5ml del cultivo de bacterias y se centrifug a 13000
rpm por 30 segundos Se elimin el sobrenadante por aspiracin con ayuda de una micropipeta y se dej el pallet lo ms seco posible sin eliminar el precipitado Se resuspendi el pallet en 300l de buffer I (buffer de lisis) y se agit vigorosamente en el Vortex Se adicion 300 l del buffer II, se cerr el tubo y se agit muy cuidadosamente invirtiendo el tubo 5 veces Se adicion 300 l del buffer III, se cerr el tubo y se agit muy cuidadosamente invirtiendo el tuvo 5 veces. Se centrifug a 13000 rpm por 10 minutos Se tom 800 l del sobrenadante Se adicion 0.7 volmenes de Isopropanol, se mescl agitando cuidadosamente invirtiendo el tubo 5 veces y se dej reposar en hielo durante 5 minutos Se centrifug a 13000 rpm por 10 minutos y se desech el sobrenadante Se lav el precipitado con etano al 70%. ( se adicion 1ml del etanol al precipitado, se agit, centrifug y se elimin el sobrenadante) Se dej secar el precipitado por 5 minutos Se resuspendi el precipitado en 30 l de buffer Tris 3nM pH 5.5 En un pollet se agrego 2l del ADN, 1.5l de BSA, 1l de la enzima Bam H1, 1.5l del buffer III y 9l de agua destilada. Obteniendo asi 15l de volumen total en el pollet. Se centrifugo y se incubo durante dos horas a 37C.