Cloruro de nitroblue tetrazolium

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Cloruro de nitroblue tetrazolium
Cloruro de Nitroblue tetrazolium
Nombre (IUPAC) sistemtico
dicloruro de 2-[2-metoxi-4-[3-metoxi-4-[3-(4-nitrofenil)-5-feniltetrazol-2-ium-2-il]fenil]fenil]-3-(4-nitrofenil)-5-feniltetrazol-2-ium
General
Otros nombres NBT
Frmula molecular C
40
H
30
Cl
2
N
10
O
6
Identificadores
Nmero CAS
298-83-9
[1]
PubChem
9281
[2]
Propiedades fsicas
Masa molar 817,64 g/mol
Valores en el SI y en condiciones estndar
(25 C y 1 atm), salvo que se indique lo contrario.
El cloruro de nitroblue tetrazolium, tambin conocido como nitroazul de tetrazolio o simplemente NBT (Nitro
blue tetrazolium); es un compuesto qumico de frmula molecular C
40
H
30
Cl
2
N
10
O
6
. Est formado por la unin de
dos grupos tetrazol. Entre otros usos tiene aplicaciones en immunologa experimental y en inmunoensayos, donde es
ampliamente utilizado para detectar la formacin de anin superxido y combinado con
5-bromo-4-cloro-3'-indolfosfato para marcar el sitio de actividad de la enzima fosfatasa alcalina.
En ambas reacciones el NBT cumple el rol de oxidante, el estado reducido del NBT se llama formazn y es un
compuesto insoluble en agua de color azul muy intenso prcticamente negro. Tambin tiene aplicaciones en el
ensayo del estallido respiratorio de las clulas fagocticas y como sustrato indicador de numerosos ELISA.
Reacciones donde se utiliza el NBT
El NBT es un oxidante poderoso en medio acuoso, en especial en condiciones cidas, por lo que debe ser tratado con
mucho cuidado para evitar su reduccin una vez disuelto, mantenindolo al abrigo de la luz y el calor. La reaccin se
encuentra favorecida por la formacin de un precipitado insoluble que inclina el equilibrio hacia la derecha.
El NBT es comnmente utilizado como un indicador redox, en las reacciones en las que participa normalmente
acepta cuatro electrones y dos protones para pasar a su forma reducida insoluble el formazn que es de color azul
intenso.
Bajo determinadas condiciones esta reaccin es reversible (medio bsico oxidante).
El uso ms frecuente del NBT es como sustrato indicador de la formacin de superxido, aunque puede ser acoplado
a otras reacciones de oxido reduccin como por ejemplo en las tcnicas que aprovechan la actividad de la fosfatasa
alcalina.
Cloruro de nitroblue tetrazolium
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En esta ltima reaccin se utiliza un sustrato orgnico fosfatado el BCIP (5-Bromo-4-cloro-3-indolil fosfato), que
bajo la accin de la enzima pierde su grupo fosfato. El bromo-cloro indolil liberado del grupo fosfato sufre primero
una reaccin de tautomerizacin y luego es oxidado por el NBT a DDIW (5,5'-dibromo-4,4'-dicloro indigo white) un
tinte tambin insoluble de un intenso color violeta, la combinacin de ambas reacciones aumenta la definicin y la
sensibilidad de las pruebas. La reaccin NBT/BCIP se utiliza tambin para ensayos colorimtricos o
espectrofotomtricos de la actividad enzimtica de muchas oxidorreductasas. Es el sustrato preferido en los ensayos
de tipo ELISPOT.
Otra de las aplicaciones es en ensayos de tipo inmunoblot, por ejemplo en el coloreo enzimtico que permite la
deteccin de determinadas enzimas en una electroforesis en gel, o para determinar cada uno de los componentes en
los complejos enzimticos de la cadena transportadora de electrones de las mitocondrias.
Utilidad clnica
Inmunohistoqumica
En inmunohistoqumica tiene una amplia aplicacin el uso de anticuerpos conjugados con enzimas que funcionan
como marcadores, entre las enzimas que ms frecuentemente se utilizan se encuentran la peroxidasa de rbano
picante (HRP por HorseRadish Peroxidase) y la fosfatasa alcalina. En ambos casos se aprovecha la formacin de un
producto coloreado que revela el sitio de unin al anticuerpo.
Test de funcionalidad del estallido respiratorio
El NBT es utilizado tambin en un ensayo, particularmente efectivo para el diagnstico de enfermedad
granulomatosa crnica y de otras enfermedades causadas por desrdenes en el mecanismo del estallido respiratorio
de las clulas fagocticas. En estas enfermedades existe un defecto en la oxidasa de NADPH, por el cual las clulas
fagocticas son incapaces de producir especies reactivas de oxgeno (H
2
O
2
, HO
2
) o los radicales (HO
-
) necesarios
para matar a los microorganismos fagocitados, como resultado los microorganismos continan vivos dentro del
fagocito, lo que causa entre otras cosas infecciones recurrentes y la formacin de granulomas.
[3]
Las clulas que son capaces de producir el estallido respiratorio son capaces tambin de reducir el NBT, principio en
el cual se basa el test. Las clulas se exponen a una solucin que contiene NBT y un estimulante de la fagocitosis tal
como por ejemplo el PMA y luego se observan al microscopio, las clulas que produjeron el estallido respiratorio
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muestran grnulos intensamente coloreados de negro (las vesculas fagocticas donde se produjo la reduccin del
NBT). El test hace un recuento del porcentaje de clulas fagocticas coloreadas sobre el nmero de clulas
fagocticas total; a mayor nmero de clulas coloreadas, mejor es la funcionalidad microbicida del paciente. Los
intervalos de referencia para esta tcnica usualmente varan entre 80% y 100% de clulas activadas luego del ensayo.
Porcentajes menores probablemente indiquen un defecto en la capacidad de produccin de especies reactivas de
oxgeno.
Referencias
[1] Nmero CAS (http:/ / nlm. nih. gov/ cgi/ mesh/ 2006/ MB_cgi?rn=1& term=298-83-9)
[2] http:/ / pubchem. ncbi. nlm.nih. gov/ summary/ summary. cgi?cid=9281
[3] Resumen (http:/ / www. imbiomed. com/ 1/ 1/ articulos. php?method=showDetail& id_articulo=67577& id_seccion=2272&
id_ejemplar=6794& id_revista=138)
Fuentes y contribuyentes del artculo
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Fuentes y contribuyentes del artculo
Cloruro de nitroblue tetrazolium Fuente: http://es.wikipedia.org/w/index.php?oldid=67372537 Contribuyentes: Grillitus, J3D3, Marcosm21, Rafaelkelvin
Fuentes de imagen, Licencias y contribuyentes
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Fvasconcellos, 1 ediciones annimas
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