ANTAGONISMUL MICROBIAN.

ANTIBIOTICELE. BACTERIOCINELE

COMUNITILE MICROBIENE. RELAIILE DINTRE

MICROORGANISME N COMUNITI
n natur bacteriile vieuiesc n cadrul asociaiilor,
care includ micete, alge, protozoare .a. Astfel de
asociaii se ntlnesc n variate habitate naturale:
ap, sol, pe plante, pe suprafaa i n corpul uman i
animal.
BIOTOP spaiu cu condiii de via particulare
(conjunctiva, mucoasa intestinal, orofaringe, vagin,
tegument, etc), populat i transformat de asociaii de
fiine vii.
BIOCENOZ (comunitate microbian) asociaii
microbiene ce populeaz un biotop.

Microorganismele prezente ntr-un biotop

particular constituie microflora acestui
habitat (m/f cutanat, intestinal, etc)

ntre microorganismele unui biotop se

pot stabili relaii:
I.
Indiferente (neutralism)
II. Favorabile (comensalism/satelitism,
simbioz/mutualism, sinergism)
III. Defavorabile (parazitism, antagonism)
Antagonism o specie inhib sau omoar alt
specie prin mecanisme specifice sau
nespecifice

Mi/o care manifest activitate inhibitoare

antagonist (A), mi/o care sufer concurent (C).
Antagonism nespecific:
- antagonistul este mai activ, utiliznd nutrienii,
oxigenul
- Antagonistul produce metabolii toxici (acizi,
indol, H2S, amoniac, peroxid, etc)
Antagonism specific antagonistul produce
substane cu aciune specific asupra unui sau
mai multor concureni (antibiotice, bacteriocine).

Efectul aciunii unui antagonist asupra

concurentului poate fi bacteriostatic sau
bactericid (uneori bacteriolitic).
Utilizarea practic a antagonismului microbian:
1. Pentru depistarea mi/o produceni de
antibiotice (micete, actinomicete, bacterii)
2. Pentru obinerea produselor biologice
curative de origine microbian (probiotice,
eubiotice): Lactobacterina, Colibacterina,
Bifidumbacterina, Bificol, etc
3. Crearea biocenozelor favorabile
organismului

METODELE DE STUDIU AL ANTAGONISMULUI

1. n mediu solid (metoda traneei)
antagonistul se nsmneaz n centrul cutiei,
concurenii perpendicular. Aprecierea
dup dimensiunea zonei de inhibiie a
creterii.
2. n mediu semisolid I strat antagonistul, II
strat concurentul. Aprecierea zon clar
ntre straturi.
3. nsmnarea n mediu lichid (BP) a unui
numr egal de A i C. Dup 24 ore incubaie
se rensmneaz 0,1 ml pe placa cu geloz.
Se compar numrul coloniilor de A i C.

I.
-

ANTIBIOTICE (AB) substane de origine

natural (microbian, animal sau
vegetal) sau substane sintetice sau semisintetice care inhib sau omoar unele
mi/o sau celule tumorale.
Clasificarea AB
Dup efectul asupra celulei
Bacteriostatic (tetraciclina, cloramfenicol)
Bactericid (streptomicina, polimixina)
Bacteriolitic (penicilina, cefalosporine)

II. Dup spectrul de activitate

- AB cu spectru restrns (ngust) de aciune
(AB anti-G+, anti-G-, anti-tuberculoase,
anti-micotice, anti-tumorale, etc)
- AB cu spectru larg de aciune (G+ i G-)
III. Dup producent (origine)
1. De origine fungic (peniciline,
cefalosporine,...)
2. Din actinomicete (aminoglicozide,
macrolide, cloramfenicol, etc)

3. De origine microbian (bacitracina din Bacillus

subtilis, gramicidina din Bacillus brevis, polimixina
din Bacillus polimyxa)
4. De origine vegetal fitoncidele (alicina, rafanin,
imanin)
5. De origine animal (lizozimul din albu de ou,
ecmolina din oase de pete, eritrina din mas
eritrocitar, splenocitina din splin)
IV. Dup compoziia chimic (beta-lactamice,
macrolide, aminoglicozide, fenicoli, polipeptide,
poliene, sulfamide, chinolone i fluorochinolone,
nitrofurani, etc)

Mecanismul de aciune al AB
1. AB cu aciune asupra sintezei peretelui celular
(dereglarea sintezei peptidoglicanului)
Beta-lactamice (peniciline, cefalosporine).
Deregleaz procesul de sintez a punilor
peptidice din PG, inhibnd transpeptidazele (PFP)
Vancomicina (blocheaz transferul pentapeptidului
din MCP spre peretele celular)
Bacitracina (blocheaz reciclarea moleculelor de
transport transmembranar - bactoprenol)
Fosfomicina (blocheaz piruviltransferaza)
Efectul acestor AB este bactericid/litic, doar celulele
metabolic active sunt omorte. Nu afecteaz
celulele eucariote (lipsa PG).

2. AB cu aciune asupra ME i a MCP

AB polipeptidice (polimixina, colistina).
Se fixeaz pe fosfolipidele ME, n special
lipidul A (bacterii G-), mrindu-i
permeabilitatea. Efect bactericid.
AB polienice (nistatina, levorina,
amfotericina B). Se fixeaz pe sterolii
MCP ale micetelor, perturbnd respiraia
i dezorganiznd MCP (permeabilitate
excesiv i moartea celulei).
Aceste AB acioneaz i asupra celulelor n
repaos. Relativ toxice.

3. AB cu aciune asupra ribosomilor

- 30S (streptomicina, kanamicina,
gentamicina, tetraciclina)
- 50S (cloramfenicol, macrolide - eritromicina,
clindamicina, lincosamide).
Se leag pe receptori specifici de pe
subunitile 30S sau 50S, perturbnd sinteza
proteic (inhibiia transpeptidazei, a
translocaiei peptidelor, etc). Rezult inhibiia
sintezei proteice sau sinteza proteinelor
nefuncionale. Efectul este bacteriostatic,
doar asupra celulelor active metabolic.

4. AB cu aciune asupra acizilor nucleici

- Rifampicina inhib ARN-polimeraza
inhibnd sinteza ADN i a ARNm
- Novobiocina blocheaz sinteza ADN
inhibnd activitatea girazei.
- Chinolonele (acidul nalidixic, ciprofloxacina,
ofloxacina) blocheaz activitatea topoizomerazelor. Efect bactericid.
- Sulfamidele i trimetoprimul interfereaz cu
sinteza acidului folic i folailor (cofactori n
sinteza AN). Activitate bacteriostatic.

Producerea AB
1. Metoda biologic
2. Metoda sintetic
3. Metoda semi-sintetic
Etapele metodei biologice:
1. Cultivarea tulpinilor-producente (Penicillium
notatum, Actinomyces griseum, etc) n mediu
lichid adecvat
2. Extragerea AB
3. Purificarea i concentrarea AB
4. Controlul toxicitii
5. Determinarea activitii AB

Activitatea AB se msoar n uniti de mas (g, mg,

g) sau de aciune (UA).
1 UA cantitatea minimal de AB care inhib
creterea unei sue-model n condiii standarde.
Penicilina 1UA = 0,6 g substan pur
Cerinele fa de AB:
- Toxicitate selectiv
- Efect terapeutic cu doze minime
- Activitate de lung durat
- Spectru ngust de aciune
- S fie solubile i absorbite uor
- S nu provoace efecte secundare
- S nu se dezvolte rezistena contra AB
- S fie ieftine

Sensibilitatea microbilor la AB
n funcie de rezultatele clinice, bacteriile se
divizeaz n 3 clase: sensibile la AB (S),

rezistente (R) i intermediare (I) (moderat

sensibile).

Tulpinile S efectul terapeutic este obinut

cu doze terapeutice uzuale
Tulpinile R efectul terapeutic nu poate fi
obinut cu doze terapeutice
Tulpinile I succesul terapeutic este
imprevizibil. Ar fi posibil cu doze mari sau
la administarea local a AB.

Fiecare tulpin izolat manifest

sensibilitate particular. Ea poate fi
studiat n laborator pentru
determinarea profilului de sensibiliti
a acestei tulpini, ceea ce constituie o
antibiogram.
Rezultatele testelor de sensibilitate
permit medicului s claseze tulpinile
dup categoriile terapeutice (S, R, I),
uneori sunt utile n identificarea
tulpinilor.

Testarea sensibilitii bacteriilor la AB

Metoda difuzimetric (rondelelor). Utilizat uzual n
infecii banale.
Condiii: mediu standard, concentraie standard de
mi/o (105/ml), rondele (comprimate) cu %
standarde de AB, condiii standarde.
Mediul este inoculat cu suspensia bacterian. Dup
uscare n termostat se depun rondelele 24h, 37C.
Lectura diametrul zonei de inhibiie a creterii
culturii bacteriene este comparat cu diametre
standarde pentru fiecare AB. Sub acest diametru
tulpina este R, dac este depit S.

 Metoda

diluiilor

ntr-un ir de tuburi cu 1 ml BP se efectueaz

diluia AB (256 UA, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1,
0,5, etc). Se adaug n fiecare tub (cu
excepia celui martor) 0,1 ml suspensie
bacterian 105/ml. Termostat - 24h.
Lectura cea mai mic doz de AB care inhib
creterea culturii dup 24h de incubare
constituie Concentraia Minim de Inhibiie
(CMI) a AB pentru tulpina testat.

CMI msoar efectul bacteriostatic.

Concentraia Minim Bactericid (CMB)

cantitatea minim de AB care omoar 99,9% din
inoculum.
Determinarea CMB din ultimele tuburi fr
cretere se repic 0,1 ml de mediu pe placa cu
geloz. Dup 24h se compar numrul celulelor
ce au supravieuit cu nr iniial (105/ml).
Pentru a stabili dac tulpina este sensibil sau
rezistent la un AB se cere cunoaterea
Concentraiilor Terapeutice (CT) (cantitatea de AB
prezent n focarul infecios n cursul
tratamentului cu doze terapeutice) a fiecrui AB
testat.

Sue Sensibile CMI/CT <1, ex.: 2/8,

efect terapeutic posibil cu doze uzuale
Sue Rezistente CMI/CT>1, ex.: 8/2,
efect terapeutic imposibil
Sue Intermediare CMI/CT=1, efect
terapeutic imprevizibil. Pot fi utilizate doze
maxime sau administrarea local a AB
Testarea CMI / CMB este indicat n
tratamentul infeciilor grave : meningite,
septicemii, endocardite, infecii cronice
sau la persoane cu imunosupresie.

1.

Monitorizatea (supravegherea)
tratamentului cu AB. Verificarea
eficacitii antibioterapiei.
Determinarea concentraiilor umorale sau
tisulare ale AB

Indicaii:
Utilizarea unui AB toxic
n caz cnd bolnavul sufer de deficiene
metabolice sau excretoare
Se compar concentraiile obinute cu CMI a
antibioticului testat (sau cu CT).
-

2. Studiul activitii inhibitorii a lichidelor

biologice (NEI)
Indicaii: infecii grave care nu rspund rapid la
tratament.
Efectuarea: la diluii duble a lichidului examinat
(ser, LCR, urin) se adaug suspensia
bacterian (din tulpina izolat de la bolnav).
Lectura: dup 24h de incubaie la 37 C se
apreciaz diluia maxim cu efect
bacteriostatic/cid.
NEI 1:8 reflect eficiena antibioticoterapiei

Rezistena mi/o la antibiotice

Cauzele:
1. Factori genetici, proprii bacteriilor
2. Factori ce favorizeaz selecia i difuzarea
tulpinilor bacteriene rezistente
Tipurile de rezisten:
1. Natural, ereditar, de specie
lipsa intei ex.: micoplasme, micete;
imposibilitatea de a atinge inta ex.:
Mycobacterium (cerurile, lipidele);
-

bacteriile nu efectueaz procesul inhibat de

AB ex.: acidul folic este preluat din mediu

2. Achiziionat, dobndit, afecteaz tulpinile

unei specii sensibile. Depinde de aciunea de
selecie exercitat de AB utilizate n tratament
Mecanismele rezistenei dobndite:
- Diminuarea permeabilitii membranare
- Modificarea intei moleculare
- Eliminarea excesiv a AB
- Inactivarea enzimatic a AB, care poate fi
hidrolizat (penicilinaz, cefalosporinaz) sau
modificat structural (acetilaze, adenilaze,
fosforilaze), etc.

Rezistena dobndit se poate manifesta

fenotipic (bacteriile n faza de repaos, formele
L de bacterii) sau genetic (genotipic)
Rezistena genetic poate fi:
- Cromozomial, determinat de mutaii (10%)
Mecanisme: modificarea intei moleculare,
diminuarea permeabilitii membranare
- Plasmidic, epidemic, realizat prin transfer
de gene prin intermediul plasmidelor R (poate
fi rezisten multipl).
Mecanisme: inactivarea enzimatic, modificarea
intei, substituia sau supraproducia intei,
excreie crescu a AB.

1.
2.
3.
4.
5.

6.
7.

Prevenirea rezistenei
Supravegherea epidemiologic a tulpinilor
rezistente
Politic strict de prescriere a AB
Respectarea dozelor terapeutice corecte i a
timpului de tratament necesar
Asocierea AB cu mecanisme de aciune diferite
Prescrierea AB care nu sunt sensibile la betalactamaze, utiliznd inhibitori (acidul clavulanic,
sulbactamul, tazobactamul). Ex.: augmentina
amoxicilina+acid clavulanic
Reciclarea AB
Producerea AB noi

Efectele negative ale antibioticoterapiei

1. Efect toxic (streptomicina surditate,
cloramfenicolul toxic pentru mduva
osoas, polipeptidele nefrotoxice, etc)
2. Efect teratogen
3. Aciune sensibilizant (penicilina, etc)
4. Disbacterioz
5. Dereglarea imunogenezei
6. Selecia suelor rezistente

Bacteriocinele substane proteice bactericide

produse de numeroase specii bacteriene i
active asupra altor tulpini ale aceeai specii
sau asupra speciilor nrudite. Producerea
bacteriocinelor este determinat plasmidic.
Tipuri de bacteriocine: colicine (secretate de
Escherichia coli), corinecine
(Corynebacterium), vibriocine (Vibrio),
piocine (Pseudomonas), etc.
Studiul sensibilitii unei tulpini la bacteriocine
(bacteriocinotipia) se utilizeaz n scopuri
epidemiologice