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MANUAL DE PRACTICAS DE
Biologia Celular y
Molecular
MATERIA:
LICENCIATURA EN:
Biologia Celular y Molecular

MEDICO CIRUJANO
QBP. Martn Zavala Nez

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NDICE

Introduccin 3
Programa de la asignatura de Biologa Celular
Lineamientos en el Laboratorio
Formato de cada prctica
4
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PRCTICAS
1. Diferenciacin celular 11
2. Conteo celular de glbulos blancos 15
3. Propiedades de la membrana 17
4. Fenmeno de transporte en las membranas 22
5. Diferenciacin mitocondrial y citoplasmtica 33
6. Actividad enzimtica de los peroxisomas 36
7. Mitosis en clulas vegetales
8. Cariotipos en races de haba
Bibliografa
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47






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INTRODUCCION
Las guas consignadas en este manual procuran conducir al estudiante de primer
ao universitario de medicina, en el fascinante mundo de la experimentacin
biolgica. Como es apenas lgico, el trabajo de experimentacin supone una
actitud protagnica y constructiva por parte del alumno; bajo la orientacin del
profesor. Consiguiendo as, la confirmacin de algunos fenmenos expuestos en
las clases tericas, adems de la familiarizacin del estudiante con el trabajo de
laboratorio. En tal sentido, al inicio de cada prctica el profesor ofrece una breve
introduccin sobre los fundamentos bsicos y metodologa de la prctica.
El objetivo fundamental del manual de prcticas es presentar a los estudiantes una
serie de experiencias prcticas diseadas para que no slo sigan instrucciones,
sino para que aprendan a pensar y a llegar a conclusiones lgicas cuando se
analizan problemas relacionados con el rea de la Biologa Celular y Molecular.
La Biologa Celular y Molecular en la actualidad ha tenido un avance muy notable,
ya que se ha dado la aplicacin de nuevos mtodos para el anlisis de la clula
en todos sus niveles. Para tener un mayor conocimiento acerca de la organizacin
molecular de la clula es necesario que sea a partir del estudio de las diferentes
molculas que la conforman. Esto nos permite enfocar cada uno de los fenmenos
celulares que se llevan a cabo en aquella.
El manual consta de ocho prcticas, las cuales constituyen material suficiente para
el desarrollo de la asignatura de Biologa Celular y Molecular. Las prcticas estn
diseadas para dos horas de laboratorio, de tal manera que haya tiempo suficiente
para discusin y explicaciones preliminares sobre el trabajo experimental.




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PROGRAMA DE LA ASIGNATURA
La materia de BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR, pretende establecer
mtodos de estudio aplicables de la estructura y funcin de las clulas animal y
vegetal, as como su composicin y estructura describiendo sus relaciones con las
clulas vecinas y con la matriz que las rodea.
OBJ ETIVO GENERAL DE LA MATERIA: Conocer los avances realizados en el
estudio de la estructura y fisiologa celular. Explicar la naturaleza fluida de las
membranas biolgicas y relacionar con los componentes lipdicos y proteicos,
sealar la fluidez de las membranas y sus funciones dinmicas, los diferentes
componentes del citoesqueleto, relacionarlos con sus funciones celulares y su
intervencin en la modulacin de los procesos extracelulares. Describir la
importancia de la comunicacin intra e intercelular para el mantenimiento de la
vida celular. Referir la ultraestructura de mitocondrias y cloroplastos, y relacionarla
con los procesos transductores de energa.
UNIDAD I. PRINCIPALES BIOMOLECULAS DE LA MATERIA VIVA
I.1 Carbohidratos. Generalidades, clasificacin e importancia.
I.1.1 Glucoprotenas y glucolpidos.
I.2 Lpidos.
I.2.1 Generalidades, clasificacin e importancia.
I.2.2 Propiedades qumicas.
I.3 Aminocidos y protenas.
I.3.1 Aminocidos como unidades fundamentales de las protenas.
I.3.2 Generalidades sobre protenas.
I.3.3 Organizacin y estructura de las protenas.
I.3.4 Clasificacin de protenas y su importancia.
I.4 cidos nucleicos.
I.4.1 Generalidades de los cidos nucleicos como unidades de la herencia.
I.4.2 Composicin qumica de los cidos nucleicos (nuclesidos y nucletidos).
I.4.2 Estructura y funcin del ADN. Estructura, tipos y funcin del ARN.


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UNIDAD II. INTRODUCCIN AL ESTUDIO DE LA CLULA
II.1 Niveles de organizacin de la materia viva.
II.1.1 tomo, molcula, coacervado, clula, tejidos, rganos, aparatos, sistemas e
individuos.
II.2 Origen de la vida y evolucin celular.
II.2.1 Evolucin qumica y sntesis prebiolgica de compuestos orgnicos;
surgimiento de las molculas orgnicas; sntesis abitica.
II.2.2 Teora de Oparin-Haldane; experimentos de Miller y Urey.
II.2.3 Origen y evolucin del metabolismo.
II.2.4 Origen de los procariontes y eucariontes.
II.2.5 Evolucin prebiolgica como antecedente del surgimiento de las primeras
clulas.
II.2.6 Hiptesis ms fundamentada del origen de los eucariontes (simbitica).
II.2.7 Origen del ncleo y del retculo endoplsmico.
II.3 Antecedentes y generalidades sobre el estudio de la clula.
II.3.1 Teora celular.
II.3.2 Datos histricos sobre las aportaciones y avances tecnolgicos que
permitieron profundizar en el estudio de la clula.
II.3.3 Postulados de la teora celular y el impacto en su momento histrico.
II.3.4 Unidad y diversidad celular; los tres dominios (Archea, Eubacteria y Eucaria).
II.3.5 Unidad y diversidad celular; los tres dominios (Archea, Eubacteria y Eucaria).
II.3.6 Clasificacin de R. Whittaker.
II.4 Mtodos para el estudio de la clula.
II.4.1 Microscopa: fundamentos; microscopio fotnico, de campo claro, contraste
de fases, electrnico, de transmisin y de barrido.
II.4.2 Anlisis de fracciones celulares: centrifugacin diferencial, cromatografa,
electroforesis y espectroscopa.
II.4.3. Mtodos histolgicos: fijacin, inclusin, corte, tincin (colorantes,
composicin, especificidad y clasificacin).
II.5 Organizacin y estructura general de la clula.
II.5.1 Procariontes: estructura y organizacin genmica; importancia y diversidad.

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II.5.2 Eucariontes: estructura (panorama general de los distintos organelos que
componen a la clula); importancia y diversidad.

UNIDAD III. ESTRUCTURAS DE SOSTN Y DE RECONOCIMIENTO
III.1 Pared celular. Estructura, funcin e importancia en procariontes (Gram
positivas, Gram negativas y de Archea) y de eucariontes (hongos, algas y
vegetales).
III .1.1 Estructura y funcin del glicoclix.
III.2 Matriz extracelular. Composicin qumica y funciones; diversidad estructural.
III.3 Membrana celular de procariontes y eucariontes: composicin qumica y
funcin.
III.3.1 Modelo del mosaico fluido, protenas membranales integrales y perifricas.
III.4 Mecanismos de transporte.
III .4.1 Transporte pasivo: smosis y difusin; transporte activo; transporte masivo.
III.4.1 Endocitosis: fagocitosis y pinocitosis; endocitosis constitutiva y mediada por
receptores. Exocitosis.

UNIDAD IV. CITOESQUELETO Y MOVIMIENTO
IV.1 Componentes del citoesqueleto.
IV.1.1 Estructura, funcin e importancia de microtbulos, microfilamentos,
filamentos intermedios y microtrabculas.
IV.1.2 Relevancia e Importancia del citoesqueleto en las funciones celulares.
IV.2 Centrolo, cuerpo basal y huso acromtico.
IV.3 Asociaciones especializadas del citoesqueleto y de la matriz.
IV.4 Movilidad celular: estructura de cilios y flagelos en eubacterias, eucaria y
archeobacterias.







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UNIDAD V. SISTEMAS MEMBRANOSOS
V.1 Retculo endoplsmico.
V.1.1 Estructura, funcin e importancia.
V.1.2 Retculo endoplsmico rugoso: sntesis de protenas lisosomales y de
secrecin (hiptesis del pptido seal).
V.1.3 Retculo endoplsmico liso: estructura y funcin; sntesis de lpidos y
detoxificacin celular.
V.2 Aparato de Golgi.
V.2.1 Estructura y funcin; modificaciones postraduccionales (glicosilaciones y
sulfataciones).
V.2.3 Transporte: trfico y empacamiento de productos de secrecin; procesos
secretores; renovacin membranal.
V.3 Lisosomas. Lisosoma primario, secundario y cuerpos residuales; mecanismos
de digestin, defensa y autodigestin controlada.
V.4 Microcuerpos. Peroxisomas y glioxisomas. Estructura y procesos oxidativos en
los que intervienen.

UNIDAD VI. ESTRUCTURAS INVOLUCRADAS EN LA
TRANSFORMACIN DE ENERGA
VI.1 Mitocondria.
VI.1.1 Ultraestructura: permeabilidad de la membrana, componentes de la
membrana interna, espacio intermembranal y matriz.
VI.1.2 Funcin e importancia en el envejecimiento celular.

UNIDAD VII. NCLEO Y REPRODUCCIN CELULAR
VII.1 Ncleo.
VII.1.1 Envoltura nuclear; estructura y funcin.
VII.1.2 Complejo de poro y su regulacin en el transporte de materiales.
VII.1.3 Cromatina y estructura cromosmica.
VII.1.4 Nucleosoma.

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VII.1.5 Matriz nuclear; nucleoplasma, participacin en la organizacin y
transcripcin del ADN.
VII.2 Nucleolo.
VII.2.1 Estructura y composicin (regin granular, regin fibrilar y ADN asociado).
VII.2.2 Componentes ribonucleoproteicos.
VII.3 Ciclo celular.
VII.3.1 Fases del ciclo celular, duracin del mismo en clulas eucariontes.
VII.3.2 Interfase (fase G0, G1, S, G2) eventos fisiolgicos. Divisin celular: mitosis,
meiosis, citocinesis.
VII.4 Control del ciclo celular.
VII.5 Apoptosis (muerte celular programada).
VII.5.1 Vas que conducen a la muerte celular.

UNIDAD VIII. COMUNICACIN CELULAR
VIII.1 Caractersticas de los sistemas de seales celulares.
VIII.2 Traduccin de seales en el interior de la clula.
VIII.2.1 Seal directa.
VIII.2.2 Transformacin de la seal.
VIII.2.3 Amplificacin de la seal.
VIII.2.4 Distribucin de la seal.
VIII.2.5 Moduladores de la seal.
VIII.3 Adhesin intracelular.
VIII.3.1 Uniones estrechas.
VIII.3.2 Uniones de anclaje: mediadas por caderina y por integrinas.
VIII.3.3 Uniones GAP y plasmodesmos.






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LINEAMIENTOS EN EL LABORATORIO
Se recomienda que se lea cada prctica antes de presentarse a la
sesin de laboratorio, ya que este curso est dirigido hacia la
aplicacin de tcnicas de estudio de la Biologa Celular. Para lo cual
se pide el diseo y control sobre los experimentos que se estn
realizando.
El alumno deber observar buena conducta dentro del laboratorio y
cumplir con los Lineamientos que marca el Reglamento interno de los
Laboratorios:
1. El uso de la bata en el laboratorio es obligatorio, NO permitiendo
el acceso al mismo a ningn alumno si no se trae en ese
momento.
2. El alumno deber tener limpio su lugar de trabajo, por tal motivo
deber depositar la basura en los cestos y no en el suelo y no se
permite la ingesta de bebidas ni alimentos dentro del laboratorio.
3. Al trmino de la prctica todo el material de cristalera utilizado
debe estar perfectamente bien lavado y sus mesas de trabajo
limpias.
4. Trabaje en orden, evitando distraer a sus compaeros cuando
estn realizando sus experimentos. El alumno desordenado ser
suspendido de la sesin en curso.
5. Est prohibido el uso de celulares dentro del laboratorio como
medio de comunicacin. Solo podrn ser utilizados para la toma
de fotografas de las preparaciones cuando as lo requieran, para
una mayor calidad en el reporte.


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FORMATO DE CADA PRCTICA
Cada prctica consta de las siguientes secciones:
1. Ttulo
2. Objetivo
3. Introduccin
4. Material
5. Procedimiento
6. Cuestionario
7. Informe
Para el desarrollo de la prctica, primero se establecen los objetivos;
posteriormente en la introduccin se discuten los principios tericos que se
aplican, las tcnicas de laboratorio requeridas y un ejemplo de clculos si fuese
necesario.
El procedimiento experimental incluye el material y reactivos necesarios, los
avisos de seguridad pertinentes y las formas apropiadas de disponer de los
desperdicios y reactivos sobrantes.
El cuestionario contiene preguntas y problemas sobre el experimento y se tendrn
que contestar antes con un prelaboratorio (prueba que el estudiante se prepar
para la prctica), durante (comprobacin experimental) y despus de la prctica
(informe).
En el informe se anotaran las observaciones, datos y resultados. Asimismo se
analizaran los resultados. Siendo el informe final de la prctica el documento en el
que se basar la evaluacin de la misma.





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PRCTICA No. 1
CELULAS ANIMALES Y VEGETALES
OBJETIVO
Establecer que de acuerdo con el nivel de organizacin, existen dos tipos de
clulas: procariotas y eucariotas.
INTRODUCCIN
Segn lo expresado por Curtis y Sue (2000) y Starr y Taggart (2004), las clulas
animales y vegetales presentan algunas diferencias y similitudes, entre las
diferencias se destaca, en la clula vegetal adems de la membrana celular,
presenta pared celular compuesta de celulosa y otros polisacridos, la presencia
de plstidos en la clula vegetal, constituye una de las grandes diferencias con
respecto a la clula animal, las vacuolas grandes en clulas vegetales(ocupa gran
parte de la clula) y vacuolas pequeas o ausentes en clulas animales es otra
diferencia importante en los dos grupos. Las similitudes se tienen la presencia de
ribosomas, mitocondrias, ncleo, nuclolo, complejos de Golgi.
Para Gonzlez y Spinel (2004), segn la complejidad de la ultraestructura celular
los organismos se dividen en procariontes y eucariontes. Los primeros o
prenucleares, se caracterizan por carecer de organelos con unidad de membrana
tales como ncleo, mitocondrias, cloroplastos, aparato de Golgi etc. como lo son
las bacterias. En el grupo de los eucariontes estn los hongos, las algas, los
protozoarios y dems organismos superiores vegetales y animales.
La principal restriccin al tamao de la clula es la que impone la relacin entre el
volumen y la superficie, esto es, en clulas grandes, la relacin superficie
/volumen es menor que en clulas pequeas, lo que significa que las clulas
grandes disponen de una superficie de intercambio con el medio ambiente
proporcionalmente menor. Una segunda limitacin al tamao de una clula
eucaritica parece estar relacionada con la capacidad del ncleo centro de
control de la clula-para suministrar suficientes copias de molculas con la

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informacin necesaria para regular los procesos que ocurren en una clula
grande, metablicamente activa (Curtis y Sue, 2000).
MATERIAL
Microscopio Azul de metileno
Portaobjetos Rojo Sudan III
Cubreobjetos Colorante Wright
Mechero de alcohol Frasco lavador
Lanceta estril Alcohol absoluto
Cubeta de tincin Eosina
Cuchillas de afeitar nuevas Hematoxilina
Cajas de Petri (pequeas) Lugol
Palillos de dientes Cebolla
Papa Tradescantia (siempre viva)
Tomate Tocino graso
Sangre humana Agua de charca y algas

PROCEDIMIENTO
Primera actividad: Observacin de clulas vegetales
1. Clulas de cebolla (Allium sp): Tome con cuidado varias hojas de cebolla y,
retire la delgada capa (epidermis) que est adherida a ellas. Depostelas en
una placa portaobjetos, evitando que se enrollen y agregue una gota de
azul de metileno u otro colorante que se le indique. Finalmente coloque el
cubreobjetos y realice las observaciones y esquemas en diferentes
aumentos.
2. Clulas de tradescantia: Se procede de la misma forma que la cebolla, pero
sin agregar ningn colorante a la muestra. Realice las observaciones y
esquemas en diferentes aumentos.
3. Clulas de papa (Solanum tuberosum): Realice varios cortes (finos) de
escasos micrmetros con la ayuda de cuchillas de afeitar nuevas, parte de
esos cortes depostelos en una caja Petri con agua y agrgueles azul de
metileno u otro colorante que se indique, el resto agrgueles directamente

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el colorante lugol. Realice las observaciones y esquemas en diferentes
aumentos.
4. Clulas de tomate (Lycopersicum esculentum): Retire un trozo pequeo de
pulpa de tomate con la ayuda de un bistur o cuchilla de afeitar, depostelo
en el portaobjeto y cbralo con el cubreobjetos. Haga las observaciones y
esquemas en diferentes aumentos.
Segunda actividad: Observacin de clulas animales
5. Clulas de epitelio bucal: Con la ayuda de un palillo de dientes, realice un
frotis de la cavidad interna de la mejilla, deposite el raspado sobre la lmina
portaobjetos y haga un extendido sobre la misma. Adicione una gota de
azul de metileno y coloque la laminilla cubreobjetos. Anote las
observaciones y dibuje los esquemas en diferentes aumentos. Finalizada la
observacin deposite las placas en el recipiente de riesgo biolgico
(guardin) que hay en el laboratorio.
6. Clulas de tejido graso: Tome una cuchilla de afeitar o bistur, y haga un
raspado sobre el tejido graso, depostelo en el portaobjeto y agrguele rojo
sudan III. Anote las observaciones y dibuje los esquemas en diferentes
aumentos.
7. Clulas sanguneas: Para esta actividad es necesario un donante. Se
procede de la siguiente manera: desinfecta con alcohol y algodn el rea
(puncin en dedo, o vena del brazo), sin pasar dos veces por el mismo sitio
(para evitar infecciones). Obtenida la muestra de sangre, deposite una gota
sobre una placa portaobjetos y con la ayuda de otra placa, realice un
extendido de la misma, adicinele el colorante wrigth, procurando distribuir
el mismo en toda la placa. Luego, pase el portaobjeto por el mechero,
haciendo varias pasadas sobre la flama (evitar quemar las clulas). Realice
las observaciones y esquemas de la muestra, donde se observarn
predominantemente glbulos rojos.



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Observacin de algas
8. Recoja agua de charcas, ri o de florero en un recipiente limpio con varios
das de antelacin. En el laboratorio, tome una pequea gota del agua con
la ayuda de un gotero, depostela en una lmina portaobjetos y colquele el
cubreobjetos.
9. Inicie la observacin en el objetivo de 4x, y luego con los otros aumentos.
Para la identificacin de gneros solicite las claves y lminas utilizadas para
tal fin. Realice las figuras y anotaciones necesarias de cada gnero
encontrado. En todos los casos recuerde seguir las normas generales de
laboratorio, utilizando guantes de ltex en todo el transcurso de la prctica.
Para la identificacin de los diferentes gneros de algas y protozoos se
cuenta con manuales, claves, laminas. Solicite ayuda a los encargados de
dirigir la prctica.
CUESTIONARIO
1. Al Identificar las diferentes partes de las clulas animales y vegetales
observadas, notamos algunas diferencias. Explique
2. En qu etapa de formacin del eritrocito desaparece el ncleo del mismo
3. Mencione la hormona encargada de la produccin de glbulos rojos en la
sangre y el lugar donde se produce.
4. Escriba al menos una funcin de cada uno de los componentes celulares de
la sangre.
5. Qu funcin desempean los plstidos en los vegetales? Qu tipo de
plstidos se conocen? Es posible identificar plstidos en clulas animales?
Explique.
6. Se sabe que las grasas o triglicridos son las sustancias ms abundantes
en la naturaleza. En qu rganos de las plantas y animales las podemos
encontrar? Qu papel desempean y en qu proporcin estn en nuestro
organismo?



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PRCTICA No. 2
CONTEO CELULAR DE GLBULOS BLANCOS
OBJETIVO
Conocer y practicar el uso correcto de una cmara de Neubauer, para poder
ejercitar los clculos necesarios para estimar el nmero celular de una
suspensin celular, realizar y aplicar la metodologa para un recuento de
Leucocitos por milmetro cbico de sangre e interpretar el resultado
INTRODUCCIN
En Biologa Celular es comn el encontrarse con la necesidad de conocer el
nmero de clulas que presentes en un volumen dado; por ejemplo, cuando se
realizan cultivos celulares se precisa saber cuntas clulas se encuentran en un
momento x (t1) con respecto al nmero de clulas que inicialmente se sembraron
(t0). O bien, para saber cuntos espermatozoides hay en los eyaculados de
diferentes pacientes. En tales casos se requiere de un instrumento que permita
contar directamente, o bien, calcular la concentracin celular en un medio.
Para resolver el problema de conteo celular, se ha optado, en algunos casos, por
calibrar sistemas espectrofotomtricos, cuyo fundamento se finca en las
propiedades de absorcin de la luz por parte de las clulas; sin embargo, tales
sistemas son poco exactos y los resultados que se obtienen son difciles de
repetir. Una alternativa a este problema es el contar directamente el nmero de
clulas presentes en un volumen conocido; esto puede ser un trabajo agobiante si
consideramos, por ejemplo, a las clulas procariontes, las cuales miden
generalmente menos de 10 micras (>1X10-6 metros o 1X10-3 milmetros o bien
0.010 y por lo tanto se pueden encontrar muchsimas en un volumen muy
pequeo. No obstante, se cuenta con la cmara de Neubauer, la cual es un
instrumento muy til que permite contar clulas de distinto tamao. La cmara de
Neubauer tiene la apariencia de un portaobjetos grueso, que en una cara tiene
una placa muy delgada de metal, la cual se encuentra grabada con un par de
cuadriculas muy finas y de medidas definidas. La cmara de Neubauer cuenta

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tambin con un par de muescas que permiten colocar la muestra a analizar en dos
compartimientos. Por ltimo, la cmara de Neubauer se complementa con un
cubreobjetos cuyo grosor es mayor, tambin, que el de los cubreobjetos
convencionales. Ver la siguiente figura:



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Entonces, la altura entre el portaobjetos y el cubreobjetos se encuentra definida,
as como el rea de la cuadricula en el portaobjetos; por lo tanto, es posible
calcular el volumen contenido en cada compartimiento de la cmara de Neubauer.
De esta manera, es posible conocer el volumen de muestra celular que se coloca
en la cmara, ahora solo resta conocer el nmero de clulas presentes en ese
volumen.
Para el conteo de leucocitos, se usan mtodos sistemticos que son ms rpidos
y precisos, y los mtodos manuales.
Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases:
Dilucin de la sangre
Muestreo de la sangre diluida en un volumen
Recuento de clulas en ese volumen
Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que
corresponden a los campos 1, 3,7 y 9.
Para su dilucin, se hace lo mismo que para los hemates pero empleando la
pipeta de blancos, de modo que la solucin que obtenemos es de 1/20. Se utiliza
como diluyente el lquido de Turk. El lquido de Turk es hipotnico de modo que se
destruyen los hemates y as no entorpecen en el recuento.
El lquido de Turk consta de cido actico glaciar 2ml, violeta de genciana
disolucin de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deber
filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.

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En un principio es un poco difcil distinguir los leucocitos de los restos de
membranas de los hemates hemolizados. Se debe tener en cuenta que los
leucocitos son ms refringentes (ms brillantes) al moverlo con el microscopio que
los restos de hemates. Se debe observar la presencia de la membrana
citoplasmtica y de la membrana nuclear (a veces ms) como lneas finas y
brillantes. Esto se observa fcilmente moviendo el microscopio hacia delante y
hacia atrs.
MATERIAL
Pipeta de Thoma para glbulos blancos Boquilla blanca
Tubo de goma Tubos de ensayo con anticoagulante
Papel parafilm Cmara de Neubauer
Cubrehematmetro Microscopio
Gasas Alcohol al 70%
Sangre venosa Lquido de Turk
PROCEDIMIENTO
1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se
practica puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2. Colocar el tubo de plstico y la boquilla para aspirar en la pipeta
3. Llenar la pipeta de glbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para
realizar una dilucin de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente
4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido
de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.
5. Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un
rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos
6. Montar la laminilla de vidrio en la cmara para recuento. Debe estar limpia y
seca.

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7. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota
pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se
llene exactamente.
8. Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten
9. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar
en los 4 cuadrados angulares.
10. En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por
fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeo de
recuento y no se consideran los que estn en los lmites inferior y derecho.
11. Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como
concentraciones, que en este caso seran nmero de clulas por unidad de
volumen de sangre, que es 1mm
3

Despus de contar los glbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el
total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente clculo:
N de leucocitos x mm
3
= altura x dilucin x rea
N de leucocitos x mm
3
= 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000
N de leucocitos x mm
3
= 4/200 = 1/50
N de leucocitos x mm
3
= N de leucocitos contados x 50

CUESTIONARIO
1. Esquematiza las partes que conforman a la cmara de Neubauer
2. Bajo qu condiciones se puede utilizar dicha cmara?
3. Qu utilidad biolgica tiene?
4. Representa la distribucin celular observada por la cmara






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PRCTICA No. 3
PROPIEDADES DE LAS MEMBRANAS
OBJETIVO
Comprobar algunas propiedades de las membranas biolgicas como lo es la
permeabilidad selectiva, el efecto que pueden tener algunos agentes qumicos
sobre las mismas y conozca la importancia del entorno para mantener su
integridad.
INTRODUCCIN
La vida como la conocemos hoy no existira si no existieran las membranas. Estas
estructuras definen el lmite entre lo que se considera una clula y su entorno. En
el caso de las clulas eucariotas, las membranas tambin definen las organelas
internas. Las membranas tienen una funcin ms compleja que ser simples
barreras delimitantes, son estructuras activas donde ocurren procesos metablicos
como transporte de molculas, transduccin de seales, respiracin celular y
generacin de potenciales elctricos entre otros. Es por esto que las membranas
estn constituidas no solo de lpidos sino tambin de protenas y carbohidratos. La
proporcin de cada una de estas macromolculas depender de la funcin de
cada membrana en particular, la cual a su vez depende de la clula a la cual
pertenece. Por ejemplo, la membrana plasmtica de un hepatocito de ratn est
constituida proporcionalmente de 45% de protenas, 27 % de Fosfolpidos, 25 %
de colesterol y 3% de otras macromolculas. La estructura de las membranas
biolgicas aceptada hoy en da es aquella descrita en el modelo del mosaico
fluido. En este modelo se establece que los Fosfolpidos forman una bicapa en la
cual las regiones no polares de cada capa se encuentran hacia adentro de la
misma y las regiones polares de cada capa se encuentran hacia afuera, en
interaccin con el medio acuoso. Las protenas se encuentran embebidas en este
mar de Fosfolpidos con interacciones generalmente de tipo no covalente.

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Las membranas son impermeables a la mayora de los solutos polares y
permeables a los solutos no polares. En general, a mayor nmero de grupos
polares (-OH, -O, -NH2) en una molcula polar, menor ser su permeabilidad a
travs de una membrana. Por lo tanto, para el intercambio de la mayora de los
solutos polares existen mecanismos controlados que pueden implicar inversin de
energa. Otro factor que afecta la permeabilidad de una molcula es su tamao o
peso molecular. A mayor peso, la molcula es menos permeable.
Los eritrocitos son clulas sanguneas cuya funcin principal es transportar
oxgeno a los tejidos. Esta funcin es llevada a cabo por la hemoglobina, una
protena que contiene grupos heme, responsable del color rojo que presentan los
eritrocitos. Durante el proceso de maduracin de estas clulas, la hemoglobina
producida se disuelve en el citoplasma y alcanza concentraciones muy altas
(cerca del 34% del peso del eritrocito); las organelas intracelulares como ncleo,
retculo endoplsmico y mitocondria se pierden. Los eritrocitos son entonces
vestigios de clulas, destinadas a sobrevivir, en el caso de los bovinos, por unos
120 das.
De esta forma, midiendo los tiempos de hemlisis, se puede comparar la
permeabilidad de una serie de molculas orgnicas. A su vez, la presencia de
hemlisis al aadir diferentes agentes qumicos permitir evidenciar cmo la
interaccin de los mismos con la membrana puede tener efectos irreversibles en
su estructura.
MATERIAL
Cloruro de sodio 0.9%: Pesar 0.9 gramos de cloruro de sodio y llevar a 100 ml con
agua destilada.
Solucin saturada de jabn
Cloroformo
Etanol
Solucin de eritrocitos lavados, no usar eritrocitos de oveja
Pipeta de 10 ml y pipeta Pasteur


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PROCEDIMIENTO
Precaucin: el da de hoy usted trabajar con muestras biolgicas. Una regla de
oro preventiva es trabajar cualquier muestra biolgica como potencialmente
infecciosa. El uso de guantes es recomendado. Si ocurre algn derrame, avise
inmediatamente al instructor ms cercano.
Lavado de eritrocitos:
Material
Tubos de ensaye de 75 X 12 mm
Muestra de sangre
Solucin salina fisiolgica
Tcnica
Centrifugar la muestra para separar el suero o plasma de los glbulos rojos. Pasar
el suero o plasma a otro tubo limpio rotulado.
Con una pipeta Pasteur, colocar 0.2 - 0.5ml de glbulos rojos en cada tubo.
Completar con solucin salina hasta 1cm del borde.
Centrifugar durante 1-2minutos para sedimentar las clulas.
Extraer la solucin salina.
Agitar el tubo para resuspender los glbulos rojos. Esta secuencia constituye el
primer lavado.
Repetir los pasos 3-6 por lo menos dos veces. En el ultimo lavado, la solucin
salina debe ser clara, sin signos de hemolisis.
Nota: Para que se pueda observar el fenmeno a estudiar es necesario no
mezclar eritrocitos de distinto origen en un mismo tubo
Actividad uno
1. A 10 ml de cloruro de sodio al 0.9% colocados en cada uno de 4 tubos de
ensayo, aada 2 gotas de eritrocitos lavados.
2. Conserve uno de los tubos como control y a los otros 3 adales
respectivamente, 2 gotas de una solucin saturada de jabn, cloroformo
(agente irritante, manipular con cuidado) y alcohol etlico.
3. Agite repetidamente y deje la solucin en reposo durante 15 minutos.

23
4. Observe los tubos y comprelos con el control
Actividad dos
MATERIAL
Pipeta de 5ml con pipeta Pasteur
Soluciones 0.3M de: urea, tiourea, glicerol, glucosa y sacarosa
Solucin de eritrocitos lavados con cloruro de sodio al 0.9%
Cloruro de sodio 0.9%: Pesar 0.9 gramos de cloruro de sodio y llevar a 100 ml con
agua destilada.
Cronmetro
PROCEDIMIENTO
1. Coloque 2 ml de la solucin 0.3 M a probar (urea, glucosa, etc) en un tubo
de ensayo rotulado y adicione una gota de sangre mezclando
inmediatamente.
2. Mida el tiempo de hemlisis. El tubo control del experimento de hemlisis
causada por agentes qumicos es utilizado como control de no hemlisis.
3. Repita el procedimiento una vez ms para corroborar el tiempo de hemlisis


CUESTIONARIO
1. Elabore un cuadro con los resultados obtenidos de tiempo de hemlisis
versus sustancia utilizada, ordenados de mayor tiempo de hemlisis a
menor tiempo de hemlisis
2. Tomando en cuenta los resultados del cuadro elaborado y la estructura
molecular de las sustancias utilizadas, explique si los datos obtenidos
concuerdan o no con lo esperado tericamente.




24
Puede utilizar los siguientes datos como referencia:
Cuadro 1. Permeabilidad relativa de algunas sustancias, segn el dimetro de la
molcula.
Sustancia Dimetro
(nm)
Permeabilida
d relativa
Agua 0.300 1
Urea 0.360 6X104
In cloruro hidratado 0.386 1X10-8
In potasio hidratado 0.396 6X10-11
Sodio 0.512 2X10-11
Glicerol 0.620 6X10-4
Glucosa 0.860 9X10-6
3. Describa el efecto en los eritrocitos con cada una de las soluciones
saturadas usadas.
4. Investigue con base en qu mecanismo cada una de las soluciones
saturadas de jabn, cloroformo y alcohol etlico causan lisis de los
eritrocitos. Hemlisis producida por efecto de la permeabilidad








25
PRCTICA No. 4
FENMENOS DE TRANSPORTE EN LAS MEMBRANAS
OBJETIVO
Estudiar algunos factores que afectan el funcionamiento de las membranas
celulares.
INTRODUCCIN
Las membranas celulares son barreras selectivas que separan las clulas y
forman compartimientos intracelulares. Entre sus funciones estn:
La membrana celular est formada por una capa doble de Fosfolpidos, protenas
y carbohidratos. Cada Fosfolpido est compuesto por glicerol, cidos grasos y
fosfato, que en conjunto crean una barrera hidrofbica entre los compartimientos
acuosos de la clula. Las protenas permiten el paso de molculas hidroflicas a
travs de la membrana, determinan las funciones especficas de sta e incluyen
bombas, canales, receptores, molculas de adhesin, transductores de energa y
enzimas. Las protenas perifricas estn asociadas con las superficies, mientras
que las integrales estn incrustadas en la membrana y pueden atravesar
completamente la capa doble. La funcin de los carbohidratos adheridos a las
protenas (glicoprotenas) o a los Fosfolpidos (glicolpidos) es la de adhesin y
comunicacin intercelular. El colesterol, que es un esteroide (lpido), determina la
fluidez de la membrana.
Para que la clula funcione eficientemente, debe mantenerse en la misma un
ambiente estable conocido como homeostasis. Para mantener este equilibrio
existen mecanismos para el transporte selectivo de materiales hacia el interior o
exterior de la clula. Las membranas de la clula son selectivamente permeables,
permitiendo el paso de algunas sustancias o partculas (molculas, tomos, o
iones), e impidiendo el paso de otras. Esta selectividad se debe a la capa doble de
Fosfolipidos de la membrana. La manera en que las molculas pasan por la
membrana depende en parte de la polaridad de las mismas. Las molculas
hidrofbicas, o no polares, pasan con relativa libertad a travs de la capa de

26
lpidos, mientras que molculas hidroflicas, o polares, incluyendo el agua, y las
molculas de mayor tamao, pasan a travs de canales formados por protenas
transportadoras. La regulacin del transporte de las molculas, o la direccin en
que se mueven depende de su gradiente de concentracin (diferencia en
concentracin entre dos lugares).
TRANSPORTE CELULAR: DIFUSIN Y OSMOSIS
Para que la clula funcione eficientemente, debe mantenerse en la misma un
ambiente estable conocido como homeostasis. Para mantener este equilibrio
existen mecanismos para el transporte selectivo de materiales hacia el interior o
exterior de la clula. Las membranas de la clula son selectivamente permeables,
permitiendo el paso de algunas sustancias o partculas (molculas, tomos, o
iones), e impidiendo el paso de otras. Esta selectividad se debe a la capa doble de
Fosfolpidos de la membrana. La manera en que las molculas pasan por la
membrana depende en parte de la polaridad de las mismas. Las molculas
hidrofbicas, o no polares, pasan con relativa libertad a travs de la capa de
lpidos, mientras que molculas hidroflicas, o polares, incluyendo el agua, y las
molculas de mayor tamao, pasan a travs de canales formados por protenas
transportadoras. La regulacin del transporte de las molculas, o la direccin en
que se mueven depende de su gradiente de concentracin (diferencia en
concentracin entre dos lugares).
Las molculas se mueven constantemente debido a su energa cintica y se
esparcen uniformemente en el espacio disponible. Este movimiento, llamado
movimiento browniano, es la fuerza motriz de la difusin.
Difusin, se define como el movimiento natural de las partculas de un rea de
mayor concentracin a un rea de menor concentracin hasta alcanzar un
equilibrio dinmico, en el cual el movimiento neto de partculas es cero. La difusin
no requiere gasto de energa por parte de la clula y por lo tanto es un movimiento
pasivo. Cuando la clula transporta sustancias en contra de un gradiente de
concentracin (de un rea de menor concentracin a un rea de mayor
concentracin) se requiere energa (ATP) y sucede movimiento activo.

27
El componente principal de la clula es el agua, que acta como solvente (el
agente que disuelve) de solutos orgnicos e inorgnicos. El movimiento de agua a
travs de una membrana selectivamente permeable se llama osmosis (difusin de
agua) y sucede siempre del rea de mayor concentracin de agua (con menor
concentracin de soluto) al rea de menor concentracin de agua (con mayor
concentracin de soluto). El agua se mover entonces, a favor de un gradiente de
concentracin hacia el rea de mayor concentracin de soluto (donde hay una
menor concentracin de molculas de agua libres). Cuando la clula contiene una
concentracin de solutos mayor que su ambiente externo, se dice que la clula
est en una solucin hipotnica, y como consecuencia, el agua entra a la clula
causando que se expanda. Si la concentracin de solutos es mayor fuera de la
clula, se dice que la clula est en una solucin hipertnica; la clula pierde agua
y se encoge. Si las concentraciones de soluto son iguales en ambos lados de la
membrana, se dice que la clula est en una solucin isotnica, donde el
movimiento neto es cero.
Las clulas animales funcionan ptimamente en ambientes isotnicos. En las
clulas vegetales, sin embargo, cuando la vacuola se llena de agua, sta ejerce
presin contra la pared celular hasta llegar a un punto donde se impida que entre
ms agua (presin de turgencia) y la clula se encuentra trgida (firme), lo cual es
el estado ideal de estas clulas. Por otra parte, si la clula vegetal pierde agua, la
clula sufre plasmlisis al separarse la membrana celular de la pared celular, lo
cual suele ser letal para la clula.
MATERIAL
Agua destilada Gradilla
Bao de agua a 70C Vasos de precipitado de 250 ml
Bao de agua a 37C Betabel
Hielo 6-Tubos de ensayo
Nevera Vaso con hielo
Navaja Pinzas para tubo de ensayo
Plato para calentar u hornilla Aguja de diseccin
Pipetas de 5 ml Termmetro
Regla Marcador de cera

28
PROCEDIMIENTO
A. Efecto de la temperatura
En este ejercicio se usar la planta de remolacha (Beta vulgaris), cuyas clulas
almacenan en la vacuola central el pigmento violeta betacianina.
1. Corte seis pedazos de remolacha (15 mm de largo) con un sacabocado y
colquelos en tubos de ensayo rotulados del 1 al 6.
2. Aade 5 ml de agua al tubo 6 y colquelo en el congelador por 30 min.
3. Aade 5 ml de agua al tubo 5 y colquelo en el bao de hielo por 30 min.
4. Aade 5 ml de agua al tubo 1 y colquelo en un bao de agua caliente a 70 C
durante 1 min. Despus de 20 min, remueva el pedazo de remolacha del tubo.
5. Deje que la temperatura del bao baje a 55 C y haga lo mismo con el tubo 2.
6. Repita el procedimiento de arriba con el tubo 3 a 37 C y con el tubo 4 a 20 C.
7. Compare la intensidad de color de las soluciones en los tubos.
8. Coloque los resultados (intensidad de color vs. temperatura) en la Tabla 7.1.
Tabla 7.1 Efecto de temperatura
Tubo Temperatura

Intensidad de color
(1 = menos intenso; 6 = ms intenso)
1 70 C
2 55 C
3 37 C
4 20 C
5 En bao de hielo
6 En congelador

B. Efecto de solventes
En este ejercicio se observar cmo algunos solventes actan sobre las
membranas. El instructor preparar este experimento.


29
MATERIAL
Soluciones de acetona y metanol
2 a 4 huevos de gallina
10 ml de aceite
Gradilla para tubos de ensayo
Un betabel
MTODO
1. Rotule seis tubos de ensayo de 1 al 6.
2. Aada 5 ml de las siguientes soluciones a los tubos de ensayo:
Tubo 1: metanol 1 %
Tubo 2: metanol 25 %
Tubo 3: metanol 50 %
Tubo 4: acetona 1 %
Tubo 5: acetona 25 %
Tubo 6: acetona 50 %
3. Corte seis pedazos de remolacha de 15 mm y colquelos en los tubos de
ensayo.
4. Luego de 30 min, remueva la remolacha y observe la intensidad de color para
cada solucin.
5. Qu tubo mostr la mayor intensidad de color?
6. Rotule seis tubos adicionales y aada lo siguiente a cada uno:
Tubo A: 1 ml de agua + 1 ml de acetona
Tubo B: 1 ml de agua + 1 ml de metanol
Tubo C: 1 ml de aceite + 1 ml de acetona
Tubo D: 1 ml de aceite + 1 ml de metanol
Tubo E: Un poco de clara de huevo + 1 ml de metanol
Tubo F: Un poco de clara de huevo + 1 ml de acetona
CUESTIONARIO
1. Qu tubo mostr ms intensidad de color?
2. Qu indica la intensidad del color?
3. Cmo afectan las temperaturas altas a las membranas celulares?

30
4. Qu le pasa a las clulas en temperaturas bajas?
5. En qu tubos se observaron reacciones?
6. Basado en lo que se observ en los tubos de ensayos (refirindose a los tubos
1 - 6 y A - F), cmo afecta la acetona a la membrana?
7. Cmo afecta el metanol a la membrana?
8. Qu indican los resultados sobre los componentes de la membrana?
C. Difusin de molculas en agua
En este ejercicio, se estudiar el movimiento browniano de las molculas y el
efecto de la temperatura sobre dicho movimiento.
MATERIAL
Dos vasos de precipitado de 200 ml
Agua fra
Agua a temperatura ambiente
Colorante vegetal
PROCEDIMIENTO
1. Aade agua a temperatura ambiente a un vaso y al otro vaso aada agua fra.
2. Deje los vasos reposar por 10-15 min para que no haya movimiento del agua.
3. Aada cuidadosamente una gota de colorante a cada envase y observe la
dispersin de la gota.
4. Afect la temperatura la difusin del tinte? Explica tu observacin.
D. Difusin a travs de una membrana selectivamente permeable (dilisis)
En este ejercicio se usar una membrana de dilisis que posee poros de un
tamao determinado y que acta como una membrana selectivamente permeable.
MATERIAL
Un vaso de precipitado de 500 ml
Una bolsa de dilisis y cordn o bandas de goma
Rejilla y tubos de ensayo pequeos
Bao de mara y matraz pequeo con agua

31
Pinzas de tubo de ensayo
Reactivo de Benedict
Solucin de yodo
Cilindro graduado
Solucin de glucosa 30 % y solucin de almidn 1 %. Se usarn aproximadamente
25 ml de cada una por mesa (150 ml de cada solucin por laboratorio).
PROCEDIMIENTO
1. Corte la bolsa de dilisis a 25 cm de largo y pngala en agua por unos minutos
para abrirla.
2. Aada a la bolsa aproximadamente la mitad de la solucin de glucosa y la mitad
de la solucin de almidn.
3. Cierre la bolsa con un cordn o con una banda de goma, de forma que luego
pueda abrirla
4. Mezcle la solucin dentro de la bolsa y enjuague con agua la superficie externa
de la bolsa; anote el color inicial de la solucin dentro de la bolsa.
5. Aada varias gotas de la solucin de yodo a un vaso (beaker) con 300 ml de
agua hasta obtener un color dorado.
6. Coloque la bolsa de dilisis dentro del agua por 30 min

Saque la bolsa del agua y colquela en un vaso (beaker) vaco. Anote el color de
la solucin dentro de la bolsa y comprela con la solucin en el primer vaso.
8. Realice la prueba de Benedict para las dos soluciones contenidas en las bolsas.
9. Cules son los resultados de este experimento para las pruebas de yodo y de
Benedict?

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D. Osmosis en clulas animales y vegetales
En los siguientes ejercicios se observar qu ocurre al poner clulas animales y
vegetales en soluciones con concentraciones diferentes de solutos.
MATERIAL
Botellas con soluciones de sacarosa
(0.1, 0.3 y 0.6 M)
Elodea fresca
Gradilla
Botella con sangre Tubos de ensaye de 13 X 100
Goteros Agujas de diseccin
Portaobjetos Microscopio compuesto
Cubreobjetos Lpiz de cera
Papel toalla Papel para lente
PROCEDIMIENTO
1. Rotule tres tubos de ensayo: 0.1, 0.3 y 0.6 M.
2. Aada soluciones de sacarosa de diferentes osmolaridades
Tubo 1: 3 ml de solucin de sacarosa 0.1 M
Tubo 2: 3 ml de solucin de sacarosa 0.3 M
Tubo 3: 3 ml de solucin de sacarosa 0.6 M
3. Aada 3 ml de sangre a cada tubo, y observe la apariencia de la mezcla.
4. Rotule y prepare cuatro laminillas:
Laminilla 1: Gota de sangre, coloque el cubreobjetos y observe los eritrocitos bajo
el microscopio.
Laminilla 2: Gota de la mezcla del tubo 1 (0.1 M), coloque el cubreobjetos, observe
bajo el microscopio y compare con laminilla 1.
Laminilla 3: Gota de la mezcla del tubo 2 (0.3 M), coloque el cubreobjetos, observe
bajo el microscopio y compare con laminilla 1.
Laminilla 4: Gota de la mezcla del tubo 3 (0.6 M), coloque el cubreobjetos, observe
bajo el microscopio y compare con laminilla 1.
5. Qu le pas a las clulas al entrar en contacto con cada una de las
soluciones? Por qu?
6. Cules de las soluciones usadas fueron hipotnicas, hipertnicas e isotnicas
para los eritrocitos?

33
7. En qu solucin sucedi hemlisis de los eritrocitos y por qu
8. Por qu ocurri la crenacin?
9. Qu indican los resultados acerca de la concentracin de solutos en el plasma
sanguneo?
D. 2. Clulas vegetales
PROCEDIMIENTO
1. Rotule y prepare cuatro laminillas segn se indica a continuacin. Coloque un
cubreobjetos y observe con el microscopio:
Laminilla 1: Hoja de Elodea con una gota de agua de estanque.
Laminilla 2: Gota de la solucin de sacarosa 0.1 M y una hoja de Elodea
Laminilla 3: Gota de la solucin de sacarosa 0.3 M y una hoja de Elodea
Laminilla 4: Gota de la solucin de sacarosa 0.6 M, una hoja de Elodea
2. Qu le pas a las clulas al entrar en contacto con cada una de las
soluciones?
3. Cules de las soluciones fueron hipotnicas, hipertnicas e isotnicas con
respecto a la clula?
4. Por qu ocurri plasmlisis en una de las soluciones?
5. Cul es la diferencia entre plasmlisis y crenacin?
6. Por qu no ocurre lisis (rompimiento de la clula) en la clula vegetal?
7. En qu tipo de solucin ocurri turgencia?








34
PRCTICA No. 5
CLOROPLASTOS Y MITOCONDRIAS
OBJETIVO
Identificar los cloroplastos y las mitocondrias en clulas vegetales.
INTRODUCCIN
Los cloroplastos se caracterizan por la presencia de pigmentos, como la
clorofila y los carotenoides. Por medio del proceso de la fotosntesis produce
oxgeno y la mayor parte de la energa qumica que es utilizada para los
organismos vivientes.
Los cloroplastos se localizan principalmente en las hojas de las plantas
superiores y en las algas. Estos organelos capturan la energa de la luz y la
transforman en ATP y diversos alimentos. La forma de los cloroplastos vara,
puede ser esfrica, ovoide, discoidea, de clava o vesiculosa. Estos organelos se
encuentran dentro del citoplasma, especficamente agrupados cerca del ncleo.
Las mitocondrias son organelos granulares o filamentosos que se
encuentran en el citoplasma de las clulas.
Aproximadamente el 90% de la energa de la clula se mantiene gracias a
las reacciones qumicas que ocurren en las mitocondrias. Por ello se les llama: La
central de energa de la clula.
Una mitocondria est rodeada por dos membranas, la exterior es lisa y
encierra al organelo y la interior se dobla en una serie de pliegues o dobleces.
Estos pliegues llamados crestas mitocondriales son ms abundantes en las
clulas con actividad metablica intensa y aqu es donde ocurren la mayor parte
de las actividades respiratorias de la clula.



35

MATERIAL
Microscopio ptico Sol. Glucosa o dextrosa al 5%
Bistur Sol. De Janus Green 0.001%
Portaobjetos Elodea
Cubreobjetos Apio
Toallas de papel Planta de musgo o lama
Papel filtro Gotero
PROCEDIMIENTO
1. En un tallo de apio, corte una tira delgada de 1 cm de longitud, conteniendo
dos venas del tallo de apio.
2. Coloque sobre un portaobjetos con la superficie hacia arriba y agrega
solucin de glucosa al 5 %.
3. Utilice una navaja de bistur corta paralelamente entre las venas. De esta
manera obtn un corte paralelo a las venas lo ms delgado posible.
4. Cubre con un cubreobjetos eliminando el exceso de lquido con una toalla
de papel. Observa al microscopio utilizando un objetivo de 40X.
5. Quite la preparacin del microscopio. Coloca un trozo de papel absorbente
en la orilla del cubreobjetos de tal manera que se absorba la solucin que
contiene su preparacin; en el extremo opuesto coloca unas gotas de
Jannus Green al 0.001 % introducindose este colorante a la preparacin
por debajo del cubreobjetos.
6. Elimine el exceso de lquido con un trozo de papel absorbente.
7. Observe la preparacin al microscopio utilizando el objetivo de 40X, y con
la ayuda de tu profesor observa con el objetivo de 100X. (las mitocondrias
se tien de color azul, perdiendo el color minutos despus por la accin de
la hidrogenasa).
8. Corte dos hojas de Elodea, toma las hojas en tus manos por algunos
minutos (para que tome una temperatura cercana a la del cuerpo).
9. Coloque las hojas en el centro del portaobjetos una por el haz y otra por el
envs y aade una gota de agua.

36
10. Cubre con un cubreobjetos y elimina el exceso de lquido con papel
absorbente. Observa al microscopio con el objetivo de 40X.
11. Observe como se mueven los cloroplastos en el citoplasma girando
alrededor del ncleo celular. Dibuja lo observado.

CUESTIONARIO.
1. Qu son las mitocondrias y qu funcin realizan?
2. En qu parte de la clula se localiza a las mitocondrias?
3. Cmo se llama el pigmento verde que contienen los cloroplastos?
4. Qu son los plstidos y cmo se clasifican?
5. Cul es la funcin de los cloroplastos?
6. Por qu razn a los vegetales verdes se les da el nombre de productores
o seres auttrofos?.
7. Escribe el nombre de las estructuras internas del cloroplasto.












37
PRCTICA No. 6
ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LOS PEROXISOMAS
OBJETIVO
Demostrar in vitro la actividad enzimtica de los Peroxisomas en diferentes
clulas.
INTRODUCCIN
Los peroxisomas se denominan as porque generalmente contienen una o ms
enzimas que utilizan oxgeno molecular para eliminar tomos de hidrgeno a partir
de substratos orgnicos especficos a travs de una reaccin oxidativa que
produce perxido de hidrgeno.
El peroxisoma es una organela celular que consta de una membrana, constituida
por una doble capa lipdica que contiene diversas protenas.
En su interior se halla una matriz peroxisomal, que contiene protenas de funcin
enzimtica.
Los peroxisomas se halla en todos los tejidos, pero predomina en el hgado, en el
rin y en el cerebro durante el perodo de formacin de la mielina.
Los peroxisomas tienen mltiples funciones. Destacan las relacionadas con el
metabolismo lipdico.
Entre ellas se hallan las reacciones de degradacin, como la - oxidacin de los
cidos grasos de cadena muy larga (AGCML: de ms de 22 tomos de carbono) y
del cido fitnico y tambin reacciones de formacin de
plasmalgenos (lpidos complejos localizados en la mielina), colesterol y cidos
biliares.
La -oxidacin peroxisomal de los AGCML acorta la longitud de su cadena para
que puedan seguir degradndose en el interior de la mitocondria.





38
MATERIAL
12 tubos de ensayo Hgado de pollo
1 gradilla Corazn de pollo
1 estuche de diseccin Rin de pollo
2 cajas de Petri Rama de apio
5 vasos precipitados de 100ml Papa
1 pipeta de 10 ml HCl
1 Mechero Alcohol
1 Mortero con pistilo Hidrxido de sodio


Perxido de hidrgeno
PROCEDIMIENTO
1. Corte 6 cubos de aproximadamente 1 cm
3
de apio, colcalo en hielo.
2. Corte 6 cubos de aproximadamente 1 cm
3
de papa, colcalo en hielo.
3. Corte 6 cubos de aproximadamente 1 cm
3
de carne (hgado, rin y
corazn), colcalo en hielo.
4. Enumere los tubos del 1 al 6 y adiciona 2 ml de perxido de hidrgeno
(PRECAUCIN) A cada tubo adiciona el tejido tal como se anota en la tabla
5. En cada uno de los tubos se debe determinar la presencia o ausencia de
0
2
, inmediatamente despus de adicionar el tejido tapa el tubo con el dedo
pulgar y coloca en la boca del mismo tubo, un palillo en punto de ignicin
(no acerques los tubos a tu cara o a la de tus compaeros)
6. Repite los pasos 4 a 6 para los otros tejidos.



39
TUBO Papa AL MOMENTO DE AGREGAR (H
2
O
2
)
1 Machacado
2 Cocido
3 Con HCl
4 Con Etanol
5 Con NaOH
6 Sin ninguna alteracin
TUBO Apio AL MOMENTO DE AGREGAR (H
2
O
2
)
1 Machacado
2 Cocido
3 Con HCl
4 Con Etanol
5 Con NaOH
6 Sin ninguna alteracin
TUBO Hgado AL MOMENTO DE AGREGAR (H
2
O
2
)
1 Machacado
2 Cocido
3 Con HCl
4 Con Etanol
5 Con NaOH
6 Sin ninguna alteracin


40
TUBO Corazn AL MOMENTO DE AGREGAR (H
2
O
2
)
1 Machacado
2 Cocido
3 Con HCl
4 Con Etanol
5 Con NaOH
6 Sin ninguna alteracin
TUBO Rin AL MOMENTO DE AGREGAR (H
2
O
2
)
1 Machacado
2 Cocido
3 Con HCl
4 Con Etanol
5 Con NaOH
6 Sin ninguna alteracin

CUESTIONARIO
1. Cul es la estructura y funcin de los peroxisomas?
2. Qu es la enzima y como se relaciona con las peroxisomas?
3. Cul es la funcin de los glioxisomas en la germinacin de las semillas de
aceite de ricino?
4. Cul son los efectos del etanol y cido clorhdrico sobre las enzimas?
5. Al cocinar los alimentos demasiado Cmo influye en la actividad de las
enzimas? en lista las enzimas presentes en el peroxisoma
6. Anota las enzimas caractersticas de los glioxisomas, que no estn
presentes en los peroxisomas?

41
PRCTICA No. 7
MITOSIS EN CLULAS VEGETALES
OBJETIVO
Observar clulas eucariotas de vegetales y animales e identificar la
organizacin de genoma en interfase y mitosis.
INTRODUCCIN
El estudio de los cromosomas de clulas eucariotas con el microscopio
ptico se hace preferencialmente en metafase, cuando estos tienen la morfologa
y estructura definida.
La observacin de la estructura del genoma en interfase, est fuera de la
resolucin del microscopio ptico, sin embargo, en algunas clulas es posible
observar el cromosoma X heterocromatizado que se identifica como un
corpsculo, el cuerpo de Barr o cromatina sexual.
La mitosis es el proceso celular por el cual las clulas somticas se dividen para
originar nuevas clulas hijas, son las encargadas de provocar el crecimiento y
desarrollo de un organismo, esto es, las clulas aumentan en nmero por divisin,
como resultado de la mitosis. Los ncleos resultantes mantienen el mismo nmero
e identidad de los cromosomas de la clula de la cual derivan.
La mitosis es un proceso bajo control gentico, el cual ha sido dividido en cuatro
fases: PROFASE, METAFASE, ANAFASE y TELOFASE. Teniendo cada una de
estas sus etapas intermedias correspondiente. Adems de la etapa terminal de la
divisin celular llamada CITOCINESIS Este proceso celular ocurre en todas las
regiones meristemticas o puntos de crecimiento de una planta

42



MATERIAL
2 Portaobjetos Raices primarias de Allium cepa
(cebolla)
2 cubreobjetos Clulas de epitelio bucal
1 Vidrios de reloj Barniz de ua transparente
1 Estuche de diseccin

1 Lmpara de alcohol HCl 1 N
1 Microscopio Ac. Actico 45%
1 pinzas Orceina actica

43

PROCEDIMIENTO
Preparacin de los meristemos
1. Cortar de 1-2 cm la parte terminal de las races y colocar en vidrio de reloj
con orceina actica. Cuidar que los meristemos queden perfectamente
cubiertos con el colorante.
2. Calentar a la llama de la lmpara de alcohol, retirar al desprenderse
vapores, enfriar y volver a calentar suavemente por 2-3 veces, cuide que la
temperatura no ponga en ebullicin el colorante, ya que esto daa los
meristemos.
3. Enfre y transfiera cada una de las races a un portaobjeto, corte 2 mm
despus del pice, aada una gota de orcena y coloque encima el porta,
presione con la punta de un lpiz la zona donde se encuentra el meristemo
y mediante golpes con la goma del lpiz, disprselo en monocapa, quite el
exceso de colorante.
4. Observe al microscopio a 40X.

Mtodo para la cromatina sexual-cuerpo de Barr
1. En porta objetos perfectamente lavados y desengrasados (alcohol etlico-
cido actico 45%, 3:1), coloque una muestra de epitelio bucal (enjuague
varias veces la boca), tomando por raspado suave con un abatelenguas,
haga frotis de hombre, etiqutelos.
2. Hidrolice con HCl 1N por 30-60 segundos y absorba el cido actico por
goteo, cubra con un portaobjetos y selle con barniz. Observa al microscopio
a 100X





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Informe
Meristemos
Descripcin
Cromatina Sexual
Descripcin

CUESTIONARIO
1. Qu es el cariotipo? Explique cmo hara usted uno.
2. Qu aplicacin dara usted a la observacin de las clulas
meristemticas?
3. Qu diferencia hay entre la mitosis de clulas animales y vegetales?
4. Investiga cmo Barr y Bertram (1949), encontraron cromatina sexual.
5. Investiga que dice la hiptesis de Mary Lyon, respecto a la
heterocromatizacin del cromosoma X
6. De acuerdo a la hiptesis de Lyon explica por qu en hombres con una
formula cromosmica 46XY, no se observa la cromatina sexual o cuerpo de
Barr.



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Prctica No.8
CARIOTIPOS EN RACES DE HABA
Objetivo
Realizar un cariotipo en una clula eucariota de un vegetal.
Introduccin
En 1931, Levintsky llam cariotipo al complemento cromosmico particular de un
individuo grupo afn de individuos. Las caractersticas del cariotipo son
constantes para las especies y pueden utilizarse, al igual que la morfologa
externa, para su clasificacin taxonmica. Su anlisis comparativo nos permite
inferir relaciones filogenticas entre los diferentes taxa.
Definido tanto por el nmero como la forma de los cromosomas, es posible
mediante el anlisis de estas caractersticas detectar la diversidad de mecanismos
citolgicos surgidos en el curso de la evolucin de los seres vivos. Con base en el
cariotipo es posible observar si existen nmeros anormales de cromosomas e
identificar el sexo de los organismos.
Los cariotipos se definen con respecto a las siguientes caractersticas:
1. Nmero de cromosomas
2. Tamao absoluto y relativo de cada cromosoma
3. Relacin de brazos cromosmicos
4. Posicin centromrica
5. Constricciones secundarias
Material y reactivos
Microscopio compuesto HCL 1N
Portaobjetos Alcohol al 70%
Cubreobjetos cido actico al 45%
Aguja de diseccin (recta) Solucin de acetocarmin
Navajas de afeitar o bistur Aceite de inmersin
Colorante Feulgen Ortho-Para diclorobenceno
Farmer (alcohol etlico absoluto: cido
actico glacial proporcin 3:1)


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Material biolgico: Semillas de haba germinadas de 10 das de edad o races
recin cortadas de plantas jvenes. (Material preparado por el alumno).
Procedimiento:
1. Se deben seleccionar los pices radicales de las habas que presenten
mejores condiciones, es decir que no tengan lesiones o manchas cafs.
2. Se ponen a pretratar en 8 Hidroxiquinoleina u Ortho-Para dicloro
benceno durante 2 a 3 horas a 4 C.
3. Se colocan en fijador Farmer (Alcohol etlico absoluto: cido actico
glacial en proporcin 3:1) durante 24 horas y se cambian a Alcohol 70%
hasta su utilizacin.
4. Despus de la fijacin de las races se lleva a cabo una hidrlisis
colocando las mismas en HCl 1N durante 16 min a 60C.
5. Inmediatamente se pasan al colorante Feulgen pera la tincin de los
cromosomas por lo menos una hora.
6. Se realizan cortes muy finos del pice y se colocan estos cortes en un
portaobjetos limpio y seco con gotas de Acetocarmn o acetorceina, las
suficientes para cubrir totalmente los tejidos. Se calientan brevemente
en la lmpara de alcohol evitando que llegue a ebullicin.
7. Posteriormente se coloca el cubreobjetos y se presiona con la goma de
un lpiz cuidando de no romper el cubreobjetos, se puede presionar con
el pulgar poniendo encima papel filtro o toalla sanita para quitar exceso
de colorante.
Nota: Tenga cuidado de no dejar deshidratar los tejidos, esto es, deber
de agregar un reactivo enseguida del otro, teniendo un breve espacio
para secarlo.
8. Despus se pueden adicionar gotas de cido actico al 45 %, colocando
el cubreobjetos y observando al microscopio.

47
Informe
Deber ubicar distintos campos celulares, teniendo especial atencin
en aquellas clulas que presenten los cromosomas bien separados.
Cuestionario
1. Por qu cree usted que se observan mejor los cromosomas en metafase
2. Mittica y no en otra fase celular?
3. Podra trabajar con semillas sin germinar para poder observar los
cromosomas?
4. Explique por qu los cromosomas se pueden teir con acetorcena.
5. Describa al menos 4 cariotipos en plantas, colocando en una tabla
comparativa el nmero de cromosomas, tamao, forma y posicin del
centrmero.














48
BIBLIOGRAFIA
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funcin celular). Ediciones Omega. 1990.
2. Laguna Jos. Bioqumica. Ediciones La Prensa Medica Mexicana.
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Nbel en Ciencias 2002: Qumica
4. Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K.Roberts y J.D. Watson Biologa
Molecular de la Clula (1996) 3. Edicin (traducido de la 3. edicin
inglesa, 1994). Ediciones Omega S.A., Barcelona.
5. Alberts, B., D. Bray, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K.Roberts Y Peter
Walter (1998) Essential Cell Biology, Garland Publishing, Inc. New York
& London.
6. TERRS Speziale Arturo M; Clnica y Laboratorio: Ciencia y Tecnologa;
2 ed; ed. Graphimedic S.A. de C.V; Mxico 2002.
7. PRESIDENCIA DE LA REPBLICA; CGEA, Gua tcnica para la
elaboracin de manuales de procedimientos; Coleccin guas tcnicas,
serie organizacin y mtodos nm. 9.
8. ANDERSON, Shauna C, Susan Cockayne; Qumica Clnica; 1 ed; trad.
Ma. Teresa Aguilar; ed. Interamericana-McGraw-Hill; Mxico, 1995.
9. KAPLAN, A. Lawrence, Amadeo J. Pesce; Qumica Clnica Teora,
anlisis y correlacin; 3 ed; trad. Tania Carren Valencia; ed. Javier
Ortega Cesea; Mxico 1996
LINKOGRAFIA
1. Mxico, Secretara de Salud, Norma Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-
1997, para la organizacin y funcionamiento de los laboratorios clnicos,
Diario Oficial de la federacin, ao 2000. Internet: http://www.salud.gob.mx/
2. El gerenciamiento del laboratorio de anlisis clnicos con la visin de la
calidad total. Internet:
http://www.sarda.org.ar/Revista%20sard%c3%A1/2002/28-33.pdf