AvaHac;ao do desenvo vlmento in vitro de ernbrtoes humanos apes cultlvo em mtcroarnblente.

Embryo developme t in vitro in microenvironment culture

Condesrnar Maroondes de Oliveira Hlho Carlos Gilberte Alrnodin

vs n' ·'a·~ c-':· bete 111\11' .. ' ". I I ,t~" -cs . '.': . - ' .. '

~I _II c:_-.,i oere ~~dngue-'d-alma ra

IMarci!,a Si!.ster Campos

AngleHca Puptn S,ch~avon [Fernanda Caronna Fachini

'R'E"S- -U'M'" '0"- [-.

I . "[ r l '-_j.'_" - ' •. ' .:.-

Mlelth'o,drJ.logy;· The present stuav was carried out in 14 ,p.atfe'nts' eoed betw!e[en 2'0 and ,4.3' years thet WI€'re submittedto In-vitro temurstion treetrnem. 'Th!€ embryos were cutturedtn 'W'O'W dishes u'ntil,da,Y 5' of tneir oeveiopment (d,S).. Trensier was carried out on dey ,3 (ld:3» Ion di~'y 5" Dr o,n both dsvs.

Reeults: From 11',2' e[m'bry'Os obtetned, ,2'8 [were trensterred ani ds, ena ,84 otecea in' culture' medtum unti! d5, ot wnict: 2.5 beceme bteetocvsts (251010)'., From 1,4 pstlents, 1',1: had' cia sse'S 1 end .II embryos trsnsterred on d3, ena thelr re',maiinitlg' €',m[blryos s'ta[yi,ng in culture ,un'itU d,5o; Tbe other 3 ostients tied embryos trsnsterred only on dS,., Prom the 111 pettents that receivea the embryos on d:3" 7 etso nsa btestocvsts trsnsterred onl IdS (6'4'%}~ Ther;@fo,r:@, from the l' a o etie n I ~E"' tn t h· ',~ sn jA~.l 1" 0:-" 1-'-.g·C· etvea b ,'.::l ,IE" PAc-- ysrs an: ·d·, __ - a

' _' ~'IUI. l~ " ,LUl "I :.- :I~ ~Il_ UIU', /" .' :_:_" .' t;;;.' .I~_. _·.·~I ;:.. ',~'o'~tu ·--~~.·:~"L~.1 .,~ .r. \:::.' ::._

totsl oi 8 petients 90lt ,pregnant (571%)~

Dtscussion: 'The pregnan'cy rate obteined in this studv

d- 'e:' ',Im'~ .... onst: rstes tnet tne w- _-·'O- w-' ~y.". ~'~,":alm:''-' s eem . S··' ro be ~ prom I ...

. . .... u'.I" ![;lL~~ _'_ '_~" _ ~ t;;; _' _ .. :. _' a ~I .. r ~Itll~ I' ~ ~',.'~. _ '_. _. v .' I~ ~' .. ~ II· .. · I

ising ettemetive tor the devetopment of in-vitro embryos. The positive ettect ,m,B'Y be ,explafnled by tne extremeiv tow am'ou'nt oimedium eround the embryo, euowlna the embryo to' keep its ow,n environment with en etticient meoiiestetion of eutoaine en d perecrin e teeters.

Ob,je:'ti'v,o: 0 objetlvo desse estudo 'foi~ avallar [21IS taxas de "ormal~a 0 Idle' blastoctsto e gl ra v ;~de'z a pas cur It! vo @ mll~) ri 0 ~ narto no sistema 'W'!OWI' que consiste ern urn mlcroernbiente obtido atraves de, "mlcrofuros" sobre [21 cavtdade de, Ulima placa del culture.

Mle~tDdol'oglmo [: O! presents estudo 'fo[j reatlzado ern .14 paclentes entre 2,0 a 43 anos, que se submeterem !~IO tratarnento por 'fertili':L'd'~;§O in-vttro. as ernbrloes foram cultlvados em places 'WIDW ate 0 [(Hat S de: desenvolvirnento (dS). ,A transferencla fo~' reallzada no dla 3(d3) au no dta S(dS) de desenvolvlrnento au ern ambos.

Resultados: Dos 112 ernbrtees obtldos, 28 foram transferides no d3 Ie 84 colocados ern cultivo ate' '0 d5,. sendo [que .21 tornaram-se blastodstos (2So/n)[. DClI5 1,4 padentes, 11 tiveram transferencla dos ernbrloes classes I e II: no, d.3" permanecendo Or restante de seus embrldes elm cultlvo ate 0 d5 e as outras 3 pacierrtes tlveram transferencla apenas no d1Sm Das 11 paclentes que tiverarn transfereneta no d3, 7 tarnbern tlverarn blastodstos transfertdos no d5 (6,40/0)., IEntao{ das 14 pacientes do estudo, 1.0 tive- . ram blastoctstos para serem transferldos, e um total die 8 paclentes enqravldararn (S7°/o)"

Dii'scu,ssi,o,: A taxa die 9 ra 'V i~ dez obtld a n o p resents estud '0 cemonstra que Q sistema 'W'IOW parece urna alternative prornlssora para 01 desenvolvlrnento in vitro de embrloes. 01 erelto pode ser expllcado devido a quantldade de rneio extremarnente balxa ern torno do e'mbri'SIO,;- perrnltindo ao ernbrtao manter seu proprio micrcamblente, corn a manifestaca Or e~ficir e'n te de fatores a ut6cr:~ nos e para crl nos.

Kevwords: w[ow system: embrvo culture: b":asto'cysts

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I[N-- TR' 0·--'····0· UrA'- 0':-

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IP',(iJ Ilia v'ral;s[""'c:have': sistema WOW/ cultivo de ernbrioes, b , ~I a s ito c· stos

I_~ ,_-:'II,. ',.: _I~! r ~.,

.Iii, taxa d- lE!J 'c;-uc- e- e,~o Ii"!i '::ii 'f~ r-t'ln 1·IZ'~:::ijf"SO in nl,l~ :n a - t -§ d - t

H ~'d ".~' sucessc na lid '" 'I~!d~,d~/ tn-vuro esta cnrerarnen-

tie ~~gadla a rnultas variaveis tals como: protocolo die- lndut;SO~, qualldade oocltarla, qualldade do cultlvo ernbrlona ... no, habllldade no manuseio de glalmletas e ernbrioes e' tarnbern a receptlvldade endornetrlal (M,.8Ihadevan/ 1998)" Os rneios de cultivo sern duvlda ttveram atteracoes lnten'5oSI com rnudancas e lncrernento die sals e cornponentes qufrnicos (Gardner; 1998). IEstas alteracoes posslbliitaram ,al nlanluten~a() de' ,emblr~iQes, por m,a~is te',mpo, @ml ~nlculba ... dOlr,c! IPrOs.5ibi'Htando 0 d'e5@nvQrlviment'Q embtri~onar'~o ate a fa.se de billastoc~sto!s (Gardnler e' Lanej 1998;, Mural[k:ami~ et

AIBSTIRAC'T

0- bt .j...' ''T"h b . ilc-. f~ 'l-h- ~ t d t b I' t

' ,~}\eCt['ve,: j i,le o~elcuv'e [0: I~I-,IS' S -Uil:,',Y' Iwas,(J asse.sS"$Os ,01-'

cyst ,d,8ve.lopm'ent iJUJ,d[ ,pfie{lnan~y' raltes afte!T em'b'ryo cuft;ur-e in thlf' WOW system; [w:hich[ consists of a microe,(Jvironmen't obltaine,d through ~:'m'icro'~h,ole'S·I/ 10111 a culture dishi CiI[vity.,

Reoebido elm:O 1/08J2008 AlceUo- @'ffl::28JOrBI200a

C:opyr~g ht ,"' Tades as di ril9'itos re'sa rvados. ,8,

,S,BIBA, _, Soci edade[ B rasdi elllr81. de Re pWlod U~8.0 ,A.s si~sVda

11

,A,rt,i goo ri I!JI ina III

a'. r .2 O(~,4) .. Recen tern e nte hii rel~ al tos die nao h aver drre renca na ta x a Ide gesta 9.aio n a s paclentes corn ida d e ii nferior '01 3:5: a nos, que recebem urn ou dots blastocistos. [plon3m" oi taxa de gemellarilidadle nestas paclentes aumenta substanctalmente Esties, mesrnos autores precontaarn a transrerencia 'de, 5'0 m ante u rn blastcctsto para este glru po d e~ pa clentes e dOllS blastoctstos para aquelas com ldade superior a J,S anos (IKal~u e: a/,ot 2008,; Bee:s,lev et a/~ r 2008).,

A grande materia dos ernbrloes humanos concebldos atraves de fert i'~~' Z 01 ~,a'o in - vitro S 8101 rot'ii ne ~ ra 'm e nte tre ns'fe rid os para 0 utero no dia 2 au 3" no estaglto de desertvolvlmento die 4 a S. ce~lulllaSi com taxes de mlmplllant~H;a,o die 10 a 20°/0 normalmente pubucades. Compo in-vivo as ernbrtdes nessa fase die desenvolvlrnento residern na tuba uterlna, €'ntrando no utero somente apes. compactacao, sendo provavel que a exposlcao premature de embrloes em' es'taigl~ 0 die ell ii vafg,e m no ute IrQ! comprometa 0 dI e senvolvtmento e a viabllidade do mesrno (B'al'Vruste~r~ :1995)~

10 cu ilti! vo d e ern b'lri~O,es. a t,e a fase de b,! a steel stos ! eve a melhor s'€h~l~ao ernbrlonarla, com rnalor probebllldade de lmplantacao e' melhor sincronismo endornetrtal (Toledo et et., :2 000; Gard ner et et. t .2Q!OO~, Cruz et et. 1 1999; D'j,ckey e Pyrziak'i 1'999)" ,A rnaiorla dos autores concorda que a transterencia em fase de blastoclsto pede dlrnlnulr a taxa de gt!s.tal~ao multlpla e eurnentar a taxa de tmplentacac e 9 estac al 0' (Hernandes, 2001,: Plach()'t et st. I 2000),. Estudos previos conftrmam que tanto metes sequencials como co-culttvo podem suportar a culture ernbrloneria at'e 0 e:stalg'io die' blastocisto 1((diEstaing et a,I'~1' ,2001);; Os melos seq uencia Is sattsfazern qua nto aos requerl mentes nutrlclonals criterio-especlfico para a forma'r;ao de: blastoctstos (Garch18if e tane, 1.997),. 0 co-eultlvo com celulas sornaticas parece tier efeltos benefices sobre 0 desenvolvimento ernbrtonano, 0 mecanisme die ,al~aio, pelo qual ,al co-,cultura melholr,ol 0 desenvoh.rim,1en,to d,os 8ImiJrUj,e:s, @: ainda esp,ecul!at:~iVOt mas. fr1c,lui' a possi'b'ilidadle' die n;mo~,alo (~Ie: :st~llbstal nc:i,CI!s t6xi ,cas. ,d() ml @i~QI com 0 rOlns -"metal~ 5 !p,e sa(~QIS, e~ ra d i ca i s I i'vr,es I (3' a se~lcret;'ao de S,UI bs,ta,rl'ci a s lem brio ... troffficars como os fatores ,de' ,cre~s,c~ilmento. Ap'esar da i'mlpiortanc!',a dos fatotres die cre,s,(:im,en.to p,ar,al '0 elmbri,ao, 'te'r' ,s,ido comprov,ald,CI pe~la pre.seril~,al die receptores sob're a trof:EH:tod,elrlm,a i nao se te:m encontrado di:feren,~,als, n,BS tax-as, de: glln3ivi'de'z: lapos co-cultivo (Mlenezo le't ijl~ t 1990; IKaum,2)1 ,et al.'f 1995),. A utii I~ilac,alo de' meios se'qUI,e'lrllc'iBliis slem os possfvlei's; efe:itos d,o co-cultilivo t,eml llevado ,~I ta:x,G3IS seme~hante$ (Sakk~as ,e't al"j 1 99,41, ICoh,en tat' aL", 1'9'90; d~'Es't,ailn!gl et a'/"l' 2001.).

N'dl tentativa de mel~horar as: ,(on:dilc;o,es Ide; cultulra ate

t I'" d b II t ,. t" f ~ I" - _ d - . t--

o e:s agl'o "~ e' ~ Ilas:l_ocIS'.o1' O~ anc_ISCl':_ 0 um, .sIS: :ema que

mantem a p'055fvle~i atu,a~;ao dos 'f~i'[or,es die crescimen'=' ,to~, Sleml a utiiliz:ac;ao d,o ,co-c:u~t~vo~ PailS ,OJ 'go'ta de :20 a 4,Qiul u,sada tr,ad~c:ionalmelnte: palral cultiiivo dos ,e:mbri'(;'es ,e grancha de'm,a'i's par,a ter ,al m,'aln:ife':5:ta~,ao ,e'nc'ie!nt,€ d@, f:ato ,-, res aut6cii.'inos ,e pan3lcri'nlos e~ volum,es menore'$ tetrmam 0 aClumu'iio, de substanc]as t6xi'cas~ ,0' objleti~v.o desse' @s'tuldo fo~i ,2l,valialr ,as ta.x,CiIS die formla~',aio, die b:lastocisto ie grav'ldI@z ap6s cul~ti'vo embr'~onario no sistelma W'O'W, qu,e c:onsh;~ tie e~'m urn Imlmcroamb'lie'nt,e obtido atr,(;1lvt!'S de "miicrofufiQs1'f sabre, a carv!'dalde d~ umla ph31ca de Clu~I[Un~:L Este sislt'ema die cul!t'ivo t,elm sm,do utiiliz:ado p'or Vaji'ta- ,e c,ollalbo'uadores Ino culll't'ivo de' !emlbr'i'oes bo'vinos'l Icom grandis: :su,e~s.slo, (Va,jltc

e,;I!!;;; ·8' I~' 2-:· ·Oc·'·Oc In 'J.

L _, ,,~, -. '. loll .: .,

,

MAT'ER'IA,L, E: MIE'TODOS,

Apos ,aplrOIVa~ao pelo com,ite de etica dlo NIIL]Ic.i,eo de: Repr-odue'a,o Asslsttda Ie Hospital Alrnodln Iltda e consentlrnento esctarecldo e lnformado, 14 paclentes foram incluldas aleatorlamente neste estudo. As paclentes tlnham entre ~2 a ,42 anos de ldade e as causes die infertllldade observadas enquadrava-se ern cinco fatores: tntertllldade rnascu I'i na 'I' i nfe rti I ldade tuba rla, rn uI~I'ti plas ca usas, outras somente fernininas ,e nao explicadas.

A p 65 r()t~i In a b as i ce Id I~: IP ro pled e~ u ti ca as. p a c~ entes in it: i ,alram UIS,O de' contraceptive oral contendo 0115: 'mgl Ide desoqestrel e 01,03 mg de: etintlestradlol (IMicrodilo~I®'1 Orqanon) dtartamente no hll~,Ci,O do ctclo por no mlhll~imo 19 dtas, !P,an:]] reallzar o bloquelo hlpoftsarlo foi utilizado acetate de leuprolide (Luprlon@, Abbot), como a'glonis'tra de GnRHj atreves de apllcacoes subcutanea, a cads 2,4 (vlnte e! quatro) horas lntdada quando fcdtavam entre 3,

(tre .... s' .~ 8'~" I( n "1"111-'0· :')1 d '1- as P' 'a -r-:lii 0 term ~1Ii"'II 0- I 01,01 IU,C'11i""'I. d 0':. CO·. In t ra c ",0 Pi ,',_,

I •. , . .I, i y '.' IV II!.·"._ ~I _' _:,. '!1;;!1, .,~II _ ,IUll!1 ul, . v . '~V: ':' '_ II ~ ,,!II r;;!I , '~_ .

ttvo ,e era rnantldo ate 0 dla do H~CG;. Apos suspensao do anttconcepclonal e U5,O contlnuo do agonmsta ,dle~ 'GnRH as pacientes reallzarn ecoqrafia transvaqlnal entre 0' sequndo e quarto dta do cldo menstrual. 01 esttrnulo ovartano 'folii iniciado com FSH recomblnante (G;on,a~®, Sereno) ou urinarlo (M,erion,C1Iil®,; IMlem,zh~lr); em dose que varlou die 150 a 300UII/d~la;., a c:ri~t@r'io clinico, entre ,]J3 (dezojto) e 20 (vtnte) horas PiOIr no rnlntmo 7' (sete) dlas, N,ovcl ecoqrafta era rre.atHz2U]la no oltavo di'a de estfrnulo e i,ln~:C'iado uso die' hMIG; (Mlerr~ional®~ Mleil:zJer) suspendendo, e:ntao .. , 10 'FSH,. Novas ecoqrafias FOn31ml reallzadas a cada ,2,4h ou 4,8h e quando 1 (urn) OUi mais 'tollliicul'Q's apresentavam d'iam,e~ tro medic maior au iglual~ a 18mm,., admintstrava-se hCGll 1,Q,,'Q10IOIU'lli (Cho,r]omo,n®,. Mei,z:ler) ern media ,3:6 hi antes da captaceo dos oocitos.

A, eaptacao era reallzada corn sedacao ern reglm,ml@ arnbu~: ate ri a I ,. lires a quatro ho ras a p CH5, .81 ca pta<;ao 0:5 (u)cito s @lr,8Im desnudados~ C'Olml pmp,etas. a'fih3ldas rem d~:ametros d i'fe:n~~:nte,sJ pIBssa n do pr] mei ra m ent:e pe'la sol~ u~,a 01 die hiialuroniJdias,e (M'D Imaximo 1. minuto)" pos:teriorlme~nt,e par S b'~ln,hos, dl@ G'V-HElP'ES (Ing,amed-'IBrtJl:sil) c:.olm 10°/0 5,S,S ('5, u bstU:.ut,o die: S,o ro :S'i n tlet~ co) e €!tr,olm cIQI~oc;a d os e m p~laca s d,e ,quattro eal'Vid,adl~~s cOlm Ime'jo de C'ul~ltivo G:V (II~lgamled'- 8,ralsH) com 1,001ro de SSS ond,e os O,oltitos rP,erman!€ci,am at,e, a microm,ani:pu~a'~ao de' Igam,e'tas~

IQ,u,atro [8 c~nco horas apos til ,captalr;:ao 'elr,a fie,all~il,~dia ,a m'ilcroml,aln~ipul,a,cao;, A pl~aca ~ra pr@par,ada com uma gota ce'n'tral coml 5~li PV'p [allcrlesc6:n'ta,do ,de ltJl da suspen,s~,o com os esp,ermISlito:zoides 'e 'Vadias gotas die, .5~[1 em tor,no' cOlm HITIF,~H'EIPES, cOlm 1.01%1 ~SS:s n,o grupo 1 au GIV~HEPE:~S com 1.0'°/0 SSS no grupo 2 onde 'fOlr,~lm cJ[]ilioc,ados 0,$ OI6Ci~ to,s I sob 611~o. Os esp,e' rm,81'toZQ idles,; n a sol u~a 0 de: P!VIP~ foram 'imob'ili:zaljo,s lP,e~la calida e as.piitr,adlos C'Olm a p~~)eta de, m'icro'lnj'ec,aot po,$sandQ=os, para a glot,a Icoml 10 06C~tOl Ique era ent.aio fiixado com, ,al I~)ipeta h,o~ldi'ng ,ole modo ,que a

.t' - ... - '~ch A ~ t d

corpusculo po,iar 'ncav,a as 12, O'U as 0 or,as.··, p~p;EL_a ,~e:

inje~,ao,~, introduzidol no ovoci:to as 3 horas e ulma IP,e(Juena ,s;UCt;',aIQI do ci~topl,al:smat 'f;eita die ,modo a assegurar a i'nje~' c;a'o do lespelrmatozl6~dle dlentro do IcltOIP!;alsm,al", De'po~s da ImJc:r(),manipu~,a~a;o f'oram coloc,ados ~ndivl'dualm,enlte e'm IPI,cu:a,s; W'OW' l(llng,almled~B,riasil) eml 4,00 JJI de: mle! rn 01 G'V' com, 101°/01 dl@, 55,S ondl,e perlman@ciia par'tres dialS., No t,erceiiro d i ,al a PO$; ia'va I i,SIr;ai,o Ie rCl te.i ta ,a' 'tra ns'fe r'e n c~a die 2 lem b r~~'-' oes; e~ 0' restant,le lera c,olllOIlC8ldo e:m, pl~aca:s WOW' c.o,m 400

J'BRA ,= JOfnal Bras'iilein) die RleplUodu~ao, ,A'Ss'~stiiida I V. 12 I n03: l~ ]lulho=Ag,ost.o'-Se:tembro l ,2008

JJI de mete G'Vlbllast (Inqarned-Brasil) onde permaneclarn por rna i'.s dols ,d i:as ~ IQ:Ur!i ndo sa tl! n ha blastoclstos era fle~i'ta nova transferencla de. no maximo dots embrioes. NIO:$ ca S·C)$; de' have r exced e nte, e'st,es era m vi! trlftca d os pe ~ 0' metodo Vitrj~-':Mniga (Ingamed,-,[B--,8ISil).

a suporte die tase I:ultea fa I' lnlctedo ne nolte da captar;:a 0" ut~~:i zando p rog esteron a Im,i c ro n! izada (, IUI·tro g esta n®,~ Fanmoqu~lmita,)~, 200mgt ili1ltlr.av,aglh1Ial" a cada a horas,

A dos'~lgl,e'm do a ... h'C:G (g,onadotrofina corlonlca subunldade IS,etal) fol rea ltzad cl no 14,0 dta apes ,al transferenela des ,emlblrl~Oillas" IF"o~i COl nsiderada glir,a!'v ii d ez a :5: pad entes corn h eGa; acirna de 51[)1 mIUll/m~" A taxa de' ~ilmpllan'tai~ao 'fo~ definida somente iap6s banmento earelace presentee ao redor del 1.3° sernana pos-tranferencla,

Total de pacientes

5

36

Palci e ntes 00 m tra sfe ren d a IJ 5

3

2'1

:1.12

100

RES_ L T.ADO,S,

Do,s 11:2 ernbrloes obtldos, :2.8 forarn transfertdos no, dile 3 die desenvolvirnento e 84 colocados ern cultivo ate 01 dl',a ,5 de desenvolvtmento. IC!os 1.1.2 embrtoes obtldos, 31 tlnharn de 6 a a celulas e erarn CI,8S$'e' :M ou :1] (segundo Rlsdlara),. Dos ,84· @mlbrH5es: deixados em cultivo 2llte o dta .5, 21, torna ra rn-se b lastoctstos (,2.5°/0) sendo tra nsfertdos. Das l4 pacientes, 11 tlveram transferencla des ernbrioes classes [ e II no dla 31 perrnanecendo 0 restante de' seus Ie rn briio,e s ern cu lltii vo aJte: 0 d i,8J ,5 ,e as 0 utras 3. pad e nte s tlverarn transferencta apenas no dta 5" Da:5, 11. pacientes que tiveram transterencie no dial 31 '7 tambern tlverarn blastoclstos transferldos no dla 5 (64,010),. Das 1.4 padenties do estudo, lOti ve Ira m Ibll astoclstos parr,a sere m transfe rtdos (,71 °In,) I' e u m to't,a~ die 8, p,a ctentes len'g ravldaram (S7%) (Tabela 1)

IEmbrrioes die 6 a 8 ,oolutllas ell asse [ e IClllalssle! II

37'

2,8

,25

841

2.1

2S

57

DIS··C·U- -S"SA'~ 0

j" • - • "_:[" I.~ •• I.I : I

(01 ~ Ni',@'I~" 1'51Ig'8)~ Recentles estudos dalo €'vid!enci'as. que' seclr,e~~ao atlva de: fa to Ire s no rnelo die culture par blastoclstos de carnundonqo ocorre e pode lnffuenciar eJl negulla'-' ~':aio de desenvolvlmento (Diaz-Cueto et' el., 2(010) ,. AI~em d lsso I' te ml S ~ d o ,S U '9@ridtO q u e en z i rna S P' roteo I i~t i cas se eretadas pelo ernbrlao e acurnuladas em torno desse tertam urn papel iilmportant,e no, attnarnento da zona peludda de ernbrioes die camundenqos [Perona e Wassarml,anj' .1.9186; Sal'w'ada et el.. 1'9'90; Lee et et.. :199'7) e: die ernbrloes humanos (Bonqso e F'on9/ 1'993),.

o sistema 'WO'W'ja '~O~ testado em e'm,brioes bovlnos, levando a obtencao die embrioes de rnelhor qlualli1Idald@,; V'fljt~1 et a" (.20001) rnostrararn que 2i1 taxa de blastoclstos bovlnos f;o~ aumentada pelo sistema 'W'OI'W'., J,a" Pereira ,e colaboradores (.200S) nao encontrararn dife:re'nl~as no desenvolvtrnento a blastocisto aD'OS cultlvararn ernbrtces bovines em gliiUpOS e indiiv~dual~lment'e, ern gota's I@ no sistema W'IOIW, IE ntreta nto f OIS ernbrtdes cult tvad 0 S no :s'j sterna 'W OW' fo rnecerami ernorlees de rnelhor qualldade, lsso rnensurado pela sobrevl da a POlS a v'i't r'j ncal~a 0 (Pe,r,s':j ,r,al et at. f 2.00 5 ) '.

E's,t:udo sernelhante f:o~ reallzado ern embrices de porco, avall[jando-se: 4 dji',ere~ntle.s sistemas de c:uIIII·t·ura (qota. cavidade 'c.o,m Ot,S mill de mai',o, de cuil'tiv'o ,e d,o'j:s tamanlho:$ d~f;elre'ntes de WOW (500 e! 100,0 ~Im)),. 101 des.e'nvohlimen'" to al bllal:stocis,t:O, usan,do 0 sis:t'ema WOW coml .1000' 1~lim 'f,o~i sign~'n,c,ant:lemlen't'e m,aiio,r iqu!a c',olm O'S, oU"tros ,si:stem,~s d',e' culltura" ~'ndi,cando Iqule '0 mlmclro,~I,mbl~ente' ,cr:ialdo me'l~hoFOU al produ~ao, de bl~as,toc:msto:s die Qvocito,$ die porco m,8·tura,dlos in' 'vitro apols ICSIt m'as que' ,a ,e'nciie'nci',a ,do, sistema: dleplendl8 do dtiame:tro' d,al p,llac,a 'WOW (Talk:Q ;et' ,cJ'i" 2(05)", ,0, siist,elma WOW' repre~s.enta uma mUdallrrll~al nBS cara1cte'-' trfstlcas fis'ilcas do aim blente: Ide (~U Itur,i3. Outros siste:ma:s ·t,elm silid,c)r .sugeridos bas,e,ad,os em m,etodr()S die; miicro!cul1:urat le'V',andio ,em conta a dl,e'ns~dl,adl,e de' lembriioles; nlO m,eilo de cultura" lilh!oIUB:S ,et al., (.2003;) cultivaraml z"Qotos de icamlu'nd,ong,ols e~m iP,are's ate' 0 es:tagllo de bl!astoc~s'to emil

J,a, e: bern estabelecido 'que a taxa de' embrtoes por volume de melo de cultura e' urn fator multo trnportante durante cultlvo in vitro (Larson e Kubi.schj 1999; Lane Ie G,alrd·~ ner, :2(00); E:s,s,a constatacao levou ao desenvolvtmento in vitro de embrloes hurnanos em mkro-qotas e no caso de embrides bovines 5'! faz !O ,cull·tivo corn urn nurnero gr.ande: de ernbrioes, 0 qUle' Ie :inv'i,av;e'~ no case de ernbrides humanos, pols 0 nurnero die ernbrtoes, pIOI~' paclente, qUE: se obtern norrnalrnanta ,e pequeno. Entretanto1 a tradicional gota die, .:z,() dl 401 1-11", usada para culuve dos emlbr~a,es humanos parece gr.and,s' demais para :se ter a rnarufesta~ao eficiente die fatores autocrtnos ,e paracrmos e volumes, me nores teriam 0' ,ClI!c'U m u Ii 0 die substa n cias tox leas i:li1lci u j' n .... do a,m,otni~.a e radicals livres, INlol sistema de 'gotasl alern dos rnatertals soluvets II~prd~cIO.5 do desenvelvrrnento ernortona .. · rio serem (i·il~lUi,dos~, ,@,II@s tllmlb'~m" pod,e:lm se'r" ,OJbsorviidO'$ pe'l!o 6111eo' Imil1le:lrs,1 sobre as. glo,tas~ E,m est.udl,o.s sobre' ,d,ens~dad,e dl@ e mlb'lni a,eS, bovrurm,o,s· fOI~ s'uger'idlo Ique a proporl~,ao aldeQluada de ,emlbrio,es para 1. Jj,1 del mleii,o, de cultura ,seriia de, " 1. :: 1. ,\~' ou 'V~2: '1.'~l'.; l[ Pallas.z @' Thlu ndl,a'thiilllj 19'9f~) e ea m u n~

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ul na abertura final de captlares de vidro, EI,es verlficararn que, os blastocistos cUlllltiv,ados nesse sistema conrmnam rna is ced ulas que os lb~·astocist:os cu tttvad a s nas mtcro ~ gotdlS padrfio. E:ste estudo, portanto, dernonstra que urn vol U me de' :1 ul €' suftclente para SUIPOlrta r 0 dese n volv i'~ rnento die L,i,gIOiO a blastoctsto. Entretal1lto/ extstem autores que suqerern que 0 desenvolvlmento em volumes menores que 110 u~ de rnelo serla cornprometldo pelo aICUmILJI~O de substanclas toxicas incluindo arnonla e redicais livres ( Carolan et sl., 1.996;, Sirn::llair et sl, ,1'997; Johnson e NI,asf'E:sfahanij :1'99'4),. '0 sistema 'W'O'W' ~'oi suqertdo tentando evltar esse noo ,de probtema pots oermrte.etraves de sua condicao de abertura, a dnui~ao die substancias toxicas orig~nalrias do metabollsrno do embriao.

Corn a meinorta recente dos rnetos de cUlllt~''Vos; te'm havl .. do rei at as de texas de SO °/~1 die: obt-en~a 0 de b lasto c]' s~ tos expandrdos (Shaplro €:t al., .2007). IE,trltn:~tarito, como I. ~~,:- - i"i'-'- - d - p. arte dos ernb r~io--es hurnanos fazem blooueto

u magi ra n_ e ~. . lUI v_ . _ _ _ _.. _ _ _ .. _. .. _ _ _ _ _ .. _ _ ~I _ _ _

es p ech~- espedttco em a. ce:lliu las I a ma i orta do s servtcos tern recelo die manter lOS embrioes em cuilitivo ate Or quinto dia pos-fertlllzacao. Aconteoe com freqOenl'cm,a que qrande parte dais paclentes que tern seus embrtoes cultlvados atlf§ o dla 5 de oesenvolvtmento podern nao ter blastocistos a serem transferidos mesrno com 0 US-O de meios sequenc'! a is ou co-cu ,it~ivo (Alrnod in e.t 21/.", 2001). Ne ste estudo houve transterencia de embrtoes tanto no dla 3, como no dia ,5' de desenvolvlrnento com a intuito de naio cornprometer 0 tratamento dills paclentes, Setenta e um por cento dials, pac tentes ttvera m b, lastoelstos a serern tra n sferld 0$ no dla Sf 0 que leva a acredttar na eftciencia do sistema.

AID es a r d a taxa de 'g ra videz ba sta n te satl state r~ 01 ('.5 7Iijio)! OJ taxa d Ie' 'Fa rm,8(:,a Or de ibis stoc~ist:o l1iao pia relceu m u ito s~ 19 n ~= ti ca nte . E nt:reta n to d eve'-,se I,eva r e ml co ri sid era CaitO que as emlb'rHJles classes I e II r;aram, transr;eri'dos no dlia ,3 de d,esle~nVOI~'V'i'm,e. nto ~ ,All em d'isso, as Ie' ml br]oes fora m cru'~t~'va= d,os mesmo' ab:§; 0 dia 3 tambem trias p!2M:OIS, WIOW~ 0 ,que p,~)d I~' tie: r ~nf1 u i dial nal 9 Ira In dH!' qua ntidade dl(2 e,m b niil©l@s e:ll,a s,S,e ill ,e I m. a lbtidlas no es[udo. 01$ res u~tado s~ port~lnbJ 'e:sta,o e'ml acordo com os e',xc1e'l!ente.s re,su'II'tados obtidos co,ml Im()de~'os anim,a'is ooml a usa. do sistema W,O'W~ demonst:r,andol que o si~ s.te 111 B po,d e mel hora r 0 des,ei1lvo Iv~m,e nto elm bri:ona rh) In-vitro., p,t) re m l' 'ia'z:-'s:e n e,cess ii, d 0 estud 0 m Ulltice:lrltriIC:O ooml Imailor numen:) d@ palcil~nt@.s :para ml~:~:hor ZivaU,at;ao.

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