CONTAGEM DE COLIFORMES

TCNICA DE CONTAGEM PELO NMERO MAIS PROVVEL

CURSO : Farmcia.
DISCIPLINA : Anlise bromatolgica
PROFESSORA:.
ANCADA :
.
BOA VISTA/RR
05/06/2014
INTRODUO
Seg!n"o a INS#RU$%O NOR&A#I'A N( )*+ iog!rte , -ro"!tos obti"o basicamente com leite+
s!bmeti"os a .ermenta/0o lctea atra1,s "a a/0o "o Stre-tococc!s t2ermo-2il!s e Lactobacill!s
b!lgaric!s+ o! a -artir "e iog!rte com o! sem a a"i/0o "e o!tras s!bst3ncias aliment4cias+ sen"o
-osteriormente aera"o e congela"o 5RASIL+ 67789.
No entanto , im-ortante manter o e:!il4brio "estas bact,rias -ara :!e o -ro"!to -ermane/a em
-a"r;es a"e:!a"os "e cons!mo. < "e gran"e im-ort3ncia a -resen/a "e coli.ormes nos alimentos -ara
a in"ica/0o "e contamina/0o "!rante o -rocesso "e .abrica/0o o! mesmo -s=-rocessamento. Os
micro=organismos in"ica"ores s0o gr!-os :!e+ :!an"o -resentes em !m alimento+ -o"em in"icar a
ocorr>ncia "e contamina/0o .ecal+ sobre a -ro11el -resen/a "e -atgenos o! sobre a "eteriora/0o
-otencial "e !m alimento+ al,m "e -o"er in"icar con"i/;es sanitrias ina"e:!a"as "!rante o
-rocessamento+ -ro"!/0o o! arma?enamento.
A -resen/a se "ar geralmente -elos coli.ormes totais :!e s0o os bacilos @ram = negati1os+
oAi"ase negati1os+ ca-a?es "e crescer na -resen/a "e sais biliares o! agentes tensoati1os 5como la!ril
s!l.ato "e s"io9 e "e .ermentar a lactose a BC=B8DC+ com -ro"!/0o "e gs e al"e4"o+ em 6) 2oras. A
maior -arte "as bact,rias "o gr!-o coli.orme -ertence aos g>neros Esc2eric2ia+ Elebsiela+ Enterobacter
e Citrobacter. Po"em ocorrer no meio ambiente+ .e?es 2!manas+ em g!as com alta concentra/0o "e
mat,ria org3nica+ solo o! 1egeta/0o em "ecom-osi/0o. Princ4-io: t!r1amento e -ro"!/0o "e gs -or
bact,rias gram negati1as+ caracter4sticas "o gr!-o coli.orme. Os coli.ormes termotolerantes 5F.ecaisG9:
s0o coli.ormes ca-a?es "e se "esen1ol1er e .ermentar a lactose com -ro"!/0o "e ci"o e gs H
tem-erat!ra "e ))+C I 7+6DC em 6) 2oras. O -rinci-al com-onente "este gr!-o , Escherichia coli+ sen"o
:!e alg!ns coli.ormes "o g>nero Klebsiella e Citrobacter tamb,m a-resentam essa ca-aci"a"e.
Princ4-io: t!r1amento e -ro"!/0o "e gs+ e1i"encia"o -elo t!bo "e D!r2am.
Alg!ns testes s0o !tili?a"os -ara a1erig!ar esses ti-os "e "ese:!il4brios eJo! contamina/;es+
eAem-lo+ o m,to"o "o nKmero mais -ro11el 5&NP9+ a t,cnica "o nKmero mais -ro11el , !m m,to"o "e
anlise :!antitati1o :!e -ermite "eterminar o nKmero mais -ro11el 5nm-9 "o5s9 microrganismo5s9 al1o
na amostra+ atra1,s "a inoc!la/0o "e al4:!otas "essa amostra em !ma s,rie "e t!bos+ conten"o !m
meio "e c!lt!ra l4:!i"o a"e:!a"o ao se! crescimento. A "etermina/0o "o nKmero "e micro=organismos ,
basea"a no -rinc4-io "e :!e+ s!b"i1i"in"o a amostra em al4:!otas+ alg!mas al4:!otas 10o conter micro=
organismos e o!tras n0o+ "e-en"en"o "a :!anti"a"e "os micro=organismos na amostra. O nKmero "e
al4:!otas com micro=organismos 5t!bos com crescimento -ositi1o a-s a inc!ba/0o9 e al4:!otas sem
microrganismos 5t!bos com crescimento negati1o a-s a inc!ba/0o9 -ermite estimar+ -or clc!lo "e
-robabili"a"e+ a "ensi"a"e original "os microrganismos na amostra 5SIL'A+ 67789.
A t,cnica "o N&P , bastante 1erstil+ -ermitin"o a en!mera/0o "e "i.erentes gr!-os o!
es-,cies "e micro=organismos+ 1arian"o=se o meio "e c!lt!ra e as con"i/;es "e inc!ba/0o. S!as
-rinci-ais a-lica/;es s0o a contagem "e coli.ormes totais+ coli.ormes .ecais e E. Coli em g!a e
Alimentos. 5SIL'A+ 67789.
O eAame -ara "etermina/0o "e coli.ormes totais se -rocessa atra1,s "e 6 eta-as 5 ensaios
-res!nti1o e con.irmati1o9+ "e reali?a/0o obrigatria -ara to"os os ti-os "e amostras. A "ensi"a"e "e
coli.ormes .ecais , obti"a a -artir "e !m eAame es-ec4.ico+ a-lica"o -aralelamente ao teste -ara
con.irma/0o "e coli.ormes totais.

OBETIVO
De.inir !m -roce"imento -ara a anlise "e coli.ormes totais e termotolerantes -or .orma/;es "e
gases no t!bo "e D!r2am.
MATERIAL
ico "e !nsenL
-i-eta Mml+ M7mLl
t!bos "e ensaioL
b,:!erL
t!bo "e D!r2amL
ca-ela
est!.a
bal0o 1ol!m,trico
balan/a anal4ticaL
g!a -e-tona"a 5N6O-9L
LS#L
Cal"o ECL
Cal"o 1er"e bril2ante bile 5'9 6OL
@ra"eL
an2o=maria
Iog!rte Fr!it=om.
MTODOS
Pro"!/0o "e g!a -e-tona"a 5N6O-9: me"i!=se B+8Cg e "il!i=o em 6C7ml "e g!a "estila"a.
Pro"!/0o "e LS#: me"i!=se B+C*g e "il!i=o em M77ml "e g!a "estila"a.
Os "ois cal"os acima -ro"!?i"os+ ca"a !m em se! reci-iente+ P!ntamente com cal"o ' e EC
.oram a!tocla1a"os.
Se-aro!=se no1e 5Q9 t!bos "e ensaio+ -ara ca"a+ sen"o os cal"os '+ EC e LS#+ to"os
i"enti.ica"os+ sen"o eles M7
=M
+ M7
=6
+ M7
=B
.
Primeiramente 2o!1e 2omogenei?a/0o "e 6Cg iog!rte 5Fr!it=om+ ameiAa9 com 66Cml "e g!a
-e-tona"a 5rec!-era/0o "e micro=organismos9.
Nomogenei?o!=se o reci-iente -or a-roAima"amente C min!tos+ a -artir "a sol!/0o "a amostra
P!ntamente com a g!a -e-tona"a+ .e?=se as "il!i/;es.
Imagem 7M. Dil!i/0o seria"o
Semeo!=se+ na ca-ela+ Mml -ara t!bo "e ensaio M7
=M
5M:M79 retiro!=se Mml atra1,s "a -i-eta+
sen"o a"iciona"a ao t!bo "e ensaio+ :!e contin2a Qml "e g!a -e-tona"a+ .a?en"o a "il!i/0o M7
=6
5M:M779.
Do t!bo "e ensaio com M7
=6
+ .oi retira"o no1amente M ml+ .a?en"o a "il!i/0o M7
=B
5M:M7779+ em
o!tro t!bo "e ensaio+ tamb,m conten"o Qml "e g!a -e-tona"a.
No teste -res!nti1o+ .oram semea"os+ na ca-ela+ M7 ml "e LS# em no1es t!bos "e ensaios 5M7
=M
+
M7
=6
+ M7
=B
9+ e a"iciona"os M ml "a rea/0o anterior+ em ca"a t!bo+ res-ecti1amente. Coloco!=se na est!.a H
BC
7
C+ "!rante 6)2rs+ as amostras "erem -ositi1o+ -ara a inci">ncia "e micro=organismos+ eAceto -ara a
amostra M7
=B
.
A-s 6)2rs+ .oram semea"os e .lambo!=se+ M ml em ca"a+ t!bo "e '
M
e EC+ on"e contin2am
M7ml "e se! reagente 5M7
=M
+ M7
=6
+ M7
=B
9+ res-ecti1amente. Colocaram=se cal"o EC em ban2o=maria H )C
7
C
e cal"o ' H BC
7
C+ ambas "!rante 6) 2. No "ia seg!inte+ analisaram=se os testes con.irmati1os+
"es-re?o!=se as rea/;es "e .orma a"e:!a"a e a!tocla1o!=se to"as as 1i"rarias !tili?a"as.
RESULTADOS E DISCURSS!ES
TESTE PRESUNTIVO
O teste -res!miti1o .oi reali?a"o tanto -ara coli.orme total+ como -ara coli.orme .ecal+ o cal"o
La!ril S!l.ato #ri-tose 5LS#9+ com t!bos "e D!r2am in1erti"os+ !tili?an"o=se "as tr>s series "e tr>s t!bos+
-or inc!ba/0o "e BCDC -or !m -er4o"o "e 6) 2.
M7
=M
M7
=6
M7
=B
Res!lta"os 6 M 7
Passa"a Hs 6) 2oras obser1o!=se :!e to"as as inoc!la/;es. Deram -ositi1as "!as amostras "a
10
-1,
uma da 10
-2
e nenhuma da 10
-3
+ o! sePa+ os t!bos "e ensaio ti1eram a .orma/0o "e gs+
"etecta"os atra1,s "e bol2as+ :!e s0o -ercebi"as "e1i"as o a!Ailio "o t!bo "e D!r2am+ -resentes nos
t!bos.
TESTE CONFIRMATIVO
#o"os os t!bos "o teste -res!miti1o .oram semea"os -ara meios "e c!lt!ra "e 'er"e ril2ante
5'.9 5contagem "e coli.ormes totais9+ e a-s -ara Escherichia coli 5E.C9 5contagem "e coli.ormes
.ecais9+ ain"a com os t!bos "e D!r2am em se! interior+ .oram -ostos em inc!ba/0o -or mais 6) 2.
1
Verde Brilhante (VB): O caldo Bile Verde Brilhante 2% um meio seletivo para coliformes totais recomendado para confirmao de testes
confirmativos para organismos coliformes em analises acteriologicas de agua! aguas residuos! alimentos! leites e laticnios. O verde rilhante e a
ile iniem o desenvolvimento de outros organismos no coliformes! assim como: Clostridium perfringens.
Imagem 76 R Res!lta"os obser1a"os com a!Ailio "o
t!bo "e D!r2am+ on"e 2o!1e a .orma/0o "e gs.
Res!lta"os "o teste con.irmati1o -ara contagem "e coli.ormes totais
Amostras ' M7
=M
M7
=6
M7
=B
Res!lta"os B 6 M

Res!lta"os "o teste con.irmati1o -ara contagem "e Escherichia coli
Amostras EC M7
=M
M7
=6
M7
=B
Res!lta"os B B B
Os res!lta"os re.erentes contagem "e coli.ormes .ecais e totais no alimento+ no caso+ no
iog!rte Fr!it=bom+ "eram -ositi1o+ o! sePa+ os t!bos "e D!2ram ti1eram -ro"!/0o "e gs+ 2o!1e ent0o
crescimento "as "!as .ormas "e contagem+ concl!in"o=se :!e o iog!rte -oss!i coli.ormes .ecais e totais.
CONCLUSO
Com o teste -res!nti1o "e coli.ormes+ conseg!imos obser1ar :!e realmente eAistem coli.ormes
no iog!rte. Por,m+ n0o -o"4amos a.irmar :!e esses coli.ormes eram .ecais.
No teste con.irmati1o -ara saber se esse iog!rte em est!"o tem a -resen/a "e coli.ormes P :!e
o cal"o lauryl triptose n0o tem o obPeti1o "e inibir o crescimento "e bact,rias ent,ricas !samos o ' e
EC e ent0o ti1emos a i"enti.ica/0o "e coli.ormes .ecais+ ten"o no -rimeiro res!lta"o -res!miti1o "e MC
N&PJg e no seg!n"o res!lta"o teste con.irmati1o -ara contagem "e coli.ormes totais .oi "e MC7 N&PJg e
no terceiro res!lta"o teste con.irmati1o -ara contagem -ara contagem "e Escherichia coli .oi SM.M77
N&PJg.
Concl!i=se :!e na amostra "e iog!rte te1e -resen/a "e coli.ormes totais e "e coli.ormes .ecais+
Com base nos res!lta"os obti"os s!gere=se a re1is0o "os -a"r;es bacteriolgicos -ara alimentos
gela"os comest41eis -rontos -ara o cons!mo on"e a -resen/a "e coli.ormes a BC(C -o"e le1ar ao
ingestor o cons!mo "e alimento n0o seg!ro.

REFERENCIA BIBLIOGRFICAS
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