UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

COLGIO TCNICO
PATOLOGIA CLNICA
MICROBIOLOGIA CLNICA
MARIANA COSTA

ESTHER IOLANDA SILVA FROIS

AULA PRTICA DE PREPARO DE MEIOS DE CULTURA E

PLANTIO PRIMRIO

BELO HORIZONTE
2014

INTRODUO
Para o estudo e identificao das bactrias necessrio isol-las e cultiv-las,
fornecendo as condies fsicas e qumicas para que elas se reproduzam e aumentem seu
inoculo. O cultivo de bactrias feito no meio de cultura, meio que fornece os nutrientes e
condies qumicas adequadas para seu crescimento, sendo que a maioria das bactrias cresce
neles. H vrios tipos de meios de cultura, classificados quanto ao seu estado fsico, finalidade e
caractersticas.
Quando uma amostra coletada e levada ao laboratrio clnico a fim de realizar sua
anlise microbiolgica, o primeiro passo o cultivo da amostra em um meio de cultura simples,
permitindo o crescimento das bactrias presentes, denominado de cultivo simples. Aps o
crescimento, as bactrias da amostra so sujeitas a testes, como a colorao de Gram, e cultivos
secundrios em meios que promovem o isolamento e identificao da bactria-alvo.

METODOLOGIA
-Materiais e mtodosI.

Preparo dos meios de cultura Agar Citrato-Simmons e Agar sangue.

AGAR CITRATO-SIMMONS

Dissolver 2,42 g do meio-base em 100mL de gua destilada;

Misturar a soluo por 10 a 15 minutos;

Aquecer em banho-maria por 1 minuto, agitando o tubo.

Distribuir 4mL do lquido em tubos de ensaio e tamp-los com rolha ou algodo.

Esterilizar o meio antes de usar.

AGAR SANGUE.

Pesar e hidratar o meio-base de Agar conforme as instrues do fabricante;

Esterilizar em autoclave;

Esfriar a +/- 50C;

Adicionar 5 ml de sangue para cada 100mL de base;

Homogeneizar delicadamente, evitando bolhas;

Distribuir o lquido em placas de Petri, tamp-las e aguardar esfriar.

Esterilizar em autoclave antes de usar.

II.

Plantio primrio em meio de cultura slido.

Identificar os meios de cultura;

Flambar a ala de platina (bacteriolgica) no bico de Bunsen;

Semear a amostra biolgica, em 3 reas na placa de Petri, em zigue-zague, afundando e

flambando a ala de platina a cada mudana de rea. Realizar esse processo num raio de 10
cm da chama azul do Bico de Bunsen;

Fig. 1- forma das estrias no meio de cultura slido.

III.

Encubar em estufa a 37C, at haver o crescimento bacteriano.

Anlise microscpica.

Identificar as lminas;

Preparar o esfregao para colorao de Gram. No caso de meio de cultura solido, com a ala
de platina, adicionar uma gota de soluo salina na lmina, coletar 1 colnia do meio de
cultura e misturar na gota, dissolvendo a colnia. No caso de meio de cultura lquido, com a
ala de platina, coletar uma gota do meio de cultura liquido e depositar sobre a lmina.
Realizar ambos os processos num raio de 10 cm da chama azul do Bico de Bunsen,
flambando a ala a cada processo;

Aguardar secar;

Corar a lmina com o mtodo de Gram;

Analisar no microscpio, com o condensador de luz alto e em objetiva de 100x, usando leo
de imerso.

RESULTADO

Foram preparados dois cultivos primrios: um em Agar sangue e outro em Agar EMB ou
Teague, sendo que o ultimo foi trago pronto para o uso pela professora. Em ambos os meios,
foram cultivadas bactrias do gnero Enterococcus.

Aps o perodo de 3 dias de incubao, numa estufa a 37C, foram observados as seguintes
resultados:

Placa com Agar sangue- foi observada presena de colnias da bactria. Houve crescimento
bacteriano.

Placa com Agar EMB- no houve o crescimento da bactria, mas foi observada que houve o
crescimento de fungo na placa.

As bactrias, aps a colorao de Gram, na microscopia, apresentaram formato de basto e

colorao roxa, sendo bastonetes Gram-negativos.

CONCLUSO
Houve o crescimento bacteriano no Agar sangue devido a sua caracterstica de permitir
o crescimento de bactrias Gram-positivas e Gram-negativas. Na placa com Agar EMB no
houve o crescimento de bactrias devido sua caracterstica de seletividade, pois ele um
meio seletivo que permite o crescimento de bactrias Gram negativas, inibindo as Grampositivas, indicando que a bactria em questo Gram-positiva; fato que foi comprovado
pela visualizao do esfregao corado pelo mtodo de Gram ao microscpio. Houve o
crescimento de fungo na placa com Agar EMB devido contaminao no plantio primrio,
possivelmente devido ao manuseio da placa fora do raio de esterilizao da chama do bico
de Bunsen ou pela flambagem incorreta da ala de platina.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Descrio dos meios de cultura empregados nos exames microbiolgicos. Disponvel em:
http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/microbiologia/mod_4_2004.pdf. Acesso
em: 25 mar. 2014.

Meios de cultura: tipos de meio de cultura, meios mais usados em microbiologia.

Disponvel em: http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfPOsAI/meios-cultura. Acesso
em: 26 mar. 2014.