You are on page 1of 6

Laporan Praktikum Nama : Diana Agustini Raharja

Mikrobiologi NIM : J3L11216


!"las#k"lompok : $ P1#1
PJP : M% Ari& Mul'a( )% Pi%
Asist"n : 1% *uriska )"kar Rani
2% Lia )uliani
3% Ram+hani
KUANTITASI MIKROBA: HITUNGAN MIKROSKOPIS
LANGSUNG
PROGRAM KEAHLIAN ANALISIS KIMIA
PROGAM DIPLOMA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2013
Pendahuluan
Mikroba ialah jasa+ r"nik 'ang m"mpun'ai k"mampuan sangat baik untuk
b"rtahan hi+up% Jasa+ r"nik t"rs"but +apat hi+up hampir +i s"mua t"mpat +i
p"rmukaan bumi% Mikroba mampu b"ra+aptasi +"ngan lingkungan 'ang sangat
+ingin hingga lingkungan 'ang r"lati& panas( +ari lingkungan 'ang asam hingga
lingkungan 'ang r"lati& panas( s"rta +ari lingkungan 'ang asam hingga basa%
Mikroba ini ti+ak +apat +ilihat s",ara kasat mata% -l"h kar"na itu( untuk m"lihat
miroorganism" +ip"rlukan alat bantu b"rupa mikroskop .A&ri'anto 2//01%
P"n"ntuan jumlah angka mikroorganism" sangat p"nting +ilakukan untuk
m"n"tapkan k"amanan suatu s"+iaan &armasi +an makanan% 2"rbagai m"to+" t"lah
+ik"mbangkan untuk m"nghitung jumlah mikroorganism"% M"to+" t"rs"but
b"rupa m"nghitung jumlah s"l( massa s"l( atau isi s"l 'ang s"suai +"ngan jumlah
s"l% 3"r+apat "mpat ma,am ,ara umum untuk m"mp"rkirakan b"sar populasi
mikroorganism"( 'aitu p"rhitungan langsung( p"ngukuran langsung( p"rhitungan
ti+ak langsung( +an p"rkiraan ti+ak langsung .4armita 2//61%
P"rhitungan langsung .direct count1 +igunakan untuk m"nghitung jumlah
s"l atau biomassa mikroorganism" +"ngan ,ara s"l +ihitung langsung +i ba5ah
mikroskop atau +"ngan p"rhitungan partik"l "l"ktronik .electronic particle
counter1% P"ngukuran langsung .direct measurement1 +igunakan untuk
m"nghitung biomassa mikroorganism" +"ngan ,ara massa s"l +apat +it"ntukan
+"ngan m"nimbang atau m"ngukur b"rat s"luruh s"l s"rta biomassa +apat
+ikor"lasikan +"ngan jumlah s"l +an m"mban+ingkann'a pa+a kur6a stan+ar%
P"rhitungan ti+ak langsung .indirect count1 +igunakan untuk m"nghitung jumlah
s"l 'ang a+a pa+a samp"l +"ngan ,ara m"mp"rkirakan jumlah mikroorganism"
+alam samp"l 'ang t"lah +ikons"ntrasikan +an +itanam pa+a m"+ia 'ang s"suai(
,ontohn'a p"mb"ntukan koloni +alam p"lat agar% P"rkiraan ti+ak langsung
.indirect estimate1 +igunakan untuk biomassa mikroorganism"% 2iomassa
mikroorganism" +ip"rkirakan +"ngan ,ara m"ngukur kompon"n biokimia s"l
mikroorganism" 'ang r"lati& konstan( s"p"rti prot"in( a+"nosin tri&os&at .A3P1(
lipopolisakari+a .LP)1( mur"in( +an kloro&il% 2iomassa juga +apat +ip"rkirakan
s",ara ti+ak langsung +"ngan m"ngukur k"k"ruhan% P"rkiraan ti+ak langsung
biomassa mikroorganism" +apat +ikor"lasikan +"ngan jumlah s"l +"ngan
m"mban+ingkann'a pa+a kur6a stan+ar .4armita 2//61%
Tujuan
Praktikum b"rtujuan m"n"ntukan jumlah s"l yeast pa+a samp"l
m"nggunakan t"knik hitungan mikroskopis langsung%
Ala dan Bahan
Alat7alat 'ang +igunakan ialah mikroskop( pip"t t"t"s( cover glass( counter(
+an Haemocytometer% 2ahan7bahan 'ang +igunakan a+alah alkohol 8/9( susp"nsi
yeast( s"rta methylene blue%
P!"#edu! Ke!ja
)uasana st"ril harus +i,iptakan +ari a5al praktikum hingga akhir praktikum%
-l"h kar"na itu( tangan +ibasahi +"ngan alkohol 8/9% P"rmukaan bi+ang
Haemocytometer +an coer glass +ib"rsihkan juga +"ngan m"nggunakan alkohol
8/9% Mikroskop +ihi+upkan +an +iatur int"nsitas ,aha'an'a( s"hingga ti+ak
t"rlalu t"rang +an ti+ak t"rlalu g"lap% Haemocytometer +il"takkan +i atas m"ja
pr"parat +an kamar7kamarn'a +i,ari s"rta +iamati +i ba5ah mikroskop +"ngan
m"ngghunakan p"rb"saran t"rk",il t"rl"bih +ahulu( 'aitu :;1/% Jika kamar7
kamarn'a t"lah +it"mukan( yeast +il"takkan +i atas Haemocytometer +"ngan
bantuan pip"t t"t"s% !"mu+ian yeast +iamati +i ba5ah mikrokopp +"ngan
p"rb"saran 'ang l"bih b"sar agar l"bih j"las t"rlihat 'aitu 1/;1/ k"mu+ian :/;1/%
Jumlah yeast 'ang b"ra+a +i kotak k",il +i +alam kamar ka,a +ihitung s"t"lah
+itambahkan methylene blue +"ngan m"nggunakan counter% P"rhitungan
+ilakukan s",ara r"pr"s"ntati&% )"t"lah +ihitung( jumlah yeast +i,atat +an
k"pa+atann'a +ihitung%
Daa dan Ha#$l Pen%a&aan
2"rikut ini hasil 'ang +ip"rol"h pa+a p"rhitungan s"l yeast s",ara langsung
s"t"lah +itambahkan methylene blue%
3ab"l 1 4asil kuantitasi yeast
!"lompok < s"l#mL
1 :(10%1/
6
2 1(66%1/
8
3 3(8=%1/
8
: 1(2%1/
8
0 1(:/%1/
8
6 1(6/%1/
8
8 1(:8%1/
8
1(/1%1/
8
= 3(/0%1/
8
1/ 2(:0%1/
8
!"pa+atan 1(1%1/
8
Pe&'aha#an
Analisis bahan pangan( air( s"rta susu s"ringkali m"mbutuhkan
p"nghitungan mikroba 'ang t"rka+ang t"knik ini m"liputi hitungan mikroskopis
langsung( m"man&aatkan p"rhitungan s"l s",ara "l"ktronik( m"to+" kimia5i untuk
m"ng"stimasi massa s"l +an p"ng"n,"ran s"rial pa+a t"knik p"n,a5anan%
P"ngukuran kuantitati& populasi mikroba s"ring kali amat +ip"rlukan +i +alam
b"rbagai ma,am p"n"laahan mikrobiologis% Pa+a hakikatn'a t"r+apat +ua ma,am
p"ngukuran +asar( 'aitu p"n"ntuan jumlah s"l +an p"n"ntuan massa s"l%
P"ngukuran jumlah s"l biasan'a +ilakukan bagi organism" b"rs"l tunggal
.misaln'a bakt"ri1( s"+angkan p"n"ntuan massa s"l +apat +ilakukan ti+ak han'a
baik organism" b"rs"l tunggal t"tapi juga organism" b"r&ilam"n .misaln'a
kapang1%
Pa+a p"r,obaan +ilakukan st"rilisasi s"b"lum +an s"su+ah p"k"rjaan +i
laboratorium% Alkohol 8/9 +is"mprotkan pa+a tangan untuk m"mbunuh
mikroorganim" 'ang ti+ak +iinginkan% Haemocytometer +an cover glass juga
b"rsihkan +"ngan alkohol 8/9 untuk m"mbunuh mikroorganism" 'ang ti+ak
+iinginkan +an m"mb"rsihkan kotoran 'ang m"n"mp"l pa+a alat( kar"na pa+a
saat +iamati +i ba5ah mikroskop alat harus b"rsih +an st"ril s"hingga p"ngamatan
t"rlihat j"las ol"h mata +an m"mp"rmu+ah untuk m"lakukan p"rhitungan mikroba%
3"rs"+ia ban'ak t"knik +i +alam laboratorium untuk m"ngukur
p"rtumbuhan mikroorganism"% Alat7alat 'ang a+a t"rs"but b"rkisar +ari p"ralatan
'ang masih s"+"rhana s"p"rti s"buah ka,a obj"k +"ngan ol"san 'ang +i5arnai
.>olk 1==31% Pa+a p"r,obaan 'ang +ilakukan( p"n"ntuan jumlah s"l 'ang a+a
+ilakukan +"ngan m"to+" hitungan mikroskopis langsung .direct microscopic
count1 m"nggunakan alat 'ang +inamakan Haemositometer untuk m"nghitung
populasi samp"l%
?ambar 1 Haemocytometer 'ang +igunakan untuk m"nghitung jumlah s"l s",ara
langsung
Haemocytometer m"rupakan alat 'ang b"r&ungsi untuk m"nghitung s"l7s"l
+arah( organ"l +alam s"l( +an s"l7s"l +arah +alam ,airan tulang punggung k" otak
s"t"lah m"lakukan tusukan lumbal% )aat ini juga ban'ak +igunakan untuk
m"nghitung jumlah s"l s"rta partik"l mikroskopis lainn'a% Haemocytometer
+it"mukan ol"h Louis7$harl"s Malass"@ 'ang t"r+iri +ari s"buah lapisan ka,a
t"bal +"ngan k"kukan p"rs"gi panjang 'ang m"n,iptakan ruang7ruang kamar%
Ruaangan t"rs"but +iukir +"ngan las"r grid 'ang m"nggor"s s",ara garis t"gak
lurus% P"rangkat t"rs"but +ibuat +"ngan hati7hati s"hingga +a"rah 'ang +ibatasi
ol"h garis +ik"tahui k"+alamann'a% -l"h kar"na itu( alat t"rs"but b"rguna untuk
m"nghitung jumlah s"l atau partik"l +alam suatu 6olum" ,airan t"rt"ntu( s"hingga
+apat m"nghitung kons"ntrasi s"l +alam ,airan s",ara k"s"luruhan .La' 1==:1%
!"tika m"nggunakan mikroskop untuk m"n,ari ruang7ruang kamar pa+a
Haemocytometer( int"nsitas ,aha'a jangan t"rlalu t"rang( kar"na garis7garis pa+a
Haemocytometer 'ang tipis s"kali ti+ak akan t"rlihat +ikalahkan ol"h sinar 'ang
l"bih b"sar +ari ,aha'a mikroskop% )"lain ,aha'a( &aktor p"rb"saran mikroskop
juga b"rp"ngaruh% Ruang7ruang kamar Haemocytometer baik +i bagian ba5ah
maupun atas akan t"rlihat +alam p"rb"saran :;1/% Pa+a p"b"saran t"rs"but( akan
t"rlihat kotak7kotak b"rukuran b"sar s"ban'ak 20 kotak% )"tiap satu kotak b"sar
b"rukuran 1 mm
2
% Pa+a p"rb"saran :/;1/ akan t"rlihat +"ngan j"las satu kotak
b"sar 'ang m"n'usun ruang kamar m"miliki 16 kotak%
)"l7s"l yeast 'ang b"rhamburan pa+a ruang7ruang kamar Haemocytometer
ti+ak p"rlu +ihitung s"mua% 4an'a 0 kotak b"sar +ari 20 kotak b"sar 'ang +ipilih(
t"tapi harus b"rsi&at r"pr"s"ntati&% P"milihan 0 kotak +apat s",ara +iagonal atau
pa+a k""mpat kotak 'ang b"ra+a +i s"tiap su+ut +"ngan satu kotak b"ra+a +i
t"ngah%
.a1 .b1
?ambar 2 Ruang7ruang kamar 'ang +ipilih untuk p"rhitungan s"l yeast .a1 +an
k"tika s"l yeast +it"t"skan pa+a Heamocytometer .b1
Pa+a p"r,obaan( k"tika susp"nsi yeast +it"t"skan pa+a ruang7ruang kamar
ini( maka s"l7s"l yeast baik 'ang hi+up +an 'ang mati ti+ak +apat +ib"+akan%
Antuk m"mb"+akan s"l 'ang mati +"ngan s"l 'ang hi+up maka +igunakan larutan
p"5arna 'aitu methylene blue% !"tika methylene blue ini +itambahkan( maka s"l
'ang hi+up akan t"tap ti+ak b"r5arna atau transparan s"+angkan s"l 'ang mati
akan b"r5arna biru( kar"na s"l mati m"miliki lapisan +in+ing s"l 'ang rusak
s"hingga p"5arna +apat masuk% !ons"ntrasi methylene blue ini ti+ak bol"h t"rlalu
tinggi( kar"na +apat m"n'"babkan @at p"5arna +apat masuk m"n"mbus lapisan
+in+ing s"l 'ang hi+up s"hingga s"l hi+up akan m"mb"ntuk 5arna biru%
!ons"ntrasi methylene blue 'ang +igunakan s"baikn'a s"b"sar /(19 b#6% )"l7s"l
s"b"lum +an s"su+ah +ib"ri methylene blue pa+a p"r,obaan +apat +ilihati +i
lampiran% Dari hasil p"r,obaan +ip"rol"h r"rata k"pa+atan s"l yeast 'aitu s"b"sar
1(1%1/
8
s"l#mL%
)"l7s"l yeast b"rupa bulatan7bulatan k",il 'ang m"misah satu sama lain(
t"tapi a+a pula 'ang b"rgabung m"nja+i suatu koloni 'ang b"rtumpuk +an
b"rg"rombol s"hingga +apat m"mp"rsulit p"rhitungan jumlah s"l% $ara
m"ngatasin'a ialah m"n,"rai7b"raikan g"rombolan s"l7s"l t"rs"but +"ngan
m"nambahkan bahan anti gumpal s"p"rti +inatrium "til"na +iaminat"traas"tat +an
35""n s"ban'ak /(19 t"tapi pa+a p"r,obaan ti+ak +ilakukan p"nambahan anti
gumpal ini%
Haemocytometer m"miliki k"l"mahan +an k"l"bihan +alam
p"nggunaann'a pa+a pros"s p"nghitungan bakt"ri s",ara langsung%
!"l"bihannn'a antara lain ialah ,"pat +alam m"nghasilkan +ata s"hingga tak p"rlu
m"nunggu lama( k"pa+atan s"l( +apat m"ngamati mor&ologi s"l( m"ng"6aluasi
homog"nitas( +an +apat m"n+"t"ksi kontaminan% )"+angkan k"l"mahann'a ialah
ti+ak +apat m"mb"+akan antara s"l 'ang mati +"ngan 'ang hi+up apabila ti+ak
m"nggunakan suatu larutan p"5arna untuk m"mb"+akann'a( sulitn'a m"nghitung
s"l b"rukuran sangat k",il s"p"rti bakt"ri kar"na k"t"balan Haemocytometer ti+ak
m"mungkinkan +igunakann'a l"nsa obj"kti& ,"lup min'ak( +an +ata 'ang
+ihasilkan ti+ak akurat kar"na s"tiap p"ngamat k"t"rbatasan +alam m"lihat s"rta
m"nghitung s"l 'ang a+a +alam ruang7ruang kamar Haemocytometer% -l"h kar"na
itu( s"baikn'a m"nggunakan alat 'ang l"bih ,anggih lagi +alam p"rhitungan
jumlah s"l kar"na s"tiap p"ralatan "l"ktronik m"milki k"s"nsiti&an 'ang tinggi
+iban+ingkan +"ngan mata manusia( s"p"rti particle counter.
S$&(ulan
2"r+asarkan hasil p"r,obaan 'ang t"lah +ilakukan pa+a p"rhitungan jumlah
s"l yeast s",ara langsung +"ngan m"nggunakan Haemocytometer +ip"rol"h
k"pa+atan s"l yeast s"b"sar 1(1%1/
8
s"l#mL%
Da)a! Pu#a*a
A&ri'anto B% 2//0% Pakan Ikan dan Perkembangannya% Jakarta: !anisius%
4armita% 2//6% Buku Ajar Analisis Hayat% Jakarta: !"+okt"ran B?$% B+% k"73%
La' 2% 1==:% Analisis Mikroba di Laboratorium% Jakarta: Raja ?ra&in+o P"rsa+a%
>olk% 1==3% DasarDasar Mikrobiologi% Jakarta: Brlangga%
La&($!an
)"l7s"l yeast s"b"lum +ib"ri methylene blue .a1 +an s"t"lah +ib"ri methylene
blue .b1 pa+a hasil p"r,obaan s"bagai b"rikut%
$ontoh p"rhitungan jumlah s"l#mL pa+a k"lompok 1%
C xx
< s"l#mL C % 20 % % 1/ xx
3
< s"l#mL C 16(6 % 20 % % 1/
3
< s"l#mL C :(10%1/
6
s"l#mL
!"pa+atan s"l yeast +alam 1 mL susp"nsi%
< s"l#mL C
C 1(1%1/
8

You might also like