Candida quarta causa de infeco de corrente sangunea USA
Candida albicans Identificao rpida e precisa crtica no tratamento Identificao fenotpica laboriosa e demanda tempo. Testes rpidos de aglutinao ltex Testes moleculares Introduo Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass espectrometry (MALDI-TOF MS) Rpido, confivel e alternativa econmica para identificao bacteriana, micobacteriana e fngica A tcnica depende da gerao de impresses digitais proteicas de micro-organismos que so comparados com espectros de referncia de um biblioteca bem caracterizada
Objetivo Avaliar o desempenho do MALDI-TOF MS para identificao de leveduras comuns e incomuns. Metodologia Maldi Biotyper 2.0 Microflex LT spectrometer (Brucker Daltonics, Inc., Billerica, MA) n=261 145 isolados da rotina do laboratrio de diferentes meios seletivos Mycosel, BHI, SAB, IMA (inhibitory mold agar) Identificao usual - tubo germinativo - Rapid assimilation of threalose - Urease e produo de pigmentos - API 20C AUX (bioMerieux) - Morfologia microscpica em agar cornmeal com tween 80 Metodologia 116 amostras estocadas previamente identificadas pelo API e sequenciamento D2 Maldi-tof MS
Cada corrida foi includa controle de extrao negativo, bactria padro e ATCC 201148 C. albicans e ATCC 13803 C. tropicalis A espectrometria de massa foi realizada de acordo com as configuraes do fabricante. (laser de nitrognio 337 nm e capturado de forma linear com 240 disparos de laser.) Espectros analisados usando o Flex control 3.0 e Maldi Biotyper automation control software. Comparados com o banco de dados da Bruker verso 3.0 Todos isolados foram feitos em duplicata Falhas na identificao foram repetidas usando os mtodos de rotina e o Maldi-tof. Resultados discrepantes foram sequenciados pela anlise da regio D2 do alvo ribossomal 28S
Dos 261 isolados 20 foram excludos ausente na base de dados Em geral, 6.8% e 1.4% isolados repetido
Hall, L., S. Wohlfiel, and G. D. Roberts. 2003. Experience with the MicroSeq D2 large-subunit ribosomal DNA sequencing kit for identification of commonly encountered, clinically important yeast species. J. Clin. Microbiol. 41:50995102. Identificao correta Identificao C. krusei Identificao C. dubliniensis Identificao correta Identificao C. krusei Identificao C. dubliniensis Identificao no confivel Propriedades inerentes ao isolado resulta espectro de baixa qualidade ou banco de dados insuficiente
Resultados e Discusso Os resultados corroboram com os de Marklein et al e Stevenson et al.(92,5% e 87,1% - Score >=2) 99% (score >=1.8) Qualidade espectral - Diferentes tipos de meio BHI e IMA.........SAB Mycosel Qualidade espectral - Tempo de incubao Diminuio do escore para >=1.8
Marklein, G., et al. 2009. J. Clin. Microbiol. 47:29122917. Stevenson, L. G., et al.. 2010. J. Clin. Microbiol. 48:34823486. Identificao nvel de espcie Identificao no confivel- Raros - Teste molecular Cryptococcus neoformans Custo de reagente Tempo gasto na execuo. Tempo do resultado. Concluses
Maldi-tof MS econmico, rpido e confivel na identificao das levedura Avanos na tecnologia pode oferecer um futuro promissor no teste direto da amostra clinica, determinao de resistncia e outros marcadores genotpicos.