Manual de Practicas

Facultad de Ciencias Qumicas
Gmez Palacio, Durango
MANUAL DE PRCTICAS
DEL LABORATORIO DE
LA MATERIA:
MICROBIOLOGIA GENERAL
RESPONSABLE DE LA ELABORACIN:
Q.F.B. JOAQUIN AVALOS SOTO

Q.B.P. ERNESTO CAMACHO MONTELONGO
FECHA DE ELABORACIN:
NOVIEMBRE DE 2009
ESTE DOCUMENTO CONTIENE
_________FOJAS TILES
Q.F.B. JOAQUIN AVALOS SOTO; Q.B.P ERNESTO CAMACHO MONTELONGO

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MANUAL DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL
DIRECTORIO
C.P. RUBN CALDERN LUJN
RECTOR
DR. SALVADOR RODRGUEZ LUGO
SECRETARIO GENERAL
M.E. MARIA DE JESUS CEDILLO GOMEZ
DIRECTORA
Q.F.B. JOSE ELPIDIO RIVAS JURADO
SECRETARIO ADMINISTRATIVO
M.C. VICTOR MANUEL RODRIGUEZ GONZALEZ
SECRETARIO ACADMICO
M.S.P. SIGFREDO ESPARZA GONZALEZ
JEFE DE LA DIVISIN DE ESTUDIOS DE POSTGRADO E INVESTIGACIN
M.C. MARIA ELENA ALONSO NAPOLES
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PLANEACIN Y EVALUACIN
DRA. PATRICIA RAMIREZ BACA
COORDINADORA DE LA CARRERA DE: INGENIERO QUIMICO EN ALIMENTOS
Q.F.B. LUIS OTONIEL GARCIA CONTRERAS
COORDINADOR DE CARRERA: QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO
Q.F.B. JOS RUVALCABA QUIONES
COORDINADOR DE TRONCO COMUN
M.C. RODOLFO GERARDO CHEW MADINAVEITIA
COORDINADOR DEL VyDE

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NDICE
Concepto
I. Encuadre del Sistema de Prcticas
I.1. Introduccin
I.2. Cuadro de Competencias
I.3 Niveles de Desempeo
II. Mapa del Sistema de Prcticas
III. Prcticas Generales de Seguridad
III.1 Reglamentos
IV. Contenido de cada practica en particular
IV.1 Unidad 1
IV.1.1. Practica # 1 Esterilizacin y manejo de Material Microbiolgico
IV.1.2. Prctica #2 Medios de Cultivo Preparacin y Envase
IV.2 Unidad 2
IV.2.1 Practica #3 Mtodos Generales de Cultivo
IV.2.2 Practica #4 Preparacin de Frotis Bacteriano
IV.3 Unidad 3
IV.3.1 Practica #5 Morfologa de Hongos y Levaduras
IV.3.2 Practica #6 Diferenciacin de grupos de bacterias (Tincin Gram)
IV.4 Unidad 4
IV.4.1 Practica #7 Tcnicas de Aislamiento
IV.4.2 Practica #8 Endosporas y Capsulas
IV.5 Unidad 6
IV.5.1 Practica #9 Identificacin Bacteriana
IV.5.2 Practica #10 Utilizacin de Carbohidratos
IV.5.3 Practica #11 Prueba de Citrato
IV.5.4 Practica #12 Produccin de Indol
IV.5.5 Practica #13 Produccin de Acido Sulfhdrico
IV.5.6 Practica #14 Descarboxilacin
IV.5.7 Practica #15 Ureasa
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Pagina
6
6
8
9
16
24
27
55
56
56
58
61
61
63
66
66
68
72
72
75
78
78
83
85
86
88
90
92
V.1. Mtodo de Asignacin de Calificaciones

VI.1. Bibliografa
95
96
I.- Encuadre del Sistema de Prcticas

I.1 Introduccin:

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Microbiologa se refiere al estudio de los microorganismos y sus actividades. Forma, estructura, fisiologa, reproduccin,
metabolismo e identificacin.
El objetivo de la Microbiologa es comprender las actividades perjudiciales y beneficiosas de los microorganismos y
mediante esta comprensin, disear las maneras de aumentar los beneficios y reducir o eliminar los daos.
Las prcticas se encuentran divididas en:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Introduccin
Objetivo
Material
Procedimiento
Resultados
Conclusiones
Bibliografa consultada
Cuestionario Previo
MISION DEL PROGRAMA DE QFB

Es un programa educativo de calidad orientado a la formacin integral de profesionales en el rea de las Ciencias
Qumicas, Farmacuticas y Biolgicas, libres, responsables y competitivos con valores humanistas y ticos que generan y
aplican conocimientos en el sector farmacutico, de preservacin del medio ambiente y biomdico, enlazndolos de
manera oportuna y con sentido biotico con los sectores productivos, sociales y cientficos, contribuyendo al progreso de
la Regin del Estado y del Pas.

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VISION DEL PROGRAMA DE QFB:

Al 2020 el programa educativo Qumico Farmacutico Bilogo de la Facultad de Ciencias Qumicas en Gmez Palacio
contar con la Acreditacin correspondiente, con cuerpos acadmicos consolidados que favorezcan la formacin de
profesionistas certificados, con gran capacidad de investigacin y alto espritu de servicio, sustentado en una amplia
vinculacin con todos los actores sociales para contribuir al desarrollo social, econmico y cientfico del Pas.
1.2. Cuadro de Competencias:

1
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Competencia
Objetivo (s)
Intencin
Contexto o
Rango(s) o
Criterio(s) de
Fundamento
o finalidad
restricciones
situaciones
desempeo
Cientfico
a Adquirir

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Motivar al
Lleve a cabo
Para que
Control de cepas
Servirn de
Adquirir destrezas
La Microbiologa
Estudiante,
Investigacin
compruebe
patgenas,
base para la
y habilidades que
es una Ciencia de
Anlisis y
en la
manipulacin de
realizacin de
le permitan
Laboratorio con un
razonamiento
prctica lo
microorganimos.
otras prcticas
conocer los
enfoque qumico-
relacionado
aprendido
de laboratorio
fenmenos que
biolgico de todas
con la teora
en la clase
en materias
permiten el
las actividades de
terica
subsecuentes
desarrollo y de los
los
microorganismos.
microorganismos
1.3. Nivel de Desempeo:

El conjunto de prcticas del presente manual te permitir llegar a un desempeo de nivel 4 de acuerdo la clasificacin de
CONOCER, a saber en el Nivel 4 se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene
que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de
trabajo. Las razones por las que asumimos que obtendrs un nivel de desempeo tan alto son:
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1. La realizacin de las prcticas en forma y tiempo presupone el dominio de diferentes habilidades y conocimientos.
2. La elaboracin de un protocolo y un informe por prctica requiere de disciplina y laboriosidad, as como la utilizacin
de herramientas computacionales.
3. Las prcticas debern ser realizadas en equipo, lo que requiere de la participacin armnica de los elementos. La
capacidad de liderazgo deber ser usada en forma ptima para realizar los diversos pasos de la prctica.
Ubicacin De La Materia Con Respecto Al Mapa Curricular
EJE DE FORMACIN FUNDAMENTAL Y EJE CURRICULAR DE CIENCIAS
BSICAS
ASIGNATURA
CLAVE
Qumica Inorgnica I
Qumica Inorgnica II
Qumica Orgnica I
Qumica Orgnica II
Qumica Orgnica III
Fsica I
Fsica II
Matemticas I (lgebra Lineal)
Matemticas II (Clculo Diferencial
QUI01
QUI02
QUO01
QUO02
QU003
FIS01
FIS02
MAT01
MAT02
e Integral) II
Matemticas III (Ecuaciones
MAT03

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HORAS
CRDITOS
TEORA PRCTICA
3
2
5
3
2
5
3
2
5
3
2
5
2
4
6
2
2
4
2
2
4
2
2
4
2
2
2
4
4
Diferenciales)
Computacin I
Computacin II
Estadstica I
Estadstica II
COM01
COM02
EST01
EST02
TOTALES:
1
1
3
3
32
4
4
2
2
34
5
5
5
5
66
EJE DE FORMACIN DE LA DISCIPLINA Y EJE CURRICULAR DE CIENCIAS

EXPERIMENTALES
ASIGNATURAS
Fisicoqumica I
Fisicoqumica II
Qumica Analtica I
Qumica Analtica II
Anlisis instrumental
Bioqumica I
Microbiologa General
Biologa Celular
Bioqumica II
Fisiologa
Gentica,
Toxicologa
Fisicoqumica Farmacutica
CLAVE
FIQ01
FIQ02
QUA01
QUA02
ANI00
BIQ01
MIG00
BIC00
BIQ02
FIO00
GEN00
TOX00
FQF00
TOTALES:
HORAS
CRDITOS
TEORA PRCTICA
3
2
5
3
2
5
4
4
8
4
4
8
4
4
8
4
2
6
4
4
8
3
2
5
4
2
6
4
0
4
3
2
5
3
3
6
4
2
6
47
33
80
EJE DE FORMACIN DEL EJERCICIO PROFESIONAL Y EJE CURRICULAR

DE MICROBIOLOGA, BIOQUMICA, BIOMDICA Y FARMACOLOGA
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ASIGNATURAS
Histologa,
Inmunologa I
Inmunologa II,
Hematologa,
Anatoma,
Anlisis Bioqumico Clnico I
Anlisis Bioqumico Clnico II
Bacteriologa Mdica
Microbiologa Industrial
Microbiologa Sanitaria
Parasitologa
Virologa
Micologa
Farmacognosia I
Farmacognosia II
Farmacologa
Tecnologa Farmacutica
Diseo y Estabilidad de
Medicamentos
Qumica Legal
Recursos Humanos
Liderazgo
HORAS
CRDITOS
TEORA PRCTICA
HIS00
3
3
6
INM01
4
2
6
INM02
4
2
6
HEM00
4
2
6
ANT00
4
0
4
ABC01
3
4
7
ABC02
3
4
7
BCM00
3
4
7
MII00
3
4
7
MIS00
3
4
7
PAR00
3
3
6
VIR00
4
0
4
MIC00
3
4
7
FAG01
3
4
7
FAG02
3
4
7
FAR00
3
3
6
TFA00
3
4
7
DEM00
3
3
CLAVE
QIL00
REH00
LID00
TOTALES:
3
4
4
70
3
0
0
57
6
6
4
4
127
EJE DE FORMACIN DE LA DISCIPLINA Y EJE CURRICULAR DE CIENCIAS EXPERIMENTALES

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ASIGNATURAS
Fisicoqumica I
Fisicoqumica II
Qumica Analtica I
Qumica Analtica II
Anlisis instrumental
Bioqumica I
Microbiologa General
Biologa Celular
Bioqumica II
Fisiologa
Gentica,
Toxicologa
CLAVE
FIQ01
FIQ02
QUA01
QUA02
ANI00
BIQ01
MIG00
BIC00
BIQ02
FIO00
GEN00
TOX00
MAPA CURRICULAR DEL PLAN DE ESTUDIOS DE QUMICO FARMACUTICO BILOGO

EJES DE FORMACIN Y CURRICULARES
SEMESTRE
EJE
DE
DE LA DISCIPLINA
DEL EJERCICIO
OPTATIVAS
TRANSVERSAL
FORMACIN
Y CIENCIAS
PROFESIONAL EN
(CADA
Y CIENCIAS
EXPERIMENTALES
MICROBIOLOGA,
SEMESTRE SE
BIOQUMICA,
DEBER
BIOMDICA Y
CURSAR UNA)
BSICAS

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FARMACOLOGA
PRIMER
INVESTIGACIN,
QUI01,
CDC00, DEH00,
DESARROLLO DE
QUO01,
PSO00, BIO00,
HABILIDADES DEL
FIS01,
TLN00, COS00,
PENSAMIENTO,
MAT01,
COB00, NUT00,
VALORES EN LA
COM01
QUI02,
TSI00, TDE00,
PROFESIN Y
COMUNICACIN
TRONCO
COMN
SEGUNDO
HAD00, CDF00,
QUO02,
COO00, MDN00,
FIS02,
SEI00, HAP00,
MAT02,
TERCER
CUARTO
COM02
MAT03,
TSH00, DIG00,
TDO00
FIQ01, QUA01,
EST01
ANI00
QUA02, FIQ02,
EST02
BIQ01, MIG00,
BIC00
QFB
QUINTO
BIQ02
SEXTO
FIS00
ANT00, ABC01,
BCM00, LID00
ABC02, FAG01,
HIS00, PAR00

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SPTIMO
FQF00, TOX00
OCTAVO
GEN00
MIC00, FAG02,
HEM00
MIS00, INM01,
FAR00, REH00,
DEM00
MII00, TFA00, VIR00,
NOVENO
QIL00, INM02
II. Mapa Del Sistema de Prcticas

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Competencia o unidad de
Semana
Prcticas
competencia a ser
Tipo
Pre requisitos
abordada
UNIDAD 1 ANTECEDENTES
DE LA MICROBIOLOGA
1.
Esterilizacin
manejo
de
microbiolgico.
1.1 Antecedentes.
Descubrimiento de los
material Multidisciplinario 2
rea de Microbiologia
Conocimiento
Terico del manejo
del autoclave
Conocimiento del
uso y manejo de:
material de vidrio,
microorganismos.
equipo menor de
1.2 Microscopia
1.3 Teora microbiana de
la fermentacin, teora
microbiana
y Laboratorio
de
la

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laboratorio y
reactivos qumicos
Uso de bata de
laboratorio
enfermedad (anlisis
2 y 3,
de la vigencia de los
postulados
de
2. Medios de cultivo: Laboratorio
Conocimiento
preparacin y envase
Multidisciplinario 2
Terico del manejo
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del
R.
Koch).
uso y manejo de:
1.4 Esterilizacin,
material de vidrio,
pasteurizacin,
inmunizaciones
equipo menor de
laboratorio y
placa slida.
reactivos qumicos
Conocimiento en el
1.5 Campos de aplicacin

de la microbiologa.
1.6 Los
cinco
empaque del
grandes
grupos
material
de
microorganismos,
microbiolgico
Uso de bata de
segn
laboratorio
Withaker
(eucariticos
procariticos).
UNIDAD
TAXONOMA DE
LOS MICROORGANISMOS
4 y 5
3. Mtodos generales
Laboratorio
Conocimiento
de cultivo.
Terico del manejo
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del

Pgina 16/45
2.1
Taxonoma,
uso y manejo de:
material de vidrio,
nomenclatura
identificacin.
equipo menor de
2.2 Concepto de especie
laboratorio y
bacteriana.
reactivos qumicos
Conocimiento en el
2.3
Categoras
empaque del
taxonmicas.
material
2.4 Sistema binario de
microbiolgico
Uso de bata de
nomenclatura.
2.5
Sistemas
de
clasificacin, Manual de
bacteriologa de Bergey
6 y 7
4. Preparacin de Frotis Laboratorio
laboratorio
Conocimiento
bacteriano
Terico del manejo
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del
s.
2.6
Secuenciacin
genomas
de
completos,
hacia una clasificacin

filogentica
uso y manejo de:

material de vidrio,
equipo menor de
laboratorio y
reactivos qumicos
Conocimiento en el
empaque del

Pgina 17/45
material
microbiolgico
Uso de bata de
UNIDAD 3
MORFOLOGA Y
8 y 9
ESTRUCTURA MICROBIANA
5. Morfologa de hongos Laboratorio
laboratorio
Conocimiento
y levaduras
Terico del manejo
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del
BACTERIAS
uso y manejo de:
3.1 Forma y agrupacin
material de vidrio,
bacteriana
equipo menor de
3.2 Morfologa colonial
laboratorio y
3.3 Estructura: E. internas
reactivos qumicos
Conocimiento en el
y E. externas
HONGOS
FILAMENTOSOS
empaque del
Y
material
LEVADURIFORMES
microbiolgico
Uso de bata de
3.4 Polimorfismo de los

hongos
VIRUS
3.5 Arquitectura viral.
10 y 11
6. Diferenciacin de
Laboratorio
laboratorio
Conocimiento
grupos de bacterias
Terico del manejo
(Tincin de Gram.)
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del

Pgina 18/45
uso y manejo de:

material de vidrio,
equipo menor de
laboratorio y
reactivos qumicos
Conocimiento en el
empaque del
material
microbiolgico
Uso de bata de
UNIDAD 4 FISIOLOGIA DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO
12.13,
7. Tcnicas de
Laboratorio
laboratorio
Conocimiento
aislamiento
Terico del manejo
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del
BACTERIAS
4.1 Fisin binaria. Curva
material de vidrio,
de desarrollo bacteriano.
equipo menor de
HONGOS
4.2
Reproduccin
en
laboratorio y
reactivos qumicos
Conocimiento en el
hongos.
4.3 Tipos
uso y manejo de:
de
esporas

Pgina 19/45
empaque del
sexuales y asexuales.
material
VIRUS
microbiolgico
Uso de bata de
4.2 Replicacn viral: ciclo

litico, ciclo lisognico.
14.
8. Endosporas y
Laboratorio
laboratorio
Conocimiento
Cpsulas
Terico del manejo
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del
uso y manejo de:
material de vidrio,
equipo menor de
laboratorio y
reactivos qumicos
Conocimiento en el
empaque del
material
microbiolgico
Uso de bata de
UNIDAD 6
METABOLISMO
MICROBIANO
6.1
Metabolismo
15.
9. Identificacin
Laboratorio
laboratorio
Conocimiento
bacteriana.
Terico del manejo
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del

Pgina 20/45
obtencin de energa en
uso y manejo de:
bacterias
material de vidrio,
quimioauttrofas
en
equipo menor de
fototrofas.
6.2
laboratorio y
Nutricin
micronutrientes
mineral:
reactivos qumicos
Conocimiento en el
empaque del
macronutrientes.
material
6.3 Metabolismo de los
microbiolgico
Uso de bata de
aminocidos.
6.4 Metabolismo de los
laboratorio
carbohidratos.
6.5
Fermentacin
microbiana.
16
10. Utilizacin de
Laboratorio
Conocimiento
carbohidratos
Terico del manejo
11. Prueba de Citrato
rea de Microbiologa
del autoclave
Conocimiento del
12. Produccin de Indol

13. Produccin de Acido
material de vidrio,
Sulfhdrico
14. Desacarboxilacin
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uso y manejo de:

equipo menor de
15.Ureasa
laboratorio y
reactivos qumicos
Conocimiento en el
empaque del
material
microbiolgico
Uso de bata de
laboratorio

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III. Prcticas Generales de Seguridad

Se toman en cuenta las diferentes normativas relacionadas con los trabajos de laboratorio en general como:
3.1.- Normas Oficiales Mexicanas:
NOM-001-SPTS-2008
Edificios, locales, instalaciones y reas en los centros de
NOM.002.STPS-2000
trabajo-Condiciones de seguridad
Condiciones de seguridad, prevencin, proteccin y combate de
NOM-005-STPS-1998
incendios en los centros de trabajo.

Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los centros
de trabajo para el manejo, transporte y almacenamiento de
NOM-026-STPS-2008
sustancias qumicas Peligrosas

Colores y seales de seguridad e higiene, e identificacin de
NOM-114-STPS-1996
riesgos por fluidos conducidos en tuberas.

Sistema para la comunicacin e identificacin de riesgos por
NOM.087-ECOL-SSA1-2002
sustancias qumicas en los Centros de Trabajo

Proteccin ambiental - Salud ambiental Residuos peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y
NOM-052-SEMARNAT-2005
especificaciones de manejo
Que establece las caractersticas,
el
procedimiento
de
identificacin, clasificacin y los listados de los residuos

peligrosos.

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3.2.- Reglamentos Varios:
Ley General de Equilibrio Ecolgico y Proteccin Ambiental (LEGEEPA) 16-V.2008

Agenda 21 del Fondo para el Medio Ambiente Mundial
Ley General de Salud 11-VI-2009
Reglamento Federal de Seguridad, Higiene y Medio Ambiente de Trabajo 21-I-1997
3.3.- Normativa de la UJED:
Ley Orgnica de la UJED

Reglamento General de la UJED
3.4.- Normativa de la FCQ
Reglamento Interno de la FCQ

Reglamento de Laboratorio de la FCQ
Reglamento del Laboratorio de Microbiologa
Manual de Bioseguridad del Laboratorio de Microbiologa

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FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

GMEZ PALACIO, DGO.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL
REGLAMENTO DE BIOSEGURIDAD
La peligrosidad de un agente est directamente relacionada con el tipo de microorganismo y la manipulacin a la que
es sometido. Por ello es bsico:
1. Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio.
2. Conocer la metodologa de trabajo del laboratorio.
3. Conocer el equipamiento del laboratorio.
4. Conocer las medidas a tomar en caso de emergencia.
5. Conocer las leyes relacionadas con la seguridad biolgica.
6. Respetar y hacer cumplir todo lo anterior.
Para que se produzca un accidente por agente biolgico deben concurrir bsicamente cuatro elementos:
a. Un husped susceptible
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b. Un agente infeccioso
c. Una concentracin suficiente de ste
d. Una ruta de transmisin apropiada.
De todos ellos, el que mejor se puede controlar en el laboratorio es la ruta de transmisin.
Las rutas de transmisin ms comunes en el laboratorio son la area y la inoculacin directa, muy por encima de todas
las dems, aunque la oral, la percutanea y el contacto directo con la piel o las mucosas tambin son posibles.
Siendo imposible determinar a ciencia cierta si cualquier material biolgico est contaminado con microorganismos del
grupo 2 3, ciertas muestras (respiratorias, etc.) en las que sea posible que exista un microorganismo del grupo 3 deben
manipularse rutinariamente en las Cabinas de Seguridad Biolgica (CSB).
MEDIDAS GENERALES
Las siguientes medidas son de obligado cumplimiento en cualquier rea del laboratorio:
El acceso al laboratorio estar limitado al personal autorizado.
No deben entrar en el mismo familiares ni amigos.
El personal del laboratorio debe implicarse en el cumplimiento de las normas de
seguridad.
Todas las reas estarn debidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin.
Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas para mantener la adecuada contencin biolgica.
Todas las superficies de trabajo se limpiarn y desinfectarn diariamente y siempre que se produzca un derrame. Los
residuos y muestras peligrosas que van a ser incinerados fuera del laboratorio deben ser transportados en contenedores
cerrados, resistentes e impermeables siguiendo las normas especficas para cada tipo de residuo.

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El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado y no es aconsejable utilizar los pasillos como almacn. Siempre debe
quedar un espacio libre no inferior a
120 cm para poder evacuar el laboratorio en caso de emergencia.
El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se realizar de tal manera que, en caso de cada, no se
produzcan salpicaduras. Lo recomendable es hacerlo en cajas hermticas o neveras transportables. Estas cajas o
neveras debern ser rgidas y resistentes a los golpes, contar con materiales absorbentes en su interior y de fcil
desinfeccin. Se etiquetarn o identificarn de forma oportuna y no podrn ser utilizadas para otros fines. Bajo ningn
concepto se deben transportar las muestras a mano.
La ropa protectora, fcilmente ajustable y confortable, as como guantes, gafas, etc. debe estar disponible en todo
momento. La ropa protectora de las reas con nivel de contencin 3 (batas) nunca debe ser usada fuera del rea de
trabajo y si se quita debe de ser desechada automticamente en una bolsa de material contaminado. Jams debe volver
a ser usada.
Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales potencialmente infecciosos.
Con este fin deben usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que contengan posibles patgenos. Los
guantes siempre sern desechados antes de salir del rea de trabajo. Jams se saldr de la misma con los guantes
puestos, ni con ellos se coger el telfono, se tocarn las hojas de examen, maniguetas de las puertas, etc.
Tras quitarse los guantes, se realizar un lavado de manos.
Se usarn gafas protectoras y mascarillas faciales si existe riesgo de salpicaduras y/o aerosoles.
Se pondr extremo cuidado en minimizar el riesgo de autoinoculacin y de generacin de aerosoles.
Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente al Supervisor y al Jefe del Laboratorio y hacerse
constar por escrito.
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Nadie podr trabajar en el rea de tuberculosis con una prueba de Tuberculina negativa.
Est rigurosamente prohibido pipetear con la boca. Se realizar pipeteo automtico con material adecuado y cada
trabajador ser instruido para manejarlo debidamente.
En la zona de trabajo no debe colocarse material de escritorio ni libros ya que el papel contaminado es de muy difcil
esterilizacin.
No debern usarse lentes de contacto.
El personal con el cabello largo debe llevarlo recogido.
Comer, beber, fumar y aplicarse cosmticos esta formalmente prohibido en el rea de trabajo del laboratorio, as como el
almacenamiento de comida o bebida.
El personal debe lavarse las manos frecuentemente durante las actividades rutinarias, tras acabar la jornada laboral y
siempre antes de abandonar el laboratorio (almorzar). Se usar un jabn antisptico y el secado se realizar con papel.
Las heridas y cortes en las manos, si se han producido en el Laboratorio, sern comunicados al responsable de la
Seccin correspondiente, as como al Supervisor de Bioseguridad que lo registrar haciendo constar todas las
circunstancias. Las heridas y cortes deben ser convenientemente vendados y despus es imprescindible ponerse
guantes.
CLASIFICACIN DE LOS AGENTES
BIOLGICOS POR GRUPO DE RIESGO:
Agente biolgico del grupo 1.
Se refiere a aqul que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre.
Ejemplos: B. Subtilis, Naegleria, E. coli K 12, Saccharomyces sp.
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Es aqul que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores,
siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Ejemplos : Actinomyces sp, Bacteroides sp, Enterobacterias, Shigella sp, Candida sp,
Cryptococcus neoformans.
Aqul que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores,
con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento
eficaz.
Ejemplos: Mycobacterium tuberculosis y bovis, Histoplasma capsulatum, Neisseria meningitidis, Coccidioides
inmitis, Chlamydia trachomatis.
Se refiere a aqul que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los
trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente
frente a l profilaxis o tratamiento eficaz.
Ejemplos: Virus de Lassa, Machupo y bola.
NIVELES DE CONTENCIN
La Seguridad Biolgica se fundamenta en tres elementos:
a. Las tcnicas de laboratorio.
b. El equipo de seguridad ( Barreras primarias)
c. El diseo de las instalaciones internas (Barreras secundarias).
d. El diseo estructural del edificio especializad ( Barrera terciaria )
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1. De las tcnicas de laboratorio:

El elemento ms importante para contener los riesgos biolgicos es el seguimiento estricto de las prcticas y
tcnicas microbiolgicas. Como parte de estas prcticas est el desarrollo o adopcin por parte de cada laboratorio
de un Manual de Seguridad Biolgica en la que se identifican los riesgos que pueda sufrir el personal y que
especifique los procedimientos que puedan minimizar esos riesgos.
2. De los equipo de seguridad (barreras primarias):
Tal y como su nombre indica, las llamadas barreras primarias son la primera lnea de defensa cuando se
manipulan materiales biolgicos que puedan contener agentes patgenos. El concepto de barrera primaria podra
asimilarse a la imagen de una "burbuja" protectora que resulta del encerramiento del material considerado como
foco de contaminacin. El ejemplo ms claro de contencin primaria lo constituyen las cabinas de seguridad
biolgica.
Cuando no es posible el aislamiento del foco de contaminacin, la actuacin va encaminada a la proteccin del
trabajador mediante el empleo de prendas de proteccin personal. En la mayora de las ocasiones se practica la
combinacin de ambos tipos de medidas, tal como puede ser el empleo de la cabina junto con guantes y
mascarilla. Todo ello sin olvidar que la mxima contencin del riesgo biolgico slo se da cuando, adems, se
emplean las tcnicas de trabajo correctas unidas a un diseo del laboratorio acorde con el nivel de riesgo.
Se incluyen en este apartado tanto dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad (por ejemplo, las cabinas
de seguridad biolgica), como los elementos de proteccin personal (guantes, mascarillas, batas, calzado, etc).
Actualmente existen equipos de proteccin personal ( EPP ) que ofrecen un altsimo grado de proteccin, pero eso
no significa que el EPP sea un substituto de una buena prctica de trabajo; La utilizacin de un equipo equivocado

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crear un riesgo adicional al operario al inspirar en ste un falso sentido de seguridad. El EPP se seleccionar en
funcin del mximo nivel de riesgo que se espera encontrar al desarrollar la actividad
3. Del diseo y construccin de las instalaciones (barreras secundarias):
La magnitud de las barreras secundarias depender del tipo de agente infeccioso que
se manipule en el laboratorio. Dentro de ellas se incluyen la separacin de las zonas
donde tiene acceso el pblico, la disponibilidad de sistemas de descontaminacin
(autoclaves), el filtrado del aire de salida al exterior, el flujo de aire direccional, etc.
El diseo y construccin de un laboratorio (lo que en Seguridad Biolgica se conoce como "barreras
secundarias") contribuye a la proteccin del propio personal del laboratorio, proporciona una barrera para
proteger a las personas que se localizan fuera del laboratorio (es decir, aqullas que no estn en contacto
con los materiales biolgicos como, por ejemplo, personal administrativo del laboratorio, enfermos y
visitantes del Hospital) y protege a las personas de la comunidad frente a posibles escapes accidentales de
agentes infecciosos.
Las exigencias de cada nivel de contencin se han enumerado ya, pasando ahora a comentar con ms
detalle algunas de ellas, junto con otras consideraciones que, si bien no son obligatorias por ley, s deberan
ser tenidas en cuenta a la hora de la evaluacin del riesgo.
a) Localizacin. Es aconsejable que el Laboratorio de Microbiologa Clnica se localice fuera del trfico del Hospital y que
no sea un lugar de paso para otras dependencias en las que no exista restriccin para su acceso (cafeteras, almacenes,
bibliotecas, aparcamientos).

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b) Acceso de personal. En general, debe ser restringido a las personas formadas para el manejo de agentes
infecciosos. Para un nivel 2 de contencin es suficiente que la puerta del laboratorio pueda cerrarse con llave, mientras
que para el nivel 3 la puerta ha de ser doble adems de recomendarse un cambio de ropa.
c) Lavamano. Debe existir uno en el mismo laboratorio. Estar dotado de grifos que puedan accionarse sin utilizar las
manos y situado preferiblemente cerca de la puerta de salida.
d) Lavaojos. Se recomienda que exista uno dentro del laboratorio como equipo de emergencia.
e) Superficies interiores. Los suelos, paredes y techos deben ser impermeables al agua y resistentes a diferentes
productos qumicos, de forma que permitan una limpieza a fondo y una posterior descontaminacin. En el nivel 3 de
contencin, adems, todas las penetraciones deben ir selladas.
f) Superficies de trabajo. Las mesas y bancos de trabajo deben ser resistentes al calor moderado, a disolventes
orgnicos, cidos y lcalis.
g) Sealizacin. Siempre que el trabajo est en marcha, debe colocarse en la puerta del laboratorio la seal
reglamentaria de peligro biolgico.
h) Presin negativa. Se recomienda que el laboratorio se mantenga a una presin negativa con respecto al exterior del
mismo, es decir, con respecto a los pasillos u otras zonas del edificio, de manera que exista un flujo de aire desde las
zonas menos contaminadas hacia las de mayor riesgo de contaminacin. Las puertas y ventanas del laboratorio han de
permanecer cerradas si se quiere mantener esa presin negativa. No es aconsejable la recirculacin de aire.
i) Filtros HEPA. No existe legislacin en Espaa en cuanto a sistema y frecuencia para su comprobacin pero, siguiendo
directrices de otros pases, parece aconsejable hacerla cada 6 meses o, al menos, no dejar pasar ms de 14 meses.
Deber realizarla siempre una empresa especializada.

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j) Residuos. Adems de la normativa general que el Hospital establezca, en funcin de la legislacin vigente, en materia
de residuos biosanitarios, en un nivel 3 se recomienda que en el mismo laboratorio (o dentro de la instalacin) exista
algn sistema (por ejemplo, esterilizacin por autoclave) para el tratamiento de los residuos producidos. De no ser as, el
transporte de estos residuos ha de realizarse en envases sellados (ver ms adelante el apartado especfico).
a.
Adiciones al Nivel 4 de contencin. Las caractersticas de diseo enumeradas se hacen obligatorias en el caso
del nivel 4 de contencin, adems de otras, como el empleo de cabinas de clase III (o equipo de proteccin similar
para los operarios), filtro HEPA a la entrada del aire, doble filtro HEPA a la salida del aire, etc.
CARACTERSTICA DE LOS NIVELES DE CONTENCIN:
El primer principio de Bioseguridad, es la contencin. El trmino contencin se refiere a una serie de a serie de mtodos
seguros en el manejo de agentes infecciosos en el laboratorio.
El trmino "contencin" se emplea para describir los mtodos que hacen seguro el manejo de materiales infecciosos en
el laboratorio. El propsito de la contencin es reducir al mnimo la exposicin del personal de los laboratorios, otras
personas y el entorno a agentes potencialmente peligrosos.
Se suelen describir cuatro niveles de contencin o de seguridad biolgica, que consisten en la combinacin, en menor o
mayor grado, de los tres elementos de seguridad biolgica descritos: tcnica microbiolgica, equipo de seguridad y
diseo de la instalacin. Cada combinacin est especficamente dirigida al tipo de operaciones que se realizan, las vas
de transmisin de los agentes infecciosos y la funcin o actividad del laboratorio.
a) Nivel de contencin 1:

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Es el nivel de seguridad requerido para los agentes biolgicos del grupo 1, es decir, los que no producen enfermedad en
el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los antimicrobianos. Es el utilizado habitualmente en los
laboratorios de prcticas de universidades o centros docentes donde se emplean cepas no patgenas (E. coli K12, B.
Subtilis, Naegleria sp, Saccharomyces cerevisiae, etc.). Ejemplos tpicos son todos los microorganismos que se utilizan
en la industria de la alimentacin para la elaboracin de quesos, cerveza, embutidos, etc.
b) Nivel de contencin 2 :
Es el obligado para agentes del grupo 2 como algunos que, perteneciendo a la propia flora habitual del hombre, son
capaces de originar patologa infecciosa humana de gravedad moderada o limitada. Deben ser manipulados por personal
especializado (tcnicos de laboratorio, especialistas en Microbiologa) y son los que con ms frecuencia se estudian en el
Laboratorio de Microbiologa Clnica: Estafilococos, Salmonella, Toxoplasma, Hepatitis B , etc.
c) Nivel de contencin 3:
Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo 3, microorganismos que cursan con patologa grave,
de difcil y largo tratamiento, que pueden curar con secuelas y capaces de producir la muerte. El mayor y ms frecuente
peligro que entraan stos es la infeccin adquirida a travs de aerosoles y por fluidos biolgicos. Por ello, las principales
medidas a tomar en este caso son la correcta manipulacin y la utilizacin de cabinas de seguridad. En los Laboratorios
de Microbiologa Clnica los ejemplos ms tpicos de este tipo de microorganismos son M. tuberculosis, Brucella, Coxiella
burneti, St. Louis virus, etc. Slo pueden ser procesados por personal calificado y en una zona con la infraestructura
recirculacin de aire, con gradiente de presin, cabinas de bioseguridad, etc. apropiada para

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el Nivel de Contencin 3, es decir, con aire acondicionado independiente, sin recirculacin de aire, con gradiente de
presin, cabinas de seguridad, etc.
d) Nivel de contencin 4:
Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha un agente especialmente patgeno e infectocontagioso,
extico o no, que produce alta mortalidad y para el que no existe tratamiento y/o es poco fiable. Normalmente son
microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Este nivel tambin puede utilizarse para trabajar con
animales de experimentacin infectados por microorganismos del grupo 4. Ejemplos de este nivel son los arenavirus
como el que produce la fiebre de Lassa y el virus Machupo, virus bola, etc. Adems, deben incluirse en este nivel de
contencin los microorganismos propios del grupo 3 que adquieran propiedades patgenas que los eleven al grupo 4. Un
ejemplo sera Mycobacterium bovis multirresistente que puede causar fallecimiento por fracaso teraputico.
Las cabinas de seguridad clase III y los trajes de presin positiva, que suministran aire a cuerpo completo o trajes de
presin positiva, suministrados de aire y de cuerpo son necesarios cundo se trabajar con agentes del nivel 4. Adems,
de las facilidades de aislamientos, se requiere ventilacin especializada, y un sistemas especial de administracin de
desecho.
En general, la naturaleza infecciosa del material clnico es desconocida y al Laboratorio de Microbiologa suelen remitirse
muestras muy diversas. Excepto en casos excepcionales (por ejemplo: sospecha de fiebres hemorrgicas), el
procesamiento inicial de los especmenes clnicos y las pruebas serolgicas pueden realizarse de forma segura en un
nivel 2, que es el nivel recomendado para trabajar con patgenos que se transmiten por va sangunea como el virus de la
hepatitis B y el VIH, a lo que habra que aadir las precauciones universales que deben ser tomadas con todas las
muestras de sangre y otros materiales potencialmente infecciosos.
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Los laboratorios que realicen trabajos que impliquen la manipulacin de agentes biolgicos de los grupos 2, 3 4 con
fines de investigacin, desarrollo, enseanza o diagnstico debern establecer medidas de contencin que se aplicaran
segn la naturaleza de las actividades, la evaluacin del riesgo para los trabajadores y las caractersticas del agente
biolgico de que se trate.
MEDIDAS DE CONTENCIN SEGN NIVELES DE SEGURIDAD
Medidas de contencin
Medidas de contencin
No
Aconsejable
1. El lugar de trabajo se
encontrar separado de toda
actividad que se desarrolle en
el mismo edificio
2.
El
aire
introducido
extrado del lugar de trabajo

se
filtrar
mediante
la
utilizacin de filtros de alta No

eficacia para partculas en el
aire
(HEPA)
de
S,
para
la
salida de aire
S,
para
la
entrada y salida
de aire
forma
similar
3. Solamente se permitir el
acceso al personal designado
Aconsejable S

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S, con esclusa
de aire
4. El lugar de trabajo deber

poder
cerrarse
hermticamente para permitir
No
Aconsejable
No
Aconsejable
su desinfeccin
5.
Procedimientos
de
desinfeccin especficos
6. El lugar de trabajo se
mantendr con una presin
negativa
respecto
la
presin atmosfrica
7.
Control
vectores,
eficiente
por
de
ejemplo, Aconsejable S
roedores e insectos
S,
8. Superficies impermeables
al agua y de fcil limpieza
para
banco
pruebas
mesa
trabajo
de
y
de
S,
banco
pruebas,
mesa
trabajo
de S, para banco de
pruebas, mesa de
de trabajo,
suelo,
y paredes y techos
suelo
9. Superficies resistentes a Aconsejable S

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para
cidos, lcalis, disolventes y

desinfectantes
10.
Almacenamiento
seguridad
para
de
S,
agentes S
almacenamiento
biolgicos
11.
seguro
Se
instalar
una
ventanilla de observacin o
un dispositivo alternativo en Aconsejable Aconsejable
las zonas de manera que se

pueda ver a sus ocupantes
12. Laboratorio con equipo
propio
13.
El
material
animales
No
Aconsejable
infectado,
incluidos,
deber
Si, cuando la
manejarse en una cabina de Cuando
infeccin
se
seguridad biolgica o en un proceda
propague por
aislador u otra contencin
el aire
apropiada
14.
Incinerador
destruccin
de
para Aconsejable S, disponible S, en el mismo

animales

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lugar
muertos
LAS CABINAS DE SEGURIDAD:
Son cmaras de circulacin forzada que, segn sus especificaciones y diseo, proporcionan diferentes niveles de
proteccin. Son fundamentales en un Laboratorio de Microbiologa Clnica y se clasifican segn el nivel y tipo de
proteccin.
Una Cabina de Seguridad Biolgica es una barrera primaria cuando se trabaja con agentes peligrosos o infecciosos, sin
embargo ellas no proveeen un completo aislamiento, por ejemplo en el control de aerosoles. Es necesario incrementar las
practicas de seguridad cuando se trabaja con una de stas cabinas.
En principio es necesario distinguir entre las campanas de extraccin de gases, las cabinas de flujo laminar y las cabinas
de Seguridad Biolgica.
La campana de gases (o vitrina extractora de gases) es un recinto ventilado que captura los humos y vapores
procedentes de la manipulacin de los productos qumicos en el laboratorio. Si bien constituye un equipo muy til en la
contencin del riesgo qumico, no ofrece proteccin alguna frente a riesgos biolgicos.
Las cabinas de flujo laminar son recintos que emplean un ventilador para forzar el paso del aire a travs de un filtro
HEPA barriendo la superficie de trabajo. El flujo de aire puede ser vertical u horizontal. Estas cabinas ofrecen proteccin
nicamente al material que se maneja en su interior, pero nunca al operador, por lo que no son recomendables para el
trabajo en un Laboratorio de Microbiologa Clnica. Son, sin embargo, un instrumento de trabajo imprescindible en las
denominadas "zonas limpias".
Las cabinas de Seguridad Biolgica (CSB ) son recintos ventilados diseados para limitar al mximo el riesgo del
personal de laboratorio expuesto a agentes infecciosos. Ello es especialmente importante si se tiene en cuenta que

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muchas de las operaciones realizadas en un laboratorio implican la formacin de aerosoles. Estos equipos tienen como
objetivo principal proporcionar una zona de trabajo que minimice la probabilidad que una partcula transportada por el aire
tiene de escapar hacia el exterior de la cabina y contaminar as al operario y a la zona que le rodea. Adems, algunas de
ellas, ofrecen proteccin al material que se manipula.
La capacidad de las cabinas de seguridad para proteger al personal y el ambiente de una exposicin potencialmente
peligrosa, especialmente por aerosoles, depende principalmente del apropiado funcionamiento de la cabina. Ninguna
cabina debe ser utilizada en el manejo de microorganismos peligrosos, a menos que se demuestre por exmenes
apropiados, que la misma cumple con las mnimas especificaciones de seguridad.
Cuando una CSB es utilizada por personal debidamente formado y consciente de la Limitaciones de sta, se convierte en
un equipo de contencin muy efectivo para reducir el posible escape de contaminacin biolgica. Sin embargo, es
conveniente tener muy en cuenta que una cabina no es nunca un substituto de una tcnica microbiolgica adecuada.
LOS FILTROS HEPA:
Las CSB disponen de dos sistemas que impiden la salida de contaminacin: las barreras de aire y los filtros. Las barreras
de aire se crean permitiendo que ste fluya en una sola direccin y a una velocidad constante dando lugar a una
verdadera "cortina" de aire que se conoce como flujo de aire laminar. Es, por definicin, un flujo con ausencia de
turbulencias. Los filtros HEPA (acrnimo del trmino High Efficiency Particulate Air) , hechos generalmente de lminas de
fibras de borosilicato, tienen como finalidad atrapar las partculas contenidas en este flujo de aire y los empleados
habitualmente son los HEPA, que retienen con una eficacia del 99,97% partculas de hasta 0,3 micras de dimetro o ms.
NORMAS DE SEGURIDAD EN LA UTILIZACIN DE EQUIPOS
1. NORMAS GENERALES
Los equipos y aparatos nunca deben colocarse en zonas de paso, en particular en los pasillos del laboratorio.
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Todos los aparatos con toma elctrica debern cumplir las normativas de seguridad correspondientes. Nunca deben
utilizarse en zonas mal aisladas y expuestas a la humedad.
Las fuentes de calor (calentadores, termobloques, etc.), sobre todo si se alcanzan temperaturas elevadas, debern estar
debidamente sealizadas para evitar quemaduras accidentales.
Todos los procedimientos de utilizacin de aparatos deberan contar obligatoriamente con apartados relativos a su
utilizacin segura.
2. NEVERAS
Un adecuado mantenimiento, limpieza y desinfeccin sistemticos de los aparatos reduce considerablemente los riesgos
asociados a su utilizacin. Sin embargo, aun en estas condiciones, hay que tener en cuenta lo siguiente:
No deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos por inhalacin en recipientes que no estn
convenientemente cerrados, especialmente si la cmara tiene un sistema de circulacin de aire.
No deben almacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables (ter etlico, por ejemplo) en neveras
que no posean un sistema de proteccin antideflagracin. En los aparatos de tipo domstico que se utilizan en el
laboratorio debe anularse la lmpara de la luz.
3. CONGELADORES
La congelacin es un proceso que mantiene la viabilidad de muchos agentes infecciosos, de ah un potencial riesgo y las
siguientes recomendaciones:
Tratar de identificar en ficheros, listas, etc. el contenido de lo almacenado y sus riesgos potenciales.

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El material potencialmente infeccioso debe colocarse en tubos, recipientes, etc. bien cerrados. No se llenarn
completamente, para evitar que rebosen por efecto del aumento de volumen tras la congelacin.
Descongelar peridicamente, limpiar y desinfectar si fuese procedente.
Utilizar guantes para manipular el contenido. Si la temperatura es baja (por ejemplo -70 C o inferior), los guantes
representan una proteccin adicional.
4. INCUBADORAS
La limpieza y la desinfeccin, peridicas y sistemticas, son el mtodo recomendable para reducir los riesgos derivados
de la contaminacin accidental del personal del laboratorio.
5. MICROONDAS
Los microondas cada vez son ms populares en el Laboratorio de Microbiologa y constituyen una nueva fuente de
accidentes, entre los ms frecuentes las explosiones cuando se usan para calentar medios con agar, ya que la diferencia
de velocidad de calentamiento produce burbujas que pueden estallar.
Las botellas o matraces deben tener el tapn aflojado, ya que si est cerrado estallan fcilmente.
Estar siempre presente, con la ropa y pantalla facial adecuadas, y controlar la intensidad del aparato, que slo puede ser
la mxima con agua y la mnima si se usa con agar.
Deber existir una tabla bien visible de los tiempos en cada posicin del potencimetro y de las cantidades a emplear.
Los microondas interfieren con los marcapasos. No deben ser colocados a una distancia inferior a 2 m de las personas
que sean portadoras de uno de estos dispositivos.
6. AUTOCLAVES

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Los autoclaves deben poseer manmetro y termostato, as como vlvula de seguridad, sistema de desconexin rpido y
la purga del vapor ha de realizarse a un recipiente estanco y con agua, jams directamente al exterior.
No deben usarse si no se conocen perfectamente todos los mandos y su fundamento.
Usar guantes especiales para protegerse del calor.
No abrir jams si el manmetro no est a "0" y la purga no ha sido abierta.
Controlar una vez al mes su capacidad de desinfeccin mediante esporas, no siendo suficiente el mtodo qumico. El uso
de registros de presin y temperatura de cada proceso y la instauracin de un programa de mantenimiento tambin
puede ser una alternativa vlida al control mediante esporas. El agua debe ser cambiada regularmente.
7. CENTRFUGAS
Los mayores riesgos derivan, sobre todo, de la contaminacin por los aerosoles generados durante la centrifugacin de
materiales biolgicos y, en menor medida, de los traumatismos accidentales. Se recomienda:
Cuando se centrifugue material biolgico potencialmente infeccioso deben utilizarse tubos cerrados; la centrfuga debe
disponer de rotores o cestillos de seguridad que protejan al operador de los posibles aerosoles.
La rotura accidental de un tubo y su vertido en la cubeta representa una incidencia importante que debe ser comunicada
inmediatamente al Supervisor o responsable, de forma que se proceda a la desinfeccin segura del aparato
No se deben utilizar centrfugas antiguas que no posean sistema de cierre de seguridad, del que disponen todos los
aparatos actuales, ni manipular stas de forma que permitan su apertura mientras estn en funcionamiento.
Si el laboratorio dispone de ultracentrfuga, el equilibrado cuidadoso del rotor es fundamental.
PLAN DE EMERGENCIAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Los riesgos en el Laboratorio de Microbiologa se dividen en riesgos no biolgicos, comunes a otros laboratorios, y
riesgos biolgicos o especficos. Los no biolgicos pueden ser qumicos, fsicos, elctricos o fuego.
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Entre los riesgos biolgicos no se hace referencia a las infecciones adquiridas en el laboratorio, ya que la mayora son un
proceso que pasa inadvertido. La exposicin se centrar en la actuacin cuando se produce un accidente.
Lo ms importante ante un accidente en el laboratorio es tenerlo previsto, simular uno como mnimo una vez al ao,
discutir las medidas a tomar y sacar las conclusiones pertinentes; en definitiva no dejar nada a la improvisacin y
disponer del material necesario para actuar. Es recomendable contar con Estaciones de Seguridad, del mismo modo que
existen
los
extintores.
El Supervisor de Seguridad llevar un registro de accidentes, donde se anotarn todos lo detalles del percance, as como
las medidas practicadas, las personas involucradas en el accidente y los procedimientos de actuacin.
Los accidentes biolgicos se producen generalmente por:
1. Inoculacin accidental.
2. Heridas causadas por animales de laboratorio.
3. Ingesta accidental.
4. Derrames y salpicaduras:
Derrames en la recepcin de muestras.
Salpicaduras en cara y ojos.
Salpicaduras y contacto directo.
Salpicaduras en la superficie de trabajo.
Salpicaduras fuera de la zona de trabajo.
5. Aerosoles.
6. Por el aire.
7. Deliberados y de origen desconocido.
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En el laboratorio de microbiologa los accidentes potencialmente ms frecuentes son las heridas causadas por objetos
punzantes o cortantes (pinchazo y herida sangrante). En este caso se debern aplicar las medidas bien detalladas en los
Protocolos de actuacin despus de una exposicin accidental a productos biolgicos probablemente contaminados
descritos
en
el
Manual
de
Salud
Ocupacional.
Las centrfugas actuales tienen mecanismos bsicos de seguridad, pero no es infrecuente encontrar todava algunas que,
debido a lo antiguo de su diseo, permiten ser abiertas antes de su parada completa, hecho inaceptable con las
normativas actuales. As pues se pueden producir accidentes al frenarlas manualmente, con el consiguiente riesgo de
lesin por la enorme fuerza centrfuga de las mismas.
El manejo y transporte de las bombonas de gases debe ser realizado por personal especializado. Estarn bien ancladas
para evitar que se caigan.
En general, no debe utilizarse la luz UV porque no es esterilizante, sino slo descontaminante y produce una falsa
sensacin de seguridad. En la CSB no se puede trabajar con ella encendida ya que puede dar lugar a una quemadura
corneal tremendamente dolorosa. Si ello ocurre, se consultar con el Servicio de Oftalmologa.
Las quemaduras por vapor procedente de las autoclaves, as como las producidas por salpicaduras de los microondas,
se tratarn tpicamente.
1. DERRAMES Y SALPICADURAS
Es uno de los apartados ms importantes por su frecuencia y porque las medidas a tomar son responsabilidad exclusiva
del Laboratorio de Microbiologa y bajo ningn concepto del personal de limpieza. El procedimiento empleado, bien
protocolizado, debe estar contemplado en el Manual de Seguridad. Los derrames y salpicaduras pueden ser de muchos
tipos: por prdida de los diferentes envases, generalmente porque estn mal cerrados (ya que se supone que son los

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adecuados), por rotura de los mismos, vuelco, etc. y son muy frecuentes en la zona de recepcin de muestras. Para
actuar correctamente son muy recomendables las Estaciones de Seguridad.
Lavado. Primero se eliminan los restos groseros de cristal, plstico, agar, etc., despus se lava con abundante agua y un
detergente acuoso y a continuacin se inicia la desinfeccin. Hay que tener en cuenta que cualquier sustancia orgnica
(agar sangre, restos de peptona,
etc.) Es extraordinariamente bloqueante de la capacidad oxidativa del hipoclorito sdico y de la capacidad de actuacin
de los iodforos; por ello, la norma es primero limpiar y despus desinfectar.
Desinfeccin. Se emplear un desinfectante preferentemente lquido. Los ms tiles en el laboratorio son:
1. Hipoclorito sdico. De eleccin para suelos, cermica, etc. No debe usarse en superficies metlicas. Se utiliza a la
dilucin pertinente para conseguir 50000 p.p.m. de cloro libre. Se vierte haciendo un crculo alrededor del derrame, o
mejor
2.
sobre
Iodforo.
3.
Se
papel
utiliza
absorbente,
la
dilucin
Alcohol
indicada
por
se
el
etlico
deja
actuar
fabricante. Adecuado
al
20
en
minutos.
superficies
metlicas.
70%.
4. Productos detergentes desinfectantes. Agentes como Virkon (perxido tamponado con surfactante), de fcil manejo,
no corrosivo, no irritante, especialmente activo en presencia de materia orgnica y que cambia de color cuando deja de
ser activo.
2.
Tubos rotos dentro de la centrfuga
Se exigir siempre la presencia del Supervisor de Seguridad. En ocasiones se puede detectar el accidente antes de abrir
la centrfuga, si se ha estado presente durante el proceso de centrifugacin, por el cambio de ruido en el funcionamiento
de la mquina. Como esto no siempre sucede, deber existir un entrenamiento para cuando se observe el accidente al

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abrir la centrfuga: cerrar la centrfuga y hacer salir inmediatamente a todo el personal prescindible del rea. Vestirse
como en el caso de las salpicaduras (el aerosol puede ser importante), cerrar la habitacin y:
1. Desinfectar la centrfuga por fuera.
2. Esperar 20 m.
3. Abrir la centrfuga muy suavemente.
4. Colocar todas las muestras no rotas en una gradilla o recipiente hermtico (bolsa de autoclave) y llevarlas a una CSB
para manipularlas all.
5. Limpiar, sacar los restos con guantes adecuados y meterlos en bolsas de autoclave o de tipo III. Llevar las cubetas o
cestillos con Virkon y el rotor, si es posible, al autoclave.
6. Desinfectar la centrfuga por dentro con iodforo o Virkon y dejar actuar 20 m.
7. Limpiar la cuba con alcohol etlico al 70%.
3. AEROSOLES
Los aerosoles son la causa ms frecuente e importante de accidente biolgico y su origen es muy variado. Muchas veces
pasan inadvertidos, por lo que siempre hay que dar por hecho que existen cuando se producen derrames o salpicaduras.
La mala prctica es la fuente ms comn de los aerosoles: enfriar asas calientes hundindolas en el agar, utilizar
centrfugas no hermticas, centrifugar con tubos abiertos o mal cerrados, agitar cultivos con el asa dentro del tubo,
pipetear con demasiada fuerza, oler las placas, etc.
Las medidas a tomar para evitar los aerosoles son cambiar los hbitos. Deben anotarse todos los incidentes y decidir con
el Supervisor de Seguridad si se toman medidas de profilaxis sobre la supuesta contaminacin. En accidentes en los que
se presume la formacin de aerosol, proceder siempre con proteccin del aparato respiratorio.
ELIMINACIN DE LOS RESIDUOS PELIGROSOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
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Todo Laboratorio de Microbiologa debera elaborar un manual o protocolo para la gestin de estos residuos, siguiendo
las directrices generales contenidas en el Plan de Residuos de cada institucin. Esta recomendacin puede ser norma
obligada en el caso de que el laboratorio pretenda certificarse o acreditarse. Entre los diferentes aspectos que debe
contener dicho manual se pueden citar los siguientes:
Estrategias de minimizacin de los residuos, incluyendo la reduccin en origen.
Segregacin de los residuos infecciosos de los no infecciosos.
Identificacin y tipificacin de los residuos infecciosos y su riesgo relativo.
Normas de sealizacin, rotulacin, almacenamiento y transporte.
Plan de formacin de todas las personas expuestas a estos residuos.
Normas de actuacin en caso de vertidos o roturas accidentales.
Plan de contingencia ante el fallo de las medidas de contencin habituales.
MANIPULACIN DE LOS RESIDUOS INFECCIOSOS
a) Residuos lquidos
La sangre, lquidos orgnicos, secreciones, etc. pueden eliminarse directamente por el desage con agua abundante,
segn aceptan diversas reglamentaciones especficas y los manuales generales. Por lo que se refiere a los lquidos
infecciosos que genera el propio laboratorio, como los sobrenadante de los cultivos, etc., es aconsejable recogerlos en un
recipiente que contenga una solucin de hipoclorito sdico recin preparada. Debe calcularse el volumen mximo
aceptable para asegurar la eficacia del desinfectante. Luego podran ser eliminados por los desages. No obstante,
muchos laboratorios someten a los residuos lquidos, sangre incluida, a un tratamiento en el autoclave, lo que es de
mayor importancia si se trata de residuos procedentes de las reas de micobacteriologa o virologa.
b) Residuos slidos
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Las formas ms frecuentes de tratamiento de los residuos slidos son la incineracin y la esterilizacin por autoclave. Por
lo que respecta a la incineracin realizada en los propios hospitales, es una actividad cada vez ms restringida, debido a
la contaminacin que origina en las zonas urbanas donde estn implantados. Ms frecuente es transferir los residuos a
empresas autorizadas, lo que debe hacerse en recipientes rgidos que debern ser transportados de forma regulada.
La esterilizacin en autoclave es la manera ms comn de tratar este tipo de residuos en el propio laboratorio que los
genera. Hay que asegurarse que el ciclo del autoclave permite la esterilizacin en toda la masa de los residuos. Los
programas para materiales limpios no sirven para los desechos, siendo aconsejable prolongar el tiempo y aumentar la
presin del proceso de autoclavado. La utilizacin de indicadores qumicos no es suficiente para el control de la eficacia,
que depender del tipo de material, volumen, etc. Las suspensiones de esporas de Bacillus tampoco pueden asegurar en
todas las circunstancias que el tratamiento trmico es suficiente en las zonas ms internas de la masa de material a
esterilizar, pues muchas veces no pueden ser colocadas en el lugar que sera apropiado. Algunos expertos recomiendan
no utilizarlas, para evitar una falsa seguridad; alternativamente, consideran ms apropiado el control riguroso sistemtico
en cada proceso (por ejemplo, registros de presin y temperatura) y el mantenimiento apropiado del autoclave.
Para una explicacin ms detallada sobre las medidas de seguridad en el descarte de material contaminado,
recomendamos las Normas sobre el tema del Manual de Bioseguridad del laboratorio clnico.
ALMACENAMIENTO, TRANSPORTE Y ENVO DE MATERIAL BIOLGICO
1. ALMACENAMIENTO
El material infeccioso debera almacenarse en zonas de acceso restringido para minimizar la posibilidad de
contaminacin del personal o el ambiente.
El almacenamiento de material en congeladores, especialmente en los de nitrgeno lquido, presenta una problemtica
especial. Debido a las bajas temperaturas, si los viales que se utilizan para el envasado no son de la calidad adecuada,
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pueden romperse, originando el derrame del material en el nitrgeno lquido, con la consiguiente contaminacin del
recipiente. En el caso de que esto ocurra debe vaciarse el recipiente, dejar que el nitrgeno lquido se evapore y proceder
a su limpieza y desinfeccin. Asimismo, cuando se maneja el material almacenado en este tipo de contenedores de
congelacin, siempre se debern utilizar gafas o mascarillas de proteccin para evitar salpicaduras del nitrgeno lquido.
2. TRANSPORTE Y ENVO
No existen regulaciones o recomendaciones especficas para el transporte seguro de microorganismos patgenos,
genticamente modificados o no. Sin embargo, si ampliamos la definicin de estos organismos y los consideramos como
"mercancas peligrosas" o "sustancias infecciosas", hay varios documentos internacionales relacionados con el tema,
como los de la Unin Postal Universal (UPU), la Organizacin Internacional de Aviacin (OIAC) y la Asociacin
Internacional de Transporte Areo (IATA).
A nivel europeo se han publicado, o van a ser publicadas prximamente, varias Directivas sobre la normativa para el
transporte de mercancas peligrosas en/entre los Estados Miembros. Estas Directivas, y en general todos los documentos
internacionales relacionados, estn basadas en un texto nico comn, las Recomendaciones del Comit de Expertos de
las Naciones Unidas para el Transporte de Artculos Peligrosos (UN).
Estas recomendaciones clasifican las mercancas peligrosas en varias clases, dos de las cuales estn relacionadas con
los microorganismos patgenos, genticamente modificados o no: clase 6.2 (substancias infecciosas) y clase 9
(substancias peligrosas miscelneas y artculos). En la clase 6.2 estn incluidas las substancias que contienen, o
razonablemente se espera que contengan, microorganismos viables, incluyendo bacterias, virus, rickettsias, parsitos,
hongos, recombinantes hbridos o mutantes, de los que se conoce o razonablemente se cree que pueden producir
enfermedad en humanos o animales expuestos a ellos.

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En la clase 9 se incluyen microorganismos modificados, no peligrosos para humanos o animales, pero que podran dar
lugar a cambios en animales, plantas, substancias microbiolgicas, as como en el ecosistema. Tambin se incluyen
microorganismos peligrosos para el ambiente, los cuales deben de ser transportados en condiciones especificadas por
las autoridades competentes del pas de origen.
Sistema bsico de embalaje. De una manera general, para el embalaje y transporte de material biolgico y teniendo en
cuenta las peculiaridades en funcin de los microorganismos, un sistema bsico de embalaje se compone de:
Recipiente primario estanco, a prueba de filtraciones, etiquetado, que contiene la muestra. El recipiente debe
envolverse en material absorbente.
Recipiente secundario estanco, a prueba de filtraciones, que encierra y protege el recipiente primario. Se pueden
colocar varios recipientes primarios envueltos en un recipiente secundario. Se debe usar suficiente material absorbente
para proteger a todos los recipientes primarios y evitar choques entre ellos.
Recipiente externo de envo. El recipiente secundario se coloca en un paquete de envo que protege al recipiente
secundario
su
contenido
de
los
elementos
externos,
tales
como
dao
fsico
agua.
Los formularios con datos, cartas y otras informaciones de identificacin de la muestra deben colocarse pegados con
cinta adhesiva en el exterior del recipiente secundario.
La Gua para el transporte de substancias infecciosas y especimenes diagnsticos, publicada por la OMS en 1997,
permite un conocimiento detallado de los requerimientos especficos para las diferentes situaciones que se pueden
plantear ante el envo de cualquier tipo de material biolgico, algunos de los cuales se exponen a continuacin:
1. Cantidad de substancias infecciosas que pueden enviarse en un paquete.
2. Tipos de etiquetas de riesgo para substancias infecciosas y para microorganismos genticamente modificados.
3. Tipos de etiquetas de riesgo para microorganismos no infecciosos.
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4. Etiquetas para envo con dixido de carbono (hielo seco).

5. Informacin que debe figurar en la etiqueta.
6. Normas para envo con refrigerantes (dixido de carbono y nitrgeno lquido).
7. Ejemplos de formato de los documentos de envo (los originales pueden obtenerse de la compaa transportadora).
En los vuelos internacionales est estrictamente prohibido que los pasajeros transporten substancias infecciosas con
ellos o en su equipaje de mano. Igualmente est prohibida la utilizacin del correo diplomtico para el transporte de este
tipo de material.
Otras posibilidades de transporte de material biolgico incluyen el traslado de muestras dentro de un hospital o centro, de
un laboratorio a otro, de un hospital a otro de la misma ciudad o a otra ciudad. Los principios en los que se basa un
transporte seguro son los mismos en todos los casos y su finalidad es que la muestra no tenga ninguna posibilidad de
salirse del embalaje en las circunstancias normales de transporte.
El transporte de material biolgico requiere una buena colaboracin entre el remitente, la compaa de transporte y el
destinatario, y cada uno debe asumir sus responsabilidades para garantizar que el producto llega a su destino
oportunamente y en buenas condiciones.

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FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO
MICROBIOLOGIA GENERAL
RESPONSABLES DE ELABORACIN:
Q.F.B. JOAQUIN AVALOS SOTO
Q.B.P. ERNESTO CAMACHO MONTELONGO
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UNIDAD 1
PRACTICA No. 1
ESTERILIZACIN Y MANEJO DE MATERIAL MICROBIOLGICO.
INTRODUCCIN:
Para estudiar los microorganismos, o utilizarlos en investigacin de problemas biolgicos, es necesario emplear
equipo y tcnicas especiales. El conocimiento sobre la esterilizacin del equipo microbiolgico, los medios y el rea en
donde se va a trabajar, es esencial en la mayora de los estudios que involucran microorganismos. Para estudiar
microorganismos especficos deben estudiarse libres de cualquier posible interrelacin con otros; por lo tanto, todos los
organismos extraos presentes, ya sea en los medios o en el equipo, deben eliminarse.
La esterilizacin con vapor es el mtodo ms comn para eliminar a los microorganismos extraos; sin embargo en
lugares donde las condiciones lo demandan deben usarse sustancias qumicas, gases o filtracin con el mismo propsito.
OBJETIVO:
Aplicar el mtodo de la esterilizacin con vapor en el equipo de microbiologa y establecer los procedimientos
precautorios para el manejo de los microorganismos.
MATERIAL:
Papel canela Vaso de precipitado de 600 ml

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Cinta testigo Guante de asbesto

Tubos de ensaye 13X100 de tapn de rosca
Cajas de Petri
Pipetas de 5 ml y 10 de 1 ml
Autoclave u olla de presin
PROCEDIMIENTO:
ESTERILIZACIN CON VAPOR:
Autoclave.- Para esterilizar, generalmente se usa vapor de agua, a 15 libras de presin, durante 15 a 20 min. El vapor
y la presin crean una temperatura resultante de 121, la cual destruye a la gran mayora de los microorganismos y esporas
resistentes. Una olla de presin ordinaria ser un sustituto de una autoclave.
CUESTIONARIO PREVIO:
1.- Define los trminos: asepsia, esterilizacin, antisepsia, desinfeccin y sanitizacin En qu casos se utiliza cada uno?
2.- Menciona al menos cinco sustancias desinfectantes y menciona cmo actan sobre los grmenes.
3.- Cmo se aplica en un laboratorio de anlisis clnicos la NOM 087?
4.- Cmo podemos prevenir una infeccin en el laboratorio? Qu se debe hacer cuando se derrama una cepa bacteriana
en el laboratorio?
5.- Cul es la utilidad de la esterilizacin en la prctica de la microbiologa?

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PRACTICA No. 2
MEDIOS DE CULTIVO: PREPARACIN Y ENVASE
Las bacterias pueden ser clasificadas en auttrofas y hetertrofas; las primeras comprenden las bacterias del suelo y el
agua que obtienen carbn y nitrgeno del medio y que producen su propio alimento y el segundo grupo comprende a las
bacterias saprfitas y parsitas.
Las bacterias para su cultivo requieren protenas, las cuales se suministran como peptonas preparadas por digestin
parcial de carne con enzimas ppticas, los carbohidratos suministran el carbono necesario, otros factores como las vitaminas
del complejo B, tambin son requeridos. Para algunas bacterias son necesarios nutrimentos ms complejos como el suero,
la sangre, la yema de huevo, etc. Los aerobios obligados precisan de una atmsfera con oxgeno para su desarrollo; los
anaerobios son incapaces de reproducirse en presencia de oxgeno; algunos pueden crecer en una atmsfera con oxgeno o
sin l son anaerobios facultativos. La temperatura ptima para la mayora de las bacterias patgenas es 37 con lmites entre
15 y 40; y un pH muy cercano al neutro.
Los medios de cultivo bacteriano pueden ser slidos o lquidos, en los primeros crecen y se identifican fcilmente las
colonias.

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OBJETIVO:
Preparar y envasar los medios de cultivo adecuados para el crecimiento de los microorganismos. Conocer la
clasificacin de los medios de cultivo.
MATERIAL:
Balanza granataria Pizeta con agua destilada
Gelatina bacteriolgica, caldo nutritivo, agar nutritivo
4 Matraces de 250 ml
EMB
Mechero, 3 Pipeta de 5 ml, algodn, esptula, cinta testigo

Probeta de 250 ml, agitador, guante de asbesto, papel canela
PROCEDIMIENTO:
1.- Caldo nutritivo. Preparar segn las indicaciones del envase, suficiente caldo para llenar sus tubos (3.5 ml por cada tubo
de ensaye).Esterilizar y envasar segn las indicaciones.
2.- Agar nutritivo. Prepara segn las indicaciones del envase. Esterilizar y envasar; preparar suficiente medio para completar
tubos de ensaye (3.5 ml) y cajas Petri (15 ml aprox.).
3.- Gelatina bacteriolgica. Preparar segn las indicaciones suficiente medio para llenar sus tubos (3.5 ml por cada tubo).
Esterilizar y vaciar.
4.-Eosin-Metil-Blue (EMB). Se prepara segn las indicaciones del envase (15 ml por cada caja Petri).

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CUESTIONARIO PREVIO (P2):

1.- Cul es la funcin de los componentes de los medios de cultivo?
2.- Menciona los gneros bacterianos que forman parte de la flora corporal normal. A qu se deben los aumentos en la flora
y qu problemas nos causan?
3.- Qu son los medios selectivos y diferenciales? , menciona si el EMB (eosin methil-blue) es un medio diferencial
selectivo y porqu.
4.- Menciona las partes del cuerpo que estn normalmente fuertemente colonizadas por microorganismos Qu partes se
encuentran desprovistas de microorganismos?
5.- Cmo se produce una caries dental? menciona a los gneros bacterianos responsables de la prod. de caries dental.

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UNIDAD 2
PRACTICA No. 3
METODOS GENERALES DE CULTIVO
Las bacterias necesitan nutrimentos para su crecimiento, desarrollo y sostenimiento. Utilizan una gama muy amplia de
dichas sustancias que van desde productos tan simples como sales inorgnicas, anhdrido carbnico y agua hasta mezclas
complejas de sangre y extracto de corazn, hgado, cerebro y otros tejidos. Estas sustancias nutritivas proporcionan carbono
nitrgeno, minerales y factores de desarrollo, necesarios para la sntesis de los hidratos de carbono, lpidos, protenas,
cidos nucleicos y otros constituyentes del protoplasma celular.
Se llama cultivo al proceso de propagar microorganismos brindndoles las condiciones ambientales adecuadas. Los
mtodos para siembra ms comnmente usados son en placas (cajas de Petri), cultivo en picadura, cultivo en agar inclinado
y en caldo.
OBJETIVO:
Efectuar las diferentes tcnicas de siembra de microorganismos y observar su desarrollo.
MATERIAL:
MICROORGANISMOS:
Asa de platino, cinta Masking

Mechero Bunsen
Cepas bacterianas
Gradilla, lpiz graso

Cajas de Petri con agar
Tubos de ensaye con medios de
gelatina, agar y caldo simple.

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PROCEDIMIENTO:
1.- Cultivo en placa (cajas de Petri).- Para realizar sta siembra debe disponerse de mechero, asa de platino, un tubo con
medio slido inclinado con el microorganismo por sembrar y una caja de Petri con el medio. Cerca de un mechero con el asa
de platino flameada toma una muestra del microorganismo, y en la caja de Petri difunde en forma de estras hasta la zona
media de la placa (previamente con un lpiz graso se divide la placa por el exterior en dos zonas). En ste momento, gire
180 e inicie la siembra en el extremo contrario. Tapa la caja de Petri e incuba a 37. Observa a las 24 y 48 hrs.
2.- Cultivo en picadura.- Cerca del mechero, en tubos con medio de gelatina inclinada, siembra las bacterias, con una asa
recta, cuidando de que el trayecto de entrada sea el mismo que el de salida. Incuba a 37. Este mtodo puede ser empleado
para conservar cultivos puros. Observa y anote resultados.
3.- Cultivo en agar inclinado.- En un tubo con agar inclinado, siembra los diferentes gneros bacterianos (cultivo en estras
rectas). Incuba a 37 hasta que haya crecimiento. Observa y anota.
4.-Cultivo en caldo.- Cerca del mechero toma una asada del microorganismo e introducela en el tubo con caldo, mueve el
asa para dispersar las bacterias en el medio.
1.- Cules son los requerimientos bsicos y especficos para que una bacteria pueda crecer?
2.- Investiga cules son los mtodos de siembra en bacterias.
3.- Qu es un cultivo axnico?, Cal es la diferencia con un cultivo genticamente puro?

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PRACTICA No. 4
PREPARACIN DE FROTIS BACTERIANO
Las caractersticas morfolgicas de las bacterias se pueden observar utilizando microorganismos ya sea vivos o
muertos(fijados), sin embargo, el estudio microscpico de clulas vivas es limitado debido a que en general slo se detectan
las configuraciones de contorno de las clulas. Las preparaciones teidas de clulas fijas permiten: 1) realizar un examen
ms detallado de las clulas, 2) observar los componentes internos y 3) lograr una diferenciacin de las especies
microbianas.
Las sustancias qumicas que se usan comnmente para teir bacterias se conocen con el nombre de colorantes y
estas pueden ser de tipo acido o bsico. En microbiologa se utilizan generalmente tres clases de tinciones.
a) Tinciones Simples
b) Tinciones Diferenciales
c) Tinciones Especiales
OBJETIVO:
Preparacin de frotis bacterianos y utilizacin de tinciones simples
MATERIAL:
MICROORGANISMOS:
Portaobjetos

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Asa bacteriolgica
Cepas bacterianas
Lpiz graso
Mechero Bunsen
Microscopio
Aceite de inmersin
Tincin de GRAM
PROCEDIMIENTO:
1.- Se usarn portaobjetos limpios.
2.- Coloca una gota de agua sobre el portaobjetos.
3.- Toma una asada del cultivo frente al mechero y colcala sobre el portaobjetos previamente etiquetado.
4.- Deja secar al aire y luego fija la muestra pasando dos o tres veces sobre la llama del mechero Bunsen, marca con
el lpiz graso alrededor de donde depositaste la muestra.
5.- Coloca sobre la muestra dos o tres gotas de azul de metileno acuoso por 60 a 90 segundos
6.- Lava con agua de la llave procurando que el agua no pegue directamente en la preparacin
7.- Secar al aire
8.- Examinar 10X, 40X y 100X (aceite de inmersin puede colocarse directamente sobre el frotis)
9. Repetir mismo procedimiento con safranina.

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1.- Explique que objetivo tiene el uso de las tinciones y que es un colorante
2.- A que se denomina en un colorante Grupo Cromgeno y auxocromico
3.- Que factores influyen en una buena preparacin de un frotis bacteriano
4.- Escriba la formula qumica de los colorantes azul de metileno y cristal violeta, seala en cada uno de los grupos
cromgenos y auxocromicos
5.- Explica las teoras fsicas de tincin de los microorganismos y amplia las teoras qumicas de tincin de los mismos
6.- Reporta los resultados obtenidos: Morfologa observada, color adquirido con azul de metileno y color adquirido con
safranina

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UNIDAD 3
PRACTICA No.5
MORFOLOGA DE HONGOS Y LEVADURAS
En general, los hongos se caracterizan por tener estructuras vegetativas que se alargan formando filamentos llamados hifas.
Estas se originan a partir de estructuras de reproduccin conocidas como esporas y pueden o no dividirse por estructuras
llamadas septos. El entrelazado de las hifas constituye a un micelio el cual se puede ver a simple vista. Este micelio puede
ser vegetativo reproductivo (areo).
Las levaduras son organismos unicelulares que carecen de clorofila y presentan formas caractersticas que van de la esfrica
a la ovalada.
Son mayores que las bacterias y su estructura interna es ms compleja. Se reproducen por gemacin, ocasionalmente, las
clulas hijas no se separan de la madre y forman una estructura llamada pseudomicelio.
OBJETIVO: Demostracin de las caractersticas morfolgicas de los hongos (filamentosos y levaduriformes)
MATERIAL:
Microscopio
Cultivo de Candida albicans
Asa bacteriolgica
Cultivo de Saccharomyces cereviceae
Cultivos de hongos en pan, tortillas, frutas y vegetales
Bistur

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5 portaobjetos y 5 cubreobjetos
Mechero
Pipeta Pasteur
Agitador de vidrio
Masking tape
Azul de metileno
Cristal violeta
Pizeta
Vaso de ppdo de 250 ml
PROCEDIMIENTO:
1.- En un vaso de precipitado realiza una preparacin de S. cereviceae hidratando una pequea porcin de levadura de pan.
2.- Elabora preparaciones en fresco de C. albicans y S. cereviceae, colocando una gota de agua, adiciona una gota de la
levadura hidratada o del tubo con Candida, aade una gota de colorante cristal violeta o azul de metileno.
3.- Realiza preparaciones de cortes de todos los hongos presentes en los dems cultivos, observa con 40X y elabora
esquemas detallados de lo observado.
1.- Investiga los factores que favorecen el establecimiento de las infecciones fngicas.
2.- Enlista cinco aplicaciones comerciales de los hongos.
3.- Menciona cinco tipos de infecciones producidas por hongos y menciona el gnero que los produce
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4. Porqu la tincin de Gram no es importante en hongos?
PRACTICAS No. 6
DIFERENCIACIN DE GRUPOS DE BACTERIAS (TINCIN DE GRAM)
Las caractersticas morfolgicas de las bacterias se pueden observar utilizando microorganismos ya sea vivos o
muertos(fijados), sin embargo, el estudio microscpico de clulas vivas es limitado debido a que en general slo se detectan
las configuraciones de contorno de las clulas. Las preparaciones teidas de clulas fijas permiten: 1) realizar un examen
ms detallado de las clulas, 2) observar los componentes internos y 3) lograr una diferenciacin de las especies
microbianas.
La tincin de Gram se encuentra entre las ms importantes para bacterias. Fue elaborada por el Dans Hans
Christian Gram en 1884 y permite distinguir entre diferentes bacterias que pueden mostrar una morfologa similar. Al examen
microscpico de un extendido coloreado por el mtodo de Gram que contenga una flora bacteriana mixta, aparecen las
caractersticas diferenciales del mtodo. Muchas bacterias habrn conservado la combinacin violeta-yodo y se teirn de
prpura (gram-positiva), otras se colorean de rojo por la safranina (gram-negativas). De sta manera, con ste procedimiento
no slo se hacen visibles la forma, tamao y otros detalles estructurales, sino que pueden agruparse los microorganismos en
los tipos Gram (+) y Gram (-), segn sus reacciones.

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OBJETIVO:
Preparacin de frotis bacterianos y aplicar la tincin de Gram en los microorganismos y clasificarlos de acuerdo a su
reaccin (+) (-).
MATERIAL:
MICROORGANISMOS:
Portaobjetos
Asa bacteriolgica
Cepas bacterianas
Lpiz graso
Mechero Bunsen
Microscopio
Aceite de inmersin
Tincin de GRAM
PROCEDIMIENTO:
1.- Se usarn portaobjetos limpios.
2.- Coloca una gota de agua sobre el portaobjetos.
3.- Toma una asada del cultivo frente al mechero y colcala sobre el portaobjetos previamente etiquetado.
4.- Deja secar al aire y luego fija la muestra pasando dos o tres veces sobre la llama del mechero Bunsen, marca con
el lpiz graso alrededor de donde depositaste la muestra.
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5.- Cubrir los frotis con reactivo de cristal violeta durante un minuto.
6.- Lavar los portaobjetos en una corriente suave de la llave durante 5 segundos.
7.- A continuacin, lavar los frotis con reactivo de yodo y luego aplicar el mismo reactivo durante un minuto.
8.- Lavar como se indic en el paso 3.
9.- Aplicar lentamente el reactivo de alcohol-acetona y seguir agregando hasta que la tintura de yodo ya no fluya del
frotis.(el ndice de la decoloracin depende de varios factores que incluyen la concentracin del alcohol, el espesor del frotis y
el hecho de si est hmedo o seco)
10.- Lavar inmediatamente como se hizo en el paso 3.
11.- Cubrir el frotis con reactivo de safranina durante 1 minuto.
12.- Lavar y secar presionando levemente con una toalla de papel haciendo descansar el frotis sobre la mesa. Oprimir
lentamente sin tallar.
13.- Observar cada frotis en 100X con el aceite de inmersin.
14.- Dibujar y colorear la morfologa de cada espcimen en la seccin de resultados y observaciones.
RESULTADOS:
MICROORGANISMO
MORFOLOGA

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TIPO DE GRAM
COLOR FINAL
1.- Qu se necesita para preparar un buen frotis bacteriano?
2.- Adems del color adquirido, menciona otras caractersticas que se pueden observar en el microscopio
3.- En diagnstico clnico Qu aplicacin tiene la tincin de Gram.?
4.- Explica en que se basa el proceso qumico de la tincin de Gram.
5.- Cmo se preparan los colorantes Gram?
6.- Investiga qu son las pruebas preliminares o primarias para la identificacin bacteriana (explica cada una).

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UNIDAD 4
PRACTICA No 7
TECNICAS DE AISLAMIENTO
La identificacin exacta de muchas bacterias se hace utilizando cultivos puros, ya que las caractersticas empleadas
para clasificarlas depende de la actividad de la poblacin y no de las clulas individuales, aun cuando algunas propiedades
bacterianas cambien cuando se toman los microorganismos de su medio natural y se cultivan en el laboratorio. La realidad
es que la clasificacin suele basarse en las propiedades de bacterias en cultivos de laboratorio.
El aislamiento de un cultivo puro se lleva a cabo tomando en
cuenta las caractersticas especificas de los
microorganismos por aislar; por ejemplo, si se desea obtener en forma pura una bacteria esporogena se calentara a 58C y
se tratara con algn desinfectante adecuado que destruya todas las clulas excepto las esporas. Al hacer la siembra se
obtendr fcilmente el crecimiento de la bacteria esporogena
OBJETIVO:
Aislar e identificar microorganismos en medios nutritivos adecuados.

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MATERIAL:
Cajas con agar nutritivo
Asa bacteriolgica
Portaobjetos
Tubos con agar inclinado
Microscopio
Aceite de inmersin
Mechero Bunsen
Mezcla de Microorganismos
PROCEDIMIENTO:
1.- Mtodo de las Placas. Tcnica de preparacin
a) Toma un apequea cantidad de la mezcla de grmenes y con el asa siembra en estras, procurando que entre estas
quede un espacio de 5mm, segn se te indique.
b) Incuba a 37 C durante 24 Hrs. Observa el crecimiento de colonias
c) Toma una colonia y prepara un frotis y telo por la tcnica de Gram. Observa al microscopio
d) Si en la preparacin se observan nicamente grmenes Gram + o Gram -, trasfiera la colonia respectiva a tubos con agar
inclinado.
e) Incuba a 37 C durante 24 Hrs.
f) Examina la pureza del cultivo por examen microscpico, este cultivo no debe mostrar mas de una especie bacteriana, de
no ser as, repite el procedimiento hasta obtener el cultivo puro.
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1.- Por qu es necesario aislar a un microorganismo para identificarlo?
2.- Por qu no siempre debemos estudiar a los microorganismos en cultivo puro?
3.- Investiga y explica otras tcnicas para obtener cultivos puros. En una muestra de suelo, Qu tcnica debe utilizarse para
obtener un cultivo puro?
4.- Qu son las vacunas y que principio activo contienen?

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PRACTICA No. 8
E N D O S P O R A S Y CAPSULAS
Las endosporas son cuerpos de gran resistencia producidas en el interior de las clulas de ciertas bacterias, se
encuentran en todas las especies de la familia Bacteriaceae, que se divide en dos gneros: Bacillus (bacilos aerobios
esporgenos) y Clostridium (bacilos anaerobios esporgenos). Una bacteria generalmente produce una sola endospora.
La mayora de las bacterias, posiblemente todos los tipos estn rodeados por una capa gelatinosa, poco definida, que
se tie pobremente a la que se ha denominado cpsula capa mucilaginosa. La sustancia que constituye la cpsula
bacteriana es de naturaleza polisacrida.
La cpsula de las bacterias no tiene la misma afinidad por los colorantes que otros componentes de la clula, por eso
se utilizan otros mtodos de coloracin especiales. El mtodo de la coloracin negativa en el cual las cpsulas se ven como
un halo claro contra un fondo obscuro, se realizar en ste ejercicio.
OBJETIVO:
Aplicar el mtodo de tincin diferencial para demostrar la presencia de endosporas. Observacin de cpsulas mediante el
mtodo de coloracin negativa.
MATERIAL PARA ENDOSPORAS:

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Mechero de Bunsen tripie c/tela Verde malaquita,

Matraz erlenmeyer de 250 ml
Fucsina bsica al .05% acuosa
Microscopio Asa bacteriolgica

Portaobjetos Cultivo de Bacillus spp inclinado/48 72 hrs Aceite de inmersin
Lpiz graso, pinzas rectas (sin diente), gasas
MATERIAL PARA CAPSULAS:
Tinta china o nigrosina
Aceite de inmersin Asa
Porta y cubreobjetos
Microscopio Mechero Bunsen
Cultivo de 24 hrs de Klebsiella

PROCEDIMIENTO PARA ENDOSPORAS:
1.- Realiza una suspensin de la bacteria (B. subtilis) en un portaobjetos sin fijarlo al calor.
2.- Coloca el portaobjetos sobre la boca del matrz con agua hirviente.
3.- Cuando se forme el agua de condensacin (vapor), entonces inunda el portaobjetos con verde de malaquita y
djalo actuar por 3 min.(No dejes secar el colorante, agregando constantemente el que se evapore)
4.- Retira con unas pinzas el portaobjetos y enjuaga con agua de la llave.
5.- Aplquese Fucsina por 30 seg.
6.- Lava el portaobjetos con agua de la llave y seca el exceso de agua con una gasa.
7.- Examina con el objetivo de inmersin. Dibuja la morfologa de las clulas y la posicin de las endosporas
dentro de la clula.
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NOTA: las esporas se tien de verde y la clula vegetativa de rojo.

PROCEDIMIENTO PARA CAPSULAS (Mtodo de la tinta china)
1.- Se coloca sobre un portaobjetos limpio una pequea cantidad de solucin fisiolgica, agua o caldo y se le agrega
una pequesima cantidad del crecimiento de un cultivo joven.
2.- Mezclar bien, agregar una gota de tinta china y cubrir inmediatamente con un cubreobjetos.
3.- Examinar inmediatamente con el objetivo de inmersin en aceite.

1.- A qu se debe el hecho de que bacterias esporgenas o productoras de cpsulas, tengan cepas que no las producen ?
2.- Qu importancia mdica tiene la presencia de cpsulas y endosporas ?
3.- Cules son los componentes qumicos de las cpsulas y las endosporas?
4.- Cules son las condiciones necesarias para que se produzcan endosporas en una bacteria ?

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UNIDAD 6
PRACTICA No. 9
IDENTIFICACIN BACTERIANA
Cuando hacemos la identificacin de una bacteria consideramos que se debe realizar un acercamiento para una
investigacin bacteriolgica sin tener en mente ideas preconcebidas, considerando a nuestro microorganismo como un
completo desconocido e iniciar la identificacin a partir de las caractersticas bsicas (pruebas primarias).
Las pruebas primarias necesarias para identificar a un microorganismo son:
TINCIN DE GRAM, MORFOLOGA, ACIDORRESISTENCIA, ESPORAS, MOVILIDAD, CAPACIDAD PARA CRECER
EN CONDICIONES AERBICAS Y ANAROBICAS, PRUEBA DE CATALASA, PRUEBA DE OXIDASA Y PRUEBA DE
OXIDO-FERMENTACIN.
PRUEBA DE CATALASA
PRINCIPIO:
Probar la existencia de la catalasa
BIOQUIMICA:
La descomposicin del perxido de hidrgeno ocurre por la accin de las enzimas catalasa y peroxidada.

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2 molculas de H2O2
molculas de H2O + O2 liberacin de gas
REACTIVOS:
Perxido de hidrgeno al 3% almacenado en botella obscura
PROCEDIMIENTO:
Con un asa de aguja, tomar una asada del cultivo puro y colocarla en un tubo estril que contenga 1 ml de agua
oxigenada al 3%, observar la presencia inmediata de burbujeo y anotar los resultados.
INTERPRETACIN:
Prueba POSITIVA: burbujeo inmediato
Prueba NEGATIVA: no hay burbujeo
PRUEBA DE LA OXIDASA
PRINCIPIO:
Determinar la presencia de enzimas oxidasa
BIOQUIMICA:
La prueba de la oxidasa se basa en la produccin bacteriana de una enzima intracelular OXIDASA. Esta reaccin de
oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromo oxidasa, el cual activa la oxidacin del citocromo reducido por el
oxgeno molecular.

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Todas las bacterias aerbicas contienen su energa por respiracin, un proceso el cual es responsable para la oxidacin
de varios sustratos.
El sistema citocromo est presente usualmente en organismos aerbicos los cuales son capaces de utilizar el oxgeno
como un receptor final de hidrgeno.
Citocromo oxidasa
enzima
2 citocromos red 2H + O2
2 citocromos c oxidados
Oxidacin
2 citocromos red c oxidados + reactivo
compuesto coloreado
PROCEDIMIENTO:
Utilizar un disco impregnado del reactivo tetrametil-para-fenilendiamina, tomar una asada del cultivo y colocarla en el
disco.
INTERPRETACION:
Prueba POSITIVA: Presencia de un color obscuro
Prueba NEGATIVA: No hay presencia de color

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PRUEBA DE OXIDACIN FERMENTACIN

PRINCIPIO:
Determinar el metabolismo de un carbohidrato por va oxidativa o fermentativa.
BIOQUIMICA:
La utilizacin de los carbohidratos por una bacteria ocurre metabolitamente por uno de dos procesos: fermentativo u
oxidativo.
La fermentacin es un proceso anaerbico y el carbohidrato es metabolizado a dos molculas de tres carbonos, el
intermediario principal es el Ac. Pirvico. El producto final de la fermentacin vara con cada especie bacteriana.
La oxidacin de la glucosa es un proceso aerbico y las bacterias que oxidan un carbohidrato son usualmente aerobias
estrictas. La oxidacin requiere oxgeno o un compuesto inorgnico como aceptor terminal de electrones.
PROCEDIMIENTO:
Inocular dos tubos de medio O F (HUGH LEIFESON) con glucosa al 1%, con una asada de cultivo puro.
Un tubo se sellar con aceite mineral y se incuban por 18 o 24 Hr a 37 C.
INTERPRETACION:
Reacciones: cido A. cido y gas
Determinacin OF:
FERMENTATIVO (F)

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OXIDATIVO
NR:
(O)
No Reactivo (no oxida ni fermenta el carbohidrato)
CUESTIONARIO:
1.- Qu son las pruebas primarias y que utilidad presentan en microbiologa?
2.- Cules son los componentes OF Hugh y Leifson?
3.- A que se debe la respuesta variable de algunos gneros de bacterias a algunas pruebas?
4.- Investiga las caractersticas e importancia mdica de los gneros Bacillus, Staphylococcus y Escherichia coli

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PRACTICA No. 10
UTILIZACIN DE LOS CARBOHIDRATOS.
Los carbohidratos son la principal fuente de energa. Los azcares simples como la glucosa y la lactosa son los
indicadores de las reacciones metablicas. Las bacterias emplean enzimas intracelulares para efectuar posteriormente la
degradacin metablica de los carbohidratos.
PRINCIPIO:
Determinar la capacidad de un organismo para degradar un carbohidrato especfico, incorporado en un medio basal
produciendo cido o cido con gas visible y produccin de cido sulfhdrico.
BIOQUMICA:
Los carbohidratos son clasificados como: monosacridos, disacridos y polisacridos, los cuales son molculas
complejas para su degradacin por las bacterias. Si son metabolizados por las especies bacterianas, primero son
catabolizados a monosacridos menos complejos por enzimas exocelulares para que puedan ser llevados hasta la clula.
La fermentacin es un proceso de oxidacin-reduccin en el cual un sustrato orgnico sirve como aceptor final de
hidrgeno en lugar de oxgeno. Las reacciones en agar de Kliger o en agra de TSI son usadas para la identificacin de
miembros de la familia Enterobacteriaceae, las cuales por definicin son bacilos Gram Negativos, catalasa positivos y que
fermentan la glucosa con produccin de cido. Hay tres patrones bsicos de fermentacin observados en el medio de TSI o
Kliger:
1.- Slo fermentacin de la glucosa.

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2.- Fermentacin de glucosa y lactosa.

3.- No fermentacin de glucosa y lactosa.
El tipo de producto final producido por la fermentacin de un carbohidrato depende de varios factores:
Tipo de organismo.
Naturaleza del sustrato
Tiempo y factores de desarrollo.
MATERIAL:
Tubos con medio TSI o Kliger.
Cultivos puros de enterobacterias.
PROCEDIMIENTO:
1.- Tomar una asada del cultivo puro.
2.- inocular, picando hasta el fondo del medio y estriando en la superficie.
3.- Incubar de 18 a 24 hrs.
4.- Leer.
INTERPRETACIN:
Las reacciones en Kliger o TSI pueden ser interpretadas de varias formas dependiendo de la bacteria:
1.- Alcalino/cido: slo la glucosa es degradada
2.- cido/cido: glucosa y lactosa degradadas
3.- Alcalino/alcalino: ni lactosa ni glucosa degradadas

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PRACTICA No. 11
PRUEBA DEL CITRATO
PRINCIPIO:
Determinar la capacidad de un organismo de utilizar el citrato como nica fuente de carbono.
Esta caracterstica se utiliza principalmente para diferenciar bacterias coliformes, principalmente Escherichia
(negativa), de Klebsiella y Enterobacter (positivas).
MATERIAL:
Tubos con agar Citrato de Simmons en posicin inclinada
Cultivos puros de enterobacterias. Cintillas pH.
PROCEDIMIENTO:
1.- Medir pH del medio antes de sembrar. Sembrar por estra en la superficie del medio una asada del microorganismo.
2.- Incubar a 37 por 24 a 48 horas. Medir pH del medio que haya resultado positivo.
3.- Reportar resultados.
INTERPRETACIN:
Cambio de color del medio:
Verde-> azul: prueba de citrato positiva.
Verde-> verde: prueba de citrato negativa.

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PRACTICA No. 12
PRODUCCIN DE INDOL
PRINCIPIO:
Determinar la capacidad de un organismo para romper el indol de la molcula de triptfano.
BIOQUIMICA:
El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias a tres metabolitos indlicos: indol,
skatol (metilindol) y cido indolactico. Varias enzimas involucradas en la reaccin llamadas triptofanasas median la
produccin de indol por actividad hidroltica contra el sustrato triptfano.
El principal intermediario en la degradacin del triptfano es el cido indol-pirvico del cual el indol involucra una
combinacin qumica produciendo un color.
La presencia o ausencia de formacin de indol es usado para la identificacin bacteriana.
MATERIAL:
Tubos con medio rico en triptfano (MIO)
Cultivo de enterobacterias
Reactivo de Kovacs o Erlich

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PROCEDIMIENTO:
1.- Inocular el medio con una asada del cultivo de bacterias
2.- Incubar 24 a 48 horas a 37C.
3.- Adicionar reactivo de Kovacs directamente al tubo.
4.- Observar.
INTERPRETACIN:
Produccin de color rojo: prueba de indol positiva.
No hay produccin de color: prueba de indol negativa.

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PRACTICA No. 13
PRODUCCIN DE CIDO SULFHDRICO
PRINCIPIO:
Determinar que el cido sulfhdrico ha sido liberado, por accin enzimtica de aminocidos que contienen azufre,
produciendo una reaccin visible, dando un color obscuro.
BIOQUMICA:
La lisis de las protenas producen aminocidos individuales, ciertas especies bacterianas son capaces de liberar
enzimticamente sulfuro de hidrgeno de varios aminocidos que contienen azufre, produciendo el gas cido sulfhdrico.
La peptona, cistena, cistina y tiosulfato son tambin una fuente de sulfuro, pero diferentes especies utilizan
diferentes compuestos conteniendo azufre o aminocidos para producir cido sulfhdrico. La enzima responsable de sta
reaccin es una cistena desulfhidrasa llamada cisteinasa.
MATERIAL:
Tubos de agar peptona hierro, TSI, Kliger, SIM o agar acetato de plomo
Cultivo puro de bacterias
PROCEDIMIENTO:
1.- Inocular el microorganismo en el medio utilizado para la prueba.

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2.- Incubar 24 a 48 hrs a 37 C.

3.- Leer.
INTERPRETACIN:
Cualquier ennegrecimiento u obscurecimiento del medio es una prueba positiva.

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PRACTICA No.14
PRUEBAS DE DESCARBOXILACIN
(LISINA-ORNITINA)
PRINCIPIO:
Determinar la habilidad enzimtica de un organismo para descarboxilar un aminocido formando una amina con
produccin de alcalinidad.
BIOQUMICA:
La descarboxilacin es un proceso por el cual la bacteria que posee enzimas descarboxilasas especficas son
capaces de atacar los aminocidos en su grupo carboxilo (COOH) produciendo una amina o una diamina y dixido de
carbono.
El proceso de descarboxilacin ocurre anaerbicamente y es un proceso irreversible no oxidativo y requiere una
coenzima, el fosfato de piridoxal.
MATERIAL.
Medio de cultivo conteniendo el aminocido de prueba (LIA).
Cultivo puro del microorganismo.

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PROCEDIMIENTO:
1.- Inocular el microorganismo en el tubo por picadura hasta el fondo.
2.- Incubar 24 a 48 hrs.
3.- Observar resultados.
INTERPRETACIN:
cido: color amarillo, prueba de descarboxilacin negativa.
Alcalino: color prpura, prueba de descarboxilacin positiva.

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PRACTICA No. 15
PRUEBA DE LA UREASA
PRINCIPIO:
Determinar la capacidad de un organismo para romper la urea formando dos molculas de amonio por la accin de
la enzima ureasa con resultado de alcalinidad.
BIOQUMICA:
La urea es una diamina de cido carbnico y es frecuentemente referida como una carbamida. Todas las amidas
son fcilmente hidrolizadas.
La hidrlisis de la urea es catalizada por una enzima especfica, la ureasa, produciendo dos molculas de amonio.
En solucin, la hidrlisis de la urea produce carbonato de amonio como producto final.
MATERIAL:
Tubos con caldo de urea
Cultivo puro de bacterias.

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PROCEDIMIENTO:
1.- Tomar una asada del cultivo.
2.- Inocular el caldo con la bacteria.
3.- Incubar 24 a 48 hrs a 37C.
4.- Leer.
INTERPRETACIN:
Hidrlisis de urea: cambio de color a rosa mexicano.
No hidrlisis de urea: no hay cambio de color.
1.- Porque es necesario aislar a las bacterias y utilizar una cepa pura para poder identificar a una bacteria ?
2.- Adems de los componentes fermentables utilizables que contienen los medios de cultivo conocidos como pruebas
bioqumicas, Qu otros componentes contienen que son los responsables de los cambios de color en las reacciones
positivas?
3.- Elabora un listado de las actividades metablicas que fueron probadas en sta prctica.
4.- En tu prctica clnica: Cules seran las consecuencias de una identificacin bacteriana errnea ?
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5.- Para enterobacterias, se utiliza un juego especial de bioqumicas, para otros grupos de bacterias; Cul sera la
forma de proceder para su identificacin ?
6.- Enumera los factores que pueden hacer variar o tener resultado errneo en la prctica para la identificacin bacteriana
por medio de bioqumicas.

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V.1. Mtodo de Asignacin de Calificaciones

EVALUACIN TODAS LAS UNIDADES DE APRENDIZAJE
TEORIA 60%
(Tres exmenes departamentales)
PRACTICA DE LABORATORIO 20%
(15 Prcticas de laboratorio, 1 Examen prctico)
INVESTIGACIN 10%
TAREAS Y ASISTENCIA 10%

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VI.1. Bibliografa
Prescott, L.M., Harley, J.P. y Klein, D.A. 1999. Microbiologa. Cuarta edicin. Ed Mc-Graw-Hill-Interamericana. Madrid
Espaa.
Jawetz, E. et al. 1999. Microbiologa mdica. Editorial El manual moderno. 16a. edicin. Mxico, D.F.
Daz, R., Gamazo, C. y Lpez-Goi I. 1999. Manual Prctico de Microbiologa 2. Edicin. Ed Masson S.A., Barcelona
Espaa.
Freeman B.A.1985. Microbiologa de Burrows. Ed. Interamericana-Mc-Graw-Hill. 22a. edicin. Mxico, D.F.
Burdon/Williams. 1982. Microbiologa. Publicaciones Cultural, S.A. 6a ed. Mxico, D.F.
Carpenter P.L. 1980. Microbiologa. Ed. Interamericana, Mxico, D.F.
Divo A. 1990. Microbiologa mdica. Ed. Interamericana.Mc-Graw-Hill S.A de C.V. 4a. ed. Mxico, D. F.
Tortora, G.J., Funke, B.R. y Case, C.L. 1993. Introduccin a la microbiologa 3. Ed. Ed. Acribia, S.A. Espaa.
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Madigan, Martinko, Parker. 1998. Biologa de los microorganismos de Brock. 8. Edicin. Prentice Hall, Espaa.

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VISION DEL PROGRAMA DE QFB:

1.2. Cuadro de Competencias:

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1.3. Nivel de Desempeo:

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2.2 Concepto de especie

2.4 Sistema binario de

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uso y manejo de:

3.1 Forma y agrupacin

3.2 Morfologa colonial

3.3 Estructura: E. internas

3.4 Polimorfismo de los

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