EFECTOS CITOTOXICOS INDUCIDOS POR FR-91 EN LINEAS DE CELULAS TUMARALES HUMANAS Martinez* E , Chacon* R, Lombardi, ** VRM, Etcheverria** R. Cacabelos** *Georgian Alternative Medicine, Madrid, Es ** EBIOTEC, Division de Biotecnologia, La Corufa, Espafia Introduccién: Las tentativas cientificas para la evaluacién in vitro de compuestos naturales con actividad biolégica han aumentado en las dos décadas pasadas, debido principalmente al desarrollo altamente automatizado de las pruebas bioldgicas de sereening basado en métodos colorimétricos que pueden medir la inhibicion de la proliferacién de las células en cultivo. El objetivo principal del actual trabajo era evaluar la actividad antiproliferativa de FR91, un lisado estandardizado de las células microbianas del género Bacillus, en lineas de células tumorales humanas. Material y métodos: Se emplearon las lineas celulares: HL-60, SW 982, SW 872, y TOV-21G. Todos los cultivos celulalares fueron mantenidos crecidos en monocapa, a excepcién de HL-60, en DMEM, L-I5 y EMEM suplementado con el suero bovino fetal al 10%, Las cultivos fueron mantenidas a 37°C en atmésfera humidificada y 5% CO}, Para el anzlisis de citotoxicidad tetrazolium-dye (MTT) las monocapas de células adherentes fueron tripsinadas, lavadas y sembradas a 15.000 células/pocillo en placas de 96 pocillos de fondo plano. FR91 fue agregado en los pocillos correspondientes por duplicado a las concentracién de: 10 L/w, 25 L/w, y 50 L/w, respectivamente. Las células no tratadas fueron utilizadas como control. Las placas fueron incubadas por 24 horas a 37°C. Tras la incubacién los sobrenadantes fueron retirados de los pocillos y 25 KL de solucién de MTT fue agregado a cada pocillo. Tras 2 horas de incubacién, 125uL de DMSO fueron aitadidos a los pocillos y la absorbencia fue leida a 450 en un espectrofotémetro de multipocillos. El porcentaje de citotoxicidad fue calculado como (A-B) /A x 100, donde A es la media de la densidad dptica de los pocillos no tratados y Bes la densidad éptica de los pocillos tratados con FR91. Resultados: Los resultados de la actividad de FR91 en las tres diferentes concentraciones se muestran en la tabla. Los valores se expresan como porcentaje de la inhibicién del crecimiento, [= Tineas cetutares [__10nL/well 25uLiwell S0uL/vell HL-60 I 58 33.5 aT i SW 872 ij 59 78.7 86.4 ‘SwW982, i 318 72.3 87 t TOV-216 42.9 654 843 Conclusiones: Segiin los resultados obtenidos en el estudio se puede concluir que el lisado de células microbianas FR91 muestra actividad antiproliferativas in Vitro