67 SILVA, L. P.; BOSSO, A. A.; CARDOSO, S. C. / UNOPAR Cient. Exatas Tecnol., Londrina, v. 9, n. 1, p. 67-70, Nov.

2010
Avaliao da Citotoxicidade da Prpolis em Clulas Meristemticas de Allium cepa
Luciana Pellegrini da Silva
a
*; Adriana Aparecida Bosso
b
; Sibele Camilo Cardoso
c
Resumo
A prpolis uma substncia elaborada por abelhas Apis mellifera a partir de matria vegetal coletada ao redor da colmeia. Para as abelhas a prpolis
possui fnalidade de confeco e manuteno estrutural da colmeia, sendo ainda agente de proteo contra microrganismos, dentre outras. Desde a
antiguidade conhece-se a utilizao de vrios produtos elaborados por abelhas, incluindo a prpolis, para fns teraputicos. Por meio de constantes
pesquisas incentivadas pela efccia da prpolis em alguns tratamentos, tem-se descoberto a mesma como importante em terapias antimicrobianas,
antivirais, anti-infamatria, antitumorais, cicatrizantes, imunoestimulantes, hepatoprotetoras, entre muitas outras. Por tais referncias buscou-
se aplicar um tratamento com extratos de tal substncia em espcie vegetal Allium cepa, visando averiguar atividade antimutagenica e
citotoxica por investigao das clulas meristemticas. Por meio do estudo constatou-se a ao antimutagenica e ausncia de citotoxicidade.
Palavras chave: Prpolis. Citotoxicidade. Allium cepa.
Abstract
Propolis is a substance produced by Apis mellifera bees from plant material collected around the hive. For bees, propolis has the purpose
of manufacture and maintenance work of the hive, and also a protective agent against microorganisms, among others. Since ancient times it
is known the use of various products produced by bees, propolis including therapeutic purposes. Through constant research encouraged by
the effcacy of propolis in some treatments, we have discovered the same as important in antimicrobial therapy, antiviral, anti-infammatory,
antitumor, healing, immunostimulant, hepatoprotective, and many others. For these references sought to apply treatment with extracts of these
substances in Allium cepa, in order to investigate anti-mutagenic activity and cytotoxicity investigation of meristematic cells. Through the study
it was noted the anti-mutagenic action and absence of cytotoxicity.
Key words: Propolis. Cytotoxicity. Allium cepa
1 Introduo
A prpolis um produto de origem vegetal, oriunda de
substncias resinosas, gomosas e balsmicas, coletadas pelas
abelhas de brotos, fores, exsudatos de plantas e modifcadas na
colmeia por adio de secrees salivares e cera (PINHEIRO-
FILHO, 1998).
A prpolis produzida pelas abelhas com a fnalidade
de realizar variadas funes dentro da colmeia, como o
preenchimento de pequenos espaos, defesa contra insetos
e microrganismos inclusive atuando na mumifcao de
insetos impedindo assim a sua decomposio, diminuio de
aberturas na entrada e sada da colmeia, entre outras funes
(ALENCAR et al., 2005).
De acordo com Marcucci (1995) j foram detectados
mais de 50 favonoides na prpolis, entre os quais compostos
pertencentes aos grupos dos polifenis vegetais, cidos
aromticos e olicos.
A composio da prpolis extremamente complexa.
Mais de 300 substncias diferentes j foram identifcadas,
suas caractersticas constitutivas e atividade teraputica
podem variar de acordo com a espcie de abelha, poca do
ano em que coletada e principalmente pela fonte botnica
(BANKOVA et al., 2000; 2005; BURDOCK, 1998).
H uma considervel quantidade de informaes
disponveis a respeito da composio qumica da prpolis e
suas atividades teraputicas, porm sua utilizao pouco
aplicvel devido variabilidade de sua composio de acordo
com origem geogrfca e poca de coleta, fatores que incidem
diretamente na fora principal responsvel da composio
qumica da prpolis (FUNARI; FERRO, 2006).
Assim para indicar um tratamento correto com a prpolis
imprescindvel reconhecer os aspectos biolgicos da mesma
e estes estarem associados a uma referncia como sua fonte
botnica. Por meio desta associao pode-se afrmar que a
prpolis de uma referida fonte botnica possua certa atividade
teraputica (FUNARI; FERRO, 2006).
A prpolis possui diversas propriedades biolgicas como
antifngica, antimicrobiana, antiviral, anti-infamatria,
antitumoral, cicatrizante, antioxidante, imunoestimulatria,
hepatoprotetora, entre outras (PARK et al., 1998).
O uso de plantas e produtos de origem natural, com
fnalidade teraputica vem aumentando dia a dia em todo
Avaliao da Citotoxicidade da Prpolis em Clulas Meristemticas de Allium cepa
Evaluation of Citotoxicity of Propolis in Meristmatic Cell of Allium cepa
ARTIGO ORIGINAL / ORIGINAL ARTICLE
a
Discente do curso de Qumica Industrial Universidade Norte do
Paran (UNOPAR). E-mail: luciana.pellegrini@hotmail.com
b
Mestre em Qumica Orgnica - Universidade Federal Rural do Rio de
Janeiro (UFRRJ). Docente da Universidade Norte do Paran (UNOPAR)

E-mail: adriana_bosso@yahoo.com.br.

c Graduao em Cincias Biolgicas Faculdade de Apucarana (FAP).
E-mail:

bele_cardoso@hotmail.com
* Endereo para correspondncia: Rua Rouxinol, 1020. Arapongas-PR.
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Avaliao da Citotoxicidade da Prpolis em Clulas Meristemticas de Allium cepa
o mundo e essa realidade tambm bastante evidente no
Brasil. Por diversos motivos, sejam de ordem mdica, social,
cultural, econmica ou flosfca, as plantas medicinais tm
sido opo teraputica para crescente parcela da populao
rural ou urbana brasileira (PAULINO, 2005).
Sabe-se que produtos naturais, da mesma forma que os
medicamentos sintticos, possuem grupos de compostos ativos
farmacologicamente que atuam no organismo. O emprego
teraputico dessas substncias exige o conhecimento desses
grupos para a avaliao das potencialidades teraputicas,
txicas e para a formulao de uma estratgia adequada para
seu uso (PERON et al., 2008).
Desta forma as pesquisas sobre as anlises toxicolgicas da
prpolis devem evoluir igualmente s pesquisas teraputicas
da mesma.
A pesquisa de citotoxicidade (estudo de danos
cromossmicos ou distrbios na diviso celular) da prpolis
pode ser realizada pelo sistema teste de raiz de Allium cepa
por apresentar boas condies cromossmicas, possuir alta
sensibilidade e alta confabilidade (FISKEJO, 1994).
O caritipo de Allium cepa consiste em 8 pares de
cromossomos, entre metacntricos e submetacntricos. Cada
bulbo produz grande nmero de razes, em curto perodo de
tempo fornecendo grande nmero de clulas em diviso por
lmina, sustentando sua utilizao para anlise de citotoxicidade.
Considerando o potencial teraputico da prpolis descrito
por diversos autores e estudos realizados anteriormente para
a mesma, a presente pesquisa teve por objetivo avaliar a
possivel citotoxicidade da prpolis, utilizando como sistema
teste as clulas meristemticas de raiz de Allium cepa.
2 Material e Mtodo
Para a realizao deste estudo adquiriu-se de fonte
comercial cebolas (Allium cepa) de tamanhos aproximados e
estas foram colocadas para enraizar em frascos com gua
temperatura ambiente, at obteno de razes com cerca de 1 a
1,5 cm de comprimento.
O sistema teste realizado neste estudo foi baseado no
trabalho de Cardoso; Vicentini; Peron (2007).
O controle negativo do prprio bulbo foi realizado
coletando-se algumas razes antes do incio do tratamento,
denominado 0 hora.
No incio do teste colocaram-se os bulbos enraizados em
duas solues tratamento por 24 horas, sendo as solues
Colchicina 0,5% e Prpolis 5%. Aps o tempo de tratamento,
retiraram-se algumas razes de cada cebola e fxou-se em
soluo de metanol e cido actico na proporo 3:1 para
posterior anlise em lminas.
Para recuperao das razes tratadas com colchicina, as
amostras foram divididas em 2 grupos, sendo um tratado
com prpolis 5 % e outro com prpolis 30 %, e aps 24 horas
foram lavadas e colocadas por mais 24 horas em gua para
nova anlise.
A prpolis utilizada neste teste uma amostra
reconhecida como prpolis de Alecrim-do-Campo (Baccharis
dracunculifolia), trabalho realizado por Silva e Bosso (2009).
O extrato de prpolis utilizado neste trabalho foi
obtido por extrao com etanol, em aparelho de soxlet por
aproximadamente 8 horas, aps o processo de extrao,
deixou-se em estufa a 40 C para evaporao do solvente e o
resduo foi solubilizado em gua destilada.
As razes das cebolas foram coradas pela reao de Feulgen
(FREESE, 1971). As lminas foram analisadas utilizando
microscpio ptico em objetiva de 40X. Foram avaliadas
1.000 clulas por bulbo para cada controle, tratamento e
recuperao, considerando-se alteraes na estrutura dos
cromossomos e alteraes no ndice mittico (IM), que se
refere diviso celular. Para a anlise estatstica foi feito o
Teste do Qui-quadrado.
3 Resultados e Discusso
Tabela 1: ndices Mitticos (IM) Mdios Totais obtidos para o
Controle, Tratamento e Recuperao em clulas meristemticas
de raiz de Allium cepa
Grupos
Controle
24 Horas
Tratamento
24 Horas
Recuperao
24 Horas
Recuperao
48 Horas
[1] 4,12 11,12 3,78 2,7
[2] 5,8 11,12 2,9 1,17
[3] 3,1 2,06 1,54 No Teve
[1]: Colchicina 0,5%, com posterior tratamento prpolis 5%; [2]:
colchicina 0,5% com posterior tratamento prpolis 30% [3]: Prpolis 5%.
Conforme descrito na tabela 1, os grupos [1] e [2] tratados
com colchicina 0,5% tiveram grande aumento no ndice
mittico, com posterior diminuio dos seus ndices na
recuperao, sendo que o grupo [1] foi tratado com soluo
aquosa de prpolis 5% e o [2] com soluo aquosa de
prpolis 30%, estes dois grupos passaram ainda por mais 24
horas na gua e tiveram os seus ndices mitticos ainda mais
diminudos.
Nas lminas preparadas das razes destes dois grupos
teste, durante o tratamento verifcou-se diversas alteraes
morfolgicas nos cromossomos, o que j era esperado devido
conhecida ao mutagnica da colchicina. As lminas da
fase de recuperao tanto com prpolis como gua, mostraram
que o tratamento com a prpolis recuperou danos celulares,
diminuindo o IM e fazendo com que as clulas das razes no
mostrassem mais erros na diviso celular.
O grupo [3] recebeu tratamento com soluo aquosa de
prpolis 5% e neste grupo foi observado que no houve ao
citotxica da prpolis no tratamento das clulas meristemticas
de raiz de Allium cepa.
Estima-se que grande parte das neoplasias resulte da
interao entre fatores genticos e ambientais, sendo a
contribuio exclusivamente gentica responsvel por apenas
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5% de todos os tumores. A frao restante pode ser atribuda a
fatores ambientais que atuam em conjunto com a suscetibilidade
gentica (ROSSIT; CONFORTI-FROES, 2000).
Durante as ltimas trs dcadas tm aumentado o interesse
da comunidade cientfca em relao deteco, conhecimento
e controle sobre os agentes ambientais responsveis por danos
sade humana. Os impactos causados por agentes txicos
sade humana, muitas vezes, no podem ser observados e
medidos diretamente. A informao obtida na anlise de risco
(testes utilizados na deteco de agentes txicos) permite
estimar e comparar estes impactos (SILVA; FONSECA, 2003).
As mutaes e as alteraes no processo de diviso
celular podem ocorrer pelo efeito de agentes mutagnicos
fsicos ou qumicos como: temperatura, radiaes ionizantes,
conservantes, agrotxicos, medicamentos, drogas naturais ou
sintticas, aditivos alimentares, entre outros (ALBANESE,
1988). Os organismos vivos esto frequentemente expostos a
agentes ambientais que podem induzir modifcaes qumicas
no DNA. Estas modifcaes na estrutura do DNA so
prejudiciais s clulas, uma vez que podem prejudicar alguns
processos, tais como a duplicao do DNA, a transcrio
gnica e a diviso celular. Elas tambm podem causar
mutaes e aberraes cromossmicas, fenmenos estes que
podem levar ao desenvolvimento de processos cancerosos e
morte celular (COSTA; MENK, 2000).
A prpolis utilizada popularmente no tratamento de
infeces, em problemas de pele e, tambm, como antiviral.
Entretanto recentemente, numerosas propriedades biolgicas da
prpolis tm sido relatadas em trabalhos cientfcos, sendo elas
anti-herpes, antitumoral, antimicrobiana e anti-HIV (KIMOTO
et al., 1998; 2001; PARK et al., 1998; ITO et al., 2001).
Particularmente a prpolis, sob a forma de extratos
hidroetanlicos, vem se destacando tanto pelas suas
propriedades teraputicas, tais como atividade antimicrobiana,
anti-infamatria, cicatrizante, anestsica e anticariognica,
quanto pela possibilidade de aplicao na indstria
farmacutica e alimentcia, na forma de alimentos funcionais
(ACKERMANN, 1991).
Diversos estudos com a prpolis, para atestar sua efcincia
antitumoral, tm sido realizados por diversos autores, sendo
que os resultados se mostram favorveis ao seu uso.
4 Concluso
O presente estudo verifcou a possvel ao antimutagenica
da prpolis, j que as razes tratadas com colchicina mostraram
recuperao signifcativa quando tratadas com a soluo
aquosa da prpolis, alm disso, verifcou-se que a prpolis
no se mostrou mutagnica nas razes tratadas com ela.
importante ressaltar, que dados obtidos a partir de sistemas
testes vegetais no podem ser considerados defnitivos, j que
a substncia testada pode apresentar interaes diferentes em
cada organismo. As converses metablicas dos compostos
mutagnicos so diferentes entre as espcies, e mesmo entre
seres da mesma espcie devido a fatores como etnia, dieta,
tenses e infeces. Logo o resultado de um nico sistema
teste, no deve ser tomado como defnitivo, devendo-se ento
realizar o mesmo estudo com sistemas-testes diferentes.
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