Mecanisme de patogenitate i virulen la microorganisme

Dimorfismul morfogenetic al drojdiilor

Numeroase specii de drojdii pot trece printr-o tranziie n timpul morfogenezei
de la forma unicelular capabil de nmugurire, notat YF (Yeast Form) la cea
flamentoas sub form de pseudohife PH ( Pseudohyphal Form) sau de hife adevrate
Hy. Acest dimorfism reprezint un factor important pentru virulen! deoarece se consider c
forma P" poate asi#ura invadarea esuturilor $n stadiile timpurii ale infeciei! $n timp ce forma
YF este potrivit pentru diseminarea $n s%n#e. Aceast ipotez este susinut de studii
e&perimentale ce au demonstrat c tulpini incapa'ile de a dezvolta filamente sunt avirulente la
(oareci.
Alturi de aceast capacitate de a alterna ntre diferite forme
morfologice exist i alte proprieti ce contribuie la virulena drojdiilor
patogene, precum - capacitatea de aderare la celulele organismului gazd! -
secreia unor enzime degradative, etc
Aceast tranziie $n morfo#enez poate fi indus de prezena a diver(i factori! unii dintre
ei similari celor e&isteni $n or#anismul #azd invadat) macrofa#e* temperatura de +,-./0*
p"1,./* lipsa sursei de azot* compu(i chimici precum) N-acetil-2-#lucozamina! 'iotin! zinc!
ser! #rupri "em! etc
3e cunoa(te faptul c! $n cazul tulpinilor diploide a4 de S. cerevisiae, $n anumite condiii
de mediu ( de e&emplu- lipsa sursei de azot) poate avea loc trecerea de la forma unicelular
capa'il de $nmu#urire la forma filamentoas cu pseudohife. Aceast tranziie din timpul
morfo#enezei este similar la S. cerevisiae (i C. albicans, su#er%nd faptul c acest dimorfism
poate fi re#lat prin acelea(i mecanisme $n am'ele cazuri.
Morfogeneza speciei Saccharomyces cerevisiae
5ulpinile de Saccharomyces cerevisiae se pot divide mitotic prin $nmu#urire. 6u#urele se
formeaz $ntr-un punct al suprafeei celulare celulare (i $(i mre(te dimensiunea $n timp ce celula
mam rm%ne constant ca mrime. Fusul de diviziune se formeaz de-a lun#ul a&ului celul
mam-mu#ure! iar dup ce un set de cromozomi este distri'uit $n mu#ure! acesta se separ de
celul. 7 cicatrice de chitin marcheaz locul de desprindere (i astfel sunt indicate convenional
$nmu#uririle precedente. 7 sin#ur celul se poate divide $n acest mod de mai multe ori.
Polaritatea diviziunii celulare este definit $n raport cu punctul de pe suprafaa celular unde a
avut loc $nmu#urirea anterioar. 5ipul spaial de diviziune este determinat #enetic (i poate fi)
axial $n cazul celulelor haploide a sau (celulele mam i fiic formeaz muguri n apropierea
polului unde se gsete jonciunea dintre ele! polar $n cazul celulelor diploide a4.
"rimii muguri ai unei celule se formeaz la polul opus celui la care a avut loc
desprinderea acesteia de celula sa mam, urmtorii muguri put#ndu$se forma la oricare dintre
cei doi poli.
Fig. 1 Tipuri de nmugurire la Saccharomyces cerevisiae
Formarea de pseudohife la S. cerevisiae reprezint un tip unic de diviziune celular
polarizat ce implic $nmu#urirea unipolar (i modificri $n morfolo#ie (formarea de structuri
macroscopice ce se desprind de colonie (i invadeaz su'stratul nepopulat). Acest tip de
$nmu#urire caracteristic celulelor diploide permite acestor celule de altfel imo'ile! s e&ploateze
eficient resursele de nutrieni din mediu.
Reglarea creterii filamentoase n cazul speciei Saccharomyces cerevisiae
5ranziia $ntre cele dou stri este indus de lipsa sursei de azot! (i este controlat de cile
de transducie a semnalului de activare 8as9. 0ele mai 'ine caracterizate ci de re#lare a
cre(terii filamentoase sunt) calea protein:inazei A (P;A) dependent de A6Pc (<yer 8.! 9//=)*
cascada 35>-6AP; - 6AP; (mito#en activated proteine :inase).
Calea PKA -AMPc
?n cazul formelor unicelulare capa'ile de $nmu#urire! sinteza proteinelor 8as9 activeaz
adenilatciclaza 0yr@ (i cre(te nivelul intracelular de A6Pc. A6Pc activeaz protein:inaza A din
celula de drojdie! fiecare dintre cele trei su'uniti catalitice ale acesteia! 5p: @-+! form%nd un
comple& cu A6Pc (6osch! 9///). 3emnalul A6Pc este transmis specific de ctre 5p:9 (una
dintre su'unitile catalitice ale protein:inazei A) ctre Flo@@. <nteracia dintre 5p:9 (i 3fl @ (un
represor transcripional al #enei FA7@@) re#leaz pozitiv transcrierea #enei %&'((.
Activarea constitutiv a )*S + induce cre(terea filamentoas chiar (i $n prezena sursei de
azot. 0oncomitent cu stimularea activitii protein:inazei A! 8as9 influenteaz de asemenea
cre(terea filamentoas (i prin intermediul cascadei 6AP;.
Cascada STE-MAPK
0alea complet de semnalizare necesit inducerea transcrierii tuturor #enelor 35> ce
codific pentru) 3te9/ (6AP;;;;)! 3te @@ (6AP;;;) (i 3te , (6AP;;) (Fi# .B)! precum (i
activarea proteinei ;ss@ (6AP;) (i a factorului transcripional 3te @9.
3emnalul e&tern activeaz 8as9 care $n schim' printr-o serie de etape intermediare
determin fosforilarea 6AP;;;- 3te @@! a 6AP;;;- 3te , (i a 6AP;-;ss@.
Atunci c%nd se #se(te le#at de C5P! 0dc.9 activeaz la r%ndul su protein:inaza 3te 9/.
;ss@ poate at%t inhi'a c%t (i activa cre(terea filamentoas. Factorul transcripional 5ec @ este
implicat in cre(terea filamentoas controlat prin cascada 6AP;!dar nu (i $n cea activat de
protein:inaza A. Di ali factori transcripionali sunt implicai $n diferenierea filamentoas ! ca de
e&emplu Flo = (i Phd @! cel din urm atunci c%nd #ena codificatoare este suprae&primat.
Am'ele ci prezentate se sf%r(esc la nivelul elementelor F8> (%ilamentous and invasion
response elements) de la nivelul #enei %&'(( ce codific pentru un factor transcripional! iar
rezultatul const $n iniierea cre(terii filamentoase.
Fig. !"ile M#P$ i P$#%#MPc ce regleaz" creterea filamentoas" la
Saccharomyces cerevisiae
Morfogeneza speciei Candida albicans
5ulpinile de Candida albicans pot cre(te su' trei forme morfolo#ice distincte) forma
unicelular capa'il de inmu#urire (Fig &a'( su' form de pseudohife PH ( Pseudohyphal Form)
precum (i de hife adevrate Hy.
Principalul criteriu prin care se difereniaz cele dou forme filamentoase este reprezentat
de morfologia celular. ,ifele se formeaz dintr-o celul mam ne$nmu#urit (denumit
'lastospor)! nu prezint constricii la jonciunea de celula mam! iar pereii celulari sunt paraleli
pe toat lun#imea lor.

Fig. & )tadii morfologice n dez*oltarea speciei Candida albicans
+a' forma unicelular" capa,il" de nmugurire - YF. +,' tu,uri germinati*e /ifale.
+c( e' pseudo/ife de diferite dimensiuni. +f' miceliu /ifal. +g' miceliu pseudo/ifal
?n cazul pseudohifelor! celula formeaz un mu#ur elon#at! iar dup formarea peretelui
despritor! celula fiic rm%ne ata(at de celula mam. Astfel se formeaz filamente compuse
din celule elon#ate ce prezint constricii la locul de iniiere a peretelui despritor de celula
mam (i la nivelul tuturor jonciunilor septale ulterioare (Fi#. + c! e! #).
3pre deose'ire de hife! $n cazul pseudohifelor at%t limea c%t (i lun#imea celulelor poate
varia foarte mult astfel $nc%t spre e&emplu)
- alun#irea mu#urilor $n pseudohife este de evident $nc%t aceste filamente pot fi
asemntoare hifelor (Fi#. + d-e).
pe de alt parte pot fi asemntoare formei YF cu mu#uri elon#ai (Fi#. + c).
Ciclul celular
Principalele diferene $ntre hife (i pseudohife reies din modul de or#anizare a ciclului
celular. Principalele evenimente ce au loc $n primul ciclu celular sunt descrise $n fi#ura .! ulterior
fiind prezentat o comparaie $ntre ciclurile celulare ulterioare ce se desf(oar at%t la nivelul
hifelor c%t (i a pseudohifelor.
?n timpul primului ciclu celular pseudohifal! la nivelul constriciei dintre celula mam (i
celula fiic se formeaz un inel de septin! la nivelul cruia are loc mitoza.
Atunci c%nd diviziunea mitotic s-a $ncheiat! inelul de septin se separ $n dou inele
distincte (i un sept de chitin se formeaz $ntre cele dou. 0a (i $n cazul formei YF formarea
acestui sept implic apariia (i contracia unui inel de actomiozin. Astfel! or#anizarea celui
dint%i ciclu celular $n cazul pseudohifelor nu difer su'stanial de cel al drojdiilor YF! cu e&cepia
alun#irii mu#urilor formai (i a lipsei separrii complete a celulelor dup formarea septului
despritor.
3pre deose'ire de acestea! $n cazul hifelor e&ist diferene majore $n ceea ce prive(te
evenimentele primului ciclu celular)
- $n cazul drojdiilor YF! $nmu#urirea are loc fie dup un profil a&ial fie dup unul 'ipolar! $ntr-un
mod dependent de temperatur. ?n cazul hifelor $n timpul primului ciclu celular se formeaz
tu'ul #erminativ diferit de mu#urele elon#at ce apare $n cazul pseudohifelor. Aceste tu'uri
#erminative apar $n E/F din cazuri la nivelul unor situsuri randomice.
- tu'ul #erminativ apare $naintea tranziiei C@43 din ciclul celular
- prima diviziune a nucleului are loc la nivelul jonciunii dintre celula mam (i mu#ure $n cazul
pseudohifelor (i YF! $n timp ce $n cazul hifelor nucleul mi#reaz din celula mam (i se divide $n
tu'ul #erminativ.
Fig. 0 Reprezentarea sc/ematic" a primului ciclu celular din timpul morfogenezei la specia
Candida albicans
2iferenele $ntre hife (i pseudohife continu (i dup $ncheierea primului ciclu celular. ?n
cazul pseudohifelor toate celulele din filament $(i continu ciclul celular dup un pattern 'ipolar
de $nmu#urire! mu#urele form%ndu-se la polul opus cicatricei de chitin! rezult%nd astfel o
structur filamentoas ramificat. 0a (i $n cazul speciei 3. cerevisiae faza C9 este e&tins astfel
$nc%t celula fiic (i cea mam au dimensiuni similare la sf%r(itul primului ciclu celular. 0a
rezultat! am'ele tipuri de celule iniiaz urmtorul ciclu celular simultan (i aceast sincronizare
este meninut $n pseudohif $n primele cicluri celulare.
?n timpul primului ciclu celular ce se desf(oar la nivelul tu'ului #erminativ! $n celula
mam se formeaz o vacuol de dimensiuni mari. ?n timpul formrii septului despritor! cea mai
mare parte a citoplasmei este transferat $n zona apical! dup $ncheierea primului ciclu celular
celula mam rm%n%nd $n faza C@.
Reglarea creterii filamentoase n cazul speciei Candida albicans
6orfo#eneza se desf(oar in cazul speciei C. albicans at%t su' un control pozitiv c%t (i su' unul
ne#ativ. Principalele ci de re#lare pozitiv a cre(terii filamentoase sunt)
- calea protein:inazei A (P;A) dependent de A6Pc (i mediat de factorii transcripionali >f#@ (i
Flo=
- modulul 6AP; mediat de factorul transcriptional 0ph@
- calea de re#lare a cre(terii filamentoase induse de modificri ale p"-ului! mediat de 8im@/@
- calea de re#lare a cresterii filamentoas mediat de factorul transcripional 0zf@
0ontrolul ne#ativ se realizeaz $n principal de ctre represorul transcripional 5up@ (i proteinele
re#latoare 8f#@ (i Nr#@. Aipsa unuia dintre ace(ti factori re#latori conduce la cre(tere
filamentoas constitutiv.
Studiul genelor implicate n reglajul dimorfismului la drojdii de interes medical
?n cazul drojdiilor pato#ene aceast trecere $ntre formele Y-P" este considerat un factor
important $n virulen! fiind asociat cu a'ilitatea de a invada esuturile #azd. Ao (i cola'oratorii
si au artat spre e&emplu! c tulpinile de 0andida al'icans ce nu pot forma pseudohife nu sunt
pato#ene la (oareci.
5ehnica PH1 (pseudohyphal determinant) a fost pus la punct de ctre Cerald Fin: (i
cola'oratorii si! $n vederea identificrii de #ene! ce atunci c%nd sunt suprae&primate $n celule
6A5a46A5 ce cresc pe mediu lipsit de surs de azot! determin cre(terea su' form de
pseudohife.
Astfel pot fi identificate #ene implicate $n morfo#enez! din 'i'lioteca de #ene (#enomic
li'rary) a tulpinii Candida parapsilosis C-S./0 construit cu ajutorul vectorului Y>plac@GE.
YEplac195
5241 bp
Amp(R)
URA3
2 um
-am "< (9B.)
Cla < (9/=G)
1co 8 < (9=E)
,in d <<< (9+.)
2co < (9,G.)
"st < (9E/)
Sma < (9,@)
3ma < (9BG)
*pa A< (+EEB)
*pa A< (.=/9)
*va < (9BG)
*va < (@/+E)
Fig.2 Harta genetic" a *ectorului Y3plac 142
Fig.5 Reprezentarea sc/ematic" a te/nicii PH1