ALUMNA : BONIFACIO ESPINOZA, Jherson CICLO : 2014 - I
TINGO MARIA 2014
I. INTRODUCCION
Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin in vitro de las bacterias, para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio bioqumico e inmunolgico, al contar con material en cantidad suficiente. Por ello constare de lagunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes, condicione de aero-anaerobiosis, etc.), que sern las ms idneas para la bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una de ellas en particular, en la bacteriologa sistemtica.
Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento que tratan de aumentar el nmero de bacteria existentes , si consideramos que se encuentran en cantidad muy exigua, a la vez que inhiben la flora de asociacin acompaante( y de aislamiento ( que tienen por fin conseguir una colonia o clon, es decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades); los dos primeros son principalmente lquidos y los segundos, slidos. Los medios selectivos son aquellos que poseen algn componente que permite o no le crecimiento de una especie bacteriana, carcter de importancias para su identificacin, y los diferenciales, aquellos que las diversas especies que hay que testar alteran de forma distinta, por lo que suelen llevar indicadores (sustancias que varan su coloracin segn el pH del medio) u otros ndices de reacciones qumicas definidas.
OBJETIVOS
II. REVISION BIBLIOGRAFICA.
Factores mecnicos: Las superficies epiteliales de la piel y de las mucosas constituyen barreras que resultan ms o menos impermeables a las bacterias. La impermeabilidad de la piel es mayor que en la mayora de las mucosas. Cuando se altera la integridad de la superficie epitelial, pueden desarrollarse infecciones subcutneas. Las bacterias que causan ms frecuentemente estas infecciones son las que existen habitualmente en la superficie cutnea, folculos pilosos y glndulas sudorparas en la piel, es decir los estafilococos.
Factores qumicos: La acidez de las secreciones gstricas mantienen sin duda la esterilidad habitual del estmago. El Ph bajo de la piel (3-5), debido en gran parte a los productos cidos del metabolismo bacteriano, frena sin duda el crecimiento de muchos microorganismos que toman contacto con sus superficie.
Factores microbianos: La flora de la regin farngea presenta problemas peculiares para el aislamiento e identificacin de microorganismos, por lo tanto se refiere a los componentes de la flora normal como a microorganismos con accin patgena. Se encuentran ampliamente distribuidos por la naturaleza, y a menudo forman parte de la flora bacteriana de la piel y el tracto respiratorio superior; muchas de las especies que se encuentran en el hombre son comensales. La especie predominante patgena para el hombre es el staphylococcus aureus, constituye la causa ms comn de las infecciones supurativas para el hombre. El aislamiento de S. aureus a partir del exudado farngeo y exudado de piel, no tiene importancia diagnstica, ya que se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe, por lo que no tiene significado clnico. PROCEDIMIENTO:
A). Raspado de piel 1. Limpiar y esterilizar el rea a trabajar con fenol al 5% 2. Prender el mechero fischer cerca de donde se va a trabajar, si es posible colocar otro 3. Humedecer el hisopo en solucin salina estril, pasarlo sobre la superficie de la piel (con o sin pelo) 4.- Descargar el hisopo en dos cajas de petri con el medio ya preparado. (Es recomendable que para cada dos cajas se utilice un solo hisopo con muestra). No retires completamente las tapas de losmedios de cultivo para evitar que se contaminen 5.- quemar el hisopo y tirarlo. 6.- Esteriliza el Asa de platino hasta el rojo vivo, enfralo introducindolo en un extremo del Agar 7.- Realiza el sembrado de los microorganismos por el mtodo de estra utilizando el asa y como se muestra en la figura. Evita destapar completamente la tapa de los medios de cultivo. 8- Repetir el mismo proceso con otro hisopo estril y con solucin salina para otras dos cajas . siembra por estra utilizando el Asa de platino y as hasta que se terminen se sembrar todos los medios preparados. 9.- Incubar a 37C por 24-48 horas y observar resultados.10.- Repite el mismo procedimiento pero ahora toma muestra de la faringe con hisopos estriles en las zonas afectadas como: amgdalas,pared posterior de la faringe, en general cualquier rea que manifiesta signos de inflamacin, exudados y lceras, procurando no tocar con el hisopo la lengua.
B) CULTIVO DE BACTERIAS A PARTIR DE UN FROSTIS FARNGEO
OBJETIVOS Comprender el concepto de colonia bacteriana, medio de cultivo y halo de inhibicin Conocer las tcnicas de siembra y cultivo de bacterias Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulacin de materiales biolgicos. Comprender la importancia de la eliminacin de los residuos orgnicos Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiologa y los procedimientos para su utilizacin MATERIALES Depresor de lengua Torunda o hisopo estril Placas de agar-sangre Asa de siembra Rotulador de vidrio Cinta adhesiva Contenedor de residuos orgnicos
DESARROLLO DE LA PRCTICA Antes de empezar No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biolgica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones. Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor especial. Estos contenedores sern llevados posteriormente a una planta de tratamiento de residuos biolgicos, donde sern incinerados. Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra. Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para evitar su contaminacin o la nuestra. Al acabar la prctica, se deben lavar bien las manos.
Toma de la muestra Se abre con cuidado, por un extremo, el depresor de madera, sin tocar el otro extremo para mantenerlo estril. Distribuidos por parejas, uno de los miembros de la pareja sujeta con el depresor la lengua del otro, colocndola pegada al suelo de la boca, manteniendo despejada la abertura bucal. CON CUIDADO, se introduce una torunda y se tocan suavemente las amgdalas, en donde se encuentran bacterias, intentando evitar el contacto con la lengua u otras zonas. Es normal que se provoque un reflejo de arcada. En este caso, se separa la torunda y se vuelve a intentar. Al finalizar, se tira el depresor al contenedorde desechos orgnicos. Se tapa la torunda y se rotula con el nombre del donante y la fecha, indicando con una F, que se trata de un frotis farngeo.
SIEMBRA : A continuacin se toma una placa de agar-sangre y se procede a la siembra del material recogido con la torunda o Hisopo. Se extrae la funda de la torunda y se pasa SUAVEMENTE por la superficie, cubriendo el rea sealada en el dibujo como (A) Al finalizar, se tira el hisopo al contenedor de desechos orgnicos.
AISLAMIENTO
Para intentar que las colonias crezcan separadas tomamos un asa de siembra y se realizan resiembras en dos zonas: (B) Tocando con el asa la zona (A) se realiza una lnea zig-zagueante SUAVEMENTE sobre la superficie (no hay que perforar la superficie del agar-sangre) (C) Sin tocar las anteriores zonas. Se tapa y se sella la placa con cinta adhesiva. Se rotula la tapa indicando el nombre del donante, su grupo-clase, la fecha y la F (de frotis farngeo).
INCUBACIN Y OBSERVACIN Se llevan las placas a incubar a 37C (temperatura corporal), durante 24 horas. Tras este perodo se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano. Al finalizar la prctica se entregan las placas al profesor para que sean destruidas junto con el resto de material empleado.
OBSERVACIN El medio de cultivo agar-sangre es un medio nutritivo general, no selectivo, en el cual pueden crecer casi todos los tipos de microorganismos. Su nombre deriva de que contiene un 5-10% de sangre desfibrinada (no coagula) extrada de caballo, conejo o, sobre todo, de carnero. Las bacterias existentes en la faringe pueden ser de dos tipos: Flora bacteriana propia o normal, de vida saprofita (crecen sobre restos de comida). Flora patgena, que provoca enfermedades (especialmenteStreptococcus pyogenes, responsable de la faringitis aguda, la fiebre reumtica, angina estreptoccica, escarlatina, erisipela)
Al tomar una muestra de la faringe, las bacterias existentes empiezan a dividirse. De una bacteria se forman miles o millones, dando lugar a una colonia, visible a simple vista.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS:
A) REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS
GELOSA SANGRE Para el aislamiento, cultivo y deteccin de actividad hemoltica de Staphylococcus, Streptococcus y otros microorganismos fastidiosos. Se observan colonias blancas casi grises, Grandes, convexas de consistencia butircea, Presentan bordes regulares. Se observa que Presenta hemlisis. Las colonias en medio slido son redondeadas, uniformes, Estos crecen rpidamente a 37 C pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura ambiente (20 C). MANITOL SAL AGAR (MSA) Se utiliza como medio selectivo, para cultivar y enumerar especies clnicas de estafilococos El manitol cuando es utilizado por los microorganismos, vira de su color original rojo a amarillo. Se observan colonias chicas, blancas, convexas, de consistencia butircea , presentan bordes irregulares. S. aureus Manitol sal Colonia amarilla S. epidermidis Manitol sal Colonia incolora
AGAR VOGEL Y JONSON (AVJ) Para la deteccin de Staphylococcus aureus coagulasa-positivo, se observan colonias negras Pequeas. bordes irregulares con halo amarillo. Para S. epidermidis y otros Pequeas, negro-grisceos, sin halo, El medio presenta un vire de rojo plido a amarillo.
ESTAFILOCOCO S110 S110 Colonias blancas un poco amarillentas, Se observan colonias chicas, convexas, De consistencia butircea y bordes Regulares.
B) DESCRIPCIN DEL TIPO DE COLONIAS OBTENIDAS Observar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las siguientes caractersticas: Forma: Puntiforme, Circular, Rizoide, Irregular, Filamentosa. Tamao: Grande (ms de 3Mm.), Mediana (2-3Mm.), Pequea (1-2 Mm.) Color: Reportar el color final despus de la incubacin Borde: Entero, Ondulado, Lobulado, Filamentoso, Ondeado Elevacin: Plano, Elevado, Convexo, Pulvinado, Umbonado Superficie: Suave, Brillante, Rugosa, Plegada, Seca, Polvorienta
III. MATERIALES Y METODOS.
3.1. Lugar y Fecha
La practica acerca de aislamiento de bacterias lo realizamos en el laboratorio de sanidad animal de la facultad de zootecnia de la Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS - Tingo Maria) ubicado en el distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Huanuco. Geogrficamente, esta zona se encuentra situada entre las cordilleras central y oriental. Esta considerada como bosque Tropical. Ubicado a una latitud sur 9 17 58 y longitud oeste 76 01 07 a 660 m.s.n.m. el clima que presenta es tropical hmedo, temperatura media anual de 24C, tiene un precipitacin pluvial de 3.660 mm y una humedad relativa de 84% .
3.2. Materiales Asa de COLLE Mechero Placas Petri con la muestra de la bacteria respectiva Plumn indeleble Tubos de caldo nutritivo Guantes quirrgicos Mascarilla 3.3. Mtodos
El mtodo utilizado en la prctica fue terico prctico con las adecuadas indicaciones del encargado del curso el profesor Tafur Zeballos.
IV. RESULTADOS.
V. DISCUSION
En la preparacin de medios de cultivos en forma liquida (caldo nutritivo) y slida (gelificantes) se trata es de conseguir un medio que rena las condiciones fisiolgicas necesarias para que las clulas se desarrollen. Los parmetros ms importantes a tener en cuenta son la presencia de agua, la temperatura, el pH y el oxgeno. Los medios de cultivo pueden ser slidos, semislidos o lquidos, con composicin qumica conocida o indefinida.
VI. CONCLUCIONES
Al finalizar el trabajo prctico estamos en capacidad y condiciones de:aislar y Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de medios de cultivo deshidratados. El medio de cultivo lquido (caldo nutritivo) y gelificante fue preparado especficamente para el aislamiento de salmonella shigella bacteria estudiada y posteriormente aislada.