UNIVERSITATEA BABE-BOLYAI CLUJ-NAPOCA

Facultatea de tiina i Ingineria Mediului

CONTRIBUII PRIVIND INFLUENA COLORANILOR

TEXTILI ASUPRA UNOR FACTORI DE MEDIU

REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT

Conductor tiinific:
Prof. Univ. Dr. Dumitru RISTOIU

Doctorand:
Florina-Maria ONI (COPACIU)

CLUJ-NAPOCA
2012

UNIUNEA EUROPEAN

GUVERNUL ROMNIEI
MINISTERUL MUNCII, FAMILIEI I
PROTECIEI SOCIALE
AMPOSDRU

Fondul Social European

POSDRU 2007-2013

Instrumente Structurale
2007-2013

OIPOSDRU

UNIVERSITATEA TEHNIC
GHEORGHE ASACHI
DIN IAI

UNIVERSITATEA BABE-BOLYAI DIN CLUJ-NAPOCA

Facultatea de tiina i Ingineria Mediului

CONTRIBUII PRIVIND INFLUENA COLORANILOR

TEXTILI ASUPRA UNOR FACTORI DE MEDIU
REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT

Conductor tiinific:
Prof. Univ. Dr. Dumitru RISTOIU

Doctorand:
Florina-Maria ONI (COPACIU)

CLUJ-NAPOCA
-2012-

UNIUNEA EUROPEAN

GUVERNUL ROMNIEI
MINISTERUL MUNCII, FAMILIEI I
PROTECIEI SOCIALE
AMPOSDRU

Fondul Social European

POSDRU 2007-2013

Instrumente Structurale
2007-2013

OIPOSDRU

Teza de doctorat a fost realizat cu sprijinul financiar al proiectului Burse

Doctorale pentru Performana n Cercetare la Nivel European (EURODOC).
Proiectul Burse Doctorale pentru Performana n Cercetare la Nivel
European (EURODOC), POSDRU/88/1.5/S/59410, ID 59410, este un proiect
strategic care are ca obiectiv general Dezvoltarea capitalului uman pentru
cercetare prin programe doctorale pentru mbuntirea participrii, creterii
atractivitii i motivaiei pentru cercetare. Dezvoltarea la nivel european a tinerilor
cercettori care s adopte o abordare interdisciplinar n domeniul cercetrii,
dezvoltrii i inovrii.
Proiect finanat n perioada 2009 - 2012.
Finanare proiect: 18.943.804,97 RON
Beneficiar: Universitatea Tehnic Gheorghe Asachi din Iai
Partener: Universitatea Babe Bolyai din Cluj-Napoca
Director proiect: Prof. univ. dr. ing. Mihaela-Luminia LUPU
Responsabil proiect partener: Prof. univ. dr. ing. Alexandru OZUNU

UNIVERSITATEA TEHNIC
GHEORGHE ASACHI
DIN IAI

UNIUNEA EUROPEAN

GUVERNUL ROMNIEI
MINISTERUL MUNCII, FAMILIEI I
PROTECIEI SOCIALE
AMPOSDRU

Fondul Social European

POSDRU 2007-2013

Instrumente Structurale
2007-2013

OIPOSDRU

Mulumiri
Adresez respectuoase mulumiri domnului Prof. Dr. Dumitru Ristoiu,
conductorul tiinific al tezei de doctorat, pentru competena i
permanenta ndrumare tiinific pe parcursul acesteia.
Mulumiri doamnei CS I Dr. Virginia Coman pentru contribuia adus
la formarea mea profesional, pentru sprijinul moral i
profesionalismul cu care m-a ghidat pe drumul ctre obinerea titlului
de doctor.
Mulumiri domnului CS II Dr. Lucian Copolovici i domnului
Prof. Dr. lo Niinemets pentru sprijinul acordat pe parcursul stagiului
desfurat la Universitatea Eston de tiinele Vieii, Departamentul de
Fiziologia Plantelor, Tartu, Estonia.
Mulumiri tuturor membrilor comisiei pentru acceptul lor de a participa
la susinerea public a acestei teze i pentru efortul depus la citirea i
evaluarea manuscrisului.
Sincere mulumiri tuturor persoanelor cu care am colaborat pe
perioada desfurrii studiilor doctorale i care mi-au mprtit cu
drag din vasta lor experien: doamna Dr. Mihaela Vlassa, doamna Dr.
Dorina Simedru, doamna Dr. Miua Filip, doamna Dr. Loredana Soran,
doamna Dr. Carmen Roba, domnul Dr. Simion Beldean-Galea.
Sincere mulumiri colegilor care mi-au fost alturi n aceast perioad
i care m-au susinut i ncurajat necondiionat.
Alese gnduri de preuire familiei i prietenilor pentru sprijinul moral,
nelegerea i rbdarea, acordate n aceti ani de studiu.
Nu n ultimul rnd, doresc s mulumesc soului meu pentru rbdarea,
susinerea i nelegerea oferite pe ntreaga perioad a doctoratului.
Mulumesc echipei manageriale care a condus la existena Proiectului
Burse Doctorale pentru Performana n Cercetare la Nivel European
(EURODOC), POSDRU/88/1.5/S/59410, ID 59410 al crui
benefiaciar am fost i eu n perioada elaborrii prezentei teze de
doctorat.

UNIVERSITATEA TEHNIC
GHEORGHE ASACHI
DIN IAI

CUPRINS
INTRODUCERE
PARTEA I
CONSIDERAII TEORETICE
Capitolul 1. Coloranii textili i importana studiului .................................................................. 5
1.1. Generaliti despre colorani .........................................................................................
5
1.1.1. Definiia coloranilor ............................................................................................. 5
1.1.2. Clasificarea coloranilor ........................................................................................ 6
1.1.3. Coloranii azoici .................................................................................................... 7
1.1.4. Coloranii antrachinonici ....................................................................................... 8
1.2. Coloranii textili ............................................................................................................. 9
1.3. Coloranii textili i mediul nconjurtor.......................................................................... 10
Capitolul 2. Tehnici de analiz utilizate n studiul coloranilor textili din probe
de ap rezidual............................................................................................................
2.1. Tehnici utilizate la pregtirea probelor de ap pentru analiz .......................................
2.1.1. Prelevarea probelor de ap ....................................................................................
2.1.2. Conservarea probelor de ap prelevate .................................................................
2.1.3. Izolarea i concentrarea compuilor de interes din probele de ap prelevate .......
2.2. Parametrii fizico-chimici de calitate ai efluenilor textili ..............................................
2.3. Tehnici cromatografice utilizate n analiza coloranilor textili din probe
de ap rezidual .............................................................................................................
2.3.1. Cromatografia. Generaliti ...................................................................................
2.3.2. Clasificarea tehnicilor cromatografice ..................................................................
2.3.3. Cromatografia de lichide .......................................................................................
2.3.3.1. Cromatografia pe strat subire ........................................................
2.3.3.2. Cromatografia de lichide de nalt performan ............................
Capitolul 3. Ecotoxicologia coloranilor textili ..............................................................................
3.1. Efecte toxice ale coloranilor textili asupra plantelor ....................................................

13
14
15
15
16
22
23
23
24
27
29
33
45
47

PARTEA a II-a
CONTRIBUII ORIGINALE
Capitolul 4. Prezentarea i caracterizarea fizico-chimic a coloranilor textili studiai............
4.1. Studiul UV-Vis al coloranilor textili ............................................................................
Capitolul 5. Determinarea parametrilor fizico-chimici de calitate ai unor eflueni textili .......
5.1. Parte experimental. Determinarea parametrilor fizico-chimici de calitate ai
unor eflueni textili ........................................................................................................
5.2. Rezultate i discuii privind determinarea parametrilor fizico-chimici de calitate ai
unor eflueni textili ........................................................................................................
5.3. Concluzii privind determinarea parametrilor fizico-chimici de calitate ai
unor eflueni textili ........................................................................................................

49
51
57
58
59
67

Capitolul 6. Analiza coloranilor textili prin cromatografia de lichide ...................................... 69

6.1. Analiza unor colorani din eflueni textili prin tehnica cromatografiei pe strat subire
de nalt performan (HPTLC) .................................................................................... 70
6.1.1. Parte experimental. Monitorizarea coloranilor textili prin
tehnica HPTLC ..................................................................................................... 70
6.1.2. Rezultate i discuii privind determinarea coloranilor textili prin
tehnica HPTLC....................................................................................................... 81
6.1.3. Concluzii privind determinarea coloranilor textili prin tehnica HPTLC ............. 88
6.2. Analiza coloranilor textili Optilan Blue i Nylosan Red din ape reziduale prin
tehnica cromatografiei de lichide cuplat cu spectrometria de mas (LC-MS/MS) ...... 89
6.2.1. Parte experimental. Determinarea coloranilor textili prin tehnica LC-MS/MS... 89
6.2.2. Rezultate i discuii privind determinarea coloranilor textili prin
tehnica LC-MS/MS .............................................................................................. 94
6.2.3. Concluzii privind determinarea coloranilor textili prin tehnica LC-MS/MS...... 104
6.3. Analiza coloranilor textili compleci ai cromului Nylosan Dark Brown,
Lanasyn Dark Brown i Lanasyn Red din ape reziduale prin tehnica LC-MS/MS ..... 105
6.3.1. Parte experimental. Determinarea coloranilor textili prin
tehnica LC-MS/MS .............................................................................................. 105
6.3.2. Rezultate i discuii privind determinarea coloranilor textili prin
tehnica LC-MS/MS .............................................................................................. 106
6.3.3. Concluzii privind determinarea coloranilor textili prin tehnica LC-MS/MS...... 121
Capitolul 7. Studii ecotoxicologice privind aciunea coloranilor textili asupra
plantelor de Triticum aestivum L........................................................................
7.1. Triticum aestivum L. i stresul aplicat ..........................................................................
7.2. Analiza parametrilor fotosintetici din plantele de gru tratate cu coloranii textili
luai n studiu ...............................................................................................................
7.2.1. Msurarea parametrilor fotosintetici ...................................................................
7.2.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra parametrilor
fotosintetici ai plantelor de gru ..........................................................................
7.2.3. Concluzii privind efectele coloranilor textili asupra parametrilor
fotosintetici ai plantelor de gru ..........................................................................
7.3. Analiza unor metabolii secundari volatili (LOX-uri i monoterpene) emii de
plantele de gru tratate cu coloranii textili luai n studiu ..........................................
7.3.1. Prelevarea i analiza unor LOX-uri i a unor monoterpene ................................
7.3.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra emisiei de
LOX-uri i monoterpene de ctre plantele de gru .............................................
7.3.3. Concluzii privind efectele coloranilor textili asupra emisiei de
LOX-uri i monoterpene de ctre plantele de gru .............................................
7.4. Analiza unor pigmeni asimilatori (clorofile i carotenoizi) din plantele de gru
tratate cu coloranii textili luai n studiu ....................................................................
7.4.1. Extracia i analiza pigmenilor clorofilieni i carotenoizi din
plantele de gru ...................................................................................................

123
123
125
125
126
128
129
129
131
135
135
136

7.4.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra coninutului

de pigmeni clorofilieni i carotenoizi din plantele de gru ................................
7.4.3. Concluzii privind efectele coloranilor textili asupra coninutului
de pigmeni clorofilieni i carotenoizi din plantele de gru ................................
7.5. Analiza unor metabolii secundari nevolatili (coninutul total de flavonoide) din
plantele de gru tratate cu coloranii textili luai n studiu ..........................................
7.5.1. Extracia i analiza coninutului total de flavonoide din plantele de gru ..........
7.5.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra
coninutului total de flavonoide din plantele de gru ...........................................
7.5.3. Concluzii privind efectele coloranilor textili asupra
coninutului total de flavonoide din plantele de gru...........................................
CONCLUZII ..................................................................................................................................
BIBLIOGRAFIE ...........................................................................................................................
Anexa I. LISTA ABREVIERILOR ..............................................................................................
Anexa II. LISTA PUBLICAIILOR TIINIFICE COTATE ISI, ELABORATE PN
N PREZENT I INCLUSE TEMATICII TEZEI DE DOCTORAT ...........................

CUVINTE CHEIE:
Colorani textili
Colorani azoici
Colorani antrachinonici
Extracia pe faz solid
Cromatografia pe strat subire de nalt performan
Cromatografia de lichide cuplat cu spectrometrul de mas
Stres abiotic
Parametrii fotosintetici
Pigmenii asimilatori
Compui organici volatili
Triticum aestivum L.

138
143
143
143
144
147
149
153
167
169

INTRODUCERE
Industria textil reprezint unul dintre cele mai comune i importante sectoare din lume, fiind cea mai
mare consumatoare de ap. Acumularea de reziduuri n ap, n cantiti care depesc puterea natural de
transformare i integrare n factorii de mediu, conduce la apariia de dezechilibre ale vieii naturale care pot
duce la dispariia de specii de animale i de plante, periclitnd n final nsi viaa noastr.
Obiectivul major al tezei de doctorat const n elaborarea unor metode moderne i performante de
izolare, identificare i cuantificare a ase colorani textili, dintre care doi antrachinonici (Optilan Blue i
Lanasyn Blue) i patru azoici (Lanasyn Red, Nylosan Red, Nylosan Dark Brown i Lanasyn Dark Brown) i
aplicarea acestor metode la determinarea coloranilor din probe de ap rezidual, aducnd astfel contribuii la
evaluarea impactului asupra calitii mediului, precum i a efectelor ecotoxicologice ale acestora asupra unor
plante.
Scopul cercetrilor ntreprinse n teza de doctorat vizeaz urmtoarele aspecte:
Determinarea indicatorilor fizico-chimici de calitate ai apelor uzate provenite din industria de prelucrare a
fibrelor textile.
Dezvoltarea unor metode de izolare a coloranilor textili studiai din probe de ap rezidual, utiliznd
tehnica extraciei pe faz solid (SPE).
Realizarea unei metode bazate pe tehnica cromatografiei de lichide de nalt performan pe strat subire
(HPTLC) pentru identificarea i cuantificarea coloranilor textili investigai n vederea monitorizrii unor
eflueni colectai de la o fabric de prelucrare a fibrelor textile care sunt deversai n reeaua de canalizare.
Realizarea unei metode bazate pe tehnica cromatografiei de lichide de nalt performan cuplat cu
spectrometria de mas (LC-ESI/MS-MS) pentru identificarea i cuantificarea coloranilor textili, aplicat la
monitorizarea unor influeni i eflueni ai unei staii de tratare a apelor reziduale unde ajung apele din
reeaua de canalizare cu un coninut potenial de colorani textili.
Studiul efectelor ecotoxicologice ale coloranilor textili investigai, asupra diferitelor performane din plante
n scopul identificrii i evalurii rapide a toxicitii acestor colorani textili, asupra plantelor de gru
(Triticum aestivum L.). Au fost evaluate efectele coloranilor textili privind fotosinteza frunzei, pigmenii
asimilatori, metabolii secundari volatili (emisii de produi de oxigenare sub aciunea lipoxigenazei i
emisii de monoterpene) i metabolii secundari nevolatili (flavonoidele) asupra plantelor de gru.
Studii privind coloranii textili investigai n prezenta tez prin tehnicile menionate anterior, ct i
influena acestora asupra unor factori de mediu, nu au fost publicate pn n prezent n literatura de specialitate.
Prima parte a tezei de doctorat cuprinde un studiu bibliografic privind coloranii textili, tehnicile de
analiz utilizate pentru izolarea, identificarea i cuantificarea acestora din probe de ap rezidual, precum i
aspecte privind ecotoxicologia coloranilor textili.
n cea de a doua parte a tezei sunt prezentate contribuiile originale aduse n vederea monitorizrii
coloranilor textili din ape reziduale: investigaii UV-Vis, determinarea parametrilor fizico-chimici de calitate
ai efluenilor textili, izolarea coloranilor din probe de ap rezidual prin tehnica SPE, identificarea i
cuantificarea acestora din diferite probe de ap rezidual prin tehnicile HPTLC i LC-ESI/MS-MS. De
asemenea, au fost ntreprinse studii ecotoxicologice privind aciunea coloranilor textili asupra plantelor de
Triticum aestivum L., precum i influene ale acestora asupra parametrilor fotosintetici i a unor metabolii
secundari menionai anterior.
Rezultatele prezentate n lucrarea de fa au fost publicate, comunicate sau sunt n curs de publicare.
Lista lucrrilor elaborate i incluse tematicii tezei de doctorat este anexat la sfritul prezentei lucrri.
1

4. Prezentarea i caracterizarea fizico-chimic a coloranilor textili studiai

Coloranii textili monitorizai n acest studiu fac parte din dou clase importante de colorani, i
anume clasa coloranilor azoici, respectiv antrachinonici. Urmrind literatura de specialitate (Lee i
Pavlostathis, 2004; Epolito et al., 2005), au fost considerate importante pentru studiu, aceste dou clase
de colorani datorit utilizrii lor frecvente n vopsirea fibrelor textile.
n Tabelul 4.1 sunt prezentate cele dou clase de colorani textili studiai. Coloranii textili
studiai au fost procurai de la Clariant Produkte (Switzerland) AG.
Tabel 4.1. Date privind colorani textili studiai.
Denumire Comercial/
Numr CAS /
Abreviere

Formula chimic/
Masa molecular (g mol-1)
Colorani azoici

Lanasyn Red M-GA

CAS 70209-87-9
LR
Nylosan Red N-2RLB
CAS 71873-39-7
NR
Nylosan Dark Brown
S-MBL
CAS 52587-68-5

C32H21CrN10O11S2Na
851,61

C24H21ClN4O6S2Na
584,02

C38H25CrN8O7S2Na
835,69

NDB
Lanasyn Dark Brown
M-GLN
CAS 70236-62-3

C38H24CrN9O9S2Na
880,69

LDB
Colorani antrachinonici
Optilan Blue MF-GL
CAS 125328-86-1
OB

Lanasyn Blue F-L 150

CAS 4474-24-2
LB

C24H21N2O5SLi
456,44

C32H28N2O8S22Na
678,68

Structura chimic

4.1. Studiul UV-Vis al coloranilor textili

Premergtor analizei cantitative a coloranilor textili prin tehnica HPTLC, au fost efectuate
msurtori UV-Vis asupra acestora n vederea stabilirii maximului de absorbie. n general, coloranii se
evideniaz n spectrul din domeniul vizibil 400-900 nm. Pentru a stabili domeniul n care se afl
lungimea de und optim pentru detecia coloranilor textili prin tehnica HPTLC, au fost nregistrate
spectrele UV-Vis ale unor soluii metanolice preparate din coloranii menionai. n Tabel 4.4 sunt
prezentate poziiile maximelor de absorbie n domeniul vizibil i absorbana coloranilor textili studiai.
Tabel 4.4. Poziiile maximelor de absorbie n domeniul vizibil i absorbana coloranilor textili studiai
pentru concentraia indicat.
Colorant
Lanasyn Red
Nylosan Red
Nylosan
Dark Brown
Lanasyn
Dark Brown
Optilan Blue
Lanasyn Blue

Poziia maximului de
absorbie
(nm)
502
511
475
567
612
470
615
588
627
581
626

Absorbana

Concentraia
(mg mL-1)

1,061
1,030
1,016
0,691
0,575
1,282
0,557
0,942
1,040
0,944
1,059

0,08
0,06
0,08
0,06
0,019
0,048

nregistrarea spectrelor UV-Vis a coloranilor textili investigai prin tehnica HPTLC, a condus la
obinerea unor maxime de absorbie n domeniul 470-627 nm.

6. Analiza coloranilor textili prin cromatografia de lichide

Deoarece procesul de vopsire ocup un loc important n cadrul tehnologiilor de finisare textil, iar
apele uzate generate n urma proceselor tinctoriale textile sunt foarte complexe, coninnd pe lng
coloranii utilizai i auxiliari de vopsire, acestea devin n final foarte toxice pentru mediu (Eremektar et
al., 2007).
Cele mai utilizate tehnicile analitice pentru monitorizarea acestor colorani n efluenii textili,
respectiv n mediu sunt spectrofotometria (ahin et al., 2007), cromatografia de lichide pe strat subire
(Umbuzeiro et al., 2005) i cromatografia de lichide de nalt performan (Prevot et al., 2008; Rafally et
al., 2008).
n urma analizei critice privind literatura de specialitate, aceti colorani nu au mai fost studiai
prin aceste tehnici pn n prezent.

6.1. Analiza unor colorani din eflueni textili prin tehnica cromatografiei pe strat subire
de nalt performan (HPTLC)
6.1.1. Parte experimental. Monitorizarea coloranilor textili prin tehnica HPTLC
Chimicale i reactivi
Coloranii studiai prin procedura SPE-HPTLC dezvoltat n acest studiu sunt Lanasyn Blue
(colorant antrachinonic), Nylosan Dark Brown, Nylosan Red, Lanasyn Dark Brown i Lanasyn Red
(colorani azoici). Pentru prepararea probelor de analizat a fost utilizat metanol (99,9; HPLC, Merck),
pentru condiionarea cartuelor de extracie pe faz solid i eluia coloranilor reinui, etanol i amoniac
25% (Chimopar), iar pentru faza mobil, n-butanol i acetat de etil (Merck). S-a folosit ap purificat cu
sistemul Milli-Q Ultrapure (Millipore). Pentru studiul SPE au fost testate patru tipuri de cartue
Phenomenex de 500 mg/6 mL (WAX/NH2, SAX, C18-U i C18-E).
Prepararea soluiilor stoc i a soluiilor standard de lucru
Pentru analiza cantitativ a coloranilor textili de interes din probe de ap rezidual, a fost
preparat o soluie stoc de 0,2 mg mL-1 prin dizolvarea a 1 mg din fiecare colorant n 5 mL metanol care a
fost pstrat la ntuneric la 4C, pentru o perioad de o saptamn. n vederea trasrii curbelor de
calibrare, au fost preparate din soluia stoc prin diluii succesive cu metanol soluii de urmtoarele
concentraii 20, 30, 40, 50 i 60 g mL-1.
Colectarea probelor de ap rezidual
Probele de ap rezidual au fost prelevate de la efluentul unei fabrici de prelucrare a fibrelor
textile din Romnia. Probele de ap au fost colectate n sticle de polietilen, filtrate, stocate la 4C i
analizate n timp de o sptmn. Efluenii textili au fost monitorizai pe o perioad de 6 luni.
Metoda SPE
Extracia pe faz solid a coloranilor textili din probele de ap rezidual a fost realizat cu
ajutorul unui dispozitiv SPE, model Supelco (Sigma Aldrich). Pentru izolarea optim a coloranilor textili
din probele de ap rezidual au fost testate patru tipuri de cartue Strata (WAX/NH2, SAX, C18-U i C18E) (Copaciu et al., 2012a).
Extracia pe faz solid a constat n patru etape importante (Poole et al., 2000; Yoshioka i Ichihashi,
2008):
1. Condiionarea adsorbentului: ndeprtarea impuritilor, activarea cu solventul potrivit (5 mL ap
Milli-Q, 20 mL acid acetic 1%) a gruprilor funcionale din patul de adsorbent pentru
mbuntirea reteniei analiilor.
2. Echilibrarea adsorbentului prin trecerea pe cartu a 20 mL ap Milli-Q, etap necesar pentru
pregtirea adsorbentului n scopul unei interaciuni optime cu analitul.
3. ncrcarea probei de ap rezidual (2 mL min-1) i retenia coloranilor textili pe adsorbent.
4. Desorbia coloranilor textili de pe adsorbent (6 mL 1% amoniacetanol, 1:1, v/v).
Extractele obinute au fost aduse la sec (40C), reluate n 2 mL metanol i supuse analizei HPTLC n
vederea determinrii coloranilor textili.

Metoda HPTLC
Metoda const n utilizarea unei faze staionare de silica gel Alugram RP-18W/UV254 (20 20
cm; 0,15 mm, Macherey-Nagel) i eluia coloranilor cu faza mobil n-butanolacetat de etil5% hidroxid
de amoniu, 4:4:1 (v/v) prin tehnica ascendent pe o distan de 5,5 cm, ntr-o camer saturat n prealabil
la temperatura camerei. Att soluiile standard ct i probele de ap rezidual au fost aplicate pe plac (1
L per band de 1 mm) cu ajutorul aplicatorului Desaga AS 30 Applicator. Cromatoplcile au fost
scanate la 550 nm cu ajutorul unui densitometru Desaga CD-60 (Copaciu et al., 2012a).
Validarea procedurii SPE-HPTLC
n vederea determinrii coloranilor textili din probe de ap rezidual colectate de la fabrici de
prelucrare a fibrelor textile, procedura SPE-HPTLC a fost validat prin parametrii de performan:
selectivitate (Gumustas i Ozkan, 2011), liniaritate (Mohammad i Zawilla, 2009), limita de detecie i
limita de cuantificare (Nayak et al., 2009), acuratee (Nayak et al. 2009) i precizie (Mehta i Morge,
2008; Gumustas i Ozkan, 2011).
6.1.2. Rezultate i discuii privind determinarea coloranilor textili prin tehnica HPTLC
Rezultate SPE
Eficacitatea adsorbenilor testai a fost estimat prin compararea nivelelor de recuperare a
coloranilor textili eluai de pe fiecare adsorbent. Fiecare extracie a fost repetat de patru ori, fiind
calculat abaterea standard relativ (RSD,%) pentru fiecare colorant. Gradele de recuperare sunt date n
Tabelul 6.2.
Tabel 6.2. Gradele de recuperare ale coloranilor textili studiai pentru
cele patru cartue SPE testate.
Cartu
Strata NH2
Strata SAX
Strata C18-U
Strata C18-E
a

LB
108,3 5,0
ndc
nd
nd

Gradul de recuperarea RSDb (%)

LDB
LR
NDB
108,7 3,6
84,8 3,8
109,2 3,2
74,2 2,3
28,5 2,4
61,3 11,8
22,7 7,5
nd
nd
20,5 8,0
nd
nd

NR
108,2 2,6
59,4 5,7
43,8 0,73
50,0 3,3

Media gradelor de recuperare pentru cele patru repetri; bDeviaia standard relativ; cNedetectat.

Dup cum se poate observa n Tabelul 6.2, cartuele Strata NH2 au asigurat un bun grad de
recuperare (peste 100%) pentru toi coloranii textili studiai, cu excepia colorantului azoic LR care a
avut un grad de recuperare de 84,8%. n cazul cartuului Stata SAX, gradele de recuperare pentru
coloranii azoici LDB, NDB i NR au fost peste 59%, cu excepia colorantului azoic LR pentru care
gradul de recuperare a fost doar de 28,5%. Colorantul antrachinonic LB nu a fost detectat datorit
interaciunii puternice dintre acesta i adsorbent, nemaiputnd fi eluat alturi de ceilali colorani textili.
Pentru cartuele Strata C18-U i Strata C18-E gradele de recuperare au avut valori foarte sczute n cazul
coloranilor LDB i NR, iar coloranii LB, LR i NDB nu au fost detectai, acetia nefiind reinui de
adsorbent.
Rezultatele bune obinute pe cartuele Strata NH2, se datoreaz mecanismului de retenie polar a
analiilor prin legturi de hidrogen sau schimb anionic slab. Acest adsorbent este potrivit pentru extracia
anionilor puternici/slabi din probe apoase. Adsorbentul cartuelor Strata SAX este o rin puternic
5

schimbtoare de anioni, astfel obinndu-se rezultate sczute ale gradelor de recuperare pentru coloranii
azoici textili, datorit interaciunii puternice ntre coloranii textili i adsorbent. Coloranii textili
antrachinonici sunt reinui puternic de rina schimbtoare de anioni a cartuelor Strata SAX i nu pot fi
eluai cu amestecul de solveni utilizat. n cazul cartuelor Strata C18-E au loc mecanisme de retenie
non-polare cu suprafaa gruprilor silanol legate hidrofobic pentru o mai puternic retenie hidrofobic,
minimaliznd selectivitatea sau eliminnd interaciunile polare ale silanolului. Pe Strata C18-U are loc un
mecanism de retenie primar nepolar combinat cu interaciuni secundare ale silanolului polar, astfel fiind
mbuntit eficiena extraciei i mrit capacitatea de ndeprtare a compuilor hidrofobici care conin
grupri hidroxil sau amino (www.phenomenex.com). Coloranii LB, LR i NDB datorit polaritii lor nu
sunt reinui pe cartue de tip C18-E i C18-U. Cele mai bune rezultate au fost obinute pe cartuul Strata
NH2 care a fost selectat pentru determinarea prin metoda HPTLC dezvoltat a coloranilor textili de
interes din diferite matrici de ap rezidual (Copaciu et al., 2012a).
Rezultatele validrii
Studiul validrii procedurii SPE-HPTLC a demonstrat performana acesteia la determinarea
prezenei n probe de eflueni textili a celor cinci colorani studiai prin: liniaritate cu coeficieni de
corelaie >0,99 pe ntreg domeniul de concentraie 20-60 ng per band din fiecare colorant; limite de
detecie cuprinse ntre 0,97-6,04 ng per band i limite de cuantificare cuprinse ntre 3,24-20,15 ng per
band; valori ale abaterii standard relative pentru repetabilitatea aplicrii probelor cuprinse ntre 0,63,5%, iar pentru repetabilitatea msurrii ariei picului cuprinse ntre 0,7-2,6%. Rezultatele gradelor de
recuperare pentru toii coloranii textili studiai n probe de ap rezidual cu adaos standard demonstreaz
o bun acuratee a procedurii SPE-HPTLC dezvoltate (Copaciu et al., 2012a).
Analiza coloranilor textili studiai din probe de ap rezidual
Determinarea acestor colorani textili din probe de ap rezidual este important pentru
monitorizarea nivelelor de poluare a apelor cu eflueni textili. Procedura SPE-HPTLC dezvoltat a fost
aplicat pentru monitorizarea celor cinci colorani din eflueni textili pe o perioad de ase luni. Probele
de ap au fost colectate lunar de la efluentul unei fabrici de prelucrare a fibrelor textile. Placa
cromatografic din Figura 6.8, ilustreaz cteva probe de ap rezidual (poziiile 11-15). n acord cu
rezultatele prezentate n Tabelul 6.8, pe perioada acestei monitorizri au fost folosii mai intens coloranii
azoici, cel mai utilizat fiind Nylosan Red i ocazional Lanasyn Blue i Lanasyn Red.
n Figura 6.8 este prezent placa HPTLC pentru coloranii studiai de la stnga la dreapta:
(poziiile 1-5) standardul individual pentru fiecare colorant textil, (poziiile 6 i 16) reprezint cate un
amestec din cei 5 colorani textili, (poziiile 7-10) reprezint extraciile obinute pe cele patru tipuri de
cartue n vederea alegerii cartuului cu cel mai bun grad de recuperare, (poziiile 11-15) reprezint
cteva exemple de probe de ap rezidual. Tot n aceast figur sunt ilustrate 2 cromatograme suprapuse,
cromatograma corespunztoare poziiei 15 (proba de ap rezidual) i cromatograma corespunztoare
poziiei 16 (amestecul standard al celor cinci colorani textili).

Figura 6.8. Placa HPTLC i densitogramele

suprapuse (550 nm) pentru coloranii textili
studiai. Poziiile 1-5 standarde individuale din
fiecare colorant textil (60 ng per band): 1-LB, 2LDB, 3-LR, 4-NDB, 5-NR; Poziiile 6 i 16
amestec standard cu cei cinci colorani textili (60
ng din fiecare colorant textil per band); Poziiile
7-10: Gradele de recuperare pe SPE ale coloranilor
textili, pentru cartuele Strata: NH2 (7); SAX (8);
C18-U (9); C18-E (10); i poziiile 11-15:
reprezint probe de ap rezidual ale unor eflueni
textili.

Table 6.8. Cantitile de colorani textili gsite pe parcursul monitorizrii

efluenilor textili.
Nr. benzii pe
plac

Data
prelevrii

11
12
13
14
15

04.02.2011
18.02.2011
10.03.2011
15.04.2011
13.05.2011
17.06.2011
11.07.2011
25.07.2011

Cantitatea gsit (mg L-1)

Lanasyn
Nylosan
Lanasyn
Dark
Dark
Red
Brown
Brown
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
0,7
nd
nd
8,1
nd

Lanasyn
Blue
nd
nd
nd
nd
20,4
nd
nd
nd

Nylosan
Red
3,7
5,7
1,2
1,0
7,4
12,0
7,6
1,3

Concentraiile gsite n timpul acestei monitorizri 0,7-20,4 mg L-1 arat c efluenii textili
rezultai n urma proceselor de prelucrare a fibrelor textile nu sunt suficient tratai nainte de deversarea
lor n reeaua de canalizare, respectiv mediu. Dintre cele dou clase de colorani textili investigai,
coloranii azoici sunt mai intens utilizai la prelucrarea fibrelor textile (Copaciu et al., 2012a).

6.2. Analiza coloranilor textili Optilan Blue i Nylosan Red din ape reziduale prin tehnica
cromatografiei de lichide cuplat cu spectrometria de mas (LC-MS/MS)
6.2.1. Parte experimental. Determinarea coloranilor textili prin tehnica LC-MS/MS
Chimicale i materiale
Coloranii textili Nylosan Red, colorant azoic, i Optilan Blue, colorant antrachinonic, procurai
de la Clariant Produkte, au fost studiai prin tehnica LC-MS. Pentru prepararea tuturor probelor de
analizat i eluia cromatografic a fost utilizat metanol LC-MS Optigrade (99,8%, LGC Standards).
Colectarea probelor de ap rezidual
Probele de ap rezidual au fost prelevate de la influentul i respectiv efluentul unei staii de
tratare a apelor reziduale din Romnia, acetia fiind monitorizai pe o perioad de 6 luni. Probele au fost
colectate n sticle de polietilen, filtrate, stocate la 4C i analizate n timp de o sptmn.
Metoda LC/ESI(-)-MS/MS
Determinarea coloranilor textili a fost realizat cu ajutorul unui cromatograf de lichide (HPLC
Agilent Serie 1200) cuplat cu un spectrometru de mas (3200 QTrap Applied Biosystems), utiliznd o
surs de ionizare TurboV n modul negativ prin electropulverizare (LC/ESI(-)-MS/MS). Monitorizarea
reaciilor multiple (Multiple Reaction Monitoring, MRM) a fost urmat de cuantificarea ionilor
moleculari precursori i a ionilor produi corespunztori. Sistemul a fost controlat cu softul Analyst 5.1.
Cea mai bun separare a acestor colorani a fost obinut pe o coloan Nucleosil 100 C18 (25 cm 0,46
cm, 10 m, Teknokroma), termostatat la 25C, prin eluie izocratic cu amestecul metanolap 70:30
(v/v), la un debit de 0,65 mL min-1.
Metoda SPE
Pentru extracia celor doi compui, Nylosan Red i Optilan Blue, a fost folosit un dispozitiv de
extracie pe faz solid Supelco (Sigma Aldrich). Pentru alegerea adsorbentului optim de extracie au fost
testate patru tipuri de cartue Strata (WAX/NH2, SAX, C18-U i C18-E). Pentru a cuantifica selectivitatea
adsorbenilor, n 500 mL ap deionizat a fost adaugat o cantitate de 160 ng din fiecare colorant textil
investigat.
Validarea procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS
n scopul validrii procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS pentru cei doi colorani textili studiai au
fost evaluai pentru fiecare colorant urmtorii parametri: liniaritatea, limita de detecie i limita de
cuantificare, precizia, acurateea i efectul de matrice.
6.2.2. Rezultate i discuii privind determinarea coloranilor textili prin
tehnica LC-MS/MS
Analiza LC/ESI(-)-MS/MS
n scopul cuantificrii prezenei coloranilor textili, OB i NR, n probe de ap rezidual, a fost
elaborat o metod LC/ESI(-)-MS/MS. Pentru selectarea tipului de ionizare, coloranii au fost supui att
unei ionizri negative ct i unei ionizri pozitive, fiind aleas ionizarea prin electropulverizare n modul
8

negativ. Pentru stabilirea condiiilor MRM, au fost preparate soluii individuale (100 ng mL -1) din fiecare
colorant n metanol. Ionul precursor a fost obinut prin scanarea coloranilor n quadrupol 1, urmat apoi
de scanarea n quadrupol 3 pentru obinerea ionilor produi.
Obinerea parametrilor optimi dependeni de fiecare colorant a fost realizat utiliznd metoda
infuziei, ca urmare din fiecare colorant au fost preparate soluii standard care au fost injectate direct n
spectrometrul MS prin infuzie continu cu un debit de 5 L min-1. Separarea coloranilor Nylosan Red,
respectiv Optilan Blue, cu o rezoluie de 1,83, a fost obinut printr-o eluie izocratic cu metanolap
70:30 (v/v) la un debit de 0,65 mL min-1 utiliznd o coloan Nucleosil 100 C18 termostatat la 25C.
Parametrii dependeni de surs au fost obinui prin Flow Injection Analysis (FIA) utiliznd o capilar de
restricie i un debit de 200 L min-1 pentru introducerea soluiilor standard (100 ng mL-1) din fiecare
colorant preparat n faza mobil. Cromatograma corespunztoare metodei LC/ESI(-)-MS/MS pentru
amestecul standard utilizat n metoda MRM este prezentat n Figura 6.12.

Figura 6.12. Cromatograma LC/ESI(-)-MS/MS

a amestecului standard (100 ng mL-1):
Nylosan Red, tR = 2,71 min; Optilan Blue, tR = 3,72 min.

Metoda SPE
Studiul SPE utiliznd cartue Strata cu faz invers (Strata C18-E i Strata C18-U) i Strata cu
schimb ionic (Strata WAX/NH2 i Strata SAX) arat c aceti compui pot fi reinui prin mecanisme
diferite (faz invers, respectiv schimb anionic). Eficiena cartuelor testate a fost estimat prin
compararea gradelor de recuperare ale coloranilor eluai pe fiecare tip de cartu. Fiecare extracie a fost
repetat de patru ori i a fost calculat RSD (%) pentru fiecare cartu testat. Gradele de recuperare sunt date
n Tabelul 6.10 (Copaciu et al., 2012b).
Tabel 6.10. Gradele de recuperare ale coloranilor textili studiai pe cele patru tipuri de cartue testate.

Cartu

Strata NH2
Strata SAX
Strata C18-U
Strata C18-E

Cantitatea
adugat
din
fiecare
colorant
(ng)
160
160
160
160

Nylosan Red
a

Media
cantitii
regsite
(ng)
166,9
92,8
152,7
135,6

Optilan Blue

Gradul de
recuperare
Mediab SDc
(%)

RSD
(%)

104,3 6,0
58,0 6,9
95,4 9,4
84,7 6,0

5,7
11,8
9,9
7,0

Media
cantitii
regsite
(ng)
175,2
128,8
139,7
162,6

Gradul de
recuperare
Media SD
(%)
109,5 3,3
80,5 5,4
87,3 9,8
101,6 8,8

RSD
(%)
3,0
6,7
11,2
8,7

Media cantitii regsite pentru patru extracii; bMedia gradului de recuperare pentru patru extracii; cDeviaia
standard; dDeviaia standard relativ.

Dup cum se poate observa n Tabelul 6.10, cartuele SPE testate au asigurat o bun recuperare
(peste 84%) pentru ambii colorani textili, cu excepia cartuului Strata SAX. Cele mai bune rezultate au
fost obinute pe cartuele Strata NH2 datorit mecanismului polar de retenie a analiilor prin legturi de
hidrogen sau schimb anionic slab. Pentru extraciile pe cartue Strata SAX, gradele de recuperare obinute
au fost foarte sczute, acest fapt fiind o consecin a interaciunilor puternice dintre coloranii textili i
adsorbentul Strata SAX care este o rin puternic schimbtoare de anioni. Pentru adsorbenii Strata C18
au fost obinute valori bune ale gradelor de recuperare datorit interaciunilor non-polare dintre gruprile
funcionale ale coloranilor i adsorbeni. n cazul cartuelor Strata C18-E are loc un mecanism de retenie
non-polar cu suprafaa hidrofobic end-capping, ceea ce minimalizeaz selectivitatea sau elimin
interaciunile polare ale gruprilor silanol. n cartuele Strata C18-U au loc mecanisme de retenie nonpolar primare alturi de interaciuni polare, silanol secundare, crescnd astfel eficiena extraciei i
creterea capacitii de ndeprtare a compuilor hidrofobici care conin grupri hidroxil sau amino
(www.phenomenex.com).
Validarea procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS
Studiul de validare a artat c procedura SPE-LC/ESI(-)-MS/MS elaborat pentru determinarea
celor doi colorani textili, Nylosan Red i Optilan Blue, din probe de ap rezidual indic o bun
liniaritate, cu coeficieni de corelaie peste 0,99, n domeniul de concentraii 1-100 ng mL-1 i limite de
detecie pn la 0,28 ng mL-1. Pentru precizia procedurii, au fost calculate valorile RSD (%) n aceeai zi
(Nylosan Red 0,8-2,6%; Optilan Blue 0,7-2,4%) i n zile diferite (Nylosan Red 1,0-1,4%; Optilan Blue
1,0-2,1%). Rezultatele obinute au demonstrat pentru procedura SPE-LC/ESI(-)-MS/MS elaborat o bun
repetabilitate att n aceeai zi ct i n zile diferite. Studiul de acuratee a indicat grade de recuperare cu
valori n intervalul 92,5-97,7%.
Efectul de matrice a fost evaluat pentru fiecare colorant textil n prob de ap rezidual. Acesta a
fost studiat prin raportul ntre panta curbei de calibrare n solvent i respectiv n matrice, obinndu-se
valori ntre -20% i +20% (Sur i Dunemann, 2004; Kmellr et al., 2008), ceea ce demonstreaz c nu
exist efect de matrice (Copaciu et al., 2012b).
Analiza coloranilor studiai din probe de ap rezidual
Determinarea coloranilor textili n probe de ap rezidual prezint o mare importan pentru
monitorizarea apelor poluate de aceast industrie. Procedura SPE-LC/ESI(-)-MS/MS realizat a fost
aplicat la determinarea din probe de ap rezidual a doi colorani, Nylosan Red i Optilan Blue, des
utilizai la colorarea fibrelor textile. Au fost colectate i analizate dousprezece probe de ap rezidual de
la o staie de tratare unde ajung ape cu potenial coninut de colorani provenii din industria de prelucrare
a fibrelor textile (Tabel 6.15).
Cromatogramele corespunztoare analizei LC/ESI(-)-MS/MS pentru probele monitorizate n data
de 05.02.2011 sunt prezentate n Figura 6.14. Concentraia de 1,84 ng L-1 regsit n efluentul staiei de
tratare arat sensibilitatea metodei elaborate. Rezultatele obinute indic prezena sporadic n urme a
celor doi colorani textili n probele de ap rezidual ceea ce poate fi asociat cu utilizarea lor ocazional n
finisarea textil i cu o bun capacitate de epurare a staiei (Copaciu et al., 2012b).

10

Tabel 6.15. Coloranii textili determinai n probe colectate de la influentul respectiv efluentul
unei staii de tratare a apelor reziduale.
Data recoltrii
05.02.2011
11.03.2011
16.04.2011
14.05.2011
18.06.2011
12.07.2011
26.07.2011
a

Proba de ap
rezidual
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent

Cantitatea (ng L-1)

Nylosan Red
Optilan Blue
81,2
nd
1,8
nd
264,8
nd
nda
nd
nd
nd
nd
nd
24,3
84,0
nd
nd
36,8
116,0
nd
2,7
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd

Nedetectat

Figura 6.14. Cromatogramele LC/ESI(-)MS/MS corespunztoare unei probe de ap din

influent (a), respectiv efluent (b), prelevat de
la o staie de tratare a apelor reziduale.
Colorantul gsit este Nylosan Red:
(a) 81,2 ng L-1 i (b) 1,8 ng L-1.

6.3. Analiza coloranilor textili compleci ai cromului Nylosan Dark Brown,

Lanasyn Dark Brown i Lanasyn Red din ape reziduale prin tehnica LC-MS/MS
6.3.1. Parte experimental. Determinarea coloranilor textili prin tehnica LC-MS/MS
Chimicale i materiale
Coloranii textili azoici compleci ai cromului studiai (Tabelul 4.1) prin metoda LC-MS/MS
elaborat sunt: Nylosan Dark Brown, Lanasyn Dark Brown i Lanasyn Red. Aceti colorani au fost
procurai de la Clariant Produkte. Pentru prepararea probelor i eluia cromatografic s-a utilizat metanol
LC-MS Optigrade (98%, LGC Standards), acetonitril LC-MS Merck, formiat de amoniu (97%) i acid
formic (95%) de la Sigma-Aldrich.

11

Metoda LC/ESI(-)-MS/MS
Determinarea coloranilor textili a fost realizat utiliznd acelai cromatograf de lichide (HPLC
Agilent Serie 1200) cuplat cu un spectrometru de mas (3200 QTrap Applied Biosystems), avnd sursa de
ionizare TurboV n modul negativ prin electropulverizare (LC/ESI(-)-MS/MS). Separarea coloranilor
textili a fost realizat pe o coloan Phenomenex Luna 3u C18 (2) 100A (50 2 mm), termostatat la
40C, prin eluie izocratic cu amestecul metanolacetonitrilap (2 mM formiat de amoniu i 0,2% acid
formic) 47:23:30 (v/v) la un debit de 0,15 mL min-1.
Metoda SPE
Pentru alegerea adsorbentului optim de extracie a celor trei colorani au fost testate aceleai
cartue Strata (C18-U, C18-E, WAX/NH2 i SAX) prezentate anterior. Pentru a cuantifica selectivitatea
adsorbenilor, n 500 mL ap deionizat a fost adaugat o cantitate de 120 ng LR, 200 ng NDB i 200 ng
LDB, urmnd etapele SPE prezentate la subcapitolul 6.1. Extractele obinute cu coninut de colorani
textili au fost aduse la sec i reluate n faz mobil.
Validarea procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS
n scopul validrii procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS pentru cei trei colorani textili au fost
evaluai urmtorii parametri: liniaritatea, limita de detecie i limita de cuantificare, precizia, acurateea i
efectul de matrice.
6.3.2. Rezultate i discuii privind determinarea coloranilor textili prin
tehnica LC-MS/MS
Analiza LC/ESI(-)-MS/MS
Pentru selectarea tipului de ionizare, coloranii au fost supui att unei ionizri negative ct i
unei ionizri pozitive, fiind aleas ionizarea prin electropulverizare n modul negativ. Pentru stabilirea
condiiilor MRM, au fost preparate soluii din fiecare colorant n acetonitril (400 ng mL -1). Ionul
precursor a fost obinut prin scanarea coloranilor n quadrupol 1, urmat apoi de scanarea n quadrupol 3
pentru obinerea ionilor produi. Obinerea parametrilor optimi dependeni de fiecare colorant a fost
realizat utiliznd metoda infuziei, astfel c din fiecare colorant au fost preparate soluii standard i
injectate direct n spectrometrul MS prin infuzie continu cu un debit de 5 L min -1. Parametrii
dependeni de surs au fost obinui prin FIA utiliznd o capilar de restricie i un debit de 200 L min -1.
Soluiile standard cu un coninut de 400 ng mL-1, din fiecare colorant preparat n faza mobil au fost
injectate n sistemul LC/ESI(-)-MS/MS.
Cromatograma corespunztoare metodei LC/ESI(-)-MS/MS pentru amestecul standard utilizat n metoda
MRM, este prezentat n Figura 6.18.

12

Figura 6.18. Cromatograma LC/ESI(-)-MS/MS a

amestecului standard al celor trei colorani textili
studiai:
Lanasyn Red, tR = 3,75 min (100 ng mL-1);
Lanasyn Dark Brown, tR = 4,34 min (300 ng mL-1);
Nylosan Dark Brown, tR = 4,79 min (50 ng mL-1).

Metoda SPE
Eficiena cartuelor testate a fost estimat prin compararea gradelor de recuperare ale coloranilor
eluai pe fiecare tip de cartu. Fiecare extracie a fost repetat de patru ori i a fost calculat RSD (%)
pentru fiecare cartu testat. Gradele de recuperare sunt date n Tabelul 6.17. Cartuele Strata NH2 i Strata
SAX nu au asigurat o bun recuperare pentru coloranii NDB i LDB n comparaie cu cartuele Strata
C18 unde rezultatele au fost mai bune. Referitor la adsorbenii Strata C18 testai, au fost obinute valori
bune ale gradelor de recuperare peste 80% pentru coloranii NDB i LDB datorit interaciunilor nonpolare ntre gruprile funcionale ale coloranilor i adsorbeni. Cele mai bune rezultate au fost obinute pe
cartuele Strata C18-E (grade de recuperare de 100%), cu excepia colorantului Lanasyn Red (70%).
Pentru cartuele Strata C18-U au fost obinute grade de recuperare peste 80% pentru NDB i LDB, avnd
loc mecanisme de retenie primare non-polar combinate cu interaciuni secundare silanol polare, crescnd
astfel eficiena extraciei. n cazul cartuului Strata NH2, datorit mecanismului polar de retenie a
analiilor prin legturi de hidrogen sau schimb anionic slab, coloranii au fost parial reinui (45,5% NDB
i 58,8% LDB).
Pentru extraciile pe cartue Strata SAX, coloranii NDB i LDB au fost reinui foarte puternic pe
adsorbent i nu au mai putut fi eluai, aceasta fiind o consecin a interaciunilor puternice ntre coloranii
textili i adsorbentul cartuului Strata SAX, o rin puternic schimbtoare de anioni.

13

Tabel 6.17. Gradele de recuperare ale coloranilor textili studiai pe cele patru tipuri de cartue testate.
Nylosan Dark Brown
Cartu

Cantitate
adugat
(ng)

Mediaa
cantitii
regsite

Lanasyn Dark Brown

Gradul de
recuperare
b

RSD
c

Cantitate
adugat
(ng)

Media
cantitii
regsite
(ng)

(%)

(ng)

Media SD
(%)
45,5 1,3

2,8

200

117,7

nd

200

nd

Strata NH2

200

91,1

Strata SAX

200

nde

Strata C18-U

200

166,8

83,4 3,1

3,8

200

170,5

Strata C18-E

200

187,2

93,6 4,3

4,6

200

204,8

nd

Gradul de
recuperare
Media SD

Lanasyn Red

RSD
(%)

Cantitate
adugat
(ng)

(%)
58,8 3,3

Mediaa
cantitii
regsite
(ng)

Gradul de
recuperare
Media SD
(%)

5,6

120

89,2

74,3 1,0

1,4

nd

120

83,8

69,8 1,5

2,1

85,2 2,0

2,4

120

80,6

67,1 1,0

1,4

102,2 3,4

3,3

120

85,2

71,0 1,2

1,6

nd

Media cantitii regsite pentru patru extracii; Media gradului de recuperare pentru patru extracii; Deviaia standard; Deviaia standard relativ; Nedetectat.

14

RSD
(%)

Validarea procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS

Studiul de validare a demonstrat c procedura SPE-LC/ESI(-)-MS/MS elaborat pentru
determinarea celor trei colorani azoici compleci ai cromului din probe de ap rezidual demonstreaz o
bun liniaritate (r>0,99) pe ntreg domeniul de concentraie 1-100 ng mL-1 pentru colorantul Lanasyn Red
i 50-300 ng mL-1 pentru coloranii Nylosan Dark Brown i Lanasyn Dark Brown.
Precizia procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS elaborate a demonstrat o bun repetabilitate prin
calculul valorilor RSD (%) n aceeai zi / n zile diferite: 0,66-1,4% / 0,84-1,5% pentru Nylosan Dark
Brown; 0,63-1,6% / 0,82-1,2% pentru Lanasyn Dark Brown i 1,0-2,3% / 1,1-1,2% pentru Lanasyn Red.
Studiul de acuratee realizat pentru cei doi colorani textili identificai (NDB i LR) n proba de
ap rezidual a indicat grade de recuperare cu valori cuprinse ntre 93,1-99,7%.
Efectul de matrice a fost evaluat pentru fiecare colorant textil din proba de ap rezidual prin
raportul ntre panta curbei de calibrare n solvent i n matrice. Valorile obinute, cuprinse n intervalul 20% i +20% (Sur i Dunemann 2004; Kmellr et al., 2008), indic absena efectului de matrice.
Analiza coloranilor textili studiai din probe de ap rezidual
Procedura SPE-LC/ESI(-)-MS/MS descris a fost aplicat pentru determinarea coloranilor
Nylosan Dark Brown, Lanasyn Dark Brown i Lanasyn Red din probe de ap rezidual din influenii i
efluenii unei staii de tratare a apelor reziduale din apropierea unei fabrici de prelucrare a fibrelor textile.
Dousprezece probe de ap au fost colectate de la o staie de tratare a apelor reziduale, i apoi analizate
prin procedura elaborat. Rezultatele sunt prezentate n Tabelul 6.22.
Tabel 6.22. Cantitatea de colorani textili studiai din probe prelevate de la influentul, respectiv efluentul
unei staii de tratare a apelor reziduale.
Data recoltrii
19.02.2011
26.03.2011
30.04.2011
27.05.2011
4.06.2011
23.07.2011

Proba de
ap
rezidual
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent
Influent
Efluent

Nylosan
Dark Brown
150,1
22,8
nd
nd
nd
nd
24,3
nd
nd
nd
nd
nd

Cantitatea (ng L-1)

Lanasyn
Dark Brown
nda
nd
nd
nd
200,6
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd

Lanasyn Red
156,0
74,0
89,0
nd
nd
nd
183,0
89,6
244,0
nd
nd
nd

n urma analizelor efectuate, n influenii staiei de tratare au fost gsite concentraii cuprinse ntre
24,3-244,0 ng L-1 pentru cei trei colorani textili compleci ai cromului, iar n efluenii corespunztori
influenilor concentraii cuprinse ntre 22,8-89,6 ng L-1. Cromatograma corespunztoare analizei LC/ESI()-MS/MS a probei de ap rezidual influent din data de 4.06.2011 este prezentat n Figura 6.22 i indic
prezena colorantului Lanasyn Red n concentraia de 244,0 ng L-1.
Rezultatele acestei monitorizri arat c prezena n probele de ap rezidual a celor trei colorani
textili azoici, compleci ai cromului, poate fi asociat cu utilizarea lor ocazional n finisarea textil.
15

Coloranii textili determinai n urme (valori maxime de 90 ng L-1) n efluenii de la staia de tratare
arat o bun epurare a acestor ape care sunt apoi deversate n mediu.

Figura 6.22. Cromatograma LC/ESI(-)-MS/MS

corespunztoare unei probe de ap din influent
de la o staie de tratare a apelor reziduale.
Colorantul gsit Lanasyn Red: 244,0 ng L-1.

7. Studii ecotoxicologice privind aciunea coloranilor textili asupra plantelor de

Triticum aestivum L.
Pentru a cunoate efectele coloranilor textili investigai n aceast cercetare asupra diferitelor
performane din plante, n scopul identificrii i evalurii rapide a toxicitii acestora, au fost studiate
efectele a doi colorani antrachinonici (Optilan Blue i Lanasyn Blue) i a patru colorani azoici (Lanasyn
Red, Nylosan Red, Nylosan Dark Brown i Lanasyn Dark Brown) la dou concentraii diferite (0,5 mg L-1
i 1,5 mg L-1) asupra plantelor de gru (Triticum aestivum L. soiul Lovrin). Au fost evaluate efectele
privind fotosinteza frunzei, pigmenii asimilatori, metaboliii secundari volatili (emisii de produi de
oxigenare sub aciunea lipoxigenazei i emisii de monoterpene) i metaboliii secundari nevolatili
(flavonoidele).
7.1. Triticum aestivum L. i stresul aplicat
n acest studiu au fost utilizate semine de gru, soiul Lovrin, achiziionate de la Fundulea,
Romnia. Experimentele au fost realizate n vase de plastic, utiliznd pmnt comercial, peste care a fost
adugat n prealabil fertilizator cu microelemente (Biolan, Finlanda). Seminele de gru au fost plantate la
o adncime de 1 cm n pmnt. Plantele au fost crescute n condiii controlate, ntr-o camer de cretere
(0,29 m2, 0,42 m) Percival (IA, USA), la o intensitate a luminii de 1000 mol m-2 s-1 furnizat timp de 12
ore i o temperatur zi/noapte, 25C/18C.
Asupra plantelor de Triticum aestivum L. a fost aplicat un stres abiotic prin tratarea acestora cu
colorani textili (Tabel 4.1), doi antrachinonici (Optilan Blue i Lanasyn Blue) i patru azoici (Lanasyn
Red, Nylosan Red, Nylosan Dark Brown i Lanasyn Dark Brown). Experimentul a nceput atunci cnd a
doua frunz a ajuns la jumtate din capacitatea ei de cretere (faza de cretere Zadoks 1,2 (Zadoks et al.,
1974)), la 14 zile dup ce plantele au fost semnate. Plantele au fost udate periodic cu soluii apoase din
coloranii textili OB, LB, LR, NR, NDB i LDB la dou concentraii, 0,5 mg L-1 i respectiv 1,5 mg L-1,
iar plantele control au fost tratate cu ap distilat. Primele msurtori au fost realizate dup 7 zile de la
nceperea tratamentului, cnd plantele au fost tratate cu un volum total de 0,5 L per colorant. Urmtoarele
16

msurtori au fost realizate dup alte 7 zile, adic dup 14 zile de la nceperea tratamentului, cnd
plantele au fost tratate cu un volum total final de 1 L soluie per colorant.

7.2. Analiza parametrilor fotosintetici din plantele de gru tratate cu coloranii textili
luai n studiu
7.2.1. Msurarea parametrilor fotosintetici
Monitorizarea parametrilor fotosintetici ai plantelor tratate cu colorani textili a fost realizat prin
schimbul de gaze, utiliznd sistemul portabil GFS 3000 (3000 Portable Gas Exchange System, Walz,
Effeltrich, Germany). Acest sistem prezint o cuv, cu mediu controlat, care este prevzut cu o fereastr
de 8 cm2 n care este introdus frunza. Cuva este prevzut cu o camer fluorimetric pentru iluminarea
probei, unde sunt realizate msurtorile fluorescenei clorofiliene. Msurtorile au fost realizate n
urmtoarele condiii experimentale: 385 mol mol-1 concentraia CO2, 1000 mol m-2 s-1 intensitatea
luminoas, 25C temperatura din cuv, 70% umiditatea relativ i 750 mol s-1 debitul de aer.
Frunza a fost nchis n cuv, lsat s se stabilizeze pn la starea de echilibru i apoi
determinate valorile pentru viteza de asimilaie net a CO2 (A) i conductana stomatal de vaporizare a
apei (gs) care au fost calculate conform ecuaiilor date de von Caemmerer i Farquhar (1981).
7.2.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra
parametrilor fotosintetici ai plantelor de gru
Rezultate
Pentru tratamentul cu 0,5 L soluie / colorant textil, nu au fost observate diferene semnificative n
viteza de asimilaie net (A), ntre cele dou concentraii aplicate (0,5 mg L-1 i 1,5 mg L-1) i control (Fig.
7.3a). n contrar, sub condiii de stres sever (1 L soluie colorant 1,5 mg L-1), viteza de asimilaie net
scade semnificativ de la 19,6 0,3 mol m-2 s-1, valoare obinut pentru control, la valorile 17,1 0,8
mol m-2 s-1 pentru colorantul OB, 16,6 0,2 mol m-2 s-1 pentru colorantul LR i 15,8 0,3 mol m-2 s-1
pentru colorantul NR (Figura 7.3b). Viteza de asimilaie net scade odat cu creterea volumului de
soluie de NR pentru concentraia de 0,5 mg L-1.
Pentru conductana stomatal de vaporizare a apei a fost observat o scdere fa de control, doar
n cazul tratamentului cu colorantul NDB, dup ce plantele au fost tratate cu un volum de 0,5 L la
concentraia de 1,5 mg L-1 (Figura 7.3c). Dup ce plantele de gru au fost tratate cu 1 L soluie per
colorant azoic, avnd concentraia de 1,5 mg L-1, media conductanei stomatale (SE) scade pn la 68
5% pentru LR, 65,3 2,2% pentru NR, 65,7 3,9% pentru NDB i 77,3 2,5% pentru LDB fa de
control (Figura 7.3d).

17

0.5 L

30
25

A
-2 -1
(mol m s )

1L

-1

0.5 mg L
-1
1.5 mg L

20

15

&*

10
5
0

tro

on

500 C

ue

Bl

ue

n
sy

n
n
ila asy-1 a
pt
n
O 0.5Lmg
an L -1La
1.5 mg L

gs

-2

-1

(mmol m s )

400

Bl

ed wn own
R
r
ro
an k B rk B
s
r
a
ly o
a
D
D
N
n
yn
sa
as
ylo Lan
N
ed

l
n
d
e
e
ed Re own ow
tro
lu
lu
R
r
r
on n B n B
n
B
n
B
a
C
k
sy
ila asy
os ark
ar
pt
na Nyl
D
n
D
O
n
La
n
La
y
sa
as #
#
ylo# Lan#
N

300

d
*

200
100
0

n
wn
ow
ro
n
Br k B
n
n
C
y
y
a
k
s
il
ar
as ylo
ar
pt
D
na an
D
N
O
L
n
La
yn
a
s
s
a
ylo Lan
N
tro

on

Bl

ue

Bl

ue

ed

n
sa

ed

on

tro

n
i la

Bl

ue

pt
na
O
La

n
sy

Bl

La

ue

na

n
sy

n
n
ow
ow
Br
k
k
ar
ar
yl
D
D
N
n
yn
a
s
os
na
yl
La
N
R

ed

a
os

ed

Br

Figura 7.3. Modificri n viteza net de asimilaie (A) (a i b) i conductana stomatal de vaporizare a
apei (gs) (c i d), pentru frunzele de Triticum aestivum L., soiul Lovrin, plante care au fost tratate cu ase
soluii de colorani textili, la dou concentraii diferite 0,5 mg L-1 respectiv 1,5 mg L-1. Msurtorile au
fost realizate dup ce plantele au fost tratate cu un volum total de soluii de colorani textili 0,5 L (a i c)
i 1 L (b i d). Fiecare valoare este media ( SE) a trei experimente replicat realizate independent cu
plante diferite. Simbolurile din grafice reprezint:
* = diferene statistice semnificative (P<0,05) ntre tratamentul cu colorani textili i control; & =
diferene semnificative ntre volumele soluiilor de colorani textili utilizate pentru tratamentul plantelor
(0,5 L respectiv 1 L), pentru aceeai concentraie (0,5 mg L-1 sau 1,5 mg L-1), i # = diferene
semnificative ntre cele dou concentraii aplicate (0,5 mg L-1 i 1,5 mg L-1) pentru acelai volum de
soluie de colorant textil utilizat pentru udarea plantelor (0,5 L sau 1 L).
Discuii
Fotosinteza este un proces biologic fundamental din plant, care uneori poate fi afectat de factorii
de stres biotic sau abiotic (Mittler, 2006). n acest studiu au fost aplicate concentraii reale care pot fi
observate n mediu (ahin et al., 2007; Copaciu et al., 2012a,b). Aceti colorani textili studiai dar i
concentraiile care au fost aplicate au condus la efecte negative semnificative asupra vitezei de asimilaie
net din frunzele plantelor de gru (Figura 7.3a i 7.3b). n cazul coloranilor LR i NDB care sunt
compleci ai cromului, procesul de fotosintez a fost redus semnificativ fa de control. Cromul este
cunoscut ca factor care afecteaz n mod negativ fotosinteza plantelor, dar mecanismul nu este nc bine
neles (Shanker et al., 2005, 2009). Cromul poate aciona nespecific prin inducerea stresului oxidativ,
afectnd n final procesul de fotosintez (Ali et al., 2011; Dey et al., 2009). ntr-un studiu recent a fost
emis ipoteza unor interaciuni ntre cromul valent i efectul acestuia asupra procesului de fotosintez
(Lopez-Luna et al., 2009). Inhibarea de ctre Cr(IV) a transportului de electroni n procesul de fotosintez
i devierea de electroni din partea donoare de electroni a fotosistemului I, a condus la o scdere a vitezei
18

de asimilaie n plantele tratate cu colorani azoici care conin n structura lor Cr (Diwan et al., 2012). Cu
toate acestea trebuie luat n considerare, faptul c n toate aceste studii de literatur concentraiile aplicate
au fost mult mai mari n comparaie cu concentraiile aplicate de noi n acest studiu. De exemplu
Rodriguez et al. (2012) au demonstrat o scdere a vitezei de asimilaie mai mic de 0,4 mol m-2 s-1, n
plantele de Pisum sativum expuse la 2000 mg L-1 Cr.
Toi coloranii azoici la concentraia de 1,5 mg L-1 au redus semnificativ conductana stomatal de
vaporizare a apei (Figura 7.3c i 7.3d). Acest lucru este n concordan cu rezultatele obinute de
Chatterjee and Chatterjee (2000) pe plante de Brassica oleracea i de Ali et al. (2011) pe plante de
Hordeum vulgare, ca rspuns la tratamente cu sruri de crom.
Astfel de scderi ale conductanei stomatale de vaporizare a apei, n plante, datorit stresului
abiotic indus de metale grele au fost asociate cu reducerea activitii apei din stomat (Eckert et al., 1999;
Kholodova et al., 2011). Mai mult, reducerea conductanei stomatale este un rspuns la stresul tipic
declanat de concentraiile crescute ale hormonului de stres acid abscisic, care este un reglator de baz al
rspunsului plantelor la factorii de stres, cretere i dezvoltare (Antoni et al., 2011).

7.3. Analiza unor metabolii secundari volatili (LOX-uri i monoterpene) emii de

plantele de gru tratate cu coloranii textili luai n studiu
7.3.1. Prelevarea i analiza unor LOX-uri i a unor monoterpene
Prelevarea compuilor organici volatili (Volatile Organic Compounds, VOC) a fost realizat
utiliznd acelai sistem bazat pe schimbul de gaze, ca i n cazul msurtorilor parametrilor fotosintetici.
Prelevarea VOC-urilor a avut loc prin intermediul cuvei, prin legarea unei pompe (1003-SKC, SKC Inc.,
Houston, USA) cu flux de aer constant la sistemul schimbtor de gaze, cu un debit de 200 mL min-1, timp
de 15 min. Prelevarea a avut loc dup stabilirea strii de echilibru i dup obinerea valorilor parametrilor
caracteristici schimbului de gaze. Aerul colectat a fost trecut printr-un cartu de oel inoxidabil (10,5 3
cm, Supelco, Bellefonte, USA) umplut cu adsorbent Carbopack (C 20/40 mesh, C 40/60 mesh, and X
20/40 mesh) optimizat pentru reinerea produilor de oxigenare sub aciunea lipoxigenazei (Lipoxygenase
pathway products, LOX) i monoterpenelor, n vederea analizei cantitative (Copolovici et al., 2009;
Niinemets et al., 2010; Niinemets et al., 2011).
7.3.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra emisiei de
LOX-uri i monoterpene de ctre plantele de gru
Rezultate
Pentru a avea o perspectiv privind efectele coloranilor textili asupra plantelor de gru au fost
evaluate emisiile de produi de oxigenare sub aciunea lipoxigenazei i monoterpenele. Emisiile de LOXuri monitorizate din frunzele verzi ale grului, sub condiii de stres abiotic prin tratarea plantelor cu
colorani textili sunt: 1-hexanol, (Z)-3-hexenol, (Z)-2-hexenal i (Z)-3-acetat de hexenil. Monoterpenle
detectate sunt: -pinen, -pinen, camfen, limonen, 3-caren, p-cimene i -felandren. Deoarece nu au fost
observate modele diferite calitativ pentru compuii singuri ai unei clase date, n continuare vor fi
prezentate rezultatele nsumate pentru emisiile de LOX-uri i monoterpene.
19

Totalul emisiilor de LOX-uri (LOX) i cel de monoterpene (monoterpene) au fost mult mai reduse n
plantele control fa de plantele tratate cu colorani textili (Figura 7.5).

0.5 mg L

-1

1.5 mg L

0.8

-1

a
#
&

LOX (nmol m

*
#

0.4

* *
&

&

&

&

0.6

&
* *

-2

-1

s )

1L

0.5 L

1.0

0.2

0.0

ro

-2

-1

monoterpene (nmol m s )

1,5

1,0

ro
nt

d
ue Red
Re
n
wn
n
ow
ro
yn osa
yn
s
i
s
Br rk B
t
l
a
a
p
y
k
n
n
r
a
N
O
La
La
Da n D
an
sy
los ana
y
L
N
*
nt

Co

lan

Bl

ue

Bl

*
*
* *

d
ue
ue Red
Re
n
Bl
wn
Bl
n
n
an
ow
n
ro
y
s
y
s
it la
s
Br rk B #
lo
a
a
p
y
k
n
n
r
a
N
O
La
La
Da n D
*&
an
sy *
los ana
y
L *
N

Co

0,5

0,0

l
n
d
e
e
ed Re own ow
tro
lu
lu
R
r
r
on n B n B
n
an k B rk B
C
y
y
a
s
l
s
s
i
r
a
a
pt
ylo Da
D
na an
N
O
n
L
La
an asy
s
ylo Lan
N

l
n
d
e
e
ed Re own ow
tro
lu
lu
R
r
on n B n B
n
n
Br k B
a
C
y
y
a
s
k
s
il
ar
as ylo
ar
pt
D
na an
D
N
O
L
n
La
yn
a
s
s
a
ylo Lan
N

Figura 7.5. Modificri n emisia de produi de oxigenare sub aciunea lipoxigenazei (LOX) (a i b) i
emisia de monoterpene (c i d), din frunzele de Triticum aestivum L., ca rspuns la tratamentul cu ase
soluii de colorani textili, la dou concentraii 0,5 mg L-1 i 1,5 mg L-1. Msurtorile au fost realizate
dup ce plantele au fost tratate cu un volum total de soluii de colorani textili 0,5 L (a i c) i 1 L (b i d).
Semnificaia statistic este aceeai din Figura 7.3.
Dup ce plantele au fost tratate cu un volum de 0,5 L soluii colorani textili azoici, au fost
observate creteri ale emisiei totale de LOX-uri, cu o medie de peste 122%, n cazul concentraiei de 1,5
mg L-1 (Figura 7.5a). Pentru acelai tratament i aceeai concentraie, coloranii antrachinonici nu
influeneaz emisia de LOX-uri (P0,1).
Rezultatele obinute n urma stresului abiotic indus de toi coloranii textili investigai (1,5 mg L-1
pentru volumul de 1 L), arat o cretere drastic a emisiei totale de LOX-uri pn la niveluri de 0,54
0,10 nmol m-2 s-1 (OB), 0,67 0,23 nmol m-2 s-1 (LB), 0,77 0,08 nmol m-2 s-1 (LR), 0,43 0,11 nmol m2 -1
s (NR), 0,72 0,16 nmol m-2 s-1 (NDB) i 0,73 0,03 nmol m-2 s-1 (LDB). Pentru acelai volum, dar la
concentraia de 0,5 mg L-1, a fost observat o cretere a emisiei totale de LOX-uri doar n cazul
coloranilor textili azoici (P<0,05). La tratamentul cu un volum de 1 L de colorani (1,5 mg L-1 LB; 0,5
mg L-1 LR; 0,5 mg L-1 NR; 0,5 mg L-1 i 1,5 mg L-1 NDB; 0,5 mg L-1 LDB), emisia total de LOX-uri a
crescut semnificativ n comparaie cu tratamentele pentru aceleai concentraii, dar la volumul de 0,5 L
(Figura 7.5b i 7.5a).
n cazul emisiei totale de monoterpene, n urma tratamentului cu volumul de 0,5 L la concentraia
de 1,5 mg L-1, au fost observate creteri semnificative n cazul tuturor tratamentelor cu colorani textili
azoici. Pentru acelai volum aplicat n timpul tratamentului, dar la o concentraie mai sczut (0,5 mg L-1)
au fost observate creteri semnificative doar n cazul coloranilor azoici NDB i LDB (Figura 7.5c). La
20

volumul de 1 L soluii de colorani azoici investigai, rezultatele arat creteri a emisiei totale de
monoterpene pentru coloranii NR, NDB i LDB la ambele concentraii testate (0,5 mg L-1; 1,5 mg L-1).
Creterea emisiei de monoterpene a fost mai sever pentru colorantul azoic LDB la concentraia de 1,5
mg L-1 n comparaie cu concentraia mai mic (0,5 mg L-1) utilizat n acelai tratament (1 L) (Figura
7.5d).
Discuii
Au fost evaluate emisiile de LOX-uri i monoterpene, ca rspuns al plantelor la stresul abiotic
indus de coloranii textili investigai. LOX-urile volatile sunt formate din acizi grai polinesaturai care
sunt eliberai de membranele plantelor n timpul stresului (Feussner i Wasternack, 2002). Emisiile de
LOX-uri n concentraii mai mari dect cele normale, semnaleaz un factor de stres asupra plantei cum ar
fi de exemplu stresul la cldur i frig (Copolovici et al, 2012), secet (Permyakova et al., 2012), ozon
(Beauchamp et al., 2005), sau lumin puternic (Loreto et al., 2006). n studiul nostru a fost demonstrat
faptul c emisiile de LOX-uri au fost induse de coloranii textili (Figura 7.5), indicnd c tratamentul cu
aceti colorani induc un stres sever plantelor de gru. Emisiile de LOX-uri au fost evidente nc de la
tratamentul cu concentraia i volumul de soluii de colorani textili cel mai sczut (0,5 mg L1; 0,5 L)
(Figura 7.5a), crescnd n continuare o dat cu creterea condiiilor de stres (Figura 7.5b). Aceste rezultate
sugereaz faptul c emisiile de LOX-uri pot fi considerate bioindicatori n condiii de stres sau poluare cu
colorani provenii din industria de prelucrare a fibrelor textile.
n ceea ce privete emisiile de monoterpene, este cunoscut faptul c frunzele de Triticum
aestivum L. nu emit monoterpene n condiii fiziologice (Kesselmeier i Staudt, 1999). Acest lucru a fost
demonstrat i n cazul nostru, pentru plantele de control, unde emisiile de monoterpene au fost foarte
mici, aproape de limita de detecie. Cu toate acestea, cele mai importante emisii de monoterpene pentru
diferite specii de plante, sunt induse de factorii de stres biotic sau abiotic (Loreto i Schnitzler, 2010;
Niinemets, 2010).
n studiul nostru, tratamentul aplicat plantelor de gru cu soluii de colorani textili, a crescut
emisia de monoterpene, dar nu au existat diferene statistice ntre cele dou concentraii de colorani
aplicate (Figura 7.5c i 7.5d). Acest rspuns care nu este dependent de doza de colorani, ar putea indica
un rspuns de tip prag, la care plantele ncep s emit monoterpene (Niinemets, 2010). Monoterpenele se
formeaz n plastidele din plante pe calea MEP (2-C-metil-D-eritritol 4-fosfat) (Lichtenthaler, 1999;
Nagegowda, 2010), dar pe aceast cale se formeaz i carotenoizii i fitolul ataat moleculei de clorofil.
Stresul aplicat plantelor de gru a condus la emisii de monoterpene, care indic o deplasare a cii MEP
ctre sinteze de monoterpene, ns stresul cel mai sever a condus la reducerea semnificativ a coninutului
de carotenoizi (Figura 7.8).

21

7.4. Analiza unor pigmeni asimilatori (clorofile i carotenoizi) din plantele de gru tratate
cu coloranii textili luai n studiu
7.4.1. Extracia i analiza pigmenilor clorofilieni i carotenoizi din plantele de gru
Extracia pigmenilor
Pigmenii fotosintetici investigai n acest studiu privind stresul abiotic indus de coloranii textili
asupra plantelor de gru au fost: pigmenii clorofilieni (clorofila a i clorofila b) i pigmenii carotenoizi
(-caroten, zeaxantin i luteina).
Extracia pigmenilor clorofilieni i carotenoizi a fost realizat dup protocolul urmat de
Niinemets et al. (1998), cu unele modificri. Dup msurarea parametrilor fotosintetici, 3 cm2 de frunz
verde au fost ngheai n azot lichid. Pigmenii de interes au fost extrai pe baie de ghea, la ntuneric, n
prezen de carbonat de magneziu i aceton (Sigma Aldrich). Din probele astfel obinute, pigmenii de
interes au fost extrai prin centrifugare (0C, 3 min) repetat cu volume diferite de aceton pn ce
reziduul a rmas incolor. Extractele supernatante au fost unite i aduse ntr-un volum final de 1 mL
aceton, i apoi filtrate prin filtre PTFE 0,45 m.
Analiza pigmenilor clorofilieni i carotenoizi prin cromatografia de lichide
de nalt performan
Determinarea pigmenilor clorofilieni i carotenoizi a fost efectuat utiliznd un cromatograf de
lichide de nalt performan Agilent 1200 (Agilent Technologies) echipat cu detector DAD. Separarea
pigmenilor a fost realizat utiliznd o coloan cromatografic cu faz invers Zorbax Eclipse XDB-C18
(4,6 mm i.d. 150 mm, 5 m, Agilent Technologies), termostatat la 10 0,1C i un sistem de eluie
binar, ap ultrapur cu HEPES (0,1 M; pH = 8) (solventul A) i aceton (solventul B). Separarea
pigmenilor clorofilieni i carotenoizi a fost realizat prin eluie cu gradient: 7,5 min amestec 25% solvent
A i 75% solvent B, dup care n 9,5 min se ajunge la 100% solvent B, rmnnd timp de 3 min dup care
n 2 min se revine la condiiile iniiale (25% solvent A i 75% solvent B) sub care se echilibreaz coloana
cromatografic timp de 8 min. Pigmenii au fost eluai cu un debit de 1,5 mL min-1 (Niinemets et al.,
1998).
Detecia HPLC a fost realizat simultan la mai multe lungimi de und, corespunztoare
maximului de adsorbie pentru fiecare pigment investigat. Clorofila a a fost msurat la 430 nm, iar
ceilali pigmeni, clorofila b, -carotenul, zeaxantina, respectiv luteina la 455 nm.
Pentru evaluarea cantitativ a acestor pigmeni din frunzele plantelor de gru, au fost trasate
curbele de calibrare pentru clorofila a, clorofila b i -caroten utiliznd etaloane Sigma Aldrich, i pentru
zeaxantin i lutein etaloane Fluka.
7.4.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra coninutului de
pigmeni clorofilieni i carotenoizi din plantele de gru
Rezultate
Dup tratarea plantelor de gru cu 0,5 L soluie de colorant, rezultatele obinute nu arat diferene
statistice ntre coninutul total de clorofil a i clorofil b i raportul a/b al acestora pentru ambele
concentraii aplicate (Figurile 7.8a i 7.8c). Dup mrirea volumului de tratament la 1 L soluie de
22

colorant, rezultatele arat o reducere semnificativ a coninutului total de clorofile, mai ales pentru
concentraia mare (1,5 mg L-1, Figura 7.8b) i o cretere a raportului clorofila a/b (Figura 7.8d).
0.5 L
-1

-2

Clorofila a+b (mg m )

500

1L

0.5 mg L
-1
1.5 mg L

b
#

400
*&

*&

*&

*&

300
200
100
0

Clorofila a/b

# *&

*&

*&

*&
*&

*&

*&

*&

4
3
2
1
0
on

tro

n
i la

Bl

ue

pt
na
O
La

n
sy

Bl
La

ue

na

n
sy

n
d
ed Re own ow
R
r
r
n
B
sa rk B rk
a
ylo Da
D
N
n
yn
a
s
s
a
ylo Lan
N

ol

ntr

d
d
lue
lue Re
Re
n
wn
n B yn B yn
an
ow
ro
a
s
l
s
i
s
Br rk B
t
lo
a
a
p
y
k
n
n
N
O
ar
La
Da
La
n D yn
sa nas
o
l
La
Ny

Co

Figura 7.8. Modificri n coninutul de clorofila a i b, din frunzele de Triticum aestivum L., ca rspuns la
tratamentul cu ase soluii de colorani textili, la dou concentraii 0,5 mg L-1 i 1,5 mg L-1. Msurtorile
au fost realizate dup ce plantele au fost udate cu un volum total de soluii de colorani textili 0,5 L (a i
c) i 1 L (b i d). Semnificaia statistic este aceeai din Figura 7.3.
Coninutul de pigmeni carotenoizi investigai (zeaxantin, lutein i -caroten) din plantele de
gru nu a fost afectat (Figura 7.9a) n cazul tratrii acestora cu un volum de 0,5 L soluie de colorant
textil, de concentraie 0,5 mg L-1. n cazul tratrii plantelor de gru cu 0,5 L soluie colorant de
concentraie 1,5 mg L-1, are loc o scdere semnificativ a coninutului de lutein i -caroten fa de
control n cazul tuturor tratamentelor cu colorani textili (Figura 7.9b). Dup tratamentul cu un volum de
1 L soluie colorant, pentru concentraia 0,5 mg L-1 se observ o scdere a coninutului de -caroten n
cazul tuturor coloranilor textili azoici (Figura 7.9c). Pentru acelai volum de 1 L, dar o concentraie de
colorant de 1,5 mg L-1, rezultatele statistice obinute arat o scdere a coninutului pentru toi carotenoizii
investigai fa de plantele control (Figura 7.9d). Se poate constata un efect toxic mai sever n cazul
coloranilor textili azoici (Figura 7.9d) datorit scderii de pn la ~ 27 mg m-2 a coninutului de -caroten
(media SE; 26,7 1,4 mg m-2) n comparaie cu coloranii antrachinonici unde scderea n -caroten a
fost doar de pn la ~ 34 mg m-2 (media SE; 34,1 0,6 mg m-2).
Discuii
Deoarece principalii pigmeni responsabili pentru absorbia luminii n procesul de fotosintez
sunt clorofilele, sensibilitatea la stres a unei plante este evaluat prin coninutul de clorofil (Modziska,
2009). Urmrind literatura de specialitate, mai multe studii au demonstrat scderi ale coninutului de
23

clorofil din diferite specii, sub impactul metalelor grele (Subrahmanyam, 2008; Vernay et al., 2007;
Zengin i Munzuroglu, 2005). Efectele coloranilor textili asupra clorofilelor din plante sunt mai puin
cunoscute. Au fost observate scderi ale coninutului de clorofile, ca rspuns a plantelor de Cicer
arietinum la tratamentul cu eflueni textili cu coninut de colorani (Garg and Kaushik, 2006). n studiul
realizat de noi, coninutul de clorofile a sczut progresiv o dat cu creterea volumului i a concentraiei
de colorani textili (Figura 7.8.a i 7.8.b). Cele mai drastice scderi au fost observate n cazul coloranilor
azoici care conin n structura lor crom.
0.5 L

60

0.5 mg L

Zeaxanthin
Lutein
Beta-caroten

50

Carotenoizi
-2
(mg m )

1L
-1

-1

0.5 mg L

40

30
20
10

30

20

l
ro
on
t

La
B
na
lu
sy e
La n B
na lu
sy e
n
N
N
R
yl
y
lo ed
os
sa
an
n
La
D
R
ed
na ar
sy k B
n
ro
D
w
ar
n
k
B
ro
w
n

40

Carotenoizi
-2
(mg m )

-1

1.5 mg L

on

tro

p
O

til

an

Bl

ue

na

La

n
sy

Bl

ue

na

La

n
sy

n
wn
ow
ro
Br k B
rk
ar
ylo Da
D
N
n
n
y
sa
as
ylo Lan
N
ed

n
sa

ed

l
ro

nt

Co

Op

n
tila

Bl

ue
n
sy

na

La

*
*

10
0

-1

1.5 mg L

i la
n

50

O
pt

C
on
O
pt
t
ila rol
La n B
na
lu
e
sy
La n B
lu
na
sy e
n
N
R
ylo Nyl
e
sa osa d
n
n
La
D
ar Red
na
k
sy
Br
n
o
D
ar wn
k
Br
ow
n

Bl

ue

na

La

n
sy

*
*

d
ed
n
Re n R
wn
a
ow
ro
s
Br rk B
lo
y
k
r
a
N
Da n D
n
y
sa nas
o
l
La
Ny

Figura 7.9. Modificri n coninutul de carotenoizi din frunzele de Triticum aestivum L., ca rspuns la
tratamentul cu colorani textili, la dou concentraii 0,5 mg L-1 i 1,5 mg L-1. Msurtorile au fost realizate
dup ce plantele au fost udate cu un volum total de soluie de colorant textil 0,5 L (a i b) i 1 L (c i d).
Semnificaia statistic este aceeai din Figura 7.3.
Efectul cromului n metabolismul direct al clorofilelor este asociat cu reducerea metalului cofactor n enzimele responsabile pentru sinteza clorofilelor sau ceea ce a urmat indirect prin efectul datorat
scderii Fe din clorofil (Vernay et al., 2007). Raportul clorofila a/b a crescut semnificativ pentru toi
coloranii textili investigai (Figura 7.8d), n special n cazul coloranilor azoici. Acest raport
caracterizeaz distribuia pigmenilor ntre centrele de reacie i lumina necesar maturrii complecilor.
Ca urmare, un raport mare al clorofilelor n frunzele de gru tratate cu colorani textili sugereaz
reducerea luminii necesare maturrii complecilor n centrele de reacie, de ctre fotosistemul II. Aceast
unitate fotosistemic este compus dintr-o mulime de polipeptide dintre care unele sunt componente
intrinseci ale membranei tilacoidale, iar altele sunt ataate la exteriorul suprafeei lumenului (Bercea,
2008).
Carotenoizii sunt un grup de pigmeni galbeni, cu rol important n fotoprotecia plantei, mecanism
care este privit ca o valv de siguran care permite disiparea energiei n exces nainte de apariia daunelor
la nivel celular. n condiiile unei intensiti luminoase ridicate, cloroplastele recepteaz o cantitate de
24

lumin mai mare dect cea necesar n faza de ntuneric, acest fapt conducnd la transferul energiei n
exces la moleculele de oxigen. Se formeaz oxigen activat, concomitent cu anumii radicali liberi care
distrug aparatul fotosintetizator. Carotenoizii au ns rolul de a prelua o parte a energiei excedentare i n
acest mod de a proteja moleculele de clorofil de aciunea distructiv a excesului de lumin (Dobrot,
2010). Cu toate acestea, sub stres sever coninutul de carotenoizi se reduce (Munne-Bosch i Alegre,
2000), dar pe de alt parte stresul abiotic crete n special coninutul de zeaxantin care se formeaz din
violaxantin prin ciclu xantofilic (Demmig-Adams i Adams, 2006).
n studiul nostru, coninutul de lutein i -caroten scade n cazul plantelor de gru tratate cu
colorani textili n comparaie cu plantele de gru control (Figura 7.9). De subliniat c a fost observat un
efect mai puternic asupra plantelor de gru tratate cu colorani textili azoici, ceea ce sugereaz n
continuare c tratamentele cu aceti colorani conduc la un stres mult mai puternic. Coninutul de
zeaxantin a sczut numai la volumul i concentraia cea mai mare aplicat (1 L; 1,5 mg L-1) plantelor.

7.5. Analiza unor metabolii secundari nevolatili (coninutul total de flavonoide) din
plantele de gru tratate cu coloranii textili luai n studiu
Din categoria metaboliilor secundari nevolatili fac parte compuii fenolici care sunt biosintetizai
pe dou ci principale: calea acidului ikimic i calea acidului malonic. O clas important din aceast
categorie sunt flavonoizii (C15) care au rolul de a atrage animalele i insectele pentru polenizare i pentru
dispersia seminelor (Dobrot, 2005).
7.5.1. Extracia i analiza coninutului total de flavonoide din plantele de gru
Extracia coninutului total de flavonoide
Materialul vegetal, aproximativ 3 cm2, a fost mrunit cu azot lichid, peste care au fost adugai 5
mL amestec etanolap 80:20 (v/v). Pentru macerare, extractele au fost pstrate timp de 10 min ntr-un
cuptor (Model UNE 200, Memmert, Schwabach) la 35C, dup care probele macerate au fost ultrasonate
30 min ntr-o baie Bandelin Sonorex la aceeai temperatur. Fiecare extras a fost filtrat printr-o
membran PTFE de 0,45 m i adus la un volum final de 5 mL cu acelai amestec de solveni (Opri et
al., 2011; Soran et al., 2012).
Analiza coninutului total de flavonoide prin tehnica spectroscopiei UV-Vis
Determinarea coninutului total de flavonoide din plantele de gru tratate cu volume diferite de
soluii de colorani textili de concentraii diferite a fost realizat prin tehnica spectroscopiei UV-Vis, cu
ajutorul spectrofotometrului UV-Vis Model UV-2550 Shimadzu.
Determinarea coninutului total de flavonoide s-a bazat pe reacia dintre flavonoide, exprimat prin
standardul rutin i clorura de aluminiu (Sigma-Aldrich) care conduce la formare unui complex galben
(Petry et al., 2001). Metoda folosit a fost conform Farmacopeei Romne (1993). Absorbana soluiei de
flavonoide a fost msurat la 420 nm, lungimea de und corespunztoare maximului de absorbie pentru
rutin.

25

7.5.2. Rezultate i discuii privind efectele coloranilor textili asupra

coninutului total de flavonoide din plantele de gru
Rezultate
Rezultatele experimentale obinute n urma acestui studiu au demonstrat faptul c tratarea
plantelor de gru cu soluii de colorani textili influeneaz semnificativ scderea coninutului total de
flavonoide din aceste plante (Figura 7.12). n cazul tuturor coloranilor textili investigai, la concentraia
de 1,5 mg L-1, pentru ambele volume aplicate (Figura 7.12 a i 7.12b), acest coninut a sczut statistic fa
de control. n cazul coloranilor LB, NDB i LDB, o scdere a coninutului total de flavonoide a fost
nregistrat chiar i la concentraia de 0,5 mg L-1. Aceste rezultate pun din nou n eviden toxicitatea
coloranilor azoici (NDB i LDB) care conin n structura lor crom (Figura 7.12b).
Discuii
Metaboliii secundari din plante sunt de mare importan n relaia plantelor cu mediul
nconjurtor. Flavonoidele sunt metabolii secundari din categoria compuilor fenolici, care sunt prezente
pe scar larg n plante i procariote. Compuii fenolici funcioneaz ca indicatori de stres, protejnd
plantele de factorii de stres biotic sau abiotic (Samanta et al., 2011; Rezanejad, 2012; Di Ferdinando et
al., 2012).

0.5 L

300

1L

-1

0.5 mg L
-1
1.5 mg L

b
*

200

100

*
*

ow
n

sy
n

D
ar

Br

ed
ow
n

Br

sa

ylo

D
ar
na

sa

N
ylo
N

La

ue
Bl

sy
n
na

La

sy
n

R
ed

l
ue

tro

Bl

La

na

on
C

i la

O
pt

ar
k

sy
n
na

n
sa
ylo
N

La

ue

ed
ylo

sa

R
N

La

na

sy
n

Bl

ue

La

na

sy
n

tro

Bl

on

i la

O
pt

R
ed
Br
o
D
w
ar
n
k
Br
ow
n

Continutul total de flavonoide

-2
(mg m )

Rezultatele studiilor prezentate arat c plantele de gru expuse la tratamente cu colorani textili
n diferite volume i concentraii, sufer o scdere drastic a coninutului de flavonoide.

Figura 7.12. Modificri n coninutul total de flavonoide, din frunzele de Triticum aestivum L., ca
rspuns la tratamentul cu soluii de colorani textili, la dou concentraii 0,5 mg L-1 i 1,5 mg L-1.
Msurtorile au fost realizate dup ce plantele au fost udate cu un volum total de soluii de colorani
textili 0,5 L (a ) i 1 L (b). Semnificaia statistic este aceeai din Figura 7.3.

26

CONCLUZII
Prin tematica prezentei teze de doctorat s-a urmrit elaborarea unor proceduri moderne i
performante de izolare, identificare i cuantificare a ase colorani textili, doi antrachinonici (Optilan Blue
i Lanasyn Blue) i patru azoici (Lanasyn Red, Nylosan Red, Nylosan Dark Brown i Lanasyn Dark
Brown) i aplicarea acestor proceduri la determinarea acestora din probe de ap rezidual. Rezultatele
cercetrilor din tez contribuie la evaluarea impactului coloranilor textili investigai asupra calitii
mediului, precum i a efectelor ecotoxicologice ale acestora asupra plantelor de gru.
Principalele etape parcurse au fost:
1. Studiu de literatur referitor la:
Coloranii textili i importana monitorizrii lor n diferii factori de mediu;
Tehnicile de analiz utilizate n studiul coloranilor textili din probe de ap rezidual;
Ecotoxicologia coloranilor textili.
2. Selectarea a ase colorani textili utilizai n prezent n industria de prelucrare a fibrelor textile.
3. nregistrarea spectrelor UV-Vis ale coloranilor textili luai n studiu pentru a stabili lungimea de und
corespunztoare maximului de absorbie fiecrui colorant, necesare analizei HPTLC.
4. Determinarea parametrilor fizico-chimici de calitate ai apelor uzate provenite din industria de
prelucrare a fibrelor textile.
A fost observat o variaie sezonier pentru mai muli parametri fizico-chimici, dictat de regimul
de producie sau fabricaie al fibrelor textile;
Aceti parametri au avut valori mai mari n timpul sezonului rece dect n sezonul cald, ceea ce
poate fi explicat printr-un regim de producie mai intens n perioada rece i condiii meteorologice
favorabile;
Comparnd rezultatele studiului nostru cu reglementrile n vigoare NTPA 002/2005 nu au fost
depite limitele maxime admise n cazul temperaturii, al totalului de materii solide n suspensie,
al coninutului total de fosfor i al coninutului de detergeni, n timp ce acestea au fost depite
pentru pH, consum biochimic de oxigen, consum chimic de oxigen i azot amoniacal;
n cazul coninutului total de azot nu exist valori maxime admise pentru deversarea apelor uzate
n reeaua de canalizare, dar monitorizarea acestui parametru este esenial, avnd n vedere
efectele negative pe termen lung.
Evacuarea efluenilor din industria de prelucrare a fibrelor textile n reeaua de canalizare
reprezint o component major n poluarea apei, deoarece contribuie la creterea consumului de
oxigen din ap i ncrcarea cu nutrieni a acesteia ceea ce conduce la promovarea unui ecosistem
acvatic destabilizat.
5. Dezvoltarea unei proceduri SPE-HPTLC, rapid i sensibil, care a fost aplicat la monitorizarea din
eflueni textili a colorantului antrachinonic Lanasyn Blue i a patru colorani azoici, i anume Nylosan
Dark Brown, Nylosan Red, Lanasyn Dark Brown i Lanasyn Red.
n vederea izolrii acestor colorani textili din ape reziduale prin extracia pe faz solid, au fost
testate patru tipuri de cartue Strata (WAX/NH2, SAX, C18-U i C18-E). Cele mai bune grade de
recuperare au fost obinute pe cartuul Strata WAX/NH2 ceea ce a artat c metoda SPE elaborat
este eficient i reproductibil pentru extracia celor cinci colorani textili din matrice lichid.

27

 Pentru determinri HPTLC cantitative, au fost nregistrate densitograme la 550 nm i realizate

curbe de calibrare.
Validarea acestei proceduri indic rezultate bune privind selectivitatea, liniaritatea, limitele de
detecie i de cuantificare, acurateea i precizia.
Aceti colorani, utilizai n prezent n industria textil, au fost determinai n efluenii textili
monitorizai n cantiti de ordinul ppm, prin procedura SPE-HPTLC elaborat, ceea ce indic
necesitatea ndeprtrii lor din aceti eflueni, nainte de deversarea acestora n diferii emisari sau
reeaua de canalizare.
6. Dezvoltarea unei proceduri SPE-LC/ESI(-)-MS/MS pentru analiza n urme a colorantului
antrachinonic Optilan Blue i a colorantului azoic Nylosan Red din diferite probe de ap rezidual
(influent i efluent), utiliznd SPE i sistemul 3200 QTRAP LC/ESI(-)-MS/MS cu surs de ionizare
Turbo V i ionizare n modul negativ prin electropulverizare.
Cartuul optim utilizat pentru izolarea coloranilor din probe de ap rezidual este Strata NH2.
Metoda SPE realizat este reproductibil i eficient pentru extracia acestor doi colorani textili
din probe de ap rezidual.
n cadrul validrii procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS au fost obinute rezultate bune privind
acurateea, precizia, liniaritatea i limita de detecie (Nylosan Red 0,28 ng mL-1; 0,43 ng mL-1
Optilan Blue).
Prezena acestor colorani la nivel de ng L-1 n probe de ap rezidual prelevate din influenii unei
staii de tratare indic necesitatea ndeprtrii acestor colorani din apele reziduale provenite de la
fabricile de prelucrare a fibrelor textile. Absena coloranilor n eflueni arat eficiena staiei de
tratare a apelor uzate.
7. Dezvoltarea unei proceduri SPE-LC/ESI(-)-MS/MS pentru analiza n urme a coloranilor textili azoici,
compleci ai cromului (Nylosan Dark Brown, Lanasyn Dark Brown i Lanasyn Red) din diferite probe
de ap rezidual (influent i efluent) utiliznd SPE i sistemul 3200 QTRAP LC/ESI(-)-MS/MS cu
surs de ionizare Turbo V i ionizare n modul negativ prin electropulverizare.
Metoda SPE elaborat pentru extracia acestor trei colorani compleci ai cromului din probe de
ap rezidual este eficient i reproductibil, cartuul optim fiind Strata C18-E.
n cadrul validrii procedurii SPE-LC/ESI(-)-MS/MS au fost obinute rezultate bune privind
acurateea, precizia, liniaritatea i limita de detecie (12,0 ng mL -1 Nylosan Dark Brown; 15,5 ng
mL-1 Lanasyn Dark Brown i 0,94 ng mL-1 Lanasyn Red).
Prezena acestor colorani la nivel de ng L-1 n probe de ap rezidual prelevate din influenii i
efluenii unei staii de tratare indic necesitatea ndeprtrii mai eficiente a acestor colorani din
apele reziduale provenite din fabrici textile.
8. Realizarea unui studiu privind efectele ecotoxicologice ale coloranilor textili investigai asupra
diferitelor performane din plante: fotosinteza frunzei, pigmenii asimilatori, unii metabolii secundari
volatili (emisii de produi de oxigenare sub aciunea lipoxigenazei i emisii de monoterpene) i unii
metabolii secundari nevolatili (flavonoide) asupra plantelor de gru (Triticum aestivum L.).
Efectele coloranilor textili asupra vitezei de asimilaie a CO2 au fost de cca. 10-15%, fiind mai
accentuate pentru coloranii care conin n structura lor crom.
Schimbrile n conductana stomatal de vaporizare a apei au fost de ansamblu, dar cu o posibil
nhibare a reaciilor enzimatice la lumin, n special pentru coloranii azoici.

28

 Compuii organici volatili, n special LOX-urile i monoterpenele emise de frunzele verzi ale
plantelor de gru, au fost indicatorii cei mai sensibili la poluarea plantelor cu colorani textili.
Coninutul de pigmeni asimilatori, clorofile i carotenoizi, a sczut puternic la tratamentele cu
colorani azoici, n special n cazul coloranilor azoici care conin n structura lor crom.
Reducerea coninutului de carotenoizi, n special de zeaxantin, sugereaz n general c planta a
fost supus unui stres cronic, ceea ce s-a ntmplat i n acest studiu prin stresul indus plantelor ca
urmare a tratrii cu coloranii textili. Coninutul redus de carotenoizi poate fi parial responsabil
pentru viteza de asimilaie net, nregistrat n studiul nostru.
n cazul coninutului total de flavonoide, rezultatele obinute demonstreaz c scderea acestora
poate fi asociat cu rolul defensiv al flavonoidelor n condiii de stres.

29

BIBLIOGRAFIE SELECTIV

1. Ali S., Zeng F., Qiu L., Zhang G., 2011. The effect of chromium and aluminum on growth, root
morphology, photosynthetic parameters and transpiration of the two barley cultivars. Biologia
Plantarum 55, 291-296.
2. Antoni R., Rodriguez L., Gonzalez-Guzman M., Pizzio G.A., Rodriguez P.L., 2011. News on
ABA transport, protein degradation, and ABFs/WRKYs in ABA signalling. Current Opinion in
Plant Biology 14, 547-553.
3. Beauchamp J., Wisthaler A., Hansel A., Kleist E., Miebach M., Niinemets ., Schurr U., Wildt J.,
2005. Ozone induced emissions of biogenic VOC from tobacco: relationships between ozone
uptake and emission of LOX products. Plant, Cell and Environment 28, 1334-1343.
4. Bercea V., 2008. Fotosinteza. Fotoreglare i fotoprotecie. Editura Todescu, Cluj-Napoca, p. 3544.
5. Chatterjee J., Chatterjee C., 2000. Phytotoxicity of cobalt, chromium and copper in cauliflower.
Environmental Pollution 109, 69-74.
6. Copaciu F., Coman V., Vlassa M., Opri O., 2012a. Determination of some textile dyes in
wastewater by solid phase extraction followed by high performance thin layer chromatography.
Journal of Planar Chromatography-Modern TLC, accepted No. 1550.
7. Copaciu F., Coman V., Simedru D., Beldean-Galea S., Opri O., Ristoiu D., 2012b.
Determination of two textile dyes in wastewater by solid phase extraction and liquid
chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry analysis, Journal of Liquid
Chromatography & Related Technologies, ID: 695312 DOI:10.1080/10826076.2012.695312.
8. Copolovici L., Knnaste A., Niinemets ., 2009. Gas chromatography-mass spectrometry method
for determination of monoterpene and sesquiterpene emissions from stressed plants. Studia
Universitatis Babe-Bolyai Seria Chemia 54, 329-339.
9. Copolovici L., Knnaste A., Pazouki L., Niinemets ., 2012. Emissions of green leaf volatiles
and terpenoids from Solanum lycopersicum are quantitatively related to the severity of cold and
heat shock treatments. Journal of Plant Physiology 169, 664-672.
10. Demmig-Adams B., Adams W.W.III. 2006. Photoprotection in an ecological context: the
remarkable complexity of thermal energy dissipation: Tansley review. The New Phytologist 172,
11-21.
11. Dey S.K., Jena P.P., Kundu S., 2009. Antioxidative efficiency of Triticum aestivum L. exposed to
chromium stress. Journal of Environmental Biology 30, 539-544.
12. Di Ferdinando M., Brunetti C., Fini A., Tattini M., 2012. Flavonoids as antioxidants in plants
under abiotic stresses, in: Ahmad P., Prasad M.N.V. (Eds.), Abiotic Stress Responses in Plants:
Metabolism, Productivity and Sustainability. Springer, New York, p. 159179.
13. Diwan H., Ahmad A., Lqbal M., 2012. Chromium-induced alterations in photosynthesis and
associated attributes in Indian mustard. Journal of Environmental Biology 33, 239-244.
14. Dobrot C., 2010. Fiziologia Plantelor. Vol. I, Editura Risoprint Cluj-Napoca, p. 57-61, 208-220.
15. Eckert M., Biela A., Siefritz F., Kaldenhoff R., 1999. New aspects of plant aquaporin regulation
and specificity. Journal of Experimental Botany 50, 1541-1545.
30

16. Epolito W.J., Lee Y.H., Bottomley L.A., Pavlostathis S.G., 2005. Characterization of the textile
anthraquinone dye Reactive Blue 4. Dyes and Pigments 67, 35-46.
17. Eremektar G., Selcuk H., Meric S., 2007. Investigation of the relation between COD fractions and
the toxicity in a textile finishing industry wastewater: Effect of preozonation. Desalination 211,
314-320.
18. Farmacopeea Romn. 1993. Editura Medical, Ediia a X-a, Bucureti.
19. Feussner I., Wasternack C., 2002. The lipoxygenase pathway. Annual Review of Plant Biology
53, 275-297.
20. Garg V.K., Kaushik P., 2006. Influence of short-term irrigation of textile mill wastewater on the
growth of chickpea cultivars. Chemistry and Ecology 22, 193-200.
21. Gumustas M., Ozkan S.A., 2011. The role of and the place of method validation in drug analysis
using electroanalytical techniques. The Open Analytical Chemistry Journal 5, 1-21.
22. Kesselmeier J., Staudt M., 1999. Biogenic volatile organic compounds (VOC): An overview on
emission, physiology and ecology. Journal of Atmospheric Chemistry 33, 23-88.
23. Kholodova V., Volkov K., Abdeyeva A., Kuznetsov V., 2011. Water status in
Mesembryanthemum crystallinum under heavy metal stress. Environmental and Experimental
Botany 71, 382-389.
24. Kmellar B., Fodor P., Pareja L., Ferrer C., Martinez-Uroz M.A., Valverde A., Fernandez-Alba
A.R., 2008. Validation and uncertainty study of a comprehensive list of 160 pesticide residues in
multi-class vegetables by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Journal of
Chromatography A 1215, 37-50.
25. Lee Y.H., Pavlostathis S.G., 2004. Decolorization and toxicity of reactive anthraquinone textile
dyes under methanogenic conditions. Water Research 38, 18381852.
26. Lichtenthaler H.K., 1999. The 1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate pathway of isoprenoid
biosynthesis in plants. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology 50, 4765.
27. Lopez-Luna J., Gonzalez-Chavez M.C., Esparza-Garcia F.J., Rodriguez-Vazquez R., 2009.
Toxicity assessment of soil amended with tannery sludge, trivalent chromium and hexavalent
chromium, using wheat, oat and sorghum plants. Journal of Hazardous Materials 163, 829-834.
28. Loreto F., Barta C., Brilli F., Nogues I., 2006. On the induction of volatile organic compound
emissions by plants as consequence of wounding or fluctuations of light and temperature. Plant
Cell and Environment 29, 1820-1828.
29. Loreto F., Schnitzler J.-P., 2010. Abiotic stresses and induced BVOCs. Trends in Plant Science
15, 154-166.
30. Mehta B.H., Morge S.B., 2008. HPTLC-densitometric analysis of candesartan cilexetil and
hydrochlorothiazide. Journal of Planar Chromatography-Modern TLC 21, 173-176.
31. Mittler R., 2006. Abiotic stress, the field environment and stress combination. Trends in Plant
Science 11, 15-19.
32. Modziska E., 2009. Survey of plant pigments: molecular and environmental determinants of
plant colors. Acta Biologica Cracoviensia Series Botanica 51, 7-16.
33. Mohammad M.A-A., Zawilla N.H., 2009. Thin layer and column-chromatographic methods for
simultaneous analysis of ambroxol hydrocloride and doxycycline hyclate in a binary mixture.
Journal of Planar Chromatography-Modern TLC 22, 201-206.
31

34. Munne-Bosch S., Alegre L., 2000. Changes in carotenoids, tocopherols and diterpenes during
drought and recovery, and the biological significance of chlorophyll loss in Rosmarinus
officinalis plants. Rosmarinus officinalis plants. Planta 210, 925-931.
35. Nagegowda D.A., 2010. Plant volatile terpenoid metabolism: Biosynthetic genes, transcriptional
regulation and subcellular compartmentation. FEBS Letters 584, 2965-2973.
36. Nayak P.S., Upadhyaya S.D., Upadhyaya A., 2009. HPTLC method for analysis of Winhaferin-A
in Ashwagandha (Withania somnifera). Journal of Planar Chromatography-Modern TLC 22,
197-200.
37. Niinemets ., Bilger W., Kull O., Tenhunen J.D., 1998. Acclimation to high irradiance in
temperate deciduous trees in the field: changes in xanthophyll cycle pool size and in
photosynthetic capacity along a canopy light gradient. Plant, Cell and Environment 21, 12051218.
38. Niinemets ., Copolovici L., Hve K., 2010. High within-canopy variation in isoprene emission
potentials in temperate trees: Implications for predicting canopy-scale isoprene fluxes. Journal of
Geophysical Research 115, G04029, doi:10.1029/2010JG001436.
39. Niinemets ., Kuhn U., Harley P.C., Staudt M., Arneth A., Cescatti A., Ciccioli P., Copolovici
L., Geron C., Guenther A.B., Kesselmeier J., Lerdau M.T., Monson R.K., Peuelas J., 2011.

40.

41.

42.

43.
44.

45.
46.
47.

48.

Estimations of isoprenoid emission capacity from enclosure studies: measurements, data

processing, quality and standardized measurement protocols. Biogeosciences 8, 2209-2246.
Opri O., Copaciu F., Coman V., Ristoiu D., 2011. UV-Vis study regarding the influence of two
potential environmental pollutants on the total flavonoid content in Triticum aestivum L. and
Secale cereale L. Studia Universitatis Babe-Bolyai Seria Chemia LVI 4, 17-25.
Permyakova M.D., Permyakov A.V., Osipova S.V., Pshenichnikova T.A., 2012. Lipoxygenase
from the leaves of wheat grown under different water supply conditions. Applied Biochemistry
and Microbiology 48, 77-82.
Petry R.D., Ortega G.G., Silva W.B., 2001. Flavonoid content assay: influence of the reagent
concentration and reaction time on the spectrophotometric behavior of the aluminium chlorideflavonoid complex. Pharmazie 56, 465470.
Poole C.F., Gunatilleka A.D., Sethuraman R., 2000. Contributions of theory to method
development in solid-phase extraction. Journal of Chromatography A 885, 17-39.
Prevot A.B., Fabbri D., Pramauro E., Baiocchi C., Medana C., 2008. High-performance liquid
chromatography coupled to ultraviolet diode array detection and electrospray ionization mass
spectrometry for the analysis of intermediates produced in the initial steps of the photocatalytic
degradation of sulfonated azo dyes. Journal of Chromatography A 1202, 145154.
Rafally L., Hron S., Nowik W., Tchapla A., 2008. Optimisation of ESI-MS detection for the
HPLC of anthraquinone dyes. Dyes and Pigments 77, 191-203.
Rezanejad F., 2012. Air pollution effects on flavonoids in pollen grains of some ornamental
plants. Turkish Journal of Botany 36, 49-54
Rodriguez E., Santos C., Azevedo R., Moutinho-Pereira J., Correia C., Dias M.C., 2012.
Chromium (VI) induces toxicity at different photosynthetic levels in pea. Plant Physiology and
Biochemistry 53, 94-100.
Samanta A., Das G., Das S.K., 2011. Roles of flavonoids in plants. International Journal of
Pharmaceutical Sciences and Technology 6, 12-35.
32

49. Shanker A.K., Cervantes C., H. Loza-Tavera H., Avudainayagam S., 2005. Chromium toxicity in
plants. Environment International 31, 739-753.
50. Shanker A.K., Djanaguiraman M., Venkateswarlu B., 2009. Chromium interactions in plants:
current status and future strategies. Metallomics 1, 375-383.
51. Soran M.L., Opri. O., Copaciu F., Varodi C., 2012. Determination of flavonoids in Triticum
aestivum L. treated with ampicillin, in: Lazar, M.D. (Ed.), Proceeding of Processes in Isotopes
and Molecules (PIM 2011). American Institute of Physics, AIP Conf. Proc., Melville, New York,
1425, p. 47-49.
52. Subrahmanyam D., 2008. Effects of chromium toxicity on leaf photosynthetic characteristics and
oxidative changes in wheat (Triticum aestivum L.). Photosynthetica 46, 339-345.
53. Sur R., Dunemann L., 2004. Method for the determination of five toxicologically relevant arsenic
species in human urine by liquid chromatographyhydride generation atomic absorption
spectrometry. Journal of Chromatography B 807, 169-176.
54. ahin S., Demir C., Ger ., 2007. Simultaneous UV-Vis spectrophotometric determination of
disperse dyes in textile wastewater by partial least squares and principal component regression.
Dyes and Pigments 73, 368-376.
55. Umbuzeiro G.A., Freeman H.S. Warren S.H., Oliveira D.P., Terao Y., Watanabe T., Claxton

56.

57.
58.
59.
60.

61.
62.

L.D., 2005. The contribution of azo dyes to the mutagenic activity of the Cristais River.
Chemosphere 60, 55-64.
Vernay P., Gauthier-Moussard C., Hitmi A., 2007. Interaction of bioaccumulation of heavy metal
chromium with water relation, mineral nutrition and photosynthesis in developed leaves of
Lolium perenne L. Chemosphere 68, 1563-1575.
von Caemmerer S., Farquhar G.D., 1981. Some relationships between the biochemistry of
photosynthesis and the gas exchange of leaves. Planta 153, 376-387.
www.phenomenex.com
www.textile.clariant.com
Yoshioka N., Ichihashi K., 2008. Determination of 40 synthetic food colors in drinks and candies
by high-performance liquid chromatography using a short column with photodiode array
detection. Talanta 74, 1408-1413.
Zadoks J.C., Chang T.T., Konzak D.F., 1974. A decimal code for the growth stages of cereals.
Weed Research 14, 415-421.
Zengin F.K., Munzuroglu O., 2005. Effects of some heavy metals on content of chlorophyll,
proline and some antioxidant chemicals in bean (Phaseolus vulgaris L.) seedlings. Acta Biologica
Cracoviensia Series Botanica 47, 157-164.

33

ANEXA I
LISTA ABREVIERILOR

LR

Lanasyn Red

NR

Nylosan Red

NDB

Nylosan Dark Brown

LDB

Lanasyn Dark Brown

OB

Optilan Blue

LB

Lanasyn Blue

UV-Vis

UltraViolet-Visibil

IR

InfraRed; Infrarou

LLE

Liquid Liquid Extraction; Extracia lichid-lichid

SPE

Solid Phase Extraction; Extracia pe faz solid

TLC

Thin Layer Chromatography; Cromatografia pe strat subire

HPTLC

High Performance Thin Layer Chromatography

Cromatografia de nalt performan pe strat subire

SPE-HPTLC

Solid Phase Extraction and High Performance Thin Layer

Chromatography; Extracia pe faz solid urmat de cromatografia pe strat
subire de nalt performan

HPLC

High Performance Liquid Chromatography; Cromatografia de lichide de

nalt performan

DAD

Diode Array Detection; Detector cu ir de diode

ESI

ElectroSpray Ionization; Ionizare prin electropulverizare

MS

Mass Spectrometry; Spectrometria de mas

SPE-LC/ESI(-)-MS/MS

Solid Phase Extraction and Liquid Chromatography ElectroSpray

Ionization tandem Mass Spectrometry; Extracia pe faz solid urmat de
cromatografia de lichide cuplat cu spectrometrul de mas cu ionizare prin
electropulverizare

34

CCO

Consumul Chimic de Oxigen

CBO

Consumul Biochimic de Oxigen

TSS

Totalul de Materii Solide n Suspensie

TN

Total Nitrogen; Totalul de Azot

TP

Total Phosphorus; Totalul de Fosfor

Strata NH2

Cartue cu umplutur de silicagel modificat amino

Strata SAX

Cartue cu umplutur de silicagel i ligand amino cuaternar

Strata C18-U

Cartue cu umplutur de silicagel C18-U cu grupri silanol libere

Strata C18-E

Cartue cu umplutur de silicagel C18-E cu grupri silanol legate hidrofobic

SD

Standard Deviation; Deviaia standard

RSD

Relative Standard Deviation; Deviaia standard relativ

LOD

Limit Of Detection; Limita de detecie

LOQ

Limit Of Quantification; Limita de cuantificare

MRM

Multiple Reaction Monitoring; Monitorizarea reaciilor multiple

FIA

Flow Injection Analysis

gs

Stomatal Conductance to Water Vapour; Conductana stomatal de

vaporizare a apei (deschiderea stomatei)

Net Asimilation Rate; Rata de asimilaie a CO2

VOC

Volatile Organic Compounds, Compui organici volatili

LOX

Lipoxygenase Pathway Products; Produi de oxigenare sub aciunea

lipoxigenazei

35

ANEXA II
LISTA PUBLICAIILOR TIINIFICE ISI ELABORATE PN N PREZENT I INCLUSE
TEMATICII TEZEI DE DOCTORAT
1.

Florina Copaciu, Virginia Coman*, Dorina Simedru, Simion Beldean-Galea, Ocsana Opri,
Dumitru Ristoiu, Determination of two textile dyes in wastewater by solid phase extraction and
liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry analysis, Journal of Liquid
Chromatography & Related Technologies, DOI:10.1080/10826076.2012.695312, sub tipar. (Factor
de impact 0,706 / 2011)

2.

Florina Copaciu, Virginia Coman*, Mihaela Vlassa, Ocsana Opri, Determination of some textile
dyes in wastewater by solid phase extraction followed by high performance thin layer
chromatography, Journal of Planar Chromatography-Modern TLC, DOI: 10.1556/JPC.25.212.6.0,
sub tipar. (Factor de impact 0,767 / 2011)

3.

Ocsana Opri, Florina Copaciu*, Virginia Coman, Dumitru Ristoiu, UV-VIS Study regarding the
influence of two potential environmental pollutants on the total flavonoid content in Triticum
aestivum L. and Secale cereale L., Studia Universitatis Babe-Bolyai Chemia, Volum 56 (4) 2011,
17-25. (Factor de impact 0,129 / 2011)

4.

Loredana Soran, Ocsana Opri, Florina Copaciu, Codrua Varodi, 2012. Determination of
flavonoids in Triticum aestivum L. treated with ampicillin, in: Lazar, M.D. (Ed.), Proceedings of
Conference Processes in Isotopes and Molecules (PIM 2011). American Institute of Physics, AIP
Conf. Proc., Melville, New York, 1425, p. 47-49.

5.

Florina Copaciu, Ocsana Opri, Virginia Coman, Dumitru Ristoiu, lo Niinemets, Lucian
Copolovici*, Diffuse pollution by anthraquinone and azo dyes in environment importantly alters
foliage volatiles, carotenoids and physiology in wheat (Triticum aestivum), Water, Air, & Soil
Pollution, lucrare trimis spre publicare. (Factor de impact 1,625 / 2011)

6.

Florina Copaciu, Carmen Andreea Roba*, Ocsana Opri, Vioara Mirean, Physicochemical analysis
of effluents generated by local industries from Cluj county - Romania and their possible impact on
the surface water quality, Water and Environment Journal, lucrare trimis spre publicare. (Factor de
impact 0,792 / 2011)

36