Materiales y mtodos:

Para realizar el trabajo en cuestin se seleccion una levadura incgnita provista por la
ctedra a la cual se le registraron las siguientes caractersticas fsicas:
- Color
- e!tura
- "lor
#egistrada esa informacin se continu con el e!perimento$ realizndose la identificacin
molecular de la siguiente manera:

%!traccin rpida de &'(:
- )e transfirieron *+ l de PCR MIX a un tubo eppendorff
- )e coloc en el fondo del tubo una pe,ue-a muestra de la colonia incgnita
seleccionada$ .aciendo uso de un palillo estril para manipular dic.a muestra
- %l preparado fue centrifugado durante /0 segundos 1un spin2$ asegurndose ,ue en
la microcentrfuga los tubos estn balanceados
- Por 3ltimo se coloc en el termociclador$ en el cul se mantuvo durante /+4 a
567C para provocar la lisis celular y la subsiguiente liberacin de &'( al medio acuoso8
9inalizada la e!traccin se realiz la amplificacin por PC# de la regin :):
-)e retir el tubo del termociclador y se le agregaron *+ ;l de solucin de enzima
ta, polimerasa 1/$<= v>v2
-)e .omogeneiz el tubo y se le dio un spin8
- )e coloc el tubo en el termociclador y se ejecut el programa con los siguientes
pasos:
Pasos para la amplificacin por PC# de la regin :):
/- 'esnatralizacin inicial: +4 a 567C
*- 'esnaturalizacin: /4 a 5?7C
?- @ibridizacin: *4 a ++7C
6- %!tensin: *4 a A*7C
+- %!tensin final: /04 a A*7C
Para los pasos *$ ?$ y 6 se realizaron 60 ciclos8
&l finalizar el programa de PC#$ los tubos se retiraron y fueron conservados a 67C .asta su
posterior utilizacin8
#9BP-:):
-%n ? tubos eppendorff se colocaron /+ ;l del producto amplificado anteriormente
1regin :)2 y +;l de los #9BP M:C correspondientes a cada una de las ? enzimas de
restriccin a emplear 1Cfo:$ @ae::: y @inf:28
-)e .omogeneiz cada tubo y se le dio un spin8
-Por 3ltimo se daj incubar los tubos a ?A7C en estufa durante *6 .s8 ranscurrido
este tiempo se conservaron los tubos a 67C .asta su posterior utilizacin8