17.

Resuspender en 200 L de TE 1X en un tiempo de

2 hr en bao Mara entre 6566 C.

18. Llevar a la plancha de agitacin una noche a temperatura ambiente.

SEVAG:
CLOROFORMO (ALCOHOL ISOAMILICO (24:1).

TSNT:

ELABORARON:

Miguel A. Garca Mireles

Lorena del Roco Ibarra Reynoso
Rubn Rangel Salazar

2% Tritn 100 X,
1% SDS,
100mM NaCl
10mM Tris HCl pH= 8.0
1mM EDTA disdico.

Departamento de Ciencias Mdicas.

UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO

EXTRACCIN
GENMICO A
DE SANGRE.

DE ADN
PARTIR

5. Agregar 500 L de Fenol saturado, y agitar en el Vortex por

1 min.
Nota: El fenol tiene 2 fases, se debe tomar la fase inferior.

1. Colocar una muestra de

sangre en un tubo con EDTA*
y centrifugar a
3,500 rpm por 15
min.
2. Separar el paquete celular
(leucocitos) y colocarlo en un tubo nuevo.

11. Mezclar lentamente por inversin

hasta observar la precipitacin del
ADN en forma de hebra blanca.

6. Adicionar 100 L de SEVAG, y agitar en el Vortex por 5

min.

7. Aadir 200 L de TE 1X pH = 8.0 y agitar en el vortex por 1

min.

3. Aadir a todo el
paquete celular
300 L de Buffer
de lisis TSNT.

4. Mezclar perfectamente por inversin.

10.
Precipitar el ADN con 1
ml de etanol fro al 96 % .

8. Centrifugar a 14, 000 rpm por 8 min.

12. Centrifugar a 14,000 rpm por 8 min.

13. Decantar el sobrenadante.

14. Lavar la pastilla con 500 L de etanol al 70 %.

9. Transferir slo la fase acuosa transparente a un tubo nuevo.

15. Mezclar y centrifugar a 14,000 rpm por 8 min.

16. Decantar el sobrenadante y dejar secar la pastilla a temperatura ambiente.

NOTA:
FASE
CHOC
4 Y 6

SI AL LLEGAR A ESTE PASO

ACUOSA TIENE UN COLOR
OLATE, REPITE LOS PASOS
.

LA
3,