Bersejarah Preview

Plastik yang digunakan dalam kehidupan sehari-hari namun karena masalah yang terkait dengan plastik, peneliti
sedang mencari alternatif untuk menggantikan plastik. Mereka tidak menyadari bahwa solusi untuk masalah mereka
ditemukan pada tahun 1920 oleh seorang ahli mikrobiologi Perancis Maurice Lemoigne. Ia menemukan poliester
pertama, poli (3-hidroksibutirat), P (3HB), dalam bentuk butiran dalam sel-sel dari bakteri Gram positif Bacillus
megaterium (Lemoigne, 1926). PHB adalah yang pertama dan yang paling umum biopolimer milik
Polyhydroxyalkanoates (PHA) (Gambar 2.1).
Sekitar setengah abad kemudian, PHA yang mengandung 3HB dan 3-hidroksivalerat (3HV) ditemukan dalam
lumpur aktif (Wallen dan Rohwedder, 1974). Itu setelah satu dekade yang Findley dan Putih (1983) melaporkan
Odha dengan 11 jenis linear dan bercabang unit berulang dari 4-8 atom karbon. Pada tahun 1983, Witholt dan rekan
kerja di University of Groningen, Belanda, menemukan bahwa Pseudomonas oleovOrans tumbuh pada alkana
menghasilkan sejumlah besar butiran yang mengandung poliester dengan unit 6-10 atom karbon (de Smet
etal.,1983). Pada tahun 1988, Doi dan rekan kerja yang diperoleh Odha dengan unit berulang asam 4-hidroksibutirat
dari bakteri yang tumbuh pada substrat karbon yang memiliki struktur ini (Kunioka etal.,1989). Saat ini, lebih dari
150 asam hydroxyalkanoic berbeda diketahui dimasukkan ke polyhydroxyalkanoates (Steinbchel dan Hein, 2001),
dengan spesies mikroba dari lebih dari 90 genera yang dilaporkan menumpuk poliester ini (Zinn etal.,2001). Odha
yang menarik perhatian besar karena meningkatnya permintaan untuk bahan yang kompatibel lingkungan dari
sumber daya terbarukan. Konsumsi Eropa bahan tersebut diperkirakan sekitar 50.000 sampai 100.000 ton untuk
tahun 2007, dan diperkirakan akan meningkat menjadi 2-4 juta ton pada tahun 2020 (Chanprateep etal.,2010).
Odha yang biodegradable dan biokompatibel memiliki masa depan yang menjanjikan di bidang terkait medis.
Namun, produksi industri mereka mapan. Usaha pertama produksi industri dibuat untuk P (3HB) di tahun 1950 oleh
sebuah perusahaan Amerika North-, WR Grace Co Namun, proses ini tidak berhasil karena efisiensi produksi yang
rendah dan kurangnya metode pemurnian yang sesuai. Pada 1970-an, Imperial Chemical Industries (ICI, Inggris)
mulai memproduksi PHB dan PHBV (200.000 l) dengan nama dagang Biopol (Holmes, 1985, Byrom, 1992).
Proses dimanfaatkan mutan CupriviadusNecator,NCIB 11.599 (Schlegel dan Gottschalk, 1965). Fermentasi
dilakukan dalam dua langkah budaya makan-batch dengan glukosa sebagai sumber karbon dan fosfat sebagai nutrisi
pembatas untuk meningkatkan produksi PHB. Biomassa akhir adalah 100 g / l dengan produktivitas 2,5 g / l / jam.
The PHBV diproduksi dengan memberikan pakan campuran glukosa dan asam propionat dalam fase akumulasi
polimer. Isi dari 3-hidroksivalerat (HV) diatur dengan menyesuaikan rasio dua substrat dalam pakan (Byrom, 1990).
Paten itu kemudian dijual ke Zeneca, kemudian diakuisisi oleh Monsanto (AS) pada tahun 1996 dan saat ini milik
Metabolix Inc (USA). Metabolix Inc adalah perusahaan yang memproduksi PHA utama di Amerika Serikat. Mereka
mengembangkan strain rekombinan dari Escherichia coli K12 untuk lebih ekspresi PHB, dan galur bakteri ini dapat
menghasilkan 100 g / l dari PHB dalam 40 jam (Lee etal.,2004). Pada tahun 2008, mereka juga mengumumkan
gabungan produksi PHA dari switchgrass pada tingkat 20% dari berat sel kering, 75% dari yang dapat dipulihkan.
Dengan demikian, dari 1 juta hektar sekitar 3,3-5000000000 pon PHA dapat diperoleh (Somleva etal.,2008). Pada
tahun 2010, Metabolix Inc membentuk perusahaan patungan dengan nama Telles dengan Archer Daniels Midland
Company (ADM) untuk membuka pabrik skala komersial pertama mereka untuk menghasilkan resin PHA berbasis
sirup jagung, Mirel . Telles adalah menyiapkan fasilitas untuk fermentasi terendam gula jagung untuk
memproduksi 50.000 ton PHA per tahun (Kram, 2008).
PHB Industri SA, sebuah perusahaan Brasil mengembangkan skema produksi yang terintegrasi untuk mendapatkan
P (3HB), gula dan etanol dari gula tebu dan telah beroperasi pabrik skala pilot memproduksi 60 ton P (3HB)
(Biocycle ) per tahun sejak tahun 1995, dengan rencana untuk meningkatkan-up proses untuk kapasitas 10.000 ton
per tahun (Nonato etal.,2001 ).

Di Kanada, Biomatera Inc mengkhususkan diri dalam pembuatan PHA oleh fermentasi residu pertanian. Sebuah
perusahaan Jerman Biomer Inc didirikan produksi PHA secara komersial skala kecil untuk aplikasi khusus
(Chanprateep, 2010). Pada tahun 1993, Biomer memperoleh keahlian dan mikroba untuk produk PHB dari
perusahaan Austria Petrochemia Danubia dan mendaftarkan nama dagang Biomer pada tahun 1995 (SCHMACK,
2000).

Mitsubishi Gas Kimia, Perusahaan Jepang yang berbasis mengembangkan produksi P (3HB) dari metanol , dan
pasar di bawah nama dagang BioGreen . Procter and Gamble, dalam kemitraan dengan Kaneka Corporation,
Tsinga University di Cina, dan Riken Institute di Jepang, telah mengembangkan berbagai aplikasi untuk PHB dan
PHBH (Nodax ) sebagai serat, bahan nonwoven, dispersi berair, dan produk sekali pakai. Berbasis di AS
Meredian / Danimer pada tahun 2007 membeli teknologi Nodax dan berencana untuk membuat tiga pabrik pada
tahun 2013 (Esposito, 2008). Baru-baru ini, Kaneka Corporation telah mengumumkan rencana untuk meluncurkan
produksi polimer lembut yang berasal dari tanaman yang disebut Kaneka PHBH pada tahun 2010, dengan kapasitas
produksi 1.000 ton per tahun di Takasago City, Hyogo, Jepang

Struktur, jenis dan sifat

Odha adalah yang paling kelompok yang menarik dan terbesar biopolyesters, dengan lebih dari 150 jenis komposisi
monomer yang memberikan sifat dan fungsi yang berbeda (Steinbchel dan Valentin, 1995; Lenz dan Merchessault,
2005; Hazar dan Steinbchel, 2007). Mereka termoplastik atau elastomer poliester (polyoxoesters) Rhydroxyalkanoic acid (HA) monomer yang dibiosintesis oleh berbagai bakteri Gram-positif dan Gram-negatif
karbon intraseluler dan senyawa penyimpanan energi (Anderson dan Dawes, 1990; Lee, 1996). Dalam kebanyakan
kasus, mereka diproduksi dan akumulasi dalam kondisi nitrogen, fosfor atau oksigen pembatasan stres (Lefebvre
etal, Ryu 1997;..etal,1997). Di hadapan sumber karbon berlebih
Odha memiliki rumus umum ditunjukkan pada Gambar 2.2 . Banyak Odha yang berbeda yang telah diidentifikasi
sampai saat ini terutama linear, head-to-tail poliester terdiri dari monomer asam lemak 3-hidroksi. Dalam polimer
ini, gugus karboksil dari satu monomer membentuk ikatan ester dengan gugus hidroksil dari monomer tetangga
(Gambar 2.2). Dalam semua Odha yang telah ditandai sejauh ini, atom karbon hidroksil tersubstitusi dalam R,
konfigurasi kecuali dalam beberapa kasus khusus di mana tidak ada kiralitas. Pada saat yang sama C-3 atau
posisi, gugus alkil yang dapat bervariasi dari metil untuk tridecyl diposisikan. Anggota keluarga PHA yang paling
banyak adalah homopolimer P (3HB), yang n sama dengan 1 dan R adalah gugus metil (Gambar 2.1). Namun, ini
rantai alkil sisi bisa jenuh, tak jenuh, rantai lurus atau bercabang yang mengandung alifatik atau kelompok sisi
aromatik atau terhalogenasi, terepoksidasi, dan bercabang monomer (Lageveen etal, 1988;.Abe etal, 1990;.Doi dan
Abe, 1990 ; Fritzsche etal, 1990a;.Fritzsche etal, 1990b;.Kim etal, 1991;.Kim etal, 1992;.Choi dan Yoon, 1994;
Hazar etal, 1994;.Curley etal, 1996;.Lagu dan Yoon, 1996). Khusus, monomer yang tidak alami seperti 4cyanophenylvalerate telah dimasukkan untuk mendapatkan polimer baru dengan sifat khusus (Kim etal.,1995). Juga
variasi substituen alkil dan posisi gugus hidroksil agak variabel, karena itu 4-, 5- dan asam 6-hidroksi telah
dimasukkan (Kunioka etal, 1989;.Valentin etal, 1992;.Valentin et al.,1994; Eggink etal, Valentin 1995;..etal,1996).
Variasi dalam panjang dan komposisi rantai samping dan kemampuan untuk memodifikasi substituen reaktif mereka
adalah dasar untuk keragaman keluarga polimer PHA.
Secara struktural, polimer ini diklasifikasikan berdasarkan jumlah atom karbon yang berkisar dari 4 16 (Madison
dan Huisman, 1999; Taguchi dan Doi, 2004) dan jenis unit monomer, memproduksi homopolimer atau
heteropolymers. Tergantung pada panjang karbon-rantai konstituen, Odha dapat diklasifikasikan menjadi dua
kelompok, rantai pendek-panjang (SCL) Odha dan menengah-rantai panjang (MCL) Odha. SCL-Odha termasuk
poliester yang mengandung monomer yang asam hydroxyalkanoic C4 atau C5, seperti poli (3-hidroksibutirat), P
(3HB), poli (4- hidroksibutirat), P (4HB), poli (5-hidroksibutirat), P ( 5HB) poli (3-hidroksivalerat) [P (3HV)] atau P
kopolimer (3HB-co-3HV). MCL-Odha termasuk poliester yang mengandung monomer asam hydroxyalkanoic C6C16 seperti homopolimer poli (3-hidroksiheksanoat), P (3HHx), poli (3-hydroxyoctanoate), P (3HO) dan
heteropolymers seperti P (3HHx-co-3HO ) (Anderson dan Dawes, 1990; Steinbchel dan Valentin 1995). Mayoritas
bakteri mensintesis PHA menumpuk baik SCL-PHA atau MCL Odha (Anderson dan Dawes, 1990; Steinbuchel dan
Schlegel, 1991; Lee, 1996), Kopoliester mikroba yang terdiri dari SCL- dan MCL hydroxyalkanoates telah
dilaporkan (Steinbchel dan Hein, 2001) seperti poli (3-hidroksibutirat co-3-hidroksiheksanoat) disintesis oleh
Aeromonas caviae (Fukui dan Doi, 1997).
Sifat Odha bervariasi, termasuk bahan-bahan yang meniru sifat termoplastik dan lain-lain yang memiliki sifat
electrometric. Odha bervariasi dalam karakteristik fisik dan kimianya karena konten monomer mereka bervariasi.
Panjang rantai hidrofobisitas pengaruh monomer polimer, titik leleh, suhu transisi kaca dan derajat kristalinitas
(Chanprateep, 2010). Faktor-faktor yang mempengaruhi isi monomer meliputi: jenis mikroorganisme (misalnya
Gram-negatif atau Gram-positif), bahan-bahan media, kondisi fermentasi, cara fermentasi (batch, makan-batch,

kontinyu) dan pemulihan. Massa molekul PHA bervariasi per produser PHA tetapi pada umumnya dalam kisaran 50
sampai 1.000 KDa. Tabel 2.2 memberikan gambaran sifat PHA yang berbeda, serta dari konvensional, polimer
berbasis minyak bumi.
Sifat biodegradabilitas merupakan salah satu faktor yang paling penting bagi popularitas Odha. Odha dapat efisien
terdegradasi di lingkungan karena banyak mikroorganisme dalam tanah yang mampu mengeluarkan
polihidroksialkanoat (PHA) depolymerases, enzim yang menghidrolisis ikatan ester dari polimer menjadi monomer
watersoluble dan oligomer, yang selanjutnya dimetabolisme menjadi air dan karbon dioksida (Jendrossek dan
Handrick, 2002; Lim etal, 2005;.Sridewi etal, 2006)..Biodegradabilitas PHA dipengaruhi tidak hanya oleh sifatsifatnya sendiri, seperti stereoregularity, kristalinitas, komposisi dan aksesibilitas permukaan untuk
PHAdepolymerizing enzim, tetapi juga oleh kondisi lingkungan, seperti suhu, tingkat kelembaban, pH dan pasokan
gizi (Sudesh et al.,2000). Botol terbuat dari P (3HB-co-3HV) secara signifikan terdegradasi pada inkubasi dalam
aerobik lumpur limbah selama 8 minggu (Jendrossek, 2001). Dalam lingkungan danau, Odha menurunkan dalam
254 hari pada suhu di bawah 6 C (Johnstone, 1990). Mergaert et al. (1992, 1993, 1994) menemukan bahwa P
(3HB-co-3HV) benar-benar terdegradasi dalam limbah anaerobik, tanah dan air laut dalam waktu 6, 75 dan 350
minggu berturut-turut.

Rantai pendek Panjang-PHA (SCL- PHA)

Secara historis, poli (3-hidroksibutirat) [P (3HB)] telah dipelajari paling luas dan telah memicu minat komersial
polyhydroxyalkanoates. P (3HB), yang berisi mengulang unit (R) -3HB, adalah poliester biologis yang paling umum
yang dihasilkan oleh berbagai bakteri di alam. Sebuah Gram-negatif bakteri Cupriavidus Necator (sebelumnya
Alcaligenes eutrophu, Ralstonia eutropha), terakumulasi P (3HB) hingga 80% dari berat kering sel. Dalam sel, P
(3HB) ada dalam cairan, keadaan amorf. Namun, setelah ekstraksi dari sel dengan pelarut organik, P (3HB) menjadi
sangat kristal menunjukkan 55- 70% kristalinitas (Doi, 1995), dan di negara bagian ini merupakan bahan kaku tapi
rapuh. Berat molekul rata-rata (M) P (3HB) yang dihasilkan oleh tipe liar bakteri biasanya di kisaran 1 x Oktober 0403x 1o6 Da dengan polidispersitas sebuah (Mw/ Mn)sekitar 2,0. Suhu transisi-gelas (T g)dan suhu leleh (T m,)dari P
(3HB) homopolimer 4 C dan 177 C masing-masing (Tabel 2.2). P (3HB) memiliki sifat mekanik yang mirip
dengan polypropylene. Misalnya, kekuatan tarik P (3HB) (43 MPa) dekat dengan polypropylene (38 MPa). Namun,
ekstensi untuk istirahat (5%) dari P (3HB) adalah nyata lebih rendah dari polypropylene (400%). Oleh karena itu, P
(3HB) muncul sebagai bahan plastik kaku dan lebih rapuh daripada polipropilena.

Karena kerapuhan nya, P (3HB) tidak tahan sangat stres. Juga, suhu leleh relatif tinggi P (3HB) (sekitar 170 C)
dekat dengan suhu di mana polimer ini terurai termal dan dengan demikian membatasi kemampuan untuk
memproses homopolimer. P (3HB) memiliki rendah O 2 permeabilitas dan sifat termoplastik yang baik, sebanding
dengan polimer berbasis minyak bumi, tetapi menderita sifat mekanik miskin (Sudesh etal.,2000).
Pembentukan coplolymers dan produksi ultra molar tinggi Massa PHB telah mampu mengatasi masalah ini.
Kopolimer dari P (3HB) dapat dibentuk dengan cofeeding substrat dan dapat mengakibatkan pembentukan polimer
yang mengandung 3- hidroksivalerat (3HV) atau 4-hidroksibutirat (4HB) monomer. Penggabungan unit monomer
selain 3HB untuk membentuk kopolimer dapat memperbaiki sifat, dengan sifat fisik dan termal bervariasi dengan
komposisi monomer molekul struktur dan. Penggabungan 3HV ke P (3HB) menghasilkan poli (3-hidroksibutirat-co3-hidroksivalerat) [P (3HB-3HV)] kopolimer yang kurang kaku dan rapuh dari P (3HB). Ini adalah kopolimer yang
paling terkenal dan memiliki kristalinitas yang lebih rendah dan penurunan kekakuan, menjadi lebih fleksibel dan
lebih tangguh daripada P (3HB) (Lee, 1996). Suhu leleh yang rendah tergantung pada isi HV (Pouton dan Akhtar,
1996). Polimer menunjukkan suhu transisi kaca di kisaran -5 sampai 20 C. Oleh karena itu dapat digunakan untuk
mempersiapkan film dengan air dan penghalang gas sifat yang sangat baik mengingatkan polypropylene, dan dapat
diproses pada suhu yang lebih rendah sementara tetap mempertahankan sebagian besar sifat mekanik yang baik
lainnya dari P (3HB) (Marchessault, 1996).

Dalam Ultra P-tinggi-molar-massa (3HB) yang dihasilkan oleh rekombinan Escerichiacoli,yang memiliki massa
molar dari 20 kDa, sifat mekanik juga sangat ditingkatkan, dengan perpanjangan putus yang meningkat dari 5%
untuk P konvensional (3HB) ke 58 % untuk film membentang dibuat dari P-molar-massa tinggi (3HB), yang nyata
membaik (Kusaka etal.,1997, 1998). Selain itu, ketika pengobatan anil diaplikasikan pada film membentang,
ditemukan bahwa sifat mekanik yang lebih ditingkatkan. Dengan demikian, P (3HB) homopolimer, yang awalnya
bahan rapuh dengan sifat fisik yang buruk, sekarang menjadi kandidat potensial untuk eksploitasi komersial lebih
lanjut dengan menggunakan teknik rekayasa genetika.

Medium Chain Panjang-PHA (MCL-PHA)

MCL-PHA terdiri dari C6 ke C16 asam lemak 3-hidroksi. MCL-Odha dan kopolimer mereka memiliki kristalinitas
yang rendah (20-40%), suhu leleh rendah dan tidak mudah patah (ekstensi untuk istirahat dari 300-450%) membuat
mereka lebih elastis dibandingkan SCLPHAs (Gross etal, 1989;.Preusting etal.,1990). Mereka berperilaku sebagai
elastomer dan komposisi mereka dapat dimanipulasi untuk berbagai aplikasi (Anderson dan Dawes, 1990).
Fitur yang paling menarik dari MCL-PHA adalah bahwa berbagai MCL-PHA bantalan kelompok fungsional yang
berbeda dalam rantai samping dapat disintesis oleh beberapa organisme (Kim etal.,2000). MCL-Odha dengan
kelompok fungsional sangat menarik, karena kelompok fungsional dapat meningkatkan sifat fisik polimer. Beberapa
kelompok fungsional lebih lanjut dapat dimodifikasi oleh reaksi kimia untuk memperoleh polimer lebih berguna dan
yang meluas aplikasi potensi MCL-PHA polimer sebagai biodegradable lingkungan dan biomaterial fungsional
untuk keperluan biomedis (Hazar dan Steinbchel, 2007).

Alifatik MCL-PHA
Banyakfluorescent Pseudomonas strain menghasilkan MCL-PHA sebagai kopolimer yang mengandung setidaknya
dua jenis unit 3-hydroxyalkanoate ketika tumbuh dengan alkana dan asam alkanoat lebih lama dari pentana dan
asam pentanoic (Kim dan Lenz, 2001). Umumnya unit monomer utama di MCL-PHA disintesis dari substrat dengan
bahkan jumlah atom karbon adalah 3-hydroxyoctanoate, sedangkan dari substrat dengan ganjil atom karbon adalah
3-hydroxynonanoate. Juga, substrat organik non-berbasis-alkil dapat digunakan untuk sintesis MCL-PHA (Timm
dan Steinbchel, 1990; Huijberts et al, 1992.).Selama dua dekade terakhir, banyak upaya telah dihabiskan untuk
mempersiapkan Odha mikroba dengan sifat baru. Akibatnya, berbagai MCL-PHA dengan gugus fungsional yang
beragam dalam rantai samping mereka telah disintesis dan sifat mereka ditandai. Banyak alifatik MCL-PHA yang
mengandung kelompok diganti, seperti bromin (Kim et al., 1992a), klorin (Doi dan Abe, 1990), fluor (Kim et al.,
1996), alkil, siano, hidroksil (Lenz et al ., 1992), alkoksi (Kim et al., 2003), acetoxy (Jung et al., 2000), epoxy
(beruang et al., 1997), sikloheksil (Kim et al., 2001), propylthio (Ewering et al.,2002), dan ester alkil (Scholz et al.,
1994) telah diproduksi mikroba. Selain itu, beberapa laporan menunjukkan bahwa beberapa strain bakteri dapat
mensintesis tak jenuh MCL-PHA yang mengandung ikatan ganda karbon karbon (Fritzche et al., 1990a) dan karbon
karbon ikatan rangkap tiga (Kim et al., 1998, 2002a) dalam kelompok reaktif terminal . Fungsional MCL-PHA
umumnya diproduksi oleh mikroorganisme tumbuh pada substrat karbon dengan struktur kimia masing-masing
diberikan sebagai sumber karbon tunggal atau sebagai campuran dengan asam oktanoat atau nonanoat.
Namun, P. stutzeri dan P. cichorii juga dilaporkan untuk mensintesis MCL-PHA bantalan gugus epoksi dari sumber
karbon non-terkait seperti minyak kedelai dan 1- alkena dari C7-C12 (Dia et al, 1998;.Imamura et al,
2001.).Umumnya, pengenalan gugus hidrofilik dalam polimer menghasilkan pembentukan polimer dengan
peningkatan hidrofilisitas. Polimer hidrofilik memiliki berbagai penerapan sebagai bahan biokompatibel dalam
berbagai bidang biomedis. Baru-baru ini, mikroba MCL-PHA yang mengandung sejumlah besar metoksi atau etoksi
kelompok berhasil dibuat dari P. oleovorans sel tumbuh pada campuran asam ethoxyalkanoic methoxyor dengan
asam nonanoat (Kim etal.,2003). Dalam hal ini, kopolimer MCL-PHA dengan lebih dari 60% mol 3hydroxyalkoxyalkanoates menunjukkan kelarutan yang tinggi, bahkan dalam metanol / air (70:30) solusi
menunjukkan bahwa sifat hidrofobik yang melekat dari MCL-PHA yang sangat berubah dengan pengenalan gugus
hidrofilik ke dalam rantai samping. MCL-Odha yang mengandung gugus reaktif, seperti klorin, epoxy, dan
kelompok-kelompok tak jenuh, telah menarik banyak perhatian karena mereka dapat lebih dimodifikasi secara kimia
untuk menghasilkan biomaterial baru dengan sifat yang lebih baik (Hazar dan Steinbchel, 2007). The jenuh MCLPHA juga berguna sebagai pusat silang dalam reaksi radikal fotokimia dan termal (Kim etal.,2001). Beberapa studi
telah menunjukkan bahwa polimer terepoksidasi, yang secara kimiawi lebih reaktif daripada Odha tak jenuh

mungkin sangat berguna dalam reaksi silang lebih lanjut untuk meningkatkan mekanik (elastomer) sifat-sifat mereka
(Taman et al, 1998;.Ashby et al, 2000).MCL.

Aromatic -PHAs
Sebuah laporan baru-baru ini menunjukkan bahwa sejumlah Pseudomonas spesiesdapat menumpuk MCLPHAs
bantalan kelompok fenil dari berbagai hidrokarbon aromatik (Tobin etal.,2005). Saat ini, poliester sintetis dengan
kelompok aromatik di backbone seperti poli (etilena tereftalat) dan poli (butilena tereftalat) diproduksi secara kimia
dan digunakan secara luas dalam industri plastik. Beberapa Odha yang mengandung substituen aromatik telah
disentesis oleh P. oleovorans dan P. putida (Kim dan Lenz, 2001). Dari mikroba yang dihasilkan poliester aromatik,
poli (3-hidroksi-5- phenylvalerate) dengan kelompok-kelompok fenil dalam rantai samping telah dipelajari paling
intensif (Fritzche et al, Abraham 1990b;..et al, 2001). Odha Sepenuhnya aromatik yang terdiri dari 3-hidroksi-phenylalkanoates disintesis dari asam -phenylalkanoic dari C5-C8 non-kristal (Abraham et al., 2001). P.
oleovorans dan P. putida biasanya menghasilkan campuran fisik polimer dengan komposisi yang berbeda secara
signifikan ketika tumbuh di berbagai campuran molar asam 5-phenylvaleric dan asam nonanoat. Pembentukan
campuran polimer dari MCL-PHA bantalan nitrophenyl (Arostegui et al., 1999) atau p-methylphenyl (Curley et al.,
1996) kelompok juga telah diamati di P.oleovorans.Ketika dibudidayakan pada campuran 11- asam
phenoxyundecanoic dan asam oktanoat, P. putida telah dilaporkan secara bersamaan mengkonsumsi dua substrat
karbon, tergantung pada waktu budidaya, dan menghasilkan kopoliester acak yang terdiri dari 3-hydroxyalkanoates
dan 3-hidroksi--phenoxyalkanoates (Lagu dan Yoon, 1996). Studi lain menunjukkan bahwa P. oleovorans bisa
mensintesis aromatik MCL-PHA dengan substituen fenoksi menggunakan berbagai asam -phenoxyalkanoic
sebagai sumber karbon tunggal yang benar-benar amorf, seperti poli (3-hidroksi-5-phenylvalerate) (Fritzche et al.,
1990b). Pengenalan kelompok thiophenoxy ke PHA baru-baru ini dilaporkan (Takagi et al., 1999). The biopolyester
dengan kelompok sisi thiophenoxy adalah polimer amorf elastis dan merupakan contoh pertama dari sulfur yang
mengandung MCL- PHA. Aromatic MCLPHAs bantalan p-methylphenoxy dan msubstituen methylphenoxydisusun
dari 8-pasam methylphenoxyoctanoicdan 8-masam -methylphenoxyoctanoic, masing-masing. MCL-PHA yang
berisi pkelompok-methylphenoxy merupakan polimer yang sangat kristal sedangkan PHA mengandung mgugus methylphenoxyhampir amorf. Sementara itu, psiano dan pkelompok -nitrophenoxyjuga telah dimasukkan ke MCLPHA, meskipun tingkat penggabungan kelompok fungsional menjadi PHA secara signifikan lebih rendah
dibandingkan dengan kelompok aromatik lainnya (Kim et al., 1995a). Untuk mencapai sifat fisik yang tidak biasa,
kelompok tak jenuh dalam rantai samping dari MCL-PHA dapat dikonversi ke dalam kelompok fungsional lainnya,
seperti epoxy (Beruang etal, Taman 1997;..etal,1998), karboksil (Beruang etal,.2001), hidroksil (Lee .etal, Erolu
2000a;.etal,2005), atau kelompok klorin (Arkin et al, 2000)..Poli (3-hydroxyoctanoate-co-3-hydroxyundecenoate)
yang mengandung 25% dari unit berulang liontin gugus asam karboksilat (beruang etal.,2001) dan 40-60%
kelompok terhidroksilasi (Lee etal.,2000a) secara sempurna larut dalam pelarut polar, seperti metanol,
dimetilsulfoksida atau campuran aseton / air, menunjukkanbahwa hidrofilisitas ini dimodifikasi Odha yang jauh

KopolimerdisempurnakanSCL-PHA dan MCL-PHA

Dibandingkan dengan sering terjadinya SCL- atau MCL-PHA di alam, prevalensi SCL-MCL hybrid PHA
Kopoliester mikroorganisme relatif jarang. Kemampuan untuk biosynthesize ini Odha hybrid dianggap terkait erat
dengan spesifisitas substrat yang luar biasa luas PHA Sintase pada organisme ini (Steinbchel dan Ltke-Eversloh,
2003). Kopoliester Hybrid PHA diharapkan memiliki berbagai sifat mekanik mulai dari kristal sulit untuk elastis,
tergantung pada persentase mol konstituen mereka (Chen etal.,2006). Kehadiran kopolimer ini adalah cara lain
untuk meningkatkan sifat fisik P (3HB), penggabungan unit HA yang berbeda ke dalam P (3HB) urut untuk
membentuk kopolimer PHA efektif. Berbagai bakteri seperti Aeromonas dan Pseudomonas mampu mensintesis
kopolimer acak 3HB dengan unit HA lainnya C3 ke C12, tergantung pada kedua jalur biosintesis PHA intrinsik
mereka dan sumber karbon yang digunakan (Doi et al, Kang 1995;..et al, 2001). Sebuah kopolimer 3HB dan 3hidroksivalerat (3HV), P (3HB-co-3HV), telah diteliti paling luas di antara kopolimer PHA dan diterapkan untuk
produk komersial. Dengan memperkenalkan 20 mol% 3HV unit, suhu temperatur leleh dan kaca-transisi P (3HB-co3HV) kopolimer penurunan sampai 145 C dan C-l, masing-masing. Sebaliknya, ekstensi untuk memecahkan
meningkat menjadi 50%, menunjukkan bahwa P (3HB-co-3HV) kopolimer lebih fleksibel daripada P (3HB)
homopolimer. Juga, penggabungan 4- hidroksibutirat (4HB) unit ke P (3HB) urut lebih efektif dalam meningkatkan
sifat material PHA. Dalam kasus kopolimer 3HB berbasis mengandung 3-hidroksiheksanoat (3HHx) atau 3HA (C8C12), sejumlah kecil unit monomer kedua sudah cukup untuk meningkatkan fleksibilitas mereka. Adalah menarik
untuk dicatat bahwa P (3HB-co-6 mol% 3HA) kopolimer menunjukkan sifat mekanik yang mirip dengan lowdensity polyethylene (LDPE) (Matsusaki, 2000). Dengan demikian, P ini (3HB-co 3HA) kopolimer diharapkan

memiliki berbagai aplikasi komersial.

Aplikasi
Penerapan polimer biodegradable sintetis mulai pada paruh kemudian tahun 1960-an. Dua dekade terakhir abad
kedua puluh melihat pergeseran dari biomaterial biostable ke biodegradable (hydrolytically dan enzimatik
degradable) biomaterial untuk aplikasi medis dan yang terkait. Odha yang biodegradable memiliki sebagian besar
aplikasi sebagai pengganti polimer petrokimia. The berbagai sifat fisik Odha dan kinerja diperpanjang diperoleh
dengan modifikasi kimia (Zinn dan Hany, 2005) atau campuran (Zhang etal, 1997;.Avella etal, 2000;.Lee dan Park,
2002; Wang et al.,2005; Gao etal, Kunze 2006;..etal,2006) memberikan berbagai aplikasi pengguna akhir potensial.
Aplikasi sebelumnya PHA kebanyakan dalam kemasan tapi sekarang pentingnya dalam industri medis telah menjadi
signifikan.

Industri
Odhamemiliki aplikasi sebagai plastik komoditas konvensional di bidang kemasan seperti wadah kosmetik dan film
(Bucci dan Tavares, 2005), botol sampo (Weiner 1997), pena dan tee golf (Baptis, 1963, Webb, 1990), artikel
kebersihan pribadi seperti popok, popok backsheet (Martini etal, 1989;.Noda 2001). Mereka juga telah digunakan
sebagai penutup untuk kardus dan kertas (Marchessault etal.,1995), karton susu dan film, hambatan kelembaban
dalam popok dan pembalut (Lauzier etal.,1993) pena, sisir, peluru (Chen dan Wu, 2005a) dan produksi bahan kimia
massal menggunakan didepolimerisasi PHA (Lee, 1999; Lee et al, 2000a). Mereka juga dapat digunakan untuk
memproduksi pengganti krim susu (Yalpani, 1993a) atau agen pengiriman rasa dalam makanan (Yalpani, 1993b).
Odha juga telah diolah menjadi serat yang kemudian digunakan untuk membangun bahan-bahan seperti kain
nonwoven (Steel dan Norton-Berry, 1986).
Komposit bioplastik juga digunakan dalam produk elektronik, seperti ponsel (NEC Corporation dan Unitika Ltd
2006) . Sebagian besar produk di atas terbuat dari P (3HB) dan P (3HB-3HV) polimer. Ini telah digambarkan
sebagai perekat panas meleleh (Kauffman etal.,1992). P (3HB) dan P (3HB-3HV) film juga dapat digunakan untuk
membuat laminasi dengan polimer lain seperti polivinil alkohol (Holmes, 1986). Bahan popok lembaran dan bahan
lainnya untuk pembuatan biodegradable atau kompos pribadi artikel kebersihan dari P (3HB) kopolimer selain P
(3HB- 3HV) juga telah dijelaskan dalam literatur (Shiotani dan Kobayashi, 1994; Noda, 1996)panjang.
PHA dengan lebih hidroksi rantai samping telah digunakan dalam formulasi perekat sensitif tekanan (Rutherford
etal.,1997). Ini dapat digunakan untuk menggantikan polimer petrokimia di toner dan pengembang komposisi
(Fuller etal.,1991) atau sebagai polimer ion-melakukan (Reusch dan Reusch, 1993, 1996). Selain jangkauan sifat
material dan aplikasi yang dihasilkan, PHA berjanji untuk menjadi sumber baru molekul kecil. Mereka dapat
dihidrolisis secara kimia, dan monomer dapat dikonversi menjadi molekul yang menarik secara komersial seperti
adalah asam -hidroksi, 2- asam alkenoic, -hydroxyalkanols , -acyllactones , -amino asam, dan - ester
hydroxyacid (Williams dan Masyarakat, 1996). Kelas terakhir dari bahan kimia saat ini mendapat perhatian karena
aplikasi potensial sebagai pelarut biodegradable.
Odha dianggap sebagai sumber untuk sintesis senyawa kiral (bahan kimia enantiometrically murni) dan bahan baku
untuk produksi cat. Selain membantu untuk menggantikan pelarut yang ada, ester asam -hydroxy dan turunannya
cenderung untuk menemukan tumbuh digunakan sebagai 'pelarut hijau' mirip dengan ester asam laktat. Konversi
asam hidroksi menjadi asam krotonat seperti 1, 3-butanadiol, lakton, dll akan membantu meningkatkan nilai pasar
karena mereka memiliki permintaan pasar yang ada dalam ribuan ton.

Kedokteran dan Farmakologi

Dalam dua dekade terakhir, Odha telah ditemukan memiliki berbagai aplikasi medis. Lambat evolusi dalam
pengembangan bioplastik di bidang medis dapat dikaitkan dengan beberapa tantangan yang unik dalam
mengembangkan bahan klinis resorbable dibandingkan dengan mengembangkan polimer komoditas. Namun, sifat
biokompatibilitas dan biodegradasi memainkan peran utama dalam penerapannya di industri medis (Zinn
etal.,2001). Sebuah plastik biodegradable dapat dimasukkan ke dalam tubuh manusia dan tidak perlu dihapus lagi
dan senyawa biokompatibel adalah kekebalannya inert. Odha yang biokompatibel karena mereka adalah produk dari
metabolisme sel dan asam butirat juga 3-hidroksi (produk degradasi) adalah konstituen darah normal (Wiggam etal,
1997;.Reusch, 2000; Zinn et al 2001,.).Dalam bentuk murni atau sebagai komposit, Odha yang digunakan dalam

aplikasi medis yang berbeda:

(1) jahitan, pengganti kulit, berpakaian, debu bubuk dalam manajemen luka,
(2) katup jantung, cangkok vaskular pada perangkat sistem vaskular,
(3) Perancah untuk rekayasa tulang rawan, sekrup dan pengganti cangkok tulang pada pembedahan tulang dan
regenerasi jaringan arteri,
(4) Mikro dan nanospheres untuk pengiriman obat dikontrol,
(5) Urologi dan stent kardiovaskular (Zinn etal, 2001;.Chen dan Wu,
2005),
(6) membran Plain untuk regenerasi jaringan dipandu,
(7) jerat Multifilament atau struktur berpori untuk teknik jaringan (Vert,
2005), prodrugs dan keberhasilan mereka dalam saraf dan perbaikan jaringan lunak,
(8) Gigi dan pengobatan maksilofasial (membimbing jaringan dan tulang regenerasi),
(9) Tablet, implan, mikro-operator dalam pemberian obat (Taman et al Chen
2005;..dan Wu 2005a)
Aplikasi ini telah ditinjau secara luas oleh (Zinn et (Philip.al,2001) dan baru-baru oleh etal.,2007). PHA dapat

dengan mudah didepolimerisasi ke sumber yang kaya optik aktif, murni, asam hidroksi bifunctional. PHB
misalnya yang mudah dihidrolisis menjadi R-3 asam hidroksibutirat ((R) -3-HB) dan digunakan dalam
sintesis obat anti-glaukoma Merck 'Truspot'. Bersamaan dengan (R) -1, 3 butanadiol, juga digunakan
dalam sintesis -laktam.(R)-3-HB berfungsi sebagai blok bangunan kiral untuk sintesis bahan kimia
seperti antibiotik, vitamin, aromatik, dan feromon (Chiba dan Nakai, 1985; Steinbuchel dan Valentin,
Seebach 1995;.etal,2001). Hal ini juga telah dikenal untuk menunjukkan beberapa antimikroba,
insektisida, dan kegiatan antivirus (Peypoux etal, 1999;.Chen dan Wu, 2005). Penelitian telah
menunjukkan bahwa(R)-3-HB menganugerahkan perlindungan parsial dan stabilitas neuron selama
kurang glukosa (Holmes, 1985; Massieu etal, 2003.).Ada juga beberapa bukti bahwa mereka bisa
berfungsi sebagai substrat energi dalam meningkatkan efisiensi jantung dan dengan demikian, mencegah
kerusakan otak (Kashiwaya etal.,2000).
Kedua PHB dan P (HB-HV) telah ditemukan untuk menjadi larut dalam berbagai pelarut dan dapat diolah
menjadi berbagai bentuk dan struktur, seperti film, lembaran, bola dan serat. Selain potensi sebagai bahan
plastik, PHA juga berguna sebagai senyawa biasa stereo yang dapat melayani prekursor sebagai kiral
untuk sintesis kimia senyawa optik aktif (Oeding dan Schlegel, 1973; Senior dan Dawes, 1973).
Senyawa-senyawa tersebut terutama digunakan sebagai pembawa biodegradable untuk dosis jangka
panjang obat-obatan, obat-obatan dan hormon. Karena sifat piezoelektrik, mereka juga digunakan sebagai
osteo bahan sintetis dalam stimulasi pertumbuhan tulang pada tulang pelat, jahitan bedah dan penggantian
pembuluh darah. Hal ini juga telah diteliti sebagai bahan untuk mengembangkan pin tulang dan piring
(Pouton dan Akhtar, 1996). Namun, aplikasi medis dan farmasi yang terbatas karena biodegradasi lambat
dan stabilitas hidrolik yang tinggi pada jaringan steril (Wang dan Bakken, 1998).
Kecenderungan saat ini memprediksi bahwa dalam beberapa tahun mendatang, banyak perangkat
prostetik permanen yang digunakan untuk sementara terapi, teknik jaringan dan aplikasi farmakologis
akan digantikan oleh perangkat biodegradable yang dapat membantu tubuh untuk memperbaiki dan
regenerasi jaringan yang rusak.

Pertanian
Odhamemiliki aplikasi pertanian potensial termasuk enkapsulasi benih, enkapsulasi pupuk untuk slow
release, film plastik biodegradable untuk perlindungan tanaman dan wadah biodegradable fasilitas rumah
kaca dan sebagai pembawa biodegradable untuk dosis jangka panjang insektisida dan herbisida (Oeding
dan Schlegel, 1973; Senior dan Dawes, Philip 1973;.etal,2007)untuk.

Gen untuk PHAbiosintesis

Mikroorganismemengubah karbohidrat dan asam lemak Odha melalui tiga jalur metabolisme yang
berbeda, yang melibatkan sebagai perantara baik asetil-CoA atau asil-CoA, dan diakhiri dengan monomer
polimerisasi dengan PHA Sintase (Philip et al. 2007). Gen dan enzim yang terlibat dalam sintesis PHA
telah berevolusi ciri khas kelompok mikroba yang berbeda. Kemampuan mikroorganisme untuk
mensintesis suatu bentuk tertentu dari PHA terutama karena kekhususan substrat PHA Sintase (PHAC).
Dari semua Odha, P (3HB) adalah polimer yang paling ekstensif ditandai, terutama karena itu adalah
pertama yang ditemukan . P (3HB) jalur biosintesis terdiri dari tiga reaksi enzimatik dikatalisasi oleh tiga
enzim yang berbeda (Gambar 2.3, Pathway I). Reaksi pertama terdiri dari kondensasi dua asetil koenzim
A (asetil-CoA) molekul menjadi asetoasetil-CoA oleh 3-ketoacyl- CoA thiolase (PhaA). Reaksi kedua
adalah pengurangan asetoasetil-CoA ke(R)-3-hydroxybutyryl-CoA oleh asetoasetil-CoA reductase
(phaB). Terakhir,(R)-3-hydroxybutyryl-CoA monomer polimerisasi menjadi poli (3-hidroksibutirat) oleh
PHB sintase (PHAC). Hanya (R) Isomer diterima sebagai substrat untuk enzim polimerisasi Tsuge (.et
al -.2003)
Selama pertumbuhan bakteri normal, CoA 3-ketoacyl- thiolase akan dihambat oleh koenzim-A bebas
keluar dari siklus asam sitrat. Tapi ketika masuknya asetil-CoA ke dalam siklus Krebs dibatasi (selama
pembatasan non gizi karbon), surplus asetil-CoA disalurkan ke PHA biosintesis.
Enzim kunci dari proses polimerisasi adalah polymerase MCL-PHA yang menghubungkan unit monomer
oleh transesterifikasi (Huisman etal, 1991;.Timm dan Steinbuchel, Kraak 1992;.etal,1997). Strain
Pseudomonas mengandung dua polimerase PHA dengan spesifisitas substrat yang sedikit berbeda
(Huisman etal.,1992). MCLPHA biosintesis pada bakteri berhubungan erat dengan tiga rute yang berbeda
metabolisme yang menghasilkan MCL-PHA molekul prekursor (Gambar 2.3, Pathway I, II dan III): (i) de
novo asam lemak jalur biosintesis, yang menghasilkan(R)-3-hydroxyacyl -CoA prekursor dari sumbersumber non-terkait karbon seperti glukosa dan glukonat; (Ii) asam lemak degradasi dengan ,-oxidation
yang merupakan rute metabolisme utama asam lemak; (Iii) panjang rantai, di mana asil-CoA
diperpanjang dengan asetil-CoA (Witholt dan Kessler, 1999).(R)-specific enoil-CoA hidratase (PhaJ),
fungsi enzim sebagai pemasok(R)-3-hydroxyacyl-CoA monomer untuk produksi PHA pada bakteri ketika
asam lemak atau minyak nabati yang digunakan sebagai sumber karbon (Fukui et al.Fiedler 1999;.etal,
Tsuge 2002;.etal,2003), maka memainkan peran penting dalam memasok unit monomer dari -oksidasi
sintesis PHA.(R)-3- hydroxyacyl-ACP-CoA transferase (Phag), yang telah diidentifikasi di P. putida dan
P.aeruginosa,juga memainkan peran penting dalam hubungan metabolisme de novo biosintesis asam
lemak dengan MCL-PHA biosintesis (Hoffmann etal.,2004). Phag mengkatalisis konversi(R)-3hydroxyacyl-ACP ke(R)-3-hydroxyacyl-CoA dan berkontribusi terhadap biosintesis MCL-PHA dari
glukonat atau senyawa karbon lainnya non-terkait. Pada tahap akhir dari MCL-PHA biosintesis, Sintase
MCL-PHA (PHAC) mengkatalisis konversi(R)CoA molekul -3-hydroxyacyl- ke MCL-PHA. Sampai saat
ini, dua gen sintase MCL-PHA, phaC1 dan phaC2, telah diidentifikasi dan ditandai di Pseudomonas spp.
Upaya telah dilakukan untuk menganalisis perbedaan fungsional antara PhaC1 dan PhaC2 di
Pseudomonas spp. Ini telah dibuktikan baru-baru ini bahwa PhaC1 dan PhaC2 dari yang sama
Pseudomonas strainmemiliki perbedaan yang jelas dalam substrat spesifisitas (Hein etal, Chen
2002;..etal,2004, 2006). Di P.stutzeri,PhaC2 memiliki substrat spesifisitas yang lebih luas, mulai dari 3hidroksibutirat ke MCL 3- hydroxyalkanoates, sementara PhaC1 hanya bisa polimerisasi MCL 3hydroxyalkanoates produk PHA (Chen etal.,2004, 2006).

Lingkungan, Filogeni dan Keragaman PHA

memproduksi mikroorganisme

PHA disintesis oleh beberapa spesies bakteri dan diakumulasi sebagai energi dan / atau karbon
penyimpanan bahan, biasanya ketika faktor gizi seperti nitrogen, fosfor, kalium, oksigen, sulfur atau
magnesium terbatas dengan adanya sumber karbon berlebih ( Dawes dan Senior, 1973; Lee, Ojumu
1996;.etal,2004). Namun, beberapa bakteri yang mampu mengakumulasi PHA dalam kondisi nonmembatasi juga (Cho etal, Ojumu 1997;..etal,2004). Lebih dari 300 spesies bakteri membawa
kemampuan metabolisme untuk biosynthesise Odha dan mengumpulkan mereka dalam sitoplasma
sebagai karbon dan sumber energi dalam bentuk butiran (Steinbu chel dan Schlegel, 1991; Reddy etal,
Suriyamongkol 2003;..etal,2007 ).

Bakteri pertama yang PHB diisolasi adalah Bacillus megaterium sejak tahun 1926. Setelah sekitar 3
dekade perkembangan penting dalam pengetahuan tentang terjadinya luas polimer dalam mikroorganisme selain Bacillus,termasuk genera bakteri Pseudomonas (Doudoroff dan Stanier, Delafield
1959;...etal,1965), Azotobacter (Stockdale etal,1968), Hydrogenomonas (Schlegel etal,1961),
Chromatium (Schlegel, 1962), biru-hijau alga Chlorogloea fritschii (Jensen dan Sicko, 1971 ), dan
banyak lainnya (Ulasan di Dawes dan Senior, 1973) terlihat. PHA memproduksi strain bakteri telah
diisolasi dari lingkungan yang beragam seperti lumpur aktif, tanah yang terkontaminasi minyak,
lingkungan hypersaline, rizosfir yang dibahas secara rinci di bawah ini. Para komunitas mikroba dalam
sistem tersebut mengalami kesempatan dari kondisi pertumbuhan yang tidak seimbang secara berkala.
Metabolisme PHA akan demikian diharapkan akan penting bagi fisiologi komunitas mikroba dalam
sistem ini.
Dalam beberapa tahun terakhir isolasi bakteri penghasil PHA telah menjadi berfokus pada penggunaan
sumber karbon ekonomis. Oleh karena itu bagian ini menjelaskan isolasi strain bakteri yang dapat
menggunakan sumber karbon ekonomis. Bagian ini juga menyebutkan bakteri yang belum dijelaskan
untuk produksi PHA sebelumnya.

Activated sludge
Itu pada tahun 1974 bahwa PHA yang mengandung 3HB dan 3HV ditemukan dalam lumpur aktif
(Wallen dan Rohwedder, 1974). Sejak itu produsen PHA dalam air limbah dan lumpur aktif telah
dipelajari. Saat ini, diketahui bahwa PHA memainkan peran yang sangat penting dalam proses lumpur
aktif dan terutama dalam proses lumpur aktif anaerobik-aerobik. Produsen PHA telah diisolasi dari
beberapa tempat pengobatan aliran limbah fasilitas ini sering memberikan campuran substrat yang
memilih untuk berbagai organisme. Selain itu, aliran limbah sering mengandung konsentrasi tinggi
molekul organik seperti asam lemak, yang merupakan substrat murah untuk pembentukan PHA. Beberapa
peneliti telah mempelajari produksi PHA oleh isolat alam dari genera seperti Sphaerotilus,
Agrobacterium, Rhodobacter, Actinobacillus,dan Azotobacter untuk mengubah sampah organik menjadi
PHA Itu pada tahun 1974 bahwa PHA yang mengandung 3HB dan 3HV ditemukan dalam lumpur aktif
(Wallen dan Rohwedder 1974 ). Sejak itu produsen PHA dalam air limbah dan lumpur aktif telah
dipelajari. Saat ini, diketahui bahwa PHA memainkan peran yang sangat penting dalam proses lumpur
aktif dan terutama dalam proses lumpur aktif anaerobik-aerobik. Produsen PHA telah diisolasi dari
beberapa tempat pengobatan aliran limbah fasilitas ini sering memberikan campuran substrat yang
memilih untuk berbagai organisme. Selain itu, aliran limbah sering mengandung konsentrasi tinggi.
Sphaerotilus natans merupakan penghuni khas lumpur aktif. Wild type isolat bakteri ini menghasilkan P
(3HB) hingga 30% dari berat kering sel, tetapi mutan kelebihan PHB hingga 50% (Takeda etal.,1995).
Dalam kondisi yang optimal,
PHA bahkan akumulasi sampai 67% dari berat kering sel (Takeda etal.,1995).

Agrobacterium sp. strain SH-1 dan GW-014 diisolasi dari lumpur aktif dan menunjukkan akumulasi PHA
hingga 75% dari berat sel kering dengan 50% 3HVmonomer (Lee etal.,1995).
Azotobacter vinelandii diakui awal karena kemampuannya untuk memproduksi P (3HB) (Byrom, 1987).
A. vinelandii UWD digambarkan sebagai strain yang menghasilkan P (3HB) selama pertumbuhan,
mungkin sebagai akibat dari pernapasan NADH oksidase cacat (Page dan Knosp, 1989). Strain ini
terakumulasi P (3HB) hingga 75% dari berat kering sel (Mart'nez etal.,1997).
Actinobacillus sp. Diisolasi dari sampel tanah di dekat pabrik penyulingan alkohol. Ketika Actinobacillus
sp. EL-9 dibudidayakan pada alkohol penyulingan air limbah, sel akumulasi P (3HB) hingga 42% dari
berat sel kering (Son etal.,1996). Baru-baru ini sebuah Microlunatus phosphovorus regangan, yang
diisolasi dari lumpur aktif, ditemukan menumpuk sekitar 30% PHA ketika tumbuh pada glukosa. Menurut
studi fluks metabolik, itu berspekulasi menjadi pemanfaat pentosa efisien juga, yang akan sangat
meningkatkan nilai komersial (Akar etal.,2006).

Tanah
Tanahadalah lingkungan yang heterogen, terputus-putus, dan terstruktur dengan keragaman yang tinggi
habitat mikro di mana kondisi dapat berubah dengan cepat (Postma et al. 1989). Berbagai strategi
bertahan hidup sel-sel bakteri dalam tanah menghadapi tekanan yang berbeda, seperti ketersediaan hara
rendah dan untuk mengatasi perubahan ini (lingkungan sering oligotrophic), bakteri tanah telah
mengembangkan (Van Elsas dan van Overbeek 1992). Akumulasi PHA telah diusulkan sebagai strategi
dimana bakteri dapat meningkatkan pembentukan, proliferasi, dan kelangsungan hidup dalam pengaturan
kompetitif seperti tanah dan rizosfir (Okon dan Itzigsohn 1992). Selanjutnya C: N rasio di rhizoshpere
adalah sekitar 20, yang cocok untuk akumulasi PHA yang tinggi. Ketersediaan nitrogen dapat menjadi
faktor pembatas untuk pertumbuhan bakteri, terutama di beberapa situs nitrogen miskin. Kondisi ini
pertumbuhan suboptimal kondusif untuk produksi PHA (Madison dan Huisman 1999).
Data pendukung untuk produksi PHA dalam lingkungan dr diberikan oleh Wang dan Bakken (1998) yang
disaring 63 bakteri sampel tanah untuk produksi PHA dan menilai akumulasi PHA adalah bantuan dalam
kelangsungan hidup kelaparan bakteri tanah. Mereka menemukan bahwa bakteri tanah dalam
pseudomonad, coryneform dan basil menghasilkan PHA. Selain itu, Azospirillum dan Azotobacter, serta
bakteri rizosfir lain di mana terbukti menghasilkan PHA dalam budaya di bawah C: N rasio 20 (Itzigsohn
et al 1995.).Dalam kondisi yang tepat, brasilense Azotobacter sel-seldapat menumpuk di atas 75% dari
berat kering mereka secara eksklusif sebagai (PHB) (Tal dan Okon 1985; Tal et al Itzigsohn 1990a;..et al
1995).
Actinobacillus sp. Strain EL-9 telah diisolasi dari tanah dan terakumulasi PHA selama fase pertumbuhan
logaritmik. Strain ini dipelajari untuk konversi dari komponen gula berkurang beralkohol penyulingan air
limbah ke PHA. Studi banding sumber karbon yang berbeda menunjukkan bahwa enzim-terhidrolisis
beralkohol penyulingan air limbah memberikan konversi tertinggi komponen untuk biomassa (4,8 g /
liter), 47% dari yang P (3HB) (Putra etal.,1996).
Dalam upaya untuk mengisolasi calon potensial untuk produksi PHA dari molase tebu, Bonatto et al.
(2004) melakukan program bioprospecting dalam sampel tanah hutan hujan subtropis dan terisolasi strain
Ralstonia pickettii 61A6. Dalam termos goyang strain menghasilkan 0,36 g / l, sekitar kandungan polimer
50%.
Dalam studi lain Jiang et al. mengisolasi(2008) Pseudomonas fluorescens ketegangan dari tanah di
Alaska, yang bisa menggunakan tebu minuman keras sebagai sumber karbon dan mengumpulkan PHA.
Dalam bioreaktor 5 liter, penulis memperoleh 22 g / l P (3HB), pada konten polimer 70%.

Silva et al. (2004) disaring 55 strain bakteri yang diisolasi dari tanah karena kemampuan mereka untuk
menghasilkan PHA dari xylose dan ampas tebu hidrolisat. Burkholderiasacchari dan
cepaciaBurkholderia dicapai P (3HB) isi 62% dan 53%, masing-masing, keduanya mencapai berat kering
sel 4,4 g / l, ketika dibudidayakan di ampas tebu hidrolisat. Dalam bioreaktor federasi konsentrasi
biomassa maksimum meningkat menjadi sekitar 60 g / l.
Baru-baru ini Srivastava et al. (2010) bioprospected untuk PHA memproduksi strain bakteri dari tanah
dan menemukan empat belas isolat dapat mensintesis PHA dari jarak pagar biodiesel minyak bioproduk.
Salah satunya galur bakteri mampu mengakumulasi PHA hingga 71,8% (b / b). Strain ini diidentifikasi
sebagai Bacillussonorensis.
Beberapa spesies Haloarchae mampu mensintesis PHA, seperti Haloterrigena hispanica(Romano et al.
2007),Haloquadratum walsbyi (Luka bakar et al. 2007), Halopiger aswanensis (Hezayen et al.
2010),Halobiforma haloterrestris(Hezayen et al. 2002) dan Haloferax mediterranei dikenal untuk
menghasilkan PHB. Ini tumbuh optimal dengan 25% (b / v) garam dan gula atau pati atau bekatul
diekstrusi sebagai sumber karbon tunggal di media dan terakumulasi 60-65% (b / b) PHB intraseluler.
Namun peningkatan konsentrasi garam, yang merupakan persyaratan untuk archae halo, dalam kasus
produksi PHB, secara signifikan meningkatkan biaya produksi (Rodriguez-Valera dan Lillo 1992), dan
selanjutnya dapat mempercepat korosi yang umum digunakan fermentor stainless steel. Ini strain bakteri
yang diisolasi dari tanah hypersaline, crystallizers pabrik garam. Halobacteria telah diisolasi dari
sejumlah habitat asin seperti pabrik garam surya, lingkungan garam pesisir, tanah di sekitar hypersaline
Danau, kolam renang dan kolam renang mineral garam (Quillaguamn, 2010).
Minyak-tercemar lingkungan yang lingkungan stres dan aliran nutrisi yang cukup seimbang, yang
membuat mereka kondusif untuk kehadiran PHA memproduksi strain. Dalam sebuah studi baru-baru ini
kami telah disaring tanah terkontaminasi minyak untuk memproduksi PHA strain bakteri. Kami
menemukan tiga strain bakteri yang belum diketahui untuk produksi PHA. Ini strain bakteri yang
Brochothrixthermosphacta, Sphinghobacteriumspp.dan Yokonella regensburgei (Dalal etal.,2010). Strain
ini adalah isolat normal tanah terkontaminasi minyak tetapi jumlah PHA akumulasi tidak lebih dari 20%.
Dalam penelitian terbaru yang Sphingobacteriumsp.ATM regangan efektif decolorized (100%) pewarna
langsung Biru GLL (DBGLL) dan sekaligus menghasilkan (64%) asam polyhydroxyhexadecanoic
(PHD)(Tambolia etal,
Dalam studi sebelumnya (Dia et al2010.);.. 1998Tian et al . 2000; Tunggu et al Haba 2002;...et al 2007)
sejumlah spesies Pseudomonas telah diisolasi dari tanah yang terkontaminasi minyak, yang menghasilkan
lebih dari 50% (b / b) produksi PHA Comamonastestosteron,isolat alami diperoleh selama studi degradasi
hidrokarbon poliaromatik dan dilaporkan untuk mengumpulkan PHA hingga 87% pada minyak nabati
(Thakor etal.,2005). Dalam sebuah penelitian baru-baru ini sejumlah PHA sintesis strain diisolasi dari
amunisi tercemar tanah. Sebuah Bacillus cereus YB-4 galur mampu mengakumulasi 35% PHA pada
glukosa (Mizuno etal.,2010).

Air
PHA memproduksi strain bakteri telah diisolasi dari sejumlah sistem perairan yang sebagian besar adalah
laut. Pada tahun 2006, Sabirova et al. Mengisolasi mutan PHA-hiper memproduksi bakteri laut
merendahkan minyak Alcanivorax borkumensis SK2, deposito yang PHA dalam lingkungan ekstraselular
oleh mekanisme yang tidak diketahui (Sabirova et al. 2006). Ini merupakan satu-satunya laporan dari
suatu organisme untuk menghasilkan asam hydroxyalkanoic ekstrasel. Baru-baru ini, sembilan strain
bakteri dari lingkungan laut ditemukan menumpuk PHA dari jatropha biodiesel sampingan (Shrivastav
etal.,2010). Salah satunya jenis bakteri mampu mengakumulasi PHA hingga 75% (b / b). Galur bakteri ini

diidentifikasi sebagai Halomonas hydrothermalis. Dalam studi sebelumnya juga sejumlah Vibrio spp.
Diisolasi dari sedimen laut dan ditemukan untuk mengumpulkan 41% dari PHA (Chieng etal.,2007).
Sampai saat ini, beberapa laporan telah berfokus pada belajar akumulasi PHA oleh thermophile kecuali
satu cyanobacterium termofilik, Synechococcus sp. (Hai etal.,2001). Proses bioteknologi berjalan pada
suhu tinggi memiliki beberapa keuntungan. Misalnya, melakukan proses fermentasi PHB pada suhu
tinggi mengurangi risiko kontaminasi. Selain itu, thermophiles tumbuh lebih cepat dari mesophiles dan
perlu sedikit waktu untuk mencapai akumulasi PHA. Thermophile C. taiwanensis hanya membutuhkan
14 jam untuk mencapai tertinggi akumulasi PHB pada 55 C setelah tanam dari sumber karbon yang
sama. C.taiwanensis,sebuah thermophile diisolasi dari sumber air panas di Southern Taiwan, mampu
mengumpulkan 67% (b / b) P (HB-co-HV) butiran dalam sel-sel dari 1,5% pati singkong dan 0,05%
valerat (Sheu et al.2009). Baru-baru ini, bakteri Gram-negatif diisolasi dari sampel air limbah sedimen
dari Mesir. Bakteri ini diidentifikasi sebagai Zobellella denitrificans ketegangan MW1 dan bisa
menumpuk hingga 87% (b / b) PHA pada gliserol. Isolasi strain ini membuka jalan untuk memanfaatkan
limbah biodiesel untuk produksi PHA (Ibrahim dan Steinbuchel, 2009).

Sejumlah haloarchae,terisolasi dari sumber air telah ditemukan untuk mengumpulkan PHA seperti
utahensis Halorhabdus (Waino et al. 2000), Natrinema altunense (Xu et al. 2005), dan Halorhabdus
tiamatea (Antunes et al. 2008). Ini archae halofilik telah diisolasi dari habitat sangat asin seperti laut
dalam atau Great Salt Lake.

Halobacteria seperti Halomonas boliviensis LC1 diisolasi dari tepi danau hypersaline dan bisa
memanfaatkan pati hidrolisat untuk mensintesis 56% (b / b) dari PHB (Quillaguama'n etal.,2005).
Selanjutnya, halophile moderat diisolasi dari Lonar Danau dan menemukan untuk mensintesis hingga
81% PHA pada maltosa. Strain ini diidentifikasi sebagai Halomonas campisalis.

Keanekaragaman filogenetik dari PHA memproduksi bakteri

Keragaman filogenetik dari PHA memproduksi mikroorganisme mengejutkan. Mereka dapat ditemukan
di archaea dan bakteri Domain. Dalam archae,produsen PHA yang ditemukan di kedua filum yaitu
Crenarchaeota dan EuryarchaeotaEuryachaeota.; Dalam Produsen PHA diidentifikasi dalam kelas
Halobacteria.Dalam dekade terakhir, sejumlah besar Halobacteria telah ditemukan untuk menunjukkan
produksi PHA sampai setinggi 80% dari PHA (Quillaguamn etal.,2010). The archaeon Haloferax
mediterranei sejauh penghasil PHA terbaik dari keluarga Halobacteriaceae, memproduksi sekitar 85,7%
dari PHA menggunakan whey terhidrolisis sebagai sumber karbon (Koller et al. 2007).
Dalam Crenarcaeota,hanya satu bakteri digarap ditemukan mengandung gen synthase PHA (Quaiser
etal.,2002). Dalam Bakteri domain, antara Gram-poisitives, produsen PHA telah diidentifikasi dalam
filum Firmicutes dan Actinobacteria milik genus Corynebacterium, Nocardia, Rhodococcus dan Basil
Tahan (Haywood etal, Valappil 1991;..etal,2007; Mizuno et al.,2010).
Sebagian besar produsen PHA milik Filum Proteobacteria.Cabang-cabang yang berbeda dari
Proteobacteria mengandung PHA memproduksi mikroorganisme, sering memiliki kerabat dekat yang
non-produsen. Yang paling dipelajari MCL-PHA memproduksi bakteri milik genera Pseudomonas,milik
kelas Gammaproteobacteria dan paling banyak dipelajari SCL-PHA memproduksi bakteri Cupriviadus
necater termasuk kelas Betaproteobacteria. bakteri PHA memproduksiJuga hadir di
Alphaproteobacteria.Bakteri penghasil PHA yang hadir dalam jumlah yang hampir sama di tiga kelas
yang berbeda dari Proteobacteria,yaitu alpha, beta dan gamma (Kadouri etal.,2005).

Produsen PHA juga ditemukan di antara filum Cyanobacteria milik marga Chlorogloeopsis dan
Synechococcus (Hai et al.,2001).Cyanobacteria bagaimanapun, adalah pribumi satu-satunya prokariota
yang menumpuk PHB oleh fotosintesis oksigenik (Miyake etal.,1996), dan kepentingan tertentu karena
persyaratan minimal mereka untuk pertumbuhan dan produksi biomassa mereka (Mallick etal.,2007).
Beberapa cyanobacteria dapat menghasilkan dan mengumpulkan PHB ketika tumbuh mixotrophically
dengan asetat, nilai maksimum yang telah direkam untuk Synechocystis PCC 6803 (15%, w / w sel
kering) (Panda etal.,2005). Produksi PHB menggunakan CO2 sebagai sumber karbon dengan
cyanobacteria tersedia tetapi isi pada umumnya, sangat rendah, dengan pengecualian tunggal untuk
Synechococcus sp. MA19 di mana kandungan PHB yang lebih tinggi, 27% (b / b) sel kering, telah
dilaporkan (Miyake etal.,1996). Baru-baru ini cyanobacteria lain telah ditemukan untuk menghasilkan
PHA. Itu terisolasi dari pantai Veraval dari Gujarat dan diidentifikasi sebagai Spirulina subsalsa
(Shrivastav etal.,2010).

Metode visualisasi dan deteksi PHA

PHA dapat dideteksi dan konten mereka dalam sel ditentukan oleh sejumlah metode (Dawes dan Senior,
1973; Anderson dan Dawes, 1990). PHA ada sebagai diskrit lokal dalam sitoplasma sel dan dapat
divisualisasikan dengan mikroskop cahaya kontras fase (1000x) karena kebiasan tinggi. Sebuah
diferensiasi yang tepat dari polimer intraseluler ini biasanya diperoleh dengan pewarna lipofilik. Sudan
Hitam telah digunakan sebagai tes dugaan keberadaan PHB meskipun noda semua bahan penyimpanan
lipofilik (Burdon, 1946). Sebuah butiran hitam-biru di latar belakang merah muda yang jelas atau cahaya
menunjukkan adanya polimer penyimpanan ini. Sebuah visualisasi yang lebih spesifik dan sensitif butiran
PHA diperoleh dengan Nil Biru (Ostle dan Holt, 1982). Bentuk yang teroksidasi Nil Biru, yang dikenal
sebagai Nile Red, terbentuk secara spontan dalam larutan air dan bertanggung jawab atas fluoresensi
terang bernoda butiran PHA. Nil Red larut dalam lipid netral yang cair pada suhu pewarnaan (55 C) dan
oleh karena itu diserap dalam inklusi PHA. Fluoresensi butiran PHA bernoda terlihat dengan panjang
gelombang eksitasi kedua 460 nm dan 546 nm. Membran sel dan komponen sel yang mengandung lipid
lainnya ternyata tidak menyerap cukup pewarna untuk memberikan fluoresensi terdeteksi. Nil Biru tidak
noda baik glikogen atau butiran poli-P (Ostle dan Holt, 1982) tetapi tidak noda penyimpanan bahan
lipofilik selain PHA, seperti lilin dan lemak (Spiekermann etal.,1999). Tanggapan neon dari Nil Biru
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi PHA dan karena itu dapat digunakan untuk mengevaluasi
variasi dalam penyimpanan PHA. Ini adalah teknik deteksi yang paling umum invivo.Pengukuran PHB
dalam sel-sel hidup dari R. eutropha dengan sitometri dan spektrofluorometri setelah pewarnaan Nil-Red
butiran telah diteliti (Degelau etal, 1995;.Gorenflo etal, 1999.).Sel diwarnai dengan Nil Biru,
menunjukkan maksimum fluoresensi yang jelas antara 570 dan 605 nm saat senang antara 540 dan 560
nm. Sebuah korelasi yang baik antara intensitas fluoresensi dan konsentrasi PHB diperoleh (Gorenflo
etal.,1999). Para penulis mencatat bahwa kecepatan metode dapat berguna untuk pengendalian proses
selama kultivasi2003;..
Baru-baru ini, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) telah diterapkan untuk menentukan isi dari
PHA dalam suspensi sel (Randriamahefa etal, Jarute et al.,2004). Namun, semua metode ini kurang
spesifik untuk membedakan antara monomer yang berbeda dan karenanya mereka tidak dapat digunakan
untuk menentukan komposisi monomer dari kopolimer PHA.
Berbagai metode telah diterapkan untuk menentukan kandungan PHA dalam biomassa dan menganalisis
komposisi monomer dari PHA- kopolimer. Banyak metode untuk analisis isi sel, struktur dan komposisi
PHB dan Odha lain telah dilaporkan, termasuk kromatografi gas (GC) setelah ekstraksi pelarut dan
esterifikasi hidrolisis polimer (Braunegg etal, 1978;.Riis dan Mai, 1988) , pirolisis di bawah nitrogen
PHA diekstraksi diikuti dengan spektrometri GC-massa (Morikawa dan Marchessault, 1981), dan
berbagai 1H dan 13teknik C NMR (Doi etal.,1986).

Lemoigne (1926) disaponifikasi dengan PHB diekstrak dari sel dan menentukan jumlah PHB secara
gravimetri. Perkembangan lebih lanjut atas metode ini diperkenalkan oleh Hukum dan Slepecky (1969)
yang dikonversi PHB diekstrak menjadi asam krotonat, dengan asam sulfat pekat, dan spektrofotometri
diukur dengan spektroskopi UV kemudian pada 235 nm.
Metode derivatisasi pertama GC dikembangkan untuk PHB ( Braunegg etal, 1978;.Riis dan Mai, 1988).
Metode dengan Braunegg et al. (1978) melibatkan ekstraksi simultan dan metanolisis PHA, dalam
kondisi asam atau basa ringan, untuk membentuk methylesters hydroxyalkanoate yang kemudian
dianalisis dengan GC. Metode ini cepat (4 jam), sensitif, direproduksi dan membutuhkan sampel hanya
kecil. Ini fitur reaksi dan ekstraksi di sama tabung sekrup-capped. Metode GC lain untuk meningkatkan
pemulihan PHA diusulkan dengan melakukan propanolysis dalam asam klorida (Riis dan Mai, 1988) atau
ethanolysis dalam asam klorida (Findlay dan putih, 1983) daripada metanolisis asam dalam asam sulfat.
Dalam ester metil metode, etil ester dan ester propil asam hydroxyalkanoic yang sesuai dibentuk. Berbeda
dengan hidrolisis basa (Wallen dan Rohwedder, 1974), yang menyebabkan campuran asam 3hydroxyalkanoic metil ester dan 2-alkenoic ester asam metil, transesterifikasi asam mengakibatkan kasus
yang ideal hanya dalam satu metil ester per komponen. Selain itu, itu jauh lebih cepat karena ekstraksi
dan esterifikasi trans berlangsung dalam satu langkah. Comeau et al. (1988) menyarankan liofilisasi
sampel dan langkah ekstraksi ulang sebelum injeksi GC, untuk meminimalkan masalah metode Braunegg
(Braunegg etal.,1978). Modifikasi yang lebih umum dari metode Comeau berada dalam reaksi esterifikasi
(baik dengan metanol atau propanol), dalam reaksi hidrolisis (baik dengan H2SO4 atau HCl) dan jenis
pelarut yang digunakan dalam ekstraksi (kloroform, diklorometana atau 1 , 2-dikloroetana). Modifikasi
lebih lanjut telah diperkenalkan untuk metode esterifikasi asam trans PHA biomassa, seperti waktu reaksi
diperpanjang untuk analisis PHB (Huijberts etal, 1994;.Jan etal, 1995.)Dan peningkatan konsentrasi asam
sulfat untuk scl Oehmen- PHA (.etal,2005)dan MCL-PHA Lageveen (.etal,1988; Lee dan Choi, 1995).
Untuk MCL-PHA, asam sulfat dalam metanol digunakan (Lageveen etal, 1988;.

Huijbert etal, 1994;.Lee dan Choi, 1995). Namun, asam sulfat adalah penggunaan terbatas sebagai katalis
untuk reaksi transesterifikasi umum, karena dekomposisi lebih lanjut dari ester 3-hidroksi (Riis dan Mai,
Oehmen 1988;.etal,2005), misalnya, oleh asam dikatalisis eliminasi. Untuk memperbaiki transesterifikasi
MCL-PHA, Furrer et al. (2007) menggunakan boron trifluorida dalam metanol.
Metode lain untuk PHA kuantifikasi termasuk HPLC (Karr etal.,1983), kromatografi ion, dan penentuan
enzimatik (Hesselman et al.1999). Tindakan HPLC hanya PHB dan didasarkan pada konversi PHB
menjadi asam krotonat diikuti oleh deteksi UV pada 210 nm. Deteksi PHA dengan kromatografi ion
didasarkan pada konversi monomer asam alkanoat. Penentuan melibatkan propanolysis asam diikuti oleh
hidrolisis basa dengan kalsium hidroksida atau hidrolisis asam dengan asam sulfat pekat. Sampel tersebut
kemudian dijalankan pada HPLC memiliki detektor konduktivitas. Ion-exchange HPLC dengan deteksi
konduktivitas diterapkan untuk analisis dicerna poli (3-hydroxybutyrate-co-3-hidroksivalerat) (PHBV)
dalam lumpur aktif (Hesselmann etal.,1999). Sebuah metode estimasi enzimatik dikembangkan oleh
Roche Molecular Biokimia USA (No. 127833) (Hesselmann etal.,1999) di mana 3HB adalah enzymically
dioksidasi dan NADH yang dihasilkan dari NAD + reoxidised di hadapan iodonitro-tetrazoliumchloride
untuk menghasilkan formazan yang itu spectrophotometerically diukur pada492 nm.
analisiskromatografi gas, dijelaskan oleh Braunegg et al. (1978), merupakan metode yang paling banyak
digunakan untuk analisis kuantitatif PHB. Hal ini sangat akurat, direproduksi dan membutuhkan volume
sampel kecil.

Sampai akhir tahun 1950-an, teknik analisis yang paling umum untuk ekstraksi dan kuantifikasi adalah
metode gravimetri, yang dikembangkan oleh Lemoigne (1926), yang terdiri dari ekstraksi PHB dari
biomassa lyophilized dengan kloroform diikuti oleh pengendapan dengan dietileter atau aseton. Pada
tahun 1958, Williamson dan Wilkinson menunjukkan bahwa dalam kondisi yang terkendali waktu dan
suhu semua materi sel, kecuali butiran PHB, dilarutkan dalam larutan natrium hipoklorit alkali
(Williamson dan Wilkinson, 1958). Korelasi kekeruhan sampel dengan pengukuran gravimetri
memungkinkan polimer kuantifikasi. Keakuratan metode ini tergantung pada ukuran dan bentuk butiran
PHB dan homogenitas suspensi (Braunegg etal.,1978). Metode gravimetri melibatkan proses ekstraksi
dengan pelarut seperti kloroform, natrium hidroksida, sodium hypochlorite atau kombinasi pelarut ini
(Hahn etal.,1993) untuk memulihkan polimer dari sel. Umumnya, sel beku-kering diikuti oleh ekstraksi
dalam kloroform panas dalam ekstraktor Soxhlet. Ekstrak didinginkan pada suhu kamar dan melewati
filter. Larutan disaring terkonsentrasi dan PHB diendapkan dengan pelarut, seperti metanol. Campuran
metanol-kloroform disaring, dicuci dengan etanol dua kali untuk memastikan kemurnian polimer. Polimer
dimurnikan kemudian vakum dikeringkan sampai berat konstan1986;..
1H dan 13C Nuklir eksperimen Magnetic Resonance juga diterapkan pada SCL dan MCL-PHA tanpa
derivatisasi kimia polimer (Doi etal, Doi, 1995; Jan et al.1996). Untuk SCL-PHA, 1H NMR pengukuran
yang cukup untuk menjelaskan komposisi mereka, sedangkan untuk MCL-PHA memakan waktu
13pengukuran C NMR diperlukan.

Kemajuan dalam produksi MCL-PHA dari

substrat murah dengan pseudomonad
Terjadinya MCL-PHA pertama kali diamati pada Pseudomonas oleovorans GPo1
(ATCC 29347; de Smet et al 1983.).Strain ini unik di antara MCL-PHAsynthesizing
Pseudomonas karena dapat memanfaatkan alkana, seperti oktan untukMCL-PHA,
sintesis karena Oktober plasmid nya (Huisman et al. 1989). Penelitian skrining awal
menunjukkan bahwa hanya spesies tertentu Pseudomonas fluorescent dapat mensintesis MCLPHAs
(Huisman et al 1989;.Timm dan Steinbchel 1990). Kemudian, 48Pseudomonas
spesiesmilik kelompok RNA ribosom homologi saya diperiksa karena kemampuan mereka untuk
mensintesis PHA dari octanoate (Diard et al. 2002). Organisme ini
telahdikelompokkan ke dalam cluster intrageneric I dan II (Yamamoto et al. 2000). Spesies
di klaster II, serta strain tertentu P. aeruginosa dalam cluster I, disintesis MCLPHAs
dengan 3HO sebagai komponen utama. Klaster I organisme lain, termasuk P.
oleovorans, strain disintesis hanya PHB. P. oleovorans GPo1 (ATCC 29347) yang
telah dipelajari secara ekstensif untuk studi sintesis MCL-PHA, telah direklasifikasi sebagai
P. putida GPo1 (ATCC Diard 29347;.et al,2002).
Berbagai substrat, seperti alkana, alkena, asam lemak, dan karbohidrat,
telahdipelajari untuk kemampuan mereka untuk mendukung pertumbuhan dan produksi MCL-PHA oleh
pseudomonad (De Smet et al 1983;.Gross et al 1989;.Lageveen et al 1988;..
Huijberts et al 1992;. Huijberts dan Eggink 1996)
Alkanoates seperti octanoate merupakan sumber karbon MCL-PHA umum untuk semua MCLPHAsintesis Pseudomonas. Telah jelas menunjukkan bahwaasam lemak oksidasiterlibat dalam memasok prekursor untuk sintesis MCL-PHA dari
sumber karbon struktural terkait (Drozd, 1987; Eggink et al 1992;.Lee etal,
2000.).Hasil MCL-PHA sintesis di Kopoliester mengandung C6 unit C14.
Sumber karbon, seperti oktan, octanoate, dan nonanoate, yang dianggap sebagai
substrat yang paling efisien untuk sintesis MCL-PHA (Madison dan Huisman
1999) .Sayangnya, rantai menengah Asam lemak umumnya lebih mahal, dan

karena itu meningkatkan biaya produksi. Faktor yang paling penting yang mempengaruhi
ekonomi secara keseluruhan produksi PHA adalah produktivitas PHA, PHA isi
biomassa,PHA hasil pada sumber karbon yang digunakan, biaya bahan baku dan pemulihan
metode(Choi dan Lee, 1999). Yang paling penting, karena proses ini skala-up, baku
bahanberkontribusi 50% dari biaya keseluruhan, dan biaya ini bahan baku
didominasioleh sumber karbon (Braunegg etal.,2004). Oleh karena itu, ekonomi
kelayakanproduksi massal PHA secara intrinsik digabungkan untuk mengembangkanyang efisien
proses bioteknologidari sumber karbon yang murah. Dalam hal ini, untuk mengurangi
biaya PHA, penelitian melanjutkan produksi mereka dari bahan baku yang murah
termasuk berbagai limbah dan produk sampingan (Castilho etal.,2009).
Pembentukan PHA intraseluler telah dibuktikan dalam oleovorans Pseudomonas
tumbuh di media yang mengandung nasam -alkanoic, dari format untuk decanoate sebagaikarbon.
sumber Namun, pembentukan PHA diamati hanya untuk hexanoate dan lebih tinggi nalkanoat
asam(Brandl etal.,1988). Fermentasi fed-batch P. oleovorans tumbuh
di oktan menghasilkan biomassa akhir 37 g / liter, 33% dari yang PHA dengan
produktivitas 0,25 g PHA / liter / jam (Preusting etal.,1993). Produktivitas yang lebih tinggi dari
0,77 g PHA / liter / jam dan 1,1 g / l / jam diperoleh dengan strain yang sama menggunakan oktan dengan
menggunakan perbaikan komposisi media dan lebih baik kemampuan pencampuran dalamkontinu
modedan dua tahap modus kontinu. Tetapi karena oktan merupakan substrat yang mudah terbakar,
penelitian produksi lainnya sebagian besar melibatkan penggunaan asam oktanoat sebagaikarbon.
sumber
Produksi kontinyu PHA oleh P. oleovorans menggunakan octanoate sebagai sumber karbon
ditunjukkan oleh Ramsay etal.,(1991), menghasilkan produktivitas 0,16 g / l / jam. Kim et
al.,(1997) mencapai produktivitas dari 0,92 g / l / jam menggunakan octanoate sebagai sumber karbon
dengan P.putida.Dalam sebuah penelitian lebih lanjut menggunakan P.oleovorans,produktivitas 1 g / l /
jam
dicapaidalam budaya batch yang makan di octanoate (Kim, 2002). Baru-baru ini, Sun et al. (2007)
mencapai produktivitas tertinggi, dari media asam lemak rantai panjang, dari 1,44 g / l / jam
dengan menumbuhkan P. putida KT2440 asam nonanoat. Tapi octanoate adalah racun bagi bakteri pada
konsentrasi tinggi. Pertumbuhan P. putida GPo1 dihambat oleh 4,65 g / l
octanoate (Ramsay et al. 1991), sedangkan P. putida KT2440 (ATCC 47054)
dihambatoleh 3-4 g / l asam nonanoat (Sun et al 2007.)mahal.;

Mengingat bahwa asam lemak murni sangat lemak hewani, minyak tumbuhan danmereka
asam lemakyang menarik karena banyak pseudomonad mampu memanfaatkankarbon tersebut
sumberdan secara tidak langsung mengurangi biaya produksi (Kellerhals etal.,2000). Penggunaan
lemak dan minyak atau asam lemak mereka memberikan sejumlah keuntungan untukMCL-PHA.
produksi Pertama ada produksi energi yang lebih tinggi dan lebih rendah CO2,yang
menentukan hasil yang lebih tinggi (Solaiman etal.,2006). Keduapersentase Monomer
kontendi PHA dapat disesuaikan dengan mengatur rasio asam lemak dalampertumbuhan.
substrat Dengan demikian, struktur PHA dapat dibuat dengan menggunakanstruktur-terkait
asam lemakdan berbagai rasio asam lemak (Eggink etal, 1995;.Ashby dan Foglia,
1998) dan terakhir mereka dapat dimanipulasi dalam bentuk cair terkonsentrasi lebih
tepat untuk tinggi proses kepadatan -cell (Weusthuis etal.,1997). Namun, karena
lemak dan minyak adalah campuran asam lemak yang berbeda, biosintesis MCL-PHA
merupakan jaringan metabolisme yang jauh lebih kompleks.
Asam oleat, asam karboksilat umum di minyak nabati, telah digunakan dalam

produksiMCL-PHA oleh beberapa Pseudomonas. strain Huiberts dan Eggink

(1996) mencapai produktivitas 0,67 g / l / jam dalam fermentasi densitas sel yang tinggi.
Pertumbuhan P. putida KT2442 asam oleat lanjut diselidiki oleh Weusthuis et al. (1997). Mereka
menerapkan strategi DO-Stat dalam proses makan-batch asam oleat. Pulsa
asam oleat bawah konsentrasi hambat diberi makan setiap kali peningkatan
oksigen terlarut menunjukkan menipisnya sumber karbon. Strategi makan ini
menghasilkan 92 g / l biomassa yang mengandung 47% PHA (1,6 g PHA / l / h). Dalam studi lain,
dengan menggunakan strain yang sama dan sumber karbon, keterbatasan fosfor diterapkan
bukanpembatasan nitrogen (Lee et al. 2000b). Biomassa akhir, konsentrasi PHA, dan
produktivitas yang meningkat menjadi 141 g / l, 51% PHA, dan 1,9 g PHA / l / jam. Demikian pula
Kellerhals et al. (2000) yang digunakan P. putida KT2442 untuk menghasilkan MCL-PHA dari asam
oleat
dan hasil-substrat spesifik dilaporkan (0,49-0,56 g PHA / g asam oleat) dekat dengan
maksimum teoritis (0.62 g / g) di laboratorium (2 l) dan pilot (30 l) sisik. Meskipun
produktivitasyang dicapai adalah 0.49 g / l / jam dan 0,57 g / l / jam pada laboratorium dan pilot skala
masing-masing. Asam oleat ini juga digunakan sebagai sumber karbon untuk P. putida (Eggink etal.,
1993), P. putida PGA1 (Tan etal.,1997) dan P. aeruginosa (Marsudi etal.,2008).
Tapi isi PHA dalam sel tidak lebih dari 35% dari CDW.
minyak sayur yang terbarukan, murah dan tersedia dalam berbagai.
Variasidalam komposisi mereka langsung mempengaruhi komposisi dan bahan
sifat PHA (Eggink etal.,1992). Juga ini adalah substrat yang baik untuk
pseudomonad dan hasil kandungan energi tinggi dalam hasil biomassa yang tinggi (Drozd,
Lee 1987;.etal,2000). Selain biaya terendah, asam lemak panjang rantai samping menawarkan
keuntungantambahan, karena mereka sering mengandung gugus fungsional yang membuatyang
PHA dihasilkan setuju untuk modifikasi setelah isolasi (Eggink etal.,1993).
Kehadiranikatan ganda dalam beberapa hasil asam lemak dalam monomer tak jenuh yang
menyediakan situs untuk modifikasi kimia PHA tersebut. Laurat, miristat, palmitat, stearat
dan asam oleat merupakan asam lemak yang paling luas hadir dalam minyak nabati dan
relatifmurah. Campurannya dapat ditemukan sebagai produk limbah dalamminyak
produksinabati,sehingga mereka menarik secara ekonomi. Substrat tersebut diteliti sebagai
bahan baku untuk produksi PHA. Secara historis, asam lemak telah menjadiyang lebih disukai
substratuntuk sintesis mikroba dari MCL-PHA. Ekonomi, bagaimanapun, dapat
dicapai dengan langsung menggunakan trigliserida sebagai bahan baku untuk fermentasi karena
biaya yang melekat pada proses saponifikasi dapat dihindari.
MCL-PHA telah diproduksi oleh Pseudomonas strain pada berbagai minyak tumbuhan seperti
minyak jarak (Eggink et al.1995), minyak zaitun (Hazar et 2003;..al,1998), minyak sawit (Yun etal,
Alias dan Tan, Marsudi 2005;..etal,2008) minyak kelapa (Solaiman etal,2001)
dan jagung minyak (Lagu etal.,2008) antara lain.
Eggink et al. (1995) mengevaluasi kapasitas produksi PHA P.aeruginosa pada
Castor minyak dan euforia minyak. Strain ini bisa menumpuk PHA hingga kandungan sel
20-30%.
Ketika P. oleovorans ditumbuhkan pada asam karboksilat yang berasal dari minyak zaitun,kemiri,
minyak minyak wijen dan minyak hamci, bisa mengumpulkan PHA hingga 60% darikering selnya
berat(Hazar etal.,1998).
Ashby et al. (2001) dievaluasi produksi MCL-PHA oleh P. resinovorans dari
glukosa, minyak tumbuhan (kedelai dan kelapa) dan campuran minyak glukosa / tanaman. Mereka

mengamati perbedaan yang jelas pada komposisi monomer apakah MCL-PHA yang dihasilkan
dari minyak glukosa atau tumbuhan. Budaya pada campuran minyak glukosa dan tanaman menyebabkan
produksiPHA menyajikan komposisi monomer menengah dengan yang diperoleh
dari minyak glukosa atau tumbuhan. Sifat termal dan mekanik PHA yang dihasilkan dari
campuran juga menengah untuk orang-orang dari PHA yang dihasilkan dari minyak glukosa atau
tanaman50:.
ini regangan akumulasi PHA pada kadar sel 57% dan 48% bila ditanam pada
campuran 50 campuran glukosa dan minyak kelapa dan glukosa dan minyak kedelai.
Pseudomonas stutzeri 1317 juga dilaporkan menggunakan minyak kedelai sebagai substrat untuk
pertumbuhan dan sintesis MCL-PHA dengan yield sebesar 1,7 g PHA / l budaya dan PHA
isi 63% (Dia et al . 1998).
The Pseudomassp.Strain DR2 (Lagu etal.,2008) mampu memanfaatkan minyak jagung, dan
menghasilkan 37,34% PHA yang terdiri dari 3-hydroxyoctanoic, 3-hydroxydecanonic,
dan 3-hydroxydodecanoic. Strain DR2 juga bisa memanfaatkan limbah minyak nabati sebagai
sumber karbon untuk produksi PHA dengan isi 23.52%.
Studi yang dilakukan oleh Tan et al. (1997) menunjukkan bahwa P. putida PGA1 dapat
mengkonversisawit disaponifikasi
minyak intike PHA. Strain ini bisa mengumpulkan 37% PHA dari plamdisaponifikasi
kerneloil.The konstituen asam lemak utama minyak sawit adalah asam laurat dan miristat.
Sedangkan PHA baik dari asam laurat atau miristat adalah semicrystalline, PHA baik dari
minyak inti sawit oleat atau disaponifikasi adalah amorf ( Tan etal.,1997). Pseudomonas
chlororaphis HS21 (Yun etal.,2003) ketika tumbuh pada minyak inti sawit, bisa
mengumpulkan 45% PHA. Apalagi kehadiran enzim lipase dalam ketegangan ini
menghilangkan kebutuhan untuk saponify minyak inti sawit (Yun etal.,2003).
Upaya lain untuk menghasilkan PHA dari trigliserida murah dilaporkan oleh
Cromwick et al. (1996). Tallow adalah lemak murah yang diteliti sebagaitunggal,
sumber karbon baik yang sebelumnya dihidrolisis atau tidak. Karena itu adalah campuran dari
trigliserida dengan oleat, stearat, asam palmitat dan komponen asam lemak utama,
lemak merupakan substrat yang menarik untuk produksi PHA. Meskipun beberapa
dicirikan baik Pseudomonas strainmengkonversi lemak dihidrolisis untuk Odha pada
tingkat antara 15 dan 20% dari berat kering sel mereka, organisme ini tidak mengeluarkan
enzimlipase untuk memfasilitasi lemak hidrolisis. P.resinovorans,bagaimanapun, menyediakan baik
aktivitas lipase dan kapasitas biosintesis PHA hingga 15% dari berat kering sel.
JugaPHA hasil yang diperoleh rendah. Dalam lemak dihidrolisis (lemak asam lemak bebas),
konsentrasi PHA tetap di kisaran 0,03-0,38 g / l untuk semua strain, sedangkan
pada lemak dihidrolisa hanya Pseudomonas resinovorans mampu tumbuh dan
menghasilkan PHA. Konsentrasi PHA dalam hal ini adalah di kisaran 0,12-0,15 g / l,
pada kadar polimer 15,2%. Berdasarkan hasil yang diperoleh oleh Cromwick et al. (1996),
jenis virus ini ditumbuhkan pada asam oleat, lemak hewan dan minyak nabati. Ini bisa
mengumpulkan sekitar 49% PHA pada asam oleat, sekitar 47% PHA pada lemak babi dan minyak
mentega dan
sekitar 51% PHA pada minyak kelapa (Ashby etal.,1998). Hasil penelitian menunjukkan bahwa
komposisiberulang-unit biopolimer yang tercermin komposisi asil lemak dari
minyakatau lemak substrat yang digunakan untuk sintesis mereka. Dengan demikian, PHA berasal dari
makan
minyakkedelai memiliki kandungan yang lebih tinggi tak jenuh monomer asam lemak hidroksil dari
polimeryang diperoleh dengan minyak kelapa.

Penggunaan produk limbah sebagai sumber karbon menyajikan keuntungan

secara bersamaan memungkinkan penurunan biaya pembuangan dan produksi dari Pertambahan Nilai
produk. Penggunaan produk-produk limbah dapat lanjut mengurangi
biaya produksiPHA. PHA telah dihasilkan dari limbah berminyak atau sub-produk dari
proses yang terintegrasi seperti rhamnose dan biodiesel (Fuchtenbusch etal.,2000). Dalam
penelitian ini Pseudomonas oleovorans tumbuh menggunakan sisa minyak daribioteknologi
produksi rhamnosesebagai sumber karbon tunggal. Budidaya Batch dalamdiaduk-tank
bioreaktorstrain ini memberikan konsentrasi PHA 1,24 g / l(isi polimer
masing-masing19,7%).Ketika budidaya dilakukan dalam mode fed-batch, PHA
akumulasimeningkat menjadi sekitar 6,4 g / l dan kadar polimer 40%.
PHAyang dihasilkan oleh P. oleovorans adalah heteropolymer mengandung 3HB, 3HHx, 3HO
(asam 3-hydroxyoctanoic), 3HD (3- asam hydroxydecanoic) dan 3HDD
(3-asamhydroxydodecanoic). 3HD adalah monomer yang paling melimpah (61,7-64,3% mol),
yang mencerminkan komposisi sisa minyak, di mana 3HD hadir pada 62,1%
konsentrasimol.
Dalam limbah minyak goreng (Vidal-Mas etal.,2001) P. aeruginosa 47T2 menghasilkan PHA pada
kadar sel 42,15%. Ferna'ndez et al. (2005) mempublikasikan hasil mereka pada
kemampuan Pseudomonas aeruginosa memakan asam lemak dan minyak goreng. Sebuah 54,6% PHA
Akumulasi diperoleh ketika asam oleat teknis digunakan sebagai sumber karbon dan
akumulasi PHA berkisar antara 66,1% ketika asam lemak bebas sampah darikedelai
minyakyang digunakan sebagai substrat karbon dan 29,4% ketika minyak jelantah digunakan.
Tergantung pada substrat disediakan berbagai komponen diamatiC10:.
Mayor jenuh atau komponen tak jenuh dari polimer yang ditemukan adalah 0, C12: 0
dan C8: 0 atau C12: 1 dan C14:. 1, masing-masing
Meskipun beberapa strain dapat terakumulasi sebanyak 60% PHA menggunakankarbon
sumbertersebut,hasil biasanya jauh lebih rendah dari asam karboksilat murni, sehingga
menghentikan proses dari menjadi komersial.