.
Composicin del reactivo
(Concentraciones al reconstituir):
Buffer TRIS pH 10.1 (30C) 1.25 M
Mg2+ 2 m M
p-Nitrofenilfosfato 16 mM
MUESTRA
heparinizado. No utilizar plasma obtenido con oxalato,
fluoruro o citrato ya que interfieren con el ensayo. La
fosfatasa alcalina es estable a lo menos 4 das entre 2 y
8C. y sobre un mes a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro manual o automtico capaz de leer a 405
nm., bao termoregulado, timer y pipetas.
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (37C.) y
poner el espectrofotmetro en cero contra blanco de agua
destilada.
Volumen de muestra (ml) 0.025
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro.
Incubar 60 segundos a la temperatura de reaccin. Leer la
absorbancia inicial (A1) a 405 nm. Repetir la lectura a los
60 segundos, exactos
CALCULOS
Determine el cambio de Absorbancia por minuto ("A/min)
Actividad PAL (UI/L) = "A/min x 2180
Factor = Vt x 1000 = 2180
# PNP x P x Vm
# PNP = Coef. de extincin milimolar del p-NPP a 405 nm.
Vm= Volumen de muestra utilizado
OBSERVACIONES
- Los volmenes de reactivo y muestra pueden ser
alterados proporcionalmente de acuerdo a los
requerimientos del espectrofotmetro.
- Si el "A/min es mayor que 0.3, repetir el ensayo con la
muestra diluda 1:3 con suero fisiolgico. El resultado
obtenido se multiplica por tres.
- Los rangos normales deben informarse de acuerdo a la
temperatura a la cual se realiza el ensayo.
20 a 95 UI/L a 30C.
30 a 125 UI/L a 37C.
NOTA: Los valores normales en los adolescentes pueden
triplicar los observados para los adultos.
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N!W. (ed) Fundamentals of Clinical Chemistry
3. Young, D.S., et al., Clin Chem. 18(10), 1972
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FOSFATASA ALCALINA - LS
Reactivo lquido optimizado para la determinacin de la enzima Fosfatasa Alcalina
en suero o plasma.
crecimiento oseo y por accin placentaria, respectivamente.
La fosfatasa alcalina cataliza la hidrlisis del p-
Nitrofenilfosfato a p-Nitrofenol y fosfato, producindose un
aumento de absorbancia a 405 nm. proporcional a la
concentracin de enzima en la muestra.
p-Nitrofenilfosfato PAL > p-Nitrofenol + fosfato
REACTIVOS
Reactivo 1:
Buffer TRIS pH 10.1 (30C) 1.25 M
Mg2+ 2 m M
Reactivo 2:
p-Nitrofenilfosfato 16 mM
Mezclar 10 ml. de Reactivo 1 con 2 ml. de Reactivo 2.
Estabilidad del reactivo de trabajo: 15 das entre 2 y 8C., 5
das a 20C. Descartar el reactivo si su absorbancia es
mayor de 0.8 a 405 nm. contra blanco de agua.
MUESTRA
heparinizado. No utilizar plasma obtenido con oxalato,
fluoruro o citrato ya que interfieren con el ensayo. La
fosfatasa alcalina es estable a lo menos 4 das entre 2 y
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (37C.) y
destilada.
Reactivo de trabajo (ml) 1.00
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro.
absorbancia inicial (A1) a 405 nm. Repetir la lectura a los
60 segundos, exactos
CALCULOS
Actividad PAL (UI/L) = "A/min x 2180
NOTA: Es posible realizar la tcnica utilizando 0,020 ml.
de muestra, en cuyo caso el factor correspondiente es
2713.
Factor = Vt x 1000 = 2180
# PNP x P x Vm
# PNP = Coef. de extincin milimolar del p-NPP a 405 nm.
OBSERVACIONES
requerimientos del espectrofotmetro.
- Si el "A/min es mayor que 0.3, repetir el ensayo con la
20 a 95 UI/L a 30C.
30 a 125 UI/L a 37C.
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N!W. (ed) Fundamentals of Clinical Chemistry
3. Young, D.S., et al., Clin Chem. 18(10), 1972
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Reactivo para la determinacin colorimtrica de la enzima Fosfatasa Alcalina
en suero o plasma.
crecimiento seo y por accin placentaria, respectivamente.
La fosfatasa alcalina actua sobre el HMP-benzofuranona
fosfato en medio tamponado alcalino. Posteriormente, al
agregar el reactivo revelador, se obtiene un cromgeno azul
en forma proporcional a la concentracin de enzima en la
muestra.
HMPBF-fosfato PAL > HMP-benzofuranona + fosfato
HMPBF + revelador > Compuesto coloreado
REACTIVOS
Conservados entre 2 y 8C. y protegido de la luz, estables
Nota: El reactivo revelador se proporciona concentrado.
Debe dilurse con agua desionizada completando el volumen
indicado en la etiqueta del frasco. Una vez diludo, conservar
entre 2 y 8C. en botella de plstico.
Composicin de los reactivos:
BUFFER-SUSTRATO
Buffer AMP pH 10,2 (37C) 300 mM
HMPBF-fosfato 36 mM
Iones Magnesio 10 mM
Tensioactivos y preservantes c.s.
Estabilizantes y activadores no reactivos c.s.
REACTIVO REVELADOR
Hidrxido de sodio 10 mM
Carbonato de sodio 20 mM
Sulfato de sodio 100 mM
SOLUCION STANDARD
HMPBF equivalente a 100 UI/l de fosfatasa alcalina
MUESTRA
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis o
plasma.heparinizado. No utilizar plasma obtenido con
oxalato, fluoruro o citrato ya que interfieren con el ensayo.
La fosfatasa alcalina es estable a lo menos 4 das entre 2 y
EQUIPO REQUERIDO
nm. (rango 570-600 nm.), bao termoregulado, timer y
pipetas.
TECNICA
Buffer-Sustrato (ml) 0,50 0,50 0,50
Preincubar 3 minutos a 37C
Agua destilada (ml) 0,05 ---- ----
Solucin Standard (ml) ---- 0,05 ----
Muestras (ml) ---- ---- 0,05
Mezclar e incubar EXACTAMENTE 10 minutos a 37 C.
Reactivo Revelador (ml) 2,50 2,50 2,50
Mezclar y leer las absorbancias a 590 nm. (rango 570-600
CALCULOS
Actividad PAL (UI/L) = FACTOR x Absorbancia muestra
FACTOR= ________100________
OBSERVACIONES
Los volmenes de reactivos y muestra pueden ser
requerimientos del espectrofotometro.
Esta tcnica es lineal hasta 500 UI/l, para valores
superiores, repetir el ensayo con la muestra diluda 1:3
con suero fisiolgico. El resultado obtenido se multiplica
por tres.
30 a 125 UI/L a 37C.
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N.W. (ed) Fundamentals of Clinical Chemistry
Technics. Harper and Row Publishers. New York, 1964.
3. Young, D.S., et al., Clin Chem. 21(5), 1972.
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Reactivo para la determinacin cuantitativa de GT en suero.
La enzima -GT forma parte del grupo de las llamadas
peptidasas. Su funcin es catalizar la transferencia del grupo
glutamil desde un pptido a otro.
A pesar de que la mayor concentracin de GT se
encuentra localizada en el rion, la mayor fuente de la
enzima presente en el suero es el hgado. Niveles elevados
de GT se encuentran asociados a enfermedades
hepatobiliares y pancreticas; alcohlicos, en enfermedades
al miocardio y en los diabticos.
El mtodo VALTEK se basa en la proposicin de Szasz y la
modificacin efectuada por Rosalki, utilizando un sustrato
sinttico, glutamil-p-nitroanilida (GGPNA) y glicilglicina
como activador.
GGPNA + glicilglicina
GT >
p-NA + G-glicilglicina
La GT cataliza la transferencia del grupo glutamil desde
el sustrato GGPNA a la glicilglicina. La velocidad de
liberacin de la p-nitroanilida es directamente proporcional a
la actividad de la GT en la muestra, y se cuantifica
midiendo el aumento de la absorbancia a 405 nm.
REACTIVOS
Conservado entre 2 y 8C, estable hasta la fecha de
caducidad consignada en la etiqueta.
Estabilidad del reactivo reconstitudo: 14 dias entre 2 y 8C.
Descartar el reactivo si su absorbancia contra blanco de
agua a 405 nm. es mayor que 0,850.
Buffer-sustrato:
Glutamil-p-nitroanilida 4,79 mM
Glicilglicina 100 mM
Buffer TRIS (pH 8,20,1) 180 mM
MUESTRAS
Utilizar suero fresco. Los anticoagulantes, particularmente el
fluoruro, citrato y oxalato, inhiben la actividad de la GT.
La GT es estable por 8 horas a temperatura ambiente, 3
das entre 2 y 8C y una semana a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
pipetas.
TECNICA
Reconstituir el frasco de reactivo con el volumen de agua
desionizada indicado en la etiqueta. Llevar el reactivo a la
temperatura de reaccin (30 37C).
Muestra (ml) 0.05
Mezclar y transferir a la cubeta del equipo. Incubar por 30
segundos. Leer la absorbancia inicial, y repetir la lectura a
intervalos de 60 segundos por los prximos 3 minutos.
CALCULOS
Determine el cambio de absorbancia porminuto ("Abs/min).
Actividad GT (UI/l)= "Abs/min x 2121
FACTOR= Vt x 1000 = 2121
#
p-NA 405
x P x Vm
#
p-NA 405
= Coef. de extincin molar de la p-NA a 405 nm
OBSERVACIONES
Los volmenes de reaccin pueden ser modificados
proporcionalmente sin alteracin en los resultados
obtenidos
Si el "Abs/min es mayor que 0.280, repetir el ensayo
diluyendo la muestra 1:1 con suero fisiolgico.
Multiplicar el resultado obtenido por 2.
Las drogas anticonvulsivas pueden elevar falsamente
los valores de la GT.
Esta tcnica es lineal hasta 600 UI/ml de GT.
Temperatura medicin 25C 30C 37C
Hombres (UI/l) 5 a 25 7 a 34 10 a 45
Mujeres (UI/l) 4 a 16 6 a 22 7 a 32
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd
Ed., W.B.Saunders, Philadelphia, PA., 1976.
2. Szasz, G., Clin. Chem. 15 (24), 1969.
3. Rosalki, S.B., et al., Ann. Clin. Biochem. 7(143), 1970.
4. Young, D.S., et al., Clin. Chem. 20(10), 1975.
5. Rosalki, S.B., et al., Clin. Chem. 20(1121), 1974.
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Reactivo para la determinacin de la actividad de la enzima Lactato Deshidrogenasa
en suero o plasma.
La enzima Lactato deshidrogenasa se encuentra
concentrada en el corazn , rion, hgado, msculo y otros
tejidos corporales. El dao a alguno de estos tejidos resulta
en un aumento de los niveles sricos de LDH. Niveles
elevados de LDH estan asociados con infarto del miocardio,
dao renal, hepatitis, enfermedades musculares y otras
patologas. Existen a lo menos cinco isoenzimas de LDH
dependiendo de su origen tisular.
La enzima LDH cataliza la reaccin reversible de lactato a
piruvato, pudiendo utilizarse ambos como sustrato. Este
reactivo se basa en el mtodo de Wacker & Amador, y las
modificaciones posteriores de Gay, Mc.Comb y Bowers,
tendientes a mejorar la linealidad del mtodo y la duracin
del reactivo.
L-Lactato+NAD+ LDH > Piruvato +NADH + H+
En este caso, la enzima cataliza la oxidacin de lactato a
piruvato reduciendo el NAD a NADH. La concentracin de
LDH se determina midiendo el aumento de absorbancia a
340 nm. a medida que se produce NADH.
REACTIVOS
reconstitudo: 5 das entre 2 y 8C. y hasta 3 das a
temperatura ambiente. Descartar el reactivo si su
absorbancia es mayor de 0.6 a 340 nm. contra blanco de
agua destilada.
Preparacin: Reconstituir el contenido de un frasco con la
cantidad de agua destilada indicada en la etiqueta. Mezclar
por inversin hasta disolucin total.
Composicin del reactivo:
Tris Buffer ph 8.9 100 mM
L-Lactato 50 mM
NAD 6.5 mM
KCl 150 mM
MUESTRAS
Utilizar de preferencia suero libre de hemlisis obtenido por
centrifugacin. La hemlisis eleva falsamente la
concentracin de LDH. En lo posible desechar el uso de
plasma debido a la interferencia de los anticoagulantes, de
otra forma, utilizar solamente plasma heparinizado. No se
requiere una preparacin especial del paciente. La LDH es
estable por 7 das entre 2 y 8C. No congelar las muestras
ya que se destruye la isoenzima de origen heptico.
EQUIPO REQUERIDO
absorbancias a 340 nm; bao termorregulado; timer y
pipetas.
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (30 37 C.)
y poner el espectrofotmetro en cero contra blanco de agua
destilada.
Mezclar y transferir a la cuveta del espectrofotmetro .
absorbancia inicial (A1) a 340 nm. Repetir las lecturas a
intervalos de 60 segundos, hasta por tres minutos.
CALCULOS
Actividad LDH (UI/L) = "A/min x 3376
Factor = Vt x 1000 = 3376
#NADH 340 x P x Vm
#NADH 340= Coeficiente de extincin del NADH a 340 nm.
P= Espesor del paso de luz en la cuveta
OBSERVACIONES
- Si el "A/min es mayor que 0.1 , repetir el ensayo con la
60 a 140 UI/L a 30C 115 a 240 UI/L a 37C
BIBLIOGRAFIA
3. Gay, R.J., Mc Comb, R.B., and Bowers, G.H. Jr. Clin
Chem 14, (740) 1978.
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TRANSAMINASAS PUNTO FINAL
Set de reactivos para la determinacin de Transaminasa Glutmico Oxalactica (GOT)
y Transaminasa Glutmico Pirvica (GPT) en suero segn Reitman y Frankel.
Las transaminasas se encuentran presentes en todos los
tejidos, pero en altas concentraciones en el hgado, msculo,
rion y corazon. Su aumento se asocia a enfermedades que
afectan dichos tejidos tales como hepatitis, cirrosis, infarto
del miocardio, etc.
La determinacin de la transaminasa glutmico oxalactica
(GOT) se basa en la siguiente reaccin:
L-Asp + a-Cetoglutarato GOT > Oxaloacetato + Glutamato
La determinacin de la transaminasa glutmico pirvica
(GPT) s e basa en la siguiente reaccin:
L-Ala + a-Cetoglutarato GPT > Piruvato + Glutamato
El piruvato u oxaloacetato formado reacciona con la 2,4-
dinitrofenilhidrazina, generando en medio alcalino una
hidrazona coloreada que absorbe a 505 nm.
REACTIVOS
Sustrato GOT
l-alanina 100 mM
2-oxoglutarato 2 mM
Sustrato GPT
l-aspartato 100 mM
2-oxoglutarato 2 mM
Reactivo Color
2,4-dinitrofenilhidrazina 1 mM
HCl 1 mM
Standard
Piruvato 2 mM
MUESTRA
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis. Descartar
muestras con hemlisis visible ya que se pueden obtener
valores falsamente elevados. Las transaminasas son
estables a lo menos 7 das entre 2 y 8C. y sobre un mes a
-20C.
EQUIPO REQUERIDO
nm.,(rango 500 - 550 nm.), bao termoregulado, timer y
pipetas.
TECNICA
CURVA DE CALIBRACION
TUBO 1 2 3 4 5 6
Agua destilada (ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
Standard (ml) --- 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Sustrato GOT (ml) 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5
Reactivo color (ml) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar 20 minutos a temp. ambiente (sobre
20C.)
NaOH 0.4 N (ml) 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
Mezclar, esperar 5 minutos y leer a 505 nm. (rango 500 -
550 nm.), contra blanco reactivo (tubo 1).
GOT U/L 0 22 55 95 150 215
GPT U/L 0 25 50 83 126 ----
Graficar en papel milimetrado las unidades de transaminasa
en las absisas (eje X), y la absorbancias en las ordenadas
(eje Y).
ENSAYO
Blanco GOT GPT
Sustrato GOT (ml) 0.5 0.5 ---
Sustrato GPT (ml) --- --- 0.5
Incubar por 3 minutos a 37C.
Agua destilada (ml) 0.1 --- ---
Muestra (ml) --- 0.2 0.1
Incubar 30 minutos a 37C.
Reactivo color (ml) 0.5 0.5 0.5
Incubar 20 minutos a temperatura ambiente (sobre 20C.)
NaOH 0.4 N (ml) 5.0 5.0 5.0
Mezclar por inversin y leer a 505 nm. (500 - 550 nm.)
contra blanco reactivo. El color resultante es estable por 30
minutos.
RESULTADOS
Determinar la actividad de las transaminasas por
interpolacin de las absorbancias obtenidas en la curva de
calibracin.
OBSERVACIONES
Los volmenes de reactivo y muestra pueden ser
alterados proporcionalmente sin alterar los resultados.
La temperatura y los tiempos de incubacin son crticos,
por tanto deben ser respetados fielmente.
Es recomendable realizar un blanco muestra (sin
incubar, y agregando el suero despus del reactivo de
color), en aquellas muestras muy hemolticas, ictricas,
o en las que se sospeche cetosis.
GOT (37C) 5 - 40 U/l
GPT (37C) 5 - 45 U/l
BIBLIOGRAFIA
2. Reitman & Frankel, Am. J. Clin. Path. 28 (56), 1957.
3. Karmen, A., J. Clin. Invest., 34 (131), 1955.
VALTEK DIAGNOSTICS
Phone: + (562) 379 2100
FAX: + (562) 379 1634
Santiago CHILE
ASAT/AST/GOT
Mtodo UV optimizado segn IFCC para la determinacin de Transaminasa Glutmico
oxalactica (Aspartato aminotransferasa) en suero o plasma.
La ASAT se encuentra presente en todos los tejidos, pero en
altas concentraciones en el hgado, msculo, rion y
corazon. Su aumento se asocia a enfermedades que afectan
dichos tejidos tales como hepatitis, infarto del miocardio, etc.
La determinacin de ASAT se realiza acoplando su accin
transaminasa a la accin de la enzima MDH en presencia de
NADH. Este mtodo se basa en el mtodo de Henry et al.,
siguiendo las recomendaciones de la IFCC
L-Asp+A-Cetoglutarato ASAT > Oxaloacetato + Glutamato
Oxaloacetato + NADH MDH > Malato + NAD+
El L-Aspartato reacciona con el a-Cetoglutarato en presencia
de ASAT formndose Oxaloacetato y Glutamato. El
Oxaloacetato producido es reducido por la enzima MDH con
la consiguiente oxidacin del NADH a NAD.
La actividad de la ASAT se mide determinando la
disminucin de absorbancia a 340 nm. segn el NADH sea
oxidado a NAD.
REACTIVOS
reconstitudo: 14 das entre 2 y 8C., 8 horas a temperatura
ambiente. Descartar el reactivo si su absorbancia es menor
de 0.8 a 340 nm. contra blanco de agua.
disolucin total.
Composicin del reactivo (Concentraciones al reconstituir):
Buffer TRIS ph 7.7(25C) 80 mM
a-Cetoglutarato 12 mM
L-Aspartato 400 mM
MDH !600 U/L
LDH !500 U/L
NADH 0.15 mM
MUESTRA
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis o plasma.
Descartar muestras con hemlisis visible ya que se pueden
obtener valores falsamente elevados. La ASAT es estable a
lo menos 7 das entre 2 y 8C. y sobre un mes a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
destilada.
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro .
CALCULOS
Actividad ASAT (UI/L) = "A/min x 1768
Factor = Vt x 1000 = 1768
#NADH 340 x P x Vm
#NADH 340= Coeficiente de extincin milimolar del NADH a 340
nm.
OBSERVACIONES
- Si el "A/min es mayor que 0.3 , repetir el ensayo con la
Hasta 29 U/L a 30C. Hasta 40 U/L a 37C.
BIBLIOGRAFIA
3. Provisional Recomendations on IFCC methods for the
measurement of catalytic concentrations of enzymes.
Clin Chem 23(887),1977.
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ASAT/AST/GOT - LS
Reactivo lquido para la determinacin segn IFCC de Transaminasa Glutmico oxalactica
(Aspartato aminotransferasa) en suero o plasma.
La ASAT se encuentra presente en todos los tejidos, pero en
altas concentraciones en el hgado, msculo, rion y corazon. Su
aumento se asocia a enfermedades que afectan dichos tejidos
tales como hepatitis, infarto del miocardio, etc.
La determinacin de ASAT se realiza acoplando su accin
transaminasa a la accin de la enzima MDH en presencia de
NADH. Este mtodo se basa en el mtodo de Henry et al.,
siguiendo las recomendaciones de la IFCC
L-Aspartato+A-Cetoglutarato
ASAT
Oxaloacetato +
Glutamato
Oxaloacetato + NADH
MDH
Malato + NAD+
El L-Aspartato reacciona con el a-Cetoglutarato en presencia de
ASAT formndose Oxaloacetato y Glutamato. El Oxaloacetato
producido es reducido por la enzima MDH con la consiguiente
oxidacin del NADH a NAD.
La actividad de la ASAT se mide determinando la disminucin de
absorbancia a 340 nm. segn el NADH sea oxidado a NAD.
REACTIVOS
Reactivo 1:
Buffer Fosfato pH 7.7 (25C) 80 mM
L-Aspartato 200 mM
LDH !1500 U/L
MDH !800 U/L
Reactivo 2:
NADH 5 mM
Mezclar 1 ml. de Reactivo 1 con 50 ul. de Reactivo 2. Estabilidad
del reactivo de trabajo: 15 das entre 2 y 8C., 5 das a
temperatura ambiente. Descartar el reactivo si su absorbancia
es menor de 0.8 a 340 nm. contra blanco de agua.
MUESTRA
obtener valores falsamente elevados. La ASAT es estable a lo
menos 7 das entre 2 y 8C. y sobre un mes a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (30 37 C.) y
destilada.
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro . Incubar
60 segundos a la temperatura de reaccin. Leer la absorbancia
inicial (A1) a 340 nm. Repetir las lecturas a intervalos de 60
segundos, hasta por tres minutos.
CALCULOS
Actividad ASAT (UI/L) = "A/min x 1768
Factor = Vt x 1000 = 1768
#NADH 340 x P x Vm
#NADH 340= Coef. de extincin milimolar del NADH a 340 nm.
OBSERVACIONES
- Los volmenes de reactivo y muestra pueden ser alterados
proporcionalmente de acuerdo a los requerimientos del
espectrofotometro.
- Si el "A/min es mayor que 0.3 repetir el ensayo con la muestra
diluda 1:3 con suero fisiolgico. El resultado obtenido se
multiplica por tres.
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N.W. (ed) Fundamentals of Clinical Chemistry W.B.
Saunders Co., Philadelphia, 1976.
measurement of catalytic concentrations of enzymes. Clin Chem
23(887),1977.
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ALAT/ALT/GPT
Mtodo UV optimizado segn IFCC para la determinacin de Transaminasa Glutmico
pirvica (Alanina aminotransferasa) en suero o plasma.
La ALAT se encuentra en altas concentraciones en el
hgado, rion, corazn y tejido muscular esqueltico.
Su nivel se encuentra aumentado en enfermedades que
involucran el hgado (cirrosis, hepatitis viral,etc.). Niveles
bajos se detectan en pacientes dializados o con deficiencia
de vitamina B6.
La determinacin de ALAT se realiza acoplando su accin
transaminasa a la accin de la enzima LDH en presencia de
NADH. Este mtodo se basa en el mtodo de Wroblewski y
La Due, siguiendo las recomendaciones de la IFCC y SSCC.
L-Alanina + A-Cetoglutarato ALAT > Piruvato + Glutamato
Piruvato + NADH LDH > Lactato + NAD+
La L-Alanina reacciona con el a-Cetoglutarato en presencia
de ALAT formndose Piruvato y Glutamato. El Piruvato
producido es reducido por la enzima LDH con la consiguiente
oxidacin del NADH a NAD.
La actividad de la ALAT se mide determinando la
disminucin de absorbancia a 340 nm. segn el NADH sea
oxidado a NAD.
REACTIVOS
reconstitudo: 21 das entre 2 y 8C., 24 horas a
temperatura ambiente. Descartar el reactivo si su
absorbancia es menor de 0.8 a 340 nm. contra blanco de
agua.
disolucin total.
Composicin del reactivo
(Concentraciones al reconstituir):
Buffer TRIS ph 7.5 (25C) 80 mM
L-Alanina 400 mM
LDH !1200 U/L
NADH 0.15 mM
MUESTRA
obtener valores falsamente elevados. La ALAT es estable a
lo menos 3 das entre 2 y 8C. y sobre un mes a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
destilada.
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro .
CALCULOS
Actividad ALAT (UI/L) = "A/min x 1768
Factor = Vt x 1000 = 1768
#NADH 340 x P x Vm
OBSERVACIONES
- Si el "A/min es mayor que 0.3 repetir el ensayo con la
BIBLIOGRAFIA
measurement of catalytic concentrations of enzymes.
Clin Chem 23(887),1977.
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ALAT/ALT/GPT - LS
Reactivo lquido para la determinacin segn IFCC de Transaminasa Glutmico pirvica
(Alanina aminotransferasa) en suero o plasma
.
La ALAT se encuentra en altas concentraciones en el hgado,
rion, corazn y tejido muscular esqueltico.
Su nivel se encuentra aumentado en enfermedades que
involucran el hgado (cirrosis, hepatitis viral,etc.). Niveles bajos
se detectan en pacientes dializados o con deficiencia de
vitamina B6.
La determinacin de ALAT se realiza acoplando su accin
transaminasa a la accin de la enzima LDH en presencia de
NADH. Este mtodo se basa en el mtodo de Wroblewski y La
Due, siguiendo las recomendaciones de la IFCC y SSCC.
L-Alanina + A-Cetoglutarato
ALAT
Piruvato + Glutamato
Piruvato + NADH
LDH
Lactato + NAD
+
La L-Alanina reacciona con el a-Cetoglutarato en presencia de
ALAT formndose Piruvato y Glutamato. El Piruvato producido
es reducido por la enzima LDH con la consiguiente oxidacin del
NADH a NAD.
La actividad de la ALAT se mide determinando la disminucin de
absorbancia a 340 nm. segn el NADH sea oxidado a NAD.
REACTIVOS
Reactivo 1:
Buffer Fosfato pH 7.5 (25C) 80 mM
L-Alanina 600 mM
LDH !2500 U/L
Reactivo 2:
NADH 5 mM
Mezclar 1 ml. de Reactivo 1 con 50 ul. de Reactivo 2. Estabilidad
del reactivo de trabajo: 15 das entre 2 y 8C., 5 das a
temperatura ambiente. Descartar el reactivo si su absorbancia
es menor de 0.8 a 340 nm. contra blanco de agua.
MUESTRA
obtener valores falsamente elevados. La ALAT es estable a lo
menos 3 das entre 2 y 8C. y sobre un mes a -20C.
EQUIPO REQUERIDO
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccin (30 37 C.) y
destilada.
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotmetro . Incubar
60 segundos a la temperatura de reaccin. Leer la absorbancia
inicial (A1) a 340 nm. Repetir las lecturas a intervalos de 60
segundos, hasta por tres minutos.
CALCULOS
Actividad ALAT (UI/L) = "A/min x 1768
Factor = Vt x 1000 = 1768
#NADH 340 x P x Vm
OBSERVACIONES
- Los volmenes de reactivo y muestra pueden ser alterados
proporcionalmente de acuerdo a los requerimientos del
espectrofotometro.
- Si el "A/min es mayor que 0.3 repetir el ensayo con la muestra
diluda 1:3 con suero fisiolgico. El resultado obtenido se
multiplica por tres.
BIBLIOGRAFIA
1. Tietz, N.W. (ed) Fundamentals of Clinical Chemistry W.B.
Saunders Co., Philadelphia, 1976.
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SUEROS CONTROLES
VALTROL N
VALTROL P
VALTROL NP
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VALTROL
Suero control liofilizado para Qumica Clnica
APLICACIONES
Los sueros control VALTROL-N y VALTROL-P han
sido preparados para ser utilizados en los estudios
de precisin, exactitud y como muestra
desconocida, dentro de los programas de control de
calidad internos en cada laboratorio.
COMPOSICION
Este producto ha sido preparado en base a plasma
de donantes humanos debi-damente controlados
por mtodos aprobados por el FDA siendo no
reactivos para HbsAg, HIV-1, HIV-2 y HCV.
Contiene los parmetros habitualmente
determinados por los laboratorios clnicos. Los
valores indicados corresponden a los obtenidos con
mtodos y reactivos VALTEK, siendo los resultados
que se obtengan vlidos slo en caso de utilizar los
mtodos y reactivos correspondientes.
PREPARACION
Sacar el sello de Aluminio con precaucin y retirar
el tapn de goma cuidando de evitar la prdida de
material liofilizado.
Agregar cuidadosamente 5 ml. de agua bidestilada,
tapar y mezclar suavemente por inversin, evitando
la formacin de espuma.
Dejar reposar a temperatura ambiente por 20
minutos, mezclando por inversin peridicamente.
Verificar la disolucin total del liofilizado.
Mezclar por inversin antes de usar.
ESTABILIDAD
Conservado entre 2 y 8 C. hasta la fecha de
Una vez reconstituido, 6 das conservado entre 2 y
8C. y protegido de la luz, 2 das para enzimas y
Bilirrubina.
Para una mayor duracin de los sueros controles,
recomendamos fraccionarlo y mantenerlo a 20 C
en un tubo hermticamente cerrado. Descongelar
una sola vez mezclando suavemente por inversin
antes de usar. Su duracin congelado a -20C es
de 1 mes.
FORMA DE USO
Los sueros control VALTROL, deben ser utilizados
de la misma manera que la muestra de pacientes,
siguiendo las instrucciones particulares de cada
mtodo.
NOTAS
- A pesar de haber realizado pruebas que indican
que los donantes estaban libres de infecciones,
se recomienda manipular el suero control con
precaucin.
- Una reconstitucin o conservacin inadecuadas
pueden derivar en resultados errneos o
irregulares.
- La actividad de la enzima Fosfatasa Alcalina
experimenta un incremento de su actividad con
el tiempo.
- La estabilidad de la Bilirrubina es de 48 horas
entre 2 y 8 C.
BIBLIOGRAFIA
1. International Federation of Clinical Chemistry.
Provisional Recommendation on Quality Control
in Clinical Chemistry. Part 3. Calibration and
Control Materials. Clin. Chem. 23, 1784 (1977).
2. Tonks, D.B., Quality Control in Clinical
Laboratories. Can. J. Med. Tech. 30: 38 (1969).
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SEROLOGIA LATEX
ARTRI CHECK (FACTOR REUMATOIDEO)
ASO CHECK (ANTIESTREPTOLISINA O )
PCR CHECK (PROTEINA C REACTIVA)
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ARTRI-CHECK
Test rpido de aglutinacin para la determinacin semi-cuantitativa de factor
reumatoideo en suero.
La artritis reumatoidea es una enfermedad sistmica crnica
de etiologa desconocida. Sus caractersticas ms frecuentes
son la inflamacin y dolor en las articulaciones y procesos
degenerativos que involucran tanto los tejidos cartilaginosos
cmo la membrana sinovial o tejidos musculares. A pesar de
que an no existe una cura especfica, la terapia temprana
es de gran valor par detener o minimizar el dao irreversible
de las articulaciones. Es por ello que el diagnstico temprano
es de gran importancia.
La artritis reumatoidea se caracteriza por la presencia de un
grupo de protenas reactivas denominadas Factor
Reumatoideo, en la sangre y lquido sinovial. En opinin de
un grupo de investigadores, estas macroglobulinas son
anticuerpos anti "gamma globulinas alteradas".
El Factor reumatoideo se encuentra presente en un 70 a
100% de los casos de artritis reumatoidea por lo que su
deteccin es un criterio de gran utilidad par el diagnstico
definitivo de la enfermedad.
As mismo se ha reportado la presencia de Factor
Reumatoideo en una variedad de enfermedades no
reumticas tales como tuberculosis pulmonar, endocarditis
bacteriana y sfilis, entre otras.
A partir del descubrimiento del Factor Reumatoideo, se han
desarrollado variadas tcnicas para identificarlo y
cuantificarlo. La tcnica ms difundida es la aglutinacin de
partculas de ltex recubiertas con gamma globulinas
humanas. El Factor reumatoideo presente en la muestra
reacciona con las partculas de ltex provocando la
aglutinacin visible de stas. El mtodo VALTEK se basa en
la reaccin inmunolgica entre el Factor Reumatoideo (RF) y
anticuerpos IgG adheridos a finas partculas de ltex.
REACTIVOS
Almacenados entre 2 y 8C., los reactivos son estables
hasta la fecha indicada en la etiqueta.
Descartar el reactivo si se aprecia una reaccin de
aglutinacin inapropiada con las soluciones control.
Reactivo RF-Ltex: Suspensin de partculas de ltex
recubiertas con IgG humana en buffer glicina-NaCl a pH 8,4
+/- 0,2.
Buffer-RF 20X: Buffer glicina-NaCl a pH 8,4 +/- 0,2
concentrado. Diluir 1:20 con agua destilada.
Control Positivo: Suero humano estabilizado con presencia
de Factor Reumatoideo.
Control Negativo: Suero humano estabilizado no reactivo con
el reactivo ltex.
MUESTRAS
Utilizar suero fresco libre de hemlisis. Refrigerar o congelar
las muestras si no se realizar el ensayo prontamente.
EQUIPO REQUERIDO
Tubos de ensayo (para dilucin), timer y pipetas.
TECNICA
Mtodo cualitativo (Screening).
1. Llevar los reactivos a temperatura ambiente antes de
realizar el ensayo.
2. Preparar una dilucin 1:20 de las muestras mezclando
una parte de suero con 19 partes de Buffer diluido.
3. Agitar el reactivo RF-Ltex suavemente vaciando el
contenido del gotario y volviendo a llenar. Mezclar 1
gota (aprox. 0,05 ml.) de reactivo RF-Ltex con 1 gota
de suero diluido en una de las zonas de la placa
utilizando para ese efecto el otro extremo de la pipeta
aplicadora provista.
4. Continuar mezclando por un minuto con la ayuda de un
rotador o manualmente. Observar la formacin de
aglutinacin utilizando una fuente de luz directa.
5. Se debe realizar en paralelo el ensayo con el control
positivo y control negativo provistos. Los controles
incluidos con este kit se utilizan sin dilucin previa.
6. Comparar la reaccin obtenida con la muestra con la de
los controles positivo y negativo.
El control positivo produce una aglutinacin gruesa dentro de
un minuto. El control negativo no produce aglutinacin.
Mtodo semi-cuantitativo.
realizar el ensayo.
2. Preparar una dilucin 1:20 de las muestras mezclando
una parte de suero con 19 partes de Buffer diluido
(Tubo N1).
3. Preparar 7 tubos de ensayo en una gradilla
enumerndolos del 2 al 8. Agregar 0,5 ml. de Buffer-RF
diluido a los tubos N2 al N8.
4. Pipetear 0.5 ml. de muestra diluda del tubo N1 al tubo
N2, continuar transfiriendo de igual forma 0.5 ml. del
tubo N2 al N3, y as sucesivamente hasta el tubo N8.
Descartar 0.5 ml de dilucin del tubo N8.
5. Las diluciones quedan como se indica:
Tubo N Dilucin Tubo N Dilucin
1 1:20 5 1:320
2 1:40 6 1:640
3 1:80 7 1:1280
4 1:160 8 1:2560
6. Con las pipetas desechables provistas, poner una gota
de cada dilucin en la placa de reaccin.
7. Agitar el reactivo RF-Ltex suavemente vaciando el
contenido del gotario y volviendo a llenar. Agregar 1
gota (aprox. 0,05 ml.) de reactivo RF-Ltex sobre cada
dilucin mezclando uniformemente, utilizando para ese
efecto el otro extremo de la pipeta aplicadora provista,
cubriendo totalmente la superficie de la zona de
reaccin.
8. Continuar mezclando por 1 minuto con la ayuda de un
positivo y control negativo provistos.
10. Comparar la reaccin obtenida en la muestra con la de
RESULTADOS
El ttulo corresponde a la dilucin mayor que presenta
aglutinacin visible. Su concentracin aproximada
corresponde a los valores que se indican en la siguiente
tabla:
TUBO Dilucin IU/ml
1 1:20 3
2 1:40 6
3 1:80 12
4 1:160 24
5 1:320 48
6 1:640 96
7 1:1.280 192
8 1:2.560 284
Valores de 3 a 6 UI/ml se consideran como positivo dbil,
sobre 12 UI/ml se consideran como valores patolgicos.
NOTAS
Los resultados obtenidos utilizando el mtodo Screening
no son directamente comparables con los obtenidos por
el mtodo semi-cuantitativo puesto que son realizados
en diferentes condiciones.
El mtodo de Screening es un procedimiento rpido
mientras que el mtodo de dilucin en tubo entrega
informacin ms til al cuantificar el factor reumatoideo
Descartar el reactivo RF-Ltex en caso de observar
aglutinacin inapropiada con los controles positivo y
negativo.
Muestras altamente lipmicas pueden dar reaccin no
especfica por lo tanto no deben ser utilizadas.
Los componentes de este kit contiene azida sdica
como preservante la cual puede formar mezclas
explosivas en presencia de compuestos de plomo. Por
ello, desechar junto con abundante cantidad de agua.
BIBLIOGRAFIA
1. Waaler, E., Acta Path. Microb. Scand. 17, 1&2, 1940.
2. Rose, H.M., Ragan, C., Pierce, E. & Lipman, M.O., Proc.
Soc. Exptl. Biol. Med., 68, 1, 1948.
3. Waller, M., C.R.C. Reviews in Medical Sci., June 1971,
p.173.
4. Bandilla, K.L. and McDuffie, F.C., Arthritis Rheum., 12,
74, 1969.
5. Hannestad, K., Clin. Exp. Immunol., 3, 671, 1968.
6. Epskin, W., Johsen, A. & Ragan C., Proc. Soc. Exptl.
Biol-Med., 91, 235, 1956.
7. Lane J.J.Jr., and Decker J.L., JAMA 173, 982, 1960.
8. Muller W., The Serology of Rheumatoid Arthritis; Berlin-
Goettlingen-Heidelberg, 1962, p.97.
VALTEK DIAGNOSTICS
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Santiago CHILE
ASO-CHECK
Test rpido de aglutinacin para la determinacin cualitativa y semi-cuantitativa de
Antiestreptolisina-O en suero.
La antiestreptolisina-O (ASO) es una exotoxina producida
por el estreptococo B-hemoltico (grupo A) la cual tiene la
capacidad de hemolizar los glbulos rojos de varias
especies. La estreptolisisna-O tiene capacidad antignica
resultando en la produccin por parte del organismo de
anticuerpos antiestreptolisina-O.
La determinacin de los niveles de ASO es un mtodo
universalmente aceptado para el diagnstico de diversas
enfermedades por infeccin de estreptococo tales como la
fiebre reumtica y glomerulonefritis.
La concentracin de ASO en individuos normales vara
ampliamente. Despus de la fase aguda de una infeccin por
estreptococo, el ttulo comienza a aumentar en alrededor de
dos semanas, llegando a sus niveles mximos en cuatro a
seis semanas, mantenindose alto por un perodo de tiempo
relativamente prolongado. En pacientes con fiebre reumtica,
se encuentra un ttulo elevado en ms del 90% de los casos,
ttulos mantenidos por sobre las 500 unidades se consideran
como evidencia de fiebre reumtica.
La determinacin de la concentracin de la ASO en forma
aislada es de relativa utilidad, por lo cual se recomienda la
repeticin de la prueba a intervalos de 10 a 15 das. Si se
observa un aumento progresivo de los ttulos obtenidos, es
posible concluir que se est frente a una infeccin reciente.
Por otra parte, la disminucin subsecuente de los ttulos es
un ndice claro de recuperacin.
El mtodo ms comn utilizado para la determinacin de la
concentracin de la ASO ha sido el test de inhibicin
hemoltica. En dicho mtodo, cantidades decrecientes de
suero se suplementan con una cantidad constante de
estreptolisina-O. Si la cantidad de estreptolisina agregada ha
sido suficiente para inhibir el anticuerpo, la adicin posterior
de glbulos rojos no presentar hemlisis. Cuando el
antgeno supera en cantidad al anticuerpo, el exceso de
estreptolisina provoca la hemlisis de los glbulos rojos
agregados.
Dado que la reaccin antgeno-anticuerpo se verifica ya sea
con la estreptolisina-O en estado oxidado como reducido, se
desarroll un mtodo en lmina para la determinacin
cualitativa y semi-cuantitativa de la ASO en suero.
El mtodo ASO-Check de VALTEK utiliza partculas de ltex-
poliestireno recubiertas con estreptolisina-O. En presencia
de los anticuerpos (ASO), las partculas aglutinan
observndose un patrn caracterstico dentro de 3 minutos.
REACTIVOS
hasta la fecha indicada en la etiqueta. Descartar el reactivo si
se aprecia una reaccin de aglutinacin inapropiada con las
soluciones control.
Reactivo ASO-Ltex: Suspensin de partculas de ltex
recubiertas con estreptolisina-O en solucin tamponada.
Control Positivo: Suero humano estabilizado conteniendo
ASO, reactivo con el ltex.
el reactivo ltex.
MUESTRAS
EQUIPO REQUERIDO
Tubos de ensayo (para dilucin), suero fisiolgico (NaCl
0.85%), timer y pipetas.
TECNICA
Mtodo cualitativo (Screening):
realizar el ensayo.
de suero (0,05 ml.) en la placa de reaccin.
9. Agitar el reactivo ASO-Ltex suavemente vaciando el
gota (aprox. 0,05 ml.) de reactivo ASO-Ltex sobre la
muestra de suero mezclando uniformemente con la
muestra utilizando para ese efecto el otro extremo de la
pipeta aplicadora provista, cubriendo totalmente la
superficie de la zona de reaccin.
10. Continuar mezclando por 3 minutos con la ayuda de un
tres minutos. El control negativo no produce aglutinacin.
realizar el ensayo.
enumerndolos del 1 al 6.
13. Diluir las muestras de suero con suero fisiolgico (NaCl
0,85%) como se indica a continuacin:
TUBO Suero (ml) Suero Dilucin IU/ml
Fisiolgico (ml)
1 0.5 0 1:1 200
2 0.5 0.5 1:2 400
3 0.5 de tubo 2 0.5 1:4 800
4 0.5 de tubo 3 0.5 1:8 1600
5 0.5 de tubo 4 0.5 1:16 3200
6 0.5 de tubo 5 0.5 1:32 6400
15. Agitar el reactivo ASO-Ltex suavemente vaciando el
gota (aprox. 0,05 ml.) de reactivo ASO-Ltex sobre cada
dilucin mezclando uniformemente utilizando para ese
reaccin.
RESULTADOS
La concentracin aproximada de ASO en la muestra se
puede obtener multiplicando el ttulo de la mxima dilucin
con reaccin de aglutinacin positiva por la sensibilidad del
mtodo (200 UI/ml).
ASO (UI/ml) = Ttulo x 200
(Una muestra con un ttulo de 1:4 tiene una concentracin
aproximada de 4 x 200 = 800 UI/ml)
Los valores normales de ASO varan con la edad, estacin
del ao y rea geogrfica. El valor de referencia se
encuentra entre 166 y 250 UI/ml con un valor promedio
menor que 200 UI/ml.
NOTAS
el mtodo semi-cuantitativo.
mientras que el mtodo de dilucin entrega informacin
ms til al cuantificar el contenido de ASO presente en
la muestra.
Descartar el reactivo ASO-Ltex en caso de observar
negativo.
Los componentes de este kit contienen azida sdica
BIBLIOGRAFIA
1. Todd E.W., J.Exp.Med., 55:267,1932.
2. Rantz L.A. & Randall E., Proc. Soc. Exp. Biol. And Med.
59:22, 1945.
3. Davidsohn I. & Henery J.B., Todd-Sanford Clinical
Diagnosis by Laboratory Methods, 14
th
Ed. W.B.
Saunders Co. Phila., 1969.
4. Freeman S.O., Clinical Immunolgy, Harper & Row
Publishers, New York, 1971.
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PCR-CHECK
Test rpido de aglutinacin para la determinacin cualitativa de Protena C-reactiva en suero.
La Protena C-Reactiva (PCR) aparece usualmente en el
suero de pacientes en fase aguda de diversas infecciones,
tanto de origen bacteriano como viral; fiebre reumtica
aguda; artritis reumatoidea y otras enfermedades del
colgeno, y otras condiciones caracterizadas por la
inflamacin.
La Protena C-Reactiva puede encontrarse presente en
casos de infarto al miocardio en su fase aguda, y varios tipos
de cncer particularmente aquellos metastsicos.
Desde el descubrimiento de que los conejos formaban
anticuerpos precipitantes contra la PCR, se han desarrollado
varios mtodos inmunoprecipitantes para su deteccin. El
mtodo VALTEK para la deteccin de la PCR se basa en el
mtodo de aglutinacin de partculas de ltex introducido por
Singer et al. en 1957, teniendo como principales ventajas su
rapidez y sensibilidad, comparado con otros mtodos.
La medicin de la PCR en intervalos de tiempo puede ser
utilizada como una medicin de la efectividad de la terapia
en aplicacin, particularmente en el manejo de aquellos
pacientes con fiebre reumtica.
El PCR-Check se basa en la reaccin inmunolgica entre
PCR (antgeno) y el anticuerpo correspondiente que recubre
la superficie de partculas de ltex.
REACTIVOS
hasta la fecha indicada en la etiqueta. Descartar el reactivo si
se aprecia una reaccin de aglutinacin inapropiada con las
soluciones control.
Reactivo PCR-Ltex: Suspensin de partculas de ltex
recubiertas con anticuerpos anti-PCR de origen animal en
buffer glicina-NaCl a pH 8,4 +/- 0,2.
Buffer-PCR 20X: Buffer glicina-NaCl a pH 8,4 +/- 0,2
concentrado. Diluir 1:20 con agua destilada.
Control Positivo: Suero humano estabilizado conteniendo
PCR como antgeno.
el reactivo ltex.
MUESTRAS
EQUIPO REQUERIDO
Tubos de ensayo (para dilucin), timer y pipetas.
TECNICA
Mtodo cualitativo (Screening):
realizar el ensayo.
(0,05 ml.) de suero en la placa de reaccin.
17. Agitar el reactivo PCR-Ltex suavemente vaciando el
gota (aprox. 0,05 ml.) de reactivo PCR-Ltex sobre la
muestra mezclando uniformemente utilizando para ese
reaccin.
un minuto. El control negativo no produce aglutinacin.
realizar el ensayo.
enumerndolos del 1 al 8. Agregar 0,5 ml. de Buffer
PCR diluido a los tubos N1 al N8.
19. Pipetear 0.5 ml. de suero en el tubo N1, mezclar y
transferir 0.5 ml. del tubo N1 al tubo N2, continuar
transfiriendo de igual forma 0.5 ml. del tubo N2 al N3,
y as sucesivamente hasta el tubo N8. Descartar 0.5 ml
de dilucin del tubo N8.
20. Las diluciones quedan como se indica:
Tubo N Dilucin Tubo N Dilucin
1 1:2 5 1:32
2 1:4 6 1:64
3 1:8 7 1:128
4 1:16 8 1:256
22. Agitar el reactivo PCR-Ltex suavemente vaciando el
gota (aprox. 0,05 ml.) de reactivo PCR-Ltex sobre cada
dilucin mezclando uniformemente, utilizando para ese
reaccin.
RESULTADOS
La concentracin aproximada de PCR en la muestra se
puede obtener multiplicando el ttulo de la mxima dilucin
con reaccin de aglutinacin positiva por la sensibilidad del
mtodo (6 mg/l).
PCR (mg/l) = Ttulo x 6
(Una muestra con un ttulo de 1:4 tiene una concentracin
aproximada de 4 x 6 = 24 mg/l)
Hasta 6 mg/l
NOTAS
Muestras con concentraciones de PCR muy altas (en el
rango de 200 mg/l), es posible obtener resultados
negativos por exceso de antgeno (efecto de prozona).
Por ello se recomienda en caso de sospecha, verificar
todas la muestra negativa repitiendo el ensayo con la
muestra diluida 1:10 con el buffer-PCR diluido.
el mtodo semi-cuantitativo.
mientras que el mtodo de dilucin en tubo entrega
informacin ms til al cuantificar el contenido de PCR
Descartar el reactivo PCR-Ltex en caso de observar
negativo.
Los componentes de este kit contiene azida sdica
BIBLIOGRAFIA
6. Tillet W.S. & Francis J., Exper. Med. 52, 561, 1930.
7. Fischel E.E. in Cohen A.A. (Editor), Laboratory
Diagnostic Procedures in Rheumatoid Disease, Little,
Brown & Co., Boston, p.70, 1967.
8. MacLeod C.M. & Avery O.T., J. Exper. Med. 73,
191,1950.
9. Singer J.M. / Plotz C.M., Amer. J. Med. 21, 888, 1956.
10. Nilsson L.A., Acta Path. Microbiol. Scand. 73, 129,
1968.
11. Saxtad J., Nilsson L.A. & Hanson L.A., Acta Paediat.
Scand. 59, 25, 1970.
12. Scherffarth F.M., Perez-Miranda M. & Goetz, Blut 20,
296,1970.
13. Singer J.M., Plotz C.M., Parker E. & Elster S.K., Amer.
J. Clin. Path. 28, 611, 1957.
14. Crockson R.A., J.Clin.Path. 16, 287, 1963.
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TEST DE EMBARAZO
HCG-ELISA
HCG MONOCLONAL DIRECTO
HCG STRIPTEST COMBO (SUERO Y ORINA)
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-HCG ELISA
Test inmunolgico rpido para la deteccin semi-cuantitativa de la sub-unidad de
gonadotrofina corinica humana (HCG) en suero y orina.
La gonadotrofina corinica humana (hCG) es una hormona
glicoproteica secretada por la placenta a partir de la
fertilizacin.
En el embarazo normal, la hCG se puede detectar
generalmente a partir del sptimo da de la concepcin,
doblando su valor cada 1,3 a 2 das. Al momento del primer
atrazo de la menstruacin, la concentracin de hCG es del
orden de 100 mIU/ml, obteniendose valores del orden de
100.000 a 200.000 mIU/ml hacia el final del primer trimestre.
La rpida aparicin de hCG y su posterior aumento, es un
excelente marcador para la deteccin precoz del embarazo.
El test VALTEK para la deteccin de hCG se basa en la
metodologa del ELISA. Este mtodo emplea una
combinacin de anticuerpos poli y monoclonales para
identificar selectivamente la hCG en orina o suero con una
gran sensibilidad (20 mUI/ml). La muestra es incubada con el
conjugado enzimtico y los anticuerpos unidos a la fase
slida simultneamente. En presencia de hCG, se forma un
complejo que queda unido a la pared del pocillo. Una vez
eliminado el conjugado enzimtico no ligado, el pocillo es
incubado con el sustrato.
El desarrollo de un color azul indica la presencia de hCG en
la muestra. La comparacin de la intensidad del color
desarrollado por la muestra con respecto de la referencia
conocida permite evaluar si la concentracin es mayor o
menor de 20 mIU/ml.
REACTIVOS
1. Pocillos de Reaccin: Microplaca de 96 pocillos
desprendibles recubierta con anticuerpos policlonales
anti-hCG.
2. Conjugado enzimtico: Conjugado peroxidasa-
anticuerpo monoclonal anti-hCG estabilizado, 7 ml.
3. Reactivo de color A: Perxido de Hidrgeno
estabilizado, 7 ml.
4. Reactivo de color B: Cromgeno, 7 ml.
5. hCG Standard: Contiene 0 mIU/ml, 1 ml.
8. Solucin STOP: HCl 3N, 10 ml.
Refrigerados entre 2 y 8C, los reactivos son estables hasta
la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit.
MUESTRAS
De preferencia utilizar la primera orina de la maana,
recolectada en un frasco lmpio y seco de plstico o vidrio.
En caso de una orina turbia, es recomendable centrifugarla
previamente. La hCG en la orina es estable por 72 horas
entre 2 y 8C. Muestras de orina con precipitado visible
debe ser filtrada, centrifugada o bien dejada decantar, previo
a realizar el ensayo.
Suero o plasma obtenido con EDTA, libre de hemlisis.
Llevar las muestras a temperatura de reaccin previo a
realizar el ensayo.
PRECAUCIONES
No agregar azida sdica a las muestras como
preservante dado que inhibe la actividad enzimtica
No mezclar reactivos provenientes de diferentes Lotes,
y no utilizar ms all de la fecha de vencimiento.
No intercambiar las tapas de los frascos.
Mantener la placa dentro de su bolsa con el desecante,
cerrandola hermticamente para evitar humedad.
TECNICA
A. Tcnica Cualitativa
1. Llevar los reactivos a la temperatura de ensayo.
2. Separar el nmero de pocillos requeridos y volver el
resto a su sobre, asegurndose de cerrarlo bien.
3. Poner una gota (50 l) de Control Positivo (Standard 20
mIU/ml), una gota (50 l) de Control Negativo (Standard
0 mIU/ml), o una gota (50 l) de la muestra del paciente
en el pocillo correspondiente.
4. Agregar una gota (50 l) de Conjugado Enzimtico a
cada posillo, mezclar procurando no salpicar.
5. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
6. Remover el contenido de los pocillos sacudidolos
suavemente, y lavar 5 veces con agua de la llave o
destilada. Evitar la contaminacin de un pocillo con otro.
7. Agregar a cada pocillo una gota de Reactivo de Color A
y una gota de Reactivo de Color B. Mezclar
suavemente. Nota: El Reactivo de Color A debe ser
agregado en primer lugar.
8. Observar la aparicin de color azul a los 5 minutos de
incubacin.
INTERPRETACION RESULTADOS
Positivo: Pocillos con una coloracin azul igual o mayor que
el Standard de 20 mIU/ml, deben considerarse positivas.
Negativo: Pocillos sin desarrollo de color al termino de los
cinco minutos de la segunda incubacin indica un resultado
negativo. La aparicin de una coloracin azul inferior a la del
Standard de 20 mIU/ml, debe considerarse negativo.
En los estadios ms tempranos del embarazo, la
concentracin de HCG en la orina puede ser inferior al lmite
de deteccin de este reactivo. Si un resultado negativo
mereciera dudas, es recomendable repetir el ensayo 2 das
despus para descartar una eventual positivizacin.
B. Tcnica Cuantitativa.
1. Llevar los reactivos a la temperatura de ensayo.
2. Separar el nmero de pocillos requeridos y volver el
resto a su sobre, asegurndose de cerrarlo bien.
3. Poner una gota (50 l) de Control Negativo (Standard 0
mIU/ml), una gota (50 l) de Standard 20 mIU/ml, una
gota (50 l) de Standard 150 mIU/ml, y una gota (50 l)
de la muestra del paciente en los pocillos
correspondientes.
4. Agregar una gota (50 l) de Conjugado Enzimtico a
cada posillo, mezclar procurando no salpicar.
5. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
6. Remover el contenido de los pocillos sacudidolos
suavemente, y lavar 5 veces con agua de la llave o
destilada. Evitar la contaminacin de un pocillo con otro.
7. Agregar a cada pocillo una gota de Reactivo de Color A
y una gota de Reactivo de Color B. Mezclar
suavemente. Nota: El Reactivo de Color A debe ser
agregado en primer lugar.
8. Incubar por 5 minutos a temperatura ambiente.
9. Agregar 50 ul de solucin STOP a cada pocillo.
10. Leer las absorbancias a 450 nm. utilizando un lector
adecuado.
11. Calcular los valores de hCG a partir de la curva de
calibracin.
LIMITACIONES DEL METODO
Otras condiciones tales como enfermedad trofoblstica
y ciertos neoplasmas no-trofoblsticos pueden causar
valores elevado de hCG.
El diagnstico definitivo debe ser realizado por un
mdico.
Se puede obtener falsos negativos en casos de
embarazos ectpicos, sdrome del feto muerto y aborto
retenido.
Deben utilizarse siempre los Controles con el objeto de
verificar el performance del reactivo.
Este reactivo no presenta reaccin cruzada con FSH,
LH y TSH.
BIBLIOGRAFIA
-Rasor, J.L., et al., Obstet. Gynecol. 50 (553), 1977
-Braunster, G.D., et al., Am.J.Obst.Gyne. 126 (678),1976.
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-HCG MONOCLONAL DIRECTO
Test latex monoclonal rpido para la deteccin directa de la sub-unidad de gonadotrofina
corinica humana (HCG) en orina.
En la mujer embarazada se observa la aparicin
significantiva de HCG en suero y orina. Esta glicoprotena es
secretada por la placenta en desarrollo despus de la
fertilizacin. En el embarazo normal, la HCG puede
detectarse en el suero a partir del sptimo da siguiente a la
concepcin, duplicndose su concentracin cada 1,3 a 2
das.
a estimacin del nivel de HCG es un excelente marcador
para la deteccin precoz del embarazo. Niveles elevados de
HCG tambin se encuentran en casos de neoplasmas
trofoblsticos, tales como los embarazos molares,
coriocarcinomas, y otros.
El test directo VALTEK para la deteccin de HCG se basa
en el principio de aglutinacin de partculas de latex
recubiertas con un anticuerpo monoclonal de origen murino,
anti sub-unidad de la HCG. Cuando una muestra de orina
con una concentracin de -HCG superior a 300 mUI/ml se
mezcla con el reactivo ltex, se produce aglutinacin. Si la
concentracin es menor o igual a 300 mUI/ml, no se produce
aglutinacin.
REACTIVOS
Reactivo Ltex: Suspensin estandarizada de partculas
de ltex recubiertas con Anticuerpo monoclonal de
origen murino anti -HCG, en buffer con preservantes.
Sensibilidad ajustada a 500 mUI/ml. Mezclar bien antes
de usar.
Control positivo: Orina humana HCG positiva
estabilizada.
Control negativo: Orina humana HCG negativa
estabilizada.
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del kit.
MUESTRAS
De preferencia utilizar la primera orina de la maana,
recolectada en un frasco lmpio y seco de plstico o vidrio.
En caso de una orina turbia, es recomendable centrifugarla
previamente. La HCG en la orina es estable por 72 horas
entre 2 y 8C. Evitar congelar las muestras.
TECNICA
Llevar los reactivos a la temperatura de ensayo.
1. Poner una gota (50 l) de Control Positivo en la posicin 1
de la lmina provista, una gota (50 l) de Control Negativo
en la posicin 2.
2. Utilizando la pipetas provistas, poner una gota de la
muestra del paciente en la posicin 3. Conserve la pipeta
para utilizarla en la agitacin.
3. Agregar una gota (50 l) de Reactivo Ltex a cada
posicin, mezclar procurando utilizar todo el campo de
reaccin.
4. Rotar suavemente durante dos minutos, y leer los
resultados inmediatamente bajo luz directa.
INTERPRETACION RESULTADOS
Un resultado negativo corresponde a una suspencin
lechosa, sin aglutinacin transcurridos los dos minutos. El
resultado es positivo si se observa aglutinacin dentro de los
dos minutos de reaccin.
Comparar el resultado obtenido para la muestra con los
resultados de los controles.
En los estadios ms tempranos del embarazo, la
concentracin de HCG en la orina puede ser inferior al lmite
de deteccin de este reactivo. Si un resultado negativo
mereciera dudas, es recomendable repetir el ensayo 7 a 12
das despus para descartar una eventual positivizacin.
OBSERVACIONES
Este test es una ayuda en la deteccin del embarazo. El
diagnstico definitivo debe ser realizado por un mdico.
NO CONGELAR el Reactivo Ltex ya que puede
aglutinar espontneamente.
El tiempo de reaccin es CRITICO. La evaporacin
puede arrojar falsos positivos.
En caso de que la muestra tenga una concentracin de
HCG muy alta, podra obtenerse un resultado falso
negativo producto del efecto de pro-zona. En tal caso
repetir el ensayo diluyendo la muestra con agua.
Se puede obtener falsos negativos en casos de
embarazos ectpicos, sdrome del feto muerto y aborto
retenido.
Deben utilizarse siempre los Controles con el objeto de
verificar el performance del reactivo.
Este reactivo no presenta reaccin cruzada con FSH,
LH y TSH.
BIBLIOGRAFIA
1. Rasor, J.L., et al., Obstet. Gynecol. 50 (553), 1977
2. Braunster, G.D., et al., Am.J.Obst.Gyne. 126
(678),1976.
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hCG-Striptest COMBO
Tira reactiva para la deteccin de Gonadotrofina Corinica en suero y orina
La Gonadotrofina Corinica humana (hCG) es una hormona
de naturaleza glicoproteica, secretada inicialmente por el
trofoblasto y posteriormente por la placenta. Durante un
embarazo normal, es detectable en la orina y suero de
mujeres embarazadas en torno al 10 da despus de la
fecundacin. El subsecuente incremento de su concentracin
en el primer trimestre de la gestacin, hace de esta hormona
un marcador ideal para la deteccin precoz del embarazo,
mediante el uso de anticuerpos especficos anti hCG.
La presencia de hCG en una condicin diferente al
embarazo, est asociada a la presencia de tumores.
FUNDAMENTO DEL ENSAYO
HCG-Striptest COMBO es un test cualitativo de una sola
etapa, que emplea una combinacin de anticuerpos
monoclonales y policlonales para identificar especficamente
hCG en suero y orina, con un alto grado de sensibilidad.
SENSIBILIDAD
La tira reactiva HCG-Striptest COMBO puede pesquisar
niveles de hCG iguales o superiores a 20 mUI/ml,
equivalente a los niveles alcanzados en orina en el 1er
da de atraso del perodo menstrual.
ESPECIFICIDAD
El test HCG-Striptest COMBO no presenta reaccin cruzada
con las siguientes hormonas, probadas en la concentracin
que se indica:
hLH 500 mUI/ml
hFSH 1000 mUI/ml
hTSH 1 mUI/ml
ALMACENAMIENTO
HCG-Striptest COMBO debe ser conservado en su estuche
sellado a una temperatura entre 4C y 30C. Se recomienda
refrigerarlo si la temperatura sube de 30C. No se debe
congelar.
MUESTRAS
La muestra de orina debe ser recolectada en un recipiente
de plstico o vidrio limpio y seco. Es recomendable usar la
primera orina emitida en la maana porque contiene una
mayor concentracin de hCG, cuando la hormona est
presente. Las muestras de orina pueden refrigerarse entre
2C y 8C hasta 8 horas antes del ensayo.
Suero libre de hemlisis. Llevar las muestras a temperatura
de reaccin previo a realizar el ensayo.
PROCEDIMIENTO
1. La cantidad de muestra debe ser al menos de 1 ml.
2. Tome la tira reactiva HCG-Striptest COMBO e
introdzcala en forma vertical en el recipiente que
contiene la muestra, tomando laprecaucin de que la
orina no sobrepase la marca de nivel mximo indicado
en la tira reactiva. Espere de 3 a 5 segundos, extraiga la
tira reactiva desde la muestra y djela sobre una
superficie horizontal limpia, seca y no absorbente (p.e.
borde del tubo de ensayo o frasco de muestra). Espere
hasta la apricin de las bandas coloreadas.
Dependiendo de la concentracin de HCG en la
muestra, es posible observar los resultados en 40
segundos, sin embargo para confirmar resultados
negativos se debe completar el tiempo de reaccin de 5
minutos. No leer los resultados despus de 10 minutos.
Resultado Negativo
Aparece una lnea coloreada (Control Interno). Indica la
ausencia de hCG en la muestra o que se encuentra en una
concentracin no detectable por este ensayo.
Resultado Positivo
Aparecen dos lneas coloreadas (Control Interno y una
adicional que corresponde a la muestra). Indica la presencia
de hCG en la muestra. An cuando la intensidad del color de
las dos lneas no sea igual, el resultado debe considerarse
positivo.
Error
No aparece ninguna lnea dentro de los primeros 5 minutos.
El test debe considerarse nulo, ya sea por un error en el
procedimiento o por deterioro de la tira reactiva. El ensayo
debe repetirse.
INTERFERENCIAS
Muestras de orina que contienen sangre o una cantidad
elevada de protenas o contaminacin bacteriana,
pueden entregar resultados errneos.
Es recomendable no leer el resultado despus de los 30
minutos ya que algunas orinas aunque sean negativas,
pueden producir una leve sombra en la zona de
reaccin de la muestra, despus de perodos
prolongados.
Se analiz la posible interferencia de un gran nmero de
medicamentos con el test HCG-Striptest COMBO y los
resultados fueron negativos. Sin embargo, no se puede
descartar la posibilidad que algunas drogas pueden
causar resultados incorrectos.
LIMITACIONES DEL ENSAYO
Se puede obtener un resultado negativo con muestras
de orina muy diluidas porque no contienen niveles
representativos de hCG. Si hay sospechas de
embarazo, repita la prueba con la primera orina de la
maana, 1 a 2 das despus.
Las muestras de pacientes con enfermedades tales
como coriocarcinoma o mola hidatidiforme, que secretan
hCG, pueden dar un resultado positivo en ausencia de
embarazo.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Tenga la precaucin que las muestras se encuentren a
temperatura ambiente (20 - 25C) antes de realizar el
ensayo.
Se debe tener la precaucin de no mojar la tira reactiva
y de no tocar la zona reactiva, pues HCG-Striptest
COMBO se podra inactivar o los resultados podran ser
alterados.
La intensidad de color de las lneas puede variar debido
a los diferentes niveles de HCG presentes en las
muestras.
BIBLIOGRAFIA
-Rasor, J.L., et al., Obstet. Gynecol. 50 (553), 1977
-Braunster, G.D., et al., Am.J.Obst.Gyne. 126 (678),1976.
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SUEROS TIPIFICADORES
ANTI - A
ANTI - B
ANTI - AB
ANTI D
SUERO DE COOMBS
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MONOCLONALES PARA TIPIFICACION DE GRUPOS SANGUINEOS
ANTI - A, ANTI - B, ANTI - A,B
Los reactivos para tipificar los antgenos del sistema ABO, de
Valtek, se basan en anticuerpos monoclonales producidos por
lneas celulares de hibridomas murinos y ofrecen todas las
ventajas de los reactivos monoclonales actuales, es decir, un
comportamiento parejo y un abastecimiento seguro. Dado que
estos reactivos no provienen de fuentes humanas, el riesgo de
transmisin de enfermedades tales como Hepatitis o Sida es nulo.
LOS GRUPOS SANGUINEOS ABO
En 1900 Landsteiner descubri que el suero de ciertos individuos
tena la capacidad de aglutinar los glbulos rojos de otros y que
este fenmeno poda utilizarse para clasificar a las personas en
distintos fenotipos de grupos sanguneos. Se reconocen 4
fenotipos comunes: O, A, B y AB, pero tambin se han
identificado subgrupos de las formas A y B.
El fenotipo ABO de un individuo se determina comnmente por
las reacciones de aglutinacin de sus glbulos rojos con los
antisueros Anti-A, Anti-B y Anti-AB. Al probar muestras de sangre
de adultos, se puede obtener la confirmacin del grupo sanguneo
ABO por la reaccin del suero del individuo con las suspensiones
de glbulos rojos testigo A y B (contraprueba).
LOS REACTIVOS
Los reactivos ABO Valtek se preparan a partir de anticuerpos
monoclonales secretados por lneas celulares de hibridomas
murinos desarrolladas en cultivo in vitro. Cada hibridoma produce
un slo anticuerpo con caractersticas bien definidas. Estos
anticuerpos pueden ser usados solos o en mezclas, para producir
potentes reactivos de especificidad predefinida.
Los reactivos se han formulado de acuerdo a las normas de la
FDA de Estados Unidos y se entregan coloreados de Azul y
Amarillo, Anti-A y Anti-B respectivamente, e incoloro en el caso
del reactivo Anti-A,B. Todos los reactivos se suministran
estandarizados y listos para ser usados en tcnicas de
hemoaglutinacin en tubo o en lmina.
PRECAUCIONES
Estos reactivos contienen azida de sodio al 0,1% (p/v). Este
compuesto puede ser txico si es ingerido. Adems, puede
reaccionar con las caeras de plomo y cobre formando sales
explosivas altamente txicas. Por esta razn, al eliminar los
reactivos, hgalo dejando correr una abundante cantidad de
agua.
Estos reactivos son para uso profesional de diagnstico in vitro,
exclusivamente.
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO
Los reactivos deben ser almacenados entre 2C y 8C.
A las temperaturas de almacenamiento recomendadas, los
reactivos son estables por lo menos durante 18 meses desde la
fecha de elaboracin. Un almacenamiento a temperaturas ms
altas o repetidas congelaciones y descongelaciones pueden
afectar la estabilidad de los reactivos monoclonales tal como
sucede con los reactivos policlonales humanos convencionales.
Si bien la azida de sodio se adiciona como bacteriosttico, se
recomienda inspeccionar el reactivo visualmente antes de usarlo.
No debe utilizarse si presenta un aspecto turbio.
RECOLECCION DE MUESTRAS
Las muestras de sangre deben recolectarse en forma asptica,
con o sin adicin de anticoagulantes. Cuando se retrasa el
examen de las muestras, stas deben almacenarse entre 2C y
8C.
Las muestras recolectadas en Heparina o EDTA deben tipificarse
dentro de 48 horas. Las muestras recolectadas en ACD, CPD y
CPDA-1 pueden ser tipificadas hasta 35 das despus de
almacenadas.
Las muestras coaguladas deben tipificarse dentro de los 7 das
posteriores a su recoleccin.
TECNICAS RECOMENDADAS
En las tcnicas que se describen a continuacin, las
suspensiones de glbulos rojos en estudio se pueden preparar en
suero fisiolgico, en tampn fosfato salino pH 7.0 (PBS), o en
salino de baja fuerza inica (LISS).
TECNICA EN LAMINA
Se prepara una suspensin al 10% de los glbulos rojos en
estudio, ya sea en suero fisiolgico, PBS o LISS. Se puede usar
en forma alternativa una suspensin al 35-45% de glbulos rojos
en suero o plasma autlogo.
1. En una lmina de vidrio limpia y rotulada agregar una gota
del reactivo y un volumen igual de la suspensin de glbulos
rojos en estudio.
2. Mezclar el reactivo y los glbulos rojos dentro de un rea de
unos 2 cm. de dimetro, moviendo la lmina en forma suave
y continua. Al cabo de dos minutos leer
macroscpicamente.
Todas las pruebas aparentemente negativas deben leerse
microscpicamente al cabo de 5 minutos.
TECNICA EN TUBO - CENTRIFUGACION INMEDIATA
1. En un tubo rotulado, agregar un volumen del reactivo y un
volumen igual de una suspensin al 3-5% de los glbulos
rojos en estudio.
2. Mezclar y centrifugar a 1.000 r.c.f. (3.500 r.p.m.) durante 20
segundos. Es posible usar otra fuerza y tiempo alternativos
adecuados.
3. Agitar suavemente el tubo para soltar los glbulos y
examinar macroscpicamente para observar si hay
aglutinacin.
TECNICA EN TUBO - SEDIMENTACION
1. En un tubo rotulado, agregar un volumen del reactivo y un
volumen igual de una suspensin al 3-5% de los glbulos
rojos en estudio.
2. Mezclar e incubar a temperatura ambiente (20C) por 1 hora.
3. Agitar suavemente el tubo para soltar los glbulos y
examinar macroscpicamente, si hay aglutinacin.
ESPECIFICIDAD
Los reactivos ABO Valtek tienen una especificidad similar a la de
los reactivos policlonales convencionales. Esto incluye la
capacidad de los reactivos Anti-B y Anti-A,B para detectar los
antgenos Bw y B adquirido y la del reactivo Anti-A para detectar
muestras del fenotipo Ax.
Los anticuerpos monoclonales usados en los reactivos ABO
Valtek se han probado exhaustivamente para determinar posibles
reacciones cruzadas con otros antgenos de glbulos rojos,
incluyendo aquellos exigidos por la FDA y se ha demostrado que
no presentan reaccin cruzada.
CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad de los sistemas de prueba es fundamental y
debe realizarse con cada grupo de exmenes.
Los glbulos rojos control recomendados para el grupo ABO son:
A1, A2, B, A2B y O.
PAUTAS GENERALES PARA RESOLVER LOS PROBLEMAS
QUE SE PRESENTAN EN LA TIPIFICACION DE ABO
REACCIONES DEBILES
Se puede encontrar reacciones ms dbiles que las normales en
las siguientes situaciones:
i.Recin nacidos. Los antgenos A y B no se expresan totalmente
al nacer. Se recomienda especial cuidado al tipificar los glbulos
rojos de bebs muy prematuros.
ii.En casos de leucemia y otras enfermedades malignas.
iii.Pacientes que han sido recientemente transfundidos con
grandes cantidades de sangre de un dador no idntico a su grupo
ABO, pueden mostrar una reaccin serolgica de campo mixto.
iv.La deteccin de las variantes ms dbiles de A y B puede
requerir una lectura microscpica de los exmenes.
La reactividad Anti-A y Anti-B puede verse reducida y
eventualmente estar ausente del suero o plasma de pacientes
muy jvenes, adultos mayores o inmunodeprimidos.
REACCIONES "FALSO"-POSITIVAS EN TIPIFICACION
DE GLOBULOS ROJOS
i.La poliaglutinacin debida a la activacin T o Tn no puede
detectarse con estos reactivos monoclonales.
ii.En la tipificacin ABO, pocas veces se han reportado problemas
debidos a anticuerpos que reaccionan con drogas, sustancias
qumicas y colorantes, o con silica liberada del material de vidrio
de mala calidad.
iii.Crioaglutininas. En presencia de crioaglutininas, bastan
habitualmente 4 a 6 lavados de glbulos rojos en suero fisiolgico
a 37C para obtener clulas que permitan una tipificacin ABO
confiable.
En contadas ocasiones puede requerirse precalentar las clulas a
37C por 10 minutos, antes de lavar 4-6 veces con suero
fisiolgico a 37C.
Un control de clulas del paciente, tratadas, a las que se agrega
dos gotas de suero fisiolgico, no debera mostrar aglutinacin.
iv.El antgeno B adquirido se observa ocasionalmente en
pacientes del grupo A. Se produce por la desacetilacin del
antigeno A por enzimas bacterianas, especialmente las asociadas
con infecciones intestinales. El paciente ser aparentemente del
grupo AB y presentar anti-B en el suero.
La disminucin del pH a 6, en la reaccin de hemo-aglutinacin,
reducir o eliminar la reaccin con el antgeno B adquirido.
REACCIONES "FALSO"- POSITIVAS EN CONTRAPRUEBA
i.Se encuentran anticuerpos Anti-A en el suero de las personas
A2 (1 al 8%) y A2B (22 al 35%). Esto debe sospecharse cuando
el suero de una persona AB o A aparente, aglutina glbulos del
grupo A, pero no los del grupo O ni los propios glbulos rojos de
la persona.Esto se confirma probando los glbulos rojos de dicha
persona con Anti-A y su suero con clulas A y A2.
ii.El suero puede contener una autoaglutinina. Las especificidades
ms comunes para stas son Anti-H, Anti-HI y Anti-I.
La especificidad de la autoaglutinina puede confirmarse probando
el suero directamente con glbulos rojos de cordn (I negativos) o
con pruebas de neutralizacin con sustancias especficas de
grupo sanguneo.
iii.Pueden producirse reacciones adicionales de los glbulos rojos
estndar A y/o B, cuando un suero contiene un aloanticuerpo
reactivo fro. Las especificidades ms comunes para tales
aloanticuerpos son P1, M y Lewis. Es til en estos casos realizar
pruebas adicionales, como un control de autoaglutinacin con un
pool de clulas del grupo O. Una prueba del suero utilizando un
panel de glbulos rojos servir para determinar la especificidad
del anticuerpo.
iv.Formacin de "Rouleaux".
Los glbulos rojos presentan un aspecto aglutinado y al examen
microscpico se ven como pilas de monedas. Este fenmeno es
producido por una anormalidad del suero que altera la carga de
superficie de los glbulos rojos. La formacin de Rouleaux est
asociada con algunos estados patolgicos que conducen a la
proteinemia, como por ejemplo: Mieloma mltiple,
Macroglobulinemia de Waldenstrom, Sndrome de
Hiperviscosidad y Cirrosis.
La administracin intravenosa de ciertos expansores del volumen
sanguneo puede inducir transitoriamente la formacin de
Rouleaux.
El Rouleaux afecta rara vez la tipificacin ABO, incluso cuando se
prueban glbulos rojos sin lavar. Si la contraprueba es afectada,
se aconseja utilizar la siguiente tcnica de dispersin:
a) Centrifugue todas las muestras.
b) Elimine el sobrenadante.
c) Reemplace el sobrenadante con dos gotas de suero fisiolgico
(o PBS, o LISS).
d) Mezcle muy bien.
e) Vuelva a centrifugar las muestras y lea las reacciones.
La aglutinacin persistir mientras que el Rouleaux se dispersar.
REFERENCIAS
1. Evaluation of Monoclonal Antibodies to Blood Group A. S.
Moore et al. Int . Symp. on Monoclonal Antibodies:
Standardization of their characterization and use, Paris, France
1983.Develop. Biol. Standard. Vol. 57, pp. 49 -54.
2. A Monoclonal Antibody to Human Blood Group B. S. Moore
et al. Int. Symp. on Monoclonal Antibodies: Standardization
of their characterization and use, Paris, France 1983. Develop.
Biol. Standard. Vol. 57, pp.55-59.
3. A Mouse Monoclonal Antibody with Anti-A (B) Specificity Which
Agglutinates AXCells. S. Moore et al. Vox Sang, 1984. Vol. 47,
pp. 427-434.
4. Widmann F.K. ed. Technical Manual 9th Edition Washington
D.C. American Association of Blood Banks 1985 Chapter 8.
5. Race R.R. and Sanger R. Blood Groups in Man 6th Edition
Oxford Blackwell Scientific Publications 1975.
6. Issit P.D. Applied Blood Group Serology 3rd Edition.
Montgomery Scientific Publications Miami, Florida U.S.A. 1985
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Santiago CHILE
REACTIVO DE GRUPO SANGUNEO ANTI-D (Anti Rho)
Mezcla Monoclonal IgM + IgG para Tcnicas Rpidas en Lmina y Tubo.
El antgeno Rho (D) fue reconocido por primera vez en 1939.
Actualmente se conocen ms de 40 antgenos diferentes que
forman parte del sistema Rh.
La mayora de los anticuerpos anti-Rh se producen en respuesta
a una estimulacin, ya sea, por un embarazo o una transfusin
sangunea.
El antgeno D es altamente inmunognico y se ha reportado que
estimula la produccin de anti-D en el 50-85% de los casos de
individuos D negativos que han sido expuestos a sangre D
positiva.
El anticuerpo Anti-D es de considerable importancia ya que puede
causar Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido y reacciones
hemolticas post-transfusionales agudas.
EXPRESION DEBIL DEL ANTIGENO RhD (Du)
El trmino Du se usa ampliamente para describir clulas que
poseen diferencias cuantitativas o cualitativas cuando se
comparan con los glbulos rojos RhD positivos normales. Por lo
general, no se aglutinan directamente con Anti-D.
Muchos usuarios consideran que, antes de clasificarlas como
RhD negativas, se deberan ensayar nuevamente para Du, las
donaciones de sangre que no se aglutinan directamente con Anti-
D.
PRINCIPIO DEL REACTIVO Y PROCEDIMIENTO DEL TEST
Los procedimientos de examen recomendados para el uso de
este reactivo se basan en la aglutinacin de glbulos rojos
portadores del antgeno D en presencia de un anticuerpo
anti-D.
El reactivo es una mezcla de un anticuerpo monoclonal humano
Anti-D, de la clase lgM, Anti-D de la clase lgG y un anticuerpo
monoclonal de la clase IgG.
El componente lgM Anti-D de la mezcla produce aglutinacin
directa de los glbulos rojos portadores del antgeno RhD normal.
En la mayora de los casos los glbulos rojos positivos Du no se
aglutinan directamente con este reactivo.
El componente IgG Anti-D de la mezcla puede detectar las
variantes Du mediante el test indirecto de antiglobulina.
El reactivo contiene azida de sodio, al 0,1% como preservante.
Tambin contiene cloruro de sodio, fosfato de sodio y albmina
de suero bovino al 6-8%. El reactivo debe usarse tal como se
suministra.
PRECAUCIONES
1. Todos los productos sanguneos deben ser tratados
como potencialmente infecciosos. La fuente humana donante
del material utilizado para producir este reactivo ha sido
controlada usando las tcnicas requeridas por la FDA y
encontrada negativa para anti-HIV 1 y 2, anti-HCV y HBs Ag.
Ningn grupo de exmenes puede garantizar totalmente que un
producto derivado de la sangre humana sea incapaz de
transmitir agentes infecciosos.
2. El reactivo contiene azida de sodio al 0,1% (p/v). La azida de
sodio puede ser txica al ingerirse y puede reaccionar con las
caeras de plomo y cobre formando sales explosivas
altamente txicas. Al eliminar el reactivo, hgalo dejando correr
grandes cantidades de agua.
3. El producto debe ser transparente. Si se ve turbio, esto
puede indicar contaminacin bacteriana.
4. Este producto es slo para uso profesional de diagnstico
in vitro.
5. No usar despus de la fecha de expiracin.
RECOMENDACIONES A LOS USUARIOS
Se recomienda ensayar en paralelo un control positivo
(idealmente clulas R1r) y uno negativo (clulas rr) en cada grupo
de exmenes.
No es indispensable usar un control del diluyente en paralelo en
todos los exmenes en que se utiliza este reactivo. Sin embargo,
al tipificar los glbulos rojos de pacientes que tienen
autoanticuerpos o anormalidades proteicas o aparentemente un
grado bajo de Du, se puede realizar un control paralelo de
seroalbmina de bovino al 6-8% en suero salino.
RECOLECCION DE MUESTRAS
Las muestras de sangre deben recolectarse en forma asptica,
con o sin adicin de anticoagulantes. Si hay demora en la
recoleccin de muestras de sangre, se recomienda almacenarlas
entre 2C y 8C.
Las muestras recolectadas en EDTA o heparina deben tipificarse
antes de 48 horas. Las muestras recolectadas en ACD, CPD o
CPDA-1 pueden tipificarse hasta 35 das despus de la fecha de
su extraccin.
TECNICAS RECOMENDADAS
TECNICA EN LAMINA UTILIZANDO VISOR
1. Prepare una suspensin de los glbulos rojos en estudio al
40 o 50% en plasma o suero autlogo (o compatible), o en
suero salino al 0,9%.
2. Agregue una gota del reactivo Anti-D a una lmina limpia y
rotulada.
3. Agregue una gota de la suspensin de glbulos rojos en
estudio.
4. Mezcle el antisuero y las clulas sobre un rea de 2 cm de
dimetro y mueva la lmina en forma suave y continua. Al
cabo de dos minutos, lea macroscpicamente. Tenga
cuidado de no confundir cualquier resecamiento de la
muestra con aglutinacin.
TECNICA EN TUBO-CENTRIFUGACION INMEDIATA
1. Prepare una suspensin al 3-5% de los glbulos rojos en
estudio, en plasma o suero autlogo (o compatible) o en
suero salino al 0,9%.
2. Agregue una gota del reactivo Anti-D a un tubo rotulado.
3. Agregue una gota de la suspensin de los glbulos rojos
en estudio.
4. Mezcle y centrifugue a 1.000 rcf (3.500 rpm) durante 20
segundos o usando una fuerza y tiempo alternativos
adecuados.
5. Agite suavemente el tubo para despegar los glbulos rojos
y examine macroscpicamente si hay aglutinacin. No
examine microscpicamente.
6. Los tests aparentemente negativos deben incubarse a
37C durante 15-30 minutos; luego se centrifugan y se
leen (como se indic en 4 y 5).
7. Muchos usuarios estiman que los tests de muestras de
donantes que dan reacciones negativas deberan probarse
para Du.
TEST INDIRECTO DE ANTIGLOBULINA PARA Du
1. Prepare una suspensin de los glbulos rojos en estudio al
3-5% en plasma o suero autlogo (compatible) o en suero
salino al 0,9%.
2. Agregue una gota del reactivo Anti-D a un tubo rotulado.
3. Agregue una gota de una solucin de seroalbmina de
bovino al 6-8% en suero salino, a un segundo tubo rotulado
como control.
4. Agregue una gota de la suspensin de glbulos rojos a
cada tubo.
5. Mezcle e incube a 37C durante 15 minutos.
6. Lave los glbulos rojos 3 4 veces con suero salino
eliminando cuidadosamente el sobrenadante y
resuspendiendo las clulas despus de cada lavado.
7. Agregue dos gotas del reactivo Antiglobulina Humana a cada
tubo, mezcle suavemente para resuspender los glbulos y
centrifugue los tubos a 1.000 rcf (3.500 rpm) por 20
segundos.
8. Agite suavemente el tubo para despegar los glbulos
rojos y examine macroscpicamente, si hay aglutinacin.
9. Para verificar la validez de los exmenes negativos,
agregue glbulos rojos sensibilizados con IgG, centrifugue
a 1.000 rcf durante 20 segundos y observe si hay
aglutinacin. Si el resultado es negativo, el test para Du
no es vlido y debe repetirse.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
POSITIVO: Aglutinacin de los glbulos rojos en estudio con el
reactivo Anti-D indica la presencia del antgeno D, dentro de las
limitaciones aceptadas para el procedimiento.
POSITIVO PARA Du: Aglutinacin de los glbulos rojos en
estudio con el reactivo anti-D por la tcnica para Du , (test
indirecto de antiglobulina) indica que los glbulos pertenecen a la
variedad Du.
NEGATIVO: No aglutinacin de los glbulos rojos con el reactivo
Anti-D indica ausencia del correspondiente antgeno Rh, dentro
de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Glbulos rojos que dan un resultado positivo en el test
directo de antiglobulina (DAT) pueden, en raras ocasiones,
aglutinar no especficamente en tests con Anti-D. Se
puede producir aglutinacin espontnea en medios con baja
concentracin de protena. Estas falsas aglutinaciones
pueden no siempre ser detectadas por tests control usando
medio salino.
2. El uso de glbulos rojos no lavados y suspendidos en
plasma o suero puede promover reacciones falsas positivas
asociadas con la formacin de rouleaux, autoanticuerpos, o
ms escasamente anticuerpos a los constituyentes del
diluyente del reactivo.El uso de glbulos rojos bien lavados
en la rutina de los tests puede reducir la incidencia de este
tipo de falsos positivos.
3. Glbulos rojos que muestren un resultado positivo en el test
directo de antiglobulina no deben tipificarse para Du.
4. Algunos glbulos rojos pueden expresar variantes del
antgeno Rh y por lo tanto pueden dar reacciones con
Anti-D mas dbiles que las esperadas.
5. Demoras en la lectura de los tests de antiglobulina,
resuspensin del botn muy brusca y otras variables de la
tcnica asociadas con la ejecucin del test de antiglobulina
pueden resultar en reacciones ms dbiles que las
esperadas o en falsos negativos para Du.
6. Es raro que ocurran reacciones falsas positivas asociadas
con la presencia de anticuerpos contra antgenos de baja
incidencia.
7. Falsos negativos o reacciones dbiles no esperadas
pueden ocurrir con glbulos rojos que han sido
almacenados por mucho tiempo, o en condiciones
inapropiadas.
8. Otras variables, tales como tcnicas incorrectas,
centrifugacin o incubacin inapropiadas, material de vidrio
mal lavado y/o contaminado pueden causar resultados falsos
positivos o falsos negativos.
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS
El reactivo Anti-D (para lmina y tubo con centrifugacin
inmediata) aglutina en forma especfica glbulos rojos humanos
cuando el antgeno D est presente y cuando se usa segn las
tcnicas recomendadas.
Cada lote de Anti-D ha sido probado exhaustivamente para
asegurar potencia y especificidad segn los mtodos y
estndares recomendados por la F.D.A. de Estados Unidos.
REFERENCIAS
1.Levine P., Stetson R. E. An unusual case of intragroup
agglutination. J. Amer. Med. Assoc. 1939. 113:126-127.
2.Mollison P.L. Blood transfusion in clinical medicine. 6th
edition. Oxford, Blackwell Scientific. 1979.
3.Moore B.P.L. Serological and immunological methods of the
Canadian Red Cross Blood Transfusion Service. 8th edition.
Toronto, Hunter Rose 1980.
4.Widmann F.K. (Ed) Thechnical Manual. 10th edition.
Washington, D. C. American Association of Blood Banks, 1990,
Chapter 11.
5.Race R.R., Sanger R. Blood groups in man. 6th edition.
Oxford Blackwell Scientific, Publishers 1975: 178.
6.Garraty G. et al. Spontaneous agglutination of red cells whith a
positive direct antiglobulin test in varius media. Transfusion
1984. 24:214-217.
7.Issit P.D. Applied Blood Group Serology 3rd Edition,
Montgomery Scientific Publications, Miami, Florida, USA, 1985,
Chapter10.
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Listado de Antibiticos disponibles
A N TIM IC R O B IA L A G E N T C O D E P O T E N C Y R E S IS T A N T S U S C E P T IB LE
A M IK A C IN A K 30 m cg 14 m m 17 m m
A M O X - C LA V U LA N IC A M C 20/10 m cg 13 m m (19)* 18 m m (20)*
A M O X IC ILLIN A X 25 m cg 11 m m 14 m m
A M P IC ILLIN A 10 m cg 13 m m (28)* 17 m m (29)*
A M P IC ILLIN (E N T E R O C O C O ) A 10 m cg 16 m m (18)*** 17 m m (26)***
A M P -S U LB A C T A M S A M 10/10 m cg 11 m m (19)**** 15 m m (20)****
A Z IT H R O M IC Y N A Z T 15 m cg 13 m m (11)**** 18 m m (12)****
A Z T R E O N A M A Z 30 m cg 15 m m (25)**** 22 m m (26)****
C A R B E N IC ILLIN C B 100 m cg 19 m m (13)** 23 m m (17)**
C E F A D R O X IL (1) C P H 30 m cg 14 m m 18 m m
C E F A M A N D O LE (2) C M A 30 m cg 14 m m (20)**** 18 m m (24)****
C E F A Z O LIN (1) C Z 30 m cg 14 m m 18 m m
C E F E P IM E (4) C P M 30 m cg 14 m m (30)& 18 m m (31)&
C E F IX IM E (3) C F M 5 m cg 15 m m (20)****(30)& 19 m m (21)****(31)&
C E F O P E R A Z O N E (3) C F P 75 m cg 15 m m 21 m m
C E F O T A X IM E (3) C T X 30 m cg 14 m m (25)****(30)& 23 m m (26)****(31)&
C E F O X IT IN (2) C X A 30 m cg 14 m m (23)& 18 m m (28)&
C E F T A Z ID IM E (3) C A Z 30 m cg 14 m m (25)****(30)& 18 m m (26)****(31)&
C E F T R IA X O N E (3) C T R 30 m cg 13 m m (24)***(34)& 21 m m (27)***(35)&
C E F U R O X IM E (2) C X M 30 m cg 14 m m (16)****(25)& 18 m m (20)****(31)&
C E P H A LE X IN (1) C N 30 m cg 14 m m 18 m m
C E P H A LO T H IN (1) C F 30 m cg 14 m m 18 m m
C E P H R A D IN E (1) C D 30 m cg 14 m m 18 m m
C H LO R A N P H E N IC O L C 30 m cg 12 m m (17)*** 18 m m (21)***
C IP R O F LO X A C IN C IP 5 m cg 15 m m (20)****(27)& 21 m m (21)****(36)&
C LA R IT H R O M IC IN A C LR 15 m cg 16 m m (13)* (10)**** 16 m m (18)* (13)****
C LIN D A M Y C IN D 2 m cg 14 m m (15)*** 21 m m (19)***
C LO X A C ILLIN C X 1 m cg 10 m m 13 m m
C O LIS T IN C L 10 m cg 8 m m 11 m m
D IB E K A C IN D K 10 m cg 13 m m 16 m m
D O X Y C Y C LIN E D X S 30 m cg 12 m m 16 m m
E N O X A C IN E 10 m cg 14 m m (31)& 18 m m (36)&
E R IT H R O M Y C IN E M 15 m cg 13 m m (15)*** 23 m m (21)***
F LE R O X A C IN F LX 5 m cg 15 m m (18)****(28)& 19 m m (19)****(35)&
F U R A Z O LID O N E F Z 100 m cg 14 m m 17 m m
G E N T A M IC IN G E 10 m cg 12 m m 15 m m
IM IP E N E M IP M 10 m cg 13 m m 16 m m (16)****
K A N A M Y C IN K 30 m cg 13 m m 18 m m
LIN C O M Y C IN L 2 m cg 16 m m 21 m m
N A LID IX IC A C ID W 30 m cg 13 m m 19 m m
N E O M Y C IN N 30 m cg 12 m m 17 m m
N IT R O F U R A N T O IN N IT 300 m cg 14 m m 17 m m
N O R F LO X A C IN N O R 10 m cg 12 m m 17 m m
O X A C ILLIN (N E U M O C O C O P S U C E P .) O X 1 m cg 19 m m (10)* 20 m m (13)*
O X O LIN IC A C ID O 2 m cg 10 m m 11 m m
P E N IC ILLIN G (E N T E R O C O C C I) P 10 U O F 14 m m (28)* 15 m m (29)*
P E N IC ILLIN G (L.M O N O C Y T O G E N E S ) P 10 U O F 19 m m (26)& 20 m m (47)&
P H O S P H O M Y C IN F O 50 m cg 12 m m 16 m m
P IP E M ID IC A C ID P I 20 m cg 13 m m 19 m m
P IP E R A C ILLIN -T A Z O B A C T A M T Z 100/10 m cg 17 m m 21 m m (18)***
R IF A M P IC IN R 5 m cg 16 m m 20 m m
R O X IT H R O M IC IN R X T 15 m cg 13 m m 23 m m
S T R E P T O M Y C IN S 10 m cg 11 m m 15 m m
S U LF A T R IM E T H O P R IM S X 25 m cg 10 m m (15)*** 16 m m (19)***
S U LF O N A M ID E S F 250 m cg 12 m m 17 m m
S U LP E R A Z O N E S F P 30/75 m cg 15 m m 21 m m
T E IC O P LA N IN T E I 30 m cg 10 m m 14 m m
T E T R A C Y C LIN E T 30 m cg 14 m m (18)***(30)& 19 m m (23)***(38)&
T O B R A M Y C IN T B 10 m cg 12 m m 15 m m
T R IM E T H O P R IM T M P 5 m cg 10 m m 16 m m
V A N C O M Y C IN V A 30 m cg 16 m m (14)* 17 m m (15)*
V A N C O M Y C IN (E N T E R O C O C O ) V A 30 m cg 14 m m 17 m m
* S T A P H Y LO C O C C U S ** P S E U D O M O N A S
*** S T R E P T O C O C C U S **** H A E M O P H ILU S
& N .gonorrhoeae
() G E N E R A T IO N
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Phone: + (562) 379 2100
FAX: + (562) 379 1634
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MISCELANEOS
HEMORRAGIAS FECALES OCULTAS
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Santiago CHILE
HEMORRAGIAS OCULTAS
Test del Guaiaco para la deteccin de hemorragias fecales ocultas.
FUNDAMENTOS
El test de Hemorragias ocultas VALTEK se basa en la
denominada reaccin del Guaiaco, en la cual, cuando una
muestra de deposicin contiene una determinada cantidad
de sangre, esta ltima reacciona con una formulacin
especial que contiene guaiaco, que se encuentra
impregnado en la zona de reaccin de la tarjeta,
produciendose una reaccin de oxidacin de un compuesto
del tipo fenlico (cido alfa guaiaclico) tras la cual se
genera un compuesto de conjugacin de color azul.
Es la hemoglobina la que ejerce una accin del tipo
peroxidasa y facilita la oxidacin de este compuesto junto al
perxido de hidrgeno presente en la solucin reveladora.
ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS
Conservados entre 15 y 30C., protegidos de la luz y de
fuentes de calor, estables hasta la fecha de caducidad
indicadas en las etiquetas.
Tarjetas reactivas:
Tarjetas conteniendo papel de alta calidad, impregnado en
solucion alcohlica de guaiacol.
Revelador:
Perxido de hidrgeno en solucin alcohlica estabilizada.
MUESTRA REQUERIDA
Para el test de hemorragias ocultas VALTEK, slo es
necesaria una pequea cantidad de deposicin, similar al
tamao de una cabeza de fsforo, finamente aplicada sobre
las areas indicadas en cada tarjeta.
Una vez aplicada la muestra sobre la tarjeta, puede ser
revelada hasta dentro de un plazo de 10 das.
Debido a que algunas hemorragias gastrointestinales son
intermitentes, es altamente recomendable que cada paciente
repita el procedimiento en tres movimientos intestinales
sucesivos, procurando en cada uno de ellos obtener
muestras de dos diferentes partes de la deposicin.
PREPARACION DEL PACIENTE
De ser posible es recomendable que el paciente se someta a
una dieta libre de carnes y de alto contenido en residuos y
fibras, a contar de 48 horas antes de realizar el exmen y
durante el transcurso de ste.
MODO DE EMPLEO
Anotar en cada tarjeta el nombre del paciente, edad, fecha
de toma de la muestra, etc.
Obtener con las paletas provistas una cantidad de muestra
similar en tamao a la cabeza de un fsforo, aplicarla
formando una capa delgada sobre la ventanilla A, obtener
una segunda muestra de otra zona de la deposicin y
aplicarla en igual forma sobre la ventanilla B, cerrar la tarjeta.
Realizar el mismo procedimiento con los prximos dos
movimientos intestinales.
Una vez completado el perodo de examen, devolver la
tarjeta al Laboratorio para su posterior revelado.
Revelado: Abrir la tarjeta por el reverso, aplicar una gota de
agua sobre cada muestra y posteriormente, una vez
absorbida el agua, agregar dos gotas de revelador sobre
cada una de ellas. Leer los resultados a los 60 segundos.
Resultado Positivo: Cuando se observa cualquier intensidad
de color azul en la zona de reaccin.
Resultado Negativo: Ausencia total de coloracin azul en la
zona de reaccin.
OBSERVACIONES
Algunos medicamentos tales como Aspirina, anti-
inflamatorios, etc., producen algn grado de irritacin
gstrica, por lo cual se recomienda suprimirlos desde dos
das antes de comenzar a tomar las muestras.
El cido ascrbico en concentraciones superiores a 250
mg/da, podra eventualmente producir falsos positivos, al
igual que dosis teraputicas de hierro.
La efectividad del mtodo puede ser controlada aplicando
sobre el papel impregnado una gota de una dilucin de
sangre total 1: 5.000 en agua, y revelando posteriormente.
BIBLIOGRAFIA
1. Winawer, S.L., et al. Gastroenterology 70 (783), 1976.
2. Layne, E.A., et al., Ann of Int. Med., 94 (774), 1981.
3. Greegor, D.H., Cancer 28 (131), 1971.
Ostrow, J.D., Mulvaney, C.A., Hansell, J.R., and Rhodes,
R.S., Am. J. Digest. Dis. 18 (930), 1973.

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