Aplicación tinción Gram acética

U UN NI IV VE ER RS SI ID DA AD D M MA AY YO OR R D DE E S SA AN N A AN ND DR R S S
Facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumicas

CARRERA DE BIOQUMICA

TESINA PARA OPTAR EL TITULO DE:
LICENCIADA EN BIOQUMICA Y FARMACIA

POSTULANTE: DEISY ZONIA CAMARGO RODAS
TUTORES EXTERNOS: DRA. MYRIAM BALCAZAR DE CHVEZ
JEFE DEL LABORATORIO DE LA ASISTENCIA PBLICA
DRA. CONSUELO VILLEGAS JORDN
LABORATORIO DE LA ASISTENCIA PBLICA

LA PAZ - BOLIVIA
FEBRERO - 2003
A AP PL LI IC CA AC CI I N N D DE EL L M M T TO OD DO O D DE E T TI IN NC CI I N N G GR RA AM M
N NO OR RM MA AL L Y Y M MO OD DI IF FI IC CA AD DO O, , P PA AR RA A M ME EJ JO OR RA AR R L LA A
V VI IS SU UA AL LI IZ ZA AC CI I N N D DE E B BA AC CT TE ER RI IA AS S
G GR RA AM MP PO OS SI IT TI IV VA AS S Y Y G GR RA AM MN NE EG GA AT TI IV VA AS S E EN N
S SE ED DI IM ME EN NT TO O U UR RI IN NA AR RI IO O

DEDICATORIA

A MI ESPOSO HUGO MOLINA O., A MIS HIJOS, SONIA,
HUGO, DAYSI, POR HABERME BRINDADO SU
COMPRENSIN APOYO Y CARIO GRACIAS POR
TODO.
SR. ARMANDO CAMARGO G., SRA. BENECIA R. DE
CAMARGO, A MI HERMANA AMANDA DE SOSSA, POR
HABERME APOYADO INCONDICIONALMENTE.
CON EL CARIO MS PROFUNDO A MIS QUERIDOS
PADRES:

AGRADECIMIENTO

AGRADECER INFINITAMENTE A TODOS MIS
CATEDRTICOS DE LA FACULTAD DE BIOQUMICA Y
FARMACIA A MIS TUTORES INTERNOS MUCHAS
GRACIAS.

AGRADECER EN FORMA ESPECIAL A LA DRA.
MYRIAM BALCAZAR DE CHVEZ, DRA. CONSUELO
VILLEGAS J., AL DR. JORGE ROCHA R., AL DR. JUAN
JOS MIGUEZ, A LA DRA. MIRTHA ARCIENEGA C., A
LA BIOTC. ROSARIO ORELLANA C., QUE ME
BRINDARON SUS CONOCIMIENTOS Y SABIDURA
PARA QUE EL PRESENTE TRABAJO PUEDA
REALIZARSE.

Tesina Facultad de Bioqumica y Farmacia
Zonia Camargo Rodas UMSA
RESUMEN

El pas presenta problemas epidemiolgicos producidos por microorganismos,
las infecciones urinarias tienen su debida importancia especialmente en la
poblacin de mujeres embarazadas que son motivo de frecuente consulta
mdica en la atencin primaria de salud y representa parte del objetivo de
estudio del presente trabajo.

Dentro de los microorganismos causantes de estos procesos infecciosos estn
las bacterias, habindose determinado en el estudio el predominio de bacterias
de forma bacilar con caractersticas Gram negativas.

El presente trabajo como hecho fundamental plantea la utilizacin de la tincin
Gram actica (adicin cido actico 0.1 N) sobre la base de la tincin Gram ya
conocida y utilizada en la prctica microscpica para determinacin de
bacterias.

El aporte del presente trabajo se ha dado en una poblacin de mujeres
embarazadas Del Seguro Bsico de Salud (SBS) con diagnostico clnico de la
infeccin urinaria, cuyo sedimentos urinarios fueron utilizados para la
identificacin de bacterias con los mtodos de tincin Gram y tincin Gram
actica.

Los resultados transcriben observacin de 269 laminas identificando 137
laminas con bacterias Gram positivas y 109 laminas con bacterias Gram
negativas luego de aplicar la tincin Gram actica 1N.

Los parmetros de eficacia del mtodo se transcriben en un 81.06% de
sensibilidad y 98.5% de especificidad para la identificacin de bacterias Gram
positivas y 75.9% de sensibilidad y 100% de especificidad para la identificacin
de bacterias Gram negativas.

1
De acuerdo a los resultados encontrados se pueden inferir para la utilizacin de
la tincin Gram actica en la determinacin de bacterias complementando con
cultivos bacterianos. Aprovechando las caractersticas del poder de
penetracin, hidatracion y aclaracin celular del cido actico.

El presente trabajo se realizo en el laboratorio de anlisis Clnico de la
Asistencia Publica en el Distrito Norte de la ciudad de La Paz.

2
1. INTRODUCCIN

Bolivia es un pas con problemas endmicos producidos por microorganismos,
las infecciones del tracto urinario, no dejan de tener importancia y son un
motivo frecuente de consulta mdica en la Atencin Primaria de Salud. Esto
hace que muchas veces deba comenzarse un tratamiento antibitico en forma
emprica hasta obtener los resultados de estudios microbiolgicos.

Los grmenes causantes de estos procesos son en su gran mayora bacilos
Gram negativos, los cuales poseen una amplia plasticidad gentica para
expresar y adquirir determinantes de resistencia a los antimicrobianos,
planteando un desafo clnico.

La mayora de las infecciones del tracto urinario son debidas a bacilos Gran
negativos (enterobacterias) de los cuales, la mayor frecuencia corresponde a
cerotipo de E. Coli, que son los responsables de ms del 80% de las
infecciones primarias y del 75% de las recurrencias. El grupo Kebsiella
representa del 10 a 15% y Proteus, Enterococos, Stapliy Lococos y especies
de Pseudomonas para los casos restantes.

La infeccin urinaria se define se define como la invasin y multiplicacin de
grmenes a lo largo del tracto urinario, acompaadas o no de sntomas y
signos o de compromiso de la funcin renal. La mayora de las infecciones del
tracto urinario son causadas por bacterias, aunque ocasionalmente pueden
estar implicados hongos y virus
1
.

La recurrencia de infecciones bajas en mujeres jvenes, as como la eleccin
de antibiticos seguros en embarazadas son otros de los tpicos que destacan
la importancia del uso racional de los antibiticos en los planes teraputicos de
las infecciones urinarias. Aunque el problema de la resistencia bacteriana no es
parte del trabajo que se plantea, sin embargo, representa la consecuencia por
falta de un seguimiento bacteriolgico en el diagnstico de laboratorio clnico,
que nicamente determina infeccin con un sencillo ensayo en el sedimento

1
RODRGUEZ, Lanza, IUL. HTM. W.W.W. Geocilios. Com. INTERNET
3
urinario.

El presente trabajo plantea la utilizacin de la tincin gram como rutina al
seguimiento del anlisis de sedimento urinario para la identificacin de
Bacterias, con el aadido de cido actico 0.1 N a la tincin de gram.

El aporte del presente trabajo se ha dado sobre una poblacin de mujeres
embarazadas del Seguro Bsico de Salud con diagnstico clnico de infeccin
urinaria, los resultados transcriben la sensibilidad del mtodo en el anlisis de
eficacia en la utilizacin de la tincin gram actica, este aporte se puede sugerir
para todos los laboratorios de anlisis clnico que no realizan bacteriologa,
puesto que el agregado de cido actico a la tincin gram; debe
complementarse con estudios de cultivos y determinaciones bacterianas
convencional
2
.

2. ANTECEDENTES DEL PROBLEMA DE ESTUDIO.

ELEMENTOS BSICOS DE EMBRIOLOGA, HISTOLOGA Y
ANATOMA RENAL

Embriolgicamente, el rin adulto, o metanefros se forma luego de la
regresin de dos estructuras primitivas: el pronefros y el mesonefros. El
sistema colector renal deriva del conducto excretor principal del pronefros
temprano, llamado conducto de Woflf. Estas ramas ductales constituyen, los
clices renales y los tubos colectores.

El rin es una glndula tubular compuesta cuyos tbulos son de dos tipos:
flexuosos, incluidos en la corteza renal, y los rectos que forman parte de la
sustancia medular y los corpusculos de Malpighi a travs de los cuales se filtra
el suero

2
RODRGUEZ, Lanza, IUL. HTM. W.W.W. Geocilios. Com. INTERNET
4
FISIOLOGA RENAL

El rin es un rgano que desempea diversas funciones fundamentales para
el mantenimiento de la vida del individuo. En este sentido cabe destacar la
regulacin de los electrlitos y del agua del medio interno, y tambin el pH, la
eliminacin de los productos finales del metabolismo proteico y la regulacin de
la tensin arterial
3
.

2.1 ANATOMA FUNCIONAL DE LOS RIONES

2.1.1 ORGANIZACIN GENERAL DE LOS RIONES Y DE LAS VAS
URINARIAS

El sistema renal se encuentra situado en la pared posterior del abdomen, por
fuera de la cavidad peritoneal. En el hombre adulto, cada rin pesa unos 150
gramos y miden 10 cm, en la cara interna del rin se encuentra el hilio a
travs del cual pasan la arteria y la vena renal, los linfticos, los nervios y el
urter que lleva la orina final desde el rin a la vejiga, donde queda
acumulada antes de expulsarse al exterior. En la mdula renal se encuentran
unas pequeas bolsitas de extremos abiertos llamadas clices mayores que se
dividen en clices menores y se encargan de recoger la orina de los tbulos de
cada papila. Las paredes de los clices, la pelvis y el urter tienen elementos
contrctiles que propulsan la orina hacia la vejiga, donde la orina se deposita
hasta que se vaca con la miccin.
4

2.1.2 RIEGO SANGUNEO RENAL

El riego sanguneo de ambos riones constituye, normalmente el 21% del gasto
cardiaco. La arteria renal da lugar a los capilares glomerulares de los
glomerulos renales es donde se filtra gran cantidad de lquido y de soluto,
excepto las protenas del plasma para empezar a formar la orina.
5

3
ARGERI, Nelson Jorge, LOPARDO Horacio ngel. Anlisis de Orina Fundamento y Practica,
Editorial Medica Panamericana. Buenos Aires - Argentina. Pg. 13 Y 16
4
VIDAL, J orge. Anatoma. Buenos Aires 1996. 4va Edicin. Pg. 325-326.
5
GAYTON HALL. Tratado de Fisiologa Mdica. Mxico. 1999. Edit McGraw-Hill
interamericana. Pg. 345
5
La circulacin renal se caracteriza por tener dos lechos capilares, el glomerular
y el peritubular, los riones pueden regular las presiones hidrostticas tanto en
los capilares glomerulares como en los peritubulares. Para responder as a las
demandas homeostticas del organismo.

2.1.3 LA NEFRONA EN LA UNIDAD FUNDAMENTAL DEL RIN

En el ser humano, cada rin est formado por 1 milln de nefronas
aproximadamente todas ellas son capaces de formar la orina. El rin no
puede regenerar nefronas nuevas por lo que lesiones o enfermedades renales
producen una prdida progresiva del nmero de nefronas. Pasado los 40 aos
va descendiendo el nmero de estas, es as que al llegar a los 80 aos muchas
personas tienen un 40 % de nefronas menos, esta perdida no encierra peligro
para la vida por los cambios adaptativos de las restantes nefronas.

Cada nefrona consta de dos partes principales: 1) un glomrulo a travs de los
cuales se filtra gran cantidad de sangre. 2) un largo tbulo donde el lquido
filtrado se convierte en orina en su recorrido hasta la pelvis renal. El lquido que
se filtra en los capilares glomerulares discurre por el interior de la cpsula de
bowman, luego por el tbulo proximal, de este pasa a circular por el asa de
Henle que desciende hasta la medula renal, pasada la mcula densa el lquido
atraviesa el tbulo distal que se encuentra en la corteza renal terminando en el
conducto colector cortical que finalmente al penetrar en la mdula se convierte
en el conducto colector medular vaciando su contenido en la pelvis renal.

Aunque cada nefrona contiene todos los elementos descritos anteriormente,
existen algunas diferencias entre las neuronas dependiendo de la profundidad
a que se encuentran dentro de la masa de los riones. Las neuronas cuyos
glomrulos estn situados en la parte externa de la corteza se llaman nefronas
corticales y se distinguen por tener asas de Henle cortas que tienen un breve
recorrido dentro de la mdula.

Alrededor del 20% y 30% de las neuronas tienen sus glomrulos situados
profundamente en la corteza renal, cerca de la mdula y se llaman neuronas
6
yuxtamedulares. Estas nefronas tienen largas asas de Henle que penetran
profundamente en la mdula y a veces, todo su recorrido es intramedular
hasta desembocar en la punta de las papilas renales.

Los vasos que riegan las nefronas yuxtamedulares tambin se disitinguen de
las neuronas corticales. En estas ltimas todo el sistema tubular est rodeado
de una extensa red de capilares peritubulares, en cambio en las neuronas
yuxtamedulares las largas arteriolas afrentes se extienden desde los
glomrulos hacia abajo, penetrando en la parte externa de la mdula y
entonces se dividen en capilares peritubulares especializados llamados vasa
recta, los cuales se extienden hacia abajo y dentro de la mdula adosados al
asa de Henle. Al igual que las asas de Henle, los vasos rectos vuelven a la
corteza para terminar desembocando en las venas corticales. Esta red
especializada de capilares de la mdula juega un papel esencial en la
formacin una orina concentrada.
6

2.1.4 FORMACIN DE LA ORINA COMO RESULTADO DE LA FILTRACIN
GLOMERULAR, LA REABSORCIN TUBULAR Y LA SECRECIN
TUBULAR.

Las cantidades en que las diferentes sustancias se excretan por la orina
representa: 1) La filtracin glomerular, 2) la reabsorcin de sustancias que se
encuentran en el tbulo y pasan a la sangre, 3) la secrecin de sustancias que
desde la sangre pasan al interior de los tbulos renales.

La formacin de la orina comienza con la filtracin en los capilares
glomerulares de gran cantidad de lquido que prcticamente carece de
protenas. La mayora de las sustancias del plasma, excepto las protenas, se
filtran libremente de tal modo que sus concentraciones en el filtrado glomerular
de la cpsula de bowman son casi las mismas que en el plasma. Cuando el
lquido filtrado sale de la capsula de bowman y pasa por los tbulos, su
composicin se va modificando debido a la reabsorcin de agua y de
determinados solutos, que son devueltos a la sangre.

6
Idem Pg. 345-347.
7
2.1.4.1 FILTRACIN REABSORCIN Y CREACIN DE LAS
DISTINTAS SUSTANCIAS

En general, la reabsorcin tubular es cuantitativamente ms importante que la
secrecin tubular dentro del proceso de formacin de la orina, pero la
secrecin juega un papel importante en la determinacin de las cantidades de
iones de potasio y de hidrgeno y de algunas otras sustancias que se excretan
por la orina. La mayora de las sustancias de la sangre que tienen que ser
depuradas, especialmente los productos finales del metabolismo como la urea,
creatinina, cido rico y uratos, se reabsorben mal y, por tanto, se excretan en
grandes cantidades por la orina. Algunas sustancias extraas y los agentes
qumicos tambin se reabsorben mal pero, adems, son secretados y pasan de
la sangre a los tbulos, de modo que sus tasas de excrecin son elevadas.
Por otra parte los electrlitos como los iones de sodio, cloro y de bicarbonaro,
se reabsorben intensamente, y su aparicin en la orina es en pequeas
cantidades, los aminoacidos y la glucosa se reabsorben completamente en los
tbulos y no aparecen en la orina aunque se hayan filtrado en gran cantidad en
los capilares gleomerulares. Cada uno de estos procesos: filtracin glomerular,
reabsorcin tubular y secrecin tubular, est regulado de acuerdo con las
necesidades del organismo
7
.

2.1.5 CONCEPTOS GENERALES DE ORINA

COMPOSICIN DE LA ORINA.

La orina fisiolgicamente es un lquido amarillento en el hombre producido
como resultado de la filtracin glomerular, la reabsorcin tubular y la secrecin
tubular de olor caracterstico debido a una sustancia voltil que en estado puro
tiene aspecto oleoso
8
.

Su composicin permite considerarla como una disolucin de urea en agua
salada, en efecto la orina normal contiene, aproximadamente:

7
Idem. Pg. 350.
8
ENCICLOPEDIA DE LA CIENCIA Y DE LA TCNICA, EDICIONES OCANO. Pg.34
8

COMPOSICIN DE LA ORINA
Agua:
Cloruro de sodio (sal):
Urea:
Acido rico:
Otras sustancia:
955 ml
10 ml
20 ml
0.5 ml
14.5 ml
95.5%
10%
20%
0.5%
14.5%
Total: 1000ml 100%

Estas proporciones no son fijas, pues varan segn el rgimen alimenticio,
adems se encuentran en la orina dos materias colorantes, la urobilina rojiza
que proviene de la bilirrubina de la bilis, en parte reabsorbida en el intestino
delgado, y el urocromo amarillo que es el pigmento ms importante
9
.

Las sustancias que aparecen en la orina son numerosas. Entre los
constituyentes normales se distinguen los inorgnicos (calcio, sodio, potasio) y
los orgnicos, estos se dividen en compuestos nitrogenados y no nitrogenados.
Las sustancias nitrogenadas mas importantes son (la urea, cido rico,
amoniaco y algunos aminocidos), entre las no nitrogenadas cabe mencionar al
cido oxlico.

La presencia de albmina (albuminuria) y glucosuria se observa en procesos
patolgicos. Por la orina se eliminan a veces clculos es decir, concreciones
de sales de composicin qumica variable, que se forman en las vas urinarias
con un mecanismo an no esclarecido. Sometiendo la orina a centrifugacin
se obtiene la separacin del sedimento urinario, la observacin microscpica
de este permite la distincin de un sedimento no organizado, del que forman
parte sustancias inorgnicas como el fosfato bi o triclcico, el fosfato
amonicomagnsico, el fosfato trimagnsico y sustancias orgnicas como el
cido rico, los uratos y los oxalatos.

9
VIDAL, Jorge. Anatoma Fisiologa e Higiene, Editorial Bruo 4ta Edicin. Lima Per.
Pg. 3299
9
En funcin del estado de hidratacin del individuo, el rin es capaz de eliminar
orina mas o menos concentrada, es decir, la misma cantidad de solutos
disueltos en mayor o menor cantidad de agua.

Esta es una funcin bsicamente del tbulo renal. Adems de la variable
fraccin de sodio o agua reabsorbidos en el tbulo proximal la accin de la
hormona antidiurtica en el tbulo colector hace a ste mas o menos
permeable al agua, condicionando una mayor o menor reabsorcin del 15% de
sta que llega a ese segmento, por tanto, una orina ms o menos diluida.

La hormona antidiurtica HAD es sintetizada por clulas nerviosas del
hipotlamo y es segregada por la hipfisis. El principal estmulo para su
secrecin es el aumento de la osmolaridad plasmtica, aunque tambin la
estimula la disminucin del volumen del lquido extracelular. La HAD acta
sobre el tbulo colector hacindolo permeable al agua, con lo que la
reabsorcin de esta aumenta o disminuye la osmolaridad plasmtica y se
escreta una orina ms concentrada. Estas situaciones de disminucin de la
osmolaridad o expansin del volumen extracelular se inhiben la secrecin de
HAD y se absorbe menos agua, excretndose orina ms diluida.
10

Estos componentes del sedimento se depositan en forma de cristales de
aspecto caracterstico y fcilmente distinguible. El sedimento organizado esta
compuesto por los hematies y los leucocitos, que por lo general, estn
ausentes o son muy escasos, pero que en condiciones patolgicas se hacen
muy numerosos, dando lugar respectivamente a la hematuria y la piria, entre
otros elementos organizados tenemos a las bacterias su presencia es debido a
la infeccin de vas urinarias (bacteriuria) o fermentacin de la orina despus
de su emisin. A menudo existen clulas de descamacin del epitelio de
revestimiento de las vas excretoras, que son eliminadas con la orina. Su
presencia no tiene significado patolgico mientras su nmero sea limitado.
En la orina pueden encontrarse tambin, frmacos o txicos que son
eliminados por va renal
11
.

10
http://www.carlosaya.net/biblioteca/contenidos/docs/nefrologa/predialisis/pacodiez
11
ENCICLOPEDIA DE LA CIENCIA Y DE LA TCNICA, EDICIONES OCANO. Pg. 7.
10
2.1.6 TOXICIDAD DE LA ORINA

El rin no elabora los elementos de la orina, sino que stos preexisten en la
sangre. La funcin del rin se reduce a extraer dichos elementos de la
sangre, para eliminarlos despus de haberlos concentrado.

La orina normal es txica en mayor grado segn las distintas horas del da, la
orina de la vigilia presenta un poder ms txico que la del sueo. Su poder
txico de la orina no proviene exclusivamente de la urea que contiene, sino
tambin de otras sustancias como las materias colorantes, sales de potasa y
compuestos nitrogenados no bien determinados. Si estas substancias txicas
quedaran en la sangre, un hombre morira intoxicado a los dos das, Si la
eliminacin es insuficiente, el hombre contrae una enfermedad grave llamada
uremia
12
.

2.1.7 VAS DE EXCRECIN DEL RIN

A su salida de los poros urinarios la orina es recogida por los clices, estos son
pequeos tubos que nacen del cuello de cada papila para formar los
conductos colectores ms voluminosos, que desembocan en la pelvis.

2.1.7.1 PELVIS RENAL

En la Pelvis renal desembocan los clices que tienen forma de embudo estos
se comunican con el urter por medio de su vrtice.
13

2.1.7.2 URTERES

Estos conductos forman parte del conducto excretor el que comunica la pelvis
con la vejiga, tienen una longitud aproximada de unos 30 centmetros y un
dimetro aproximado de unos 5 milmetros, los urteres a la salida de la pelvis
se hallan separados por una distancia de 7 centmetros, pero al dirigirse hacia

12
ENCICLOPEDIA DE LA CIENCIA, EDICIONES OCANO. PG. 330 331
13
VIDAL, J orge. Op. Cit. Pg 328.
11
la vejiga en la cual penetran lateralmente su distancia es apenas de 2
centmetros.
14

2.1.7.3 VEJIGA

La vejiga es una bolsa muscular y elstica que se encuentra en la parte inferior
del abdomen, inmediatamente por detrs de la pelvis y por delante del recto se
encarga de recoger la orina que traen los urteres, su capacidad de
almacenamiento de la orina es muy variable en los individuos, el trmino medio
oscila entre 300 ml.
15

2.1.7.4 URETRA

Es un conducto por el cual es expulsada al exterior la orina a por la contraccin
vesical. Nace en el orificio anterior del trgono vesical y se abre al exterior por
el meato urinario. La base de la uretra est rodeada por un msculo circular
llamado esfnter uretral que se compone de fibras normalmente contradas y de
fibras estriadas que permiten mantener cerrado este conducto y resistir as el
deseo de orinar.
16

2.2 EXAMEN GENERAL DE LA ORINA

2.2.1 RECOLECCIN ADECUADA DE LA ORINA

Si bien es cierto que una muestra parcial de la orina no tiene la misma
representatividad que el total de 24 horas, sin embargo entendemos que
resulta aceptable en la rutina, proceder a indicar al paciente la coleccin de la
primera orina de la maana que, normalmente, responde a un lapso de 8 a 12
horas, tiempo durante el cual la orina se encuentra en la vejiga del paciente.

Las muestras colectadas en esta forma resultan suficientemente
representativas como para reconocer la presencia de una determinada

14
Idem. Pg 328.
15
Idem. Pg 329.
16
Idem. Pg 329.
12
patologa renal detectable por el anlisis de la orina. Para tal cometido
indicamos al paciente lo siguiente:
Al levantarse, previo lavado minucioso de genitales externos, se debe desechar
el primer chorro o miccin, y colectar aproximadamente unos 200 ml, sin
suspender el chorro el recipiente adecuado.

Este recipiente deber rotularse con nombres y apellidos, fecha y hora que se
recolecto la muestra y de inmediato llevar al laboratorio para su anlisis
17
.

2.2.2 EXAMEN FSICO

2.2.2.1 VOLUMEN

La cantidad normal de orina emitida se debe medir en 24 horas, y esta en
relacin directa con la densidad urinaria. En el hombre es de 1200 a 1500 ml,
en la mujer es de 1000 a 1200 ml.

2.2.2.2 COLOR

El color normal de la orina es amarillo mbar en sus diferentes tonalidades:

ORINA INCOLORA:

En la diabetes inspida (con densidad baja) y en la diabetes mellitus no tratada
(con densidad alta).
En la insuficiencia renal avanzada o final. En las taquicardias paroxsticas.
En la anemia ferropnica acentuada.
18

AMARILLO INTENSO:

En todas las orinas densas, concentradas, por oligura de origen extrarrenal.
En la ictericia de cualquier origen, En la anemia perniciosa y en la ictericia

17
ARGERI, Nelson Jorge y LOPARDO, Horacio ngel. Anlisis de Orina Fundamentos y
Prctica, Editorial Mdica Panamericana Buenos Aires Argentina,
18
Idem. Pg. 26
13
hemoltica, aunque el tono suele ser rosado en ambas (urobilina).

Ingesta de drogas que contengas ferrinas, el uso teraputico de las flavinas, el
cido pcrico.
19

ORINA ROJA O ROSADA:

En las oligurias febriles.
En las hematurias
En las hemoglobinurias
Anemia perniciosa
Anemia hemolitica
20

ORINA PARDA ( cerveza negra )

En las ictericias parenquimatosas y mecnicas, con tpica coloracin
amarillenta de la espuma al agitarla. En ciertas hematurias: en la
glomerulonefritis aguda.
21

ORINA NEGRUZCA

(Generalmente se va oscureciendo al cabo de un rato de emitida):
En los melanosarcomas negra por la eliminacin de melanina.
En la alcaptonuria
En la intoxicacin por cido fnico y derivados.
Medicacin por L-DOPA o tinidazol.
En la fiebre hemoglobinrca del paludismo tropical.
22

ORINA BLANQUECINA O LECHOSA:

a) En la quiluria.

19
Idem. Pg. 26
20
Idem. Pg. 26
21
Idem. Pg. 26
22
Idem. Pg. 26
14
b) En ciertas lipurias masivas.
c) En las piuras marcadas.
d) En las oxalosis o hiperoxaluria.
23

ORINA VERDOSA O AZULADA:

En la intoxicacin por timol, fenol, etc.
Presencia de bacilos piocianinicos.
24

ORINA TURBIA:

En todas las piaras en las fosfaturas: aunque sea normal la cantidad de
fosfatos, un pH muy alcalino los precipita. Debe considerarse fisiolgicamente,
cierta turbidez por alcalosis compensada al levantarse y durante la fase
gstrica de la digestin

en orinas fermentadas.
25

2.2.2.3 OLOR DE LA ORINA

El olor de la orina normal es suigneris, recin emitida presenta un olor
aromtico caracterstico.

Puede presentar un olor ftido debido a la presencia de Bacterias gram
negativas, o tambin puede presentar un olor a uvas en caso de Diabetes
mellitus o procesos infecciosos producidos por bacterias como ser
Pseudomonas, o puede presentar un olor amoniacal por la presencia de
Proteus.
26

23
Idem. Pg. 26
24
Idem. Pg. 26
25
Idem. Pg. 26
26
FISCHE BACH Manual de Pruebas Diagnsticas. Mxico. 2000. 5ta edicin. Pg 157.
15
2.2.2.4 ASPECTO DE LA ORINA

LMPIDA

El aspecto de la orina normal es lmpida, ligeramente opalescente en mujeres
debido a la presencia de la descamacin celular.
27

TURBIA

Turbia Intensa se presenta en orinas piricas, orinas alcalinas, presencia de
carbonatos, presencia de fosfaturias, orinas fermentadas.

Turbia Roscea Anaranjada, en presencia de uratos amorfos, estos de
disuelven a 16oC.
28

DENSIDAD DE LA ORINA

La densidad en la orina es el peso de un cuerpo slido que desplaza a un
lquido y se lo mide tomando en cuenta la densidad del agua, como la densidad
de la orina generalmente oscila entre 1004 y 1030 g/ml esta relacionada con la
concentracin de diferentes sustancias en disolucin.
29

2.2.3 EXAMEN QUMICO DE LA ORINA

2.2.3.1 REACCIN Y PH DE LA ORINA

El pH urinario representa el logaritmo negativo de la concentracin de iones (H)
en la orina, el pH urinario hace que el rin pueda mantener una
concentracin normal de (H) en el plasma y lquido extra celular. El pH urinario
oscila entre un rango que va desde 4,5 a 8.5 segn la composicin diettica.
30

27
Idem. Pg. 157
28
Idem. Pg. 157
29
Idem. Pg. 157
30
Idem. Pg. 157
16
pH ACIDO (4.5 a 6.5).

Se presenta en: acidosis metablica, diabetes mellitus, pacientes en ayunas.

pH ALCALINO (7.1 a 8.5).

Se presenta en: Alcalosis respiratoria, infeccin en vas urinarias, producidas
por Proteus o Pseudomonas donde el pH puede llegar a 9, alteraciones renales
crnicas, obstruccin pilrica.

2.2.3.2 PROTENAS EN ORINA O ALBIMINURIA

Normalmente la eliminacin de protenas por la orina no es detectable
(3mg/da), por medios corrientes. La cantidad de albmina en la orina no
relaciona la gravedad de la afeccin, pero en el enfermo nos sirve para
determinar el progreso o regresin de su enfermedad. Es importante sealar
que en procesos piuricos debe rescatarse la cantidad de albuminuria producida
por los piocitos. Se sabe que 80 a 100.000 leucocitos por ml producen 1g o/o
de albumina.
31

2.2.3.3 GLUCOSA EN ORINA

Normalmente no existe glucosa en la orina, puede ser metablica o
hiperglicemica, como en el caso de la glucosuria alimenticia. por lo menos con
los mtodos usuales una nfima glucoresis fisiolgica no tiene inters clnico,
pues escapa a la deteccin con aquellas tcnicas). Slo aparece cuando se
rebasa el umbral de 180 mg/100 ml en !a glucemia (clsica).
32

2.2.3.4 CETONURIA

La aparicin de acetona y otros cuerpos cetnicos (cidos acetoactico y beta-
hidroxi-butrico) en la orina es un hallazgo anormal que ocurre en todos los

31
Idem. Pg. 157
32
Idem. Pg. 157
17
casos de cetosis, es decir, cuando la cetonemia est aumentada a raz de
una movilizacin y consumo exagerados de las grasas en el organismo, por
falta absoluta o relativa de hidratos de carbono. Normalmente, se eliminan unos
125 mg diarios, incapaces de positivizar las reacciones habituales en clnica, y
siempre menos de 0,5 g/24 horas de cuerpos cetnicos.
33

2.2.3.5 PIGMENTOS BILIARES COLURIA (bilrrubinuria)

La presencia de pigmentos biliares concretamente bilirrubina en la orina, a la
que confieren una coloracin amarilla intensa en los casos incipientes, y como
cerveza oscura si la concentracin es pronunciada. La espuma, al agitar la
orina, est teida tambin de amarillo. La COLURIA aparece en todas las
ictericias obstructivas o parenquimatosas.
34

2.2.3.6 UROBILINURIA

Comprendemos la urobilina propiamente dicha y su cromgeno, el
urobilingeno. Es sabido que su presencia en la orina supone la llegada de
bilirrubina al intestino, donde se transforma en urobilingeno (reduccin por
bacterias) y luego en urubilina. (Por oxidacin), reabsorbindose parcialmente
y eliminndose casi exclusivamente por el hgado (crculo enteroheptico de la
urobilina). Normalmente, la orina contiene de 0,03 a 0,48 mg por da.
35

2.2.3.7 HEMATURIA (eritrocituria)

Presencia de hemates en orina, a diferencia de la hemoglobinuria, en que
existe pigmento hemtico, pero no clulas. La hematuria puede ser
macroscpica o slo reconocible como eritrocituria en el sedimento.
36

2.2.3.8 PRESENCIA DE NITRITOS EN LA ORINA

La prueba depende la conversin de los nitratos en nitritos por la accin

33
Idem. Pg. 157
34
Idem. Pg. 157
35
Idem. Pg. 157
36
Idem. Pg. 157
18
bacteriana de la orina, para ellos es preciso que est contenga la poblacin
microbiana de toda una noche o un mnimo de 4 horas, por lo que es preferible
usar la primera miccin de la maana. Casi todas las enterobacterias pueden
formar nitritos a partir de nitratos, pero no todas las bacterias de la vejiga
pueden hacerlo ejemplo: enterococos, por lo que a veces se encuentran falsos
negativos. Tambin la existencia de cantidades importantes de grmenes
reductores de nitros da estos falsos negativos. Estos microorganismos
reducen el nitrato a amoniaco, xido ntrico y xido nitroso, hidroxilamina y
nitrgeno, por tanto dan negativa la prueba de los nitritos. El resultado positivo
puede ser una indicacin para cultivo de orina, a menos que la muestra haya
sido almacenada en malas condiciones, permitiendo el crecimiento bacteriano.
A pH cido los nitritos, si existen, reaccionan con el cido para arsanlico
para dar una sal de diazonio, que acoplandose con una benzoquinolina,
produce un colorante azlico rosado y de debe leer a los 40 segundos. Los
falsos positivos pueden deberse a medicamentos que colorean de rojo a la
orina, los falsos negativos pueden deberse a la presencia de cido ascorbico,
al urobilinogeno y pH menor a 6.
37

2.2.4 SEDIMENTO URINARIO

La orina constituye uno de los datos ms tiles para el diagnstico y pronstico
de las nefropatas. Interesa solicitarlo, no slo en los enfermos con sntomas
renales o urolgicos manifiestos, sino tambin en los hipertensos en general,
en el embarazo patolgico, en los procesos infecciosos etc., para descubrir la
posible participacin etiolgica o complicacin renal latente. el examen del
sedimento urinario abarca corrientemente los siguientes aspectos; citologa,
bacteriologa, existencia de cilindros y sustancias qumicas precipitadas
(cristales y sedimento amorfo). Conviene asegurar la no contaminacin por
secreciones vaginales, perineales.
38

37
WALLACH, J acques. Interpretacin Clnica de las Pruebas de Laboratorio 4ta Edicin. Pg. 495
y 496
38
Idem. Pg 496.
19
2.2.4.1 LEUCOCITOS Y PIOCITOS

Normalmente se presentan de 0-3 leucocitos/ul. Su hallazgo mayor en el
sedimento es patolgico y corresponde cuando son abundantes, al mismo
significado clnico que la piura macroscpica: existencia de un proceso
inflamatorio supurado en el rin o vas urinarias. Sin embargo, la presencia de
unos pocos leucocitos inalterados en el sedimento, especialmente en la mujer,
debe considerarse normal. Por otra parte, si, adems de leucocitos, existen
hemates y ambos en proporcin sangunea, el caso no puede calificarse de
piura, sino de simple hematuria.
39

Para interpretar el significado de una leucocituria intensa es necesario conocer
el nmero de leucocitos y piocitos, el cual ser mayor a 10 clulas por campo,
y verificar, el grado de la proteinuria una vez filtrada o centrifugada la orina.

Estas clulas se encuentran en todas las infecciones renales: pielitis,
pielonefritis, hidro nefrosis, litiasis o neoplasias infectadas, pionefrosis,
tuberculosis renal, etc. En las cistitis, prostatitis, uretritis, etc.

En las nefritis mdicas; glomerulonefritis en fase aguda o en nuevos brotes
de reagudizacin. A diferencia de las pielonefritis y nefropatas supuradas, aqu
se trata de leucocituria ms que de piura, pues suelen faltar los leucocitos
degenerados o piocitos, y, adems, las cifras son mucho ms discretas.
Ciertamente, la relacin leucocitos: albmina es siempre mayor en las
infecciones urolgicas que en las nefritis. Puede existir, pues, piura sin
bacteriura y, por ello, el hallazgo de aqulla no autoriza, por s sola. a concluir
que existe una infeccin renal pero la piura tuberculosa va sin grmenes y
hay que sospecharla en toda piura estril persistente. Tambin existe
leucocituria estril en el rin de fenacetina o en una infeccin urinaria
decapitada por un tratamiento antibitico. En las mujeres, que cursan un
cuadro cistico pueden deberse a vaginitis y cursan sin piuria ni bacteriura.

39
ARGERI, Nelson J orge y LOPARDO, Horacio ngel. Op. Cit. Pg. 57.
20
2.2.4.2 CLULAS EPITELIALES

En general, tienen escaso inters clnico: en cualquier sedimento de una
persona normal se observa la presencia de algunas. Cuando son abundantes y
proceden de los tbulos renales corresponden a una nefropata pcirenqui-
matosa (nefrosis necrotizante mercurial o necrosis tubular de otro origen,
glomerulonefritis con descamacin tubular, etc.).

Se observan fragmentos de clulas columnares degeneradas o con
inclusiones. Las clulas de pelvis renal o de vejiga aparecen en los catarros,
pielitis y cistopielitis intensas. En los rumores uroteliales u otros (renales,
prostticos), acumulaciones de clulas atpicas con ncleo hipercromtico,
nuclolos grandes o mltiples, etc.
40

2.2.4.3 PRESENCIA DE CILINDROS EN LA ORINA

La comprobacin de cilindruria en un sedimento depone, por lo pronto, en favor
de una nefropata difusa, mdica, y en contra de un proceso urolgico
aunque naturalmente una pielitis ascendente con afectacin parenquimatosa
da tambin cilindruria

LOS CILINDROS HIALINOS

Tienen la misma significacin que la albuminuria en general e incluso pueden
aparecer normalmente en pequea cantidad.

LOS CILINDROS GRANULADOS

Son siempre patognicos, y lo mismo que los epiteliales de los que proceden
por degeneracin celular, significan descamacin y lesin tubular apareciendo
en la orina de los enfermos renales con afectacin parenquimatosa aguda:
glomerulonefritis, nefrosis necrtica, Tiene gran inters para el pronstico
observar la evolucin de la cilindruria. En las formas graves y agudas son

40
DAVIDSON, Todds. Diagnstico y tratamiento clnico por el laboratorio). Espaa. 1998. Pg.
528.
21
especialmente nmeros cilindros. En la nefritis aguda se normaliza antes la
protegiera que la cilindruria, por lo que interesa examinar el sedimento aunque
el enfermo no presente proteinuria patente.
41

Tambin pueden encontrarse abundantes cilindros granulosos en los diabticos
cetosis grave (cilindros del coma). Los falsos cilindros granulos son cilindros
hialinos recubiertos por polvo mineral u otros detritos y tienen la misma
importancia que los hialinos.

CILINDROS HEMTICOS

Los cilindros hemticos aparecen en las hematurias parenquimatosas renales,
hematurias nefrticas y tienen igual significacin suelen corresponder a lesin
glomerular. Es de inters su hallazgo para excluir el origen subrenal de las
hematurias urolgicas en casos dudosos.

Aparte de la glomerulonefritis aguda, aparecen en la subaguda y
ocasionalmente en la crnica; tambin, a veces, en la endocarditis bacteriana
subaguda, en las colagenosis especialmente en el lupus y en la necrosis
tubular aguda hemoglobinrica
42

LOS CILINDROS HEMOGLOBNICOS

Aparecen tpicamente en las hemoglobinurias (genuinas, transfusional, etc.),
pero en ocasiones' acompaan los cilindros hemticos y granulosos en la
nefritis aguda. Las hemoglobinurias crnicas suelen acompaarse de cilindros
con hemosiderina, granulos en su superficie tingibles por el azul de Prusia.
43

41
Idem.. Pg. 529.
42
Idem.. Pg. 529.
43
Idem.. Pg. 530.
22
CILINDROS LEUCOCITARIOS

Aparecen de modo caracterstico en las pielonefritis,

LOS CILINDROS CREOS

Son los de peor pronstico, pues corresponden a profundos y avanzados
trastornos degenerativos tubulares; se registran en las nefritis crnicas graves
con insuficiencia renal, en las amiloidosis, en las dermatomiosits, lupus
eritematoso, etc. Su anchura demuestra que proceden de los tubos colectores
o de los tbulos dilatados por obstruccin intrarrenal.
44

2.2.4.4 PRESENCIA DE CRISTALES EN SEDIMENTO URINARIO

La existencia de cristales o depsitos inorgnicos amorfos en un sedimento
urinario puede corresponder a una nefrolitiasis concomitante, pero no es, en s,
concluyente para su diagnstico; efectivamente, hay litiasis comprobadas que
no se acompaan de sedimentos demostrativos, y viceversa, la cristaluria
puede existir por mucho tiempo sin que se hayan formado clculos en los
riones, aunque se deba a una verdadera ditesis cistnica, urtica. Etc.
45

Para distinguir las cristalurias diatsicas de las exgenas bastar reexaminar el
sedimento de la orina despus de unos das de rgimen adecuado, sin
sobrecarga diettica de los alimentos ricos en la sustancia respectiva.

Si el diagnstico de litiasis es evidente clico nefrtico, pero no poseemos el
clculo, la composicin qumica de los cristales autoriza a concluir sobre
idntica composicin que los clculos queden, siempre que en el examen
repetido del sedimento en distintos das, y han suprimidos los alimentos que
pueden originarlos, haya la abundante presencia de los mismos cristales.

44
Idem.. Pg. 531.
45
FISCHE BACH Op. Cit. Pg 210.
23
URATOS.

Pueden presentarse en la gota, caso en que la uricemia puede darnos, junto a
los signos clnicos mayor apoyo diagnstico. En estos casos la orina suele ser
cida que es una de las condiciones de precipitacin del cido rico. Pueden
precipitarse tambin uratos.
46

LEUCINA Y TIROSINA.

Estos cristales aparecen en la insuficiencia heptica grave (atrofia amarilla
aguda, intoxicacin fosfrica, etc.).
47

CISTINA.

Aparece en los enfermos con cistinosis o cistinuria,
Oxalatos.
Se precipitan especialmente en orinas acidas. Pueden tener un origen exgeno
o ser manifestacin de una ditesis oxlica
48

FOSFATO

Los cristales aparecen en orinas alcalinas por lo general. Se trata de fosfato
calcico o as fosfato amnico-magn sico. Este ltimo puede aparecer por
fermentacin amoniacal de la urea, fuera del organismo o incluso dentro de la
vejiga en pacientes con retencin urinaria (prostticos, estenticos uretrales,
etc.) infectada, y en este caso se observa ya en la orina recin emitida.
Grmenes ureolticos frecuentes son los Proteus, pero fuertemente ureolticos
a veces lo son cepas de Corynebacterium.
49

46
Idem. Pg 210.
47
Idem. Pg 211.
48
Idem. Pg 211.
49
Idem. Pg 211.
24
2.2.4.5 IONOGRAMA URINARIO

Representa el conocimiento de las proporciones relativas de los electrlitos
contenidos en la orina, expresados en miliequivalentes por litro de los distintos
aniones y cationes.

Permite enjuiciar la situacin metablica del organismo en lo que respecta al
metabolismo mineral y cido-bsico, y por otra parte informa sobre la funcin
renal.
50

- CLORUROS

La determinacin de los cloruros en la orina no suele utilizarse en clnica y slo
tiene valor si se practica durante varios das seguidos, en la orina de 24 horas y
en enfermos sometidos a rgimen cuyo contenido salino sea conocido. Los
valores normales varan de 5 a 20g en 24 horas (80 y 200 g de Cl y Na).
51

- POTASIO EN ORINA (potasuria)

La eliminacin urinaria de este catin vara dentro de amplios lmites, segn la
dieta. Con una alimentacin mixta corriente, la potasuria normal oscila entre 1,5
y 3,5 g en 24 horas, es decir, no sobrepasa los 90 mEq al da.
52

- FSFORO EN ORINA (fosfaturia)

La eliminacin media suele ser, normalmente, de 1 g en 24 horas, pero puede
variar dentro de amplios lmites segn la dieta: de 0,5 a 3 g por da.
53

- CALCIURIA

La eliminacin diaria normal de calcio por la orina vara entre 2,5 y 20 mEq, o

50
Idem. Pg.212.
51
Idem. Pg 212.
52
Idem. Pg 212.
53
Idem. Pg 212.
25
sea, aproximadamente, entre 55 y 220 mg.
54

2.2.4.6 OSMOLURIA

La presin osmtica global de la orina depende de su concentracin en
sustancias osmticamente activas, es decir, Se expresa actualmente en
osmoles por litro.

Normalmente, la concentracin osmolar mxima de la orina alcanza los 1000 o
1300 miliosmoles/L, que corresponde a una densidad mxima de 1040. Siendo
la mnima concentracin de 50 miliosmoles/L, que representa una densidad de
1001.
55

2.3 EXAMEN MICROBIOLGICO DE LA ORINA

La infeccin de las vas urinarias es una infeccin en la uretra, vejiga o
riones. Si no se trata debidamente, puede lesionar los riones o causar una
infeccin en la sangre.

2.3.1 BACTERIURIA E INFECCIN URINARIA

Se entiende como bacteriuria la eliminacin de grmenes por la orina
recientemente emitida. La presencia de bacterias o bacteriuria en la orina es un
hecho frecuente. La turbidez que presentan estas orinas se debe
exclusivamente a la cantidad de grmenes que hay en suspensin.
56

Bacteriuria no es sinnimo de infeccin ni de inflamacin urinaria.
La bacteriuria puede existir sin estar asociada a ningn parmetro que indique
inflamacin. El trmino de bacteriuria slo debe ser empleado para designar
ese hecho en forma exclusiva sin ninguna otra preestimacin de criterio que
insine una causa que la provoque.

54
Idem. Pg 212.
55
FISCHE BACH Op. Cit. Pg 210.
56
http://www.geocitis.com/rodriguezlanza/iul.htm
26
La existencia de bacterias en la orina recientemente emitida se presta a una
serie de variantes que debe ser considerada en cada oportunidad.
Se ha estipulado una concentracin terica de grmenes de >100.000 col/ml.
de orina del chorro medio de una miccin, sobre la que la bacteriuria sera
significativa y se asociara a probable infeccin.

El urotelio no se inflama. Cuando es agredido se descama y se elimina con la
orina en el sedimento en forma de clulas muertas. Los tejidos suburoteliales
formados por tejido conjuntivo, vasos sanguneos, linfticos y nervios, son los
nicos capaces de inflamarse y permitir salir la urina leucocitos muertos (piuria)
y eritrocitos (hematuria).

La bacteriuria solo significa la presencia de bacterias en la orina y puede ser
denominada infeccin urinaria pero por si sola no se debe concluir con ningn
diagnstico de inflamacin urinaria sino se acompaa de otros signos y/o
sntomas que la acompaen como la piuria, la hematuria y los sntomas
irritativos.

La inflamacin puede tener un origen infeccioso o no infeccioso. La bacteriuria
puede o no estar acompaada de inflamacin del aparato urinario.
Si hay infeccin urinaria los grmenes aparecen en la orina y puede no haber
ningn signo o sntoma de inflamacin.

Pueden estar disminuidos de cantidad o ausentes por:
57

- un tratamiento antibitico previo.
- accin de algn antisptico instilado.
- retencin vesical insuficiente.
- Tuberculosis.
- baja densidad de la orina (<1.003).
- Formas L o Protoplastos.
- Obstruccin ureteral o pilica completa.
- Grmenes que requieren investigacin especfica (Clamydias, etc.).

57
27
La enfermedad infecciosa del aparato urinario se produce cuando los grmenes
violan la integridad del urotelio y penetran en el tejido suburotelial.

Los grmenes pueden llegar al tejido suburotelial por va vascular sangunea o
linftica, o hacndolo en forma directa por una agresin traumtica
(cateterismo, puncin sptica).

Para que la infeccin urinaria ocurra son necesarias condiciones
predisponentes:
58

1. Una mayor agresividad bacteriana para romper la barrera urotelial.

2. La mayor agresividad bacteriana se incrementa con la mayor
concentracin de los grmenes.

3. Una mayor permeabilidad del urotelio sea por lesin directa, destruccin
de sus uniones celulares o por disminucin de su inmunidad local.

4. Un aumento sostenido de la presin dentro de la va urinaria con
respecto a la resistencia de salida de la orina.

2.3.2 ETIOPATOGENIA

Es llamativo el hecho de cmo la presencia de bacterias en la orina puede no
estar acompaada de ninguna manifestacin de inflamacin.

Esa falta de manifestaciones de inflamacin puede estar explicada por:
59

a) Una disminucin del nmero y la virulencia de los grmenes.
b) A la indemnidad urotelial y a las defensas inmunitarias del tejido
mesenquimal que sostiene al urotelio.

58
59
J AWEST, Ernest y MELNICK J .L Microbiologa Mdica. 14va Ed. Mxico D.F. 1992.
Manual moderno S.A. de CV. Pg. 13
28
c) A presiones intraurinaria bajas ( por debajo de 30 cm. de agua en
forma sostenida).

Las condiciones determinantes lo establecen el nmero y agresividad de los
grmenes.

Las condiciones predisponentes la forman la resistencia del urotelio a la
penetracin bacteriana y a la presin dentro de la va excretora.

Ha sido comprobado que si la presin dentro de la va excretora (conteniendo
bacterias) se sostiene por encima de los 40 cm. de presin de agua, la
inflamacin por infeccin es inevitable.

Toda obstruccin orgnica o funcional de la va excretora facilita la pululacin y
agresividad de los grmenes.

La entrada de los grmenes en el aparato urinario puede hacerse:
60

a) Por va sangunea y filtrada en el rin proveniente de focos
intestinales, dentarios, amigdalinos o cutneos
b) Por va ascendente, subiendo por la uretra hacia la vejiga, o a travs
de una instrumentacin (puncin, cateterismo o cistoscopa).

La infeccin de la vejiga no da fiebre. Pero s la da cuando los parquimas que
drenan en ella deben vencer una presin mayor de 40 cm. de agua en forma
sostenida.

2.3.3 ETIOLOGA

Los grmenes capaces de provocar infecciones urinarias son:
61

a) Gram negativos: (enterobacterias) Escherichia coli Klebsiella, Proteus,

60
Idem Pg. 13
61
Idem Pg. 13
29
Pseudomonas , Serratia y Citrobacter.
b) Gram positivos: Estreptococo faecalis y Estafilococo faecalis.

2.3.4 INFECCIONES URINARIAS EN MUJERES EMBARAZADAS

Si la uretra o la vejiga estn infectadas, tal vez sienta dolor o ardor cuando
orina, tenga dolor o sensacin de que la vejiga est llena, o quizs necesite
orinar con frecuencia. Si tiene los riones infectados, tal vez tenga dolor de
espalda o en los costados justo encima de la cintura. Tambin puede tener
escalofros que le hacen temblar, fiebre o sudores, o sentirse enfermo del
estmago. La orina puede tener olor fuerte o hasta presentar sangre o pus. Si
las bacterias invaden la uretra, de all pueden pasar a la vejiga y los riones. Si
las bacterias no salen al orinar, pueden multiplicarse y causar una infeccin.
Las bacterias que causan estas infecciones generalmente provienen de las
heces o de la piel que est alrededor de la abertura de la uretra. Las
infecciones de las vas urinarias son ms comunes en mujeres que empiezan
su vida sexual, estn embarazadas o acaban de pasar la menopausia. Son
tambin ms comunes en los hombres y en las mujeres que tienen diabetes o
clculos renales. Los nios tambin pueden contraer infecciones de las vas
urinarias.
62

Las infecciones urinarias son muy frecuentes y, debido a que los agentes
causales son a veces idnticos o semejantes a las bacterias de la flora normal
(por ejemplo, Escherichia coli), hay que ser muy cuidadosos en el anlisis
bacteriolgico. Puesto que la orina es capaz de mantener un importante
crecimiento bacteriano en muchas condiciones, en infecciones urinarias
frecuentemente se encuentran altas cantidades de clulas. En el mayor de los
casos, la infeccin se presenta como consecuencia de un microorganismo que
asciende de la uretra y que proviene del exterior. Ocasionalmente, aun la vejiga
puede llegar a infectarse, las infecciones del tracto urinario son las que ms se
adquieren en los nosocomios (hospitales). Poblaciones mayores a 100.000
bacterias por mililitro pueden dar pautas de infeccin urinaria. Lo ms frecuente
son los miembros de las bacterias enterales, constituyendo la E.coli cerca del

62
30
90% de los casos. Otros microorganismos incluyen a la Klebsiella,
Enterobacter, Proteus, Pseudomona y Srteptococcus faecalis. La Neisseria
gonorrhoeae, el agente causal de la gonorrea, no prolifera en la orina, sino en
el epitelio de la uretra, y debe diagnosticarse por mtodos diferentes.

Para determinar bacteruria por contaminacin y por infeccin, se utiliza el
trmino de bacteruria significativa. Inicialmente se consideraba como
diagnstico de I.T.U. una cifra superior o igual a 100.000 UFC/ml de orina
emitida espontneamente. Si bien es cierto que esta cifra tiene una muy buena
especificidad para I.T.U., su sensibilidad es muy baja, ya que alrededor de un
tercio de pacientes sintomticas con recuentos entre 100 y 100.000 UFC/ml.
Esto se observa preferentemente en el caso de grmenes Gram positivos como
el Staphylococcus saprophyticus. Por esta razn, algunos autores consideran
cifras mayores a 100 UFC/ml, en mujeres sintomticas, como indicativos de
I.T.U. En hombres sintomticos en que la contaminacin es menos probable se
considera una cifra de 1.000 UFC/ml como sugerente de infeccin. El
diagnstico de bacteriuria significativa en pacientes cateterizados, se hace con
cifras mayores de 100 UFC/ml.
63

Debido al nmero relativamente alto de microorganismos que se encuentran en
una infeccin urinaria de importancia, el examen microscpico directo de la
orina es de gran valor es de gran valor y se recomienda como parte del
procedimiento bsico mediante la tincin de Gram. Es muy importante el
contar el nmero de bacterias para el diagnstico. Ms de 100.000 bacterias
(ms de 100 colonias) son significativas, pero incluso ms de 100 en ciertas
circunstancias (mujer sintomtica) tambin pueden serlo. Han de hacerse dos o
tres muestras con ms de 100.000 bacterias/ml de una sola especie para iniciar
el tratamiento en caso de pacientes asintomticos. En el aspirado suprapbico
ms de 100 bacterias/ml suponen infeccin.

Con la tincin de Gram efectiva podemos atrevernos a hablar de infeccin
aunque, de todas formas, lo ideal es el cultivo. Se inocula la orina en la
superficie de dos placas de agar para posteriormente, tras incubar, hacer el

63
31
recuento de las colonias. Una de las placas tendr agar sangre y la otra azul de
metileno con eosina para detectar gram negativos.
64

2.3.5 ESTRUCTURA DE LA CLULA PROCARIOTA

La clula procariota es ms simple que la clula eucariota a cualquier nivel, con
una excepcin: la pared celular puede ser ms compleja.

2.3.5.1 NUCLEOIDE

El nucleoide procariota, equivalente al ncleo eucariota puede observarse
mediante microscopio de luz. El material gentico de una clula (cido
desoxirribonuclico o ADN) se conoce como genoma. Las estructuras
moleculares bsicas de los ADN procariotico y eucariotico son indistinguibles.
Ambos se componen de dos cadenas helicoidales de nucletidos de purina y
pirimidina, unidas entre s por enlaces hidrgeno para formar una doble hlice.
As como el ADN eucariotcico organizado en varias molculas individuales
(cromosomas), el genoma procaritico consiste normalmente en una sola
molcula circular. El ADN procaritico no est unido a histonas ni organizado
en pequeos cromosomas. La ausencia de membrana nuclear, coloca a la
molcula de ADN procariotico dentro del citoplasma, en un rea que se conoce
como nucleoide.
65

Desde hace tiempo se ha considerado que el nucleoide de las clulas
bacterianas consiste en una sola molcula circular continua, con un peso
molecular aproximado de 3 x 10
9
.

2.3.5.2 ESTRUCTURA CITOPLSMICA

Todas las clulas, tanto las eucariticas como las procariticas, estn rodeadas
por la MEMBRANA CITOPLASMTICA o celular. sta membrana se compone
primariamente de fosfolipidos dispuestos en dos capas. Acta como barrera

64
65
J AWEST, Ernest y MELNICK J .L Op. Cit. Pg. 14
32
que impide la fuga de sustancias hacia el exterior de la clula y la entrada de
materiales indeseables, la caracterstica de esta membrana o bicapa lipidica es
semejante en las eucariotas y en las procariotas. Las clulas procariotas
carecen de plsticos autnomos, como mitocondrias y cloroplastos situadas en
la membrana citoplasmtica.
66

La membrana citoplsmica de las bacterias (tambin conocida como
membrana celular) es visible en las microgrficas electrnicas de corte
bacterianos finos. Es una membrana unitaria clsica compuesta de fosfolipidos
y protenas. Las membranas de las procariotas se distinguen de las clulas
eucariotas por la ausencia de esteroles, con la nica excepcin de los
micoplasmas que los incorporan en sus membranas en sus membranas, como
el colesterol, cuando proliferan en un medio que contiene esteroides.

Invaginaciones contorneadas de la membrana citoplasmtica forman
estructuras especializadas denominandas mesosomas. Hay dos tipos: los
mesosomas de tabique, los cuales forman paredes transversales durante la
divisin celular y los mesosomas laterales. El cromosoma bacteriano (DNA)
est adherido al mesosoma En bacterias con sistemas transportadores de
electrones excepcionalmente activos se encuentran invaginaciones ms
extensas de la membrana citoplasmtica en el interior del citoplasma (por
ejemplo, en bacterias fotosintticas y en las fijadoras de nitrgeno).

2.3.5.3 FUNCIN

Las principales funciones de la membrana citoplasmtica son: 1) permeabilidad
selectiva y transporte de solutos; 2) Transporte de electrones y fosforilacin
oxidativa en especies aerbias; 3) excrecin de exoenzimas hidrolticas; 4)
portar a las enzimas y las molculas parteadoras que intervienen en la
biosntesis del DNA de los polmeros de la pared celular y de los lpidos de la
membrana y 5) portar a los receptores de membrana y otras protenas de los
sistemas quimiotcticos y otros de transduccin de seal.
67

66
Idem. Pg. 15
67
Idem. Pg. 17
33
Por lo menos 50% de la membrana citoplasmtica debe permanecer en estado
semilquido para que ocurra el crecimiento celular. A temperaturas bajas esto
se logra principalmente mediante grandes aumentos en la sntesis e
incorporacin de cidos grasos insaturados.

La membrana citoplasmtica forma una barrera hidrfoba impermeable a la
mayor parte de las molculas hidrfilas. Sin embargo, existen varios
mecanismos (Sistemas de transporte) que permiten a la clula transportar
nutrientes al interior y expulsar productos de desecho al exterior.

2.3.5.4 ENVOLTURA O PARED CELULAR

Las capas de la envoltura celular ubicadas entre la membrana citoplsmica y la
cpsula se conocen colectivamente como la pared celular. En las bacterias
grampositivas est constituida principalmente por peptidoglucano y cido
teicoico (vase adelante); en las gramnegativas, la pared celular incluye al
peptipoglucano y a la membrana externa.
68

La presin osmtica interna de la mayor parte de las bacterias flucta entre 5 a
20 atmosferas como resultado de una concetracin de solutos adquiridos
mediante transporte activo. En casi todos los medios esta presin seria
suficiente para hacer estallar a la clula si no fuese por la presencia de una
pared celular con enorme resistencia a la tensin. La pared celular bacteriana
debe su resistencia a una envoltura compuesta por una sustancia denominada
murena, mucopptido o peptidoglucano (todos son sinnimos).

Las bacterias se clasifican como gram positivas o gram negativas segn su
respuesta a la tcnica de tincin de Gram. Este procedimiento de tincin
diferencial, denominado as por el histlogo Christian Gram, quien lo desarrollo
en un intento por teir bacterias en los tejidos infectados.

Adems de la proteccin osmtica que proporciona, la pared celular
desempea una funcin esencial en la divisin celular y funciona, adems,

68
Idem. Pg. 18
34
como un primordio para su propia biosntesis. Varias capas de la pared son los
sitios de importantes determinates antignicos y un componente (el
lipopolisacrido de las paredes celulares gram negativas) es responsable de la
actividad inespecfica de endotoxina de la bacteria gram negativa. En general,
la pared celular tiene permeabilidad inespecfica; sin embargo, una capa de la
pared de las clulas gram negativas, la membrana externa impide el paso de
molculas relativamente grandes

La Capa de peptidoglucano ste es un polmero complejo que consta, para
fines descriptivos, de tres partes: una columna vertebral compuesta de N-
acetilglucosamina y cido N-acetilmurmico Murmico alternados; un grupo de
cadenas tetrapeptdicas laterales idnticas adherida al cido N-acetilmurmico
y un conjunto de puentes peptdicos transversales tambin idnticos. La
columna vertebral es la misma en todas las especies bacterianas; las cadenas
tetrapeptdicas laterales y los puentes peptdicos transversales varan de
especie a especie.

Las cadenas tetrapeptdicas laterales de todas las especies tienen, no
obstante, ciertas caractersticas importantes en comn. Casi todas tiene L-
alanina en la posicin 1 (adherida al cido N-acetilmurmico); D-glutamato o
algn sustituto en la posicin 2; y D-alanina en l aposicin 4. La posicin 3 es
la ms variable. La mayor parte de las bacterias gram negativas tienen cido
diaminopimlico en esta posicin, al cual se liga la lipoprotena de la pared
celular descrita adelante. Las bacterias gram positivas pueden tener cido
diaminopimlico, L-lisina, o cualquiera e otros L-aminocidos en la posicin 3.
69

El cido diaminopimlico es un elemento singular en las paredes de las clulas
procariotas y el precursor inmediato de la lisina en la biosntesis bacteriana de
dicho aminocido. Los mutantes bacterianos bloqueados en la va biosinttica
antes del cido diaminopimlico crecen normalmente cuando se les adiciona
este cido en el medio, pero se lisan al administrrseles slo L-lisina, ya que
continan su crecimiento, pero estn incapacitados para sintetizar
especficamente nuevo peptidoglucano de la pared celular.

69
Idem. Pg. 19
35
El hecho de que todas las cadenas de peptidoglucano estn unidas
transversalmente significa que cada capa de peptidoglucano es una sola
molcula gigante. En las bacterias gram positivas pueden haber hasta10
capas de peptidoglucano, el cual representa ms de 50% del material ms de
50% del material de la pared celular; en las gram negativas al parecer existen
solo 1 o 2 capas que constituyen de 5 a 10% del material de la pared. Las
bacterias deben sus formas, caractersticas en algunas especies en particular,
a la estructura de sus paredes celulares.

2.3.5.5 ENVOLTURA CELULAR GRAM POSITIVA

La envoltura de las clulas gram positivas es relativamente simple: est
constituida por 2 a 3 capas: la membrana citoplasmtica, una capa
peptidoglucano gruesa y en algunas bacterias una capa externa llamada
cpsula.
70

La mayor parte de las paredes celulares gram positivas contienen
considerables cantidades de cido teicoico teicurnico, los cuales representan
hasta 50% del peso seco de la pared y 10% del peso seco total de la clula.
Adems, algunas paredes gram positivas pueden contener molculas de
polisacridos.

1. cidos teicoico y teicurnico: Estos son polmeros hidrosolubles que
contienen ribitol o residuos de glicerol unidos por enlaces fosfodister y que
tiene uno o ms aminocidos o azcares sustitutos. Hay dos tipos de cidos
teicoicos; el cido teicoico de la pared, unido de manera covalente al
peptidoglucano, y el cido teicoico de la membrana (cido lipoteicoico), unido
por covalencia al glucolpido de la membrana y concentrado en los
mesosomas. Algunas especies gram positivas carecen de cidos teicoicos de
la pared, pero al parecer todas las especies contienen cidos teicoicos de la
membrana.

Los cidos teicoicos constituyen importantes antgenos de superficie en las

70
Idem. Pg. 20
36
especies gram positivas que los poseen, y su accesibilidad a los anticuerpos se
ha considerado como evidencia de que se encuentran en la superficie exterior
de la capa de peptidoglucano. Sin embargo, su actividad a menudo se
incrementa por la digestin parcial del peptidoglucano; de aqu que la mayor
parte del cido teicoico puede yacer entre la membrana citoplsimica y la capa
de peptidoglucano para extenderse posiblemente hacia arriba a travs de los
poros de esta ltima. . Los cidos teicoicos enlazan al ion magnesio e
interviene en el suministro de ste a la clula. Tambin intervienen en el
funcionamiento normal de la envoltura celular.

2.3.5.6 COMPONENTES ESPECIALES DE LAS PAREDES
CELULARES GRAM NEGATIVAS

Esta es una estructura muy compleja de mltiples capas. La membrana
citoplsmica (denominada membrana interna en la bacterias gram negativas),
est rodeada por una capa laminar sencilla de peptidoglucano a la cual esta
anclada un capa compleja denominada membrana externa.
71

Tambin puede estar presente una cpsula como envoltura mas externa. El
espacio entre las membranas interna y externa se denomina espacio
periplsmico.

Las paredes celulares de las bacterias gram negativas contienen tres
componentes que yacen exteriores a la capa de peptidoglucano: lipoprotena,
membrana externa y lipopolisacrido.

1 LIPOPROTENA: Las molculas de una lipoprotena rara sirven para
entrecruzar las capas de la membrana exterior y del peptidoglicano. La
lipoprotena contiene 57 aminocidos que representan repeticiones de una
secuencia de 15 aminocidos; es un pptido enlazado a los residuos de cido
diaminopimlico de las cadenas tetrapeptdicas laterales del peptidoglucano.
El componentes lipdico, que consiste en un diglicrido tioter ligado a una
cistena terminal, se inserta de manera no covalente en al membrana externa.

71
Idem. Pg. 22
37
Su funcin de la lipoprotena es estabilizar la membrana externa y fijarle en la
capa del peptidoglucano.
72

2 MEMBRANA EXTERNA: La membrana externa es una estructura de dos
capas; su hoja interna semeja en composicin a la de la membrana
citoplsmica, mientras los fosfolpidos de la hoja externa son sustituidos por
molculas de lipopolisacrido. Como resultado, las capas de esta membrana
son asimtricas, y las propiedades de esta bicapa difieren considerablemente
de las de una membrana biolgica simtrica, como la membrana
citoplasmtica.
73

La capacidad de la membrana externa para excluir molculas hidrfobas
constituye una caracterstica poco comn entre las membranas biolgicas y
acta para proteger a la clula (en el caso de las bacterias entricas) de las
sales biliares. Debido a su naturaleza lipdica, sera de esperarse que la
membrana externa tiene canales especiales constituidos por molculas de
protena denominadas porinas, que permiten la difusin pasiva de compuestos
hidrfilos de bajo peso molecular como azcares, aminocidos y ciertos iones.
Las molculas grandes de antibiticos penetran la membrana externa de
manera relativamente lenta, o cual explica la gran resistencia a los antibiticos
de las bacterias gram negativas. La permeabilidad de la membrana externa
vara ampliamente de una especie gram negativa a otra.

3. LIPOPOLISACRIDO (LPS): El lipopolisacrido de las paredes celulares de
las bacterias gram negativas consiste en un complejo lipdico denominado
lpido A, al cual se adhiere un polisacrido constituido por un centro y una serie
terminal de unidades repetidas.
74

El lpido A consiste en unidades del disacrido glucosamina fosforilado al cual
est unidos varios cidos grasos de canal larga. El cido b-hidroximirstico, un
cido graso con 4 tomos de carbono siempre est presente y es exclusivo de

72
Idem. Pg. 22
73
Idem. Pg. 23
74
Idem. Pg. 23
38
este lpido; los otros cidos grasos, junto con los grupos sustitutos en los
fosfatos, varan segn la especie bacteriana.

El LPS est adherido al a membrana externa mediante enlaces hidrfobos. Se
sintetiza sobre la membrana citoplsmica y se transporta a su posicin final
exterior. Se requiere la presencia de los LPS para que numerosas protenas de
membrana externa efecten su funcin.

No todas las bacterias gram negativas tienen membranas externas del LPS
conformadas por un nmero variable de unidades repetidas de oligosacridos;

4. ESPACIO PERIPLSMICO: El espacio entre la membrana interna y la
externa, denominado espacio periplsmico, contiene la capa de murina y una
solucin de protenas similar a un gel. El espacio periplsmico es
aproximadamente 20 a 40% del volumen celular, lo que est lejos de ser
insignificante. Las protenas periplsimicas incluyen protenas de enlace para
sustratos especficos (por ejemplo, aminocidos, azcares, vitaminas e iones),
Las bacterias por si solas poseen numerosas autolisianas, enzimas hidroticas
que atacan al pepitidogucano, como las glucosidasas, amidasas y peptidasas.
Estas enzimas presuntamente desempean funciones esenciales en el
desarrollo y en la divisin celular, pero su actividad es ms aparente durante la
disolucin de clulas muertas (autlisis).
75

2.3.5.7 TINCIONES

Las tinciones se combinan qumicamente con el protoplasma bacteriano; si la
clula no ha muerto, el proceso mismo de la tincin termina por hacerlo. El
mtodo, por consiguiente, es bastante drstico y puede producir artificios.

TINCIN EN GRAM

Una caracterstica taxonmica importante de las bacterias es su respuesta a la
tincin de Gram. Esta caracterstica parece ser fundamental, ya que la

75
Idem. Pg. 24
39
reaccin a la tincin se correlaciona con muchas otras propiedades
morfolgicas en maneras relacionadas filogenticamente. Un microorganismo
potencialmente gram positivo puede verse como tal solamente cuando
concurren un conjunto particular con condiciones ambientales en un cultivo
joven.

El procedimiento para la tincin de Gram se inicia con la aplicacin de un
colorante bsico, el cristal violeta. Luego se aplica una solucin de yodo; en
este momento todas las bacterias se tien de azul. A continuacin , las clulas
se tratan con alcohol. Las clulas gram positivas retienen el complejo cristal
violeta yodo y permanecen de color azul; en cambio las gram negativas se
decoloran completamente por alcohol. Por ltimo, se aplica un colorante de
contraste (como la safranina, que es un colorante rojo); de esta manera, las
clulas gram negativas, previamente decoloradas, toman el colorante de
contraste y las clulas gram positivas ahora aparecen prpuras
76
.

3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La propuesta de la aplicacin del mtodo de tincin de Gram adicionado con
cido actico al 0.1 N o Tincin Gram Actica basado en la tincin de Gram
convencional, prueba bsica de identificacin de bacterias, plantea la
posibilidad de su aplicacin en la determinacin de bacterias gram positivas o
negativas en sedimento urinario, es decir para complementar el anlisis
bioqumico clnico de orina, para lo cual se pone en manifiesto con la prctica
de todas las muestras de orina procedentes de una poblacin de mujeres
embarazadas durante el ltimo trimestre del 2002.

4. JUSTIFICACIN

El anlisis de orina para la determinacin y confirmacin de infeccin urinaria
en un laboratorio de anlisis clnico contempla el anlisis fsico y qumico de la
orina y la observacin microscpica de sedimento urinario para poder encontrar
la presencia de bacterias. La propuesta que se plantea en el presente ensayo

76
Idem. Pg. 25.
40
es la determinacin de bacterias en orina realizando:

Aplicacin del mtodo de tincin Gram al sedimento de la muestra de orina
centrifugada y aplicacin del mtodo que se pone a prueba; es decir tincin
Gram adicionado con cido Actico 0.1N al sedimento de orina.

5. HIPTESIS.

La tincin de Gram modificado con cido actico al 0.1 N facilita la visualizacin
de la presencia de las bacterias gram positivas y gram negativas en el
sedimento de orina de una poblacin de mujeres embarazadas con infeccin
del tracto urinario.

6. OBJETIVOS DE INVESTIGACIN

6. 1 OBJETIVO GENERAL

MEJ ORAR LA VISUALIZACIN DE BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y
GRAMNEGATIVAS EN EL SEDIMENTO URINARIO UTILIZANDO LA
TINCIN GRAM MODIFICADA CON ADICIN DE CIDO ACTICO
0.1 N.

6. 2 OBJETIVOS ESPECFICOS

o ESTABLECER LA COMPARACIN EN EL MTODO MICROSCPICO
UTILIZANDO LA TINCIN GRAM Y LA TINCIN GRAM ADICIONADO
CON CIDO ACTICO AL 0.1 N EN SEDIMENTO URINARIO

o DETERMINAR LA EFICACIA ENTRE EL MTODO MICROSCPICO
DE TINCIN GRAM Y TINCIN GRAM ADICIONADO CON CIDO
.ACTICO AL 0.1 N EN SEDIMENTO URINARIO.

41
7. METODOLOGA

El trabajo realizado es de tipo experimental y prospectivo.

7.1 ESTANDARIZACIN DEL MTODO DE GRAM ADICIONADO CON
CIDO ACTICO AL 0.1 N

La estandarizacin a partir de bacterias Gram positivas y Gram Negativas para
la determinacin de las diferencias encontradas entre el mtodo de tincin
Gram y el mtodo modificado con cido actico al 0.1 N en el microscopio.

7.2 MTODOS, TCNICAS Y MATERIALES

El presente trabajo, se ha desarrollado toda la fase prctica y experimental en
el laboratorio de la asistencia pblica situado en la Av Simn Bolvar N 1519
de la ciudad de La Paz.

MATERIAL BIOLGICO

Se utiliz cepas de control de cultivos: bacilos gramnegativos, cocos
grampositivos, sedimento urinario con presencia de bacteriuria.

MATERIAL DE VIDRIO

Dos lminas de vidrio por cada paciente, previa identificacin de datos
personales.

REACTIVOS

Acido actico 0.1 N
Se ha utilizado portaobjetos en duplicado por cada paciente, uno para
colorearlo con tincin gram y otro con tincin gram ms cido actico 0.1N.

42
MTODOS

Tincin gram y tincin gram actica.

7.3 PROCEDIMIENTO Y TCNICA

Luego de realizar el examen fsico y qumico de la orina, se procede de la
siguiente manera:

1.- Centrifugar la muestra de orina 10min a 2500 RPM.
2.- Obtener el sedimento urinario.
3.- Colocar 50 UL de sedimento en portaobjetos previamente identificado.
4.- Fijar la muestra a temperatura habiente por 30min.
5.- Realizar la tincin Gram normal.
6.- Pasos de la tincin Gram:

Cubrir el porta objetos con el colorante primario por un minuto cristal violeta
luego lavar con agua corriente.

Cubrir el porta objetos con solucin de lugol un minuto (mordiente) lavar con
agua corriente.

Cubrir el porta objeto con alcohol-acetona 10seg (de colorante) lavar con agua
corriente.

Cubrir el porta objeto con el colorante de contraste por un minuto (safranina o
fuccina fincada) luego lavar con agua corriente.

Para la tincin Gram adicionada con cido actico 0.1N se siguen los mismos
pasos hasta el inciso C y en el paso de la coloracin del contraste de
safranina se le agrega 50UL de cido actico de 0.1N durante un minuto se
procede con el lavado.

Dejamos secar a temperatura ambiente.
43
44
Observar al microscopio con objetivo inmersin.

7.4. APLICACIN DEL MTODO ESTANDARIZADO EN MUESTRAS
OBTENIDAS

Luego de estandarizar el mtodo, proceder a determinar bacterias de
sedimentos de orina de la poblacin en estudio con la tcnica de Gram Actica
al 0.1N.

7.5 TIPO DE ESTUDIO Y MUESTREO

El presente estudio es del tipo experimental, cuyo mtodo de muestreo, est
basado de acuerdo a la programacin de la poblacin de mujeres embarazadas
del Seguro Bsico de Salud con infeccin urinaria. Atendiendo a la poblacin
existente en el distrito urbano norte de la ciudad de La Paz y la distribucin de
laboratorios existentes en el mismo.

C s A c h a c h i c a l a
A s i s t e n c i a P b
C E M S E
l i c a
P o l i c . C e n t r a l
P r o s a l u d T . S o r z a n o
P r o s a l u d A . M i r a f l o r e s
S a n F . D e A s i s
P o l i c . V i l l a F t i m a
H o s p . O b r e r o
P o l i c 1 2 d e A b r i l
R E D D E L A B O R A T O R I O S D E D I S T R I T O U R B A N O N O R T E
2 5 6 . 6 3 4 H A B I T A N T E S S A N F R A N C I S C O D E A S I S
P R O S A L U D A L T O M I R A F L O R E S
P R O S A L U D T E J A D A S O R Z A N O
P O L I C L N I C O V . F T I M A C . N . S .
C E M S E
H O S P I T A L O B R E R O C . N . S .
P O L I C L N I C O C E N T R A L C . N . S .
H O S P I T A L M A T E R N O I N F A N T I L C . N . S .
A s i s t e n c i a P b l i c a
C . S . A C H A C H I C A L A
H O S P I T A L M I L I T A R C O S S M I L
I N S T I T U T O N A C I O N A L D E T R A X .
H o s p i t a l d e C l n i c a s

7.6. POBLACIN Y MBITO DE ESTUDIO

Mujeres Embarazadas del Seguro Bsico de Salud diagnosticadas en el
Laboratorio Clnico de la Asistencia Pblica. La Asistencia Pblica esta ubicada
en el Distrito Urbano de Salud 2 y tiene una cobertura de atencin media de
15.000 por ao. Pero para realizar una programacin aproximada vamos a
basarnos en la poblacin del Distrito de Salud Urbano Norte;
Poblacin del Distrito Urbano Dos: 256.634 Habitantes
Programacin Anual al 1%: 2566 habitantes
Cobertura de casos por centro de salud trimestral (Asistencia Pblica): 256

Las actividades se realizaron de acuerdo al siguiente flujograma:

MUJERES EMBARAZADAS SBS

MUESTRAS DE ORINA PARA ANLISIS CLNICOS DE
MUJERES EMBARAZADAS DEPENDIENTES DEL SBS EN EL
LABORATORIO CLNICO DE LA ASISTENCIA PUBLICA
DETERMINACIN MICROSCOPICA
DE BACTERIAS T. GRAM
ADICIONADO CON ACIDO ACETICO
EFICACIA DE LOS
RESULTADOS POR
ANALISIS CLINICO Y
LOS RESULTADOS
OBTENIDOS CON
TINCION GRAM
ACTICA
EFICACIA ENTRE LOS
RESULTADOS
OBTENIDOS POR TINCIN
GRAM Y TINCION GRAM
ACETICA AL 0.1N

8. ANLISIS DE RESULTADOS

Los resultados encontrados luego de haber procesado 269 muestras durante
los meses de octubre a diciembre, habiendo comenzado en septiembre para la
estandarizacin del mtodo se muestran en seguida, los comentarios de los
mismos se los realizan posteriormente.

45
8.1 RESULTADO GENERAL DEL MTODO EMPLEADO

La determinacin de bacterias en sedimento urinario con el mtodo de tincin
gram actica es:

8.1.1 RESULTADOS GENERALES

TABLA N 1
RESULTADOS GENERALES DE LA DETERMINACIN DE BACTERIAS
GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS EN MUESTRAS DE
SEDIMENTO URINARIO DE MUJERES EMBARAZADAS DURANTE
LOS MESES DE OCTUBRE NOVIEMBRE Y DICIEMBRE DEL 2002
MUESTRAS PROCESADAS 269
MUESTRAS CON INFECCIN URINARIA 94
MUESTRAS SIN INFECCIN URINARIA 175
MUESTRAS CON BACTERIAS GRAM POSITIVAS 105
MUESTRAS CON BACTERIAS GRAM POSITIVAS A. ACETICO 137
MUESTRAS CON BACTERIAS GRAM NEGATIVAS 82
MUESTRAS CON BACTERIAS GRAM NEGATIVAS A. ACTICO 109

46
Los grficos de esta tabla son:
GRFICO N 1
0
50
100
150
200
250
300
1
Pacientes
DX Clinico +
T.G.P.+
T.G.P.A.+
T.G.N. -
T.G.N.A.-

REFERENCIAS

Pacientes: nmero de muestras procesadas
DX Clnico +: las muestras con infeccin urinaria
T.G.P. +: bacterias gram positivas
T.G.P.A.+: bacterias gram positivas con cido actico
T.G.N.-: bacterias gram negativas
T.G.N.A.-: bacterias gram negativas con cido actico

El siguiente grfico representan los mismos resultados en porcentaje:

GRFICO 2
Pacientes
DX Clinico +
T.G.P.+
T.G.P.A.+
T.G.N. -
T.G.N.A.-
47

8.1.2 RESULTADOS EFICACIA TINCIN GRAM ACTICA

TABLA 2
DETERMINACIN DE LA EFICACIA DE LA TINCIN
GRAM ACTICA
POSITIVOS T.GRAM ACTICA VP 138
CONVERSION NEGATIVA FP 27
CONVERSION POSITIVA FN 71
NEGATIVOS T.GRAM ACETICA VN 131
SENSIBILIDAD 66%
ESPECIFICIDAD 83%

Los resultados de la tabla 2 se objetivizan mediante las siguientes grficas:

GRFICO 3
EFICACIA DE LA TINCIN GRAM ACTICA

GRFICO 4
PORCENTAJE EFIC N GRAM ACTICA
0
20
40
60
80
100
120
140
VP FP FN VN
VP
FP
FN
VN
ACIA TINCI
VP
FP
FN
VN
48
GRFICO 5
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD
0
20
40
60
80
100
S E
S
E

GRFICO 6
PROPORCIN DE LA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD
S
E

8.1.3 RESULTADOS EFICACIA TINCION GRAM POSITIVA ACTICA

TABLA 3
GRAM POSITIVA ACTICA
POSITIVOS T. GRAM ACTICA VP 137
NEGATIVOS T. GRAM ACTICA VN 132
SENSIBILIDAD 81,06%
ESPECIFICIDAD 98,5%

Los resultados de la tabla 3 se especifican mediante los siguientes grficos:
49
GRFICO 7
EFICACIA TINCIN GRAM POSITIVA ACTICA
0
20
40
60
80
100
120
140
VP FP FN VN
VP
FP
FN
VN

GRFICO 8
EFICACIA TINCIN GRAMPOSITIVA ACTICA EN PORCENTAJE
VP
FP
FN
VN

GRFICO 9
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD
0
20
40
60
80
100
S E
S
E
50
GRFICO 10
PROPORCIN DE LA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD
S
E

8.1.4 RESULTADOS EFICACIA TINCION GRAM NEGATIVA ACTICA
TABLA 4
GRAM NEGATIVA ACTICA
POSITIVOS T.GRAM ACTICA VP 120
NEGATIVOS T.GRAM ACETICA VN 149
SENSIBILIDAD 75,9%
ESPECIFICIDAD 100%

Los resultados de la tabla 3 se especifican mediante las siguientes grficas:

GRFICO 11
EFICACIA GRAM NEGATIVA ACTICA
0
50
100
150
VP FP FN VN
VP
FP
FN
VN

51
GRFICO 12
EFICACIA GRAM NEGATIVA ACTICA EN PORCENTAJE:
VP
FP
FN
VN

GRFICO 13
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD:
0
20
40
60
80
100
S E
S
E

GRFICO 14
PROPORCIN DE SENSIBILIDAD Y RESISTENCIA
S
E

52
8.1.5 RESULTADOS DE LA MORFOLOGA ENCONTRADA

La determinacin microscpica de acuerdo a la morfologa determinada en
porcentaje; es la siguiente:
TABLA 5
MORFOLOGA DE LAS BACTERIAS OBSERVADAS CON LA TINCIN
GRAM ACTICA EN PORCENTAJE
MORFOLOGA PORCENTAJ E
(%)
GRAM
POSITIVOS (%)
GRAM
POSITIVOS (%)
BACILOS 68,03 24,53 43,50
COCOS 10,41 10,41 0

9. CONCLUSIONES

Se han procesado 269 muestras de mujeres embarazadas para diagnstico
clnico en el Laboratorio de la Asistencia Pblica, los resultados encontrados
determinas las siguientes conclusiones.

La aplicacin del mtodo de tincin gram permite diferenciar bacterias en gram
positivas y gram negativas en sedimento urinario.

La Tincin gram actica permite determinar con mayor sensibilidad y
especificidad la presencia de bacterias gram positivas y gram negativas en el
sedimento urinario (como se analizar ms adelante).

Los resultados de eficacia de la tincin gram actica proporcionan una
sensibilidad de 66% y una especificidad de 83% con respecto a la
determinacin con tincin gram simple.

La aplicacin de la tincin gram con cido actico 1N mejora la determinacin
de bacterias respecto a la ticin gram simple con una conversin negativa de
27, es decir, que 27 casos reportados como positivos en la Tincin Gram
simple, han sido convertidos como casos negativos (conversin negativa).

La conversin positiva (conversin de casos negativos a positivos) es de 71.
53
La tincin gram actica proporciona datos exactos de 131 verdaderos
negativos.

La aplicacin de la tincin gram actica 1N mejora la determinacin de
bacterias gram positivas con una sensibilidad del 81,06% y una especificidad
de 98,5%.

La aplicacin de la tincin gram con cido actico 1N mejora la determinacin
de bacterias gram positivas respecto a la ticin gram simple con una
conversin negativa de 2, es decir, que 2 casos reportados como positivos en
la Tincin Gram simple, han sido convertidos como casos negativos
(conversin negativa).

La conversin positiva (conversin de casos negativos a positivos) es de 32
negativos.

La aplicacin de la tincin gram actica 1N mejora la determinacin de
bacterias gram negativas con una sensibilidad del 75,9% y una especificidad de
100%.

La aplicacin de la tincin gram con cido actico 0.1 N mejora la
determinacin de bacterias gram negativas respecto a la ticin gram simple con
una conversin negativa de 0.

La conversin positiva (conversin de casos negativos a positivos) es de 38
negativos.

Como se muestra en la tabla 4 la determinacin microscpica ha dado mayor
cantidad de bacilos gram negativos, seguido de bacilos gram positivos y
finalmente cocos gram positivos.
54
10. COMENTARIOS Y RECOMENDACIONES FINALES

Los resultados finales apoyan de manera afirmativa la hiptesis planteada
respecto, al empleo del mtodo de la tincin gram adicionada con cido actico
al 1N en la determinacin de bacterias gram positivas y gram negativas. Por lo
tanto el ensayo planteado permite resumir las siguientes afirmaciones:

- La sensibilidad del mtodo actico permite determinar la presencia total de
bacterias en los sedimentos urinarios.
- La afirmacin para la determinacin de infeccin bacteriana se la debe
realizar cruzando con los parmetros del anlisis clnico caractersticos de
las orinas.
- El mtodo empleado puede determinar la presencia de bacterias en
sedimentos urinarios, cuyo anlisis clnico en el laboratorio no ha declarado
infeccin. Debido a que la presencia de las mismas no sea procedente de
las muestras de orina de las pacientes.
- Por la amplia determinacin de bacilos gram negativos, es pertinente
recomendar realizar la determinacin del bacilo tuberculoso con la tincin
Ziehl Nielsen, como perfil para otros trabajos.
- Para todos los casos en los que el mtodo empleado ha corroborado la
determinacin clnica de infeccin urinaria, se recomienda hacer el
diagnstico bacteriolgico convencional.
- Para los laboratorios que no realizan diagnstico bacteriolgico, se
recomienda hacer prctica de la tincin gram, para confirmar sus
diagnsticos de infeccin urinaria.
- Finalmente se recomienda realizar otros trabajos aplicando el cido actico
ya que en el presente trabajo se pudo encontrar, levaduras, hifas, y otros.

55
11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

ALMEIDA Claudio. Infecciones Microbianas Urinarias: En ciudades de
Amrica Latina y Caractersticas socioeconmicas de sus poblaciones.
1996.

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FISCHE BACH Manual de Pruebas Diagnsticas. Mxico. 2000. 5ta
edicin.

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McGraw-Hill interamericana.

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Embarazadas ed. Madrid (Espaa): Ed. AMV. 1996. XVII.

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56
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(Espaa) : Ed Acribia. 1994. XI.

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ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD Metodologa de la
investigacin/ Manual para el desarrollo de personal de salud. 1996.

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A. 1096.

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Mxico D.F. 1992. Manual moderno S.A. de CV

MARIN, Manuel. Qumica Orgnica, Ignacio Puig Editorial, Editor
Albeerto Moly. Buenos Aires Argentina.

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editores: Dr. BuddynLazo de la Vega, Dr. Eduardo Aranda, Ao 1992.

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VIDAL, J orge. Anatoma Fisiologa e Higiene, Editorial Bruo 4ta
Edicin. Lima Per.

WALLACH, J acques. Interpretacin Clnica de las Pruebas de
Laboratorio 4ta Edicin.
57
http://www.carlosaya.net/biblioteca/contenidos/docs/nefrologa/pre
dialisis/pacodiez

58

ANEXOS
59
ANEXO 1

REACTIVOS
CIDO ACTICO CH
3
-COOH

ETANOICO: CH
3
-COOH.- Se llama tambin cido actico. En estado libre se
encuentra en el reino orgnico, en los jugos de ciertos animales y vegetales, pero como
abunda ms es bajo la forma de acetatos, especialmente de potasio y de calcio.

PESO MOLECULAR 60
SOLUBILIDAD X.
ESTADO FISICO SOLIDO INCOLORO
PUNTO DE FUSIN + 167
o
DENSIDAD 1049
EBULLICIN 1188
o

PROPIEDADES

El etanoico se presenta comnmente como un lquido incoloro, de olor picante,
corrosivo, que se solidifica fcilmente en hermosas formas cristalinas, a la manera del
hielo. Este cido actico exento de agua se solidifica a 17, de suerte que en invierno se
suele mantener slido en el interior de las botellas y en verano se vuelve lquido, por
esto a dicho cido se llama cido actico glacial.

El cido actico es monobsico, y por consiguiente no puede, da origen a sales neutras,
sin embargo varios acetatos se combinan con un molcula de cido actico para formar
los llamados biacetatos. Con el Cl en presencia de la luz produce los cidos
cloroacticos, mono, bi y tricloroacticos, segn el nmero de tomos de H del radical
Ch3 substituidos por el cloro.

APLICACIONES

El cido actico es la base para la obtencin de acetatos, y es de uso continuo en la
alimentacin bajo la forma de vinagre.
60
ANEXO 2
PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS

VIOLETA DE GENCIANA

Violeta de genciana..............................................1 g.
Alcohol 96..........................................................20cc
Agua destilada.....................................................80cc

LUGOL

Yodo metlico......................................................1 g.
Ioduro de potasio.................................................2 g.
Agua destilada.................................................300 cc

SAFRANINA

Safranina colorante..............................................1 g.
Alcohol 95.........................................................20 ml
Agua destilada...................................................80 ml

SOLUCIN DECOLORANTE DE GRAM

Alcohol 95.........................................................70 ml
Acetona...............................................................30 ml

61
ANEXO 3
PREPARACIN DE MATERIAL

62
ANEXO 4
FOTOS

63
NDICE DE CONTENIDO

RESUMEN...................................................................................................................... 1
1. INTRODUCCIN.................................................................................................. 3
2. ANTECEDENTES DEL PROBLEMA DE ESTUDIO............................................. 4
2.1 ANATOMA FUNCIONAL DE LOS RIONES................................................ 5
2.1.1 ORGANIZACIN GENERAL DE LOS RIONES Y DE LAS VAS
URINARIAS.............................................................................................................. 5
2.1.2 RIEGO SANGUNEO RENAL..................................................................... 5
2.1.3 LA NEFRONA EN LA UNIDAD FUNDAMENTAL DEL RIN .................. 6
2.1.4 FORMACIN DE LA ORINA COMO RESULTADO DE LA FILTRACIN
GLOMERULAR, LA REABSORCIN TUBULAR Y LA SECRECIN TUBULAR. . 7
2.1.4.1 FILTRACIN REABSORCIN Y CREACIN DE LAS DISTINTAS
SUSTANCIAS....................................................................................................... 8
2.1.5 CONCEPTOS GENERALES DE ORINA.................................................... 8
2.1.6 TOXICIDAD DE LA ORINA....................................................................... 11
2.1.7 VAS DE EXCRECIN DEL RIN......................................................... 11
2.1.7.1 PELVIS RENAL................................................................................. 11
2.1.7.2 URTERES....................................................................................... 11
2.1.7.3 VEJ IGA ............................................................................................. 12
2.1.7.4 URETRA ........................................................................................... 12
2.2 EXAMEN GENERAL DE LA ORINA............................................................. 12
2.2.1 RECOLECCIN ADECUADA DE LA ORINA........................................... 12
2.2.2 EXAMEN FSICO...................................................................................... 13
2.2.2.1 VOLUMEN ........................................................................................ 13
2.2.2.2 COLOR ............................................................................................. 13
2.2.2.3 OLOR DE LA ORINA........................................................................ 15
2.2.2.4 ASPECTO DE LA ORINA ................................................................. 16
2.2.3 EXAMEN QUMICO DE LA ORINA .......................................................... 16
2.2.3.1 REACCIN Y PH DE LA ORINA...................................................... 16
2.2.3.2 PROTENAS EN ORINA O ALBIMINURIA ....................................... 17
2.2.3.3 GLUCOSA EN ORINA ...................................................................... 17
2.2.3.4 CETONURIA..................................................................................... 17
2.2.3.5 PIGMENTOS BILIARES COLURIA (bilrrubinuria) ............................ 18
2.2.3.6 UROBILINURIA................................................................................. 18
2.2.3.7 HEMATURIA (eritrocituria)................................................................ 18
2.2.3.8 PRESENCIA DE NITRITOS EN LA ORINA...................................... 18
2.2.4 SEDIMENTO URINARIO.......................................................................... 19
2.2.4.1 LEUCOCITOS Y PIOCITOS ............................................................. 20
2.2.4.2 CLULAS EPITELIALES .................................................................. 21
2.2.4.3 PRESENCIA DE CILINDROS EN LA ORINA................................... 21
2.2.4.4 PRESENCIA DE CRISTALES EN SEDIMENTO URINARIO............ 23
2.2.4.5 IONOGRAMA URINARIO................................................................. 25
2.2.4.6 OSMOLURIA..................................................................................... 26
2.3 EXAMEN MICROBIOLGICO DE LA ORINA.............................................. 26
2.3.1 BACTERIURIA E INFECCIN URINARIA................................................ 26
64
2.3.2 ETIOPATOGENIA..................................................................................... 28
2.3.3 ETIOLOGA............................................................................................... 29
2.3.4 INFECCIONES URINARIAS EN MUJ ERES EMBARAZADAS................. 30
2.3.5 ESTRUCTURA DE LA CLULA PROCARIOTA ...................................... 32
2.3.5.1 NUCLEOIDE ..................................................................................... 32
2.3.5.2 ESTRUCTURA CITOPLSMICA...................................................... 32
2.3.5.3 FUNCIN.......................................................................................... 33
2.3.5.4 ENVOLTURA O PARED CELULAR.................................................. 34
2.3.5.5 ENVOLTURA CELULAR GRAM POSITIVA ..................................... 36
2.3.5.6 COMPONENTES ESPECIALES DE LAS PAREDES CELULARES
GRAM NEGATIVAS............................................................................................ 37
2.3.5.7 TINCIONES....................................................................................... 39
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA................................................................. 40
4. J USTIFICACIN................................................................................................. 40
5. HIPTESIS......................................................................................................... 41
6. OBJ ETIVOS DE INVESTIGACIN..................................................................... 41
6. 1 OBJ ETIVO GENERAL................................................................................. 41
6. 2 OBJ ETIVOS ESPECFICOS......................................................................... 41
7. METODOLOGA................................................................................................. 42
7.1 ESTANDARIZACIN DEL MTODO DE GRAM ADICIONADO CON CIDO
ACTICO AL 0.1 N ................................................................................................... 42
7.2 MTODOS, TCNICAS Y MATERIALES .................................................... 42
7.3 PROCEDIMIENTO Y TCNICA ................................................................... 43
7.4. APLICACIN DEL MTODO ESTANDARIZADO EN MUESTRAS
OBTENIDAS.............................................................................................................. 44
7.5 TIPO DE ESTUDIO Y MUESTREO.............................................................. 44
7.6. POBLACIN Y MBITO DE ESTUDIO........................................................ 44
8. ANLISIS DE RESULTADOS ............................................................................ 45
8.1 RESULTADO GENERAL DEL MTODO EMPLEADO................................ 46
8.1.1 RESULTADOS GENERALES................................................................... 46
8.1.2 RESULTADOS EFICACIA TINCIN GRAM ACTICA............................ 48
8.1.3 RESULTADOS EFICACIA TINCION GRAM POSITIVA ACTICA .......... 49
8.1.4 RESULTADOS EFICACIA TINCION GRAM NEGATIVA ACTICA......... 51
8.1.5 RESULTADOS DE LA MORFOLOGA ENCONTRADA........................... 53
9. CONCLUSIONES ............................................................................................... 53
10. COMENTARIOS Y RECOMENDACIONES FINALES........................................ 55
11. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................. 56
ANEXOS....................................................................................................................... 59

65

Aplicación tinción Gram acética

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