7.

Clasificarea canalelor ionice

Variabilitatea

extraordinar

formelor

de

via

diversitatea

modurilor de interaciune cu mediul exterior sunt reflectate n

multitudinea de canale ionice aprute i conservate n decursul
filogenezei. Pstrnd elementele care asigur selectivitatea, factor
primordial n generarea concentraiilor asimetrice de electrolii i
potenialului transmembranar, evoluia adaug pe rnd noi domenii
funcionale ce confer sensibilitatea la stimuli, exprimat n variantele
de gating i modulare discutate anterior. Aceste dou proprieti
eseniale, permeaia i gatingul, permit construirea unei matrici
bidimensionale de clasificare, n care distingem canale nonselective,
slab selective (de exemplu, anionice sau cationice) i nalt selective
(canale de Na+, K+, Ca2+), canale activate de voltaj (indice v sau VOC
voltage-operated channels) i activate de ligand (ROC receptoroperated

channels)

plus

clasele

speciale

mechanosensitive

thermosensitive.
Clonarea i analiza genetic introduce o nou dimensiune n clasificare,
permindu-ne

urmrim

apariia

diversificarea

tipurilor

fundamentale, regiunile nalt conservate i cele hipervariabile. Pe

msur ce screeningul genoamelor diferitelor specii avanseaz, tabloul
devine din ce n ce mai complet.
Teoriile actuale asupra originii vieii sunt focalizate asupra apariiei
agregatelor moleculare cu proprieti de cataliz ncruciat, ceea ce
permite segregarea i conservarea compoziiei la nivelul micelelor
fosfolipidice teoria matricelor lipidice (Lancet & Segre). Evoluia
ansamblurilor lipidice spre membrane duce la apariia mediului intern
recunoscut de Claude Bernard (le millieu interieur), care permite
homeostazia form de echilibru dinamic caracteristic sistemelor
deschise. Mediul intern deschide posibilitatea conservrii informaiei
structurale sub forma secvenelor de acizi nucleici i ulterior cuplarea

cu

sinteza

proteinelor

(teoria

hiperciclului

Eigen).

Apariia

mecanismelor de corecie a erorilor de transcriere a dus la o

amplificare extraordinar a cantitii de informaie, permind apariia
diversitii prin duplicarea genelor i binecunoscutul mecanism de
mutaie-selecie ntrevzut de Darwin i Mendel.

Fig. 7.1 Scenariul lipidic al apariiei vieii. Spre deosebire de teoriile clasice, n
care RNA autocatalitic apare naintea protomembranelor (A), n aceast viziune
primele evenimente sunt reprezentate de autoasamblarea unor agregate
lipidice, a cror compoziie se conserv prin segregare, iar sinteza compuilor
macromoleculari i apariia codului genetic survin ulterior, n interiorul
veziculelor lipidice.

Privind arborele filogenetic al canalelor ionice, constatm c toate

canalele voltage-gated i de background provin dintr-un strmo
comun prezent la procariote, un canal/transportor de K + tetrameric cu
dou domenii transmembranare pe subunitate, probabil asemntor cu
Kcsa (nu trebuie s uitm c la bacterii lanul respirator se afl de
asemenea n membran). Ulterior sunt adugate cele patru domenii
transmembranare suplimentare ce constituie senzorul de voltaj,
precum i subunitile regulatorii. Prin fuziunea a dou i apoi a patru
subuniti 6TM rezult structura actual a canalelor de Na + i Ca2+

Fig. 7.2 Originea presupus i evoluia familiilor de canale ionice, n paralel cu

evoluia filogenetic. Pe msura apariiei unor specii din ce n ce mai complexe
are loc i diversificarea tipurilor de canale ionice, implicate n special n
interaciunea cu mediul nconjurtor, realizat de sistemul neuromuscular.

voltage-gated. O alt linie de evoluie este cea care d natere

canalelor

ligand-gated,

cu

patru

domenii

transmembranare

pe

subunitate. Arhitectura lor este complet diferit de cea a canalelor

voltage-gated clasice. n fine, o a treia linie de evoluie duce la apariia
canalelor anionice i a aquaporinelor.
Pn spre jumtatea deceniului 60, natura cilor de permeaie era
neclar, ntruct modelul Hodgkin-Huxley nu descria dect parametrii
cinetici diferii ai celor dou conductane, de Na + i de K+, fr nici o
referire

concret

la

structura

molecular

mecanismelor

realizeaz acest proces. Cteva teorii intrau n competiie:

-

permeaia printr-o membran omogen

legarea i migrarea de-a lungul unor situsuri ncrcate electric

transportul prin carrieri

fluxul prin pori, cu mai multe variante:

-

aceeai cale pentru toi ionii, cu afiniti variabile n timp

pori creai spontan prin agitaie termic

pori formai din proteine, fosfolipide, acizi nucleici, etc.

care

Primul experiment care a demonstrat c Na + i K+ urmeaz ci diferite

l-a reprezentat blocarea curenilor de Na + cu tetrodotoxin (TTX),
adus de Toshio Narahashi n laboratorul lui John Moore din Statele
Unite. Experimentele cu TTX sau STX marcate radioactiv au dus la
estimarea densitii canalelor de Na+: 100-400 canale/m2 n axoni
nemielinzai. Ulterior, legarea TTX a permis purificarea canalelor de
Na+ din organul electric al iparului electric.
n contrast cu relativa uniformitate a canalelor de Na +, cele de K+
demonstreaz o surprinztoare varietate. Astfel, n axoni au fost
descrise trei tipuri de canale de K +, cu senzitiviti la voltaj i
farmacologie diferit (Dubois 1981, Grissmer 1986, Rper & Schwartz
1989, Corrette et al 1991, Jonas et al 1989, Safronov et al 1993). Reid
et al (1999) descriu dou moduri de gating (flickery i noisy) ale
canalelor de K+ cu cinetic intermediar blocabile de -dendrotoxin
din axonii umani, i trei niveluri de conductan, pe care le atribuie
subtipurilor Kv1.1, 1.2 i 1.6.
i distribuia n axonii mielinizai a canalelor de Na + i K+ este diferit:
canalele de Na+ sunt concentrate la noduri, asigurnd o conductan
de vrf de Na+ de 750 mS/cm2, comparativ cu 40-60 mS/cm 2 n axonii
nemielinizai. Conductana de repaus este i ea mai mare la noduri: 40
mS/cm2 comparativ cu 0.2-1 mS/cm 2 n axonii nemielinizai, asigurnd
o repolarizare rapid n timpul potenialelor de aciune. Ea se
datoreaz densitii mari de canale de K + de background, insensibile la
TEA i independente de voltaj (componenta denumit clasic gL).
Au fost descrise i canale de Na + rezistente la TTX, cu rol n nocicepie
(Scholz et al); de fapt, ele rspund la doze mai mari de TTX, nu n
domeniul nanomolar.

Fig. 7.3 Dou tipuri de canale de Ca2+ la nivelul membranei fibrelor miocardice
ventriculare, avnd conductan, cinetic i farmacologie diferite (din Nilius et
al. 1985).

Canalele de Ca2+ sunt dificil de nregistrat, datorit amplitudinilor mai

mici ale curenilor. Kostyuk et al. (1977) realizeaz primele nregistrri
whole-cell ale curenilor din neuroni ganglionari de melc, n absena
Na+ i cu Cs+ i TEA n pipet pentru a bloca curenii de K +. Curenii de
Ca2+ se activeaz maxim la ~ 10 mV. Potenialul de reversie este greu
de calculat, deoarece Ca2+ intracelular este foarte sczut (10 -7 M
comparativ cu 10-4 M la exterior, deci ECa 125 mV), ns frecvent
valorile msurate sunt mai mici datorit altor cureni de outward. O
proprietate interesant a curenilor de Ca2+ este selfinactivarea
datorit acumulrii Ca2+ intracelular. Ea poate fi nlturat prin
nlocuirea Ca2+ cu Ba2+. i alte canale de Ca2+ sunt modulate direct de

Ca2+ intracelular: K(Ca) sau Cl(Ca) (n afara reglrii metabolice prin

PKC, PK Ca2+/CaM-dependente, calcineurin).
Au fost descrise dou tipuri de canale de calciu (Tsien, Nilius):
-

tipul T (transient, tiny, low-threshold, fast, inactivating, FD-fast

deactivating, type I, LVA-low voltage activated)

tipul L (lasting, large, high-threshold, slow, lasting, SD-slow

deactivating, type II, HVA-high voltage activated).

n neuroni exist un al treilea tip numit N. 1, 4 dihydropyridinele sunt

blocani ai canalelor LVA. Ele sunt liposolubile i au o structur similar
anestezicelor locale. ntruct i canalele de Ca 2+ au o structur similar
celor de Na+, s-a presupus c mecanismul de aciune este acelai:
ptrunderea n vestibulul intern i blocarea dependent de voltaj. Un
model experimental de succes l-a reprezentat analogul nifedipinei BAY
K 8644 (produs la Colegiul de Medicin al Universitii Baylor din
Texas), care intr n vestibul stabiliznd starea deschis a canalelor.
Canalele de K+ prezint o diversitate i mai mare de structuri i funcii.
n neuroni ele particip la stabilirea potenialului de repaus i la
modularea repolarizrii i a generrii de poteniale de aciune
repetitive (firing). Tipul clasic descris de Hodgkin & Huxley a primit
denumirea

de

delayed

rectifier,

datorit

activrii

ntrziate

la

depolarizare i favorizrii curenilor de outward. Un alt curent de K +,

prezent numai n soma neuronal, nu i n axoni, este curentul
tranzient de tip A, cu inactivare rapid, asemntor curentului de Na +.
Rolul su este de a ncetini depolarizarea membranei, modulnd rata
de firing; axonii doar conduc impulsurile nervoase, acestea fiind
generate la nivelul conului axonal. Un rol asemntor l au canalele de
K+ dependente de Ca2+. Clasic distingem dou categorii: cele de mare
conductan (BK), blocabile de charybdotoxin (extras din veninul
unui scorpion), i cele de mic conductan (SK), blocabile de apamin
(extras din venin de albin). ntruct activitatea canalelor BK este
uor de nregistrat, ele au fost intensiv studiate prin metoda patch

clamp. Studierea fenomenului de post-hiperpolarizare neuronal (afterhyperpolarization - AHP) a evideniat dou componente cinetice
distincte: o component lent, blocabil de apamin sau Cd 2+, datorat
SK, i o component rapid, datorat unor canale de K + de tip inward
rectifiers.
Un curent cu o comportare invers f de IA, adic activat de
hiperpolarizare, a fost descris n celulele cu activitate repetitiv (pacemaker), primind diferite nume:
- Ih

hyperpolarization-activated current

- If

funny

- IQ

queer

- IAR

anomalous rectifier (Katz 1949).

El este mai puin selectiv (canalele sunt permeabile pentru cationii

monovaleni - Na+ i K+), i se activeaz la poteniale negative (-80
-100 mV), adic n timpul hiperpolarizrii dup un potenial de aciune.
El este activat de receptorii -adrenergici, cu cinetici diferite n inim i
neuroni. n activitatea de pace-maker a celulelor miocardice intervin
patru cureni:
-

IK, prin canale delayed rectifier, genereaz AHP

Ih, cu rol predominant dup stimularea simpatic

ICa

un posibil curent de Na+ de tip background.

Conductanele de background de K + au fost mai puin studiate; ele au

rol n meninerea potenialului de repaus apropiat de EK i, posibil, n
termosenzitivitatea la rece.
Canalele de Cl- joac n principal rolul de conductane de background,
ns unele dintre ele sunt voltage-gated. Ele au un rol stabilizator i de
transport n epitelii.
n fine, jonciunile gap realizeaz comunicarea direct ntre celule
(Furshpan & Potter 1985), fiind permeabile pentru ioni i molecule mici.
Ele pot fi dependente de voltaj. Sunt alctuite din dou ansambluri

simetrice numite hemiconexoni, fiecare compus din 6 subuniti

(conexine) delimitnd un por central. Subunitile se deschid prin
glisare, asemntor unei diafragme, micarea fiind comunicat prin
zonele de apoziie subunitilor din hemiconexonul opus.

Referine
Blatz AL, Magleby KL. 1987. Calcium-activated potassium channels.
Trends Neurosci 10:463-467.
Eigen M, Biebricher CK, Gebinoga M, Gardiner WC. 1991. The
hypercycle. Coupling of RNA and protein biosynthesis in the
infection cycle of an RNA bacteriophage. Biochemistry
30(46):11005-18.
Eigen M, Porschke D. 1970. Co-operative non-enzymic base
recognition. I. Thermodynamics of the helix-coil transition of
oligoriboadenylic acids at ACIDIC PH. J Mol Biol 53(1):123-41.
Furshpan EJ, Potter DD. 1959. Transmission at the giant motor
synapses of the crayfish. J Physiol 145:289-325.
Hess P, Lansman JB, Tsien RW. 1984. Different modes of Ca channel
gating behaviour favoured by dihydropyridine Ca agonists and
antagonists. Nature 311(5986):538-44.
Katz B. 1949. Les constantes lectriques de la membrane du muscle.
Arch Sci Physiol 2:285-299.
Keen JE, Khawaled R, Farrens DL, Neelands T, Rivard A, Bond CT,
Janowsky A, Fakler B, Adelman JP, Maylie J. 1999. Domains
responsible for constitutive and Ca(2+)-dependent interactions
between calmodulin and small conductance Ca(2+)-activated
potassium channels. J Neurosci 19(20):8830-8.
Kostyuk PG, Krishtal OA, Shakhovalov YA. 1977. Separation of sodium
and calcium currents in the somatic membrane of mollusc
neurones. J Physiol 270(3):545-68.
Meech RW. 1974. The sensitivity of Helix aspersa neurones to injected
calcium ions. J Physiol 237(2):259-77.
Neher E. 1971. Two fast transient current components during voltage
clamp on snail neurons. J Gen Physiol 58(1):36-53.
Reid G, Scholz A, Bostock H, Vogel W. 1999. Human axons contain at
least five types of voltage-dependent potassium channel. J
Physiol 518(Pt 3):681-96.
Scholz A, Vogel W. 2000. Tetrodotoxin-resistant action potentials in
dorsal root ganglion neurons are blocked by local anesthetics.
Pain 89(1):47-52.

Segre D, Lancet D. 2000. Composing life. EMBO Rep 1(3):217-22.

Spray DC, Bennett MV. 1985. Physiology and pharmacology of gap
junctions. Annu Rev Physiol 47:281-303.
Tsien RW, Fox AP, Hess P, McCleskey EW, Nilius B, Nowycky MC,
Rosenberg RL. 1987a. Multiple types of calcium channel in
excitable cells. Soc Gen Physiol Ser 41:167-87.
Tsien RW, Hess P, McCleskey EW, Rosenberg RL. 1987b. Calcium
channels: mechanisms of selectivity, permeation, and block.
Annu Rev Biophys Biophys Chem 16:265-90.
Yarom Y, Sugimori M, Llinas R. 1985. Ionic currents and firing patterns
of mammalian vagal motoneurons in vitro. Neuroscience
16(4):719-37.