Matrices o soportes

Generalmente geles
Soporte ideal
Insoluble
Gran permeabilidad y rea especifica
Rigidez y forma de partcula de la matriz
Adsorcin inespecfica
Reactividad y baja fuerza inica
Resistencia a biolgicos


Tipos de matrices
Matrices de polisacridos
Agarosa
Celulosa
Dextrano
Matrices sintticas
Poliacrilamida
Vidrio
Otras matrices
Hidroxialquilmetacrilato
Oxiranos acrlicos
Mtodos de derivatizacin
Consiste en unir covalentemente el ligando a la
matriz
Introducir molculas que alejen el ligando de la
matriz (brazos espaciadores) para aumentar la
adsorcin del afinante
Acoplar el ligando cuando el brazo espaciador ya
esta unido a la matriz activada
Matrices de polisacridos
Activadas introduciendo grupos electroflicos al
gel para hacerlas mas reactivas a los grupos
nucleoflicos presentes en el ligando o brazo
espaciador.
1. Activacin introduciendo grupo nucleoflico
2. Acoplamiento en el que se une el ligando

Oxirano, aziridina e imidocarbamato
Matrices sintticas
Poliacrilamida

Modificacin directa: introduciendo grupos
funcionales que desplacen el nitrgeno de la
amida. Aminoacetilacin, hidrazinacin e
hidrolisis alcalina
Modificacin indirecta (co-polimerizacion acril-
bisacril-ligando): acoplando acido acrlico al
amino terminal del ligando para copolimerizarlo
con acrilamida y N.
Vidrio

Se basa en utilizar compuestos que reaccionen
con agentes acopladores de silanos. El
procedimiento es idntico al de matrices de
polisacridos.


Brazos espaciadores
Molculas que alejan ligandos de la matriz
permitiendo que el afinante lo encuentre con
mayor facilidad. Pueden ser hidrofbicos,
hidroflicos, macromolculas multivalentes o
molculas libres de carga.
Bloqueo de los sitios inactivados
Despus de la unin ligando-matriz, se
recomienda bloquear sitios remanentes que lo
unan.
Grupos aminos: aminas primarias de bajo
peso molecular
Grupos ster: Tris 0.1M pH 8
Grupos aldehdo: borohidruro de sodio
Bibliografa
Carbajal-Saucedo, A. (s.f.). Cromatografa de
afinidad. Recuperado el 2 de Octubre de 2014,
de Instituto de Biotecnologa:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cr
om_Afinidad.pdf