Identificao de Flavonoides e Taninos extrados do

extrato do Abacateiro e extrato de Hamamlis

FARMCIA - 6 PERODO

Relatrio apresentada ao Curso de
Farmcia Noturno do Centro
Universitrio Hermnio Ometto, como
parte integrante da Disciplina de
Fitoqumica.


Prof. Dra. Fernanda Oliveira de Gaspi







ARARAS/SP
AGOSTO/2014

1. INTRODUO
A pesquisa fitoqumica tem por objetivos conhecer os constituintes qumicos
de espcies vegetais ou avaliar a sua presena. Quando no se dispe de estudos
qumicos sobre a espcie de interesse, a anlise fitoqumica preliminar pode indicar
os grupos metablicos secundrios relevantes na mesma. Caso o interesse seja
restrito a uma classe especfica de constituintes os s substancias responsveis por
uma certa atividade biolgica, a investigao dever ser direcionada para o
isolamento e a elucidao estrutural das mesmas (SIMES, 2001).
1. A Extrao
Antes de executar uma extrao, deve-se levar em considerao uma srie
de fatores que interferem nesta operao, tais como as caractersticas do material
vegetal, o seu grau de diviso, o meio extrator (solvente) e a metodologia (SIMES,
2001).
Conforme foi citado no item anterior, o grau de diviso do material ir
influenciar diretamente a eficincia da extrao. A estrutura histolgica das diversas
partes da planta bastante heterognea; existem rgos, como as razes e os
caules, cujos tecidos esto extraordinariamente compactados (xilema), ao passo que
em folhas e flores os tecidos se apresentam com textura mais delicada. Como o
poder de penetrao dos solventes depende, entre outros fatores, da consistncia
dos tecidos que formam o material a extrair, necessrio considerar que quanto
mais rgido for o material menor deve ser sua granulometria (SIMES, 2001).
O solvente escolhido deve ser o mais seletivo possvel. graas
seletividade que se pode extrair apenas as substncias desejadas ou em maior
quantidade. Como a seletividade depende da polaridade, o conhecimento do grau de
polaridade do grupo de substncias que se deseja preferencialmente extrair
determina o solvente ou mistura solvente que mais se aproxima do timo de
seletividade para aquela extrao. Na escolha do solvente, alm dos fatores
relacionados eficincia do processo extrativo devem ainda ser considerados a
toxicidade e/ou riscos que seu manuseio representa, a estabilidade das substncias
extradas, a disponibilidade e o custo do solvente (SIMES, 2001).
Os fatores relacionados aos mtodos de extrao dizem respeito agitao,
temperatura e ao tempo necessrio para execut-los. Levando-se em conta que os
processos de extrao dependem, em grande parte, de fenmenos de difuso e que
a renovao do solvente em contato com as substncias a dissolver desempenha
um papel de grande influncia na velocidade da dissoluo, pode-se concluir que a
agitao pode abreviar consideravelmente a durao de um processo extrativo
(SIMES, 2001).
O tempo de extrao varia em funo da rigidez dos tecidos do material
vegetal, do seu estado de diviso, da natureza das substncias a extrair, do solvente
e do emprego ou no de temperatura e/ou agitao. O aumento da temperatura
provoca um aumento da solubilidade de qualquer substncia, motivo pelo qual os
mtodos de extrao a quente so sempre mais rpidos do que aqueles realizados
temperatura ambiente. Entretanto, o calor nem sempre pode ser empregado, j que
muitas substncias so instveis em altas temperaturas (SIMES, 2001).
Na escolha do um mtodo extrativo, deve-se avaliar a eficincia, a
estabilidade das substncias extradas, a disponibilidade dos meios e o custo do
processo escolhido, considerando a finalidade do extrato que se quer preparar.
Como a composio qumica das plantas extremamente complexa, muito
frequentemente ocorre a extrao concomitante de vrios tipos de substncias,
farmacologicamente ativas ou no, desejadas ou no. Por isso, deve-se
primeiramente definir, com a maior preciso possvel, o que se deseja obter. De
acordo com essa definio e levando-se em considerao os fatores envolvidos no
processo extrativo, pode-se escolher o mtodo e o solvente que sero empregados
(SIMES, 2001).
2. A Caracterizao
Classicamente, a caracterizao dos principais grupos de substncias
vegetais de interesse tem sido conseguida pela realizao de reaes qumicas que
resultem no desenvolvimento de colorao e/ou precipitado caracterstico. Para
algumas reaes, o extrato pode ser empregado diretamente, enquanto que, em
outras, o solvente deve ser previamente eliminado. Usualmente, estas reaes so
realizadas em tubo de ensaio ou placa de toque, podendo tambm ser utilizada a
deteco cromatogrfica com reagentes especficos (SIMES, 2001).
A realizao de reaes de caracterizao diretamente no extrato bruto pode
eventualmente mascarar o resultado. O fracionamento do extrato e a realizao dos
testes com as fraes obtidas possibilitam geralmente reaes mais ntidas
(SIMES, 2001).
3. Os Flavonoides
Os flavonoides esto entre os compostos naturais mais disseminados em
plantas, registrando-se mais de dois mil deles, tanto em seu estado livre quanto
como glicosdeos. As principais categorias estruturais gerais so as flavonas, as
flavanonas, os flavonis, as antocianidinas e as isoflavonas. Em alguns casos, o
anel heterocclico de seis membros substitudo por um anel de cinco membros
(auronas) ou aparece numa forma isomrica de cadeia aberta (chalconas). Foram
atribudas diferentes funes na natureza a vrios flavonoides: compostos
antimicrobianos, produtos de estresse de metablitos ou molculas sinalizadoras
(ROBBERS, 1997).
O emprego de flavonoides em teraputica vasto e ainda emprico, uma vez
que a prtica de uso mais antiga que o desenvolvimento de anlises
farmacolgicas modernas. Alguns medicamentos contm flavonoides, indicados em
particular, para o tratamento de doenas circulatrias, hipertenso e agindo como
cofator da vitamina C (SIMES, 2001).
As folhas da espcie vegetal Persea americana, conhecida vulgarmente pelo
nome de abacateiro, constituem insumo farmacutico muito utilizado na elaborao
de extratos com fins teraputicos. Este fato deve-se principalmente as virtudes
diurticas referidas a princpios presentes nas folhas da planta, como os flavonoides.
(CARDOSO, 1940, apud GUTIERREZ, p. 29).
A farmacopeia brasileira inclui o extrato fluido do abacateiro na sua primeira
e segunda edio. A primeira edio recomenda como liquido extrator mistura de
lcool e gua na proporo de 2:5, ao passo que a segunda edio determina a
extrao em gua fervente, acrescentando pequena quantidade de lcool no fim da
percolao com finalidade conservante. (DIAS, 1926, apud GUTIERREZ, p. 30).
Extrao de Flavonoides
Para a extrao utilizam-se geralmente solventes com polaridade crescente:
a primeira extrao, com solvente apolar, retira leos, gorduras, esteris e
pigmentos facilitando a extrao posterior dos flavonoides. A segunda extrao com
solvente um pouco mais polar (clorofrmio, diclorometano, acetato de etila ou ter
etlico) permite recuperar as agliconas livres pouco polares tais como flavonas,
flavonis, flavanonas, dihidroflavonis, isoflavonas e outras agliconas com alto grau
de metilao. Aumentando a polaridade do solvente (acetona, metanol, gua) se
extraem as agliconas poli-hidroxiladas, flavonas e flavonis mais polares, auronas,
chalconas. Por ltimo a extrao com gua quente arrastar os heterosdeos mais
polares, tais como os poliglicosdeos, flavonodiis, catequinas e prociandinas, e os
aucares (SIMES, 2001).
Caracterizao de Flavonoides
A caracterizao pode ser realizada diretamente no farmacgeno
(histoqumica) ou em extratos vegetais, por ensaios cromticos, cromatogrficos,
espectroscpicos ou fotomtricos. Os ensaios com extrato vegetais so os mais
utilizados, pois permitem a avaliao simultnea de vrios constituintes. Os ensaios
cromticos apresentam importncia como estgio preliminar de anlise e, em alguns
casos, podem ser empregados s dosagens dos respectivos derivados flavnicos.
Em alguns casos possvel distinguir entre as diversas classes de flavonoides. As
cores obtidas variam conforme o ncleo, o numero e a disposio dos substituintes
hidroxilados. Alguns exemplos de ensaios cromticos esto apresentados a seguir
(SIMES, 2001).
Reao da cianidina, de Shinoda ou hidrogenao: consiste em adicionar
soluo alcolica cida da substncia um pequena fragmento de magnsio. Essa
reao baseia-se no fato de que os derivados flavnicos de cor amarela reduzem-se
adquirindo colorao avermelhada ou, no caso dos antocinicos, azulada. Esse
ensaio produz reao negativa para chalconas e isoflavonas (SIMES, 2001).
Reao citro-brica ou Reativo de Wilson: as solues cetnicas de
flavonas, flavonis e chalconas adquirem tons amarelados e fluorescncia amarelo-
esverdeada quando os cidos ctrico e brico so dissolvidos em acetona, ou
solues vermelho-alaranjado quando esses mesmos cidos so dissolvidos em
anidrido actico (Reativo de Dimroth). O ensaio negativo com as flavanonas e
isoflavonas (SIMES, 2001).
Reao com H
2
SO
4
concentrado: os compostos flavnicos formam sais de
oxnio com cido sulfrico concentrado que podem ser precipitados pela adio de
gua. As flavonas e flavonis formam solues fortemente amareladas, as
flavanonas, laranja a vermelho e as chalconas e auronas colorao vermelho a
carmim (SIMES, 2001).
4. Os Taninos
Os taninos compreendem um grande grupo de substncias complexas muito
disseminadas no reino vegetal; em quase todas as famlias botnicas h espcies
que contm taninos. Estes, quando ocorrem em grande quantidade, geralmente se
localizam em determinados rgos da planta como as folhas, os frutos, o crtex ou o
caule (ROBBERS, 1997).
Os taninos costumam ser divididos em duas classes qumicas, com base na
identidade dos ncleos fenlicos existentes e na maneira como se unem. Os
membros da primeira classe so o cido glico e o cido hexaidroxidifnico com
seus derivados esterificados com glicose. Como tais steres so facilmente
hidrolisados, produzindo os cidos fenlicos e o acar, so conhecidos como
taninos hidrolisveis. Os taninos no hidrolisveis ou condensados compem a
segunda classe (ROBBERS, 1997).
A folha de hamamlis a folha dessecada de Hamamelis virginiana Linn
(Fam. Hamamelidaceae). (ROBBERS, 1997).
A folha de hamamlis contm hamamelitanino e um segundo tanino que
parece derivar do cido glico; contm tambm um acar hexose, um leo voltil,
um principio amargoso, cido glico e oxalato de clcio. Tem propriedades
adstringentes e hemostticas. (ROBBERS, 1997).
Extrao de Taninos
Vrios autores tem recomendado o uso de misturas de solventes como p.ex:
metanol: gua (por aquecimento ou temperatura ambiente); metanol: cido e
acetona: gua. A presena de gua em solventes orgnicos como metanol e
acetona pode aumentar o rendimento da extrao de compostos fenlicos.
Hagerman (1988) confirmou o aumento significativamente superior na extrao de
taninos, tanto condensado como hidrolisveis, pela extrao com acetona-gua, em
relao a metanol-gua. Pode-se dizer ainda que a extrao empregando metanol-
gua, serve com finalidade qualitativa, enquanto que com acetona-gua possui
finalidade quantitativa (SIMES, 2001).
Caracterizao de Taninos
Os taninos podem ser caracterizados por reaes de colorao ou de
precipitao. Como a presena de lcool pode interferir, ele deve ser removido. As
reaes tradicionais de precipitao com gelatina, ou p de pele, sais de alcaloides
e metais pesados so ainda utilizadas para a deteco de compostos desta classe.
Taninos hidrolisveis e condensados podem ser diferenciados atravs da reao de
Stiansny (HCl concentrado e formol), ocorrendo precipitao destes ltimos; no
sobrenadante, pode-se detectar a presena dos taninos hidrolisveis atravs, por
exemplo, da reao com cloreto frrico, com desenvolvimento de cor azul (SIMES,
2001).














2. OBJETIVO
Extrair flavonoides e taninos dos extratos de Abacateiro e Hamamlis, e
caracteriz-los por 8 (oito) mtodos, atravs da observao da cor ou formao de
precipitado.

















3. MATERIAIS E MTODOS
3.1. MATERIAIS
Chapa Eltrica
Papel de Filtro
Funil
Bquer
Tubo de Ensaio
Luz UV
Extrato de Abacateiro
Extrato de Hamamlis
gua Destilada
Soluo Etanol:gua (4:1)
cido Clordrico Concentrado (HCl)
Fragmento de Magnsio Metlico
Cloreto Frrico (FeCl
3
) 2%
Cloreto de Alumnio 5%
Reativo de Wilson
cido Sulfrico
Hidrxido de Sdio (NaOH) 1N
Formol
cido Actico Glacial
Acetato de Chumbo 10%

3.2. METODOLOGIA
1. Extrao Flavonoides
Pesou-se 2 g do Extrato de Abacateiro em um bquer, adicionou-se 20 mL
de soluo etanol:gua (4:1). Aqueceu-se por 5 minutos em Chapa Eltrica, deixou
amornar e filtrou.

2. Extrao Taninos
Pesou-se 1 g do extrato de Hamamlis em um bquer, adicionou-se 30 mL
de gua destilada. Aqueceu-se at ferver e deixou amornar para ser filtrado.
3. Reaes de Caracterizao
A. REAO DE SHINODA
Colocou-se 2 mL de cada extrato em seu determinado tubo de ensaio,
acrescentou-se 0,5 mL de HCl concentrado. Adicionou-se um fragmento de
Magnsio metlico, observou-se o resultado.
B. REAO DO CLORETO FRRICO
Colocou-se 1 mL de cada extrato em seu determinado tubo de ensaio,
acrescentou-se 4 mL de gua destilada e 2 gotas de FeCl3 2%. Observou o
resultado.
C. REAO DO CLORETO DE ALUMNIO
Em um papel de filtro, aplicou-se duas gotas do extrato em duas reas,
colocou-se sobre uma das manchas uma gota da soluo etanoica de Cloreto de
Alumnio 5%. Aps a evaporao do solvente, observou-se sob luz UV.
D. REAO DE WILSON
Colocou-se 1 mL de cada extrato em seu determinado tubo de ensaio,
adicionou-se 3 gotas do reativo de Wilson. Observou a colorao e depois sob luz
UV.
E. REAO COM CIDO SULFRICO
Colocou-se 1 mL de cada extrato em seu determinado tubo de ensaio,
adicionou-se 3 gotas de cido Sulfrico. Observou-se o resultado.
F. REAO COM HIDRXIDOS ALCALINOS
Colocou-se 1 mL de cada extrato em seu determinado tubo de ensaio,
adicionou-se 4 mL de gua destilada e 15 gotas de NaOH 1N. Observou-se o
resultado.
G. REAO DE STIASNY
Colocou-se 1 mL de cada extrato em seu determinado tubo de ensaio,
adicionou-se 3 gotas de formol e 2 gotas de cido Clordrico. Observou-se o
resultado.
H. REAO COM ACETATO CIDO DE CHUMBO
Colocou-se 2 mL de cada extrato em seu determinado tubo de ensaio,
adicionou-se 4 mL de cido actico glacial e 2 mL da soluo de Acetato de Chumbo
10%. Observou o resultado.





















4. RESULTADOS E DISCUSSO
Aps realizarmos as reaes foram obtidos os seguintes resultados:
REAES ABACATEIRO HAMAMLIS
SHINODA
Rsea-avermelhada
(positivo p/ Flavonis)
No ocorreu alterao
CLORETO FRRICO
Verde-acastanhado
(positivo p/ Flavonis e
Flavanonas)
Azul
(positivo p/ taninos
hidrolisveis)
CLORETO DE
ALUMNIO
No ocorreu alterao No ocorreu alterao
WILSON No ocorreu alterao No ocorreu alterao
AC. SULFRICO
Vermelho-carmim
(positivo p/ Chalconas e
Isoflavonas)
No ocorreu alterao
HIDRXIDOS
ALCALINOS
Amarela
(positivo p/ Flavonis)
Amarela-escura
(positivo p/ Flavonis)
STIASNY No ocorreu alterao
Precipitado
(positivo p/ taninos
condensados)
ACETATO AC. DE
CHUMBO
No ocorreu alterao No ocorreu alterao
Figura 1: Tabela dos resultados das reaes.
possvel por meio de reaes de caracterizao, diferenciar flavonoides e
taninos utilizando a observao das cores que so obtidas em cada ensaio, para as
amostras: Extrato de Abacateiro e Extrato de Hamamlis.
Na reao de Shinoda onde so adicionados Magnsio e cido Clordrico,
os derivados flavnicos que so de cor amarela se reduzem apresentando cor
avermelhada, sendo negativos para Chalconas, Isoflavonas e Taninos. Os
flavonoides sofrem reduo pelo hidrognio liberado na reao do Magnsio com o
cido Clordrico, observando o aparecimento de cor vermelha (Abacateiro).
A reao com o Cloreto Frrico baseia-se na mudana de cor, pela reao
dos taninos e flavonoides com este reagente. O resultado foi positivo para taninos
hidrolisveis (Hamamlis), pois apresentou o desenvolvimento de colorao azul, e
positivo para flavonoides (Abacateiro), onde observou a mudana e o
desenvolvimento da colorao verde.
Para os testes de reao com Cloreto de Alumnio e Reao de Wilson os
testes foram negativos, tanto para flavonoides quanto para taninos, pois a
intensificao de fluorescncia da mudana de cor de verde amarelado no ocorreu
para as amostras analisadas, o que pode ser devido a utilizao do comprimento de
onda no adequada para essa anlise.
A amostra de Abacateiro apresentou-se positivo para Chalcona e
Isoflavonas atravs da reao de cido Sulfrico, onde pode se observar a alterao
de cor para vermelho carmim, mas o teste apresentou-se negativo para taninos
(Hamamlis).
As reaes com Hidrxido de Sdio so muito utilizadas para a identificao
de fenis, como os flavonoides so polifenis, estas reaes podem ser utilizadas
nas determinaes dos mesmos. Os fenis reagem com substncias alcalinas, neste
caso o NaOH, formando fenxidos, que sofrem facilmente oxidao pelo ar,
alterando sua colorao para amarelo confirmando ser positivo para flavonoides e
taninos. O resultado desse teste foi de difcil visualizao, devido a colorao do
extrato, por ser muito escuro, dificultou um pouco a observao da cor amarela,
porm foi possvel verificar.
Para a reao de Stiasny, o teste de caracterizao para o grupo de
flavonoides apresentou-se negativo, no ocorrendo precipitao desejada, sendo
apenas positiva para a classe de taninos condensados (Hamamlis).
J para a reao com Acetato cido de Chumbo o teste foi negativo tambm
tanto para flavonoides, quanto para taninos.
De acordo com os testes realizados foi possvel visualizar a presena de
flavonoides e taninos nas amostras analisadas. Estas so apenas suposies do
tipo de molcula flavonodica que pode estar presente nas amostras testadas.
Porm deve-se relembrar quanto inespecificidade das reaes.
5. CONCLUSO
Conclui-se que a extrao de flavonoide do extrato de abacateiro, e a
extrao de taninos do extrato de hamamlis foram sucedidas com sucesso.
A caracterizao pelos mtodos da reao do cloreto frrico, da reao do
cloreto de alumnio e da reao com hidrxidos alcalinos apresentaram mudana na
colorao, positivando a presena de flavonoides e taninos dos extratos de
abacateiro e hamamlis, respectivamente.
Nos mtodos da reao de Shinoda e a reao com cido sulfrico, s
apresentaram colorao para a amostra do flavonoide do extrato de abacateiro.
Na reao de Wilson e na reao com acetato cido de chumbo no foi
possvel a visualizao de cor.
Por fim, na reao de Stiasny, houve a caracterizao de taninos do extrato
de hamamlis.











6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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Porto Alegre/Florianpolis: Ed. Universidade/UFRGS/ Ed. Da UFSC, 2001.
ROBBERS, J.E. et al. Farmacognosia e farmacobiotecnologia. So Paulo,
Editorial Premier, 1997. 372 p.
CUNHA, A.P. Farmacognosia e fotoqumica. Lisboa : Fundao Calouste
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GUTIERREZ, M.A; OLIVEIRA, F de. Caracterizao farmacognstica da droga e
do extrato fluido de Persea americana. So Paulo, Fundao de amparo
pesquisa do estado de So Paulo.