Materiales y mtodos

1.- Inocular en 3 mL de
medio Luria Bertani (LB)
adicionado de antibitico
a una colonia blanca e
incubar durante toda la
noche a 37C y 250 rpm.

4.- Adicionar 250L de la

solucin de lisis y mezclar
suavemente por inversin
5 veces, se incuba el tubo
a temperatura ambiente
sin dejar que la reaccin
se lleve a cabo por ms de
5 minutos.

5.- Adicionar 300L de

solucin de neutralizacin
y mezclar por inversin del
tubo 5 veces, dejar reposar
durante 5 minutos.

2.-Al da siguiente
cosechar las
clulas por
centrifugacin a
13 000 rpm
durante 5 min,
concentrndolas
en 1 solo tubo.

3.- Descartar el sobrenadante y

resuspender el paquete celular
en 250L de la solucin que
contiene ARNasas (1L de
ARNasa/mL de solucin), con la
ayuda de un aparato vortex
hasta homogeneizar.

6.- Centrifugar a 13
000 rpm por 10
minutos y transferir el
sobrenadante que
contiene ADN
plasmdico a un
nuevo tubo.

7.- Precipitar el ADN

plasmdico
adicionando 750L de
isopropanol y dejar
reposar por 10
minutos.

10.- Centrifugar a
12 000 rpm por 5
min, descartar
todo residuo de
etanol.

11.- Resuspender en
30L de agua estril
desionizada.

8.- Centrifugar
a 13 000 rpm
por 10 min y
descartar el
sobrenadante.

9.- Lavar la pastilla

con 500L de
etanol al 70% para
eliminar sales.

12.- Almacenar a 20C.