Professional Documents
Culture Documents
Curs
Genetica uman
II
Chiinu, 2012
Cuprinsul
CURS 7 ...................................................................................................................................................................... 3
GENELE UMANE .............................................................................................................................................. 3
CURS 8 .................................................................................................................................................................... 16
TEHNICI DE ANALIZ A GENELOR ......................................................................................................... 16
CURS 9 .................................................................................................................................................................... 22
CARACTERE EREDITARE ............................................................................................................................ 22
CARACTERISTICA GENELOR ALELE I NEALELE ................................................................................ 22
CARACTERE MONOGENICE MENDELIENE ............................................................................................ 23
DETERMINISMUL UNOR CARACTERE EREDITARE NORMALE ......................................................... 24
CARACTERE MONOGENICE NON-MENDELIENE ................................................................................... 25
CARACTERE EREDITARE NORMALE POLIGENICE ............................................................................ 27
CURS 10 .................................................................................................................................................................. 29
STUDIUL CARACTERELOR EREDITARE ................................................................................................. 29
PARTICULARITILE CARACTERELOR EREDITARE .......................................................................... 29
METODE DE STUDIU UTILIZATE N GENETICA UMAN ..................................................................... 31
CURS 11 .................................................................................................................................................................. 35
INTRODUCERE N PATOLOGIA GENETIC UMAN ............................................................................. 35
ASPECTE COMUNE N PATOGENEZA BOLILOR GENETICE ................................................................ 37
BOLI CROMOZOMIALE ................................................................................................................................ 39
BOLI MONOGENICE ...................................................................................................................................... 42
TESTAREA GENETIC .................................................................................................................................. 53
CURS 7
GENELE UMANE
n conceptul clasic gena este un segment cromozomial ce controleaz expresia fenotipic a
unui caracter, iar n conceptul contemporan gena reprezint un segment polinucleotidic al moleculei
de ADN ce codific sinteza unei molecule specifice polipeptid sau ARN.
Astfel substratul molecular al informaiei genetice este molecula de ADN, iar substratul
molecular al caracterului morfologic, biochimic sau fiziologic este proteina.
Genele umane se clasific n dou categorii majore: gene structurale care codific
polipeptide i gene codificatoare de molecule de ARNr i ARNt.
Categoria
Gene mici
Gene medii
Gene mari
Gene gigante
Gene
supergigante
Lungimea, kb
pn la 10
10-25
25-50
51-100
101-500
peste 500
~2000,0
Dimensiunile
ARNm, kb
0,5
0,6
0,4
2,8
1,6
2,4
9
8,7
Numrul
intronilor
2
2
2
7
12
12
26
36
16,0
60
Tipuri
Dimensiuni
complete
Forme
scurte
Muscular
Cerebral
Cerebral
1-Dp71
4,5-4,8
Intronul 63
2-Dp116
5,5
Intronul 56
3-Dp40
2,2
Dp140
Dp260
7,5
Intronul 44
Expresie
Inim, muchi scheletici
Scoara Hipocamp
Celulele Purkinje
Oriunde, n afar de
muchi
Nervii periferici
Oriunde, n afar de
muchi
Neuroni embrionali
Retin
repetate sau prin meioz se transmit la alte generaii de celule sau de organisme, asigurnd
continuitatea materialului genetic n irul generaiilor i transmitea genealogic a caracterelor ereditatea;
2. Gena este specific - codific o molecul polipeptidic, determin expresia unui caracter;
3. Gena are o aciune dozat asupra fenotipului prin posibilitatea sintezei unei anumite cantiti de
genei de a contribui la formarea mai multor caractere; poate fi primar - determinat de aciunea
multipl a produsului genei sau poate fi secundar determinat de consecinele secundare ale
aciunii proteinei la nivelul diferitor celule, esuturi i organe;
7. Genele pot exista n mai multe forme moleculare (diferite secvene nucleotidice), determinnd o
surs de variabilitate genetic. Prin modificarea secvenei nucleotidice ale unei gene (mutaii)
apar variante noi ale genei alele; alelele multiple controleaz diferite stri sau forme
alternative ale unui caracter; caracterul controlat de o serie de alele multiple se numete caracter
polimorf (25% din genele umane au variante alelice multiple).
transcripia copierea informaiei genetice din ADN i sinteza moleculelor precursoare ale
ARNm;
translaia procesul prin care secvena nucleotidelor din ARN este tradus ntr-o secven
de aminoacizi ai lanului polipeptidic.
(II) La nivel celular expresia genei reprezint rezultatul integrrii proteinei sintetizate ntr-o
structur celular, ntr-un lan metabolic sau ntr-o reea de semnalizare celular. Fenotipul celular
morfologia i funcia este controlat de genomul celulei, dar realizat de setul specific de
proteine sintetizate proteinomul.
(III) La nivel organismic expresia genelor se manifest prin caractere morfologice i nsuiri
complexe, datorit cooperrii tuturor componentelor moleculare i supramoleculare n morfogeneza
i fiziogeneza organismului uman.
Astfel, n concept actual, expresia genic este studiat la diferite nivele:
i. molecular polipeptidul sintetizat, care constituie efectul primar al expresiei genice;
ii. celular molecula proteic i funcia ei n celul efectul secundar;
iii. organismic manifestarea fenotipic a genei efectul teriar.
50%
LOCALIZAREA GENELOR
Conform teoriei cromozomiale ale ereditii propus de Th. H. Morgan (1911):
genele sunt localizate pe cromozom, fiecare gen ocup un anumit locus;
genele unui cromozom sunt dispuse liniar i formeaz grupuri de nlnuire;
numrul grupurilor de nlnuire este egal cu numrul haploid de cromozomi;
ntre cromozomii omologi poate avea loc schimb de gene alele (crossing-overul);
frecvena crossing-overului este direct proporional cu distana dintre gene i este invers
proporional puterii de nlnuire;
7
Unele gene au o singur copie, altele gene au mai multe copii i formeaz familii repetitive (n
tandem sau pe diveri cromozomi) sau nerepetitive de gene.
Genele de pe un cromozom, ce sunt localizate foarte aproape una de alta formeaz haplotipuri,
care deseori au elemente reglatoare comune.
Genele localizate pe autosomi determin caractere autozomale ce se transmit de la prini
indiferent de sex, iar genele localizate pe gonosomi determin caractere sex-lincate ce se transmit
dependent de sex:
- genele i caracterele X-lincate se transmit de la mam i fiicelor i fiilor, iar de la tat numai
fiicelor;
- genele i caracterele Y-lincate (holandrice) se transmit exclusiv din tat n fiu.
HRILE GENETICE
Genomul celulei include dou sisteme de gene cu mod de organizare i motenire diferite:
genomul nuclear i genomul mitocondrial.
n nucleul celulelor umane se conin circa 30000 perechi de gene, care sunt repartizate de-a
lungul a 46 molecule de ADN, care corespund celor 46 cromozomi din setul diploid.
Fiecare cromozom conine n medie 1-2000 de gene. Genele sunt dispuse liniar n cromozom,
una dup alta, fiind separate prin secvene necodificatoare (ADN-satelit, spaceri). Genele unui
cromozom se transmit de la o generaie la alta, n bloc, fenomen numit nlnuire genic sau linkage.
Fiecare cromozom reprezint un grup de nlnuire.
Genomul mitocondrial este organizat sub form ADN inelar, conine 37 gene aranjate compact i se
transmite pe linie matern.
Astfel, la om sunt 25 de grupuri de nlnuire:
22 grupuri ale autosomilor;
un grup al cromozomului X;
un grup al cromozomului Y;
un grup genele ADN-ului mitocondrial.
Cromozom
Nr. gene
Lungimea, Mb
1
3511
250
2
2368
243
3
1926
198
4
1444
191
5
1633
181
6
2057
171
7
1882
159
8
1315
146
Cromozom
Nr. gene
Lungimea, Mb
9
1534
141
10
1391
136
11
2168
135
12
1714
134
13
720
115
14
1532
107
15
1249
103
16
1326
90
Cromozom
Nr. gene
Lungimea, Mb
17
1773
81
18
557
78
19
2066
59
20
857
63
21
450
48
22
855
51
X
1672
155
Y
429
59
Fenomenul de linkage se manifest numai n cazul genelor plasate pe acelai cromozom, n timp ce
pentru genele plasate pe cromozomi diferii transmiterea ereditar a genelor se face independent,
mendelian.
Studiul mecanismului de transmitere ereditar a artat c nu ntotdeauna genele ce fac parte din
acelai grup linkage se transmit nlnuit. Excepiile sunt explicate prin posibilitatea recombinrii ntre
cromozomii omologi crossing-over, care are loc n meioz. n timpul crossing-overului are loc
schimbul reciproc de gene alele ntre cromozomii pereche - cromozomii omologi.
Frecvena crossing-overului este diferit pentru diveri loci, variaz de la 0% la 50% i este
corelat cu distana dintre gene. La valori de peste 50% nu se mai consider o recombinare, ci o
segregare independent.
Pe baza observaiei c ntre genele foarte apropiate probabilitatea apariiei chiasmelor i
respectiv a fenomenului de crossing-over este mic, iar ntre genele mai ndeprtate crete spre limita
superioar de 50%, determinarea frecvenei recombinrilor genice n procente constituie modalitatea de
stabilire a localizrii genelor pe cromozom i, respectiv, a alctuirii hrilor genetice.
9
n prezent, datorit tehnicilor de genetic molecular, s-au elaborat hrile fizice ale
cromozomilor cu distribuia exact a genelor pe cromozom, iar mrimea genelor i distana dintre ele se
prezint n perechi de nucleotide (pn).
Stabilirea unor relaii (grupe) de nlnuire ntre
gene i, deci, caractere este foarte important n
genetica medical. Se urmrete transmiterea
unor caractere patologice n comun cu un
caracter normal.
Caracterul normal servete ca marcher
(indicator) a unei patologii i este important n
special pentru bolile ce apar pe parcursul vieii.
Exemple de grupe de nlnuire:
- Rh i eliptocitoz (eritrocite cu form oval);
-
10
MUTAIILE GENICE
Mutaiile genice pot interesa genele de structur sau secvenele implicate n reglare: n primul
caz se modific structura (calitatea polipeptidului sintetizat dup informaia genei), n al doilea caz se
schimb ritmul (cantitatea) sau tipul de protein sintetizat. Ca rezultat al mutaiilor genice, se produc
forme alternative ale genei, numite alele.
11
Substituia duce la modificarea unui singur codon (sens sau nonsens). Schimbarea unui codon sens
va determina unul din urmtoarele efecte:
- schimbarea aminoacidului ca rezultat al modificrii codonului mutaii misens;
- oprirea sintezei proteinei, n cazul n care codonul format prin substituie este un codon STOP
(UAA, UAG i UGA) mutaii nonsens;
- pstrarea structurii iniiale (normale) a proteinei deoarece codonul rezultat prin substituie este
sinonim cu cel modificat samesens mutaii.
.
Substituia poate implica uneori i un codon non-sens sau stop: UAA sau UAG pot deveni CAA sau
CAG, codoni care semnific glutamina. n acest caz sinteza polipeptidului continu pn la un nou
codon stop. Un exemplu de elongaie a catenei l constituie o alt Hb anormal Hb CS (Hb Constant
Spring) a crei caten alfa are 172 aminoacizi n loc de 141; secvena adiional de 31 aminoacizi
ncepe ntr-adevr cu Glutamina.
Substituia poate interesa doi sau chiar mai muli aminoacizi distinci, separai, din catena unui
lan polipeptidic . De ex: Hb C-Harlem = 2 alfa 2 beta 6 GluVal; 73 AspAsn.
Inversia va duce la modificarea unui codon i lectura sa n sens invers. Consecinele inversiei
sunt aceleai ca i ale substituiei.
Prin deleie se nelege lipsa a una sau a mai multe perechi de nucleotide din molecula de ADN.
Natura anomaliei produse va depinde de numrul de perechi de nucleotide implicat n deleie. Dac
lipsete o singur pereche de nucleotide se produce o decalare a fazei (cadrului) de lectur a codului
genetic (mutaii frame shift); lectura este incorect i se sintetizeaz o protein n care toi
aminoacizii, situai dincolo de locul deleiei, vor fi modificai (ex: Hb Wayne).
Dac numrul de nucleotide deletate este multiplu de trei, atunci n catena polipeptidic
determinat de gena mutant vor lipsi unul sau mai muli aminoacizi (n Hb Gun-Hill sunt abseni cinci
aminoacizi din catena beta: 91-95) Uneori se poate realiza deleia complet a unei gene. n alfatalasemii nu se produc catenele alfa ale hemoglobinei pentru c gena corespunztoare lipsete din
genom, n locul lor se sintetizeaz alte tipuri de lanuri: de ex: Hb H=4 beta sau Hb Bart=4 gama.
Inseria sau adiia nseamn introducerea unui nucleotid n secvena unei gene; din punctul de
inserie lectura codonilor se va face decalat, realizndu-se o protein cu secven anormal.
12
Crossing-overul inegal se poate produce dac nu are loc o mperechere perfect a omologilor. n
rezultatul CO inegal se produce o rearanjare a secvenelor ADN i deci o modificate a structurii
polipeptidelor codificate de aceste secvene (ex. Hb Lepore).
Reversia (mutaia supresiv) este o mutaie care intereseaz o alt mutant, determinnd
revenirea la fenotipul normal (slbatic). Reversia adevrat transform codonul mutant n normal, iar
reversia numit supresiv produce o a doua mutaie, diferit ca poziie ca prima dar care corijeaz
efectul ei.
Ex. Hb. Harlem prezint prima mutaie n catena beta 6 Glu-Val ca i Hb S dar efectul ei de
transformare a hematiilor n secer este anulat de o a doua mutaie: beta 73 AspAsn. Situaia se repet i
n cazul Hb Memphis/S: alfa 23 GluGln; beta 6 GluVal.
Consecinele mutaiilor genice. Efectul primar al mutaiilor genice l reprezint modificarea
secvenei aminoacizilor n moleculele polipeptidice, sintetizate pe baza informaiei acestor gene (ele
sunt produsul primar al genei respective). Efectul biologic al acestei modificri depinde de tipul
aminoacidului substituit i de locul su particular n molecula polipeptidic. Dac mutaiile vor
modifica structura sau ritmul de sintez a unei enzime, atunci se produce o alterare (bloc complet sau
parial) a unei ci metabolice. Efectul primar este urmat de o mulime de efecte secundare care vor
determina un fenotip modificat.
13
Mutaiile pot afecta partea reglatoare sau partea codificatoare a genei. Modificarea secvenei
nucleotidice a promotorului poate duce la schimbri cantitative n sinteza ARN i proteinei:
- blocarea transcripiei lipsa produsului proteic modificri fenotipice prin deficien (de ex.,
fenilcetonuria, intolerana la zaharoz);
- activarea continu a transcripiei sinteza unei cantiti mari de produs proteic modificri
fenotipice prin exces (de ex., sinteza n cantiti mari a HbF i HbA2 duce la hemoliz i
anemie).
Modificarea secvenei nucleotidice a regiunii codificatoare, n special a exonilor, poate duce la
schimbarea mesajului genetic i secvena de aminoacizi din protein, producnd schimbri calitative n
sinteza produsului final:
- sinteza unei proteine cu o activitate sczut (mutaie hipomorf);
- sinteza unei proteine cu o activitate exagerat (mutaie hipermorf);
- sinteza unei proteine inactive (mutaie amorf).
Dup valoarea adaptiv i consecinele mutaiilor genice asupra structurii i funciei
organismelor ele se pot mpri n mai multe grupe:
- mutaii neutre care produc polimorfismul biologic intraspecific, variantele normale (de ex.,
grupele sanguine, serice sau tisulare);
- mutaii deviante (defavorabile) care antreneaz un handicap mai mult sau mai puin sever i
creeaz fie o stare de boal, fie o predispoziie la boal; unele dintre ele sunt mutaii letale sau
subletale, afectnd decisiv viabilitatea i reproducerea individului;
- mutaii evoluante cu valoare adaptiv mai mare ca normalul; ele produc indivizi mai bine
adaptai, mai rezisteni la mediu.
MUTAII DINAMICE
n 1991 s-a descoperit o nou clas de alterri ale ADN, diferite de mutaiile clasice, mutaiile
dinamice. Ele sunt reprezentate de creteri ale numrului unor repetri trinucleotidice situate n
proximitatea sau chiar n interiorul genelor structurale. Mutaiile dinamice sunt caracterizate de
instabilitate, exprimat prin creterea numrului de copii ale unitilor trinucleotidice, cu ocazia
diviziunilor pe care le realizeaz celula purttoare.
Mutai
e
comple
t
Exist variaii ale numrului de repetri trinucleotidice:
- polimorfisme ADN benigne;
- premutaia secvena de ADN devine instabil, dar nu determin un fenotip patologic;
- mutaia complet - prin expansiunea repetrilor trinucleotidice determinnd fenotip
patologic.
14
Purttorii premutaiilor sunt fenotipic normali. Expansiunea repetrilor are loc n gametogenez.
Astfel unii din gameii purttorilor sntoi vor conine mutaia complet, care la descendeni va
produce un fenotip patologic. n gametogeneza ultimilor, din cauza instabilitii acestor repetri, vor
aprea expansiuni adiionale, care la urmtoarea generaie va produce un fenotip patologic mai grav
(=fenomenul de anticipaie).
15
povar
genetic
CURS 8
TEHNICI DE ANALIZ A GENELOR
Tehnologia ADN recombinant a creat premisele dezvoltrii unor metode de diagnostic
molecular dotate cu capacitate de rezoluie, grad de precizie i nivel informativ net mai superioare celor
ale metodelor convenionale. Superioritatea absolut a abordrii moleculare rezult ns din faptul c
spre deosebire de toate celelalte metode de diagnostic, limitate la determinarea exclusiv a trsturilor
fenotipice, - analiza ADN, destinat nemijlocit studiului genotipului este singura n msur s
obiectiveze alterrile primare (mutaiile) care se fac direct responsabile pentru starea de boal.
Tehnicile ADN recombinant permit identificarea genelor normale i/sau a variantelor lor
mutante, stabilirea purttorilor de gene mutante, diagnosticul prenatal sau presimptomatic al
patologiilor genetice, iar n viitorul apropiat apare posibilitatea dezvoltrii terapiei genice.
Studiul molecular al genelor poate fi realizat pe mai multe ci n dependen de scopul propus:
- secvenierea ADN pentru determinarea structurii primare a genei;
- tehnica Southern-blot pentru identificarea RFLPs;
- tehnica Northen-blot pentru determinarea expresiei genelor (analiza ARNm);
- tehnica Western-blot pentru determinarea produsului proteic al genei;
- tehnica PCR pentru identificarea genei normale sau mutante, prin amplificarea specific a
secvenelor de ADN, etc.
n laboratoarele de biologie molecular se utilizeaz diverse variante ale metodelor menionate. Toate
aceste metode se bazeaz pe diferite principii de manipulare a acizilor nucleici:
- clivarea specific a ADN-ului genomic pentru obinerea fragmentelor de cercetat;
- identificarea fragmentelor de ADN sau ARN de cercetat prin hibridare cu sonde specifice
complementare secvenei int;
- identificarea genelor normale sau mutante prin procesul de amplificare specific a ADN (PCR)
reacie specificat de alegerea primerilor complementari genei / secvenei de interes;
- vizualizarea fragmentelor de interes dup rezultatele electroforezei i marcarea specific al ADN
sau ARN de cercetat, sau utilizndu-se programe computerizate de citire i interpretare a
rezultatelor;
- interpretarea rezultatelor este un proces complex, legat de fiecare tehnic i procedur n parte n
concordan cu particularitile metodei utilizate.
Pentru separarea fragmentelor de acizi nucleici se utilizeaz electroforeza n gel de agaroz sau de poliacrilamid.
Purtnd sarcin negativ, moleculele acizilor nucleici migreaz n cmpul electric, iar viteza de migrare depinde
de greutatea molecular a fragmentelor cercetate - fragmentele mai scurte migreaz mai rapid, n timp ce
fragmentele lungi migreaz mai lent. Pentru determinarea dimensiunilor fragmentelor de acizi nucleici,
concomitent cu fragmentele de interes sunt supuse electroforezei n trecuri vecine i fragmente-marker ai
lungimii. Moleculele acizilor nucleici pot fi vizualizate n gel prin colorare cu ageni chimici, marcare radioactiv
sau fluorescent. n cazul marcrii radioactive fragmentele se identific cu ajutorul autoradiografiei care const
n suprapunerea gelului cu un film fotosensibil.
16
SECVENIEREA ADN
Secvenierea const n determinarea succesiunii nucleotidelor (bazelor azotate) dintr-un anumit
segment al moleculei de ADN. Analiza secvenei bazelor azotate din structura ADN poate fi realizat
prin dou ci: 1) calea chimic (Maxam-Gilbert), n care se folosesc reaciile chimice de clivare a
ADN-ului n baze individuale, dar fiind o metod complicat i laborioas, n ultimii ani nu se mai
utilizeaz; 2) calea enzimatic (Sanger) n care ADN-ul este sintetizat in vitro pe baza matriei ADN
studiat, n aa fel nct reacia se termin specific n poziia care corespunde unei baze anumite. Pentru a
determina o secven de nucleotide pe una din cile menionate, ADN-ul este supus seriei de patru
reacii separate, fiecare reacie fiind specific pentru una din baze. Prin electroforez produii de reacie
vor migra n patru curse paralele, pe acelai gel. Urmrind band cu band, poate fi identificat ordinea
nucleotidelor n ADN.
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
18
Extragerea ADN
din celule nucleate
Denaturarea ADN i
transferul FR
pe membrane
Electroforeza FR
Hibridare cu sonda
Autoradiografia
Vizualizarea i interpretarea
rezultatelor
Datorit tehnicii Southern-blot se poate determina prezena sau lipsa unor situsuri de restricie
caracteristice genei analizate care se asociaz cu anumite mutaii:
- detectarea mutaiilor punctiforme ce implic situsurile de restricie (dispar sau apar noi situsuri de
restricie), care se evideniaz prin modificarea numrului i lungimii fragmentelor de restricie;
- detectarea mutaiilor prin deleii, duplicaii sau inserii ale unor fragmente polinucleotidice mai mari de
50-100p.b., care se evideniaz prin modificarea lungimii fragmentelor de restricie;
- acestea permit diagnosticul prenatal sau presimptomatic al mutaiilor patologice i depistarea
purttorilor heterozigoi de gene mutante.
Metoda Southern blot are i limite: (1) nu permite detectarea mutaiilor punctiforme sau
microdeleiilor la nivelul secvenelor de ADN dintre situsurile de restricie; (2) este laborioas,
complex i scump.
TEHNICA NORTHERN-BLOT
Metoda Northern-blot const n transferul moleculelor denaturate de ARN pe filtre de nailon sau
nitroceluloz, urmat de hibridarea cu sonde marcate. Aceast metod este similar tehnicii Southernblot cu deosebirea c ARNm extras i purificat nu este supus scindrii cu enzime, iar electroforeza
decurge n condiii de denaturare. Tehnica Northern-blot permite identificarea transcripilor genelor
analizate, cantitii de ARNm, stabilirea lungimii lor.
TEHNICA WESTERN-BLOT
Aceast metod const n identificarea unei proteine specifice din amestecul de proteine celulare.
Pentru aceasta, proteinele sunt separate prin electroforez n condiii de denaturare. Proteinele separate dup
greutatea molecular sunt transferate pe filtre de nailon sau nitroceluloz i supuse tratrii cu anticorpi specifici
marcai radioactiv sau fluorescent. Prin aceast metod se poate identifica prezena/lipsa proteinei,
dimensiunile ei, rata de expresie a genei.
19
Extragerea ADN
Electroforeza
produilor PCR
Pregtirea componentelor
pentru PCR
Vizualizarea
produilor PCR
Amplificarea ADN-int
Autoradiografia i interpretarea
rezultatelor
Pentru a realiza amplificarea unei secvene este necesar cunoaterea structurii genei normale
sau mutante i sinteza primerilor specifici complementari capetelor fragmentului de interes. Primerii
reprezint secvene oligonucleotidice monocatenare de 20-30 baze care sunt obinute prin sintez
artificial. PCR se bazeaz pe hibridarea ADN int - primer i replicarea semiconservativ a ADN.
Avantajele tehnicii PCR sunt urmtoarele: necesitatea cantitilor mici de ADN, rapiditatea ei
(n cteva ore se obin milioane copii de ADN), iar specificitatea primerilor permite amplificarea
selectiv a ADN i, de menionat c, produsele de amplificare pot fi utilizate n calitate de sonde pentru
hibridri n alte tehnici.
Aplicaiile practice ale tehnicii PCR:
- detectarea mutaiilor cunoscute la bolnavi i purttori, n diagnosticul prenatal i presimptomatic al
bolilor ereditare;
- determinarea genelor de predispoziie la bolile comune (coronaropatii, boala hipertonic, tulburri
psihice etc.);
- diagnosticul precoce i evaluarea pronosticului bolilor canceroase;
- determinarea prenatal a sexului;
- identificarea agenilor patogeni (virui, bacterii);
- dactiloscopia genomic n identificarea persoanelor, analiza filiaiei (paternitate, maternitate);
- tipizarea HLA.
20
Hibridarea in situ
Hibridarea in situ reprezint o tehnic molecular, n care o sond specific marcat poate
identifica direct pe preparatele celulare:
(1) o gen pe un anumit cromozom sau fragment de cromozom;
(2) un ARNm ntr-o celul particular sau esut;
(3) numrul moleculelor de ARNm n dependen de perioada ontogenetic sau tip tisular;
(4) ADN viral;
(5) deleiile cromozomiale submicroscopice;
(6) genele responsabile de producerea cancerului, localizarea i nivelul lor de expresie.
n ultimii ani se utilizeaz metoda FISH (Fluorescence In Situ Hibridization) care utilizeaz
sonde fluorescent marcate. Metoda FISH este simpl, poate fi aplicat pe preparate celulare arhivate,
este rapid, nu modific morfologia celulelor.
Tehnica FISH
21
CURS 9
CARACTERE EREDITARE
RELAIA GENOTIP - FENOTIP
Definirea biologic a unui individ este determinat de ansamblul unor caractere morfologice,
fiziologice, biochimice, psihice i comportamentale fenotipul, controlate de aciunea, n diferite proporii,
a factorilor ereditari i a celor de mediu. Sistemul de gene din setul diploid de cromozomi al unui individ,
care determin formarea unui anumit fenotip se numete genotip. Caracterele, la formarea crora genotipul
particip ntr-o proporie mai mare de 50% poart denumirea de caractere ereditare. Caracterele ereditare
pot avea determinism monogenic sau poligenic (multifactorial).
CARACTERISTICA GENELOR ALELE I NEALELE
Genele alele sunt localizare n loci identici pe cromozomi omologi i controleaz acelai
caracter sau forme alternative ale aceluiai caracter. Genele alele se pot prezenta n mai multe forme
moleculare diferite polialelism, dar n genotip, la o persoan, sunt prezente numai dou alele o
pereche (excepie - pe cromozomii X i Y la brbai este prezent doar o alel pentru fiecare gen).
Fiecare individ poart circa 30 mii perechi de
gene alele, dup unele este homozigot - purttor de
gene alele identice, dup altele este heterozigot purttor de gene alele diferite i hemizigot dup
genele nlnuite cu cromozomul X la brbai. n cazul
heterozigoiei se manifest alela cu o activitate mai
mare (gena dominant) fa de a doua (gena
recesiv). Astfel sunt alele:
- cu activitate moderat normomorfe;
- cu activitate mrit hipermorfe;
- cu activitate mic hipomorfe;
- neactive amorfe;
- cu funcie nou neomorfe.
Manifestarea fenotipic a unei alele depinde i
de alte gene nealele i de factorii de mediu.
n timpul transmiterii: n meioz, genele alele
se separ n gamei diferii segreg, iar la fecundare se combin ntmpltor formnd diferite
genotipuri, determinnd segregarea caracterelor ce reprezint baza legilor ereditii mendeliene. Alelele
unui individ una este de origine matern i alta de origine patern. Individul homozigot produce
gamei identici dup alela dat, iar individul heterozigot produce gamei diferii 50% vor conine o
alel i 50% vor conine cealalt alel.
Gene nealele sunt localizate n loci diferii ai cromozomilor i, de regul, controleaz caractere
diferite sau coopereaz pentru formarea unui caracter complex. Se manifest fenotipic independent una
fa de alta sau interacioneaz determinate de:
o efectul poziiei genelor dintr-un haplotip;
o epistazie;
o aciunea complimentar;
o poligenia aditiv.
Genele nealele se transmit:
- n bloc nlnuit, dac se afl pe acelai cromozom i formeaz grup de nlnuire, haplotipuri;
- independent, dac se afl pe cromozomi diferii.
22
Exprimarea fenotipic n populaie a caracterelor monogenice este de regul bimodal (de ex., 75%
din populaie are Rh+, iar 25% - Rh-). Unele caractere monogenice prezint mai multe forme alternative
polimorfisme determinate de existena alelelor multiple i/sau interaciunea cu ali factori ereditari sau
neereditari (de ex., mai multe variante de grupe sangvine dup sistemul AB0 I [0], II [A1 sau A2], III [B],
IV [A1B sau A2B]).
Caracterele monogenice pot fi att normale (de ex., grupele sangune, grupele serice, antigenii
tisulari, etc.), ct i patologice (de ex., polidactilia, albinismul, fenilcetonuria, hemofilia, daltonismul, unele
forme ale displaziei smalului dentar, etc.).
23
Caracterul
Alele
Localizare pe
cromozom
Factorul Rhesus
D, d
Gusttor
G, g
Secretor
Se, se
19
Grupe sangvine
AB0
0, A1, A2, B
Relaiile dintre
alele
Dominan /
recesivitate
Dominan /
recesivitate
Dominan /
recesivitate
Genotipuri
Fenotipuri
DD, Dd
dd
GG, Gg
gg
SeSe, Sese
sese
Rh+
RhGusttor
Negusttor
Secretor
Nesecretor
Dominan /
recesivitate
00
A1A1, A1A2, A10
A2A2, A20
BB, B0
0 (I)
A1 (II)
A2 (II)
B (III)
Codominan
A1B
A2B
MM
MN
NN
Hp1Hp1
Hp1Hp2
Hp2Hp2
Xg(a+)Xg(a+),
Xg(a+)Xg(a-), Xg(a+)Y
Xg(a-)Xg(a-), Xg(a-)Y
A1B (IV)
A2B (IV)
M
MN
N
Hp1-1
Hp1-2
Hp2-2
Grupe sangvine
MN
M, N
Codominan
Haptoglobine
Hp1, Hp2
16
Codominan
Grupe sangvine
Xg
Xg(a+),
Xg(a-)
Dominan /
recesivitate
Xg+
Xg-
Unele gene au aciune unic (o gen un caracter), altele au aciune multipl, pleiotrop (o
24
epistazia fenomenul cnd o gen (epistatic) influeneaz activitatea unei alte gene nealele
(hipostatic). De ex., gena h n stare homozigot blocheaz expresia genelor sistemului AB0
fenotipul Bombay:
o persoanele cu genotip HHBO sau HhBO prezint antigeni B pe eritrocite, iar
o persoanele cu genotip hhBO nu prezint antigeni B pe eritrocite.
- aciunea complementar a genelor pentru formarea unui caracter coopereaz diferite gene prin
aciunea concomitent a produilor lor (de ex., hemoglobina A este rezultatul expresiei genelor globinei de pe cromozomul 16 i -globinei de pe cromozomul 11);
- efectul poziiei - activitatea unei gene este influenat de alte gene sau secvene nvecinate;
modificarea secvenelor nvecinate pot duce la inhibarea sau activarea defectiv a genei.
Genotipul se afl sub influena diferitor factori genetici sau negenetici, interni sau externi ce pot
influena capacitatea de manifestare fenotipic a genei:
- penetrana reprezint frecvena cu care o gen se manifest fenotipic la indivizii heterozigoi;
penetrana poate fi complet (toi heterozigoii prezint caracterul dominant) sau incomplet (doar o
parte dintre heterozigoi prezint caracterul dominant);
- expresivitatea reprezint gradul sau severitatea de manifestare fenotipic a unei gene (de ex.,
forme complete sau incomplete ale unui sindrom, forme uoare sau forme grave ale unei patologii).
-
Expresivitatea reprezint gradul sau severitatea de manifestare fenotipic a unei gene la diferii
indivizi cu acelai genotip. Cauzele expresivitii variabile pot fi interaciunile genice sau factorii de
mediu i se manifest prin forme complete sau incomplete ale unei patologii, forme uoare sau forme
grave ale unei patologii, etc..
25
Instabilitatea genelor n irul generaiilor este determinat de mutaii dinamice. Ele sunt
reprezentate de creterea numrului de copii ale unor repetri trinucleotidice situate n proximitatea sau
chiar n interiorul genelor structurale, cu ocazia diviziunilor pe care le realizeaz celula purttoare.
Exist variaii ale numrului de repetri trinucleotidice:
- polimorfisme ADN benigne;
- premutaia secvena de ADN devine instabil, dar nu determin un fenotip patologic;
- mutaia complet - prin expansiunea repetrilor determinnd fenotip patologic.
Purttorii premutaiilor sunt fenotipic normali. Expansiunea repetrilor are loc n gametogenez.
Astfel unii din gameii purttorilor sntoi vor conine mutaia complet, care la descendeni va
produce un fenotip patologic.
n gametogeneza ultimilor, din cauza instabilitii acestor repetri, vor aprea expansiuni adiionale,
care la urmtoarea generaie va produce un fenotip patologic mai grav (=fenomenul de anticipaie).
Mutaie
complet
Amprentarea genomic este un proces genetic implicat n reglarea activitii genelor, n special
prenatal, controlnd dozajul genetic prin inactivarea selectiv a genelor de origine matern sau patern.
26
Mecanismele amprentrii gnelor nu sunt pe deplin elucidate. Unul din acestea ar putea fi determinat de
metilarea ADN proces asociat cu inactivarea genei.
De exemplu, gena Igf-2 ce controleaz sinteza
unuia dintre factorii de cretere poate fi implicat n
procesul de cretere (talia). Mutaia acestei gene este
implicat n apariia nanismului, n cazul dac este
motenit pe linie patern. Astfel indivizii heterozigoi
(Na) pot avea fenotip normal dac gena mutant (a)
este de origine matern sau sunt cu hipostatur (pitici)
dac gena (a) are origine patern. Duplicaia genei
normale (N NNa) poate cauza supracreterea dac
este motenit pe linie patern sau prezint fenotip
normal dac motenete pe linie matern.
Disomia uniparental este fenomenul, cnd
zigotul conine doi cromozomi omologi motenii de la
acelai printe. Ea apare ca rezultat al nedisjunciilor cromozomilor n meioza matern sau patern,
urmat de eliminarea postzigotic a cromozomului supranumerar de cealalt origine. O alt cauz a
apariiei disomiei uniparenatale ar putea fi translocaia robertsonian. Astfel, persoanele cu disomie
uniparental motenesc de la un singur printe alelele pentru anumite caractere, nlnuite cu
cromozomul disomic. Dar, n dezvoltare exist o contribuie difereniat a informaiei din cromozomii
materni i paterni (dozaj genetic). Totodat prezena ambelor genomuri parentale este esenial pentru
dezvoltarea feilor viabili. Necesitatea existenei materialului genetic a ambilor prini a fost
demonstrat prin consecinele disomiei uniparentale. Sindromul Prader Willi i sindromul Angelman
sunt determinate de amprenarea genei Snrpn cu localizare n cromozomul 15q11-13. n cazul
sindromului Prader Willi s-a identificat disomia uniparental matern a cromozomului 15, care se
manifest fenotipic prin retard mintal moderat, obezitate i hipostatur. Sindromul Angelman rezult
prin disomie uniparental patern, manifestndu-se fenotipic prin retard mintal sever i ataxie. n
disomia uniparental matern a cromozomului 7 au fost depistat retard de cretere.
27
28
CURS 10
STUDIUL CARACTERELOR EREDITARE
Caracterele ereditare normale sau anormale (bolile genetice) se caracterizeaz prin determinism
monogenic, poligenic sau multifactorial. De regul, determinismul genetic al caracterelor se stabilete
odat cu formarea genotipului individului la fecundare. Astfel, caracterele ereditare au un ir de
particulariti prin care se deosebesc de cele neereditare:
- sunt produse prenatal;
- au manifestare congenital;
- se transmit genealogic;
- sunt familiale;
- sunt concordante la gemenii monozigoi;
- se asociaz cu marcheri genetici;
- au o distribuie populaional specific.
De fapt aceste particulariti luate fiecare n parte, nu au o valoare absolut deoarece unele dintre ele se pot
ntlni i la caracterele i bolile neereditare dar, atunci cnd ele se asociaz mai multe deodat la un
caracter, semnific, de obicei, natura ereditar.
PARTICULARITILE CARACTERELOR EREDITARE
1. Determinismul genetic
Fiecare caracter ereditar este determinat de interaciunea genotip factorii de mediu. Gena sau
genele motenite determin un caracter fenotipic prin:
- sinteza unor proteine specifice (caracter elementar);
- realizarea funciei specifice a proteinei la nivel de celul i/sau esut;
- manifestarea unui anumit caracter (normal sau patologic) la nivel de organism caracter
fenotipic.
2. Determinismul prenatal
Constituia genetic a fiecrui individ se stabilete n momentul formrii zigotului, iar fenotipul se
formeaz prin expresia difereniat a genelor motenite (caractere de specie, caractere normale individuale,
anomalii). Caracterele ereditare sunt determinate pn la natere, dei se pot manifesta la diferite etape ale
ontogenezei. Dar, n perioada prenatal, organogeneza poate fi influenat i de factorii mediului,
producnd anomalii de dezvoltare neereditare (de ex., fenocopiile).
3. Manifestarea congenital
Manifestarea congenital reprezint prezena caracterului sau a bolii nc de la natere. Majoritatea
caracterelor i bolilor ereditare sunt prezente la natere, dar exist i excepii, cnd ele se manifest mai
trziu la o anumit vrst, mai precoce sau mai tardiv (de ex., hipodonia, miopatia, coreea Huntington
etc.). Dar, exist i afeciuni neereditare cu manifestare congenital (de ex., fetopatia rubeolic, fetopatia
alcoolic, boala constriciilor amniotice).
4. Transmiterea genealogic
Transmiterea genealogic reprezint motenirea unui caracter de la prini i transmiterea lui la
descendeni. Este cunoscut c caracterele i bolile ereditare se transmit din generaie n generaie. Dar
exist i unele care nu se transmit:
- datorit decesului precoce a persoanelor afectate (bolnavii cu hemoglobinopatii severe);
- datorit sterilitii persoanelor afectate (de ex., sindromul Morris - testicul feminizant);
- apariia unor mutaii noi care ar putea s se transmit generaiilor urmtoare;
- boli recesive rare.
Exist i boli neereditare care se pot transmite de la o generaie la alta (de ex., transmiterea mam - ft a
sifilisului, SIDA etc.).
Analiza transmiterii genealogice este un lucru esenial n stabilirea naturii ereditare a unui caracter
sau a unei boli deoarece transmiterea ereditar se face dup nite reguli stricte, matematice (ex: legile lui
29
Mendel), n timp ce transmiterea neereditar are un caracter aleator, n funcie de condiiile momentane de
mediu.
5. Distribuia familial
Distribuia familial reprezint frecvena crescut a anomaliei / caracterului la membrii nrudii ai
aceleiai familii, comparativ cu frecvena din populaia general (concentrare familial a caracterului).
Majoritatea bolilor ereditare prezint o net distribuie familial, dei exist i boli ereditare cu apariie
sporadic (de ex., anomaliile cromozomice care apar sporadic deoarece de obicei determin anomalii de
reproducere). Exist i boli neereditare care pot prezenta distribuie familial atunci cnd membrii familiei
sufer influena unor condiii similare de mediu (de ex., gua endemic, tuberculoza, intoxicaiile, unele
infecii etc.).
6. Concordana caracterului la gemenii monozigoi
Caracterele monogenice, pur ereditare sunt totdeauna identice la gemenii monozigoi (100 %
concordan), iar cele neereditare sau multifactoriale pot fi discordante. Cnd concordana unui caracter
este regula, iar discordana excepie, se vorbete despre caractere determinate parial ereditar (caractere
multifactoriale). In cazul caracterelor ecologice, concordana este egal cu discordana la gemenii
monozigoi.
7. Frecvena diferit n populaii diferite
Anumite caractere ereditare prezint frecvene diferite n populaii genetic diferite. Aceasta se
explic prin concentrarea anumitor gene ntr-o anumit regiune. De exemplu:
- deficiena n G6PD (glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza) sau unele hemoglobinopatii (de ex.,
sicklemia) sunt mai frecvente n zonele cu malarie, deoarece heterozigoii pentru aceste afeciuni
sunt rezisteni la plasmodiul malariei;
- n izolatele umane (geografice, etnice sau religioase), prin cstorii consangvine se creeaz un
fond crescut de alele comune (de ex., n majoritatea populaiilor din Europa frecvena albinismului
este 1:20000, iar ntr-un izolat din regiunea Bihorului, Romnia este de 1:100).
8. Prezena anomaliilor cromozomice
Toate afeciunile care se nsoesc de anomalii cromozomice de numr sau de structur (vizibile la
analiza cariotipului) sunt anomalii genetice (ereditare). Dar nu toate bolile ereditare se nsoesc de anomalii
cromozomice (de ex., bolile ereditare produse prin mutaii genice sau poligenice se nsoesc de un cariotip
normal). Cariotipul normal nu exclude deci existena unui caracter ereditar anormal la subiectul cercetat.
9. Asocierea cu marcheri genetici
Unele caractere fenotipice anormale se pot asocia cu marcheri genetici specifici uor detectabili, de
obicei caracteristici pentru o familie, la care se refer:
- o anumit secven ADN, reprezentnd o gen normal, localizat n vecintatea genei patologice;
- un microsatelit aflat n vecintatea sau interiorul unei gene patologice;
- un situs de restricie.
Asocierea se poate explica prin urmtoarele fenomene:
- transmiterea nlnuit a genelor ce formeaz haplotip (de ex., asocierea Rh - eliptocitoz);
- o gen favorizeaz apariia unei anumite tulburri (ex. asocierea HLA-B27 - spondilit
anchilozant).
Numai asocierea criteriilor prezentate permite stabilirea naturii ereditare a unui caracter. Criteriile
luate separat, nu au valoare practic.
30
31
METODE CITOGENETICE
Metodele citogenetice includ diverse tehnici de analiz microscopic a materialului geneic la
nivel de celul:
- analiza cromozomilor metafazici i prometafazici (cariotiparea);
- teste de citogenetic molecular pe cromozomi interfazci (FISH, mFISH, SKY);
- testul Barr pentru analiza cromatinei sexuale X;
- testul F pentru analiza cromatinei sexuale Y.
Cariotiparea reprezint analiza setului de cromozomi din celulele somatice n diviziune pentru
aprecierea numrului, formei i mrimii cromozomilor, utiliznd diferite tehnici de colorare /
vizualizare. Astfel, analiza plcilor metafazice sau prometafazice permite depistarea diferitor anomalii
cromozomice de numr sau de structur implicate n sindroame plurimalformative, neoplazii, stri
intersexuale.
Analiza cromozomilor interfazici, bazat pe hibridizarea in situ permite stabilirea unor
anomalii cromozomice submicroscopice (microdeleii sau microduplicaii) sau stabilirea poziiei unor
gene n cromozomi.
Testul cromatinei sexuale permite diagnosticul sindroamelor cromozomiale cu implicarea
heterozomilor X sau Y i stabilirea sexului genetic. Cromatina sexual X (corpusculul Barr) poate fi
uor vizualizat pe preparate citologice n interfaz (numrul corpusculilor Barr + un cromozom X =
numrul cromozomilor X n celula analizat).
METODE BIOCHIMICE
Spectrul de metode biochimice presupune analiza produsului primar al expresiei genice
proteina, precum i a metaboliilor controlai de aceast protein. Sunt utilizate metode calitative i
cantitative specifice unui anumit tip de metabolii. Aceste tehnici sunt indicate n:
- diagnosticul unor boli monogenice enzimopatii;
- diagnosticul unor boli multifactoriale;
- stabilirea unei predispoziii la boal.
De exemplu, prin analiza electroforetic a proteinelor serice se poate stabili polimorfismul individual i,
indirect, constituia genetic a individului (genotip homozigot sau heterozigot).
METODA GENEALOGIC
Una dintre particularitile caracterelor ereditare este concentrarea lor familial i transmiterea
de la o generaie la alta. Metoda genealogic presupune analiza familial, identificarea persoanelor cu
un anumit caracter i urmrirea acestuia pe parcursul mai multor generaii. Aceasta este important
pentru stabilirea tipului de transmitere a caracterului i calcularea probabilitii de reapariie a
caracterului ereditar la descendenii unui cuplu.
Studiul genealogic se realizeaz n mai multe etape:
- anamneza familial;
- analiza clinic i paraclinic a membrilor familiei;
- ntocmirea arborelui genealogic;
- analiza tipului de transmitere a caracterului;
- stabilirea genotipurilor persoanelor din familia studiat i calcularea probabilitii de
manifestare a unui fenotip normal sau patologic;
- sfat genetic.
Anamneza familial este primul pas n obinerea informaiilor despre prezena unui anumit
caracter ntr-o familie. De regul, informaia este obinut de la proband (cazul princeps persoana ce
se adreseaz dup sfat genetic). Datele despre structura familiei sunt nregistrate n fie speciale de
consult genetic i sunt completate pe baza informaiilor obinute din analiza familial.
32
Analiza familial include chestionarea rudelor probandului (cel puin 2-3 generaii), analiza
clinic i paraclinic a probandului i a rudelor afectate i sntoase, analiza fielor medicale personale,
efectuarea testelor genetice (n dependen de caz cariotip, cromatin sexual, analiza ADN, studiul
nlnuirii cu marcheri genetici). Toate aceste informaii pe de o parte completeaz istoricul familiei, pe
de alt parte concretizeaz tipul anomaliei sau afeciunii (diagnostic clinic precis). Fiele de consult
genetic includ urmtoarele date:
(a) dac probandul este copil evoluia sarcinii, boli acute sau cronice ale mamei i medicamente
administrate n timpul sarcinii, expunerea la ageni teratogeni sau mutageni; vrsta prinilor; prezena
consangvinitii; naterea la termen sau prematur, durata travaliului, natere natural sau prin manevre
obstetricale; date despre nou-nscut greutatea i talia la natere, scor Apgar; evoluia postnatal.
(b) dac probandul este adult evoluia pubertii, funcia reproductiv (normal sau perturbat:
sterilitate, avorturi spontane, nou-nscui mori sau nou-nscui vii malformai); locul de munc,
expunere la noxe.
Analiza familial este util pentru diferenierea unei anomalii congenitale neereditare de o boal
ereditar propriu-zis.
ntocmirea arborelui genealogic. Arborele genealogic este reprezentarea grafic, cu ajutorul
unor semne convenionale, a rezultatelor anchetei familiale i servete la stabilirea tipului de
transmitere n cazul n care acesta este ereditar.
Stabilirea tipului de transmitere a caracterului n cazul cnd acesta este ereditar, se
efectueaz n conformitate cu criteriile de recunoatere (prezena caracterului n fiecare generaie sau
discontinuitate n transmitere; raportul prezenei caracterului la cele dou sexe). Transmiterea poate fi
monogenic sau poligenic, autozomal, sau lincat cu cromozomii sexuali, determinat de alele
dominante sau recesive. n dependen de tipul de transmitere, se stabilete genotipul persoanelor
sntoase i afectate, se calculeaz riscul de recuren (probabilitatea apariiei anomaliei analizate la
descendeni).
Rezultatele analizei genealogice a familiei stau la baza unui consult genetic adecvat pentru:
- informarea obiectiv a familiei;
- planificarea familiei;
- opiuni pentru diagnosticul prenatal n scop de prevenire a naterii copiilor cu anomalii;
- prevenirea manifestrii unor complicaii n cazul bolilor genetice cu manifestare la adult.
METODA GEMENILOR
Prin analiza comparativ a unui caracter la gemenii monozigoi i gemenii dizigoi se poate
urmri o concordan sau discordan care poate fi asociat cu ponderea factorilor genetici i de mediu
n manifestarea unui fenotip.
Gemenii monozigoi (GMZ) provin din acelai zigot i ca urmare sunt genetic identici. De
regul GMZ, avnd genotip identic, au caractere ereditare asemntoare (concordan) i difer doar
dup caracterele influenate de mediu (discordan).
Gemenii dizigoi (GDZ) sunt gemeni provenii din fecundarea a dou ovule diferite de ctre doi
spermatozoizi, ei difer genetic ca oricare membru al unei fratrii fa de ceilali.
Pentru stabilirea cotei factorilor genetici i celor de mediu n formarea unui caracter, se
calculeaz coeficientul de ereditate (H):
Concordan aGMZ Concordan aGDZ
H
x100%
100% Concordan aGDZ
Concordana GMZ sau GDZ reprezint procentul de asemnare dup un anumit caracter la mai
multe perechi de gemeni (valori statistice veridice). Cu ct raportul este mai apropiat valoric de 100%,
participarea factorilor genetici n determinismul caracterului este mai mare. Coeficientul are valoarea 100%
pentru caracterele pur ereditare (concordana la gemenii monozigoi este de 100%).
La valorile H cuprinse ntre 100-70% factorul ereditar are rol major, preponderent; ntre 70-40%
caracterul este format sub influena mediului dar cu predispoziie genetic; mai puin de 40% - caracterul este
ecologic.
33
n prezent metoda gemenilor se utilizeaz pentru stabilirea rolului factorilor genetici i de mediu n
longevitate, manifestarea talentului, sensibilitatea la medicamente, etc.
Caracterul
analizat
Sexul
ABO
Dermatoglife
Concordana la
GMZ (%)
100
100
95
Concordana la
GDZ (%)
58
65
60
Reumatism
60
34
40
Diabet zaharat
30
16
17
H (%)
100
100
88
Tipul
caracterului
Genetic
Genetic
Genetic
Cu predispoziie
genetic
Ecologic
METODA POPULAIONAL-STATISTIC
Populaia uman reprezint totalitatea indivizilor ce locuiesc pe un anumit teritoriu, ntre care are
loc schimb permanent de informaie ereditar. Structura genetic a unei populaii se poate deosebi de alta
datorit existenei unui genofond particular determinat de suma genotipurilor indivizilor din aceast
populaie. S-a stabilit c genofondul unei populaii este relativ constant de-a lungul mai multor generaii.
Stabilitatea genetic este valabil pentru populaia ideal care se caracterizeaz prin urmtoarele
particulariti:
- este numeroas (peste 1,5 mii indivizi);
- este panmictic (cstorii la ntmplare);
- lipsa fluxului interpopulaional de gene (lipsa migraiilor);
- rata mutaiilor rmne constant;
- lipsa seleciei n favoarea sau defavoarea unui genotip;
- lipsa undelor populaionale.
Echilibrul genetic al unei populaii ideale este caracterizat de legea Hardy-Weinberg, valabil
pentru caracterele monogenice:
1. ntr-o populaie ideal frecvena alelelor rmne constant de-a lungul generaiilor:
p+q=1, unde
p frecvena alelei dominante (A)
q frecvena alelei recesive (a)
2. ntr-o populaie ideal frecvena genotipurilor rmne constant de-a lungul generaiilor:
p2+2pq+q2=1, unde
2
p frecvena homozigoilor dominani (AA)
2pq frecvena heterozigoilor (Aa)
q2 frecvena homozigoilor recesivi (aa).
Factorii care ar putea modifica genofondul populaiei sunt: izolatele, cstoriile consanguine sau
asortative, migraiile, mutageneza, selecia, deriva genic etc.
Valoarea practic a metodei populaional statistice const n cunoaterea genofondului
populaiei, estimarea frecvenei unor alelele mutante, calcularea numrului aproximativ al persoanelor
afectate i purttoare de mutaii patologice etc. Datele statistice pot fi utile n planificarea activitii
instituiilor medicale, iniierea unor programe de profilaxie a patologiilor genetice.
34
CURS 11
INTRODUCERE N PATOLOGIA GENETIC UMAN
Bolile genetice reprezint stri patologice determinate sau condiionate de modificri specifice
ale materialului genetic (mutaii). Bolile genetice sunt numeroase i variate att dup cauza apariiei,
momentul manifestrii, ct i tabloul clinic.
ETIOLOGIA BOLILOR GENETICE
Mutaiile pot afecta att materialul genetic nuclear, ct i ADN-ul mitocondrial; pot afecta
materialul genetic al celulelor generative i se pot transmite genealogic, sau pot afecta materialul
genetic al celulelor somatice realizndu-se o clon celular mutant cu consecine patologice doar
asupra fenotipului purttorului, fr transmitere genealogic.
Mutaiile pot fi ereditare (motenite), manifeste sau nu la alte generaii, sau pot fi de novo spontane sau produse sub aciunea unor factori de mediu mutageni (radiaii, virusuri, noxe profesionale,
diverse substane chimice toxice).
CLASIFICAREA BOLILOR GENETICE
Bolile genetice sunt determinate sau condiionate de mutaii la nivelul moleculelor de ADN
(modificri calitative sau cantitative ale materialului genetic). n dependen de cota de participare a
factorilor genetici bolile genetice se clasific n:
- boli cromozomiale determinate de anomalii de numr sau structur a cromozomilor;
- boli monogenice sau monofactoriale, determinate de mutaii dominante sau recesive, manifestarea
crora nu depinde de anumite condiii de mediu;
- boli poligenice sau multifactoriale care sunt condiionate de mutaii mai multe gene cu efect minor
sau aditiv i determinate de aciunea patologic a factorilor de mediu.
Specialitii din domeniul geneticii medicale insist asupra clasificrii etio-patogenetice a bolilor
genetice:
boli cromozomiale sau sindroame cromozomiale plurimalformative;
boli monogenice sau moleculare;
boli poligenice sau multifactoriale, boli cu predispoziie genetic;
boli mitocondriale;
boli genetice ale celulelor somatice (boala canceroas);
boli de incompatibilitate materno-fetal.
n prezent sunt cunoscute peste 1000 sindroame cromozomiale. Dup datele Dr. Mc.Kusick au
fost descrise i nregistrate peste 9000 de boli i sindroame monogenice. Luate fiecare n parte, au o
frecven populaional mic, dar n ansamblu reprezint o categorie de patologie uman important, n
special lund n consideraie impactul lor medico-social:
- 50% din toate avorturile spontane cunoscute n primul trimestru de sarcin prezint o anomalie
cromozomial;
-
50% din toi copii cu retard mintal sever, cecitate sau surditate prezint o cauz genetic;
10% din cazurile comune de cancer (CR de sn, CR de colon sau CR ovarian) au o component
important genetic;
10% din aduli prezint fie o maladie pur genetic, fie o maladie cu predispoziie genetic.
36
37
2. Mutaiile patologice, ca factori etiologici, pot fi cauza bolilor cronice. Evoluia cronic i
progresiv n bolile genetice este o caracteristic, cu excepia celor letale.
3. Mutaiile genice se manifest nu numai cu semne specifice, dar i cu diminuarea rezistenei
nespecifice a organismului la bolile asociate, determinnd cronizarea ultimelor.
4. Constituia genetic a pacientului:
- poate modifica eficacitatea msurilor terapeutice,
- poate determina reacie patologic a unor indivizi la anumite medicamente,
- determin un polimorfism n viteza de eliminare sau oxidare a unor preparate
medicamentoase, sau a metaboliilor care pot modifica farmacocinetica unor
medicamente.
5. Unele mutaii sau asocierea lor duc la scderea capacitii organismului de a rezista la
aciunea distrugtoare a factorilor de mediu, astfel i nsntoirea bolnavului va fi
problematic. Aciunea genelor asupra cronizrii proceselor patologie poate fi explicat prin
modificarea direcionrii unor procese biochimice, modificarea statusului hormonal, deficiene
ale rspunsului imun.
PARTICULARITILE BOLILOR GENETICE
Fiecare caracter ereditar este determinat de interaciunea genotip factorii de mediu. Gena sau
genele mutante determin un fenotip patologic prin:
- sinteza anormal a unor proteine specifice (efectul patologic primar al mutaiei);
- dereglarea structurii sau funciei specifice la nivel de celul i/sau esut (efectul patologic
secundar al mutaiei);
- manifestarea unui anumit caracter patologic sau sindrom la nivel de organism simptoamele bolii
(efectul patologic teriar al mutaiei).
Bolile i sindroamele genetice se caracterizeaz prin determinism monogenic, poligenic, multifactorial
sau apar n rezultatul anomaliilor cromozomiale. De regul, determinismul genetic al bolii se stabilete
odat cu formarea genotipului individului la fecundare. Astfel, afeciunile ereditare au un ir de
particulariti prin care se deosebesc de cele neereditare:
- sunt produse prenatal i se pot manifesta congenital sau n orice perioad de via;
- se transmit genealogic i au o agregare familial; dar pot aprea spontan prin mutaii de novo;
- se asociaz cu marcheri genetici (anomalii cromozomice sau secvene nucleotidice specifice);
- sunt concordante la gemenii monozigoi i au o distribuie populaional specific;
- au evoluie cronic, progresiv i recidivant determinate de aciunea permanent a genei
mutante, cu manifestare variabil de la pacient la pacient, chiar i n cadrul aceleai familii;
- se manifest cu modificri patologice a mai multor organe i sisteme, datorit efectului
pleiotrop al genei mutante;
- sunt rezistente la metodele de tratament tradiionale.
METODELE STABILIRII NATURII GENETICE A UNEI BOLI
Pentru a stabili implicarea factorilor genetici n bolile umane i ponderea lor n producerea unei
patologii se urmrete:
- studiul transmiterii genealogice a bolii sau anomaliei i determinarea tipului de motenire,
calcularea riscului de manifestare sau de recuren;
-
determinarea defectului biochimic primar la nivel de sintez proteic sau efectele acestuia asupra
unui proces biochimic controlat de gena/proteina modificat.
Bolile cromozomiale sunt rezultatul unor modificri specifice ale numrului cromozomilor
caracteristic speciei (46 n celulele somatice umane) sau modificri structurale ale acestora. Efectele i
gravitatea anomaliilor cromozomice depind de tipul de anomalie i mrimea dezechilibrului genetic - cu
ct defectul cantitativ este mai mare, cu att consecinele sunt mai grave.
Sindroamele cromozomice prezint modificri fenotipice comune (tulburri de cretere pre- i
postnatal; ntrziere n dezvoltarea psiho-motorie i debilitate mintal; multiple anomalii viscerale,
disgenezii gonadice) i modificri specifice ale cromozomului sau cromozomilor implicai.
SINDROMUL DOWN (TRISOMIA 21)
Sindromul Down este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:700
nou-nscui, dar dependent de vrsta matern:
- la 20 ani 1:1500;
- la 30 ani 1: 900;
- la 35 ani 1: 400;
- la 40 ani 1:100;
- la 45 ani 1:30.
Cauza sindromului Down este trisomia 21:
95% - trisomia 21 omogen liber, avnd ca origine nondisjuncia meiotic;
5% - trisomia 21 mozaic sau translocaional.
Cariotipuri asociate n sindromul Down:
47, XX (XY), +21;
47, XX(XY), +21/ 46,XX(XY);
46, XX(XY), rob (21;13);
46, XX(XY), rob (21;14);
46, XX(XY), rob (21;15);
46, XX(XY), rob (21;21);
46 ,XX(XY), rob (21;22);
46, XX(XY), i(21q).
Manifestrile clinice majore sunt determinate de anomalii multiple de dezvoltare:
- hipotonie generalizat;
- dismorfism cranio-facial;
- malformaii cardiace;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut;
- risc crescut pentru leucemii.
Evoluie:
- n cazul de malformaii severe decesul n perioada de sugar;
39
40
Evoluie: 30% din cazuri deces n prima lun de via; 10% - supravieuiesc vrstei de 1 an cu
retard sever mental i somatic. Riscul de recuren 1%. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor
(cariotip, FISH).
SINDROMUL TRISOMIEI 8
Sindromul trisomiei 8 este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de
1:5000 nou-nscui i dependent de vrsta matern, mai frecvent sun afectai indivizii de sex masculin.
Cauza trisomia 8: 90% din cazuri sunt rezultatul unei nedisjuncii postzigotice, determinnd forme
mozaice ale trisomiei 8; 10% - sunt trisomii pariale determinate de rearanjamente strucrurale ale
cromozomului 8 (duplicaii). Cariotipuri asociate n sindromul Patau:
47, XX (XY), +8;
47, XX(XY), +8/ 46,XX;
46, XX(XY), 8p+;
46, XX(XY), 8q+.
Manifestrile clinice majore sunt deteminate de asocierea anomaliilor multiple de dezvoltare:
- dismorfism cranio-facial: frunte proieminent, strabism, epicant, hipertelorism, palatin arcuit,
despictur palatin, buze ngroate, urechi mari malformate;
- contracturi articulare, camptodactilia, aplazia rotulei, pliu palmar transvers unic;
- anomalii ale anusului;
- malformaii cardiace i renale;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut.
Evoluie: Trisomia 8 total este letal, iar n formele pariale sau mozaice pacienii au
longevitate sczut. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor
(cariotip, FISH).
SINDROMUL TURNER
Sindromul Turner este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:2000
1 : 5000 nou-nscuii de sex feminin. Cauza : 50% - 69% - monosomia X total i omogen, 30-40% forme mozaice i restul cazurilor, mult mai rare, sunt rezultatul unor monosomii X pariale (deleii,
izocromozomi, cromozom X inelar). Cariotipuri asociate n sindromul Turner:
45,X;
45,X / 46,XX;
46, X, Xq-;
46, X, i(X q);
46, X, del(Xp);
46, X, r(X);
Manifestrile clinice majore sunt determinate de anomalii multiple de dezvoltare:
o la nou-nscut piele abundent n exces la nivelul gtului, pterigium coli, limfedem
periferic localizat mai ales pe faa dorsal a piciorului;
o malformaii cardiace (DSA);
o hipostatur disproporionat;
o impubertizm, amenoree primar.
Evoluie: statura final a adultelor este ntre 125-145 cm; intelegena i sperana de via
sunt, n general, normale; tratamentul de substituie cu hormaoni estrogeni de la adolescen induce
dezvoltarea caracterelor sexuale secundare i previne osteoporoza, dar nu influieneaz statura i
infertilitatea. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor (cariotip,
FISH); testul Barr, de regul, este negativ.
41
SINDROMUL KLINEFELTER
Sindromul Klinefelter este un sindrom cu infertilitate masculin, cu incidena medie de
1:1000 nou-nscuii de sex masculin; 1 : 10 din brbaii infertili; 1 : 100 din bieii din instituiile
pentru retard mintal. Cauza: 85% - disomie X total i omogene (47,XXY), 15% - forme mozaice sau
polisomii X totale sau pariale. Cariotipuri asociate n sindromul Klinefelter:
47, XXY
47, XXY / 46,XY
48, XXXY
48, XXYY
49,XXXXY
etc.
Manifestri clinice majore:
o Talie nalt;
o Constituie de tip feminin;
o Ginecomastie;
o Pilozitate sczut de tip feminin;
o Testicule mici (sub 2 cm la adult), incapabile de a secreta testosteron;
o Oligo- sau azoospermie;
o Sterilitate primar;
o Retard mintal moderat.
Evoluie: Tratamentul de substituie cu testosteron induce dezvoltarea caracterelor sexuale
secundare i previne osteoporoza. De regul, indivizii cu sindrom Klinefelter sunt infertili, dar n
cazurile cu mozaicizm ar putea fi fertili. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul
cromozomilor (cariotip, FISH); testul Barr este pozitiv.
Sindromul
Cri-du-chat
Wolf-Hirschhorn
Prader - Willi
Angelman
Williams
Velo-cardio-facial
DiGeorge
BOLI MONOGENICE
Bolile i sindroamele monogenice sunt strile patologice determinate de mutaii dominante sau
recesive ntr-o singur gen cu efect major, ce determin o sintez anormal a lanului polipeptidic
codificat i, prin efect pleiotrop, anomalii de structur sau funcie celular. Acestea la rndul lor vor
42
Boli
Autozomal
dominante
Autozomal
recesive
X-lincate
Y-lincate
Mitocondriale
Total
1218
2201
4458
531
947
1420
1730
119
1487
171
2336
286
3907
412
19
59
6678
a. 2012
8005
19769
495
27
60
8587
1172
59
64
21064
SINDROMUL MARFAN
Sindrom autozomal-dominant ce afecteaz esutul conjunctiv cu expresivitate variabil, dependent
de factorii de mediu;
are o inciden de 1 : 10000 1 : 15000;
etiologia: apare ca urmare a unei mutaii n gena fibrilinei care este situat n locusul 15q21;
debuteaz n primii ani de via prin:
- creterea rapid a membrelor cu aspect de arahnodactilie;
- subluxaia de cristalin, cataract, strabism,
- articulaii laxe cu scolioz i cifoz;
- pectus excavatum sau carinatum;
- afeciuni cardiace (anevrism de aort);
sperana medie de via 40-50 ani;
diagnosticul presiptomatic se bazeaz pe analiza ADN.
COREEA HUNTINGTON
Afeciune neurovegetativ cu transmitere atozomal-dominant ce se manifest la indivizii de peste
30-40 ani;
are o inciden de 1 : 18000;
etiologia: apare ca urmare a unei mutaii dinamice n gena ce codific proteina huntingtina, situat
n locusul 4p16.3;
mutaia produce atrofia de nucleu caudat, putamen i globus palidus;
manifestri clinice majore:
- tulburri neurologice motorii progresive (coree, distonie);
- n timp apar tulburri de personalitate i demen;
decesul se produce la 15-20 ani de la debutul clinic;
agregare familial, afecteaz mai frecvent brbaii;
diagnosticul presiptomatic se bazeaz pe analiza ADN.
ADPKD
Boala Polichistic Renal de tip Autozomal Dominant este o afeciune multisistemic, caracterizat
prin scderea rezistenei esutului conjunctiv i astfel apar modificri structurale ale organelor
supuse stres-ului presional: tubii nefronali, conducte biliare, perete vascular, ducte pancreatice,
aparat valvular cardiac;
are o inciden de 1 : 1000;
etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena PKD1 situat n locusul 16p13.3 (85%) sau PKD2
din locusul 4q21-22 (15%);
manifestri clinice majore:
- dezvoltarea progresiv i difuz de chiti renali multipli, bilaterali, n toate segmentele tubilor
uriniferi;
- asocierea variabil cu alte anomalii extrarenale (cardiovasculare, digestive) - n special chiti
hepatici;
- manifestat de obicei la adult i evolund frecvent spre IRC;
44
SINDROMUL EHLERS-DANLOS
Reprezint un grup de boli genetice ale esutului conjunctiv cu transmitere autozomal-dominant;
are o inciden de 1 : 5000 1 : 50000;
etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena ce codific colagenul tip V (2q31);
manifestri clinice majore:
- manifestri cutanate aspectul hiperextensibil (cutix laxa); textur moale, catifelat; apariia
unor escare atrofice i a echimozelor;
- manifestri articulare hipermobilitate articular;
- cifoscolioz;
- anomalii oculare keratoconus; sclere albastre; subluxaie de cristalin; dezlipirea retinei;
- complicaii ruptura prematur a membranelor i hemoragiile pre- sau postpartum;
- ruperea vaselor ce reprezint o cauz frecvent de deces;
diagnostic prenatal pe baza testelor ADN.
FENILCETONURIA
Reprezint o hiperfenilalaninemie sever cu transmitere autozomal-recesiv;
are o inciden de 1 : 10000 nou-nscui;
46
etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena pentru fenilalaninhidroxilaz (PAH), cu localizare
12q24.1;
manifestri clinice majore:
- tulburri neorologice;
- retard somatic i mintal;
- demen n formele netratate;
- miros particular al urinei;
- dermatit cronic descuamativ;
boala se manifest n copilrie i depinde de dietoterapie (excluderea fenilalaninei din produsele
alimentare);
diagnosticul prenatal sau neonatal prin dozarea fenilalaninei plasmatice sau analiza ADN.
BOALA WILSON
reprezint o degenerescen hepato-lenticular cu tansmitere autozomal recesiv.
Are o inciden 1 : 100000;
etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena localizat pe crs. 13q14.3, ce determin tulburri n
transportul cuprului cu scdere a capacitii de ncorporare a cuprului n ceruloplasmin i scderea
secreiei biliare; cuprul se acumuleaz n ficat producnd leziuni la acest nivel; se depune n creer,
rinichi.;
manifestri clinice majore:
- debuteaz la persoanele tinere cu afectare hepatic i tulburi neurologice;
- afeciunea hepatic are o evoluie ciclic cu caracterul unei hepatopatii cronice (icter, astenie,
inapeten) cu citoliz;
- poate asocia anemie hemolitic;
- manifestrile neurologice tremor fin al extremitilor, coree, dizartrie, imposibilitate de a
coordona micrile;
- manifestri psihice cu alterarea personalitii (schizofrenie), scderea performanelor colare la
copii;
- semn specific prezena inelului Kayser-Fleischer.
supravieuirea depinde d gradul de afectare a ficatului; ciroza hepatic cauz frecvent de deces;
diagnosticul prenatal prin teste de ADN.
HEMOGLOBINOPATIILE
Reprezint un grup heterogen de patologii, cu transmitere autozomal - recesiv, determinate de
diverse variante ale Hb, care induc tulburri prin afectarea structurii i funciei hematiilor;
47
48
HEMOFILIILE A I B
Hemofiliile A i B sunt afeciuni XR; genele
mutante responsabile sunt localizate pe braul lung
(Xq28), avnd ca urmare deficitul factorilor VIII i
respectiv IX, componente ale cii intrinseci a
coagulrii.
Boala afecteaz 1 din 5000 de biei.
Hemofilia A este de 10 ori mai frecvent ca
hemofilia B.
Aspectul clinic al hemofiliei A depinde de gradul de activitate a factorului VIII i se exprim n
4 forme:
Forma
Concentraia
Manifestri clinice
factorului VIII
Sever
Sngerare spontan i dup circumcizie. Hemartroze
1%
repetate. Deformri articulare.
Moderat
1-5%
Hemartroze ocazionale. Deformri articulare rare.
Uoar
5-20%
Sngerare rar: dup intervenii chirurgicale,
stomatologice, dup traumatisme.
Ascuns
Se includ i purttoarele genei patologice.
25%
Diagnosticul prenatal al hemofiliilor se bazeaz pe stabilirea sexului, analiza ADN n vilozitile
coriale i dozarea factorului VIII sau IX n sngele fetal.
PROFILAXIA BOLILOR EREDITARE
Profilaxia primar const n evitarea concepiei sau naterii copilului cu anomalie grav,
incurabil prin diverse msuri ce intesc:
micorarea procesului mutaional;
limitarea concepiei n cazurile cu risc 100% sau ntreruperea sarcinii dup diagnosticul
prenatal;
diagnosticul preimplantiv cu selecia produilor de concepie mutani n cazurile de
fertilizare in vitro;
terapie genic germinal sau somatic cu revenirea la genotip normal.
Profilaxia secundar cuprinde o serie de inrervenii pentru prevenirea / atenuarea maniferstrii
complicaiilor la indivizii cu mutaii patologice:
msuri terapeutice perinatale i n timpul sarcinii;
diagnosticul preclinic cu aplicarea terapiei de prevenire a complicaiilor;
excluderea factorilor ce pot provoca apariia bolilor cu predispoziie genetic;
terapie de substituie / dietoterapie / transplant de esut .... pentru fiecare caz n
particular.
Profilaxia eficient poate fi relizat n cadrul unui centru specializat de consult genetic.
Diagnosticul prenatal cu scop de prevenire a bolilor genetice sau AC grave are ca scop
depistarea anomaliilor congenitale sau a bolilor genetice la embrion sau ft. Se realizeaz n cazurile de
sarcini cu risc teratogen sau genetic (anamnez familial sugestiv) i poate fi ca metod de screening
populaional.
Diagnosticul prenatal necesit respectarea principiului de siguran i precizie i se poate
realiza numai n cadrul unui centru specializat de consult genetic.
de organe, terapii celulare. Terapia genic are ca scop corecia cauzei bolii mutaiei genice.
Terapia genic reprezint modificarea genetic a celulelor afectate prin substituia genei mutante
amorfe cu o gen normal sau inhibarea unei gene patologice sau ARNm mutant. Terapia genic
poate fi realizat la nivelul celulelor somatice sau celulelor germinale (interzis). Boli candidate
pentru terapia genic sunt:
- Deficiena ADA SIDC (deficiena de adenozindezaminaz implicat n
sindromul imunodificienei combinate);
- Hemofilia B;
- Fibroza chistic;
- FH (hipercolesterolemia familial);
- Cancerul.
SFATUL GENETIC
Sfatul genetic este actul medical specializat i complex prin care se determin probabilitatea
(riscul) ca o boal ereditar sau parial ereditar s se manifeste sau s reapar ntr-o familie. Sfatul genetic
este atribuia medicului genetician i se acord la solicitarea persoanelor interesate, deoarece prin
calcularea riscului i stabilirea conduitei ulterioare, sfatul genetic are rol important n profilaxia bolilor
genetice. Dup calcularea riscului de recuren i comunicarea acestuia, trebuie avut n vedere
posibilitatea efecturii diagnosticului prenatal, precum i ntreruperea sarcinii cnd se consider c riscul
este prea mare.
Necesitatea actual a sfatului genetic este determinat de 2 condiii:
1. Diferitele substane poluante din mediul urban, precum i iradierea accidental, profesional sau
diagnostic n timpul sarcinii pot duce la apariia de mutaii i deci a bolilor genetice. Datorit creterii
frecvenei bolilor genetice, cresc i morbiditatea, mortinatalitatea i mortalitatea infantil prin boli
genetice.
2. Datorit interveniei medicinii moderne persoanele cu boli genetice pot supravieui pn la vrsta de
adult i deci pot transmite boala genetic la descendeni.
Ideal, sfatul genetic ar trebui solicitat n urmtoarele situaii:
* Premarital:
1. Unul sau ambii parteneri au anomalii congenitale sau boli genetice;
2. Parteneri sntoi, dar unul sau ambii au rude apropiate cu boli genetice (frai, prini, bunici,
unchi-mtu, verior);
3. Parteneri sntoi, dar doresc o cstorie consangvin;
4. Persoane expuse accidental, profesional sau terapeutic la ageni teratogeni sau mutageni;
5. Cupluri care se cstoresc trziu sau planific s aib copii la mai mult de 35 ani;
* Postmarital (cele mai frecvente solicitri):
1. Naterea unui copil malformat sau cu o boal genetic;
2. Cupluri cu copii nscui mori sau avorturi spontane repetate;
3. Femei care necesit:
a. doze mari de medicamente care pot afecta dezvoltarea ftului;
b. femei care au avut boli infecioase virale (rubeol);
c. radiografii pe micul bazin, vaccinri.
Sfatul genetic se acord n centre specializate de genetic medical, de ctre o echip complex de
specialiti (genetician, obstetrician, pediatru, chirurg pediatru, endocrinolog etc). Centrul trebuie s fie
dotat cu un laborator bine utilat pentru a efectua investigaiile necesare unui diagnostic corect i complet.
Metodologia sfatului genetic
Stabilirea diagnosticului precis clinic i paraclinic (date biochimice, radiografii, echografie, ECG,
EEG etc) ;
Stabilirea autenticitii filiaiei i a caracterului genetic al bolii prin:
50
r = coeficient de nrudire;
n1 = numrul de generaii situate ntre unul dintre cei doi indivizi i strmoul comun;
n2 = numrul de generaii situate ntre al doilea individ i strmoul comun.
exemple de coeficieni de nrudire:
- rude de gr. I - prini/copii; frate (sor)/frate (sor) - au r = 1/2
- rude de gr. II - bunici, mtui, unchi - au r = 1/4
- rude de gr. III - veri primari - au r = 1/8.
COEFICIENTUL DE CONSANGVINITATE:
Coeficientul de consangvinitate se calculeaz pentru indivizii rezultai n urma cstoriei a
dou persoane nrudite.
52
,
F = coeficient de consangvinitate;
n = numrul de indivizi prezeni ntr-o bucl care ncepe la nivelul unui
strmo comun, merge pe linie descendent pn la copilul rezultat n urma
unei cstorii consanguine, trecnd pe la unul dintre membrii acestui cuplu
consanguin i se ntoarce pe linie ascendent pn la acelai strmo comun,
trecnd pe la al doilea membru al cuplului consanguin.
NOT:
n se calculeaz pentru toi strmoii comuni
De obicei cu ct o boal recesiv este mai rar cu att consangvinitatea la prini este mai
frecvent.
TESTAREA GENETIC
Testarea genetic este o metod de studiu ce identific genotipurile asociate cu o anumit
afeciune sau predispoziie la boal sau care pot duce la apariia unor boli la descendeni. Scopul testrii
genetice const n identificarea urmtoarelor categorii:
- Persoane afectate (ct mai precoce pentru o ct mai prompt intervenie terapeutic);
- Purttori sntoi heterozigoi (pentru afeciuni recesive);
- Purttori sntoi de gen mutant dominant (pentru afeciuni dominante cu debut tardiv);
- Persoane cu predispoziie genetic pentru boli cu determinism multifactotial.
n dependen de caz, scopul final al acestei identificri este alegerea unei opiuni reproductive
optime sau acolo unde este posibil un tratament precoce. Testarea genetic este parte component a
screeningului neonatal, populaional sau familial.
Screening-ul neonatal
Reprezint programul de depistare presimptomatic i de prevenire a unor boli genetice. Are
drept scop depistarea nou-nscuilor cu anumite boli genetice nemanifestate la natere, boli a cror
evoluie poate fi controlat i eventual oprit prin terapie adecvat i iniiat precoce. Constituie o
strategie eficient de sntate public, aplicabil pentru unele afeciuni tratabile precum fenilcetonuria,
hipotiroidismul congenital i galactozemia.
53
DIAGNOSTICUL PRENATAL
Este necesar n cazul sarcinilor cu risc crescut, identificate prin screening sau n urma consilierii
genetice a cuplurilor parentale cu risc. Un diagnostic prenatal complet va impune consultri
interdisciplinare (obstetrician, pediatru, genetician, neonatolog etc.).
Dei diagnosticul prenatal constituie o surs de disconfort pentru mam i chiar o surs de risc
vital pentru ft, acesta rmne un instrument predictiv extrem de eficient n epidemiologia bolilor
genetice, permind n unele situaii evitarea naterii unui copil malformat.
Existnd riscurile citate mai sus, efectuarea diagnosticului prenatal impune ndeplinirea unor
criterii clar definite:
- severitatea malformaiei: nendoielnic n cazul prezumpiei de sindromDown (sau alte anomalii
trisomice), defecte de tub neural deschis sau boli metabolice neurodegenerative, decizia rmne
discutabil n alte situaii (defecte ale membrelor, despictur labio- maxilo palatin), n care
intelectul i durata de via pot rmne neafectate; zona geografic poate fi decisiv pentru unele
afeciuni, impactul malformaiei fiind diferit receptat n funcie de particularitile socio-culturale
zonale;
54
Diagnosticul prenatal cuprinde att metode noninvazive, ct i metode invazive, acestea din urm
avnd ns risc abortiv.
METODE NONINVAZIVE
Echografia are ca scop identificarea unor anomalii fetale structurale: defecte de tub neural,
malformaii congenital de cord, anomalii scheletice, renale etc.
Detecia celulelor fetale n circulaia matern, metod la limita dintre cercetare i practica
medical, se bazeaz pe apariia n sngele matern a anticorpilor fa de celulele trofoblastice sau
sanguine (trombocite, leucocite) nc din primul trimestru de sarcin. Metologia poate fi util att n
determinarea sexului produsului de concepie (important n transmiterea bolilor legate de cromozomul
X), dar i n boli monogenice cu transmitere autozomal precum i n anomalii cromozomice de tip
aneuploidie. Poate fi utilizat ca test screening n grupuri int speciale cu risc crescut .
Detecia ADN-ului fetal n plasma matern acest ADN, provenind din apoptoza celulelor
fetale, ar fi n cantitate mai mare dect cel izolat din celulele fetale i n consecin, mai uor de detectat.
boli monogenice caracterizate prin sinteza de proteine anormale specifice: hemoglobinopatii (tip
thalasemie), hemofilie;
- suspiciune de infecie fetal (n caz de infecie matern viral rubeol, virus citomegalic sau
bacterian);
- incompatibilitate de grup sanguin (n cazul confirmrii fiind posibil transfuzia sau
exsanguinotransfuzia n utero);
- deficite imunologice.
Riscul de avort spontan i natere prematur este mai redus n cazulfetoscopiei, dei rmne
semnificativ (aproximativ 2% deoarece se practic cu ac subire, motiv pentru care aceast metod tinde
s nlocuiasc fetoscopia.
Amniocenteza - const n aspirarea transabdominal de lichid amniotic sub ghidaj echografic.
Permite efectuarea de cariotip (rezultat tardiv ns, deoarece implic culturi celulare), analiza ADN,
determinri biochimice. Celulele amniotice prelevate permit
studierea cromozomilor (cariotipului) pentru identificarea
rearanjamentelor structurale, a mozaicurilor i a aneuploidiilor,
cu interpretare viciabil ns prin contaminarea cu celule
materne sau, n cazul sarcinilor gemelare, prin confuzie cu
celulele celuilalt ft, datorit puncionrii din greeal a sacului
amniotic al acestuia. Alte surse de eroare in de tehnic sau de
prezena mozaicurilor cromozomice, linia anormal innd, n
acest din urm caz, nu de celulele fetale ci de cele
extraembrionare. n plus, prelevarea de celule amniotice face
posibil studiul ADN, necesar n unele boli genice, cum ar fi: fibroza chistic de pancreas, hemofilia,
distrofia muscular Duchenne, sindromul X fragil, rinichiul polichistic etc. Din lichidul amniotic se pot
face analize biochimice n vederea identificrii de proteine anormale caracteristice unor enzimopatii
(fenilcetonuria, tirozinemia galactozemia, polizaharidozele etc.).
Riscurile fetale ale amniocentezei sunt reprezentate de:
- avort 1% (n caz de manevre repetate poate atinge 10%);
- chorioamniotit;
- pierderi de lichid amniotic.
Riscurile materne nu sunt neglijabile:
- hemoragii vaginale;
- izoimunizare Rh.
decelarea (n 1-3% din cazuri) de mozaicuri cromozomice adevrate (dar celulele fetale pot fi
contaminate cu celulele materne ceea ce preteaz la confuzii; n plus, pot exista alte facte derutante);
se impune monitorizarea sarcinii i efectuarea cariotipului din celulele fetale obinute prin
amniocentez i cordono-centez.
Riscurile constau n:
- avort (risc superior amniocentezei);
- anomalii ale membrelor (de aceea metoda este interzis nainte de sptmna a 9-a de gestaie);
- pierderi de lichid amniotic,
- sngerri vaginale.
-
57